成人谜语范文

导语：如何才能写好一篇成人谜语，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公文云整理的十篇范文，供你借鉴。

篇1

大有人在，汉语成语，拼音是dà yǒu rénzài，指某类人数量很多。兼语式;作谓语;同“不乏其人”。这里给大家分享一些关于成语大有人在的谜语，供大家参考。

一、大有人在成语谜语矢 …… 打一成语

二、大有人在成语解析形容某一种人为数不少。《资治通鉴·隋纪炀帝大业十一年》：“帝至东都，顾眄街衢，谓侍臣曰：‘犹大有人在。’意谓向日平杨玄感，杀人尚少故也。”

三、大有人在成语造句1.只要你肯学,师傅大有人在。

2.我们这个时代,风流倜傥的青年大有人在。

3.这些人揽辔澄清、志在治国安邦的,也是大有人在。

4.像他这样的贪污犯现在大有人在。

5.在解放军战士中，能百步穿杨的大有人在。

6.像他这样爱占便宜的人大有人在。

7.旧社会，烟馆赌局到处都是，在这些伐性之斧下丧生的大有人在。

8.在中青年教师队伍中殚见洽闻之士是大有人在的。

9.至今，不相信自己，只按教条办事，像郑人买履的人还大有人在。

10.不怕你笑，我们团裡滥竽充数者大有人在。

11.穿着奇装异服招摇过市的大有人在。

12.即便是今天,小富即安、不思进取的仍大有人在,就是很好的证明。

13.一边呵佛骂祖,一边割肉饲鹰者大有人在。

14.但,修炼界之中,忌才的人也大有人在,如若无法拉拢,那就出手毁去,也不愿这样的人投入到别的势力之中。

15.但是因为分布区域狭窄,所以野生数量奇缺,捕捉出售大有人在,价格比起三棱闭壳龟,也就是俗称的金钱龟还要高昂的多。

16.武艺高强者被拜将封侯者,也大有人在。

17.再看某些知名专家学者和教授，一切向钱看，在其位不谋其政者不乏其人，滔滔不绝却不着边际者大有人在，能解决实际问题者显得弥足珍贵。

18.尽管对她那行云流水般富有表现力的动作持嘲笑态度的批评家大有人在，但伊莎多拉却为死板的古典舞蹈界带来了灵动性和自我表现力。

19.另外一家银行沈河支行的信贷员告诉记者，现在等了三四个月的大有人在，年前获得贷款的希望很渺茫。

20.早期移民到加利福尼亚的锡克教信徒与墨西哥裔美国妇女通婚甚为普遍，而第二、第三代日裔与外族通婚也大有人在。

21.可事实上世人多半受寂寞所致,着急开始,然后不了了之的人大有人在,感情犹如泛滥之河水,分文不值也。

22.麦克纳斯伯爵是紫荆花帝国名将,威名赫赫,麾下能征惯战者大有人在,武技高明的骑士多如牛毛,杜昂要学武技很方便,根本就不用到外面另请老师。

23.佩服佩服,要知道,当今天下,能做出‘百尺竿头’诗句者,大有人在,但是能做出‘百尺竿头’战诗者,少之又少。

24.齐风兴奋的说道,这三天里他们经常听到有人在不远处厮杀,一言不和便杀个你死我活的大有人在,更有甚者只是刚碰面便直接打起来的。

25.准提是善人,那和准提作对的白云就是大大的恶人了,其中中长舌男女大有人在,好事不出门,恶事传千里,一时之间牛豪恶名传遍洪荒。

26.我可是提醒过你的,交完钱跟进不进得来可是两码事,每年因为不能通过入学测验而给学院白送钱的冤大头可是大有人在。

27.藩镇将领一心保唐的在少,保存实力怀不臣之心的在多,又深惧我军之威,坚守不出的必大有人在,剩下不听劝告的,可遣大将痛击,如此一来,联军之危可解。

28.袁绍只觉得自己都快被所气爆了,这帮诸候真是成事不足,败事有余,闻功则喜,闻过则责,出谋划策未见有人,落井下石更是大有人在。

29.知道缘由后,更似已经有人开始在楚墨的背后指指点点,甚至有的破口大骂楚墨的恶劣行径了,而为徐阳抱打不平的更大有人在,局面朝着楚墨不利的情形发展着。

30.那些人倒了,但是,在他们的鼓噪声中,火中取栗者、投机取巧者、阴谋家野心家、各色残渣余孽等等,在台上的仍然大有人在。

31.阴天乐突然问道,现在田中财团内部为了继承权打得一塌胡涂,身为首位继承人的田中丽奈自然成为了多方的眼中钉、肉中刺,想必妄想要她命的大有人在。

32.还有就是到现在人们也没有形成一个统一的意见,支持两种意见的人都是大有人在,双方各抒已见争论不休。

33.民间的球迷爱屋及乌的认为蔡智的教练水平也到了国际级,希望朱广沪让出国家队主教练位置的大有人在。

篇2

释义：旧时神怪故事中形容凶神恶鬼的面貌，现形容人面貌极其凶恶。

出处：许仲琳《 封神演义》第六十三回：子牙见对营门一人， 三首六臂青面獠牙。

示例：鲁迅《 呐喊·狂人日记》：那青面獠牙的一伙人，便都哄笑起来。

近义词：呲牙咧嘴、 横眉竖眼。

篇3

1、 针锋：针尖。针尖对针尖。比喻双方在策略、论点及行动方式等方面尖锐对立。

2、双方争执，寸步不让 。

出处： 宋·释道原《景德传灯录》卷二：“夫一切回答，如针锋相投，无纤毫参差。”

篇4

近几年，随着农业产业越来越热，诸多行业大佬纷纷进军农业，但几年下来，这些大佬们精心打造的产品在市场的表现却不尽相同，褚橙一枝独秀，销量节节攀升，而潘苹果和柳桃则一直处于不温不火的状态。尽管此次任志强口口声声说自己做小米完全是为公益，与赚钱无关，但从目前来看，起码从表面上来看，“任小米”与褚橙、潘苹果、柳桃等并没有太大区别。那么，任志强的“任小米”能否成为粮食领域的“褚橙”呢？

北京方圆品牌营销机构，作为国内最早的关注农业产业、打造实效营销的知名策划咨询公司，凭借多年丰富的市场实战经验认为，尽管“任小米”和“褚橙”都有着名人做背书，但“褚橙”的成功绝不仅限于此，“任小米”要想创造“褚橙”一样的辉煌，成为粮食领域的“褚橙”并不是件轻松的事情。

一、从方向上来说：

此次，任志强卖小米，从一开始就在打公益牌，一直强调自己“赔钱、赔时间、赔精力、赔形象”完全是为了节省水资源改善内蒙阿拉善当地荒漠化。本来，为了更好的推销产品，搞点“公益”的情怀无可厚非，其做法与潘石屹为家乡苹果代言打造“潘苹果”如出一辙，本来良好的公众形象可以为产品加分不少，但从方向上来说却不免有些偏颇。

为什么这么说呢？因为不管怎么玩情怀，最终的目的还是要卖产品，只有把产品卖出去，再能更好的促进“公益”。因此，其方向始终要对准市场、对准消费者。而一味强调“公益”，会给人一种只考虑自己，而忽视消费者的感觉。在这种情况下，也许有的消费者就会想，要玩公益，那是你们有钱人的事情，为什么非要“绑架”我呢？我为什么非要买，让你用我的钱去做公益呢？

正是由于方向的偏颇，忽视了消费者，因此，潘石屹的“潘苹果”虽然一直在打公益，但却一直不温不火。而“褚橙”就不一样了，从一开始褚时健就把方向对准了市场、对准了消费者，那就是打造一款与众不同的冰糖脐橙，因为方向对了，所以在开拓市场的过程就走的比较顺。因此，北京方圆认为，任小米要想将来延续“褚橙”的辉煌，从一开始方向上就要找准，千万不能出现大的偏颇。

二、从产品上来说：

在互联网时代，一个产品要想获得消费的认可，要想成功，必须要赋予这个产品足够的内涵来满足人们的精神需求，只有这样才能直指消费者的心智并深深的扎根心底。换句话说，不能光卖产品，而是要卖需求。

“褚橙”为什么能够异军突起？因为褚橙除了产品真的好，能够带来良好用户体验之外，一开始就被赋予了一种正面的、积极向上的，切合年轻人精神需求的故事与内涵，甚至被赋予了一种励志的精神，而这正是其直指消费者心智的精髓所在，除了口感之外，这一点可以说是褚橙最大的增值部分，它让褚橙的消费者增加了一种精神上的体验，满足了他们精神的需求，因此褚橙火了。而“柳桃”则完全不同，柳传志坚持认为，我卖的就是我种的猕猴桃，而不是我的故事，我的故事我也不会拿出来卖钱。正是因为只卖产品，而缺乏满足消费者精神需求的东西，因此柳桃在直指消费者心智方面就弱了很多，故而在市场上被褚橙远远的甩在后面。

对于刚刚开卖“任小米”来说，北京方圆认为，似乎现在也只是在卖产品，而没有在卖需求。也许有人说，不是有“公益”吗，但那不是消费者的需求。而仅仅对于卖产品来说，任小米所强调的“种植基地无污染源，土壤达到国标的‘自然保护区’级别，不喷洒一滴农药，沿用古法工艺，手工除草”等等则很难直指消费者的心智，更别提扎根心底了，因为在网络这个竞争残酷的环境中，比你标准高、比你说的好的同类产品有的是。所以，任小米要想真正火起来，还要从一开始就要多赋予自己一点儿能够满足人们精神需求的有内涵的东西，并且学会卖需求。

三、从传播来说：

无论任小米、褚橙，还是柳桃、潘苹果，虽然都有名人、行业大佬做背书，但是要想真正卖的好，传播却不可少。

褚橙之所以卖的好，引爆传播方面功不可没。众所周知，褚橙刚刚上市，就迅速被王石、潘石屹、田朴珺等名人大力的赞扬追捧，并在社交媒体中宣传，迅速引爆了传播，还有老罗不但说褚橙，而且售书送褚橙，再到后来韩寒、蒋方舟等人对褚橙的传播等等，除了名人、大咖的自媒体传播，如今褚橙还充分利用个性化的包装箱进行传播，都为褚橙的迅速走红及热销发挥了积极推动作用。而柳桃、潘苹果在传播方面明显力度不够，因此，褚橙在消费者中的知名度和认知度要比它们高的多，这也是为什么褚橙能够火爆全国一个重要的原因。

就“任小米”来说，虽然已经在天猫开售，但北京方圆认为，无论是开售之前还是开售后，其传播的力度还远远不够，很多人知道“任小米”还是通过新闻，而在自媒体或个性化传播方式的利用方面还亟待提高，因为只有引爆传播，才能更好的提高产品知名度，才可能真正拉动销量！

四、从价格上来说

众多周知，农产品的生意不好做，而小米作为农产品的杂粮类则更不好做。因此，在价格上就要讲究策略。

此次，任志强卖小米主打公益牌，但在天猫上的售价却是49.9元/4斤，此价格让很多消费者惊呼“太贵了”。北京方圆认为，贵并不可怕，“褚橙”也卖的贵，但一样能够卖的火，关键是一定要为自己产品的价格找到一个有力的支撑，一定要让品牌能够支撑起这个价格，否则建立在“公益”招牌下的任小米很可能因此而自己羁绊了自己前进的步伐。就如同潘苹果，潘石屹更多的也是主打公益，本来其良好的公众形象能为其加分不少，但之后潘苹果推出的定价却过高，12个一盒，每盒118元，相当于每个苹果近10元的价格，不但使得公益色彩逐渐变淡，而且又找不到对价格的有力支撑，因此使得潘苹果在水果大战中远远地处于劣势，并逐渐走向了没落。

篇5

【 关键词 】 口令；对称密钥；双向；身份认证

【 中图分类号 】 TN

【 Abstract 】 This paper proposes a two-way identity authentication scheme based on the password and symmetric key system.Under the assumption that communication on both sides for electronic wallet client and electronic wallet server application environment，using symmetric key algorithm implements mutual authentication between the two sides of communication、the session key exchange and user anonymity.Finally， the solution of the security and performance were analyzed.

【 Keywords 】 password；symmetric key；two-way；the identity authentication

1 引言

由于移动网络的快速发展，越来越多的人们开始使用手机等移动终端设备上网，各种电子服务与电子交易发展也十分迅速。而远程用户要获得远程服务器的服务或者进行电子交易，用户与服务器之间在开放的网络中确认双方的身份是十分重要的。为了让人们更加安全地在网络上进行交易，基于网络的安全问题已经成为信息社会急需解决的问题之一。项金萍提出的基于口令的两方认证和密钥交换协议的研究，实现了用户和远程系统的相互认证，但是因为采用了智能卡和读卡器，并不适合应用于手机等移动设备。杨a涵提出的可证安全的口令认证密钥交换协议研究，因为采用了公钥算法，对移动终端的资源需求较大。万泓伶提出的基于口令的认证系统设计与实现，运用了计算量较大的模运算。林远辉提出的基于口令的三方认证密钥交换协议研究，采用了开销较大的公钥算法。由徐会艳提出的基于口令的身份认证方案的研究，运用了开销较大的签名运算。李晓伟提出的可证明安全的认证与密钥协商协议研究，也采用了开销较大的公钥算法。本文提出的身份认证方案，因为采用了对称密钥算法，对系统资源需求较低，适合应用于手机设备等移动终端环境。

2 方案设计

2.1 用户注册

用户A设定使用电子钱包的账户名IDA和口令pwA。服务器将一个共享的对称密钥kA和对应IDA的匿名标识snA存入到客户A的电子钱包客户端中，服务器保存了snA与IDA及h（pwA）的映射关系，用户A下载并安装电子钱包客户端，用户不能访问存储kA和snA的区域。

2.2 认证流程

方案的具体认证流程如图1所示。

（1）用户输入用户名IDA和口令pwA登陆电子钱包客户端。

（2）客户端选取随机数r1并作存储，用对称密钥kA加密r1 || IDA为E（r1 || IDA），把E（r1 || IDA），snA打包为MA发送至服务器。

（3）服务器收到MA后，检测snA是否存在于数据库，若存在则查找对应的IDA，否则拒绝认证。通过snA查找到对应IDA的共享对称密钥kA，用对称密钥kA解密E（r1 || IDA）得到r1 || IDA，存储r1。服务器选取随机数r2、会话密钥k'并作存储，用对称密钥kA加密IDS || k' || r1 为E（IDS || k' || r1），把E（IDS || k' || r1），r2打包为MS发送至客户端。

（4）客户端收到MS后，用对称密钥kA解密E（IDS || k' || r1）得到IDS || k' || r1，比较解密得到的随机数r1'与客户端已存储的r1是否相同，相同则存储会话密钥k'和随机数r2，否则拒绝认证。客户端用会话密钥k'加密r2 || h（pwA）为M0，然后发送M0至服务器。

（5）服务器收到M0后，用会话密钥k'解密M0得到r2 || h（pwA），比较解密得到的随机数r2'、h（pwA）'与服务器端已存储的r2、h（pwA）是否相同，相同则认证成功，否则拒绝认证。认证成功后，服务器更新snA为sn'A。用会话密钥k'加密IDS || sn'A为M1，然后发送M1至客户端。

（6）客户端收到M1后，用会话密钥k'解密M1得到IDS || sn'A，存储匿名标识sn'A，用作下一次用户的登录认证。

3 安全性和性能分析

3.1 方案的安全性

性质1：认证方案可以实现会话密钥的安全交换。

证明：步骤（3）中服务器通过匿名标识snA查找到对应IDA的共享对称密钥KA，从而解密了E（r1 || IDA），确认了消息MA的真实性以及用户的真实身份IDA。服务器选取会话密钥k'，用对称密钥KA加密IDS || k' || r1为E（IDS || k' || r1）传输至客户端，保证了会话密钥k'的安全传输。步骤（4）中客户端用对称密钥KA解密E（IDS || k' || r1）得到IDS || k' || r1，通过比较解密得到的随机数r'1与客户端已存储的r1是否相同，从而确认了消息MS以及随机数r1的真实性，客户端存储会话密钥k'，因此会话密钥的安全交换得以实现。

性质2：认证方案可以保证用户与服务器之间的可认证性。

证明：步骤（3）中服务器通过匿名标识snA查找到对应的IDA共享对称密钥kA，解密E（r1 || IDA）得到r1 || IDA，通过比较解密得到的ID'A与服务器已存储的IDA是否相同，从而确认了用户身份的真实性，用户身份得以认证。步骤（4）中客户端用对称密钥kA解密E（IDS || k' || r1）得到IDS || k' || r1，通过比较解密得到的随机数r'1与客户端已存储的r1是否相同，从而确认了消息MS以及随机数r1的真实性，服务器身份得以认证。步骤（5）中服务器用会话密钥k'解密M0得到r2 || h（pwA），通过比较解密得到的随机数r'2 、h（pwA）'与服务器端已存储的r2 、h（pwA）是否相同，实现了用户口令的认证，因此用户与服务器之间的可认证性得以保证。

性质3：认证方案可以保证用户的匿名性。

证明：步骤（2）中客户端通过匿名标识snA隐藏用户的真实身份IDA，snA仅在用户向服务器发起认证的消息MA中。步骤（3）中服务器发给用户的应答是含有随机数r1的消息MS，除用户本人外，任何人都不知道该报文是发给谁的，保证了用户身份的机密性。步骤（5）中用户与服务器认证成功后，服务器更新snA为sn'A，因此有效地保证了用户的匿名性。

3.2 性能分析

3.2.1 客户端

计算开销：用H代表一次hash计算，E代表一次对称加密计算，D代表一次对称解密计算，用λ代表hash函数输出的位长。

步骤（2）中客户端用对称密钥kΑ加密r1 || IDA为E（r1 || IDA），需要一次对称加密计算，步骤（4）中客户端用对称密钥kΑ解密E（IDS || k' || r1）得到IDS || k' || r1，需要一次对称解密计算，用会话密钥k'加密r2 || h（pwA）为M0，需要一次对称加密计算和一次hash计算，步骤（6）中客户端用会话密钥k'解密M1得到IDS || sn'A，需要一次对称解密计算，客户端的计算开销总计为H+2E+2D。

步骤（2）中客户端发送消息MΑ至服务器、步骤（4）中客户端收到消息MS、发送消息M0至服务器、步骤（6）中客户端收到消息M1需要的通信开销大致为2| r1 | + | IDA | + | snA | + 2| IDS | + | k' | + 2| r2 | + | λ | + | sn'A | 。

| r1 | 、 | IDA | 、 | snA |、| IDS | 、 | k' |、| r2 |、 | sn'A |分别代表 r1 、 IDA 、 snA 、IDS 、 k' 、 r2 、sn'A 的标准位长。

3.2.2 服务器

步骤（3）中服务器用对称密钥kΑ解密E（r1 || IDA）得到r1 || IDA，需要一次对称解密计算，用对称密钥kΑ加密IDS || k' || r1为E（IDS || k' || r1），需要一次对称加密计算，步骤（5）中服务器用会话密钥k'解密M0得到r2 || h（pwA），需要一次对称解密计算，用会话密钥k'加密IDS || sn'A为M1，需要一次对称加密计算，服务器的计算开销总计为2E+2D。

步骤（3）中服务器收到消息MA、发送消息MS至客户端、步骤（5）中服务器收到消息M0、发送消息M1至客户端需要的通信开销大致为2| r1 | + | IDA | + | snA | + 2| IDS | + | k' | + 2| r2 | + | λ | + | sn'A |。

4 结束语

本文通过运用口令和对称密钥算法，实现了客户端和服务器的双向身份认证，不仅完成了会话密钥的安全交换，而且也保证了用户的匿名性，用户的隐私得到了有效保护。在安全性得到保障的同时，也获得了较好的性能。

参考文献

[1] 项金萍.基于口令的两方认证和密钥交换协议的研究[D].杭州师范大学，2011.

[2] 杨a涵.可证安全的口令认证密钥交换协议研究[D].中国矿业大学，2013.

[3] 万泓伶.基于口令的认证系统设计与实现[D].电子科技大学，2013.

[4] 林远辉.基于口令的三方认证密钥交换协议研究[D].山东大学，2014.

[5] 徐会艳.基于口令的身份认证方案的研究[D].南京理工大学，2010.

[6] 李晓伟.可证明安全的认证与密钥协商协议研究[D].西安电子科技大学，2013.

基金项目：

国家自然科学基金资助项目（61472343）。

作者简介：

李纯（1992-），男，汉族，江苏徐州人，扬州大学信息工程学院，硕士，研究生；主要研究方向和关注领域：信息安全。

篇6

关键词：人员密集 建筑 火灾隐患 致灾因素 预防治理

1、人员密集场所建筑的定义

人员密集场所建筑是指人员聚集众多、密度较大,一旦发生火灾极易造成人员群死群伤或重大财产损失的建筑。《建筑设计防火规范》（2006版）中将人员密集场归纳为同一时间内聚集人数超过50人的公共活动场所,而新《中华人民共和国消防法》（2009版）明确定义为:人员密集场所,是指公众聚集场所,医院的门诊楼、病房楼,学校的教学楼、图书馆、食堂和集体宿舍,养老院,福利院,托儿所,幼儿园,公共图书馆的阅览室,公共展览馆、博物馆的展示厅,劳动密集型企业的生产加工车间和员工集体宿舍,旅游、宗教活动场所等。

2、城市人员密集场所建筑火灾隐患存在的种类

(1)在一些大中型城市的商业繁华地段遍布着人员密集场所建筑,更有甚是文物保护建筑,建设之初未经消防设计或原消防设计已经满足不了现行消防技术标准规范要求。比如一些商场建筑的防火分区超面积或原本就没有进行防火分隔,防火间距及消防车通道宽度不足,消防给水系统等消防设施不符合现行规范标准。

(2)有些人员密集场所的消防设施自安装首次调试后就没有进行过检验维修,消防控制值班人员不懂更不固定,甚至根本不设消防控制人员,致使消防设施不能正常运转或达不到功能要求,成了“假”消防设施。

(3)建筑使用上满足不了人员密集场所消防技术标准。一些设置在居住建筑内的人员密集场所,应设置独立安全出口,但在投入使用之初就没有设置第二安全出口,或与居民住宅共用安全出口和疏散通道,不能满足人员密集场所的消防安全要求。

(4)一些城市自身消防水源不足。这些城市里的部分人员密集场所没有设置消防水源,即便安装了消防给水系统,由于水源有限也只成了摆设,不能真正起到灭火作用。少数缺水地区的人员密集场所将消或拴系统直接接到市政管网给水系统上,不单独设立消防泵,无法满足消防给水常高压的要求。

3、城市人员密集场所建筑火灾隐患形成的原因

3.1 历史形成原因

由于建筑始建年代久远,当初的消防科技还不发达,消防技术标准比较落后,不能满足人员密集场所的建筑消防技术要求。消防法律法规还不健全,建筑消防审核、验收体制还不完善,加之消防监督检查监管不到位,致使这些人员密集场所建筑投入使用并沿用至今。

3.2 消防设施系统检测、维护管理不到位

一些人员密集场所的负责人不重视消防工作,不能定期对建筑消防设施进行检验维修保养,不落实建筑消防设施管理、维护制度,致使建筑消防设施设备年久失修,老化、损坏严重,影响防灭火功能。

3.3 在消防设施安装维护上不投入资金

一些人员密集场所经营者只顾眼前利益,认为安全投资没有收益,加之侥幸心理作怪,不认为火灾会与发生在自己头上,宁愿在广告宣传上投入大量资也不愿在消防安全设施建设上投入丁点资金。

4、城市人员密集场所建筑火灾隐患的预防与治理

4.1 加强对人员密集场所建筑火灾隐患的监督检查

人员密集场所历来是消防监管重点单位,按照《消防法》规定,公安机关消防机构至少应每年对人员密集场所重点单位进行一次消防监督检查。首先是人员密集场所所在建筑是否经过消防设计审核、消防验收合格,并取得相应消防行政许可;其次是属于公众聚集场所的人员密集场所开业前或使用前是否依法申请消防安全检查,并符合消防安全要求取得消防行政许可;最后是已经通过消防设计审核和消防验收合格的建筑使用性质是否改变。

4.2 加大对人员密集场所建筑火灾隐患整改力度

对发现存在火灾隐患的人员密集场所不仅要依法下发《责令改正通知书》,更要督促其落实整改措施、制定推进整改计划、跟踪督促整改进程,直到消防设施设备满足现行人员密集场所各项消防技术标准要求。

4.3 严把建筑消防审核、验收及备案抽查关

消防行政许可部门要严格按照法律法规和各项消防技术标准规范对人员密集场所建筑进行消防审核、验收及备案抽查,从源头上杜绝人员密集场所的建筑火灾隐患。

4.4 定期组织建筑消防设施检测维护,确保正常运行

设置在人员密集场所的消火栓给水系统、火灾自动报警系统、自动喷水灭火系统、防烟排烟系统等各类消防设施必须有经过消防培训的专门人员管理操作,并定期组织检验检测,发现问题故障,及时沟通生产厂家或具备消防资质公司进行维修维护。

5、城市人员密集场所人为致灾因素的基本种类

5.1 将人员密集场所设置在耐火等级低的建筑物内

人员密集场所应设置在耐火等级较高的一、二级建筑内,但个别业主为节省资金投入而将人员密集场所设置在耐火等级较低的三级建筑内,达不到人员密集场所的建筑防火要求。

篇7

【关键词】 黑色素瘤抗原；发酵；大肠杆菌

【Abstract】 AIM: To realize high celldensity fermentation of MAGE3/HSP70 engineered E.coli，and to evaluate the antitumor immunity of MAGE3/HSP70 fusion protein in vivo. METHODS: High celldensity fermentation of MAGE3/HSP70 enginered E. coli was carried out with constant soluble oxygen and continuous cultivation in selfcontrol fermentor. The mouse was immunized by purified MAGE3/HSP70 fusion protein in E.coli， and the antitumor immunity was detected by ELISPOT and LDH release assay. RESULTS: High celldensity fermentation of MAGE3/HSP70 engineered E.coli was successful， and the expression of MAGE3/HSP70 in fermented bacterial was the same as the flask culture. The results of ELISPOT and LDH release assay showed that MAGE3/HSP70 generated tumor specific cytotoxic T lymphocyte (CTL) to damage tumor cel1. CONCLUSION: High celldensity fermentation of MAGE3/HSP70 engineered E.coli was realized and MAGE3/HSP70 fusion protein can generate specific CTL to kill tumor cel1.

【Keywords】 Melanoma antigen; fermentation; E.coli

【摘要】 目的：实现重组人黑色素瘤抗原MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌的高密度发酵，并测定MAGE3/HSP70融合蛋白在体内的抗肿瘤免疫效应. 方法：利用自控发酵罐发酵，采用溶氧反馈，分批补料的方法对MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌进行了高密度发酵，从菌体中纯化MAGE3/HSP70融合蛋白，并用所纯化的MAGE3/HSP70融合蛋白免疫小鼠，运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测了融合蛋白激活机体细胞免疫反应的状况. 结果：高密度发酵取得成功，发酵菌中MAGE3/HSP70融合蛋白的表达量与摇瓶中的相当，摸索出发酵水平纯化MAGE3/HSP70融合蛋白工艺，ELISPOT和LDH显示MAGE3/HSP70可以激活机体免疫反应，并产生针对MAGE3的CTL，特异性杀伤表达MAGE3的肿瘤细胞. 结论：MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌成功实现高密度发酵，MAGE3/HSP70融合蛋白可以有效激活机体免疫反应，产生针对特异性抗原MAGE3的CTL，免疫学活性良好，为新型抗肿瘤疫苗临床前研究奠定了良好基础.

【关键词】 黑色素瘤抗原；发酵；大肠杆菌

0引言

黑色素瘤抗原（melanoma antigenassosiated gene，MAGE）是第一类被发现的肿瘤排斥抗原［1-2］，MAGE3是MAGE家族成员之一，不仅在黑色素瘤表达，同时在其它多种肿瘤中均有不同程度的表达，能够诱导机体特异性的CTL反应，更重要的是在除和胎盘外的正常组织中均不表达，人们认为它是肿瘤特异性免疫治疗理想的靶分子之一［3-4］. 重组人黑色素瘤抗原MAGE3/HSP70融合蛋白(专利申请号：ZL03134626.X)是我室研制和开发的一种新型肿瘤疫苗［5］，它对肝癌、胃癌、乳腺癌等常见恶性肿瘤具有良好的治疗效果和预防效果，在肿瘤的治疗方面具有潜在的临床应用价值［6］. 本研究目的是实现重组人黑色素瘤抗原MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌的高密度发酵，并用从发酵菌中纯化的目的蛋白，测定其在体内的抗肿瘤免疫效应，为通过动物肿瘤模型研究MAGE3/HSP70融合蛋白在肿瘤免疫治疗中的作用奠定基础.

1材料和方法

1.1材料含MAGE3/HSP70基因的重组表达质粒pET28a／MAGE3HSP70由本室构建，宿主菌BL21（DE3）本室保存. NBS Bioflo Ⅳ20L自动发酵罐(NBS公司)；J6B型大容量冷冻离心机(Beckman公司)；微量蛋白电泳仪(BioRad公司)；KTA explorer 100层析系统(Amersham Pharmacia Biotech公司);实验动物是由第四军医大学实验动物中心引进繁殖的4～6 wk龄二级C57BL/6小鼠40只，体质量18～20 g，均为雌性，在SPF级饲养条件下进行试验. 转MAGE3基因的小鼠黑色素瘤细胞B16MAGE3由本实验室马家海博士构建，MAGE3蛋白和HSP70蛋白由本实验室马家海博士提取并鉴定. 小鼠IFNγ ELISPOT系统(法国Diaclone公司); Cytotox96检测试剂盒(Promega公司); Ficoll淋巴细胞分离液(Sigma公司); 蛋白胨、酵母抽提物(Oxoid公司); SOURCE 30Q及Sephacryl S200HR (Pharmacia公司); IPTG (Sigma公司); 抗MAGE3多克隆抗体(R&D公司);其余试剂均为国产分析纯试剂.

主要溶液的配制①种子液：1000 mL种子液中含蛋白胨16 g，酵母提取物10 g，甘油20 mL，NaCl 5 g，用5 mol／L NaOH将pH值调至7.0；②发酵液：每升发酵液中含有蛋白胨20 g，酵母抽提物9 g，甘油5 mL，十二水磷酸氢二钠6 g，磷酸二氢钾1.5 g，硫酸铵1.5 g，氯化铵1 g，七水合硫酸镁0.25 g，氯化钙0.02 g，硫酸亚铁0.04 g，甘氨酸0.5 g. 每升补料基质含有：甘油120 mL，蛋白胨80 g，酵母抽提物40 g，七水合硫酸镁5 g.

1.2方法

1.2.1种子培养取-70℃，100 g/L甘油保存的pETHM/BL21(DE3)菌种1支，从中挑取1环，划含卡那霉素(Kan)的LB平板，37℃培养过夜，次日挑取一个边缘整齐、生长良好的单菌落接种到10 mL LB培养基中(含35 mg/L Kan)，37℃振荡培养12 h，以50 g/L接种量转接1次，37℃继续培养4 h左右，使其生长至对数生长期，以1%接种量转接至200 mL种子液中，37℃振荡培养过夜.

1.2.2发酵采用20 L NBS Bioflo IV自控发酵罐，发酵总体积12 L (0.6 L种子液，0.74 L发酵液，1.2 L缓冲液，9.48 L H2O)，含Kan (35 mg／L). 以AFSBioCommand Bioprocessing Software(Version 2.61)软件对其进行数据采集(每30 s采集数据1次)，实现计算机在线控制，全过程共10 h. 控制参数为：①空气流量设定为12 L/min，溶氧控制在40%，达到最大转速后，通入纯氧；②温度控制为37℃；③pH值设定为7.0，自动流加浓氨水以保持恒定；④搅拌速度：设定搅拌速度下限为200 r/mim，上限为1200 r/min. 生长过程中当溶氧低于设定值时通过计算机由AFSBioCom mand Bioprocessing Software(Version 2.61)软件控制每分钟增长5转. 诱导过后，搅拌速度改为由NBS Bioflo IV发酵罐自动溶氧反馈控制. ⑤补料流加：在生长阶段，当溶氧率在3 min内持续高于60％时补料泵以5％的速率进行补加营养. 诱导阶段当溶氧值在3 min内持续高于50％时补料泵以100％的速率进行补加营养1 min. 每1 h取样测定A600 nm值，当培养至A600 nm=12时IPTG诱导目的蛋白表达，诱导4 h后收集菌体，取小量进行SDSPAGE检测蛋白表达水平，其余菌体保存于-70℃用于纯化目的蛋白.

1.2.3目的蛋白的纯化4℃离心收菌，3 mL/g菌体重悬于Lysis Buffer（50 mmol／L NaH2PO4，300 mmol／L NaCl，10 mmol／L imidazole，pH 8.0)；加入溶菌酶至终浓度为10 g/L，冰浴30 min；超声裂解，功率2 kW，超声10 s，间隔10 s，共30 min；12 000 g，4℃离心15 min，取上清，0.45 μm针头滤器过滤；上NiNTA Superflow柱， Wash Buffer(50 mmol／L NaH2PO4， 300 mmol／L NaCl， 20 mmol／L imidazole， pH 8.0)冲洗后Elution Buffer(50 mmol／L NaH2PO4， 300 mmol／L NaCl， 250 mmol／L imidazole， pH 8.0)；洗脱，收集洗脱峰；SDSPAGE分析；以50倍体积的A液(20 mmol／L Tris・HCl， pH 8.0)透析24 h，中间换3次透析外液，透析后上清过用A液充分平衡的SOURCE 30Q柱，用B液(20 mmol／L Tris・HCl， 0.5 mol／L NaCl， pH 9.0)连续梯度洗脱4～5个柱床体积，收集洗脱峰，SDSPAGE分析；收集目的蛋白峰，以50倍体积的C液(20 mmol／L Tris・HCl， pH 7.4)透析24 h，中间换3次透析外液，透析后上清过用D液（137 mmol／L NaCl， 1.4 mmol／L KH2PO4， 1.7 mmol／L KCl， 4.3 mmol／L Na2HPO4・12H2O，pH 7.4）液充分平衡的Sephacryl S200HR柱，收集洗脱峰；SDSPAGE及Western Blot鉴定. Bradford法测定蛋白的含量，冻干，-70℃保存.

1.2.4动物免疫和小鼠脾淋巴细胞的分离与活化C57BL/6小鼠30只，随机分为5组，每组6只，各组分别于第1，10，20日腹腔注射蛋白免疫，MAGE3组注射MAGE3蛋白3.2 μg（200 pmol）；HSP70组注射HSP70蛋白15.8 μg（200 pmol）；MAGE3/HSP70组注射融合蛋白18.6 μg（200 pmol）；HSP70＋MAGE3组注射HSP70蛋白7.9 μg（100 pmol）和MAGE3蛋白1.6 μg（100 pmol），对照组注射PBS，100 μL/(只・次). 末次免疫后10 d，小鼠球后动脉取血，断颈处死，无菌取脾脏，毛玻璃片轻轻捻碎脾脏，10号针头轻轻吹吸数次，用Ficoll淋巴细胞分离液分离淋巴细胞. 计数后，用AIMV培养液培养1 d后用于后续试验.

1.2.5MAGE3特异性T细胞的检测采用IFNγ ELISPOT方法： 依照法国DIACLONE公司ELISPOT检测试剂盒使用说明，用稀释好的捕获抗体（Capture Antibody）100 μL/孔包被PVDF板， 4℃静置16 h. 20 g/L脱脂乳PBS室温封闭2 h，加入PBS，MAGE3，HSP70，MAGE3/HSP70和MAGE3＋HSP70免疫小鼠得到的脾细胞细胞1×104个/孔，同时加入转MAGE3基因的小鼠黑色素瘤细胞B16MAGE3细胞5×104个/孔，每个实验组设置3个复孔，50 mL/L CO2纳胞培养箱静置培养20 h. 用PBS充分冲洗后加入检测抗体（Detection Antibody），于37℃孵育2 h，洗板，再加入碱性磷酸酶标记的链霉亲和素，同上孵育洗板，加入底物显色液. 避光显色20 min，1200 dpi扫描读取斑数，统计学分析.

1.2.6LDH释放法测定细胞杀伤效率方法参照文献［5］，主要步骤如下：以PBS，MAGE3，HSP70，MAGE3/HSP70和MAGE3＋HSP70免疫小鼠得到的脾细胞为效应细胞，以MAGE3基因的小鼠黑色素瘤细胞B16MAGE3细胞为靶细胞，以小鼠黑色素瘤细胞B16为对照，进行体外杀伤实验. 靶细胞浓度为1×104个/孔，效靶比分别为5∶1，10∶1和50∶1，37℃共育4 h，离心后，每孔吸取50 μL上清液进行LDH检测. 实验同时设立效应细胞自发释放孔，靶细胞自发释放孔，靶细胞最大释放孔和培养液背景孔. 每个实验组设3个复孔，用AIMV无血清培养液洗涤重悬细胞，所有检测孔所测得吸光度值减去培养液背景即为实际值. 按下公式计算：杀伤率=(实验组A-效应细胞自发A-靶细胞自发A)/ (靶细胞最大A-靶细胞自发A)×100％.

统计学处理：统计资料均采用x±s表示，分析采用JMP统计软件（V5.0.1.2SAS Institute Inc.）进行，组间比较采用方差分析处理，P

2结果

2.1工程菌的发酵为了获取足量的菌体进行研究，我们对工程菌进行了高密度发酵. 用溶氧反馈、分批补料的方法，采用20 L NBS Bioflo IV发酵罐进行高密度发酵. 接入种子液时菌体密度为A600 nm=0.01，6 h后达A600 nm=12.8. 200 μmoL/L IPTG诱导表达目的蛋白， 于诱导后4 h终止发酵， 发酵结束时A600 nm=48.2， 每升发酵液收湿菌70 g， 发酵曲线如图1.

图1pETMH/BL21(DE3)工程菌的发酵曲线（略）

2.2MAGE3/HSP70融合蛋白的表达及纯化结果显示，在诱导4 h后，发酵菌体的重组蛋白表达量同摇瓶培养表达水平相当(图2A). 发酵菌体裂解后取上清，经过NiNTA Superflow，SOURCE 30Q及Sephacryl S200HR纯化后，纯度可达90％以上(图2A). Western Blot结果显示，纯化后的目的蛋白能够与抗人MAGE3多克隆抗体特异性结合(图2B).

AM: 低分子质量蛋白标准;

1: 未诱导pETMH/BL21(DE3);

2: 摇瓶IPTG诱导pETMH/BL21(DE3);

3: 发酵罐IPTG诱导pETMH/BL21(DE3);

4: 纯化MAGE3/HSP70融合蛋白. B1: 低分子质量蛋白标准;

2: 未诱导pETMH/BL21(DE3);

3: 纯化MAGE3/HSP70融合蛋白;

4: 发酵罐IPTG诱导pETMH/BL21(DE3).

图2MAGE3/HSP70的原核表达与分离纯化（A）及Western Blot（B）结果（略）

2.3体外肿瘤免疫学试验

2.3.1ELISPOT检测分泌IFNγ的MAGE3特异性T细胞数量与PBS组比较，HSP70组、MAGE3+HSP70组小鼠脾淋巴细胞中分泌IFNγ的T淋巴细胞频数没有明显变化，MAGE3组和MAGE3/HSP70组频数显著增加（P

2.3.2细胞毒性实验采用LDH释放实验，结果显示，效靶比为5∶1，10∶1和50∶1时，HSP70组及PBS组诱导的CTL对B16MAGE3细胞无特异性杀伤作用；MAGE3组、MAGE3+HSP70 和MAGE3/HSP70组特异性杀伤作用显著增强，而且MAGE3/HSP70组特异性杀伤作用显著大于MAGE3组、MAGE3＋HSP70组（P

bP

图3ELISPOT检测蛋白疫苗免疫小鼠分泌IFNγ的T淋巴细胞频数（n=5， x±s）（略）

bP

图4蛋白疫苗免疫的小鼠脾淋巴细胞对B16MAGE3细胞的特异性杀伤（n=5， x±s）（略）

3讨论

肿瘤免疫治疗在预防肿瘤复发、转移及治疗微小残留肿瘤病灶等方面有其独特的优势，是肿瘤综合治疗的重要组成部分. 肿瘤免疫治疗的分子基础是肿瘤抗原可以激活机体特异性CTL杀伤肿瘤细胞. 黑色素瘤抗原(MAGE)是一种肿瘤特异性抗原，是肿瘤特异性免疫治疗理想的靶分子［1-2］. 其中MAGE3可以激活机体的细胞免疫系统，活化CTL特异性地识别并杀伤表达MAGE3的肿瘤细胞［3-4］. 重组人黑色素瘤抗原MAGE3/HSP70融合蛋白是我室研制和开发的一种新型肿瘤疫苗［5］，实验表明，它对肝癌、胃癌、乳腺癌等常见恶性肿瘤具有良好的治疗效果和预防效果，在肿瘤的治疗方面具有潜在的临床应用价值［6］. 作为广谱抗肿瘤药物的研究，其用量较大，为了得到大量的重组MAGE3/HSP70蛋白，就需要大量的诱导表达MAGE3/HSP70蛋白的基因重组菌体，而高密度发酵是获取大量基因重组菌体重要策略之一［7］.

基因工程菌的两阶段培养法是基因工程的一大进步，它是通过合适的诱导条件将工程菌的发酵过程分为菌体生长与产物表达两阶段，为了增加基因产品的时控产率，不仅需要提高工程菌的表达水平，同时必需增高菌体增殖密度［8-9］. 对于通过化学诱导表达目标蛋白的工程菌，诱导时机和诱导时间对菌体的生长密度和比生产率有较大影响. 在细菌的对数生长中期诱导比早期和后期诱导产率高，而且只有工程菌处于对数生长时期，目标蛋白的表达水平才最高，一旦工程菌进入稳定生长期，目标蛋白的表达水平迅速下降，可能与菌体内的酶体系有关. 在对数生长期菌体内的各种酶体系代谢旺盛，尤其是转录、翻译酶体系很活跃，而进入稳定生长期后，该酶体系活性减弱或代谢速度减慢，只能勉强进行转录和翻译，从而引起细菌生长状态下降，表达外源基因的能力也随之降低［10-11］， 所以应在对数中期进行诱导. MAGE3/HSP70工程菌活化6 h，A600 nm为12.3时处于对数生长期中，此时进行IPTG诱导，收菌量与目标蛋白的表达量都达到较高水平. 研究虽然对MAGE3/HSP70工程菌进行成功的发酵，但是收菌量还有待进一步提高，发酵条件还要进一步优化，以达到中试生产的要求. 在下步纯化过程工作中我们一方面要提高MAGE3/HSP70蛋白的可溶性表达，另外还要摸索包涵体的复性条件，以期提高蛋白的最后得率.

为了进一步明确发酵表达并纯化的MAGE3/HSP70在体内的抗肿瘤免疫活性，我们利用检测细胞免疫反应的通用方法，酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测了MAGE3/HSP70激活机体免疫反应的情况. 结果发现用MAGE3/HSP70免疫小鼠，刺激机体产生分泌IFNγ的T淋巴细胞频数显著高于PBS组，HSP70组，MAGE3+HSP70组以及MAGE3组. 同时LDH杀伤实验表明MAGE3/HSP70可以激活机体免疫系统产生特异性CTL杀伤表达MAGE3的肿瘤细胞，且显著高于其他各组，而对不表达特异性抗原的细胞没有杀伤作用. 说明MAGE3/HSP70在制备过程中保持了药物的性能. 本实验为MAGE3/HSP70的进一步应用奠定了基础.

【参考文献】

［1］ Xiao J， Chen HS. Biological functions of melanomaassociated antigens ［J］. World J Gastroenterol， 2004，10(13):1849-1853.

［2］ 马加海， 隋延仿， 叶菁， 等. 肿瘤抗原基因MAGE3的克隆、原核表达与纯化［J］. 第四军医大学学报， 2004，25(6): 485-488.

［3］ Marchand M， Punt CJA， Aamdal S， et al. Immunisation of metastatic cancer patients with MAGE3 protein combined with adjuvant SBAS2: A clinical report［J］. Eur J Cancer， 2003，39(1): 70-77.

［4］ Minami K， Yamaguchi Y， Ohshita A， et al. Generation of antigenpresenting cells using cultured dendritic cells and amplified autologous tumor mRNA［J］. Oncology， 2005，69(5):399-407.

［5］ Ma JH， Sui YF， Ye J， et al. Heat shock protein 70/MAGE3 fusion protein vaccine can enhance cellular and humoral immune responses to MAGE3 in vivo［J］. Cancer Immunol Immunother， 2005，54(9):907-914.

［6］ Duan Z， Duan Y， Lamendola DE， et al. Overexpression of MAGE/GAGE genes in paclitaxel/doxorubicinresistant human cancer cell lines［J］. Clin Cancer Res， 2003，9(7):2778-2785.

［7］ Khalilzadeh R， Shojaosadati SA， Maghsoudi N， et al. Process development for production of recombinant human interferongamma expressed in Escherichia coli［J］. J Int Microbiol Biotechnol， 2004，31(2):63-69.

［8］ Zawada J， Swartz J. Maintaining rapid growth in moderatedensity Escherichia coli fermentations［J］. Biotechnol Bioeng， 2005，89(4):407-415.

［9］ De Anda R， Lara AR， Hernandez V，et al. Replacement of the glucose phosphotransferase transport system by galactose permease reduces acetate accumulation and improves process performance of Escherichia coli for recombinant protein production without impairment of growth rate［J］. Metab Eng， 2006，8(3):281-290.

篇8

对于一流高校理科专业的学生来说，在本专业继续深造是比较保险的出路，也是大多数人的选择，除此之外的举动，例如工作、转系等等，都被视为冒险项目。

与李杰的清闲相比，在上海，4岁孩子的父母们忙碌起来，5月和6月是幼儿园报名的高峰期，一些名牌幼儿园的名额早早就会被一抢而空，为了能在9月开学时给孩子寻找一条“金色起跑线”，家长必须提前数月打听情报、尽早在网上登记，“通路子”、找关系，有的家庭一家六口悉数出马，清早起床分赴不同幼儿园拿号排队，以便能让孩子在多家幼儿园得到“面试”机会。“和高考填志愿一样。”有家长在幼儿论坛的择园版抱怨，他们心力交瘁，同时也暗自担忧，如果从4岁起就如此疲于奔命。那未来的十几年学习生涯，甚至毕业后孩子的工作出路，都像是一副枷锁，牢牢束缚住他们的生活和希望。

“名牌大学”VS“理想的大学”

威尔・肖茨是世界上唯一一个拥有“谜语学’学位的人，1974年，他进入印第安纳大学学习，该大学有一条规定――本科生可以自行设计学位课程，专业方向不限，只需要满足基础课及学分要求。这在很多高校是想都不敢想的规定，可是给了威尔一个机会，这个喜欢猜谜的年轻学生试着提交了一份谜语学学位课程计划。教授们虽然吃惊，最终还是批准了，于是他读完自己设计的谜语学课程，提交西方谜语史论文，随后考取弗吉尼亚大学法学院，三年后放弃考律师(美国律师的吃香程度相当于如今中国的公务员)，进了一家杂志社编写字谜。

如今，威尔的“成功业绩”包括《纽约时报》的纵横填空字谜和NPR周日字谜节目；家藏两万种古今谜语文献，包括十六世纪珍本；还创办了全美字谜大赛和万国谜语锦标赛，担任世界各地的谜语赛事的主席、评委或特邀顾问。

作家冯象在《理想的大学》一文中写道：“我在威尔身上看到了理想的大学，那里，学生可以自由发展个性与才智，而不必套进同样的模子，试图长成或装扮同样的人材。千人一面，一个脑袋。”

李杰谈论他们班那个“唯一去找工作的同学”时说：“他是一个比较有想法的人。已经直接保博了，可是想到未来5年都待在高校研究所里，而研究的项目又不一定是自己想做的，与其浪费青春，不如干脆进入社会锻炼。”

1986年12月出生的李杰是江苏前黄高级中学保送至清华的学生。当年在那个省重点学校，他排名年级前五，父母对他报考化学系有意见，希望他读一个例如计算机那样的专业。“社会上所谓热门专业，好找工作，都是错误的。10年前计算机那么火，都去读，现在毕业的学生不过也就是当个底层IT人士罢了。”李杰费了一番口舌说服文化程度不高的父母，他的父亲后来觉得“学化学可以做药，做化肥，人没有计算机也能活，但生病了不吃药不行”，便想通了。李杰认为自己也算是对出路想得比较明白的人――这是他的爱好，他愿意在这条路上一直走下去，而他的很多同学是“随大流”，既然大家都走这条路，也很保险，那么就这样吧。

去年从北大生物系毕业的吴玫选择了一条截然不同的道路，她不尽然同意“保研―出国―直博”这一高校理科生的单一模式，毕业后当了一年古琴老师。“我的同学都觉得我很奇怪。”她穿着亚麻布的衣服，在琴馆过着弹琴、上课、喝茶这样相对悠闲的日子，她的父母也希望她能够继续深造，或者回西安去找一份稳定的工作，她现在需要给父母一个留在北京的理由，因此也考虑如何重新规划人生。跳出现有体制总要经历阵痛，吴玫不否认压力很大，虽然觉得在琴馆或许是一种逃避面对“模式化人生”的方式，可是她的眼神看上去颇为坚定，并不为自己的决定感到后悔。

“成人”VS“成功人士”

过了22岁这个坎，李杰和吴玫结束必要的学业，做出了自己对人生的选择，完成了没有仪式的成人礼，进入真正“成人’’阶段，“自己对自己的决定负责”，他们都提到了同样的一句话，然而却离目前社会价值观中“成人”的光环还很远。

李杰算了一笔账，如果去国外读博士，那么一年奖学金就有2万2千美元至2万5千美元不等，通常开销1万至1万5肯定够了，剩下的1万美元是“净赚”，5年下来也有5万美元的积蓄，按照现在的汇率计算，相当于30万人民币左右，“等拿到博士学位回来，买一套房子的首付算是有了。”

那些指望孩子将来上名牌大学，赚大钱的父母恐怕要失望了，“成人”与“成功人士”之间不划等号，22岁出国，读完博士已经29岁，该谈婚论嫁了，“没房没车谁要你々”李杰说。而如今家长的投入，光是属于非义务制教育的学前教育，费用已经不成比例的高。根据上海市的一项统计，幼儿园有“六大费用”是逃不了的：公办幼儿园伙食费4元／天；托管费在公办的示范幼儿园收费1200元左右／月，一般中等私立幼儿园的托班管理费是每月800多元，而收费高的则在1200元以上，有台、港地区投资背景的幼儿园一般是每月2000元，更有以美元收费的，折合人民币每月上万元；代办费用于幼儿园订阅幼儿教育类书籍、购买文具用品和卫生用品的支出，一般每学期收100至120元；中午睡觉要购买的被褥费80至400元左右，有些幼儿园还会要求购买校服，置装费大多在200元以上；休闲活动费，根据活动成本计算；特长兴趣班，这个收费过杂，无法计算。此外不包括赞助费。

问题在于，李杰的同学中，他很少听说有人上过课外补习班的，吴玫也如此。李杰的一个室友，初中二年级几乎没上过学，因为“他上初一时把初二和初三的教材都看了，说很简单嘛，没什么难的，他妈妈也管不了他，差点退学了。”事实上这名室友照样轻松考上了清华。巧立名目的补习班，顿时成了一种悖论。

“好好学习”VS“好好做人”

2009年6月2日，教育部学生司副司长姜钢透露，今年高考报名人数约为1020万名，比去年约减少40万，将有84万应届毕业生不参考。幼教热与高考“遇冷”形成可笑的反差。从4岁到22岁的成长期，中国人承受着冰火两重天的考验，这段时间里教育成为一个家庭唯一的重头戏，中国青少年研究中心的调查显示，54.7％的父母要求孩子读到博士，83.6％要求孩子考试考前15名，2005年全国妇联的一项调查显示，母亲对孩子说得最多的一句话是，“好好学习”，排在其后的是“功课做了没有”。中国青少年研究中心副主任孙云晓认为，这样容易造成“情感荒漠化”，即只将注意力集中在知识和技术等狭窄的领域，为实现个人目标而很少考虑可能带来的恶劣后果等。

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摘要：实践证明，只要学生有兴趣识字，并且掌握一定的识字方法，再通过少写多认多复现进行巩固，他们就可以轻松完成新《课标》提出的识字要求，为阅读奠定良好基础。本文结合自己的教学实际，介绍了一些识字教学的方法，仅供参考。

关键词：识字教学；拓宽渠道；激发兴趣

《语文课程标准》指出：“语文是一门实践性很强的课程，应着重培养学生的语文实践能力，而培养这种能力的主要途径也应是语文实践。”识字写字是第一学段语文教学的重点，而要提高识字教学的效率，关键的因素还是培养学生的自主识字能力，这种能力的培养不是一蹴而就的，需要老师花很大的功夫，想很多的办法。

一、幼儿园要努力为幼儿创设一个认读汉字的环境

首先，幼儿在一日活动中，同样也会碰到、看到各种东西。比如门窗、墙壁、桌椅、钢琴、玩具……凡是能用汉字标明的实物上都尽可能与汉字挂钩，让孩子们识物的同时就能见到与之对应的汉字。让幼儿在不知不觉中，自然而然地把图像、声音、语义、符号整合在一起，从而认识汉字。其次，教师在与幼儿交往中，也要注意营造一个认读汉字的环境。现在，不少幼儿园实行了在胸前佩带标志的制度。这不但能标明每个人的身份，而且具有教儿童识字的功能。我们只要把人名写入标志，在幼儿与教师和小朋友的交往中，他们就能认读其上面的汉字。最后，教师通过组织幼儿开展多种多样的活动，充分拓展他们识字的空间。也可以在区域活动中，向幼儿提供字典、图文并茂的图书，各类看图识字卡片等，供幼儿自己去查找感兴趣的文字。

二、拓宽识字渠道，鼓励学生生活识字

生活是语文学习的最好资源，识字也不例外，学生学习汉语有别于学习其他语言，它具有母语学习的优势，因此我们必须充分发挥这一优势，鼓励学生在生活中识字。放开手，让学生自主识字。孩子有孩子的年龄和心理特点，他们最知道自己喜欢什么样的学习方式，最会寻找符合自己个性的学习识字的方法，而这些学习方式一旦被鼓励和激发，就会变成孩子宝贵的学习资源，成为方法性的资源，而且这些资源不仅不会遗忘，而且会随着时间的积累而越来越熟练和提高。

三、制作生字卡片是一种很好的学习识字的方式

学生自做的卡片虽然没有买来的好看规范，但正是这些各具特色的卡片才体现了学生的个性，培养了学生的创造能力。它至少可以起到这样一些作用：1、可以让学生在预习课文时提前与生字见面，在课后做卡片则可以起到巩固生字的作用，增加学生与生字见面的机会；2、在做卡片的过程中，可以抄写，可以剪贴，也可以配插图，勾花边，学生的动手操作能力得到了很好的培养；3、好动是孩子的天性，多样化的活动既符合孩子喜爱动手的特点，又避免了单纯抄写生字的枯燥和无聊，让学生真实地感受到学习生字是一项愉悦的活动，可以想象，这样的家庭作业是受孩子喜爱的。4、人手一套的生字卡片便于学生在小组学习中合作学习。孩子们拿着自己的小卡片，可以自己拼读，可以让同伴欣赏，也可以当小老师拿卡片来考考小组内的同学。可见，这小小的识字卡片真是为学生独立识字能力的培养插上了翅膀。

四、从课中遵循规律识字

低年级学生的注意力保持时间短，每节课所学的字不多，指导学生小组合作学习生字，并在全班旧了交流识字方法，再当堂采取多种方法复现，及时巩固要求认识的字。根据儿童“先快后慢”的遗忘规律，在识字教学课后两三天内进行复习、巩固尤为重要。我利用学生在合作中、游戏中、活动中巩固识字。我在生字教学中利用摘苹果、走迷宫、找朋友、巧配对等游戏的方式在兴趣盎然中加深印象。我鼓励儿童自编句子、儿歌、谜语，鼓励学生从身边，从书报上找到刚识的字，在语言环境中及时巩固识字，并和学生一起参与。例如，我教学“丛”字，顺口说了一个谜语：“两人桥上走”，马上就有学生说出了“江”“照”“日”“田”等字的谜语，学生们根据谜语很快就记住了生字。我还鼓励学生“异想天开”，找一些不相关的字词连成自认为觉得有趣的一句话或一段话，这样既巩固了生字，同时又训练了学生的想象能力、思维能力和表达能力，学生们都很乐意做这样的“发明创造”。每一课识字完毕，我还让学生总结自己喜欢的识字方法，如：记部件、熟字加偏旁部首、熟字换偏旁部首、找形近字、找同音字、找相关字等等，学生们总会找到适合自己的识字方法。

五、引导学生发挥想象，激发识字兴趣

开始识字时，为了提高学生的学习兴趣，我告诉小朋友：我们中国的汉字很奇妙，一个汉字可以是一首诗、一幅画、一首儿歌、一个故事。小朋友听了便十分有兴趣。开始教生字时我有意识地把一些生字编成谜语，故事讲给他们听。小朋友听了之后很感兴趣，一下子就把生字记往了，之后，我便鼓励他们自己来给生字编编谜语，讲讲故事。小朋友的情绪很高涨，有的小朋友编得谜语相当出色，连老师都不曾想到，如“底”字，小朋友说：“有个小不点来到广场下买了一瓶乐百氏奶，‘底’字下面的一点代表小不点，不能漏掉。”但在教学时应适时点拨，引导，避免学生为了编个谜语，讲个故事就硬性把字拆开，强行把各部件编成没有任何联系的故事、谜语。

六、周期复现巩固识字

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“定位”这个词是我们电视工作者经常挂在嘴边的一个词。“定位”的意义在于以明确的方向、目标给自己以与众不同的个性形象，从而受到社会的承认与关注。归纳起来，节目定位的依据大体有三个：一是根据受众对象定位；二是根据节目内容定位；三是根据节目形式定位。任何一个电视节目要想办出特色，受观众欢迎，定位的准确与否是关键，儿童节目也不例外。

一、儿童节目定位的依据

电视节目的准确定位取决于节目的基本属性，儿童节目顾名思义是做给儿童看的节目。儿童节目定位的依据主要就是它的受众对象即观众，在电视事业日益发展的今天，儿童电视节目应该成为孩子们课余的伙伴，家庭的课堂，这一点已成为人们的共识。

二、儿童节目的定位与节目内容、形式的统一

对于儿童节目来说，定位容易，但具体操作起来却难，容易出现节目内容、形式与定位不相符的错位情况。儿童节目是做给孩子们看的，但做节目的却多是成年人，制作者往往带着成人的视角来想象儿童的喜怒哀乐和兴趣点，把成年人的主观思想强加给孩子。

为此，作为成年人的编导应该做到：

1.学会尊重。这里的尊重包括两方面内容：一是指要尊重儿童成长发展的客观规律。儿童的年龄特点决定了他们心理发展的特征，所以儿童电视节目制作者必须要根据儿童的心理特征和年龄特点来策划节目；二是指要尊重儿童本身。儿童有自己独特的情感世界，对外部世界有着独特的感知能力，观察问题、思考问题也有其独特的视角和方法，我们要平等地对待他们，把他们当做完整的、独立的一个人，深入地感受他们真实而丰富的心灵。

2.学会沟通。学会沟通，就是要以它们的视角观察世界，以它们的思维方式去思考问题。要走进他们的世界里，了解他们喜欢什么、讨厌什么、关心什么、害怕什么，这样他们才能接纳你，把你当成他们的朋友。在尊重儿童的基础上，与他们进行很好的沟通，孩子们就会很愿意把他们的心里话，把他们的喜好告诉我们，我们做出的节目也就能更加受到儿童的欢迎。