大豆分离蛋白十篇

大豆分离蛋白篇1

关键词：菠萝蛋白酶 大豆分离蛋白 水解度

菠萝蛋白酶是以菠萝的果、茎、叶、皮等为原料，运用现代生物分离提纯技术制成，其外观为微黄色粉末状，分子量为33000，等电点为9.5。菠萝蛋白酶能够水解大豆分离蛋白制作大豆肽，该方法价廉，且易进行、易控制、易分离，安全性高，受到行业人士广泛关注。本试验通过研究菠萝蛋白酶水解大豆分离蛋白的工艺条件，探究菠萝蛋白酶对大豆分离蛋白的水解能力和最佳的工艺参数，控制水解度，为行业应用提供科学依据。

1　实验材料与方法

1.1　主要实验材料与试剂

大豆分离蛋白　河南郑州同创益生食品有限公司

菠萝蛋白酶(2500GDU/g) 广西南宁杰沃生物制品有限公司

盐酸溶液(0.1141mol/L)　河南省洛阳市化学试剂厂

NaOH溶液(1.075mol/L)　河南省洛阳市化学试剂厂

1.2　主要仪器与设备

凯氏定氮仪（天津玻璃仪器厂）

90W电动搅拌器（金坛市金城教学仪器厂）

DELTA-320型pH计（梅特勒公司）

HH-4数显恒温水浴锅（国华电器公司）

碱式滴定管（天津玻璃仪器厂）

T-500型电子天平（上海精密仪器厂）

1.3　实验方法

1.3.1 蛋白含量测定

参照GB/T5009.5-2003[1]。

1.3.2 水分含量测定

参照GB5009.3-2003[2]。

1.3.3 大豆分离蛋白水解度测定方法

大豆分离蛋白水解度采用pH-State法[3,4]。在大豆分离蛋白水解过程中及时加入NaOH标准溶液维持pH不变，随预定的反应时间记录维持反应体系pH恒定所消耗的NaOH溶液的毫升数，最后计算大豆分离蛋白水解度。

1.3.4 大豆分离蛋白水解方法

配制一定浓度 (W/V)的大豆分离蛋白溶液，加热至水解温度，用酸或碱调节溶液pH至预定值，按蛋白酶添加量称取蛋白酶加入大豆分离蛋白溶液中，在反应过程中及时加入NaOH溶液维持pH不变，随预定的反应时间记录维持反应体系pH恒定所消耗的NaOH溶液的毫升数，最后计算大豆分离蛋白水解度。

2　实验结果与讨论

2.1　大豆分离蛋白成分分析

2.2　菠萝蛋白酶水解大豆分离蛋白最佳参数确定

2.2.1 温度对波萝蛋白酶水解的影响

在设定pH为7.5，底物浓度为4%，酶浓度为2.5%，时间为30min条件下，测定不同温度下菠萝蛋白酶水解大豆分离蛋白的水解度，结果如图1所示。温度从45℃变化到70℃，大豆分离蛋白水解度随着温度的增大而增大，当温度为60℃时，水解度达到最大，60℃之后大豆分离蛋白水解度呈下降趋势。这说明菠萝蛋白酶的活性在60℃时最大，在60℃以下菠萝蛋白酶活性随温度增大而增加，超过60℃时，菠萝蛋白酶因温度过高而开始变性失活。

2.2.2 pH对波萝蛋白酶水解的影响

在设定温度为60℃，底物浓度为4%，酶浓度为2.5%，时间为30min条件下，测定不同pH下菠萝蛋白酶水解大豆分离蛋白的水解度，试验结果如图2所示。pH从6.5变化到7.5时，大豆分离蛋白水解度随着pH的增大而增大，当pH为7.5时，水解度达到最大，pH7.5之后大豆分离蛋白水解度呈下降趋势。这说明菠萝蛋白酶的活性在pH7.5时最大，在pH7.5以下菠萝蛋白酶活性随pH增大而增加，pH超过7.5时，菠萝蛋白酶的活性因pH上升而下降。

2.2.3 底物浓度对波萝蛋白酶水解的影响

在设定温度为60℃，pH为7.5，酶浓度为2.5%，时间为30min条件下，测定菠萝蛋白酶在不同大豆分离蛋白底物浓度下的水解度，试验结果如图3所示。底物浓度从3%变化到4%时，大豆分离蛋白水解度随着底物浓度的增大而增大，当底物浓度为4%时，水解度达到最大，底物浓度超过4%时，大豆分离蛋白水解度呈下降趋势。这说明菠萝蛋白酶水解最佳底物浓度为4%。底物浓度过低，影响酶和底物结合几率，水解度下降，底物浓度过高会抑制大豆分离蛋白的水解。

2.2.4 酶浓度对波萝蛋白酶水解的影响

在设定温度为60℃，pH为7.5，底物浓度为4%，时间为30min条件下，测定不同酶浓度下菠萝蛋白酶水解的水解度，试验结果如图4所示。酶浓度从2.5%增加到6%时，大豆分离蛋白水解度随着酶浓度的增大而快速增加，当酶浓度达到6%时，大豆分离蛋白水解度开始增加缓慢。当菠萝蛋白酶的浓度超过5%时大豆分离蛋白水解度增加很小，这是因为当酶与底物完全作用时，过量的酶不会增加水解速率，因此菠萝蛋白酶水解时酶浓度为5%即可。

2.2.5 时间对波萝蛋白酶水解的影响

在设定温度为60℃，pH为7.5，底物浓度为4%，酶浓度为5%，测定不同时间下菠萝蛋白酶水解的水解度，试验结果如图5所示，菠萝蛋白酶水解反应时间从10min增加到30min时，大豆分离蛋白水解度随着反应时间的增加而增加较快，菠萝蛋白酶水解反应30min之后水解度增加缓慢。当反应时间超过30min时水解度增加很小，这是因为水解反应超过30min时，菠萝蛋白酶酶作用点数目所剩很少，因此考虑反应效率，菠萝蛋白酶水解时间为30min即可。

2.2.6 菠萝蛋白酶水解大豆分离蛋白工艺条件优化

选用L9(34)正交表试验方案，以水解度最大值为评价指标，在水解时间为30min下，对温度、pH、底物浓度、酶浓度进行优化。菠萝蛋白酶水解大豆分离蛋白参数正交试验因素水平范围见表2，菠萝蛋白酶水解参数正交试验表见表3。用极差法分析正交试验数据结果可知，影响菠萝蛋白酶水解大豆分离蛋白参数的大小顺序(即R值大小顺序)为：酶浓度＞温度＞底物浓度＞pH；菠萝蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳参数组合为：酶浓度为6%，温度为65℃，底物浓度为5%，pH为8.0。在此条件下验证表明，菠萝蛋白酶水解大豆分离蛋白的水解度可以达到8.18%。

3 结论

菠萝蛋白酶水解大豆分离蛋白最佳工艺条件为酶浓度为6%，温度为65℃，底物浓度为5%，pH为8.0，在此条件下菠萝蛋白酶水解大豆分离蛋白30min，水解度为8.18%。

为了增加菠萝蛋白酶水解大豆分离蛋白的水解度，可延长反应时间，在此条件下水解4h，水解度可达11.07%。

参考文献

[1] 中华人民共和国国家标准.GB/T5009.5-2003 食品中蛋白质的测定方法[M]. 北京：中国标准出版社，2003.

[2] 中华人民共和国国家标准.GB5009.3-2003食品中水分的测定方法[M]. 北京：中国标准出版社，2003.

大豆分离蛋白篇2

【摘要】 目的研究大豆胰蛋白酶抑制剂提取物对四氧嘧啶糖尿病模型小鼠的治疗效果。方法以市售大豆为材料，经酸浸、脱脂、硫酸铵沉淀、透析除盐、葡聚糖凝胶G-75柱纯化等方法进行大豆胰蛋白酶抑制剂的分离提纯。然后，用大豆胰蛋白酶抑制剂提取物对四氧嘧啶糖尿病模型小鼠灌胃给药。通过比较正常对照组、实验对照组、大豆抑蛋白酶抑制剂高中低剂量组的多项血液指标（血糖、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇）及各组小鼠病理切片等，研究大豆胰蛋白酶抑制剂的降糖活性。结果给予大豆胰蛋白酶抑制剂灌胃的糖尿病小鼠其血糖水平明显下降，甘油三酯水平下降，总胆固醇水平和高密度脂蛋白胆固醇水平无明显变化。结论大豆胰蛋白酶抑制剂提取物对糖尿病有较显著的疗效。

【关键词】 大豆 胰蛋白酶抑制剂 分离提纯 糖尿病 小鼠胰蛋白酶

抑制剂（soybean trypsin inhibitor，SBTI）是一类可以抑制胰蛋白酶水解活性的小分子多肽，普遍存在于植物的储藏器官，如种子、块根和块茎中［1］。大豆胰蛋白酶抑制剂已在多种医药领域有所应用［2，3］，另有报道大豆中微量胰蛋白酶抑制剂对于糖尿病治疗，调节胰岛素失调可能有一定效果［4］，但未见SBTI对糖尿病治疗效果的专项研究，本文就大豆胰蛋白酶抑制剂对四氧嘧啶糖尿病模型小鼠的治疗作用进行研究和探索。

1 材料与仪器

1.1 试剂与药品市售大豆，牛胰蛋白酶(1∶250，上海维编科贸有限公司），BAPNA·HCl(Na-苯甲酰-DL-精氨酸对硝基苯胺盐酸盐，上海维编科贸有限公司)，Tris(三羟甲基氨基甲烷，成都化学试剂厂生产)，Sephadex G-75（葡萄糖凝胶G-75，上海化学试剂厂生产），Alloxan（四氧嘧啶，sigma公司），葡萄糖试剂盒-GLU(氧化酶法，液体，北京北化康泰临床试剂有限公司)，高密度脂蛋白胆固醇试剂盒（酶比色法，通用型，中生北控生物科技股份有限公司），甘油三酯试剂盒（酶比色法，通用型，中生北控生物科技股份有限公司），总胆固醇试剂盒（酶比色法，通用型，中生北控生物科技股份有限公司），肝素钠（江苏万邦生化医药股份有限公司），硫酸铵，正己烷，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，36%乙酸等均为国产分析纯。

1.2 仪器DS-1高速组织捣碎机（上海标本模型厂），DF206电热鼓风干燥机（北京医疗设备二厂），FA1004电子天平（科大创新股份有限公司中佳分公司），KDC-1042低速离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司），722分光光度仪（上海精密科学仪器有限公司），电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂），AE240电子天平（METTLER公司）。

2 方法与结果

2.1 胰蛋白酶抑制剂的分离纯化

2.1.1 大豆胰蛋白酶抑制剂（SBTI）粗提物的制备用酸抽提法所得粗品蛋白和抑制剂总量高［1］，故本实验采用酸性水溶液浸泡大豆粉末提取大豆胰蛋白酶抑制剂［5，6］。

2.1.2 大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的透析除盐将抑制剂粗制备物置于透析袋中蒸馏水充分透析7 d，除去盐分。

2.1.3 凝胶柱的制备及抑制剂粗提物的纯化［5，7］参考文献［5，7］中方法，吸出存留缓冲液，加入1 ml样品，用缓冲液进行洗脱，控制流速在2 ml·h-1。流出10 ml后，用干净的试管分部收集，检测每管抑制剂的活性。

2.1.4 大豆胰蛋白酶抑制剂的活性测定［5，7］参考文献［7］中方法，以BAPNA为底物测定胰蛋白酶和胰蛋白酶抑制剂的活性。计算其抑制百分率［5］。收集具有抑制活性的洗脱液（即大豆胰蛋白酶抑制剂的提取物）。

2.2 大豆胰蛋白酶抑制剂提取物对小鼠血糖、甘油三酯、总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇水平的影响

2.2.1 实验性四氧嘧啶糖尿病动物模型的建立随机选取10只小鼠作为正常对照组(Control)。除正常对照组外，其它小鼠禁食12 h后，腹腔注射四氧嘧啶250 mg·kg-1。72 h后尾尖取血，用葡萄糖氧化酶法测定注射四氧嘧啶小鼠的血糖，以血糖值大于11.1 mmol·L-1［8］的小鼠作为四氧嘧啶糖尿病模型小鼠。将糖尿病模型小鼠随机分为实验对照组(Alloxan) 、大豆胰蛋白酶抑制剂低剂量组(Alloxan+ SBTIL) 、大豆胰蛋白酶抑制剂中剂量组(Alloxan +SBTIM) 和大豆胰蛋白酶抑制剂高剂量组(Alloxan+SBTIH)。

2.2.2 分组给药及测定方法Alloxan+SBTIL组、Alloxan+SBTIM组和Alloxan+ SBTIH组的定时给药剂量分别为每只每天0.1，0.3 ml和0.5 ml。但为了消除不同给药剂量对实验结果的影响，需将Alloxan+SBTIL组和Alloxan+SBTIM组的药液用蒸馏水稀释，使得稀释后药液的给药量为每只每天0.5 ml。Control组和Alloxan组给予等容量生理盐水（0.5 ml）。连续7 d经口灌胃给药。末次给药后次日分别测定各组小鼠的血糖、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇4项血液指标（均采用试剂盒法，其具体操作过程见试剂盒内说明书）。完成测定后，处死小鼠，取肾脏和肝脏制作病理切片。

2.2.3 大豆胰蛋白酶抑制剂对糖尿病模型小鼠血糖水平的影响结果见表1。表1 对糖尿病模型小鼠血糖水平的影响由表1可见，造模72 h后，四氧嘧啶诱导的糖尿病模型小鼠的血糖水平均显著高于正常对照组（P＜0.01），并且糖尿病模型小鼠状态较为萎靡，表明糖尿病模型制造成功。对照实验后的各给药组和糖尿病模型小鼠的血糖水平可见大豆胰蛋白酶抑制剂对糖尿病的降糖作用：由Alloxan组、Alloxan+SBTIL组、Alloxan+SBTIM组到Alloxan+ SBTIH组小鼠的血糖水平有逐渐降低的趋势，即血糖降低程度与给药剂量正相关。其中Alloxan+SBTIM组、Alloxan+SBTIH组与Alloxan组相比有明显降低（P＜0.01），尤以Alloxan+SBTIH组更为明显。结果表明，大豆胰蛋白酶抑制剂对糖尿病小鼠的血糖有较明显的降低作用。

2.2.4 SBTI对糖尿病模型小鼠TG，CHO和HDL-C的影响结果见表2。表2 SBTI对糖尿病模型小鼠TG，CHO和HDL-C指标的影响与Control组比较，aP＜0.01，cP＜0.05；与Alloxan组比较，bP＜0.01

本实验中，SBTI给药组的血清甘油三酯水平有所降低，其中大豆胰蛋白酶抑制剂高、中剂量给药组小鼠的甘油三酯水平与四氧嘧啶糖尿病模型组之间存在统计学差异（P＜0.01），可认为给药组小鼠血清甘油三酯水平明显降低。另一方面，SBTI对总胆固醇有一定的降低作用，对高密度脂蛋白胆固醇有一定的升高作用，但其差异不存在统计学差异（P＞0.05），即影响不显著。该实验结果在一定程度上补充说明了SBTI对糖尿病具有较好疗效。

2.2.5 SBTI对糖尿病模型小鼠肾脏和肝脏细胞的病理切片显微镜观察结果比较观察图1～3，Control组小鼠肾脏细胞的组织切片中可见，其细胞形态为饱满，结构清晰，与周围细胞的界限较明显，细胞排列相对整齐；肾小球形态正常；近曲小管、远曲小管形状较规则，均匀排列。Alloxan组切片的细胞形态萎缩变形，轮廓不饱满，界限不清晰，细胞排列紊乱；肾小球固缩较明显，肾小球囊壁增厚；肾小管萎缩；间质组织细胞增生明显，有炎细胞浸润。Alloxan+SBTIH组细胞形态、界限、排列状况均较高血糖对照组有改善；肾小球固缩程度减轻；肾小管的形态、排列状况及间质增生情况也有改善。肾组织切片显示，大豆胰蛋白酶抑制剂对糖尿病模型小鼠的肾组织有一定的保护作用。

比较观察图4～6，Control组小鼠肝脏切片中可见，肝小叶结构完整，形态饱满，界限清晰；肝板排列规则整齐，且较为紧密。Alloxan组切片肝脏细胞体积变小；胞质嗜酸性增强，细胞核染色较深；肝板排列较为疏松，且不整齐。高剂量给药组小鼠的肝小叶结构明显，肝板细胞体积增大，排列较整齐、规则。

3 讨论

血糖是糖尿病的主要表征，临床上以血糖值作为糖尿病的主要诊断依据。因此，血糖水平的降低程度可直接反映糖尿病的治疗效果。通过分析各组小鼠血糖水平的实验数据可得出，大豆胰蛋白酶抑制剂对糖尿病具有较好的治疗作用。

四氧嘧啶糖尿病小鼠较正常小鼠的血清甘油三酯，胆固醇水平均有升高［9］。本实验中，SBTI给药组的血清甘油三酯水平有所降低，其中，SBTI高、中剂量给药组小鼠的甘油三酯水平与Alloxan组之间存在统计学差异（P＜0.01）。另一方面，SBTI对总胆固醇有一定的降低作用，对高密度脂蛋白胆固醇有一定的升高作用，但其差异不存在统计学差异（P＞0.05）。该实验结果在一定程度上补充说明了SBTI对糖尿病具有较好疗效。

由于糖尿病小鼠胰岛素的缺乏会引起肝糖原合成减弱和分解过程加强加速，引起糖尿病的肝细胞体积减小，胞质嗜酸性增强，即肝细胞发生病变；糖尿病肾组织中肾小管的重吸收作用降低，大量葡萄糖由肾脏排出，病理性渗透性利尿，即肾细胞发生病变。而且，蛋白质、脂肪、水和电解质的代谢紊乱等也对肝肾细胞造成相应的损伤。因而，通过其肾、肝脏器质病变程度也可反映出治疗糖尿病药物的疗效。肾、肝的病理切片反映，给药组糖尿病小鼠的病情有一定程度的好转。

从实验数据中可观察到，各大豆胰蛋白酶抑制剂给药组的CHO，HDL-C水平与Control组及Alloxan组之间均无统计学意义（P＞0.05）。因此，拟定在下一步研究中，通过四氧嘧啶和高糖高脂饲料诱导大鼠的高糖高脂糖尿病，研究大豆胰蛋白酶抑制剂对糖尿病模型各项血脂指标的影响，进一步探索大豆胰蛋白酶抑制剂对糖尿病的疗效。

参考文献

［1］ 王 竞，康 庄，廖 海，等.白菜型油菜种子胰蛋白酶抑制剂纯化及部分性质研究［J］.天然产物研究与开发，2005，17（3）：275.

［2］ 万善霞，王婉琬，滑 静，等.胰蛋白酶抑制剂在不同领域的研究概况［J］.北京农学院学报，2003，18（2）：152.

［3］ 蔡祖花，王凤山，张天民.胰蛋白酶抑制剂的临床研究概况［J］.中国生化药物杂志，2000，21（3）：157.

［4］ 陈 星，刘 蕾，刘 辉.固定化酶法分离纯化大豆胰蛋白酶抑制剂［J］.食品技术，2004，12: 12.

［5］ 郭瑞华，刘正猛，王和平，等. 永川豆豉胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及其降糖活性研究［J］.时珍国医国药，2007，18（2）：299.

［6］ 汪家政，范 明.蛋白质技术手册［M］.北京：科学技术出版社，2000：65.

［7］ 曾 英，桑玉英，胡金勇，等.波叶青牛胆胰蛋白酶抑制剂的纯化及其性质研究［J］.云南植物研究，2002，24（1）：104.

大豆分离蛋白篇3

蛋白质主要存在于大豆中，大豆蛋白质含量几乎是肉、蛋、鱼的二倍。而且大豆所含的蛋白质中人体“必需氨基酸”含量充足、组分齐全，属于“优质蛋白质”。

利用豆腐黄浆水生产有保健功能休闲食品

项目简介：该产品系利用废弃物深加工而成，成本低，技术性附加值高，且适于小规模生产，资金周转率高，基于我国市场上各种休闲食品虽多，但能量普遍偏高，不适于健康要求，故低能量的休闲食品市场看好，加之现国内尚无既是低能量的，又有特殊保健因子的同类产品，估计毛利率在30%以上，也可将该产品申请为保健食品，收益可更高。

大豆异黄酮提取纯化技术

项目简介：该项目以大豆胚芽为主原料，经过萃取、工业色谱纯化技术，生产高纯度大豆异黄酮。将异黄酮含量提高至40～90%（视市场需要定）。产值2.5亿元；大豆胚芽4800吨（干基）；溶剂300吨（耗损量）；吸附剂10吨；循环冷却水200吨/时； 动力电200KVA；水蒸汽（0.6MPa）6吨/时；车间厂房1600平方米；设备投资800万元。

大豆及豆粕深加工技术

项目简介：该项目以大豆分离蛋白或豆粕为原料，通过有控制的酶解，生产高质量的大豆多肽。该产品可用作营养疗效食品（具有降血脂、降血压和快速补充营养功能）和运动食品的功能性配料成分。以大豆或豆粕为原料，通过微生物发酵，生产具有抑制病原菌、调节肠道微生态环境、增强免疫力及促进动物快速生长等功能的多效生物饲料添加剂产品。该品不仅天然、安全、高效、多功能，而且具有活菌含量高，耐热、耐酸碱、易保存等特性，可替代或部分替代饲料中的抗生素。

由大豆粉末磷脂提取磷脂酰胆碱方法

项目简介：该发明公开了属于化学医药产品提取技术的一种由大豆粉末磷脂提取磷脂酰胆碱的方法，是采用乙腈与低碳醇的混合溶剂对大豆粉末磷脂进行多级逆流浸提，并将各级提取液在真空中除去溶剂的工艺方法，获得含磷脂酰胆碱为70％以上的产品，一般收率达70％以上。该方法工艺简单、设备投资小、适合于工业大生产。

纳米级大豆膳食纤维

项目简介：该项目研制的纳米级大豆膳食纤维是物理改性的精制纤维素，应用纳米技术改性纤维素的超微结构，使之具有多种独特的功能，在多种食品和饮料行业中具有广泛的应用。

该产品是高溶解性的膳食纤维；高持水性；极低的粘度；耐酸、耐热和耐盐；优良的蛋白质稳定性；极佳的乳化性。该产品可用于稳定剂、品质改良剂、脂肪替代品、保健食品原料。

利用生物修饰技术制取功能性大豆蛋白

项目简介：该研究利用植物蛋白酶、动物蛋白酶对蛋白进行水解，从中寻求能够将大豆分离蛋白性能改变的最佳蛋白酶的种类和水解技术，为其改性蛋白的特性研究及产品开发奠定基础。最终开发产品植物奶粉蛋白质含量30%以上；乳品专用大豆分离蛋白含量在80%以上，NSI值在80%以上：抗氧性肽，分子量小于1000，相对抗氧化力1.0以上，注射型分离蛋白85%以上。

大豆种衣剂

项目简介：该产品是根据大豆生长发育特点而研制的种子包衣剂， 内含大豆生长所必需的Zn、Mo等多种微量元素和杀虫剂．杀菌剂及成膜剂，具有增加营养，防治病虫等功效，可促进苗期大豆根系生长发育，增加大豆根瘤数量，尤其适用于重迎茬大豆。该剂为粉剂，便于运输和储藏。每包种衣剂加入200毫升热水搅拌至无结块为止，冷却后倒入15公斤种子，拌匀，然后放阴处摊开晾干，待播种。拌后的种子不可食用或喂牲畜。

全脂大豆完全脱腥蛋白粉制备方法

项目简介：该项目运用独特的工艺方法较彻底地钝化了胰蛋白酶抑制剂、脂肪氧化酶、血球凝集素和致甲状腺肿素的活性，使大豆较理想地克服了大豆所固有抗营养性、致甲状腺肿大、肠胃不适、胀气和豆腥苦涩味等五大副作用，从根本上克服了当前流行的脱腥技术所生产的蛋白粉只能做食品添加剂的弊病，在国内外首次实现了大豆完全脱腥。

大豆乳清废水处理方法

项目简介：该发明涉及一种大豆乳清废水处理方法，并且从大豆乳清废水中提取低聚糖和蛋白。大豆乳清废水是指在以低温脱脂豆粕为原料生产大豆分离蛋白过程中，豆粕经碱溶、酸沉、离心分离提取蛋白后产生的有机废水，其中含有蛋白、低聚糖等类物质，COD为1800～20000mg/L，生化处理投资大，而且浪费了资源。该技术方案运用多级膜分离方式对大豆乳清水进行处理，可提取大豆低聚糖和蛋白形成产品，增加企业经济效益，处理后的水可循环使用，无污水排放，不需建污水处理装置，节约水资源。

大豆植物油提取磷脂

项目简介：该产品涉及一种运用膜分离技术改造大豆植物油提取工艺，提取高品质大豆磷脂的方法，适用于大豆植物油加工行业。该技术方案提取的磷脂为高品质大豆粉末磷脂和大豆溶血磷脂，其应用价值大大高于传统方法生产的大豆浓缩磷脂。该方法提供的油脂精炼工艺比传统工艺路线减少了碱炼脱酸工序，避免了大量碱炼废水的产生，既降低了炼油成本，又消除了炼油废水的一个重要污染源。该方法提炼的大豆成品油，因其中的磷脂已基本提取，可明显提高成品油的品质和保质期。

提取大豆分离蛋白的方法

项目简介：该产品涉及一种提取大豆分离蛋白的方法，特别涉及一种运用无机陶瓷膜技术提取大豆分离蛋白的新方法。大豆蛋白质具有良好的营养功能，能够补充人体必需的能量，增强人体免疫力，对防治心脏病、糖尿病、癌症等疾病具有一定的效果，大豆分离蛋白的蛋白质含量不低于90%，是纯度最高的大豆蛋白制品。该技术方案取消了传统工艺中的酸沉工序，提高了产品质量，减少盐酸使用量，降低了生产成本，提高了蛋白的收率，可达到95%以上。由于取消酸沉工序，改善了大豆乳清水的处理条件，便于提取其中的低聚糖等产品。

大豆功能因子连续提取工艺

项目简介：传统工艺生产浓缩蛋白产品单一、生产成本高；功能因子不能分开，影响产品质量；污水排放量大。该工艺使用低级醇类用于萃取非蛋白成份；用膜技术浓缩低聚糖；等电点分离大豆核酸；反渗透浓缩治理废水；双溶剂分离大豆低聚糖、异黄酮；喷雾干燥。一条生产线上连续提取浓缩蛋白、大豆低聚糖、异黄酮、皂甙、核酸等功能因子；异黄酮纯度＞80%，皂甙纯度＞80%，低聚糖纯度＞40%，核酸纯度＞30%，蛋白含量＞70%；污水零排放。

高效因氛大豆基因工程根瘤菌HN32的构建和应用

项目简介：本成果以慢生型大豆极瘤菌22-10为受体，采用构建供体首基因文库－三亲本杂交－植物筛选的技术路线，将来自快生型大豆极瘤菌B52的3.7kB增效基因导入22-10，并通过盆栽试验从获得的转移接合子中筛选出增效菌株HN32。该菌株在小区试验中较受体菌增产7.8%，比不接种对照增产16.8%。在扩大的31个小区试验中平均比受体亩增产7%。经在黑龙江、广西和四川等地进行的大面积推广应用试验，结果表明HN32具有明显的增产效果和应用前景。

从大豆豆粕／胚芽／乳清废液中提取活性天然产物工艺

项目简介：该项目在充分与民间资本和设备合作的基础上，成功的开发出了大豆天然活性产品联产工艺。用该工艺生产的天然活性产品，成本低，质量明显高于目前市售产品。而且在此基础上，可进一步生产市场亟须的高端精细产品(大豆异黄酮甙元和染料木素单体)。项目工艺通过对豆粕或胚芽或乳清液的提取制备大豆异黄酮，之后利用生产异黄酮的下脚料生产大豆皂甙和低聚糖。大豆异黄酮甙元为通过水解大豆异黄酮而获得。染料木素是通过分离从甙元混合物中制备。

混合型大豆干酪加工关键技术研究

项目简介：该项目筛选了适用于混合乳的发酵剂菌株，确定了牛乳和豆浆的配合比例及凝结混合乳的特定酶，研究了混合型干酪成熟过程中发生的变化。项目确定了混合乳中豆浆的最佳添加量。将豆浆的添加量控制在0、10%、15%、20%、25%、30%，按照契达干酪的制作方法加工混合型干酪，并测定干酪的营养成分、产率及感观指标。观察了菌株发酵混合乳的凝乳性能，检测了菌株发酵不同基质凝乳的酸度、粘度、双乙酰、胞外多糖和pH4.6可溶性氮含量，结果表明，发酵基质不同时，菌株的发酵特性也不同。确定了适于凝结混合乳的凝乳酶的种类和添加量。探讨了混合型干酪在成熟期间的质构特性和蛋白质含量变化。

大豆新品种长农22号

项目简介：该品种籽粒圆形，种皮浅黄色、微光、脐浅黄色、百粒重18～20克，褐斑虫食率低，外观品质优良。籽粒脂肪含量19.25%，蛋白含量39.11%。属中晚熟品种。预计推广10万公顷以上，每公顷平均2998公斤，比吉林30增产9.0%，每公斤大豆2.5元计算：该品种推广后，将比老品种大豆增产2580万公斤，农民增加收入0.65亿元人民币。

大豆功能因子研究

项目简介：该项目以高温(或低温)豆粕为原料，在一条生产线上，连续提取大豆皂甙、异黄酮、核酸、低聚糖、浓缩蛋白的生产新技术中试鉴定。在一条生产线上连续提取大豆皂甙、异黄酮、核酸、低聚糖、浓缩蛋白5种产品。效益大幅度提高，连续提取不仅使产品得率提高，而且使纯度提高。项目采用“逆向分离技术”，将高温豆粕中的蛋白质全部分离提取(蛋白质利用率＞98%)， 在国内、外，首次以豆粕为原料，提取出大豆核酸，并达到工业生产规模。

分子蒸馏法从大豆油脱臭馏出物中提取天然维生素

项目简介：该项目使用分子蒸馏法从大豆油脱臭馏出物中提取天然维生素。分子蒸馏是一种在高真空度条件下进行的高科技分离技术。由于在分子蒸馏过程中操作系统压力可达0.1Pa，混合物可以在远低于常压沸点的温度下分离，另外组分受热时间短，因此，该技术已成为分离目的产物最温和的分离方法，特别适合于分离低挥发度、高沸点、热敏性和具有生物活性的天然产物。工艺流程为大豆油脱臭馏出物脱除游离脂肪酸甲酯化中和分离甾醇脱除脂肪酸甲酯（生物柴油）浓缩的天然VE。从大豆油脱臭馏出物中提取天然维生素，不但可以大大提高经济效益，为市场提供急需的产品，还可出口国际市场。

药用辅料大豆磷脂

项目简介：该项目在CO_2超临界条件下液化溶解油脂，把蛋黄油和胆固醇分离出来。利用高速磁力剪切器配合乙醇溶剂，提取出大豆磷脂－其工艺水平国内首创，该技术正在申请发明专利。该工艺采用高速磁力剪切器打开了磷脂分子的间隙，加速了溶剂的渗透力，使粉碎和萃取同步进行，有效地缩短时间，降低能耗，提高产品提取率，与传统工艺相比，生产时间缩短了50倍。相比其他方法有效地降低有机溶剂乙醇的用量，降低了安全隐患。根据层析剂对粗磷脂的吸附性不同，进一步把PE、PI、PS等杂质分离，得到最终产品大豆磷脂，并且萃取率由传统的仅为3%提高到15%。

乳酸菌大豆植物蛋白饮料项目

项目简介：该产品是生物技术与大豆加工技术、发酵技术及饮料加工技术结合起来的一个综合产品，是微生物专家和食品制造专家多年潜心研究的结晶。通过多种组方、筛选、评价、研制、试产，在解决一系列技术难题后，该项目现已完全成熟，成功开发了益生菌功能性新饮料――乳酸菌大豆植物蛋白饮料系列产品。该饮料以大豆豆浆为原料，经过特殊高活力乳酸菌生物发酵技术和特殊的科学工艺流程研制而成，产品结构型式分活性和非活性两种：活性乳酸菌有搅拌型、凝固型及多种果味饮料型；非活性乳酸菌有清爽透明型和多种果味型。

大豆啤酒生产技术

项目简介：该项目产品大豆啤酒是用大豆酿制的以营养保健为特色的高档啤酒。产品以优质无污染豆粕、酒花和部分麦芽为主要原料，采用高新生物技术和独特工艺经发酵酿制而成。具有预防肥胖、不胀头、营养价值高等特点，自成系列，适合不同消费阶层的需要。大豆啤酒是啤酒史上的一项新发明，有广阔的发展前景。该项技术是将豆粕中的淀粉和蛋白质通过微生物发酵法分解而成的大豆啤酒的糖源和氮源，再按常规生产、制成有营养价值和保健功能的新型啤酒。

利用酱油渣生产大豆肽白酒技术

项目简介：该项目是以酱油渣生产大豆肽白酒项目。它除具有普通白酒的特点之外，还具有大豆肽的保健功能，口味柔和、酱香浓郁，该技术已获得国家专利。其加工过程，成功的运用了生物工程技术中的酶技术、发酵技术，解决了大豆富含大量蛋白质和脂肪的难题。其酒中含有普通白酒所不具备的短肽、多肽、低肽。脂肪分解为对人体有益的各种有机酸和酯，使其不仅含有硒、磷、钙、锌、铁、镁、钾、VA、VB、和异黄酮等多种微量元素、维生素等，而且增加了保健功能。大豆肽白酒酒度为38°～58°，口感香醇。其卫生和理化指标均达国家优级酒标准。

生长因子在大豆异黄酮预防骨质疏松中作用

项目简介：该研究用体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞，用SP免疫组化方法测定成骨细胞中TGF-β1和TGF-βR1、TGF-βR2、IGF-1的表达情况。研究发现大豆异黄酮可显著地促进成骨细胞的增殖和分化，并促使成骨细胞形成矿化结节。大豆异黄酮可预防去卵巢大鼠骨钙、锌、铜丢失，预防骨质疏松。该课题深入研究大豆异黄酮预防绝经后骨质疏松的机理，尤其从细胞水平、分子水平研究三种骨生长因子在大豆异黄酮预防绝经后骨质疏松中的作用，对探讨大豆异黄酮预防绝经后骨质疏松的机理、指导合理膳食和预防绝经后妇女骨质疏松有重要的理论意义和社会效应。

高效固氮大豆基因工程根瘤菌HN32的构建和应用

项目简介：该成果以慢生型大豆根瘤菌22-10为受体，采用构建供体菌基因文库三亲本杂交植物筛选的技术路线，将来自快生型大豆根瘤菌B52的3.7kb增效基因导入22-10并通过盆栽试验从获得的转移接合子中筛选出增效菌株HN_32。该菌株在小区试验中较受体菌增产7.8%，比不接种对照增产16.8%。在扩大的31个小区试验中平均比受体菌增产7%。经在黑龙江、广西和四川等地进行的大面积推广应用试验结果表明HN_32具有明显的增产效果和应用前景。该成果已进入中试。在取得农业部基因工程安全委员会商品化的批准后，该成果在大豆主产区和新发展区有广阔的应用前景。

大豆杂种有时利用与优质超高产品种培育

项目简介：该项技术是利用吉林省农科院自主开发的大豆“三系”，即细胞质雄性不育系、保持系和恢复系，选育大豆杂交种，并利用切叶蜂传粉技术开发出“昆虫-环境植物三位一体综合调控”的高效、低成本制种技术，实现杂交大豆产业化。该研究获得中国和美国发明专利。传粉昆虫切叶蜂的繁殖是苜蓿制种田中进行的，在繁蜂的同时大大提高了苜蓿种子的产量，噶技术不仅降低了杂交种成本，也促进了我国苜蓿种业的发展。该项目成果包括大豆杂交种；育种及制种技术体系；切叶蜂繁殖及放蜂技术。其应用范围包括农业领域、苜蓿种业。

大豆优质高效抗逆关键技术研究

项目简介：该项目进行了生物/非生物逆境（干旱、水分和养分亏缺、病虫害等）影响大豆的机制和引起大豆产量和品质降低的原因研究；改变生境、提高作物抗逆信与水分和养分利用效率的栽培调控技术研究；调节内源激素、提高作物抗逆性与水分和养分利用效率的调节剂调控技术研究；优质、高效、低风险大豆调控栽培工程技术体系研究。其初步明确了干旱、水分和养分亏缺、病虫害等对大豆的影响机制和引起大豆产量和品质降低的原因；筛选出低污染除草剂、提出机械与低污染除草剂相结合的除草剂技术；提出了大豆病虫草害生物防治技术；初步建立了大豆质量保优控制体系。

大豆蛋白环保型胶粘剂生产技术

项目简介：该技术以大豆油脂生产的副产品脱脂豆粕为原料，利用高压高温碱解环流技术结合化学改性技术，及与其它高分子的共聚、共混改性技术，研制出环保型涂布印刷纸涂料胶粘剂和绿色复合板材粘接剂。该产品是环境友好产品。其中，板材粘接剂无甲醛等VOC释放，粉状，可直接加水调配，20%浓度时的粘度≤5000cp；阻水性相当于脲－甲醛树脂；防水性优于酚醛树脂；添加甲叉二异氰酸酯；粘合强度≥50 to 64 kg/cm^3。涂布印刷纸涂料胶粘剂可完全替代酪蛋白，粉状，强分散性，可直接加冷水调配，高含固量和流动性，50%浓度时的粘度≤300mPas，强快干性，70%浓度时涂层固体粘度≥20,000 mPas，直接和色素结合，吸附率超过50%，中度的水分滞留，平均涂层厚度≤5μ。

风味良好的大豆多肽生产方法

项目简介：酶促水解大豆蛋白生产大豆多肽是大豆深加工的一个重要方向，因为大豆多肽具有容易消化吸收，增强体力，降低血压、血脂，减肥，提高免疫力等功能，可以作为多种人群的保健食品。该项目采用固态发酵技术自行制备蛋白酶制剂，该蛋白酶与一般的商品蛋白酶相比，具有成本低廉，水解能力强，水解产物无苦味等特点，中试结果表明可工业化生产。以低温脱溶豆粕为原料，经碱溶酸沉以及酶解工艺，可获得DH高达42%的大豆肽，精制后可用于肠胃病人的疗效食品、运动员饮料的配制，目前医院采用的从美国进口的大豆多肽价格高达100多元/100克，日本的大豆多肽运动员饮料年销售额已高达30亿日元仍有上升趋势。此外这种多肽的粗制品具有适口性好、成本低廉的特点，可作为酸解蛋白的替代品用于酱油工业，也可用于饲料工业。

大豆蛋白可降解塑料生产技术

项目简介：该技术利用低温脱脂大豆粕为原料，生产大豆蛋白生物可降解塑料。

该技术主要通过加入改性剂、增塑剂、交联剂、填充剂、还原剂、剂、防腐剂、着色剂和其它助剂，使大豆蛋白塑料的机械特性和耐水性得到改善。主要性能指标方面，拉伸强度可达到4028g，伸长率达到57%，拉伸强度7.8MPa，冲击强度383MPa，断裂伸长率53.2%。成本、性能及可降解性方面的比较方面，以低温豆粕（蛋白质含量为55%）为原料，原料价格为2300元/吨，与淀粉塑料相比具有原料成本可比性。用低温脱脂豆粕制造的大豆蛋白塑料粒料成本将低于5000元/吨。在性能方面，大豆蛋白生物可降解塑料具有良好的机械特性，耐水性和贮藏稳定性。用模压方法制的大豆蛋白塑料在土壤中19天后60%被降解。

大豆分离蛋白篇4

( 1 ）材料与加工设备

① 原材料、辅材料及配方 大豆 100 千克，鸡蛋 40 千克，葡萄糖酸内酯0. 3 千克，消泡剂 0 . 2 千克，聚乙烯塑料袋、盒等。

② 加工设备 磅秤、不锈钢容器、榨汁机、分离筛、搅拌器、板式热交换器、打蛋器、真空灌装机、蒸煮槽、冷却槽等。

( 2 ）技术要点

① 筛选 为了提高加工质量，必须对原料进行筛选 ,以清除杂物和砂、石等。一般可以采用机械筛选机、电磁筛选机、风力除尘器、比重去石机等进行筛选，应选择颗粒整齐、无虫眼、无霉变的新大豆作原料。

② 称量 原料大豆的称量采用水位计量法或称重计量法。

③ 浸泡 大豆浸泡要掌握好水量、水温和浸泡时间。通常大豆吸水量为大豆量的 1 . 1 倍左右，泡豆水要按 1 千克大豆添加 2 ~ 2 . 5 千克冷水的比例添加。泡豆水的温度一般控制在 17 ~ 25 摄氏度，水温过高就要及时换水。泡豆水的 pH 值要求在 6 .5 以上，若酸度过高，也应及时换水。泡豆时间要根据季节和室温灵活掌握，春秋季节 12 ~ 14 小时，夏季需 6 ~ 8 小时，冬季需 14~16 小时。通常应选用不小于 3 立方米的泡豆容器。泡好的大豆表面光亮，没有皱皮，有弹性，豆皮也不易脱掉，豆瓣呈乳白色，稍有凹心，容易掐断。

④ 水洗 浸泡好的大豆要进行水洗，以除去脱离的豆皮和酸性的泡豆水，提高产品质量。

⑤ 磨浆 将泡好的大豆采用石磨或砂轮磨磨浆，为了使大豆充分释放蛋白质，应磨 2 遍。磨第 1 遍时，边投料边加水，磨成较稠的糊状物。磨浆时的加水量一般是大豆质量的 2 倍，不宜过多或过少。大豆磨浆以后不宜停留，要迅速加人适量的 50 摄氏度热水稀释，控制蛋白质的分解和杂菌的繁殖，而且可使蛋白质溶解在水里，有利于提取。加热水的同时，还要加人一定量的消泡剂，方法是取约占大豆质量0. 3 ％-~0 . 5 ％的植物油放人容器中，加人 50 ~ 60 摄氏度的热水 10 千克，搅拌后倒人豆浆中，即可消除豆浆中的泡沫。

⑥ 分离 磨浆后，进行浆、渣分离。为了充分提取其中的蛋白质，一般要进行 3 次分离。第 1 次分离用 80 -~100 目分离筛，第 2 次、第 3 次分离用 60 ~ 80 目分离筛。每次分离后都要加人 50 摄氏度左右的热水冲洗豆渣，使豆浆从豆渣中充分溶解出来，进行下一次分离。最终豆渣中的蛋白质含量不超过 2 . 5 ％。

⑦ 添加鸡蛋 挑选新鲜的鸡蛋，去壳、搅匀，按配方比例加入豆浆中，混合均匀。

⑧ 煮浆 添加鸡蛋后要迅速煮沸，使豆浆的豆腥味和微苦味消失，增加豆香味，为点浆创造必要的前提条件。将过滤好的豆浆倒入锅里，盖好盖，烧开后再煮 2 ~ 3 分钟。注意火不要烧得太猛，且要一边加热一边用勺子扬浆，防止糊锅。若采用板式热交换器，则加热速度快，产品质量好。加热温度要求为 95 -~98 摄氏度，保持 2 ~ 4 分钟。豆浆经过加热以后，要冷却到 30 摄氏度以下。

⑨ 点浆 葡萄糖酸内酯在添加前要先加 1 . 5 倍的温水溶解，然后将其迅速加入降温至 30 摄氏度的豆浆中，并混匀。葡萄糖酸内酯要随用随配，日常保管应注意防潮，否则将会失效。

⑩ 灌装 采用灌装机将混合好的豆浆混合物灌入成品袋（盒）中，并进行真空封装。

⑾ 加温 灌装好的豆浆采用水浴或蒸汽加热，温度为 90 ~95 摄氏度，保持 15 ~ 20 分钟。

大豆分离蛋白篇5

关键词：氨肽酶；大豆蛋白；脱苦

中图分类号：TS201.25文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)11-0036-04

Study on Debittering Effect of Aminopeptidase

XU Ying-min

( Suzhou Polytechnical Institute of Agriculture, Suzhou 215008, China)

Abstract：Objective To Study the debittering effect of aminopeptidase from Bacillus subtilis on soy protein hydrolysate. Methods A HPLC method and organoleptic investigation were used. Results 1% hydrolysate of soy protein with trypsin treatment was bitter. The bitterness could be removed by the addition of aminopeptidase. The amount of free amino acids was increased by 28.8 % and the amount of hydrophobic amino acid was also increased obviously. Conclusion The aminopeptidase from Bacillus subtilis has an ideal debittering effect.

Key words： aminopeptidase; soy protein; debittering

蛋白质是人体必需的营养素之一。蛋白质水解物通常为寡肽、小分子肽和少量氨基酸的混合物[1]，其溶解性、热稳定性较蛋白质有明显改善，具有比蛋白质更好的加工性能和营养特性，是现代食品加工过程中的重要原料。但蛋白质水解液往往呈现苦味，限制了它的实际应用[2]。因此，去除蛋白质水解物的苦味成为研究的重要课题。

蛋白质水解物的苦味主要来自水解物中的苦味肽。苦味肽一般是N端带有单 个或多个疏水氨基酸残基，有时也可能是C端带疏水氨基酸残基。天然蛋白质是无味的，由于天然蛋白质相对分子质量很大，分子构型复杂，其疏水性残基被包裹在分子内部无法与味蕾接触，因而不呈现苦味。蛋白质一旦水解成相对分子质量较低的多肽时，包裹的疏水性残基就会暴露，从而与味蕾接触产生苦味[2]。氨肽酶可从N端切除疏水性氨基酸残基从而达到脱苦的目的[3,4]。国外对微生物源外肽酶研究较早，在20世纪70年代初，Tadanobu等就从米曲霉中提纯了3种亮氨酸氨肽酶及羧肽酶[5,6]，现已有复合型蛋白酶Flavourzyme问世，利用微生物氨肽酶进行蛋白质水解液脱苦的研究也较多[4]。而国内对微生物源氨肽酶的报道较少，脱苦多用Novo公司所产的Flavourzyme。我们选取大豆蛋白质为底物，考察了从豆腐乳中筛选到的枯草芽孢杆菌所产的氨肽酶脱除蛋白质水解物苦味的效果。

1材料与方法

1.1材料

大豆蛋白（生化试剂，上海化学试剂公司）；胰蛋白酶（上海伯奥生物科技有限公司）；氨肽酶（本实验室发酵制备）。

1.2仪器

722分光光度计（上海第三分析仪器厂）；PHS-25型pH计（上海雷磁仪器厂）；TG-328A电光分析天平（梅特勒公司）；安捷伦1100液相色谱仪（美国）。

1.3实验方法

1.3.1蛋白质含量测定Bradford法[7]。

1.3.2DH值（水解度）测定方法采用pH-stat法[8]。DH＝BN/a×m×h，式中 B为消耗碱量，N为氢氧化钠摩尔浓度，a为蛋白质氨基的平均解离度，m为蛋白质的质量数，h为每1 g蛋白质底物具有的肽键毫摩尔数。

1.3.3氨基氮测定方法茚三酮法[9]。

1.3.4游离氨基酸组成测定使用安捷伦1100液相色谱仪。C18柱4.0 mm×25 mm，紫外检测器，柱温40 ℃，流速1.0 mL/min，波长338 nm、262 nm（Pro），流动相A：20 mmol醋酸钠液，B：20 mmol醋酸钠液∶甲醇∶乙腈＝1∶2∶2（V/V）。

1.3.5 苦味评价方法称取2 g苦丁茶，加500 mL蒸馏水煮沸30 min，过滤，定容至500 mL。分别稀释20，40，60，80，100倍，定义苦味值为强、较强、中、弱、无。

2结果与讨论

2.1单独使用氨肽酶的水解效果

称取适量大豆蛋白质，溶解于pH 8.5、10 mmol/L的Tris-HCl溶液中，配制成1 %的底物溶液（实际纯蛋白底物浓度为0.92 %），反应温度50 ℃，分别加入不同量（5 000，10 000，20 000 U/g）的试验氨肽酶进行酶解，随着水解的进行，酶解液pH逐渐下降，滴加0.25 mol/L的氢氧化钠保持酶解液pH 8.5左右，记录消耗碱量与时间的关系，换算成水解度DH与时间的关系，见图1。

由图1可见，单用氨肽酶不能彻底水解蛋白质，水解度仅能达到7.3 %，释放的游离氨基酸也有限，所以以下实验都采用双酶法二步水解。

2.2双酶法水解大豆蛋白质

大豆蛋白质溶解于pH 8.0、10 mmol/L的Tris -HCl溶液中，配制成1 %的大豆蛋白质液，85 ℃水浴预处理15 min，水解温度40 ℃，分别加入酶浓度∶底物浓度（E/S）为1/200，1/100，1/50的胰蛋白酶进行酶解，滴加0.25 mol/L的氢氧化钠保持酶解液pH 8.0左右，记录消耗碱量与时间的关系，换算成DH与时间的关系，见图2。

由图2可见，随着酶水解时间的延长和加酶量的增加，大豆蛋白质水解度变化的总趋势是逐渐增加。在水解初期，水解度上升很快，2 h后上升速度逐渐缓慢，3 h后基本保持稳定。当E/S加至1/100时，酶浓度增加对水解度的影响减弱，考虑到成本因素，加酶量以1/100为宜。胰蛋白酶水解4 h后，水解液85 ℃水浴加热15 min灭酶，离心去沉淀，调节pH至氨肽酶最适的 8.5，分别加入不同量的氨肽酶5 000，10 000，15 000，20 000 U/g保持温度50 ℃、pH 8.5不变，继续水解10 h。结果表明，加入氨肽酶后水解液pH变化不大，水解度DH增加了6.73 %。测定水解液中氨基氮的变化，结果见图3。

由图3可见，水解液中的游离氨基酸含量随酶量的增加和时间延长呈现明显上升的趋势，8 h后水解基本完成，游离氨基酸的量不再增加。酶量的添加以10 000 U/g为宜。水解完毕氨基酸含量由2 450 mg/L上升到3 157 mg/L。对胰蛋白酶水解液及双酶水解液进行游离氨基酸分析，结果见表1。

由表1可见，双酶水解后谷氨酸和精氨酸的量增加最为明显，甘氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、赖氨酸和亮氨酸等疏水氨基酸的量也有一定的增加，表明添加氨肽酶起到了增加游离氨基酸数量及脱苦的效果。

2.3氨肽酶对大豆多肽苦味的影响

比较制得的大豆多肽溶液与不同浓度的苦丁茶，得到大豆多肽的苦味值，见表2。

由表2可见，随着酶量增加及水解时间延长，苦味呈下降趋势，加酶量以10 000 U/g为宜，水解完毕苦味值由强降至无，水解液清亮无沉淀，无苦味感。

3结论

枯草芽孢杆菌氨肽酶单一作用不能彻底水解蛋白质。大豆蛋白质经胰蛋白酶单一作用水解，水解度达到10.88%，水解液中游离氨基酸的量为2 450 mg/L，水解液呈现苦味。添加枯草芽孢杆菌氨肽酶进一步水解，游离氨基酸总量增至3 157 mg/L，谷氨酸的增加最为明显，疏水氨基酸的量也明显增加，苦味基本脱除。若对此枯草芽孢杆菌的产酶条件进一步优化，有望实现工业化生产，开发出新型酶制剂，用于肉类、鱼类加工，酱油、酱料等调味料及营养食品、保健食品、蛋白质饮料等大豆肽产品的研制。

参考文献

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[2]赵国华，陈宗道. 蛋白质水解物苦味研究进展[J]. 粮食与油脂，2000（1）：28-30.

[3]Noboru I, Satoru I, Tadayuki T. Purification and characterization of aeromonas caviae aminopeptidase possessing debittering activity[J]. J Agric Food Chem, 1997, 45(12): 4897-4901.

[4]Badal C, Saha, Kiyoshi H. Debittering of protein hydrolyzates[J]. Biotechnol Adv, 2001, 19 (5):355-370.

[5]Tadanobu N, Seiichi N. Purification and properties of leucine aminopeptidaseⅠ from Aspergillus oryzae[J]. Agric Biol Chem,1973, 37(4): 757-765.

[6]Tadanobu N, Seiichi N. Purification and properties of leucine aminopeptidase Ⅱand Ⅲ from Aspergillus oryzae[J]. Agric Biol Chem,1973, 37(4): 767-774.

[7]汪家政，范明. 蛋白质技术手册[M]. 北京：科学出版社，2001：42-46.

[8]吴建中，赵谋明，宁正祥，等. 双酶法生产低苦味大豆多肽研究[J]. 食品工业科学与技术， 2003，24（4）：24-27.

大豆分离蛋白篇6

摘要:

介绍了大豆加工产业废弃物———豆渣的营养价值和利用现状，着重从豆渣功能成分的提取、豆渣纤维的功效、豆渣发酵制品及豆渣在食品中的多种应用等几个方面进行了综述，旨在为豆渣的综合利用、资源化研究提供借鉴。

关键词:

豆渣;豆渣纤维;功能成分;营养价值;开发利用

大豆(Glycinemax)又称黄豆，为五谷之一，属于碟形花科，大豆属，原产于中国，至今已有5000a的栽培历史，通常被认为是由野豆驯化而来，已知品种约有1000多个。19世纪后期，大豆栽培由我国传入欧美各国，20世纪30年代已遍及世界各国。我国大豆的集中产区在东北平原、黄淮平原、长江三角洲和江汉平原。大豆含有丰富的对人体健康非常有益的营养素，如高膳食纤维、高蛋白、高钾、高钙等，具有较高的营养价值和经济价值［1］。我国自古就有食用大豆及其制品的饮食习惯，在大豆的加工和处理上有着丰富的经验和较为成熟的工艺。豆渣是生产大豆分离蛋白、豆粉、豆腐和豆浆等豆制品的副产物，产量非常大。但由于豆渣所含热能低且口感粗糙，一直以来未引起人们的高度重视，其大都作为家畜的饲料或废弃物倾倒，造成了资源的浪费和环境的污染［2］。因此，豆渣的综合利用已成为各国科研工作者关注的问题之一。主要概述豆渣的营养价值及开发利用现状，旨在为豆渣的开发利用奠定理论基础。

1豆渣的营养价值

豆渣含有丰富的营养价值，含蛋白质18%～23%、膳食纤维50%～55%，还含有人体必需的8种氨基酸及丰富的矿物质和维生素，其主要成分见表1、表2［3-4］。由表1、表2可知，豆渣营养非常丰富，除了丰富的膳食纤维以外，矿物质含量也都高于或接近于其他粮食作物，特别是维生素B含量较高。豆渣蛋白中的必需氨基酸在组成上与大豆蛋白基本相当。特别是豆渣蛋白中赖氨酸含量达46．0mg/kg，可以弥补谷类食品中赖氨酸的不足，添加后可提高产品的营养价值。

2豆渣的开发利用现状

2．1豆渣功能性成分的提取目前，豆渣的功效成分研究主要集中在大豆多糖、低聚糖、异黄酮、核黄素、天然维生素E等方面。随着人们对豆渣价值的认识，豆渣功效成分的研究日益受到人们的关注。

2．1．1大豆多糖豆渣中含有大量的水溶性多糖，具有天然的功能活性成分。与其他生物多糖相比，大豆多糖黏性较低，分散性、稳定性、乳化性和黏着性较好，可以有效改善食品的食用品质、加工特性和外观特征［5］。此外，大豆多糖还具有调节血糖和血脂、促进肠道有害物质的吸附与排泄、抗癌、促进矿物质吸收利用等生物学活性，在抗氧化、抗菌、抗病毒及免疫调节等方面也有一定功效［6］。前人在大豆多糖提取方面做了大量研究，尹艳等［5］以六偏磷酸钠水溶液提取—乙醇沉淀分离的方法提取豆渣多糖，通过正交试验得到提取的最优工艺，豆渣多糖的提取率为53．96%。娄冠群等［7］以亚临界水提取豆渣中可溶性大豆多糖，结果发现，亚临界水提取法比传统热水提取法提取时间明显缩短，且多糖得率提高。另外，豆渣多糖还有望作为天然抗氧化剂和功能性食品得到开发利用。张强等［8］以热水浸提—乙醇沉淀分离的方法得到豆渣多糖，通过体外氧化试验表明，豆渣多糖对超氧阴离子自由基和羟基自由基具有较强的清除能力，且存在一定的量效关系。范远景等［6］将提取的多糖经过初步纯化后，经薄层层析和傅立叶变换红外光谱分析初步确定，可溶性大豆多糖中含有鼠李糖和半乳糖等单糖组分。姚磊等［9］利用酶法降解豆渣纤维得到不同时段的豆渣纤维改性多糖，对其清除ABTS自由基、亚铁离子螯合能力进行评价，结果表明，不同时段的大豆多糖组分对ABTS自由基有一定的清除效果，降解12h组对ABTS自由基的清除效果最好，对亚铁离子有较好的螯合作用，并呈现剂量依赖性，降解2h组大豆多糖对亚铁离子螯合能力最强。

2．1．2异黄酮大豆异黄酮是另外一种存在于豆渣中的生物活性成分，对人体具有多种生理功能。除抗氧化作用外，还具有抗癌、防止心血管疾病、抗菌等多种功能［10］。黄晓东［11］通过柱层析技术和薄层层析(TLC)法提取、分离大豆豆渣中黄酮类化合物，经紫外光谱和TLC鉴定，所获得的2种化合物分别为黄豆苷和染料木素2种异黄酮。何恩铭等［12］在单因素试验的基础上，采用正交试验优化了豆渣中大豆异黄酮的提取方法，在此条件下异黄酮的提取量为89．5mg/kg。李光等［13］进行了豆渣异黄酮超声提取工艺的响应曲面法优化，得出豆渣异黄酮提取的最优工艺条件，在此条件下，浸出率可达1．204%。张福丽等［14］优化了豆渣中异黄酮的提取工艺，并对其抑菌活性进行分析，结果表明，大豆异黄酮对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和红曲霉的生长均有明显的抑制作用，对大肠杆菌和短乳杆菌无显著影响。

2．1．3豆渣蛋白豆渣中含有丰富的蛋白质，在食品、化工等领域有着广泛的用途，可以作为很好的食品添加剂［15］。水解后得到的含氨基酸和多肽的水解蛋白是食品工业优质的植物蛋白来源，其中的某些寡肽还具有特殊的生理功能。关于豆渣蛋白提取方法的研究较为集中，包括酶法、碱溶酸沉法、超声波法、盐析法等。周德红等［16］利用酶法水解豆渣制备水解蛋白，在复合蛋白酶和风味蛋白酶的添加量均为0．1%时，研究了酶反应的pH值、水解时间、水解温度及底物浓度对蛋白质提取率的影响，结果显示，在最佳提取条件下，蛋白质提取率为55．46%，水解度为9．05%。徐赏等［17］以豆渣为原料，采用碱溶酸沉法提取豆渣蛋白，通过正交试验优化了豆渣蛋白的提取工艺，在最佳提取条件下，豆渣蛋白提取率为75．05%。除单一提取法外，马秀婷等［18］采用超声波和碱溶酸沉共同作用的方法提高大豆豆渣中蛋白质提取率，经多次试验验证，豆渣蛋白提取率可达80．19%。

2．2豆渣纤维的应用豆渣中的纤维具有预防便秘、减肥、预防心脑血管疾病等功效。王常青等［19］以SD大鼠为对象，研究了豆渣纤维生理功能，表明豆渣纤维降血脂、改善血液流变性能的效果显著，且优于果胶。徐虹等［20］、孙海燕等［21］通过动物试验发现，豆渣粉具有显著降低血糖和血脂，改善血糖、血脂代谢的作用，并对糖尿病小鼠的肾脏、肝脏具有一定的保护作用。此外，豆渣纤维还具有以下一些功能。

2．2．1重金属离子去除剂重金属在环境中不能被微生物降解，属于持久性污染物［22］。程建国等［23］以豆渣为主要原料，选择合理的工艺条件，合成新型重金属离子去除剂———豆渣纤维素黄原酸酯。其使用量较少即对废水中重金属离子有较好的去除作用，且本身能自然降解，在环境保护领域有广泛的应用前景。2．2．2生物降解材料填充料豆渣富含纤维素。由于纤维素在分子机构上与淀粉分子相似，与无机填充料相比，淀粉对纤维素应具有更好的浸润性。张卫英等［24］对淀粉基生物降解材料中加入纤维素进行了研究，结果表明，纤维素的加入可提高材料的力学性能。

2．2．3作为微胶囊的壁材周德红等［25］以月见草油为芯材，豆渣纤维、麦芽糊精为壁材制备月见草油微胶囊，试验结果表明，豆渣可溶性膳食纤维是月见草油微胶囊化的优良壁材，产品溶解性好、包埋率高。

2．2．4双歧杆菌的增值剂徐广超等［26］以人体肠道内的长双歧杆菌和婴儿双歧杆菌为试验对象，观测膳食纤维促进双歧杆菌增殖的效果，结果表明，豆渣水溶性膳食纤维对婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌的增殖都具有促进作用，并且对混合菌株的增殖效果更为显著。

2．2．5可食用包装纸以豆渣为原料，生物蛋白酶、脂肪酶为催化剂提取豆渣中的膳食纤维，制成新型可食性包装纸。确定的最佳工艺为:蛋白酶用量4%、反应时间7h、温度40℃、pH值7、塑化剂用量1．5%、糊精用量2%［27］。利用豆渣生产可食用包装膜既实现了废物利用，又保护了环境，具有广阔的发展前景。2．3豆渣产品开发利用研究进展豆渣纤维含量高，口感粗糙，且具有不愉快的豆腥味，长期以来未得到人们的重视。随着社会的发展和人们对食品营养与健康的关注，人们从营养学的角度对豆渣纤维有了新的认识。目前，我国人均膳食纤维摄入量只有推荐摄入量的1/2，在食品中加入豆渣粉既提高了人们膳食纤维的摄入量，也减少了资源的浪费。豆渣膳食纤维可以通过微生物和酶进行降解，形成水溶性多糖，增加可食纤维量，消除或减少豆渣的粗涩感及豆腥味，有效改善大豆膳食纤维的功能性和价值［28］。

2．3．1豆渣在发酵制品中的应用

2．3．1．1蛋白质饲料莫重文［29］对混合菌发酵豆渣生产蛋白质饲料进行了研究，利用菌酶与酵母菌种的协同作用混合发酵，将纤维素等物质变成低分子糖类，再利用酵母菌在生长繁殖过程中将糖类物质与无机氮合成菌体蛋白，以此提高发酵料的蛋白质含量和可消化性，使得粗蛋白含量比原来增加了43．07%。

2．3．1．2活性酶培养基纳豆激酶具有溶解血栓、改善血液循环等作用;α－糖苷酶抑制剂能通过抑制小肠上段的α－糖苷酶活性，对与α－糖苷酶相关的慢性疾病如糖尿病具有潜在的治疗效果。豆渣是制备纳豆激酶、α－葡萄糖苷酶抑制剂等活性酶制剂的良好培养基。鲍艳霞等［30］以豆渣为原料，研究了纳豆菌固体发酵生产纳豆激酶的工艺并最终确定了固体发酵培养基的最佳配比;朱运平等［31］研究了不同微生物发酵后的豆渣提取物对α－葡萄糖苷酶活性的抑制效果，发现用枯草芽孢杆菌发酵的豆渣抑制效果最佳，可开发成降血糖食品，为豆渣的开发利用开辟新方向。

2．3．2豆渣在食品添加剂中的应用李琳等［28］将新鲜豆渣经过蛋白酶和纤维素酶水解后，再利用米曲霉对水解液进行发酵，生产食品添加剂。在最优发酵条件下，豆渣中57．87%的固形物变成了可溶性成分，约51．8%的蛋白质变为多肽;产物中主要含有多糖、可溶性纤维和分子质量在5ku以下的肽类。陶瑞霄等［32］以毛霉为菌种，对豆渣的发酵条件、产品色泽、风味和营养价值进行评估，结果发现，发酵后的豆渣色泽棕黄，入口细腻，发酵风味浓郁，同时氨基酸态氮含量和总酸含量升高，有利于加工各种风味酱料和休闲食品。

2．3．3豆渣在烘焙食品中的应用目前，豆渣在烘焙食品中的应用研究主要集中于豆渣含量对烘焙食品感官品质的影响［33］。面包中豆渣的添加量应适当，这是由于添加豆渣后面包体积会随着大豆膳食纤维含量的增加而减小，面筋被稀释，面筋与纤维物质发生相互作用，从而导致面筋网状结构萎缩。陈正宏等［34］通过粉质试验和焙烤试验得出，豆渣粉在面包中的最佳添加量为3%。孙建华等［35］研究发现，与普通面包相比，豆渣面包膳食纤维增高的同时蛋白质含量也增大，豆渣的最佳添加量为10%。赖海涛等［36］对豆渣面包制作工艺进行了优化，结果显示，在最佳工艺条件下，豆渣的添加量达15%。对于饼干而言，添加豆渣膳食纤维的比例可以加大，这是因为饼干对面筋含量要求较低。但是饼干的感官评价存在较大的人为主观性，不同学者对于豆渣在饼干中的添加量有不同的见解。吴金凤等［37］认为，在调整油、糖、水添加量的基础上，豆渣粉替代面粉的用量可以提高到40%。宋莲军等［38］认为，豆渣添加量为31．75%时，制得的豆渣饼干的品质较好。杨君等［39］通过正交试验得出，膳食纤维饼干中豆渣的最佳添加量为20%。利用豆渣中的膳食纤维具有较高持水力的特点可以有效解决糕点类产品烘焙时因失水而导致的硬度增加问题，同时还有利于产品体积和柔软度的保持，降低成本。豆渣添加量随着糕点类产品、感官品质、添加工艺等不同而不同。李雨露［40］研究发现，豆渣添加量占面粉的30%时，蛋糕品质最佳。吴素萍［41］发现，在蛋糕最佳的配方中，豆渣添加量占面粉质量的35%。张锐利等［42］研究豆渣纤维蛋糕时，把新鲜的豆渣先气蒸15min，然后冷却乳化均质得到豆渣乳，最佳工艺中豆渣乳的添加量占面粉质量的35%。吕远等［43］在制作戚风蛋糕时发现，改性豆渣的最佳添加量占面粉质量的12．5%。此外，在制作面条、馒头的过程中，豆渣粉也可代替部分面粉增加产品的蛋白质含量和膳食纤维含量，改善产品的质构特性。王苏闽［44］、李波等［45］将豆渣添加于馒头、面条等的加工中，并得出产品的最佳配方，结果表明，添加豆渣不但不会影响原有产品的感官品质，还能提高产品的感官品质。豆渣在食品方面的应用还有即食海带点心、板栗豆渣酥饼、豆渣桔皮保健酱、豆渣南瓜饼、豆渣鱼丸等。

2．3．4豆渣在饮料开发中的应用豆渣是一种理想的膳食纤维源，开发豆渣纤维饮料既可以利用豆渣，又可以生产功能性饮料，满足消费者的需要。骆延平［46］将生产豆奶分离出的豆渣进行蒸煮、酶解、调配、加入稳定剂及乳化剂，然后经过二次均质，得到了一种状态稳定、流动性好、口感圆润爽滑的新型功能性纤维饮料。温志英等［47］选用风味浓郁、果实甜美、色香味俱佳的菠萝原料与豆渣配合研制出果味豆渣饮料，将豆渣去腥、脱色、干燥、粉碎、过筛处理后，加入已经去皮、榨汁、预煮、打浆的菠萝浆汁，以菠萝浓郁的香味、甜美的滋味弥补豆渣风味的不足，使二者达到优势互补，产品酸甜适口、稳定性好。

3展望

近年来，对豆渣的研究有了一定进展，但其在应用与成果转化方面还存在许多不足。首先是由于含水量和蛋白质含量较高，鲜豆渣极易腐败，影响风味，限制其后续的食用和应用;其次是豆渣的纤维素含量高，虽然膳食纤维被证明具有许多营养保健作用，但其粗糙的口感也在一定程度上制约了豆渣的应用。因此，为了能够将豆渣引入现代人的生活中，一方面需要进一步提高人们健康消费的理念;另一方面需要打破传统观念，采用新型的干燥技术、改性技术及发酵加工技术等，改善豆渣食品的风味、口感，扩大其应用范围;最后，还应开发豆渣新型食品，增加豆渣制品的加工形式和花色品种，注重搭配和组合效果，并与企业、市场需求紧密结合，加强产业化研究，实现商业化大规模，才能使豆渣真正成为粮食的有效补充，同时发挥其保健功效。总之，豆渣是一种还未被充分开发利用的健康食品，豆渣中丰富的营养成分和保健价值还未有深入研究。随着生活水平的提高、生存环境的恶化以及竞争压力的加大，人们越来越重视身体的保健，多样化的产品、健康的需求、庞大的人口基数、人们认知程度的逐步提高等共同作用产生的诱人消费空间，正在吸引越来越多的企业和研究机构加入这个行业。豆渣制品对人体生理代谢具有有益的调节功能，且无任何副作用的特点，必将为豆渣主食产品、豆渣衍生的功能食品及保健型休闲食品带来广阔的市场前景。

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大豆分离蛋白篇7

关键词：大豆茎叶；蛋白质含量；考马斯亮蓝染色法

中图分类号：TS63 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2012）20-4610-03

蛋白质是一项质量和资源评价的重要指标[1]，用一种快速、准确、方便的方法来检测蛋白质含量是必不可少的。近年来，许多学者用考马斯亮蓝染色法和其他方法对蛋白质含量进行了测定[2-9]。蛋白质中的酰胺基团与考马斯亮蓝染料中的阴离子结合使溶液显蓝色，测定效果可通过测定显色稳定性等多个性状指标进行全面客观地评价。本试验采用盆栽大豆，对大豆的茎叶蛋白质含量与大豆产量进行考察，通过分析它们之间的影响与关系，为今后大豆育种工作提供试验方法。

1 材料与方法

1.1 材料

供试样品为大豆茎叶（实验室自制）。

牛血清白蛋白（进口分装），购于上海亿欣生物科技有限公司；考马斯亮蓝G-250（进口分装），购于中国医药（集团）上海化学试剂公司；其他试剂均为国产分析纯试剂。

1.2 仪器

SHB-IIIS循环水式多用真空泵和抽滤装置（郑州长城科工贸有限公司）、EL303型电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；Cary50紫外分光光度计（美国瓦里安有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 蛋白质标准溶液的配制 准确称取牛血清白蛋白100.0 mg，用去离子水定容至100 mL，即为

1 mg/mL蛋白质标准液，4 ℃保存待用。

1.3.2 考马斯亮蓝G-250溶液的制备 称取考马斯亮蓝G-250 100.0 mg于研钵中，取体积分数为95%的乙醇（下同）50 mL，从中取约10 mL加入研钵，将考马斯亮蓝G-250研成粉并溶解；轻轻将上层液体转入500 mL烧杯中，再取10 mL乙醇溶液于研钵中研磨，同法收集，重复洗涤3次。最后用20 mL乙醇分次洗涤研钵，合并液体于烧杯中。取体积分数为85%浓磷酸100 mL分次加入烧杯再转入

1 L容量瓶，定容，抽滤，得考马斯亮蓝G-250溶液。

1.3.3 标准曲线的绘制 分别吸取0.2～1.0 mL标准蛋白质溶液于10 mL试管中，各管补加0.15 mol/L NaCl溶液至1 mL，各取0.1 mL于新试管中并加入5 mL考马斯亮蓝 G-250溶液，摇匀，放置 2 min，于595 nm 处测定其吸光度[7]。

1.3.4 样品中蛋白质含量的测定 取样品溶液0.1 mL，按上述方法测定其吸光度，再根据标准曲线方程计算出样品的蛋白质含量[8]。

2 结果

2.1 标准曲线回归方程的建立

用紫外分光光度计，以0.15 mol/L的NaCl溶液作空白对照，在595 nm处测定对照品溶液吸光度。以吸光度为纵坐标，蛋白浓度为横坐标，绘制标准曲线见图1。

通过测定不同浓度牛血清白蛋白的吸光度得其线性回归方程式：Y=0.478 3X+0.070 3，R2=0.999 3。

2.2 样品蛋白质含量测定结果

按蛋白质含量测定方法，同时做3个重复，大豆茎的吸光度为0.434 2、0.440 2和0.437 5 a.u.，大豆叶的吸光度为0.611 4、0.611 0和0.612 1 a.u.。计算大豆茎的蛋白质含量为7.608%、7.734%和7.677%，平均含量为7.673%；大豆叶的蛋白质含量为11.313%、11.305%和11.328%，平均含量为11.315%。

2.3 稳定性试验

量取同一样品溶液 1 mL，每隔 10 min 测定1次，观测其稳定性，结果见表1，表明在显色1 h 内吸光度稳定，RSD分别为0.04%和0.39%。

2.4 重复性试验

按上述方法，分别测定大豆茎和叶蛋白提取液的吸光度，检验该方法的重现性，结果见表2，RSD分别为0.83%和1.27%，小于5%，表明重现性较好。

2.5 精密度试验

准确吸取牛血清白蛋白溶液（1 mg/mL）0.5 mL进行精密度试验，连续测定其吸光度6次，其RSD为0.25%，小于5%，表明精密度较好，结果见表3。

2.6 回收率测定

取已配制好的1 mg/mL牛血清白蛋白溶液0.1 mL，加入1 mL大豆茎（或叶）样品溶液，然后再加入5 mL考马斯亮蓝染色液，摇匀，静置2 min左右，于595 nm处测定其吸光度，以不加牛血清白蛋白溶液作为空白对照，根据标准曲线算出相应浓度，然后计算加入样品蛋白的量，并计算回收率[9]，结果见表4。结果表明，该方法准确度较高，可满足大豆茎叶中蛋白含量的快速定量分析。

3 讨论

蛋白质分子均具有酰胺基团，棕红色的考马斯亮蓝G-250染料上的阴离子与蛋白质的酰胺基团结合，使溶液变为蓝色，由于溶液在595 nm处吸光度与蛋白质含量成正比，因此595 nm处测定吸光度，可计算出样品中蛋白质含量[6]。上述结果表明，考马斯亮蓝与蛋白质中的酰胺基团结合生成的蓝色非常稳定，在1 h之内吸光度值变化很小，重复性较好，精密度较高，同时该方法测定蛋白含量的回收率符合大豆茎叶蛋白质含量的测定要求。大豆茎蛋白质提取液中蛋白质含量在0.7～1.0 mg/mL范围内；大豆叶蛋白质提取液中蛋白质含量在1.1～2.0 mg/mL范围内，用考马斯亮蓝染色法测定大豆茎叶蛋白质的含量优于其他传统方法[10，11]。但另一方面，该法线性范围窄，低浓度样品易受影响，因此，在测定时所用试管须经酸浸泡，洗净后应经高温烘干。当样品浓度大于一定浓度时，须稀释测定，另外，可用乙醇和去离子水清洗比色皿上粘染的色素[12]。综上所述，该法准确率较高且简便灵敏，对设备要求低，受干扰小，适宜于测定大豆茎叶的蛋白质含量。

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大豆分离蛋白篇8

关键词：大豆蛋白质；酶解；前处理；水解度

中图分类号：Q51文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)03-0027-03

Study on Pretreatment of Soybean Proteolysis

HU Chun-lin, PAN Yue-ping

(College of Food Engineering, Harbin University of Commerce, Harbin 150076, China)

Abstract：Objective To study the method of raised degree of hydrolysis of soybean protein. Methods Through comparing the influences of heating, ultrasonic treatment, acid treatment or alkali treatment on the isolated soybean protein, the feasibility on the pretreatment of soybean protein was discussed. Results With the processing of heating, ultrasonic treatment, acid treatment or alkali treatment, the degree of hydrolysis of soybean protein raised, especially through heating and ultrasonic treatment, it obviously increased by 7%～8% compared with those without pretreatment. Conclusion The pretreatment methods of soybean proteolysis are reasonable and feasible.

Key words：soybean protein; enzymolysis; pretreatment; degree of hydrolysis

为了促进大豆蛋白质的酶解反应，提高大豆蛋白质水解度（degree of hydrolysis），常用能促进酶解的方法，如对大豆蛋白质进行前处理[1]，在酶解反应时用超声波促进酶反应[2]等。

大豆蛋白质分子内部结构复杂，多肽链紧密折叠在一起，其二级结构中有25%的α-螺旋，25%的反平行β-折叠结构，42%的β转角以及 8%的自由卷曲，疏水氨基酸在其内部形成疏水区域，外面被亲水外壳包裹，这些亚基间又彼此结合形成复杂的四级结构。大豆蛋白质分子高度压缩，结构紧密，对蛋白酶的酶解作用具有很强的抵抗力[3,4]。因此，要加快酶解速度，提高大豆蛋白质水解度，就须对大豆蛋白质进行前处理，使其高度压缩的结构松散开，暴露出分子内部的酶作用位点以利蛋白酶的结合[5]。本研究分别探讨了加热、超声波、酸、碱处理对大豆蛋白质酶解的影响。

1　材料与方法

1.1材料

大豆蛋白粉（食品级，哈高科大豆食品有限公司）；中性蛋白酶（酶活性50 000 U/g・pro，食品级，北京奥博星生物技术责任有限公司）；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠（分析纯，天津天新精细化工开发中心）。

DF-1型集热式磁力搅拌器（金坛新一佳仪器厂）；PHB-4 便携式pH计（上海伟业仪器厂）；HH-4数显恒温水浴锅（金坛荣华仪器制造有限公司）。

1.2方法

1.2.1蛋白质含量测定方法采用凯氏定氮法[6]。

1.2.2酶解方法及条件称取大豆蛋白质粉5 g，以pH7.0磷酸缓冲液作溶剂，配成100 mL溶液。经前处理后冷却至室温，加入蛋白酶0.5 g，水浴保温，振荡酶解。反应2 h后，90 ℃水浴酶解液保温10 min灭酶，冷却至室温后测水解度[7]。

1.2.3水解度的测定方法甲醛滴定法[8]

1.2.4几种前处理方法

1.2.4.1加热其他条件不变，改变温度和热处理时间2个参数，酶解后测大豆蛋白质水解度。

1.2.4.2超声波其他条件不变，改变超声功率、超声处理时间和温度3个参数，酶解后测大豆蛋白质水解度。

1.2.4.3酸其他条件不变，改变酸浓度、酸处理时间2个参数，酶解后测大豆蛋白质水解度。

1.2.4.4碱其他条件不变，改变碱浓度、处理时间2个参数，酶解后测大豆蛋白质水解度。

2　结果与讨论

2.1不经预处理的酶解反应结果

不经预处理平行做3份酶解液，水解度分别为13.50%，13.89%，13.70%，结果平均水解度为13.69%。

2.2加热处理对大豆蛋白质水解的影响

2.2.1热处理温度在加热时间（10 min）不变，用不同温度（70，80，85，90，95，100 ℃）对大豆蛋白质预处理，然后水解，结果见图1。由图1可见，经热处理后，水解度普遍升高，在85 ℃时水解度最高，比不经前处理高7%，因此，热处理温度以85 ℃为宜。85 ℃之后随着温度升高水解度下降，可能是温度过高导致蛋白质的过度变性。

图 1热处理温度对大豆蛋白质水解度的影响

2.2.2热处理时间在85 ℃的条件下，用不同加热时间（5，10，15，20，25，30 min）对大豆蛋白质预处理，然后水解，结果见图2。由图2 可见，水解度随加热时间缓慢升高，在15 min时水解度最高，然后开始下降。因此，加热时间以15 min为宜。

图 2热处理时间对大豆蛋白质水解的影响

2.3超声波预处理对大豆蛋白质水解的影响

2.3.1超声功率在温度为25 ℃（室温），超声时间为10 min的条件下，改变超声功率（40，50，60，70，80，90，100 W），对大豆蛋白质预处理，然后水解，结果见图3。由图3可见，功率在50 W时水解度最大，此后随着功率增大水解度逐渐下降，表明功率过大会导致蛋白质的过度变性，反而不利于酶解。

图 3超声功率对大豆蛋白质水解度的影响

2.3.2超声处理时间在25 ℃（室温），超声功率为50 W的条件下，改变超声时间（3，5，10，15，20，25，30 min），结果见图4。由图4可见，随着时间的延长水解度下降，表明超声时间不宜太长，以5 min为宜。

图 4超声处理时间对大豆蛋白质水解的影响

2.3.3超声温度在超声功率为50 W，超声时间为5 min的条件下，改变超声温度（20，30，40，50，60，70，80 ℃），对大豆蛋白质预处理后水解，结果见图5。由图5可见，在70 ℃时水解度明显提高，温度再提高时水解度开始下降。这与大豆蛋白质热处理有关，超声时有温度处理，其结果相当于超声和热处理两者的协同作用使大豆蛋白质适当变性，从而有利于蛋白酶的酶解作用。

图 5不同温度下超声对大豆蛋白质水解的影响

2.4酸预处理对大豆蛋白质水解的影响

2.4.1酸浓度在酸处理10 min的条件下，改变酸浓度（0.05，0.1，0.5，1.0，2.0 mol/L），对大豆蛋白质预处理后水解，结果见图6。由图6可见，酸处理时浓度在0.1 mol/L条件下水解度最大，浓度继续增大可导致蛋白质过度变性，使水解度下降。

图 6酸浓度对大豆蛋白质水解的影响

2.4.2酸处理时间酸浓度（0.1 mol/L）不变，改变酸处理时间（5，10，15，20，25，30 min），对大豆蛋白质预处理后水解，结果见图7。由图7可见，酸处理15 min时水解度最大，此后开始下降。

图 7酸处理时间对大豆蛋白质水解的影响

2.5碱处理的影响

2.5.1碱浓度在碱处理10 min的条件下，改变碱浓度（0.05，0.1，0.5，1.0，2.0 mol/L），对大豆蛋白质预处理后水解，结果见图8。由图8可见，碱浓度在0.1 mol/L时水解度最大，浓度继续增大时可导致蛋白质过度变性，使水解度下降。

图 8碱浓度对大豆蛋白质水解的影响

2.5.2碱处理时间碱浓度0.1 mol/L时，改变碱处理时间（5，10，15，20，25，30 min），对大豆蛋白质预处理后水解，结果见图9。由图9 可见，碱处理时间对大豆蛋白质水解的影响不很明显，碱处理15 min时水解度最大，此后开始下降。

图 9碱处理时间对大豆蛋白质水解的影响

3结论

综上所述，大豆分离蛋白质经加热、超声波、酸、碱等处理，其水解度都有所增加，相比较而言，加热和超声波处理效果比较明显，比不经前处理的酶解水解度提高7%～8%。

大豆蛋白质在酶解前经过适当的变性，使其组成蛋白质的氨基酸肽链适当松散，有利于蛋白酶的酶解，提高水解度。

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[6]GB/T 5009. 5-2003. 食品中蛋白质的测定[S].

大豆分离蛋白篇9

根据市大豆加工业的发展特点，按照“有限目标、突出重点、适度发展和全面提升”的发展原则，提出重点发展领域和发展方向如下：

（一）传统豆制品加工业

充分发挥市非转基因大豆产区的资源优势，鼓励传统豆制品加工业实现工业化，采用现代工业技术装备改造传统豆制品加工业，重点改进中小企业的加工工艺和设备，应用现代加工、保鲜和包装技术装备实现规模化生产，提升传统豆制品加工业的工业化水平。发展传统豆制品加工业的适度规模，适应市场需求、发展需求和竞争需求的规模生产，提高技术含量，优化产品结构，提高产品档次，塑造品牌企业，打造产品品牌。顺应传统大豆制品发展趋势，增加传统大豆制品的色、味、型，开发生产中、高档特色风味系列的传统大豆制品，提高产品质量，保证安全卫生，方便产品运销，力求占有更大的市场份额。

（二）大豆油脂加工业

以现有油脂加工企业为基础，适度发展高油专用大豆生产基地，实现标准化生产。淘汰和改造一批技术设备落后、经济效益差的企业，淘汰常压蒸发工艺及能耗高、污染大、消防设施不达标、没有污水处理设施的大豆油脂加工企业，严格控制大豆油脂产能盲目扩张。依靠高新技术改造大豆油脂加工业，采用生物技术进行大豆油脂的改性，生产出功能性油脂；采用膜分离技术进行油脂水化脱胶,用混合油分离溶剂替代混合油蒸发与汽提，节能降耗；采用纤维酶、半纤维酶或果胶酶等破坏大豆的细胞结构，提高大豆蛋白和油脂的提取率。扩展大豆油脂新品种、新用途，开发生产适合不同消费群体的功能性专用油脂。如开发生产运动员专用油脂、降血脂油脂、促进少儿生长发育油脂、减肥油脂、食品专用和营养保健油脂等产品。鼓励大豆油脂加工企业使用大豆脱皮技术、大豆膨化技术等，提高出油率及生产高蛋白豆粕。鼓励榨油和精炼配套生产，加强以豆粕和豆油为原料的新产品（发酵豆粕、健康营养油等）开发，鼓励使用PLC控制的自动化生产工艺，积极推广使用污水回收利用技术。

（三）大豆蛋白加工业

发挥市非转基因大豆产区的资源优势，发展高蛋白专用大豆生产基地，扩大生产规模。利用现代技术装备，改造一批能耗高、废水治理困难、生产成本高的大豆蛋白加工企业，鼓励大豆蛋白加工企业的产业链向上、下游两端延伸。增加大豆蛋白花色品种，开发生产大豆蛋白系列产品。重点开发生产低变性豆粕，开发生产营养或功能特性各异的大豆蛋白产品，重点发展销路广、市场潜力大的豆奶（粉）、浓缩蛋白、组织蛋白、分离蛋白、水解蛋白、改性大豆蛋白等产品，同时还可从乳清废水中提取乳清蛋白，不断向市场推出新产品。积极推进大豆蛋白的应用，优先发展适合于广大居民日常消费的大豆蛋白食品，提高其品质和营养价值，加强大豆蛋白在主食制品中的应用技术研发。深入开展大豆蛋白在肉制品中的应用，应用脱脂豆粉、组织大豆蛋白主要是为了替代肉制品中的肉量，降低成本，同时提高蛋白质含量，降低动物脂肪和胆固醇的含量。应用浓缩大豆蛋白、分离大豆蛋白主要是起到保水、保油、防止肉汁离析的作用，改善肉制品的品质和口感。

保障措施建议

（一）加大扶持力度，落实优惠政策

为加快市大豆加工业的发展，必须加大扶持力度，认真落实各项优惠政策。一是积极探索有效的扶持方式，加大财政资金投入力度。提高大豆加工业基本建设投资占整个基本建设投资的比重，同时也要增加对大豆加工业骨干企业的技改投入；对于国家支持的项目，地方政府要积极安排配套资金；各级财政每年应安排一定数量的资金，用于大豆加工业的技改贷款贴息；财政支农资金和农业综合开发有偿资金等，要重点支持大豆加工企业的基地建设、技术服务、质量安全体系等建设。二是认真落实各项优惠政策。围绕大豆加工业的发展，国务院办公厅、国家财政部、国家税务局等部门制定了一系列的优惠政策，包括税收优惠政策、暂免征收企业所得税政策、增值税进项抵扣政策、出口退税政策等，关键是落实到位。对大豆加工企业收购和储存原料的资金供应，视同大豆购销企业享受中国农业发展银行的资金支持。

（二）挖掘大豆油脂企业潜力，原则上限制新上产能

由于市大豆油脂加工业产能严重过剩，年平均产能过剩43.2%,产能过剩最大企业为84%，导致企业资源严重浪费。因此，～2015年要限制大豆油脂加工企业新上产能，原则上不再新建和扩建大豆油脂生产规模，避免无序竞争。应采取有效措施，提高大豆原料供应能力，挖掘大豆油脂企业原有潜力，扩大开工率。

（三）采取有力措施，建立高油高蛋白专用大豆生产保护区

高油高蛋白专用大豆是市宝贵的大豆资源，强调非转基因和绿色是市发展大豆产业的竞争优势所在。一是应建立市高油高蛋白专用大豆保护区，通过立法和其他有效方式保护高油高蛋白专用大豆种质资源，实行高油高蛋白专用大豆的地理和物种保护制度。二是要调整高油高蛋白专用大豆的产业结构，做到专种、专收、专储，形成大豆品牌效应。三是要用健全的机制提高农民种豆积极性，为农民提供农业保险，帮助农民规避风险，帮助农民把品种改良好，让农民放心种大豆，促进农民增收。临时性的大豆补贴政策只能缓解一时，不能从根本上解决问题。四是要扩大高油高蛋白专用大豆种植生产基地建设规模，壮大大豆种植生产产业群，为市大豆加工业提供充足的绿色大豆原料。

(四）规范企业质量管理，精心打造大豆加工品牌

严格执行国家《食品安全法》以及《食品市场准入制度》等有关规定,大力开展ISO9000和HACCP等质量管理体系认证，确保大豆加工产品质量合格，保障食品安全和市场准入的各项要求。打造大豆加工品牌，就是要根据产品市场定位确定品牌目标，例如打造“国际品牌”、“中国品牌”、“地方品牌”等等，同时要不断保护和提升原有品牌。在打造品牌的过程中，一是要进行品牌策划，进行产品定位，制定市场营销策略，加大宣传力度，找准市场切入点，有计划、有步骤地扩大品牌知名度；二是要把打造品牌和产品创新有机结合起来，以品牌为主导带动新产品开发，不断推出新产品来扩大品牌的知名度。三是要建立一支打造品牌的执行队伍，积极开拓产品市场、占领市场，不断扩大产品的市场覆盖面，不断提高产品的影响力，最终形成知名度高的品牌产品和品牌企业。

（五）加快技术进步和创新，提升大豆加工业整体水平

鉴于市大豆加工业技术水平发展不平衡状况，对于薄弱环节要加快技术创新步伐，实现技术跨越。一是大力采用新技术、新工艺、新装备，将市大豆加工业引入工业化进程。二是要引入科技创新机制，应用高新技术延伸产业链条，增加高附加值产品，提高综合利用率。三是加强产学研结合，鼓励大豆加工企业与大专院校、科研单位建立广泛的合作关系，帮助企业尽快提升技术水平。四是依靠技术进步，按照市场要求加快企业技术改造步伐，围绕提高产品质量和档次开发市场适销对路的产品。五是广泛开展国际合作和交流，把自主研发与引进消化吸收再创新相结合，提高技术创新能力，防止盲目的低水平重复建设。

大豆分离蛋白篇10

点豆腐就是设法使蛋白质发生凝聚而与水分离。盐卤是结晶氯化镁的水溶液，属电解质溶液，可以中和胶体微粒表面吸附的离子的电荷，使蛋白质分子凝聚起来得到豆腐。卤水豆腐就是用盐卤点制的豆腐，石膏豆腐就是用硫酸钙点制的豆腐。豆浆中含有大量蛋白质，并已经在溶液内形成胶体。加入少量电解质可以发生聚沉作用，所以有南石膏，北卤水点豆腐之说。南豆腐主要采用石膏，成分是硫酸钙。北豆腐是用盐卤作为凝固剂，盐卤主要成分是氯化镁。 基本原理就是静电作用，豆浆加热后表面带负电荷，二价盐离子能诱导蛋白聚集形成凝胶。石膏本身无毒，但是在于服用了多少。如同所有添加剂一样，需要看使用剂量。

（来源：文章屋网 http://www.wzu.com）