病毒学范文10篇

病毒学范文篇1

和铁钉在环境中不同的是，非复制期病毒和微生态环境仍然有信息的交换：溶原态的入嗜菌体得到一定量的紫外线或化学信息而进入复制期，巨噬细胞得到流感病毒衣壳的结构而介导抗体的合成。T4嗜菌体得到E.coli细胞表面受体的信息收缩衣壳将DNA注入E.coli体内。病毒在从非复制期进入复制期往往都可以看作非复制期病毒在得到了微生态环境中的化学、物理和生物信息，作出了“主动”反应而进入了复制期。铁钉对任何环境信息都没有反应，永远在“非复制期”。这就是非复制期病毒和无生命物质的根本区别。

病毒在非复制期有三类微生态环境。

第一类是从一个宿主到另一个宿主间的生态环境，如感冒病毒存在于空气中；甲肝病毒存在于下水道中；虫媒病毒存在于昆虫的消化道，或脊髓灰质炎病毒疫苗存在于糖丸中。在第一类微生态环境中，病毒与环境的关系是病毒对环境因子的耐受，类似于前面讲到的铁钉存在于界。病毒存在于第一类微生态环境总是按一定的半衰期消失，病毒在这种生态环境中没有进入复制期的可能性，但有机会进入第二或第三类微生态环境。这类微生态环境可以称业“病毒的抵抗性生态环境”。病毒如果总是停留于抵抗性生态环境中，最终的结果只有死亡。

病毒存在于抵抗性生态环境中，对其较大的已知的环境因子有紫外线、氧气或其它氧化物、去垢剂及各种蛋白、核酸变性剂、消化水解酶等。在医学上用照射紫外线，熏蒸甲醛(蛋白变性剂)、醋酸或乳酸(氧化剂)杀灭空气和物体表面的病毒，用次氯酸盐溶液浸泡瓜果、餐具，可以快速杀灭病毒。

不同的病毒对相同的环境因素的耐受是不相同的，往往在医学病毒学有关“病毒的理化特性”可以查阅到相关的知识。如黄祯祥主编的《医学病毒学基础及实验技术》第666页描述流感病毒的理化性质为：

流感病毒通常56℃加热30分钟被灭活，在-70℃或冰冻干燥后病毒活性可以长期保存。病毒活性在含有50%甘油盐水的感染组织中，在0℃条件下能保存数月。最适pH为7.0-8.0,在pH3.0时感染力迅速被破坏，但禽类流感病毒具有耐酸性。病毒对脂溶剂敏感并被紫外线、甲醛、去污剂和氧化剂所灭活。

病毒在这种环境中往往是它繁殖周期中最为脆弱的环节。

有关病毒在抵抗性生态环境的知识可以告诉我们怎样杀灭在这个时期的病毒，或怎样在需要时保存病毒。

第二类生态环境病毒在是宿主的细胞间或腔管内，如乙肝病毒存在于人体的淋巴液和其它细胞间液；HIV病毒存在于血液；轮状病毒存在于消化道内。

非复制期病毒的第二类生态环境是宿主体内的细胞间环境。病毒在这个环境中也不能进入复制状态。由于存在于宿主体内，病毒的微生态环境中不存在氧化剂、脂溶剂、蛋白变性剂及紫外线等天然的或人为的因素。对病毒造成损伤的环境因素主要是细胞间液或血液中的各种酶类和宿主的免疫体系。

由于生存在环境的选择，细胞间或腔管内的酶类只能杀灭偶然进入这种环境的病毒，而对适宜生存的病毒种类是无能为力的。轮状病毒如果不能抵抗人的胃酶或肠道中的胰酶的攻击，就不能在肠道细胞中繁殖，势必在自然界消失。肝炎病毒如果不能抵抗血液和淋巴液中的酶类的打击，就不可能长期存在于人体中。

第二类微生态环境是病毒在感染途径中必需越过的环境。

第二类生态环境中最有意义的对病毒的破坏因子是宿主的免疫体系，包括体内外屏障作用，巨噬细胞、NK细胞、K细胞等，其中抗体系统在抵御病毒的侵犯的过程中意义最大。

非复制期病毒在宿主免疫系统的攻击下并不是无能为力的，在进化选择在压力下病毒可以通过这样一些途径避免全军覆没：

1.在不触发集体特异免疫反应的区域存在，如局限于表皮生长的痘病毒，扁平疣病毒，一些多瘤病毒。

2.在没有初始免疫的个体中越过第二类微生态环境；如正粘病毒科的感冒病毒，风疹病毒，甲肝病毒，以及不久前被消灭了的天花病毒。

3.在机体中和抗体下降，或机体免疫功能下降的时候经二类微生态环境。当抗体水平上升时，病毒已经躲进细胞内。比较典型的例子是水痘-带状疤疹病毒，HIV病毒。

4.不产生触发免疫系统的物质，如类病毒，拟病毒。

所有能在动物和人体寄生的病毒都能利用这样或那样的在非繁殖期度过第二类微生态环境。人类希望改变微生态环境的方法来消灭第二类环境中的病毒，除传统采用的免疫接种以外尚无成功的例证。

病毒的第三类生态环境是在宿主的细胞内，如腺病毒整合于鼠类动物细胞的染色体上；虹彩病毒结晶于昆虫的体表细胞内；水痘一带状疱疹病毒潜伏于人体背根神经细胞中。

存在于宿主细胞内的病毒明显处于非复制期的有两种情况：一是昆是虹彩病毒，多角体病毒在病毒成熟以后结晶；二是宿主细胞死亡，其余很难分清病毒是否处于非复制期。象乙肝病毒，SV10病毒整合于宿主细胞染色体上，也有部分基历不同程度的表达，不能严格的称为非复制期。

细胞内的环境对病毒的生存是有利的：细胞内的水解酶被约束在溶酶体中，机体的免疫体系鞭长莫及，不能在细胞内发挥作用?

在第二和第三类病毒的微生态环境中，一百多年来人类试图通过改变生态环境使之不适宜病毒的生存。明显取得成功的是接种免疫：以此消灭了天花病毒，降低了乙肝病毒、脊髓灰质炎病毒等严重危害人类健康病毒病的发生。还进行下一些实验，虽然没有显著成果，却是人类战胜毒性疾病的努力方向：

1.药物，期望向克服细菌疾病一样克服病毒性疾病。

2.反义基因，将病毒基因组永远封闭在非复制期。

3.特定酶的抑制剂，如HIV逆转录酶抑制剂，将HIV病毒封闭于非复制期。

病毒在宿主细胞中进入复制期后，完整的病毒颗粒不再存在。病毒的核酸面对的是宿主细胞代谢系统的分子环境。如果该细胞适于病毒的繁殖，病毒充分利用环境中的原材料、能量和酶，开动复制机器，复制病毒元件，装配新病毒。如果细胞的代谢系统只有部分可以被病毒基因所利用，如人腺病毒C亚属在猴细胞中的复制，不能包装出完整的新病毒。但腺病毒基因产物转化细胞，基因整合到染色体中，随细胞的分裂而遗传下去。一些种类的病毒不只是利用环境，还复制出特定的核酸和蛋白，抑制细胞自身的分子合成。总之，病毒在复制期的分子生态也和其它生物在生态系统中作用类似，存在个体-环境的相互作用。

病毒学范文篇2

关键词主要呼吸道病毒单克隆抗体杂交瘤细胞库

Establishmentandclinicalapplicationofthehybridomacellbankofmonoclonalantibodiesagainst8typesofmainrespiratoryviruses

DUANPei-Ruo,ZHANGLi-Li,HANHong-Yanetal.

DepartmentofClinicalExperiment,No.262HospitalofPLA,Beijing100088

AbstractObjective:The8types,4kindsofmainrespiratoryviruseswhichcausehumanrespiratorydiseases,includeinfluenza-A、B,parainfluenzavirus1、2、3,respiratorysyncytialvirusandadenovirus-3、7.Methods:Haddevelopedakittorapidlydiagnosethesevirusesfrom1986to1997.Bythetechniqueofhybridoma,hadprepared117hybridomacellstrainssecretingMcAbsofthese8types,4kindsofvirusesandofalkalinephosphatase.TheMcAbsformajunctionalcomplexplusalkalinephosphataseanti-alkalinephosphatase(APAAP)bridgedrapiddiagnosis.Results：Theresultofthekitiscredible,andnodisturbanceofPendogenousenzyme.Performingthediagnosis,onlyneedageneralopticalmicroscopeandcanfinishin2or3h.Thehybridomacellbankcanprovidenotonlythereagentsoftherapiddiagnosis,butalsothereagentsforanalysisofvirussubgroups,virusvariationandgeneexpression.Conclusion:Theserialreagentsoftherapiddiagnosishavebeengranted4newdrugcertificatesand5productioncertificatesbytheministryofHealthDepartmentofNationalHealth.

KeywordsMainrespiratoryvirusesMonoclonalantibodyHybridomacellbank

国内外专著指出：对人类，尤其是婴幼儿，威胁最大的为流感病毒甲（Influenza-A,FluA）和乙型（Influenza-B,FluB）、副流感病毒1、2和3型（Parainfluenzavirus1、2、3,PIV1、2、3）、呼吸道合胞病毒（Respiratorysyncytialvirus,RSV）及腺病毒3、7型（Adenovirus-3、7,Adv3、7），急性呼吸道病毒的实验诊断应首先考虑以上这4类8种病毒［1，2］。从1986～1997年应用淋巴细胞杂交瘤生物技术，完成了以上4类8种病毒单克隆抗体（Monoclonalantibody，McAb）杂交瘤细胞系的制备以及快速诊断桥联试剂、抗碱性磷酸酶单克隆抗体杂交瘤细胞系的制备工作，共9大系117株单抗细胞株。此报道如下。

1材料与方法

1.1第一抗体即4类8种抗病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

1.1.1病毒抗原来源均严格采用标准品。流感病毒甲型和乙型毒株购于首都病毒研究所流感中心［3，4］，副流感病毒1、2、3型毒株购于美国马里兰州ATCC国际毒株库［5-7］，呼吸道合胞病毒long株由友谊医院病毒室提供［8］，腺病毒3、7型毒株由预防医学科学院病毒研究所毒株库提供［9］。

1.1.2动物免疫病毒采用Balb/c小鼠易感系统加脾攻击方法进行［3-9］，碱性磷酸酶采用皮内半佐剂加静脉免疫［10］。

1.1.3细胞融合按文献［1］常规法进行。

1.1.4阳性孔检测用IFA荧光法以及间接反向ELISA。

1.1.5细胞株的鉴定所有的细胞株要求经3次以上亚克隆，3次反复冻存，3个月的37℃环境下传代，对52株单抗做Ig亚型分析，染色体分析，每株均要求作阻断、替代、交叉、封闭以及稳定性6种特异性鉴定［3-10］。

1.2第二抗体即兔抗鼠的制备按文献［1］进行。

1.3第三抗体即抗碱性磷酸酶（Alkalinephosphatase，AP）单克隆抗体细胞系及其复合物（APAAP）的制备动物免疫用的抗原系美国Promege公司产的精酶，采用反向间接ELISA检测技术获得抗碱性磷酸酶单克隆抗体细胞系，然后选择单抗最适浓度结合抗原，制成APAAP复合物［11］。

1.4快速诊断两种技术

1.4.1将8种抗呼吸道病毒单抗用于桥联（APAAP)

快速诊断技术。

1.4.2将8种抗呼吸道病毒单抗用于间接荧光（IFA）快速诊断技术［7-9，12］。

1.5临床应用方法

1.5.1研究者的临床应用见文献［6-9，11，13］。

1.5.2协作者的临床验证见文献［14-16］。

1.5.3国外产品应用WHO标准品验证［6-9］。

2结果

2.18大系单抗细胞库的建立和鉴定结果

2.1.1建立起一个比较完整的抗主要呼吸道病毒单抗杂交瘤细胞库1986～1997年共获8大系108株单抗细胞株：抗甲型流感11株；抗乙型流感6株；抗腺病毒3型14株；抗腺病毒7型7株；抗副流感1型18株；抗副流感2型5株；抗副流感3型22株；抗合胞病毒25株。以上8大系单抗杂交瘤细胞系的建立见文献［3-11］。

2.1.2系列单克隆抗体Ig亚型和效价分析见表1。

2.1.3系列单抗的效价测定用于临床快速诊断的以上52株单抗，平均结合病毒效价为8000～32000(+++，荧光法)，其连接物碱性磷酸酶单抗效价

表18种主要呼吸道病毒单克隆抗体Ig亚型分析

Tab.1AnalysisofIgsubtypesofMcAbsagainst8typesofmainrespiratoryviruses

McAbsNumber1)Igsubtypes

IgG1IgG2aIgG2bIgG3IgM

FluA11623

FluB5113

PIV16411

PIV25212

PIV3624

RSV871

Adv7532

Adv333

AP33

Total5215161218

Note:1)allofthe52cell-linesselectedwereusedfortherapiddiagnosis达2000万（+++，反向间接ELISA），证实9大系列单抗均具有高度的敏感性和亲和力，效价要高出动物抗血清20～600倍，且无抗细胞抗体混杂。

2.1.4单抗的特异性鉴定结果交叉试验：各株单抗分别与常见的9～12种呼吸道病毒抗原和相关病毒（腮腺炎病毒、麻疹病毒等）作交叉试验，结果无交叉反应。阻断试验：各株单抗分别以异种动物抗血清作阻断，血清在1：2～1：8时，系列单抗被特异阻断。替代试验：以1%小鼠血清替代系列单抗作已知阳性标本，均为阴性。免疫印迹反应（Westernblot）、结合表位鉴定：合胞病毒（8株）、副流感1、2、3型（16株）、腺病毒3、7型（8株），抗原经还原处理后，单抗能清晰地与对应病毒蛋白的表位结合［14］。单抗的纯化和冰干：经盐析用DEAE-52离子交换层析后，比活性达95.2U/mg以上。将各株单抗按8个单位应用效价稀释后按8种抗病毒抗体分别混合组成诊断试剂，制成冰干品。

2.2兔抗鼠（二抗）及兔抗鼠荧光标记免疫效价为1：32（+++，双扩法），兔抗鼠以荧光标记纯化，应用效价为1：10稀释。

2.3碱性磷酸酶单抗及复合物结果共获单抗细胞株9株，单抗在16000U/ml时结合碱性磷酸酶抗原4U，成为APAAP复合物。

2.4系列呼吸道病毒单抗用于桥联快速诊断的质量指标结果见表2。表2系国外快速诊断试剂和病毒分离、双份血清、WHO-McAb标准品和IFA技术对照所得。以上结果证实系列单抗用于桥联快速诊断的各项指标符合生物试剂标准。

表2系列呼吸道病毒单抗用于快速诊断的质量指标

Tab.2ThequalityresultsofseriesofMcAbsusedintherapiddiagnosis

IndicatorViruses

FluPIVAdvRSV

Sensitivity(%)93.30100.0090.0093.50

Specificity(%)100.0099.0099.40100.00

Pseudo-positiveratio(%)01.000.580

Pseudo-negativeratio(%)6.70010.006.20

Positivepredictionvalue(%)93.70100.0090.0090.00

Negativepredictionvalue(%)100.0096.0098.40100.00

Grossuniformity(%)92.3099.0098.8096.00

Adjusteduniformity(%)92.3598.0094.5095.70

Youdenindex0.8900.9900.8970.930

2.5系列呼吸道病毒单抗用于桥联快速诊断试剂申请的国家新药证书和文号从1991～1994年经申请和审批，共获4项新药证书和5项生产文号，它们是合胞病毒，(93)卫药证字S-05号，(93)卫药准字(京星)S-02号；副流感1、3型，(94)卫药证字S-21号，(94)卫药准字(京星)S-01号；副流感2型，(94)卫药证字S-25号，(94)卫药准字(京星)S-03号；腺病毒3、7型，(94)卫药证字S-22号，(94)卫药准字(京星)S-02号；流感A和B型，(94)卫药准字(京星)S-01号。

3讨论

急性病毒性呼吸道感染是人类最常见的传染病，尤其是军营、学校、幼儿园等人群聚集的地方，常在流行期呈几十人甚至几百人发病，人们往往很难弄清病毒病因。本研究用10年时间建立起比较完整的抗主要呼吸道病毒单抗杂交瘤细胞库，连同连接物碱性磷酸酶单抗杂交瘤细胞株，此库共有9大系117株细胞株，其中抗副流感1、2、3型和抗呼吸道合胞病毒G蛋白单抗等70株为国内少见报道的细胞株。该库的建立，不仅可不间断地提供8种主要呼吸道病毒快速诊断试剂［14-17］，还可为国内主要呼吸道病毒的亚型分析、病毒变异以及基因表达等提供研究试剂［18，19］。

本研究创立的抗主要呼吸道病毒桥联诊断试剂，克服了内源酶对结果的干扰，只需1台普通显微镜即可观察细胞内病毒抗原存在，其结果清晰快速，2～3h可获得准确诊断结果［11，13，15，16］。我国是世界公认流感病毒大流行株及变异株发源地，此试剂有较大的实用价值，本研究者曾3次在6h内快速报道流感疫情［20，21］。系列诊断试剂经国家生物制品鉴定所严格鉴定和审查，已获4项国家新药证书，5项生产批准文号，它们是国内首次按“药品管理法”审批程序批准的系列呼吸道病毒单抗桥联快速诊断试剂。

作者简介：段佩若，女，62岁，主任技师，主要从事医学呼吸道病毒学研究

作者单位：(解放军第262医院医学实验科，北京100088)

4参考文献

1郭元吉.呼吸道病毒.见：黄桢祥主编.医学病毒学基础和实验技术.北京：科学技术出版社，1990：655

2GlezenW.Seriousmorbidityandmortalityassociatedwithinfluenzaepidemics.EpidemiolRev，1992;4:253段佩若，韩洪彦，张容惠etal.抗甲型流感病毒内部抗原和表面抗原(H3N2)单抗的制备和分析鉴定.中国免疫学杂志，1996;12(Suppl.):131

4韩洪彦，张容惠，张励力.抗乙型流感病毒单克隆抗体的制备和分析.细胞与分子免疫学杂志，1997;13(3):53

5段佩若，张励力，韩洪彦etal.副流感1型单克隆抗体细胞库的建立.单克隆抗体通讯，1993;9(2):60

6段佩若，张励力，韩洪彦etal.单克隆抗体用于免疫荧光技术快速诊断检测副流感病毒3型抗原的研究.中华微生物学和免疫学杂志，1992;12(5):393

7段佩若，张励力，韩洪彦etal.副流感2型单克隆抗体的制备和应用.中华实验和临床病毒学杂志，1994;8(2):171

8段佩若，赵一博,赵华etal.呼吸道合胞病毒单克隆抗体细胞系的建立和临床应用.中华医学杂志，1989;69(3):174

9段佩若，张励力，韩洪彦etal.腺病毒3、7型单克隆抗体快速诊断试剂的制备和应用.单克隆抗体通讯，1993;9(2):68

10段佩若，朱仁英，张励力etal.应用离子交换纯化单克隆抗体的实验报告.单克隆抗体通讯，1989;5(2):50

11段佩若，张励力，韩洪彦etal.碱性磷酸酶单抗及其复合物的制备及用于呼吸道病毒检测.中华流行病学杂志，1997;18(3-A):89

12段佩若，张励力，韩洪彦etal.应用系列呼吸道病毒单克隆抗体快速检测抗原的研究.中华流行病学杂志，1994;15(5):308

13段佩若，林京，韩洪彦.呼吸道合胞病毒单克隆抗体用于碱性磷酸酶桥联酶标快速诊断.中华医学检验杂志，1990;13(2):89

14张励力.免疫印迹技术对抗副流感1、3型单抗识别抗原表位的研究.中国免疫学杂志，1994;10(6):353

15盛锦云，王同权.小儿肺炎病毒学与临床研究.中华儿科杂志，1992;30(4):203

16董宗祈，陈志勤.儿童病毒性肺炎多病原检测分析.中华儿科杂志，1995;33(3):171

17阮力.呼吸道合胞病毒糖蛋白F和G在同一重组痘苗病毒中的表达.病毒学报，1992;8(2):101

18杜金林，王之梁.我国呼吸道合胞病毒抗原亚型初步探讨.微生物学报，1991;31(6):488

19段佩若，张励力，朱仁英.乙型流感局部爆发的调查.人民军医，1992;397(12):12

病毒学范文篇3

关键词：感冒；调护

急性上呼吸道感染约有70%~80%由病毒引起［1］。普通感冒是急性上呼吸道感染的常见临床表现类型，引起普通感冒的常见病毒为鼻病毒、冠状病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、埃可病毒、柯萨奇病毒等。普通感冒约半数为鼻病毒感染［2］，当人体抵抗力暂时性低弱（常因生活调摄不慎所致）时，鼻病毒乘虚侵袭，并在上呼吸道黏膜内迅速繁殖而出现急性炎症，但正常人体内有足量的抗鼻病毒抗体，所以，一周内多能病愈，对常人，这种感冒失治或误治均无大碍。但当机体正气长期不足时，再感受非常见呼吸道病毒（体内未储备足量的抗该病毒抗体），或感受流感病毒副流感病毒（毒素之毒力强），或体内有宿疾等情况下，如失治或误治，则易使感冒病程延长。临床上感冒的调护失宜，也同样不利于感冒的尽快康复。

感冒的调护应从以下方面入手：（1）适当休息。休息可蓄养精气、恢复抗病能力，增加正气抗御病邪的力度，从而正胜邪退，缩短感冒病程。（2）适当饮水。感冒发热患者往往伴有口渴喜饮，咽干舌燥，溲赤便结等津伤液耗症状。热邪壅盛于内，可从两个途径伤耗津液，一是直接灼伤体内津液，另一是蒸迫津液外泄化为汗液。阴液损伤，限制热势上升不利，致发热短时内难退，同时，筋脉失阴液滋养濡润，易致四肢抽搐，即热极生风。所以，高热患者及时适当量饮水是必要的。（3）适量水果。水果大多富含维生素、糖等营养成分，是机体生成津液、营气的主要原料之一，高热患者吃适量水果可及时补充因热所丢失的津液，津液充足又能限制热势。（4）饮食宜清淡而营养。以清淡流质，富于营养，易消化为宜，慎食油腻难消化食物。（5）对于感冒发热患者，可酌选凉性饮食物，如黄瓜、丝瓜、苦瓜、西瓜、冬瓜、芹菜、菠菜、油菜、黄花菜、竹笋、番茄、茄子、莲藕、香蕉、梨、甘蔗等；减少或避免热性食物，如葱、姜、蒜、辣椒、花椒、韭菜、小茴香、枣、牛奶、牛羊肉、川菜、麻辣串、烟酒等。（6）正确排出鼻涕。鼻液里含大量病毒，应直接从鼻孔擤鼻涕排出，如吸入口腔后吐出，则易使鼻腔下部的病毒向上部或咽部扩散。（7）感冒时的打喷嚏、流清涕，对侵袭至鼻腔黏膜上的病毒有向外驱逐、冲洗的作用，所以，感冒初期慎用减弱此作用的药物，如含马来酸氯苯那敏的速效胶囊。（8）卧室空气适当流通、保持室内空气清新，但不要让患者直接吹风。（9）汗出后及时更换内衣。（10）新愈之体，正气未复，避免再次吹风受寒。

感冒经正确的辨证用药治疗和正确的调护，大都能数日内痊愈。

【参考文献】

病毒学范文篇4

1临床资料

2009年1月至2011年4月收治慢性乙肝患者128例，均符合2010版《慢性乙型病毒性肝炎防治指南》[1]诊断标准，同时符合使用贺普丁的一般适应证，其中男75例，女53例；年龄35～57岁，平均43岁；既往均无心血管、神经、精神及血液系统等方面的疾病。在常规治疗的基础上，应用贺普丁片100mg口服，每天一次，疗程24～48周；治疗期间注意增加营养、保证充足睡眠，给心理护理。

2不良反应及处理

2．1肝损害

本组35例(27.3%)在治疗过程中出现谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)一过性增高。这种肝损害可能与机体免疫有关[3]。嘱患者注意休息，并采取心理护理，帮助其消除紧张心理，并根据患者情况采取合理饮食，高蛋白低脂饮食；升高明显者加用护肝药物，一般不影响疗程。

2.2呼吸道感染

10例(7.8%)患者治疗过程中出现咽喉疼痛、鼻塞、流涕、头痛。嘱患者休息，多饮开水，用淡盐水漱口，给速效伤风胶囊对症治疗，上述症状3～5天消失。症状消失后继续按疗程治疗。

2.3肌肉酸痛

3例(2.3%)患者在应用贺普丁治疗15天左右出现肌肉酸痛，体温正常，主要表现为腓肠肌疼痛明显，检查肌酸磷酸激酶升高，根据医嘱给布洛芬片口服改善症状，同时嘱患者多饮开水，卧床休息，严密观察肌酸磷酸激酶的变化。约3周后症状消失，复查肌酸磷酸激酶正常。

病毒学范文篇5

【关键词】乙型肝炎病毒;抗病毒药物;干扰素;核苷类似物;中草药

世界卫生组织估计全世界大约有20亿乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)感染者,其中3.5~4亿为HBV慢性感染者,每年由于急慢性HBV感染而死亡的人数达到100万,并呈上升趋势。而我国是乙肝大国,占据其中的1/3,有1.2亿HBV携带者。从数据而知,乙肝病毒感染已成为危害人类健康的重要疾病,因此对HBV感染者有效的抗HBV治疗在全世界特别是在我国显得尤为迫切。

国内外在治疗HBV感染研究中,认为HBV的持续感染是造成乙肝慢性化的主要原因,且可导致病情发展、恶化至肝硬化、HBV相关性肝细胞癌。因此,抗病毒治疗是慢性乙肝治疗的关键,被认为是迄今为止治疗HBV感染最基本的病因治疗,以抑制肝炎病毒复制为依据。本文就抗HBV药物的研究进展做一综述。

1干扰素(interferon,IFN)

IFN是机体感染病毒时,宿主细胞通过抗病毒应答产生的一组结构类似、功能相近的低分子糖蛋白,是抗病毒感染最重要的一种细胞因子[1]。主要分为α、β和γ三型,其中IFN-α和β具有直接抗病毒作用。自1992年IFN-α2b被批准用于治疗病毒性肝炎以来,迄今为止仍是被FDA批准的首先药物。目前全球获准上市的IFN有12个,以IFN-α居多,其临床疗效无明显差异。IFN的抗病毒机制包括免疫调节作用和直接抗病毒作用,并以前者为主[2]。近年发现,IFN在还有抗肝纤维化的作用。目前,IFN-α在抗HBV治疗中的问题是效果有限,抑制病毒复制但难以清除病毒,而且停药后有复发现象。近年来国内外均倾向于采用重组干扰素,激素撤除合并干扰素疗法以及干扰素与其他抗病毒药物结合疗法治疗HBV感染。如聚乙二醇IFN-α[3]是聚乙二醇(PEG)与重组IFN仅结合形成的长效干扰素。

2核苷类似物(nucleosideanalogue)

HBV为双股DNA病毒,其复制需经过逆转录过程,该类药物可抑制HBV-DNA逆转录酶活性,从而达到破坏病毒的作用。

2.1拉米夫定(lamivudine,LMV)是一种嘧啶核苷类抗病毒药,作为酶底物dCTP竞争性抑制剂,通过抑制病毒逆转录酶及DNA多聚酶,终止病毒DNA链延长,故可使HBV-DNA很快减少。清除HBe和促进HBeAg/抗HBe的血清转换,减少血液和肝脏内的病毒载量。SchmilovitzWeiss等[4]的临床研究表明,给急性重型肝炎患者口服LMV后,能有效、迅速地抑制HBV-DNA的复制,使患者获得病毒学、肝组织学和肝脏生化功能的改善,且患者耐受性好,无明显不良反应。但长期用LMV易导致的HBV突变株而降低疗效,且价格较贵,口服吸收率低,停药后极易产生“反跳”现象,且YMDD的存在影响肝病理的改善。

2.2阿德福韦(adefovir,ADV)是为无环腺嘌呤核苷单磷酸,可绕过第一步磷酸化,后者常常是核苷类药物在细胞内转化的关键步骤并影响药效。它不需要转化成三磷酸形式,只要二磷酸形式就能抑制HBV-DNA聚合酶与逆转录酶。体内外研究表明,ADV可明显抑制HBV野生型和LMV诱导病毒变异株的复制。对由LMV耐药病毒株引起的急性或亚急性重型肝炎,较早加用ADV,能减缓或终止病情恶化,降低病死率[5]。目前尚未发现有对ADV耐药的病毒株,故其有望成为治疗对其他核苷类似物耐药病毒株的有效药物。

2.3其他恩替卡韦(entecavir,ETV)、替比夫定(Telbivudine,LdT)已经批准上市,其他一些核苷类抗病毒药物如克拉夫定(clevudine)Ⅰ期临床研究已经完成。恩曲他滨(emtricitabine,FTC)和替诺福韦(tenofovir)正在Ⅲ期临床研究中。另外,如利巴韦林(病毒唑,ribavirin)、阿糖腺苷及其单磷酸盐、阿昔洛韦(无环鸟苷,acyclovir)、膦甲酸酯(phosphonoformate,foscarnet,PFA)、聚肌胞(双链多聚核苷酸,Poly:C)等也是直接或间接作用于病毒DNA-P的广谱抗病毒药,在慢性病毒性肝炎的治疗上也取得了一定的疗效,但也具有易复发等缺点。同时,很多新的核苷类抗病毒药物正在进行抗HBV的评估,继续研究设计新的核苷类似物也可防备耐药突变株的出现[6]。无论如何,这类药物为抗HBV的研究提供了新的希望。

3中草药及其有效成分

许多具有抗HBV的中草药被发现,受到国内国外的高度关注和广泛研究。总的来说,中草药一般同时具有多种活性:能减轻肝损伤症状,丙氨酸转氨酶(ALT)活力下降,并能促进肝细胞再生,使肝组织坏死区迅速修复;或者抑制HBV-DNA聚合酶,在DNA水平上阻断病毒的复制;或者具有HBsAg结合活性,阻断病毒颗粒装配成有浸染活性的病毒颗粒。国外学者从大量中草药中筛选了很多具有抑制HBV表面抗原和HBV-DNA聚合酶作用的草药,而且研究发现具有HBV-DNA聚合酶抑制作用的草药还有刺激产生肿瘤坏死因子(TNF)的作用。有人对60种中药的抗HBV作用进行了体外实验研究,发现有28种对HBV-DNA抑制率达50%以上,18种达25%~50%,主要为清热解毒药,其中部分可降解HBV-DNA。

3.1苦味叶下珠1982年印度学者Thyagajan等首次报道苦味叶下珠(PhyllanthusamarusL)体外对HBsAg有灭活作用[7],叶下珠为大戟科叶下珠属植物叶下珠PhyllanthusurinaiaL的干燥全草,具有清热解毒、明目等功效,主要治疗腹泻下痢、尿路感染、肝炎等[8,9]。刘庄等[10]的研究表明不同叶下珠品种和制剂在体外均有不同程度的抗HBV活性,而未显示明显的细胞毒性,相同剂量下,药物对HBsAg和HBeAg的抑制较对HBV-DNA抑制效果好,提示药物对病毒颗粒产生的抑制不仅在转录前水平,可有对mRNA翻译水平、蛋白分泌等环节也有影响。

3.2垂盆草中药垂盆草SedumsarmentosumBunge为景天科景天属多年生草本植物,又名地蜈蚣草、佛甲草,我国分布广泛。它具有清热解毒,抗菌消炎作用[11]。广泛的临床应用已证明垂盆草及其制剂具有显着的抗肝炎作用。1979年方圣鼎等分得一水溶性氰苷类成分:2-氰基-4-O-β-D-葡萄糖反丁烯-2-醇,并指出其为抗肝炎活性成分[12]。诸国华等[13]研究发现垂盆草甙是抗肝炎的活性成分;其水溶性成分具有调节机体免疫能力的作用[14]。

3.3水芹水芹(OenanlbeJapanica)在临床中对高血压、高脂血症、心脑血管疾病患者具有防治作用。研究发现,水芹甲醇撮物(100mg/kg)可明显降低血浆中脂质过氧化产物丙二醛的含量,保护超氧化物歧化酶的活性[15]。水芹[16]可以通过减少肝脏脂质过氧化产物生产是CC14所致的肝细胞空泡样变性、线粒体肿胀、粗面内质网扩张等病理损害减轻,抑制HBV-DNA的复制,从而达到抗病毒的效果。

3.4其他有效的抗HBV的中草药很多,还有多糖类如猪苓多糖、香菇多糖、云芝多糖等等,它们都有一定的抑制HBV复制的作用,并且在治疗中安全,无明显不良反应,但其作用机制尚待研究。中药汤剂对HBV也有一定作用。但中药治疗目前存在诸多问题,只有将中药与现代药物研究技术有机结合,采用随机大样本前瞻性对照研究,才能从中寻找和筛选出真正有效的药物,为人类造福。

4免疫调节药物

免疫调节剂可以提高人体的免疫功能,尤其是对HBV的特异性免疫,还可以识别和破坏HBV感染的靶细胞,达到清除HBV的目的。但应用免疫调节剂对HBV-DNA和HBeAg的阴转率尚未见报道,目前多作为辅助或与其他抗HBV药物联合治疗。

胸腺肽α1(thymosin-α1,Tα1)是一种人工合成、由28个氨基酸组成的高纯度多肽,具有较强的免疫调节作用,其作用机制可能为增强T细胞和NK的应答功能及刺激IL-2和IFN的产生,增加IL-2受体及组织相容性复合物Ⅰ类抗原在淋巴和非淋巴系细胞的表达,因而有利于机体清除肝炎病毒;同时还可以减轻TNF-α的细胞毒作用,减轻肝细胞的免疫病理损伤,促进肝脏功能的修复[17]。国外有一项关于Tα1治疗慢性乙型肝炎的临床研究中,用Tα1治疗24周,72周后1.6mg组HBV-DNA阴转率30%(bNDA法)和15%(转录介导扩增法,TMA),HBeAg阴转率达22.8%;0.8mg组的效果类似[18]。

其他免疫调节剂还有胸腺因子、左旋咪唑涂布剂、免疫核糖核酸、HBV特异性转移因子等。免疫调节剂在慢性乙型肝炎中的应用目前还缺乏针对性,疗效不确切,尚有待进一步研究。特异性免疫调节剂,如树突状细胞(dendriticcell,DC)疫苗、HBV的S和前S2治疗性疫苗、CTL多肽疫苗、DNA疫苗、反义核酸等处于实验研究阶段,治疗效果有待进一步研究。预计这种新疫苗将成为人类战胜感染性疾病的有力武器。

【参考文献】

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3MarcellinP,LauGKK,BoninoF,etal.PeginterferonAlfa-2aalone,lamivudinealone,andthetwoincombinationinpatientswithHBeAg-negativechronichepatitisB.NEnslJMed,2004,351:1206-1217.

4Schmilovitz-WeissH,Ben-AriZ,SikulerE,etal.LamivudinetreatmentforacuteseverehepatitisB:apilotstudy.LiverInt,2004,24:547-551.

5HosakaT,SuzukiF,SuzukiY,etal.Adefovirdipivoxilfortreatmentofbreak-throughhepatitiscausedbylamivudine-resistantmutantsofhepatitisBvirus.Intervirology,2004,47:362-369.

6相洪琴.金刚烷胺有望用于治疗丙肝.国外医学情报,1997,18(3):10.

7ThyagarajanSP.Ind,JMedRes,1982,76(Suppl):124.

8江苏新医学院.中药大辞典.上海:上海科学技术出版社,1979,536.

9DRGupta.JNatProd,1984,47(6):958.

10刘庄,傅希贤,张乃临,等.中草药叶下珠不同品种和制剂体外抗乙型肝炎病毒的实验研究.中华实验和临床病毒学杂志,1997,11(3):282.

11广东省卫生厅.广东省药品标准(上册),1987,10.

12方圣鼎.有效成分垂盆草甙的分离与结构.药学学报,1979,(9):431.

13诸国华,周启霆,白冬鲁.Synthesisofsarmentosin.药学学报,1999,34(1):34-38.

14林以宁,赵浩如,刘康,等.垂盆草制剂水溶性成分的药理活性研究.中药药理与临床,2000,16(6):19-20.

15张红英.水芹甲醇提取物对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用.中国中药杂志,1995,120(1):44.

16黄正明,杨新波,曹文斌.水芹水提物在鸭原代肝细胞培养中对DHBV抑制作用的初步研究.中国药学杂志,1997,32(11):720.

病毒学范文篇6

关键词:动物检疫;样品采集;检疫技术;实践应用;检疫样品

随着经济的发展，人们生活水平日渐提高，对食品安全和公共卫生越发关注。动物检疫工作关系到畜产品安全，影响着人们的生活。做好动物检疫工作，不仅是保证动物产品的质量，更是对人民生命健康安全的保障。

1动物检疫样品采集的基本要求

“动物检疫样品的采集”工作作为一项关系人民健康安全的工作，政府相关部门对“动物检疫样品采集”工作有着一系列严格要求，最大程度保障采集样品的真实可靠性以及检疫成果的准确性。

1．1安全性

安全性是指检疫工作人员在提取样品时，要做好相应的防护措施。由于样品中很可能含有危险性极高的病毒、细菌等物质，相关工作人员应当穿戴好防护服等，用以保证自身安全，避免发生动物疾病传染人类的情况。还要保证周围环境的安全，阻断一切病毒等有害物质的传播途径。可以通过杀菌消毒、隔离处理的方法，保证采集工作顺利进行。

1．2适时性

细菌病毒千变万化，为了保证检疫结果的准确性，检疫工作者应当遵照“适时性”的原则，在检疫样本死亡不超过4h的情况下，完成样品采集工作。尤其是在夏天气温较高的情况下，更要准确判断样品情况，避免样品受外界影响发生变化从而改变样品检疫工作的准确性。

1．3合理性、典型性

为保证检疫工作的准确性，采集检疫样品时，应当牢记“理论与实践相结合”，挑选典型的样本进行合理的采集工作。检疫人员可以通过扩大采集目标数量、采集含有病原体较高的个体、调高单个样品采集量等方法，确保采集样品的代表性和准确性，为后续的检疫工作打下基础。

1．4无菌性

在进行检疫样品采集工作时，应当在无菌的环境下进行。无菌环境既保证了采集工作的安全性，又保证了采集结果的准确性。

2病料处理

病料处理是指对采集的样品，通过特殊手法进行保存，以保证检疫样本的活性，保证检疫结果的准确、可靠性。病料处理有以下几种方式。

2．1病理组织学检查材料

“病理组织学检查材料”就是将样品放入10%的福尔马林溶液、或95%的酒精溶液中，并24h更换一次，以保证样品的活性，保证检测的准确性。

2．2细菌检查材料

一般用灭菌的液体石蜡、30%的甘油缓冲盐水或饱和氯化钠溶液来保存检疫样品。

2．3病毒学检验材料

一般使用50%甘油缓冲盐水保存。

2．4血清学检验材料

从发病猪无菌采取血液，注入灭菌试管中，室温或37℃环境下放置0．5～1h，然后进行4℃冷藏。

3动物检疫样品的检疫方法

随着科技的发展，社会对食品要求的严格，动物检疫样品的检疫方法开始从单一化逐渐转变为多元化发展，最常见的是临场检疫方法。类似中医问诊的方法，通过问诊、听诊、触诊、叩诊等手段进行基本判断，这也是最常见的手段。此外，还包括隔离检疫以及实验室检疫法。

3．1临场检疫

通过问诊、视诊、触诊、听诊、叩诊、和嗅诊，对动物产品质量进行判定，分辨出检疫对象健康与否，是活畜产地检疫最常用的方法。

3．2隔离检疫

根据不同动物种类，进行不同时间的隔离检疫，通过观察22动物的生理情况，判断是否健康。尤其注意，在整个过程中，不能对样品动物进行药物注射，以免影响结果的判断。

3．3实验室检疫

实验室检疫是最准确、最复杂的检疫方式，主要有病理学检疫、病原学检疫、免疫学检疫等。

4动物检疫工作的重要性

“动物检疫工作”对于保证人民生命财产安全起到至关重要的作用。在我国的检疫体系中，动物检疫一直都是重点的内容，对于畜牧养殖行业和肉禽蛋类的检疫制度相当完善，检疫的标准和流程也都有建立，但是在这样严格的动物检疫体制下，我国每年仍旧会发生动物疫情，这充分说明了动物疫病的复杂和隐秘，也更加突出了动物检疫的重要性。另外，动物检疫也是防止生物入侵的有效途径，我国每年从世界各地进口各种肉类禽类动物数量众多，如果不做好动物检疫，这些动物难免会携带外来生物进入我国，造成生物入侵，严重威胁我国的生态环境稳定。

5如何进一步加强动物检疫工作

检疫工作关乎全社会，如何加强检疫工作，是每一名检疫工作者应当思考的问题。

5．1增强检疫工作人员的思想认知

思想决定行动，因此提高检疫工作者的思想认知，让检疫工作者了解检疫工作的重要性，增强自身的荣誉感。在枯燥、单调的工作中找到工作的动力，产生工作热情。

5．2提高检疫技术

科技作为第一生产力，提高检疫技术水平，能够更加有效地加强检疫工作。同时定时检查相关机器设备，有利于检疫检查结果的准确性。

6结语

检疫工作是一项神圣且富有使命感的工作，虽然可能有些枯燥、单调，但是这些依旧不能掩盖其散发的光辉。同时，检疫工作十分复杂，这不仅要求检疫工作者要有极高的专业素养，更要有责任心、富有使命感。检疫工作者只有做到全心全意为人民着想，才能真正做好检疫工作，为人民生命健康保驾护航。

参考文献:

［1］王娜，戴伶俐，周蕾，等．动物检疫样品采集及检疫方法的应用［J］．畜牧与饲料科学，2019，40(10):95－98．

病毒学范文篇7

心肌炎是指心肌中有局限性或弥漫性的急性、亚急性或慢性炎性病变，常为各种全身性疾病的一部分。近年来由于对心肌炎的病原学的进一步了解和诊断方法的改进，心肌炎的诊断增加，已被作为常见的心脏病之一，而病毒性心肌炎在其中发病率最高，是当前我国最常见的心肌炎。病毒性心肌炎是病毒所引起的心肌急或慢性炎症。一般是在病毒感染（如感冒、咽痛、腹泻等）后的1～3周内发生。导致心肌炎的病毒有多种，主要经呼吸道或肠道感染，少数肝炎患者可发生心肌炎。病毒可直接损伤心肌，也可通过免疫机制导致心肌炎症。

对病毒性心肌炎的治疗，目前尚无特效药，有些所谓抗病毒药物，还处于临床试用摸索阶段。人体被病毒感染后，心肌受到损害，其炎症呈局灶性或弥漫性，也可累及心包膜，窦房结以及传导系统，病变程度各不相同，可发生病窦、心力衰竭、心肌心包炎以及不同程度的房室传导阻滞和心律失常，甚至几种病变同时存在，临床表现多种多样，因此，病毒性心肌炎不是单用一种药物、一个方剂所能治愈的，目前多采取综合治疗及对症处理的方法进行治疗。

1一般治疗

1.1休息休息相当重要。活动和疲劳可使病情加重。急性期需卧床休息到热退后3～4周,心影恢复正常,始能下床轻微活动。恢复期应继续限制活动，待病情稳定,再逐步增加活动量。病情较重,心脏增大者,卧床6个月左右,如心脏未明显缩小,应适当延长卧床时间。有心功能不全者,应绝对卧床休息,以减轻心脏负担,使心衰获得控制,心脏情况好转后,始能轻度活动。一般重症患儿需卧床休息6个月以上;轻症患儿如仅有早搏等心律失常,则可适当缩短卧床休息时间。

1.2饮食多进食含维生素C类水果（如橘子、番茄等）及富含氨基酸的食物（如瘦肉、鸡蛋、鱼、大豆等）。

2药物治疗

2.1抗生素虽对引起心肌炎的病毒无直接作用，但因细菌感染是病毒性心肌炎的重要条件因子，故在开始治疗时，均主张适当使用抗生素。一般应用青霉素肌注1～2周或400万～960万u/d静脉滴注1周或克林霉素1.2g/d静脉滴注1周,以清除链球菌和其他敏感细菌。

2.2保护心肌心肌炎时，自由基产生增多，而超氧化物歧化酶活性下降，自由基加重心肌细胞损伤。（1）维生素C具有保护心肌不受自由基和脂质过氧化损伤作用。用法：重症心肌炎患者，维生素C5g+5％葡萄糖注射液250ml，静脉滴注，每日1次，疗程1～2周。（2）辅酶Q10参与氧化磷酸化及能量的生成过程，并有抗氧自由基及膜稳定作用。用法：辅酶Q10片10mg口服，每日3次，疗程1个月。（3）曲美他嗪通过抑制游离脂肪酸β氧化，促进葡萄糖氧化，利用有限的氧，产生更多ATP，增加心脏收缩功能。用法：曲美他嗪20mg口服，每日3次，疗程1个月。

2.3抗病毒近年来对原发病毒感染提出使用干扰素或干扰素诱导剂［1］预防和治疗心肌炎，与此同时，对其他抗病毒的药物研究在继续深化，并有新药应用于临床，如阿昔洛韦、更昔洛韦。李红等［2］研究结果表明，更昔洛韦有抗巨细胞病毒的活性，能明显减少巨细胞病毒所诱导的细胞凋亡的发生。对中药抗病毒的研究仍在继续，如郭乃榄等［3］研究发现大蒜素在体外能有效地抑制巨细胞病毒;李红等［2］在实验中亦进一步证实了大蒜毒对巨细胞病毒临床分离株的抑制作用。另外，其他一些中药如大青叶、板蓝根、连翘、虎杖等可能对病毒感染有效［1］。

2.4肾上腺皮质激素的应用关于皮质激素的应用目前尚有争论，多数认为：病程早期（即发病18天内）及轻症病例则不必使用；病情严重如心脑综合征、心源性休克、Ⅱ度以上房室传导阻滞、严重心力衰竭等应立即使用，病情缓解减量停药；反复发作或病情迁延者，可能与自身免疫有关，故主张使用，一般病例口服强的松1～1.5mg/（kg·d），3～4周，症状缓解逐渐减量、停药；严重病例使用氢化考的松8～12mg/（kg·d）或地塞米松0.2～0.4mg/（kg·d）静脉滴注。

2.5调节免疫功能针对免疫情况选用免疫增强剂、转移因子、胸腺肽针剂、干扰素等。近年来研究的主要方向是，如何应用生物手段在病毒性心肌炎的早期进行有效治疗，改善心肌病理改变，减少炎细胞浸润，降低心肌纤维化程度，降低病死率。研究发现，中药黄芪对提高免疫功能及改善心功能有益［1］，葛根在治疗病毒性心肌炎中亦有较好效果，在辨证组方中重用葛根，对缓慢性心律失常患者有提高心率的作用［4］。

2.6对症治疗出现心力衰竭者，按常规心力衰竭治疗，但洋地黄用量偏小，贝那普利5～10mg或培哚普利2～4mg或咪达普利5～10mg口服，每天l次。心肌炎急性期不主张应用β受体阻滞剂，因其可降低心肌免疫力；但若有心脏扩大、心肌变薄等重构倾向时，即使急性期也应用。完全性房室传导阻滞者，使用临时体外起搏器，不能恢复者安装永久心脏起搏器。根据心律失常情况选择抗心律失常药物治疗。

病毒性心肌炎的发病以轻中型多见，重型较少，经长期随诊结果，绝大多数痊愈，少数迁延，极少数死亡。故病毒性心肌炎重在早期治疗，通过治疗减轻心肌的炎性反应，使心肌损伤范围缩小，心肌纤维化程度减轻。中西药物的运用，是要提高机体免疫力，使机体生物防御能力增强，及时杀灭病毒、清除被病毒感染的心肌细胞不使病毒扩散，同时可保护正常心肌细胞不受损害。

【参考文献】

1陈灏珠.实用内科学，第10版.北京:人民卫生出版社，1997，1326.

2李红，董永绥，方峰，等.大蒜素和更昔洛韦抑制巨细胞病毒所致细胞凋亡的实验研究.中华儿科杂志，1999，37（4）:219.

病毒学范文篇8

［关键词］HBV;抗原表位;抗原性;FHVRNA2载体系统

StudyonAntigenicityofHBVRecombinantEpitope

Abstract：ObjectiveConstructionandExpressionHBVrecombinantepitopeinaforeignepitopepresentingvector，andevalutionofdignosticsensitivityforantiHBswithHBVepitope.MethodsOligonucleotidsencodedtwentyfouraminoacids(aaS124147)whichiswithin"a"antigenicdeterninantweresynthesizedandinsertedintoaforeignepitopepresentingcarrierI3site(FHVRNA2cDNAI3).HBVepitopewasexpressedinaprokaryoticcellularsystem(BL21cell).TheexpressionproductwasanalyzedanditsantigenicitywasfurtherstudiedbyELISAandWsternblotmethodwithchimericproteinascoatingantigen.weusedchimericproteinascoatingantigentotestantiHBswithELISAandWsternblotin58seralsamples.ResultsThechimericproteinreactedwithantiHBsseralspecially.ThedetectionpositiveratioofantiHBsis77.5%and68%respectivelybyELISAandWsternblotwithchimericproteinascoatingantigen,thecontrol''''swas62%.ConclusionHBVepitopeexpressedinaforeignepitopepresentingcarrierpossessedgoodantigenicityanddiagnosticvalue.

Keywords：HBV；Epitope；Antigenicity；FHVRNA2carriersystem

乙型肝炎病毒(HBV)是乙型肝炎的病原体，并引起慢性肝炎和肝硬化，而且与肝癌的发生密切相关。迄今，对HBV感染最有力的预防和控制措施，仍是发展疫苗。FHVRNA2载体系统［1］是一个以昆虫小RNA病毒flockhousevirus外壳蛋白为载体的新型抗原表位表达载体，此系统中表达的载体蛋白可自动组装成病毒样颗粒，使插入的外源抗原表位可以暴露在颗粒的表面，保持天然构象和免疫学特性。本研究拟将HBVa抗原表位插入到FHV外壳蛋白上，并对其抗原性及诊断意义进行了研究。

1材料与方法

1.1细胞重组质粒DNA大肠杆菌DH5α用于重组质粒pETEDNA的克隆和扩增。大肠杆菌BL21(DE3)用于重组质粒pETEDNA的表达。质粒DNA在含200μg/ml氨苄青霉素的LB或TB培育中生长，FHVRNA2载体系统即重组pETFHV构建见［1］。

1.2HBV抗原表位及重组pETE的构建和表达

1.2.1HBV抗原表位及重组pETE的构建人工合成HBV特异抗原表位E(氨基酸序列：124CTTPAQGNSMFPSCCCTKPTDGNC147)寡核苷酸序列：正向5’GATGCACGACTCCTGCTCAAGGCAACTCTATGTTTCCCTCATGTTGCTGTACAAAACCTACGGATGGAAATTGC3’；反向3’CTACGTGCTGAGGACGAGTTCCGTTGAGATACAAAGGGAGTACAACGACATGTTTTGGATGCCTACCTTTAACG5’，两端为Bsu36I识别位点，与经Bsu36I作用后的重组pETFHVDNA混匀后置室温连接2h,转化DH5α细胞，接种LB平板(200μg/mlAmp)培养。重组质粒pETEDNA经酶切筛选并经DNA序列测定。

1.2.2携带HBV抗原表位的嵌和蛋白的表达重组pET系统中，嵌和蛋白的表达受T7启动子的控制［2］。BL21经重组pETEDNA转化后，在TB培养液中37℃生长16h～18h,细胞经4000r/10min离心沉淀,用超声裂解缓冲液悬浮，超声裂解，裂解液经离心，弃上清，沉淀(包涵体)用8mol/L尿素溶解。

1.2.3SDSPAGE及Westernblot分析方法见前文［1，3］，3，3二氨基苯胺四氢盐酸(DAB)底物试剂为AMRESCO公司产品;第二抗体辣根过氧化物酶(HRP)结合物购自华美公司。

1.3HBV重组抗原表位诊断意义评价

1.3.1ELISA检测血清样本固相ELISA检测如前文所述［1］，以纯化的嵌和蛋白为包被抗原，每孔100μl(含1μg纯化嵌和蛋白)，检测58份乙肝患者血清中抗HBs，与抗HBsELISA检测试剂检测结果比较。阳性判断标准为(检测血清A492底物对照A值)/(阴性血清A492底物对照A值)>2.1。邻苯二胺二氢盐酸(OPD)购自AMRESCO公司；第二抗体辣根过氧化物酶(HRP)结合物购自华美公司；乙肝患者血清由昆明市传染病医院收集;抗HBsELISA检测试剂盒购自上海科华公司。

1.3.2HBV重组抗原表位Westernblot检测血清样本方法见前文［3］，检测了58份乙肝患者血清样本。

2结果

2.1携带HBV抗原表位的嵌和蛋白的表达FHVRNA2cDNA载体系统即重组pETFHV构建见文献［4］，其编码产物是FHV外壳蛋白，三维立体结构已得到精确测定，其上有6个可供外源抗原表位插入的位点［5］(见图1)。应用该系统，我们将人工合成HBV抗原表位寡核苷酸序列插入到重组pETFHVDNA上，构建携带HBV抗原表位的重组质粒pETE，经NsiⅠ和NcoⅠ双酶切筛选(见图2)和DNA序列测定无误后转化BL21细胞，高水平表达嵌和蛋白。经SDSPAGE和考马斯亮蓝染色(见图3)和Westernblot(见图4)分析结果表明，这些嵌和蛋白为携带有HBV抗原表位的重组FHV外壳蛋白。

图1FHV外壳蛋白的三维结构：示可供选择的外源抗原表位序列插入位点L1、L2、L3、I1、I2，I3HBV抗原表位氨基酸序列在FHV中插入位点。（略）

图2重组质粒NcoⅠ+NsiⅠ酶切图（略）

2.2携带HBV重组抗原表位的嵌和蛋白在BL21中的表达与鉴定携带HBV抗原表位的重组质粒pETFHVE在BL21(DE3)转化细胞中高水平表达了携带HBV抗原表位的嵌合蛋白FHVE,其分子质量与阳性对照相同，约为45000(等于载体FHV外壳蛋白的分子质量43000加上HBV抗原表位的分子质量)。经SDSPAGE和考马斯亮蓝染色(见图3)及Westernblot(见图4)分析结果表明，重组抗原表位显示了抗原性。

图3携带HBVa特异抗原表位的嵌合蛋白SDSPAGE(10%)分析（略）

图4嵌合蛋白的Westernblot分析（略）

2.3HBV重组抗原表位ELISA检测敏感性分析我们用嵌和蛋白为包被抗原用间接ELISA法检测58份乙肝患者血清中抗HBs抗体，检测阳性率为77.5%，高于ELISA试剂盒检测的62%。

2.4HBV重组抗原表位Westernblot以嵌和蛋白为包被抗原用Westernblot检测58份乙肝患者血清中抗HBs抗体，检出阳性率为68%。

3讨论

3.1HBVa抗原表位在疫苗及诊断应用研究中的意义根据HBsAgS蛋白的抗原性不同，将HBV分为9个血清型(即HBsAg亚型)［6，7］：ayw1、ayw2、ayw3、ayw4、ayr、adw2、adw4、adrq-、adrq+。HBVS蛋白第120～第160氨基酸序列是HBV的交叉中和抗原表位即a表位［8］，可诱导产生交叉中和抗体，保护成人免受各HBV亚型的感染。本研究进一步表明，HBVa重组抗原表位可与临床不同来源的血清抗HBs发生特异性结合，具有疫苗研究和诊断意义。

3.2新型抗原表位表达载体系统对于抗原表位来说，决定其免疫原性和抗原性的因素除了氨基酸序列，更重要的是分子的空间构象和呈递给免疫细胞识别的方式。利用FHVRNA2表达载体在大肠杆菌中表达的抗原表位具有良好的免疫原性，免疫小鼠产生了交叉中和抗体［9］，并已成功的在该系统中表达了HIV1V3、轮状病毒Vp4抗原表位和HCV抗原表位，并诱导中和抗体和交叉中和体产生［1，10，11］。HBV抗原表位在FHVRNA2载体系统可中高效地表达，并近似天然构象，能被天然抗HBs抗体特异性识别结合，具有良好的抗原性，在以其为包被抗原用ELISA和Weternblot检测抗HBs中检测敏感性与ELISA诊断试剂盒差异无显著性，在HBV诊断试剂和重组抗原表位亚单位疫苗研究中具有重要意义。

参考文献：

［1］ScodellerEA，TisminetzkySG，PorroF，etal.AnewepitopepresentingsystemdisplayaHIV1V3loopsequencesandinducesneutralizingantibodies［J］.Vaccine,1995，13:12331239.

［2］RosenbergAH,LadeBN,ChuD，etal.VectorsforselectiveexpressionofclonedDNAsbyT7polymerase［J］.Gene,1987，56:125135.

［3］TowbinH，StaehelinT，GordenJ，etal.Electrophoretictransferofproteinfrompolyacrylamidegelstonitrocellulosesheets：procedureandsomeapplication.Proc.Natl.Acad.Sci［J］.USA，1979，76：43504353.

［4］TisminetzekySG，ScodellerEA，EvangelistiP，etal.ImmunoreactivityofchimericproteincarryingtheHIV1epitopeIGPGRAF，correlationbetweenpredictedconformationandantigenicity［J］.FEBSLetters，1994，353：14.

［5］FisherAJandJohnsonJE.OrderedduplexRNAcontrolsthecapsidarchitectureofanicosahedralanimalvirus［J］.Nature,1993,361:176179.

［6］MagniusLO，etal.AnewvirusspecifieddeterminantofhepatitisBsurfaceantigen［J］.ActaPatholMicrobiolScan,1975，83B:295297.

［7］WandsJR，etal.HepatitisBviralantigenicstructure:signatureanalysisbymonoclonalradioimmunoassays［J］.ProcNatlAcadSciUSA,1984，81:22372241.

［8］MoynihanJS，DmelloFI，etal.48mersyntheticpptideanalogueofthehepatitisBvirus"a"determinantinducesanantiHBsantibodiesresponseafterasingleinjection［J］.JMedVirol,2000，62:159166.

［9］TisminetzekySG.FEBSLetters,1994，353:14.

病毒学范文篇9

关键词：德育；医学生；贡献；职业道德

21世纪是一个教育的全新时代，良好的道德品质成为决定人生道路的重要因素之一。尤其是在经济全球化的大背景下，我国教育教学工作更应该不断创新，结合改革开放40年的成果，强化对学生的思想道德教育。我们学校近几年发展较快，学生人数日益增多，学校是对学生进行思想道德教育的主要渠道，身为教师肩负着重任，我们必须明确新时代教育教学的特点，遵循党的教育理念，认清德育教学的重要性，并将其摆在重要位置。作为教师不仅要对学生的学习负责，更要对学生的灵魂负责，让他们在道德雨露的阳光中成长。我作为一名专职教师，主要讲授《病原生物学与免疫学基础》这门课，结合自身岗位特点，下面就谈谈对学生进行思想道德教育的几点体会。

一、结合我国医学微生物方面的卓越成就，进行爱国主义教育

青少年是祖国的未来和民族的希望，思想道德教育直接影响他们综合素质的提高，对于推动国家和民族的发展也有重要的作用。爱国主义教育是青少年学习历史知识、了解革命传统、增强爱国情感、培养民族精神的重要途径，是陶冶情操、提高道德修养的重要方式。因此，在讲授医学微生物学的发展与现状时，利用古代我国劳动人民在对微生物世界无知的状态下，就会使用微生物制曲、酿酒，11世纪，北宋末年的刘真人提出肺痨由虫引起的学说，说明我国古代的人们通过对传染病流行规律的观察就可作出客观判断。明李时珍《本草纲目》中指出，对病人的衣服蒸过再穿就不会感染到疾病，表明已有消毒的记载。古人早就认识到天花是一种烈性传染病，一旦与患者接触，几乎都将受感染，且死亡率极高。但已康复者去护理天花病人，则不会再得天花，这就是“免疫”一词的最早概念。在这种现象的启发下，宋真宗年代就出现了预防天花的人痘接种法，比18世纪英国医生琴纳发现牛痘苗早800多年[1]。到了现代，我国学者黄祯祥发现并首创了病毒体外细胞培养技术，为现代病毒学奠定了基础；朱既明首次将流感病毒裂解为亚单位，提出了流感病毒结构图像，为以后研究亚单位疫苗提供了原理和方法，在防治传染病方面取得了巨大成就。以上这些例子都是微生物思想道德教育的主要依据，这些成果和技术有助于激发学生对祖国的热爱之情，培养他们的创造力，树立他们良好的道德修养。

二、用献身微生物研究的典型事例来激发学生的奉献精神

与思想道德教育有关的典型性案例是实现高质量教学的基础，一系列生动的例子能够在教学中鼓舞学生，让他们树立正确的“三观”。如美国病理学家霍华德•泰勒•立克次(HowardTaylorRicketts)(1871-1910年)首次发现洛矶山斑疹伤寒的独特病原体[2]，但是在实际研究的过程中，却不幸感染病毒，最终牺牲，人们为了纪念他而把这类微生物命名为立克次氏体。众所周知，我国在2008年出现了“非典”，该种病原体传播速度快，难于治疗，造成了严重的后果。在抗击“非典”的过程中，很多医护人员不计个人得失，奋战在岗位第一线，甚至献出了自己宝贵的生命。广东省中医院护士长叶欣，是优秀的“非典”抗战勇士，它夜以继日的为患者治疗，最终感染上病菌而不幸逝世。生前，她留下了一句令人刻骨铭心的话：这里危险，让我来。把风险留给自己，把安全留给病人。医护人员无私忘我的精神，就是对思想道德教育最好的诠释，他们是学生学习的楷模。正是由于他们的奉献，才让我国的医疗事业不断迈上新台阶。作为祖国未来发展的奠基人，青少年朋友必须以这些英雄为榜样，沿着他们的足迹不断前行，弘扬科学、奉献、敬业的精神。对于学生而言，枯燥的理论知识难于理解，生动的小故事和真实的案例，则能够唤起他们的兴趣，激发他们的爱国情怀，不断提高学生的思想道德素养。

三、用教师自身的厚德博学来培养学生的职业道德

教师是教学的指导者，是学生学习的榜样。教师如果不能以身作则，起到良好的示范作用，就会对学生产生不良影响。相反，为人师表、学高为师的教师，自然会受到学生的拥戴。新时期的优秀教师，在传播思想道德文化的同时，必须要具备高尚的情操，能够做到宽厚仁爱、儒雅品高、严守师道、博学多识。对于学生而言，教师就是指路的明灯，教师要用科学的方法指导学生，给学生温暖，让他们感受到教师的鼓舞和支持。最近我们学校的智慧教学模式，进行地如火如荼，这是顺应时代符合信息化要求的一种先进的教学模式。倾听着同事们一堂堂精心准备的课，我亲身领略着他们对教材的深刻解读，感受着他们对课堂的准确把握，体会着他们对学生的密切关注。让我对智慧教学的理念又有了一次升华，深刻体会到了这种教学模式的优越性。作为教师需要不断更新教学理念，完善教学设计，结合不断更新的临床情况，才能常教常新，使学生真正成为学习的主体。当然，教师也要明确今后教学应努力的方向，树立使命感和责任感，在教学过程中做到精益求精、无私奉献，通过不断的学习来逐渐完善自我。对待学生要细心、耐心、一丝不苟。践行医务人员的使命，站在病人的角度看问题。这是我们在教学中进行德育渗透的又一个努力。以上是我的几点体会，今后还要根据新形势下医学生的思想脉搏，积极挖掘教材中内在的德育因素，不断探索思想道德教育的有效途径，丰富专业知识，夯实业务技能，真正的把教书与育人有机结合起来，为培养精于医术、诚于人品的合格医学人才做出应有的贡献。让我们不忘初心，牢记使命，树立培养青少年创新精神和实践能力的发展目标，为实现中华民族伟大复兴的中国梦不懈奋斗！

【参考文献】

[1]李凡,刘晶星等。医学微生物学第7版[M].北京:人民卫生出版社,2010:3.

[2]王玉红等.病原生物学与免疫学基础[M].郑州：河南科学技术出版社,2016.

[3]汤飞凡,张晓楼,黄元桐等.关于沙眼病毒的形态学、分离培养和生物学性质的研究[J].中华眼科杂志,1958(8):7-10.

病毒学范文篇10

1资质认定体系依据

2015年8月1日起施行的《检验检测机构资质认定管理办法》（以下称《办法》）中规定，对在中华人民共和国境内从事向社会出具具有证明作用的数据、结果的检验检测活动的检验检测机构实施资质认定[1]。在资质认定评审和管理中要依据RB/T214—2017《检验检测机构资质认定能力评价检验检测机构通用要求》（以下简称RB/T214）及特定领域要求（适用时）[2]。高校兽医实验室只有建立符合《办法》和RB/T214等法规和标准要求的资质认定体系并有效运行，才能取得认证。

2资质认定体系的建立

2.1设立符合要求的组织机构。成立申请资质认定的工作领导小组，对管理体系的建立和实施进行策划。根据RB/T214要求和实际情况设置相应的组织机构，设质量管理、技术运作、服务等部门和相关岗位，明确职能和权责。2.2确定机构的合法性地位。高校兽医实验室一般不具备独立法人资格，因此需要法人单位授权成立校内二级部门，授权开展检测业务，独立对外行文，独立核算。需由高校法定代表人对实验室最高管理者进行任命，授权其全权负责该实验室的运行和管理，有权对该实验室的资源进行配置和使用。2.3确定资质范围。高校兽医实验室的行业特征比较明显，可结合自身的特点、现有条件和市场检测需求来确定检测项目和参数，明确检测项目的检测方法，以此来确定拟申请的资质范围。首先，可参考《一、二、三类动物疫病病种名录》《中华人民共和国进境动物检疫疫病名录》《人间传染的病原微生物名录》等文件，合理选择预检测的动物疫病病种。其次，搜集相应病种的标准方法，分析标准方法中要求的仪器设备、试剂、耗材、标准物质等关键点，从人、机、料、法、环、测方面进行自我评价，确认现有检测条件能力是否满足要求，合理确定检测类别、项目参数、标准方法及限制范围，形成最初的检测能力范围参数表。2.4规划实验场所环境和设备设施。高校兽医实验室应依据检测能力范围等信息，选择符合生物安全级别要求的实验场所和设备，根据实际情况，合理布局实验区域和办公区域，并充分考虑到环境条件对结果的影响[3]。实验区域一般设有样品室、试剂室、分子生物学检测室、病理学检测室、细菌检测室、核酸检测室等功能区。水、电、通风、环境温湿度、洁净度、废气废液的处理等要满足实验要求。设施设备要满足检测要求，保证正常开展检测工作。同时，实验室还需配备有必要的防护及应急设备，保障人员安全。特别需要注意的是，检测设备一定要将教学和科研设备严格区分。2.5人员及培训。实验室要配置满足RB/T214要求和检测能力范围要求的管理人员和检测人员，并对人员进行相应的培训。主要学习《办法》和RB/T214等法规和标准的相关文件，动物疫病检测涉及的标准、仪器设备的操作等，深入了解资质认定工作、体系运行、方法验证等方面的知识，为体系的建立和运行积累经验，确保人员能力满足要求。其中，内审员要进行资质认定体系内审员培训并取得资质。授权签字人、质量负责人、技术负责人、质量监督员也要完成相应的资质培训。2.6编写管理体系文件。实验室依据RB/T214要求和有关规章制度编写体系文件，坚持系统性、协调性、唯一性和适用性的基本原则，建立切合自身实际的管理体系文件。体系文件包括质量手册、程序文件、作业指导书和记录等4个层次。第一层次是《质量手册》，主要根据RB/T214和规定编制质量方针、目标描述、质量体系要求、职责和途径等，是实验室开展质量活动的依据和纲领性文件。第二层次是程序文件，主要描述实施质量体系要素所涉及到的质量活动，确定谁、何时、何地做什么，以及怎么做等。第三层次是作业指导书，是某个具体作业的指导文件，如检测规程、设备操作规程（SOP）等。第四层次是记录，是信息的即时记录，包括质量记录和技术记录，如原始记录、表格、签名、报告等。管理体系文件后，要认真组织学习，确保实验室全体人员掌握，并严格执行体系文件。

3资质认定体系的试运行

管理体系文件编制完成后，即可进入体系试运行阶段，应做好文件控制、设备管理及仪器设备的检定校准、服务和供应品的采购、检验检测方法的验证确认、样品管理、质量控制、人员监督、内部审核和管理评审等工作，对运行过程中发现的问题要及时梳理和总结，采取改进和纠正措施按要求进行修订，进一步完善管理体系。3.1检测方法管理。检测方法的选择、验证和确认是兽医实验室运行时非常重要的环节。检测方法使用前，需对标准方法进行验证，对非标准方法进行确认[2，4]。使用时，按国家标准、行业标准、国际标准、国内外公认的权威机构推荐的方法、委托单位认可的方法等方法顺序，优先选择标准方法。检测方法发生变化时，要重新进行验证或确认。首次进行资质认定时，建议尽量选择标准方法。3.2模拟实验。实验室根据拟申请的检测能力范围参数表，每个类别，每种方法可选取5个左右的样品进行模拟实验，按照已制订的相关程序，从样品接收直至报告发放进行全过程演练，重点检查管理体系与实际操作是否相适应，发现问题时及时分析原因，采取适当的措施纠正，保证检测结果的准确性。3.3内审和管理评审。试运行满6个月后，应对管理体系进行一次内部审核。通过内部审核，查找管理体系存在的问题，有针对性地采取纠正措施，进行自我完善。质量负责人需要按照RB/T214要求，提前编制内部审核计划表和检查表，按已制订的内部审核程序进行审核。需注意，审核范围要涉及全要素，要根据各兽医实验室的业务范围和特点，并突出重点。内部审核结束后，最高管理者要组织一次管理评审，各部门按管理评审计划提交相应的文件，做出管理评审报告，衡量现行的管理体系是否符合自身实际情况，评价管理体系的适宜性、充分性及有效性。

4资质认定评审

4.1认证前准备。实验室在提出资质认定申请前，要准备好各级管理体系文件和各种档案资料，其中档案资料主要包括人员档案、检测档案、仪器档案、供应商档案、试剂耗材档案、质量监督记录、质量控制记录、环境相关监控记录、内审和管理评审等资料。同时要做好内务整理及记录，做好实验室安全防护，确保实验室的设备、设施和环境条件满足检测要求。各部门要各负其责，相互协调。4.2网上申请。实验室将认证材料准备好后，向国家认监委或者省级资质认定管理部门提交网上申请。审核通过后，按申请书要求，携带相关文件到受理大厅进行办理和确认。网上初审通过后，等待安排现场技术评审。4.3现场评审。实验室接到现场评审通知后，联系评审组长安排现场审核事项，主要内容有评审组长主持召开首次会议、现场检查、文件档案审查、现场实验、评审组长主持召开末次会议等。现场评审结束后，实验室要及时整改评审专家开具的不符合项，按要求在规定时间内完成整改。整改通过后，由评审组长出具评审报告并上报，经上级评审部门审核同意后，实验室即可获得资质认定证书。

5资质认定体系的正式运行

高校兽医获得实验室资质认定证书标志着资质认定体系的建立工作已经初步完成，实验室可以正式对外接收样品开展动物疫病检测相关业务。实验室要保证所有检测活动是在资质认定证书规定的检测能力范围内，正确使用资质认定证书和CMA标志。要认真执行RB/T214要求，全面贯彻质量方针，努力实现质量目标，养成按质量管理体系办事的工作作风。参照体系试运行模式运转，做好质量控制工作，积极参与室间比对和能力验证计划；加强仪器设备管理，保证量值溯源；做好体系风险评估工作；充分做好内部审核和管理评审工作，不断完善和改进管理体系，保持管理体系的有效性和符合性。通过资质认定后要做好监督管理工作，要监督各项质量活动均处于受控状态，严格遵循文件并有完整记录，通过质量监控、管理评审等方式自我完善和发展，使管理体系处于良性循环状态。同时，市场监管部门等有关部门，也会定期对实验室的运行进行监督检查。

6结语

浙江农林大学动物健康检测中心经过几次认证和扩项工作，检测范围从最初19项动物疫病检测项目发展到现在145项，对浙江省及周边地区开展动物疫病监测、养殖场健康调查、伴侣动物的出入境检疫等服务，每年检测量4万项次以上，出具检测报告200余份。由此可见，高校兽医实验室通过利用现有资源开展资质认定工作是可行的，也是必要的。需要注意的是，高校兽医实验室资质认定体系的建立与运行，切勿照搬照抄其他实验室的管理体系，必须结合高校及本实验室的实际情况综合考量。高校兽医实验室通过资质认定，对于高校提升教师的教学与科研能力、提高实验室建设水平、优化配置教育资源都具有推动作用。通过为政府部门和养殖户提供准确、可靠、公正、可信的检测结果，充分发挥了高校在动物疫病检测等服务社会工作中的积极作用，为我国动物疫病预防控制工作贡献力量。

参考文献：

[1]检验检测机构资质认定管理办法：国家质量监督检验检疫总局令第163号[A].北京：国家质量监督检验检疫总局，2015-4-9.

[2]中国国家认证认可监督管理委员会.检验检测机构资质认定能力评价检验检测机构通用要求：RB/T214-2017[S].北京：国家质量监督检验检疫总局，2018.

[3]孙燕，范首君，熊仲良，等.开展实验室认证认可，提升动物疫病检测能力[J].中国动物检疫，2017，34（1）：65-67.

[4]李洁，韩俊，武桂珍.病毒学实验室质量管理体系的建立[J].病毒学报，2018，34（3）：390-394.