医学检验常用染色方法范文

导语：如何才能写好一篇医学检验常用染色方法，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公文云整理的十篇范文，供你借鉴。

篇1

[关键词] 抗酸杆菌；缸染法抗酸染色显微镜；检查结果

[中图分类号] R331 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）03（b）-0083-03

[Abstract] Objective To analyze the application effect of cylinder dyeing acid-fast stain microscopy method in examining the acid-fast bacilli results. Methods 100 cases of patients with tuberculosis admitted and treated in our unit from January 2008 to January 2016 were conveniently selected as the observation group， and 100 cases of patients with tuberculosis admitted and treated in our unit at the same period were selected as the control group， the control group were given the monolithic separated dyeing， while the observation group were given the monolithic immersion mixture dyeing， and the examine results were compared between the two groups. Results The difference in the test rate of acid-fast bacillus between the observation group and the control group had statistical significance by comparison （95.00%vs 80.00%）（P

[Key words] Acid-fast bacilli； Cylinder dyeing acid-fast stain microscopy； Examination results

Y核病是我国发病率极高的一种慢性传染病，该病主要由结核杆菌感染而诱发，因此给予结核病患者应用一种可靠、操作简单的筛选方法进行检查意义重大[1-2]。在临床上预防和诊断结核疾病的途径主要是通过检测结核杆菌及分析其病理而实施的，所以，如何科学有效地检查出分支杆菌的细菌，准确迅速发现传染源对于结核病患者的临床诊治具有十分重要的意义。缸染法抗酸染色显微镜方法是当前临床检查结核病常用的方法之一，该检查方法查找患者痰液中的抗酸杆菌时，操作较简单，并不需要使用昂贵的仪器设备，同时具有极强的特异性，临床工作人员可以省去进一步确认的步骤，从而明显提高结核病控制工作的质量[3-5]。为了分析抗酸杆菌应用缸染法抗酸染色显微镜方法进行检查的结果，该文对2008年1月―2016年1月该单位收治的200例结核病患者作出研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选择该单位收治的100例结核病患者作为观察组，其中男64例，女36例；年龄21～37岁，平均年龄（22.26±1.08）岁；病程0.1～3年，平均病程（1.02±0.27）年。同时将该单位同期收治的100例结核病患者设为对照组，其中男62例，女38例；年龄20～36岁，平均年龄（22.14±1.02）岁；病程0.2～3年，平均病程（1.06±0.25）年。两组患者的一般资料经对比差异无统计学意义（P>0.05），可进行对比。

1.2 方法

两组患者在2周内已进行抗酸杆菌检查，若患者检查结果显示为阳性，则均取1份痰液标本，每份痰液标本均作直接涂片6张，自然干燥后，固定放置在100 mL初染剂中进行染色，时间为5 min，然后取出4片使用自来水冲洗，用脱色剂脱色后，再用自来水冲洗，其中2片放置在100 mL脱色剂中，剩下2片则放置在100 mL复染剂中。上述涂片均各使用1张新玻片将其涂层尽量刮擦下来混入各染色组分中，并且当做当天的污染攻击染液组分。其中对照组患者的标本直接涂片采取单片分置染色，观察组患者的标本直接涂片采取单片浸入混合染色，模拟进行平行检测。同时取两组抗酸杆菌检查结果为阴性者的痰标本直接涂片3份，主要当做污染法阴性无污染对照。

1.3 统计方法

选择SPSS 19.0统计学软件以及excel软件分析两组患者的全部数据资料，计数资料采用[n（%）]表示，采用χ2检验，以P

2 结果

2.1 两组患者镜检结果对比

观察组患者的抗酸杆菌检出率为95.00%，对照组患者的抗酸杆菌检出率为80%，将两组患者的抗酸杆菌检出率进行对比，发现观察组明显高于对照组，差异有统计学意义（P

2.2 两组患者污染率对比

观察组患者的抗酸杆菌检查污染率为0.00%，对照组患者的抗酸杆菌检查污染率为10.00%，将两组患者的抗酸杆菌检查污染率进行对比，发现观察组明显低于对照组，差异有统计学意义（P

3 讨论

目前临床检查抗酸杆菌时，临床标本直接涂片抗酸染色显微镜方法是应用范围较广的一种检查方法，该检查方法相对于热染法来说，操作步骤更简单，并且染液用量更少，同时还能对环境进行保护[6-9]。当前国内结核病控制对策中，通过痰涂片对抗酸杆菌进行的实验方法是结核病控制工作人员找出传染源的主要方法，该检查方法设备并不复杂，操作难度低，同时可以快速获取报告结果，具有极高的特异性[10-12]。但是直接涂片抗酸染色显微镜方法也存在部分缺点，比如敏感性不高，检验结果较容易受痰标本质量、留置时间以及临床检验人员等因素的影响。基于此，详细分析缸染法抗酸染色显微镜方法的优缺点，并制定对应措施，可直接关系到抗酸杆菌的临床检查结果[13-14]。

该研究结果显示，观察组抗酸杆菌检出率95.00%，对照组抗酸杆菌检出率80.00%，对比差异有统计学意义（P

综上所述，抗酸杆菌检验过程中使用缸染法抗酸染色显微镜方法，污染发生率较低，保证检查结果，值得推广。

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篇2

【关键词】 儿童； 细菌耐药监测； 耐药率

儿科临床使用广泛，而儿童可选择的抗菌药物品种有限，因此实时监测病原菌种类的变迁及药物敏感性变化，对儿科临床合理选择抗菌药物有重要的指导意义。现将某儿童医院2012-2013年细菌微生物实验室检出病原菌和耐药性进行回顾分析，报告如下。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 2012-2013年各临床科室送检的各类阳性标本（痰液、血液、粪便、胸水、脓液、咽拭子、各类灌洗液等）中分离并进行药敏试验的病原菌株。标本送检和保存参照《全国临床检验操作规程》（第3版）。分析结果时剔除同一患者重复菌株，非无菌部位标本（如痰液）至收集感染标本菌株。

1.2 细菌培养、分离、鉴别及药敏试验 （1）标本接种和培养参照《全国临床检验操作规程》（第3版）进行，细菌的鉴定采用PHOENIX 100型全自动微生物分析仪仪器，药敏试验采用PHOENIX 100型全自动微生物分析仪仪器配套的药敏板，操作严格按照PHOENIX100说明书，同时结合手动监测结果。（2）质控菌株：大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923、铜绿假单胞菌ATCC27853均购置卫生部。

1.3 统计学处理 用SPSS 19.0 统计学软件对计数资料进行 字2检验，以P

2 结果

2.1 2012-2013年主要病原菌的检出情况 近2年检出主要病原菌的种类变化不大，2013年较2012年细菌总数有所增加，但各主要病原菌的比例下降，说明其他病原菌检出增加。具体见表1。

2.2 主要抗菌药物耐药率的比较 主要革兰染色阳性菌及阴性菌对各类抗菌药物的耐药率见表2～3。

2.3 铜绿假单胞菌对常用抗菌药物耐药性的比较 近2年铜绿假单胞菌对大部分抗菌药物耐药率升高明显（P

3 讨论

近2年检出的儿童疾病病原菌主要为革兰染色阴性菌，与文献[1]报道一致。革兰染色阴性细菌中以大肠埃希菌为主。表皮葡萄球菌在本院革兰染色阳性菌中检出率最高与陈婷等[2]检测结果一致，提示过去认为是无致病性或弱致病性的菌株已经成为医院感染中临床多见的病原菌。

本院革兰染色阳性菌耐药率从高到低依次为溶血葡萄球菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌，这3种细菌对青霉素耐药率均85%～95%，对红霉素耐药率均70%～90%；金黄色葡萄球菌对阿莫西林棒酸耐药率由25.3%升高至57.3%，对苯唑西林耐药率由15.2%下降至9.3%，以上数据与文献[3-4]报道一致。未检出对万古霉素耐药菌株。万古霉素为糖肽类抗菌药物，是临床上治疗耐甲氧西林葡萄球菌的最为经济有效的药物[5]，因此为防止和减缓耐万古霉素的葡萄球菌的出现，将万古霉素作为特殊限制级抗菌药物使用有重要意义。

主要革兰染色阴性杆菌对各类抗菌药物耐药率均有不同程度升高。大肠埃希菌、克雷伯菌对青霉素类、第一代、第二代头孢菌素类抗菌药物耐药率均达75%以上，对三代头孢菌素类头孢曲松、头孢哌酮、头孢噻肟耐药率也高达50%以上，对头孢他啶、第四代头孢菌素类耐药率20%～30%，对加酶抑制剂哌拉西林他唑巴坦和头孢哌酮舒巴坦的耐药率升高，但

2013年铜绿假单胞菌对大部分抗菌药物耐药率较2012年升高明显（P

参考文献

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篇3

关键词： 临床微生物学 基本技术 实验考核 方法 应用

医学检验专业的学生毕业后大多从事医学检验和实验室工作，除了理论知识外，熟练的实验操作和技能是他们立足的基础。临床微生物学检验是医学检验专业的重要专业课，是一门实践性和应用性均很强的学科。随着感染性疾病类型的改变，新发和再发病原体的不断增加，临床微生物学在临床检验工作中占据重要地位，并对培养合格的临床微生物学检验的专业人才提出了更高要求［1］。另外，临床微生物学接触的多为病原微生物，必须树立“有菌观念”，保证“无菌操作”，充分掌握生物安全的相关知识，才能适应临床和科研工作。因此，在临床微生物学检验实验教学中，教师必须高度重视对学生的基本实验技能训练和培养良好的实验习惯，做到从头从严抓起，使学生熟练掌握各项基本实验技术，融会贯通，并加强探索和创新等科学素养的培养。

为提高教学质量，我们实行在完成微生物学基本技术教学后，对学生进行标准化实验考核。多年的经验显示，对微生物学基本技术进行标准化考核，不仅可评价学生对基本技术的掌握程度，进一步规范基本技术操作，促进学生学习的主动性和积极性，而且是评价和提高教学质量、推进教学改革的有力依据。

一、临床微生物学基本技术标准化实验考核内容及考核目标

在临床微生物学中，实验基本技术重要包括显微镜使用、革兰染色、培养基制备、消毒与灭菌、细菌分离与培养［2］。根据教学大纲和实际情况，我们选择革兰染色和分区划线两个项目作为实验考核项目，并要求在20分钟内完成操作并作出染色结果报告。其中革兰染色主要检查学生对革兰染色技术的掌握情况，染色结果判断和报告准确性，以及显微镜使用和维护；分区划线除了考核学生对分区划线技术的掌握情况外，还包括无菌操作、接种环使用、开/拿平皿及划线的手法、实验材料标记、清理台面等实验习惯的考核。

二、临床微生物学基本技术标准化实验考核方法

目前临床微生物学实验课都是小班教学，我院基本上是一个教师负责28―32名学生，每个年级由3―4位教师带教。为避免教师个人习惯和师承的差异，在临床微生物学实验教学中实行规范化带教，对教学内容、教学方法，以及实验操作基本技术等方面均进行统一。这样，可以有效避免因教师因素引起的差异，使标准化实验考核能顺利进行。

临床微生物学基本技能标准化实验考核，包括实验考核组织、标准化操作方法、标准化监考和记录、标准化评分标准、修正和预防措施。具体方法和操作过程如下。

1.实验考核组织

在实验课的第一堂课，即告知学生要进行基本技术考核。在考核前1周，教研室统一对学生讲解考核要求和纪律，考核内容及评分标准等文件。考前2天，实验室准备好考核用玻片、试管架、接种环、记号笔、培养基、各种试剂、显微镜等材料和仪器。考前1天转移考核用菌种，保证细菌处于对数生长期。教研室对参加考核的所有学生随机安排考试地点和时间，考核名单及具体安排于考前1天张贴在实验室门口，由非带教老师担任监考老师。

2.标准化实验考核内容

选择金黄色葡萄球菌ATCC25923和大肠埃希菌ATCC25922作为考试用菌种。每个学生一个菌种，编写不同号码。要求在20分钟内完成革兰染色和分区划线两个项目操作，并作出染色结果报告。

3.标准化操作方法

严格无菌操作。革兰染色包括做好标记，正确制片；自然干燥；火焰固定；结晶紫初染，卢戈碘液媒染，95%酒精脱色，稀释石碳酸复红复染；吸水纸吸干；油镜观察；结果报告；油镜和玻片清洗；台面整理。分区划线包括标记，划线的姿势；平皿打开的手法，平皿放置；平皿开口朝向；划线分布；放培养箱培养。

4.标准化监考和记录

按照考核安排表，学生在规定时间和地点进行操作并报告结果，每位教师在每个时间段负责3―4名学生，对学生的每一个操作进行监督并记录，当学生在油镜下找到细菌后，监考教师检查染色结果并记录。学生在记录单上填写染色结果报告并签名。加强考场纪律，用计时器提醒学生。教师不回答学生任何与考核有关的问题。

5.标准化评分标准

实验考核成绩以20分计，直接计入课程总成绩。分数分配如下。

（1）革兰染色技术9分。标记0.5分；制片1分；固定1分；染色步骤2分（结晶紫初染，卢戈碘液媒染，95%酒精脱色，稀释石碳酸复红复染每个步骤各0.5分）；染色结果正确1分；报告正确1分；显微镜使用和维护2分；玻片清洗及台面清理0.5分。

（2）分区划线9分。平皿底部标记0.5分；平皿放置0.5分；无菌操作2分（接种环灭菌及冷却、平皿开口朝向、单手开平皿、酒精灯正确使用各0.5分），划线姿势和手法1分；送培养箱培养1分；划线分布2分；分离结果2分（划线分布和分离结果由老师在培养后第二天评分）。

（3）其他2分。在规定时间20分钟内按要求完成所有操作。超时1分钟扣0.5分，超时2分钟扣1分，超时3分钟扣2分，超时4分钟扣3分，超时5分钟扣5分。超过5分钟未完成操作，参加补考。补考以总成绩为18分计，通过者实验考核成绩为12分。

6.修正和预防措施

对不会用显微镜（包括油镜下找不到视野，不会使用油镜等），结果报告错误（与镜下结果不符，如球菌报告为杆菌，红色报告为革兰阳性等）的学生，无论前面各项操作结果如何，一律重考。

考核结束后，进行分析并做总结。除了对学生考核成绩进行分析外，还特别注意在考核过程中出现的各种问题，并针对考核中常见的特殊性问题，在实验教学中加以改进和提高。

三、标准化实验考核应用体会

临床微生物学基本技术实验考核是以教学大纲为质量标准的考试，目的是检验学生是否达到教学大纲要求和学业成绩的差异。主要考核学生对常用临床微生物学实验技能的掌握程度。实验考核结果不仅可评价学生对临床微生物学知识和技术的掌握程度，而且是评价教师教学质量的有力依据。

对医学检验专业学生，我们一直非常重视他们的临床微生物学基本技能训练，在教学中做到以小组为单位，由带教教师讲解并进行操作示教。在学生自己操作过程中，教师在实验室内巡回，仔细观察学生操作，对不规范和错误的操作及时纠正，下课前总结并提醒学生在试验中出现的问题。由于学生普遍对医学检验检验专业和临床微生物学的认识，加上学生均知道要进行操作技术考核，绝大部分学生在实验过程中能做到较积极主动地学习。

自2005年开始建立标准化实验考核体系，2006年开始实践以来，我们发现建立和应用标准化的实验考核体系，一方面可更好地促进学生的学习积极性：实施标准化考核以来，学生对基本技术的重视较以往明显提高，每次实验中都认真操作，完全不需要教师像以前一样进行检查，真正做到自觉、认真，甚至有部分学生利用课余时间联系实验室进行强化联系。另一方面可使实验考核规范化，做到有据可依的评分，避免人为因素等诸多可变因素对学生成绩的影响，做到有据可依、客观、合理、公正地评价和评分。另外，由非带教教师进行监考和评分，避免了因带教教师个人喜好等因素影响学生成绩，也可进一步促进实验带教的规范化。

总之，与以前的实验考核比较，标准化实验考核体系不仅能进一步促进学生的学习积极性和独立解决问题的能力，标准化的评分标准使学生在完成考核后对自己的成绩已经心中有数，避免少数学生对自己成绩有意见的现象，而且能促进学生在操作过程中养成良好习惯。临床微生物学基本技术标准化实验考核是公正、客观考核学生学习效果、评价教学质量的重要手段。

参考文献：

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篇4

【关键词】TF染色法；快速诊断；治疗；淋菌性眼炎

文章编号：1009-5519（2007）19-2866-02 中图分类号：R77 文献标识码：A

Fast diagnosis and treatment of gonococcal ophthalmia in newborn

YU Qiang

(The Maternal and Child Health Hospital of Hongan,Hubei 438400,China)

【Abstract】Objective:To introduce a fast diagnostic way of gonococcal ophthalmia in newborn,ie,TF staining method.Methods:The eye secretion was collected from 25 newborns who were out-and in-patients with much eye secretion and smeared respectively.These smears were stained with TF staining method,and then looked for gonococcus under microscope.The illegimate sexual act of parents and some related sanitations were investigated respectively at the same time.Results:Five of 25 newborns were diagnosed as gonococcal ophthalmia,which agreed with the illegimate sexual act of their parents(unilateral father or mother or both father and mother).The sick newborns with gonococcal ophthalmia were treated in time,and all were cured and discharge.Conclusion:Combined with the related illness of parents(especially illegimate sexual act),the TF staining method could rapidly examine gonococcus in eye secretion of newborn.So it is suggested that the TF staining method possessed a stronger utilized value in the diagnosis of gonococcal ophthalmia in newborn.

【Key words】TF staining method；Fast diagnosis；Treatment；Gonococcal ophthalmia

淋病是最常见的性病之一，在小儿淋病中以新生儿淋菌性眼炎和淋菌性外阴阴道炎较多见，尤其是孕妇感染淋球菌后，增加了母婴传播的机会，可因分娩将产道的淋菌直接传染给所生的新生儿，引起眼炎。表现为眼分泌物增多并呈脓性外观，眼结膜充血、水肿，不易睁眼。由于淋球菌培养时间较长，而用涂片检查，方法简便、有效并有一定的特异性[1]；为探讨一种新的淋菌涂片快速染色方法，特选用了喻强建立的用途广泛的TF染色法[2～5]，先后对25例有眼分泌物增多的新生儿做淋菌染色检查，共检出5例，并结合患儿家长的病史（均有婚外）将5例诊断为新生儿淋菌性眼炎，现予介绍。

1 资料和方法

1.1 临床病例：先后选择25例眼分泌物增多的新生儿，其中门诊就诊16例，住院患儿9例（剖宫产2例，自然分娩7例），其日龄均在3～22天之间。

1.2 染色液的配制：选用TFM液[2]的配制方法，配制后置一尖嘴的塑料小瓶中保存（容量在10～15 ml即可），放置时间长时应注意及时校正或更换。

1.3 染色步骤：用无菌棉签浸入生理盐水后再采取新生儿眼分泌物，涂片后待干，滴加1～3滴TFM液，染数秒钟（待染液稍转红即可），背面式冲片，待干（背式烘干也可，但温度不宜高），中性树胶封片再置显微镜下观察。

2 结果

经TF染色后的标本，细胞着色鲜明，淋菌染成淡蓝色，有时稍偏紫，有些细胞内含10余对至几十余对双球菌，两菌接触面平坦或稍凹，呈肾形或卵圆形（菌体的大小与形态符合淋菌的特征）；在受检的25例标本中，检出5例淋菌标本（其中门诊1例，住院4例），为了对照研究，又将这5例眼分泌物拭子再次涂片，用革兰染色，结果均检出革兰阴性细胞内双球菌，同时结合该5例患儿的家长病史（均有婚外），将这5例诊断为新生儿淋菌性眼炎，并及时给予了治疗，均治愈出院。

3 讨论

淋菌对人体的黏膜有特殊的亲和力，即使完整的黏膜也可发生感染，孕妇患淋病后，新生儿于产道分娩时易感染淋菌性眼炎，如不及时诊断和治疗则会导致失明。轻症或无症状的淋病患者是重要的传染源，有资料表明，临床上有5%～20%的男性和60%的女性感染后无明显症状，由于新生儿淋菌性眼炎可扩散发展，如脓尿、咽炎、头皮化脓、败血症、圣克莱尔病和播散性淋球菌感染[7]，因此当新生儿在生后48小时出现眼分泌物多，呈脓性外观，眼结膜充血、水肿时应引起高度注意，有条件的单位可取两份标本，一份快速染色检查，一份做细菌培养。有文献提示[6]，在取分泌物标本到实验室培养之后开始凭经验治疗，而不是等待结果。

在染色检查中，一般常用革兰染色或美蓝染色，急性淋病的诊断标准为见到“细胞内革兰阴性双球菌”，而脓细胞中常可含有1至数对，当典型的细胞内革兰阴性双球菌在分泌物涂片中找到时，也可初步诊断并进行治疗。本研究之所以选用TF染色法，是因该法具有用途广泛，操作简便，可重复染色并且涂片中的有形成分着色鲜明等特点[6，7]，尤其是染色时间易掌握（只要滴在标本上的染液稍转红即可）和同一标本可直接重复染色的优点是革兰染色、美蓝染色和姬姆萨染色所不具备的。在快速诊断新生儿淋菌性眼炎时有一个值得重视的问题，这就是患儿家长的病史采集（主要是指婚外），尤其是男方有婚外，而女方不知情的情况下，要追问病史并注意方法，及时诊断轻症或无症状的淋病患者，并对配偶及同时治疗，是避免重复感染的有效办法。由于耐药菌株的出现，新生儿淋菌性眼炎最好住院治疗，以便观察治疗效果（并做眼分泌物涂片染色监测），必要时可请眼科会诊。

有专家认为，预防新生儿淋菌性眼炎最有效的方法是对感染的孕妇给予产前治疗，新生儿生后1小时内给予0.5%的红霉素膏涂眼，最好应用一次性药（膏）水，但眼药水预防新生儿淋菌性眼炎的有效率尚未肯定，并且无法清除鼻咽部的菌群[7]。值得注意的是，在开始静脉应用抗生素治疗的最初24小时内隔离新生儿，由于分泌物有很强的传染性，要遵循严格的洗手技术，还要立即用无菌等张生理盐水冲洗双眼（每1～2小时1次）直至洗净；当使用推荐的抗生素进行全身治疗时，不必再应用局部抗生素治疗[6]。

总之，通过上述临床应用研究结果表明，在快速诊断新生儿淋菌性眼炎时，TF染色具有较强的实用价值，而新生儿淋菌性眼炎的快速诊断和及时治疗对减少其并发症以及该病的预后均起重要作用。

参考文献：

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[6] 魏克伦，杨于嘉.新生儿手册[M].第五版.第一版.长沙：湖南科学技术出版社，2006.270.

篇5

关键词：骨髓检验报告；教学方法；探讨

【中图分类号】G640

骨髓检验报告的书写是医学检验专业学生《血液学检验》课程中非常重要的内容之一，在常见贫血、白血病等血液病的诊断、协助诊断和疗效观察过程中，临床医师需要反复抽取患者的骨髓送血液科进行骨髓检查，每次检查后检验医师都要填写骨髓检验报告，供临床医师诊断疾病，观察疗效，直到患者病情完全缓解出院为止。因此，骨髓检验报告单的填写质量要求非常高，一份良好的骨髓检验报告单是骨髓细胞特征的全部再现，是检验医师骨髓检验技术和对临床资料综合分析能力的高度体现，检验医师不仅需要较强的识别骨髓细胞形态的能力，写一份合格的骨髓检验报告更重要。学生在学习过程中，对骨髓检验报告的书写常感到非常困难，为了上好这一课，笔者在多年的教学过程中，积极探索，结合学生实际与临床实际，对骨髓检验报告单的书写探索出了一套较好的教学方法，能使学生在较短的教学时间里写好一份骨髓检验报告，并让学生通过骨髓检验报告单的书写，全面熟悉、掌握贫血及白血病等常见血液病的血象及骨髓象特征，学会分析骨髓象，掌握相关骨髓检验技术，并正确为常见血液病下诊断。现将教学方法交流如下。

1.总结出一套骨髓检验报告基本书写模板，要求学生根据所检验的血液病的血象和骨髓象特征，按照模板认真填写

根据教材及临床实际，骨髓检验报告单的书写具有一定规律，但对初学者学生来说，要写好一份骨髓检验报告单确是一件非常困难的事，为了让学生在课时数少的情况下尽快掌握书写技巧，笔者为学生总结出了一套骨髓检验报告单书写基本模板，供学生参考，要求学生按照模板要求认真分析骨髓象，填写不缺项。这样做可以帮助学生理清思路，有计划、有条理地去分析骨髓象，书写报告单，减少了学生走弯路的时间。

1.1一般情况下骨髓象书写基本格式

①取材满意、涂片染色良好。

②骨髓有核细胞增生程度，粒红比值。

③粒系细胞增生程度，所占比值，以哪1-2阶段的细胞为主，各阶段细胞形态特征。

④红系细胞增生程度，所占比值，以哪1-2阶段的细胞为主，各阶段细胞形态特征。成熟红细胞形态特点。

⑤淋巴细胞及单核细胞比值、形态特征。

⑥全片见到巨核细胞多少个，以哪1-2阶段细胞为主，各阶段细胞形态特点。血小板分布及形态特点。

⑦全片未见寄生虫及其他异常细胞。

1.2常见贫血的骨髓象书写格式

在报告基本格式的基础上，把“4、与3、”对换位置，并要求学生要特别重点描述幼红细胞形态改变，以及成熟红细胞形态改变特点，因为不同的贫血，幼红细胞和成熟红细胞形态都会出现不同的形态改变，这样有助于贫血的分类和诊断。

1.3常见白血病的骨髓象书写格式

在报告基本格式的基础上，根据白血病发生在哪个系，就将哪个系的白血病细胞改变情况放在第3条描写，第2条不用填写粒红比值，未发生白血病改变的其他系细胞受抑制。

例如，急性淋巴细胞白血病L1书写格式：

①取材满意、涂片染色良好。

②骨髓有核细胞增生极度活跃。

③淋巴系细胞增生极度活跃，以原始淋巴细胞为主，占65%，幼稚淋巴细胞占29%，原始淋巴细胞和幼稚淋巴细胞以小细胞为主，大小较一致，核型规则，细胞核染色质较粗，核仁1-2个，不太清楚，胞浆量少，退化细胞较多。

④红系及粒系细胞受抑制，细胞形态基本正常。

⑤全片见巨核细胞2个，血小板少见，形态基本正常。

⑥全片未见寄生虫及其他异常细胞。

2.认真批改学生写的骨髓检验报告，找出问题，并及时在课堂上讲评，指导学生及时纠正错误

一般情况下，就算是照着模板写报告，学生前几次所写的报告都会出现不少问题。如，常有一些学生在报告中没有描述成熟红细胞形态特点，血小板分布和形态，出现粒红比值计算结果错误，忽略第一条“取材满意、涂片染色良好”及最后一条“全片未见寄生虫及其他异常细胞”等。也会出现不知怎样描述异常幼红细胞形态特点和白血病细胞形态特点，难下诊断等问题。还会在报告文字描述中用一些口水话，写错字、涂改字等。因此，每次学生交来的骨髓检验报告，笔者都会认真批改，在报告上注明错误的地方，并把正确的答案也批在报告上。然后统计分析学生出现哪些问题，某种问题出现人数有多少等情况。在下一次的课堂上，笔者就会针对学生出现的问题一一讲评，对学生每一次的进步都给予表扬。而且，每一次讲评都做到讲深讲透。

2.1骨髓检验报告中学生问题分析：

2.1.1不填取材满意、涂片染色良好

这一条有的学生会不写，他们认为没必要，但笔者要求一定要写。因为这一条包含的意义在于检验医师应该首先检查临床医师送检的骨髓片是否是成功抽取的骨髓涂片，如果取材满意，才有对骨髓象进行分析的价值。随后检验医师对骨髓涂片要进行瑞特染色，染色良好的片子，骨髓细胞形态才好识别，才能有效分类骨髓细胞。因此，这一条的书写，可提醒学生要重视以上问题，对初学者来说是必须的。

2.1.2粒红比值算错

粒红比值是指检验医师所分类的骨髓细胞中全部粒系细胞数除以全部红系细胞数所得的值，这个值可以反映骨髓中粒系细胞和红系细胞所占比例是否在正常范围，表达方式以正常骨髓粒红比值为例，粒：红=2-4：1，有的同学会写成粒红比值1：2-4，这样一来，意义就完全不同了，一般是学生粗心大意和理解错误的结果，必须给予纠正，并说明道理。

2.1.3漏填成熟红细胞形态特点

成熟红细胞形态变化，在常见贫血的诊断中具有较大意义，不同的贫血，成熟红细胞形态会发生不同的改变。如巨幼细胞性贫血，骨髓象中成熟红细胞大小不均，以大细胞为主，红细胞中央淡染区不明显。因此，要求学生一定要重视成熟红细胞形态描述。

2.1.4漏填血小板分布及形态特点

血小板数量的减少、形态的异常，会影响机体止血和凝血的功能，导致机体组织、器官、粘膜容易出血，或出血不止。如再生障碍性贫血和常见白血病等患者的骨髓中一般会出现不同程度的血小板减少，或形态异常，检验医师对骨髓中血小板分布情况和形态改变的描述，可为临床医师提供患者出血原因，出血程度分析等参考依据，因此也很重要，要求学生不能省略或遗漏。

2.1.5忽略全片未见寄生虫及其他异常细胞

有些寄生虫病如疟疾、弓形虫病等，在骨髓中可发现相应的虫体或寄生虫滋养体等，如果是血液病合并寄生虫感染患者，发现寄生虫就可为临床医师提供有价值的诊断依据。

有些血液病可在骨髓中发现特殊异常细胞及病理细胞，如骨髓癌转移、戈谢病、尼曼匹克病等，如在骨髓中发现异常的癌细胞、特殊形态的戈谢细胞及尼曼匹克细胞，对相应的疾病有绝对的诊断意义。因此，写这一条，更重要的是提醒大家在观察分析骨髓象时要同时注意观察骨髓中是否存在寄生虫，是否存在特殊异常细胞，不管有没有，都要给临床医师一个明确的回答。

2.1.6异常幼红细胞形态特点和白血病细胞形态特点描述不清

出现这个问题主要有两个方面的原因：一是学生识别细胞能力不足，二是没有掌握相关血液病的骨髓象特征，看不出特点，抓不住重点，不知该怎样描述。针对这个问题，笔者便结合相应血液病骨髓象进行认真分析，如典型的缺铁性贫血骨髓象幼红细胞改变特点为，幼红细胞胞体小，胞浆量少，胞浆边缘不整齐、嗜碱性，中晚幼红细胞核染色质浓缩、深染。同时加强骨髓细胞形态学改变投影演示、版图描绘、显微镜下指导，提高学生识别骨髓细胞能力及对血液病骨髓象特征掌握程度。

2.1.7正确下诊断困难

每一份骨髓检验报告都需要下一个诊断意见，为临床医师提出细胞学诊断意见或可供临床参考的意见。骨髓检查诊断疾病的性质一般分为明确诊断、符合诊断、提示性诊断和排出性诊断等，不同的血液病应该以不同的方式下不同的诊断，这需要检验人员具有较高的检验技术、较丰富的临床知识、以及将检验结果与临床资料相结合综合分析的能力。对于初学者学生来说，确实有一定困难。如巨幼细胞性贫血、各种白血病，通过骨髓检查可作出明确性诊断，缺铁性贫血只能做出符合性诊断等。但通过反复实验、修改报告，反复讲解相应血液病的诊断要点后，学生可以基本掌握常见血液病的诊断方法。

2.1.8在报告文字描述中用一些口水话，写错字、涂改字

骨髓检验报告要求内容简明扼要，突出重点，使用书面、专业语言，而且不能有任何涂改痕迹，因此对学生报告中出现口水话、写错字、涂改字等现象，笔者要求一定要改正，要求学生反复书写、反复修改报告，直到满意为止。并将实验报告作为平时成绩，纳入学期考试总成绩。

3.特别讲解常用化学染色在常见血液病的诊断中的重要作用

常用化学染色有过氧化物酶染色（POX）、特异性酯酶染色（SE）、非特异性酯酶染色（α-NAE）及氟化钠抑制实验，铁染色等。如POX、SE和α-NAE及氟化钠抑制实验对常见急性白血病（急性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病）的鉴别具有重要意义；铁染色，对缺铁性贫血诊断具有重要意义等。因此，要求学生在骨髓检验报告单中，做了化学染色的，必须填写化学染色结果。

4.强调血片检查在骨髓检验中的作用

许多血液病不仅骨髓象发生改变，而且血象也有相应改变。如常见急性白血病，不仅骨髓象可见到大量原始、幼稚白血病细胞，血片中也可查到大量一般绝对见不到的异常原始、幼稚细胞。因此，血涂片的检查和描写对血液病的诊断也很重要，学生也需要重视。

骨髓检验报告主要包括以下几部分的内容：骨髓象、血象、细胞化学染色结果、诊断意见及建议。笔者通过以上几个方面的反复教学，学生可在毕业前基本掌握常见血液病的骨髓检验报告书写方法，并正确下诊断，为学生将来服务社会奠定了良好基础。

参考文献：

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［关键词］根尖封闭；Cortisomol糊剂；染料渗入法；微渗漏

根管充填是根管治疗中最重要的一步，其目的是封闭根管系统，尤其是根尖1/3，以防止细菌进入造成根管的再感染。而糊剂的使用是根尖封闭质量的关键［1］。据统计，根管治疗失败有近60%是由于根管封闭不完全造成的［2］。因而研究者一直都在寻找理想的根管充填材料和方法以彻底封闭根管系统。Cortisomol是目前国外常用的一种根管充填材料，现在国内也开始使用，关于其减轻根尖术后的疼痛及对治疗牙髓和根尖周病有较好的疗效［3］已有报导，而其对根尖孔的封闭能力报导较少。本实验通过染料渗入法将Cortisomol糊剂与传统的氧化锌丁香油糊剂对根尖孔的封闭性能作对比研究。

1材料与方法

1.1材料Cortisomol根管糊剂（法国碧蓝公司生产），粉由1.1%醋酸强的松龙盐、多聚甲醛、氧化锌、红色氧化剂及赋形剂等组成，液为丁香油，应用方法为粉液调拌；氧化锌丁香油糊剂（上海齿科材料厂生产），其主要成份为氧化锌和丁香油，使用时两者调拌而成；牙胶尖（广东协禾医药有限公司生产）。

1.2方法

1.2.1样本收集和分组收集离体单根管恒牙44颗，要求牙体完整，牙根长度近似。超声波去除牙面肉芽和结石，10%福尔马林液浸。

1.2.2根管预备和充填将以上所有牙均用金钢砂片于釉牙骨质交界处切除牙冠，拔除根髓后测量并记录根管工作长度（根管口至根尖孔上方1旁mm处的距离），用K型根管锉按常规法清理并扩大根管至40#，3%过氧化氢液和生理盐水交替反复冲洗根管后吸干。采用冷侧压法按测量好的工作长度进行根充，阴性和阳性对照组根管仅充填牙胶尖；A、B组各20颗分别用Cortisomol糊剂和氧化锌丁香油糊剂加牙胶尖充填根管，拍X片证实充填良好后，将以上各牙根管口用磷酸锌粘固粉封闭。

1.2.3染色和微渗漏的测量将以上所有样本置于37℃、100%湿度孵箱内8d，待根充材料凝固后，取出吹干，阳性对照组根面不涂指甲油，阴性对照组为整个牙根包括根尖孔涂布2层指甲油，A、B组为在距离根尖孔2mm以上根面均匀涂布2层指甲油，静置24h。将牙根垂直悬吊浸入6mm深1%亚甲蓝液中浸泡6d，取出牙根，流水洗净吹干，将牙根沿长轴纵形剖开。在带有目微尺的光学显微镜（×50）下，测量染液自根尖孔向冠方渗入的距离（精确到0.01mm），以双侧长度的平均值作为最后测得值并记录。对测量结果通过SPSS统计软件作统计学分析，采用t检验。以上操作均由1人完成。

2结果

阳性对照组染色距离均为6mm以上；阴性对照组染液渗入距离为0；Cortisomol糊剂组平均微渗漏距离为1.21mm；而氧化锌丁香油糊剂组为2.17mm。经均数的显著性t值检验，P<0.01，两组渗漏值有显著性差异。两种根充糊剂的微渗漏结果见表1。

3讨论

根充材料的主要作用是提供根尖封闭，以防止细菌的侵入和细菌产物从根管系统扩散进入到根尖周组织［4］。理想的根充材料应该具有易操作、阻射、体积稳定、不被吸收、对温度不敏感及能粘附于牙本质，无毒，生物相容性好等特点［5］。影响根充材料封闭效能的因素很多，除了与根管壁的清洁度湿度根管预备状况有关外，最重要的因素还是材料的理化性能。临床上选用何种材料作封闭剂，一般是基于材料的封闭性能以及材料的生物相容性两方面考虑。本实验通过国外常用的Cortisomol糊剂与传统的氧化锌丁香油糊剂采用美蓝染色法对其根尖孔的封闭能力进行对比研究。结果阳性对照组美蓝渗入明显，说明亚甲蓝有良好的渗透和染色作用，阴性对照组无美蓝渗入，表明本实验所用保护剂封闭能力良好，从而保证该实验的可靠性。超级秘书网

Cortisomol糊剂与氧化锌丁香油糊剂同属氧化锌类根管封闭剂，已知氧化锌不溶于水，颗粒细小（<200目），流动性好凝固时间长（24h），具有一定的X线阻射力，因而其根尖封闭效能颇佳。它是目前临床应用最广泛的根充糊剂，疗效肯定，以它作对照组对于评价一种新的根充糊剂是合适的。Cortisomol根充材料主要含1.1%醋酸强的松龙盐、多聚甲醛、氧化锌、红色氧化剂及赋形剂，其工作时间为30min，凝固时间2~6h，溶解度≤3%。同国内常用的氧化锌丁香油糊剂相比，主要增加了醋酸强的松龙盐和赋形剂成份。醋酸强的松龙为糖皮质类激素，根管内用药可减轻根充术后根尖周围的肿胀和疼痛；多聚甲醛可使根尖残留的牙髓组织干燥硬化和消毒根管；红色氧化剂便于清楚操作；而其赋形剂可增强糊剂与根管壁的粘附，从而增强糊剂封闭根尖孔的能力。Cortisomol根管糊剂不可吸收，吸水性小，能长期固定在根管中［7］，也可防止因微渗漏引起的根尖周炎的复发。从以上两组实验结果也说明了Cortisomol糊剂对根尖孔的封闭性能优于氧化锌丁香油糊剂。可见Cortisomol这种新型的根管糊剂具有止痛、根管消毒、减轻炎症反应［7］和根管封闭性能好等多种作用，是一种较理想的根管充填剂。

参考文献

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［5］刘敏川综述，邓惠妹审校.根管充填方法的现状述评［J］.国外医学，1995，22（5）∶285

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【论文摘要】近年来分子生物学技术以及其它高、新技术在病理领域得到广泛的应用，同样作为体育界的基础研究学科运动人体科学的发展已经不能满足简单的宏观的研究，越来越多的医学检验以及病理学实验技术在运动人体科学广泛应用，尤其是组织病理学技术中定位技术，例如免疫组化、原位杂交等。本文就以上三种病理学常用的定位技术的方法进行综述。

1免疫组织化学实验技术

随着免疫组织化学染色技术的广泛应用，病理学研究产生了划时代的飞跃。免疫组织化学是病理学实验中常用的方法，是在蛋白质水平用各种特异性抗体检测细胞内各种抗原物质。根据标记物的不同，免疫组织化学技术可分为免疫荧光细胞化学技术、免疫酶细胞化学技术、免疫铁蛋白技术、免疫金-银细胞化学技术、亲和免疫细胞化学技术、免疫电子显微镜技术等。

1.1免疫组织化学实验步骤免疫组化技术是在组织化学的方法上结合免疫学的理论和技术发展起来的一门新技术。其原理是利用免疫学的核心——抗原体特异性结合的原理，用标记抗体追踪抗原，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等显示一定的颜色，并借助显微镜、荧光显微镜、电镜对其颜色进行观察，以达到检测抗原物的目的[1]。

1.2免疫组化技术的优点免疫组化技术的优点：①特异性强，免疫组化中抗体与组织细胞中的抗原的结合是特异的。如白细胞共同抗原（LCA）显示淋巴细胞成分。②敏感性高，而今，由于抗生物素—生物素（ABC）法和链酶素—过氧化物酶连接（SP）法的出现，使抗体的稀释度(代表敏感度)达到了上千、上万，甚至上亿倍，使免疫组化技术更加可靠。③定位准确，由于抗原抗体的结合是特异的，因而免疫组化技术可在组织和细胞内准确定位，对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，将形态与功能相结合，对疾病进行深入的研究。

2原位杂交实验技术

原位杂交是将组织化学与分子生物学技术结合来检测合定位核酸的技术。它是用一段已知序列的核苷酸片断来检测细胞内是否存在欲检测物质的DNA或RNA，是比免疫组化更加灵敏而深入一个层次的检验方法。根据所选探针和待测靶序列的不同，核酸原位杂交有DNA-DNA杂交、DNA-RNA杂交、RNA-RNA杂交等。

2.1原位杂交技术的应用原位杂交由于不需要从待测组织中提取核酸，可完好的保存组织、细胞的形态结构，将形态学与基因功能活动的变化相结合进行多层面的研究。主要应用：①细胞特异性mRNA转录的定位可用于基因图谱、基因表达和基因组进化的研究；②感染组织病毒DNA/RNA的检测和定位；③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的监测；④基因在染色体上的定位；⑤检测染色体的变化；⑥间期细胞遗传学的研究。

2.2原位杂交技术与免疫组化的比较

2.2.1两者的区别原位杂交与免疫组化染色技术相比较，这两种方法的共同之处均具有定位检测的功能，且均有较高的敏感性和特异性，所不同的是免疫组化染色是用的是抗体，其检测对象是抗原，机制是抗原-抗体的特异性结合，是蛋白质表达水平的检测；原位杂交使用的是探针，遵循碱基互补配对的原则与待测靶序列结合，是DNA或mRNA水平的检测。从实验方法来看，免疫组化染色操作相对简单，成本相对较低，受外界因素的影响相对小；原位杂交技术无论从实验设计上，还是从实际操作上均较免疫组化染色复杂，成本的高低与试剂的种类和来源密切相关。一般而言，直接选用商品化的标记探测和检测试剂盒的实验成本较高；荧光标记探针较非荧光标记探针的成本高，对样本及实验条件的要求较高，也更容易受到外界因素的影响。

2.2.2免疫组化与原位杂交双标技术双标技术是在同一张组织切片上标记两种不同的抗体或同时应用两种不同的检测手段，如免疫组化和原位杂交技术，在不同层次来检测同一细胞上某些物质的表达是否有相关性的一种实验方法。与传统的单项检测相比，双标记具有无可比拟的优越性，可以克服由于切片间各种差异而引起的时间或空间的样本误差。实验方法上先进行原位杂交会减少免疫组化过程中对待测DNA或RNA的破坏或影响，一般目前均推荐先进行原位杂交后进行免疫组化标记[2，3]。具体的操作跟单纯的免疫组化和原位杂交各自的方法一致。需要注意的问题就是：①所用的实验设备必须经DEPC水浸泡或200℃烤箱过夜，操作时须带口罩及手套；②当杂交步骤完成后，切片必须认真浸泡及长时间洗涤至少超过30min。③作免疫组化的各步骤时间均须适当延长，以增加抗原抗体间的结合，杨青春等人研究发现每个步骤均延长2～3倍时间。④免疫组化显色后不需要用苏木精复染，以免遮盖核信号。

参考文献

[1]纪小龙，施作霖.诊断免疫组织化学[M].北京：军事医学科学出版社，1997.5.

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【关键词】 胃癌；癌前病变；诊断；染色内镜检查；胃镜

胃癌（gastric carcinoma）是最常见的消化系统恶性肿瘤， 在我国恶性肿瘤中排第二位[1]。我国新发胃癌病例占全球新发病例的40%以上， 并且大部分已处于进展期， 手术及化疗效果不佳[2]。因此早期诊断胃癌及癌前病变具有重要的临床意义， 胃镜检查在确定早期胃癌及癌前病变中具有重要价值。近年来随着内镜技术的普及和各种内镜下方法的开展， 内镜已经成为诊断消化道肿瘤的首选方法， 电子染色内镜是近年来发明的内镜方法， 为了探讨电子染色内镜下诊断胃癌及癌前期病变的临床价值， 作者经过多年临床研究， 取得了满意的结果， 现总结报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取2012年1月～2014年1月在本院进行诊治的内镜下黏膜异常的240例检查者。纳入标准：①所有检查者均进行胃镜活检；②检查前未行放化疗和免疫治疗；③自愿纳入本研究者 。观察组108例予以染色后活检，对照组132例单纯活检。观察组108例中男70例， 女38例；年龄32～80岁， 平均年龄（55.48±12.39）岁。对照组132例中男79例， 女53例；年龄33～81岁， 平均年龄（56.79±11.45）岁。两组检查者的性别、年龄等一般资料差异无统计学差异（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 两组检查者均进行常规胃镜的准备与操作， 检查前常规用咽部、一般情况告知、摆放， 检查前除准备常规胃镜下治疗器械外， 需禁食水6 h。完善血常规、血型、出凝血时间、肝肾功能等治疗。麻醉前麻醉师、内镜操作医师、护理人员均需要详细了解病史， 注意有无禁忌证及物过敏史。有休克症状者检查前纠正休克。测量血压、脉搏、呼吸， 发现异常及时处理。如有假牙应取下， 以防窒息[5]。插镜过程中保持患者头部位置不动， 应密切观察检查者的反应， 当胃镜到达咽喉部时， 嘱患者做吞咽动作， 以助胃镜通过咽喉部， 但不可将唾液咽下， 以免呛咳， 如有呛咳， 说明可能有唾液流入气管， 应将患者的左嘴角轻轻下压， 协助患者将唾液排出。当检查者出现恶心不适时， 应告知检查者深呼吸， 放松全身肌肉。观察组用清水将病变部位及周围胃黏膜冲洗干净后，经活检孔插入喷洒管，将配制的0.5%卢戈氏靛胭液均匀喷洒于病变黏膜，0.5 h后，于着色区域行胃黏膜活检并进行病理组织学检查。对照组直接钳取胃黏膜行活检。

2 结果

观察组108例检查者中， 病检证实有肠上皮化生46例，不典型增生30例，早期胃癌8例（均经手术及术后标本病理检查证实限于黏膜层且无淋巴结转移）。对照组检查者中，病变组织病理检查显示：肠上皮化生34例，不典型增生20例，未检出早期胃癌。观察组癌前病变和早期胃癌共检出84例，检出率77.78%（84/108）；对照组癌前病变和早期胃癌共检出54例，检出率40.91%（54/132）。统计学检验差异有统计学意义（P

3 讨论

胃癌是消化系统最常见恶性肿瘤， 在恶性肿瘤中排第二位， 病死率排第三位， 大部分患者发现胃癌并采取治疗措施时已经处于晚期状态， 治疗效果不佳。目前， 胃癌的治疗是以手术为主、放化疗等治疗为辅的综合治疗， 虽然随着医疗技术的发展， 胃癌的手术切除率不断得到提高， 但是其术后复发率高、死亡率仍然是医生经常面临的问题[3]。因此如何采取积极的措施早期诊断胃癌及癌前病变具有深远的意义。

内镜是近代医学史中一种重要的诊断和治疗器械。随着科技的进步， 内镜已从原来单一的诊断功能发展到借助高频电刀、氩气、微波、激光等手段来摘除、电凝人体的赘生物以及直接进入腔内止血等为目的的治疗性内镜。目前外科正逐步形成以内镜为治疗工具的“微创外科学”[4]。

胃镜检查是临床常用的检查手术， 胃镜诊疗技术目的通过胃镜检查直视胃部疾病， 以确定病变的部位及性质， 取活体组织检查以协助诊断。临床适应证包括上消化道症状， 需做检查以确诊者；不明原因上消化道出血者；疑上消化道肿瘤者；需随诊的病变， 如溃疡病、萎缩性胃炎、息肉病等。但临床操作中也要注意禁忌证， 比如有严重心脏病、严重肺部疾病、上消化道大出血生命体征不稳者、精神不正常不能配合检查者、咽部急性炎症者、明显主动脉瘤、腐蚀性食管炎急性期或者疑有胃肠穿孔者[5]。

本研究采用电子染色内镜检查作为观察组研究方式， 此方法是通过内镜将色素喷洒在胃黏膜上， 作内镜检查， 称染色内镜， 通过本研究发现， 观察组癌前病变和早期胃癌共检出84例，检出率77.78%（84/108）；对照组癌前病变和早期胃癌共检出54例，检出率40.90%（54/132）。统计学检验差异有统计学意义（P

综上所述， 尽管染色内镜可很大程度上提高早期胃癌和胃黏膜不典型增生的诊断率， 但常规活检因取材部位及深度等原因， 还是有一定的漏诊率， 黏膜下层的整个病灶， 并进行病理学检查， 弥补了常规活检的不足， 减少漏诊率。因此， 对于有经验内镜医师诊断的早期胃癌， 进行染色内镜并行完整病理活检对于诊断早期胃癌有重要意义。

参考文献

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关键词：胸腹水沉渣石蜡包埋；免疫组化；诊断

胸腹水是临床上一种常见的并发症，临床上对其进行诊断时往往采用体液细胞学检测法，但这种检测方法的诊断率相对较低。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取于2013年9月～2015年9月我院各个科室送检的胸腹水标本共260例。其中，患者的年龄41～79岁，平均年龄（56.67±3.29）岁。依据患者的临床资料与标本的镜下形态选取恶性及存在恶性倾向的体液标本共56例。

1.2方法

1.2.1切片制作方法 将选取的56例标本进行离心，然后舍弃上清液，吸取沉淀物后，将其制作成1张液基细胞涂片，采用滤纸将剩余的沉淀物进行包埋，包埋完成后进行组织学标号，并将其与组织标本放置于脱水机中，按照组织标本的制作方法对其进行固定、脱水、透明以及浸蜡，制成石蜡组织块后，再将其制成3～4μm的切片。

1.2.2免疫组化染色方法 检测方法使用Elivision法，抗体采用CEA、CK-H以及CKlow等，试剂采用福州迈新生物技术有限公司生产。染色方法具体如下：首先，将切片进行常规脱蜡至水，洗液采用PBS。然后，滴入3%的过氧化氢，于常温下将其放置10min，并依据相关要求进行抗原修复操作，再滴入一抗，将其放置于4℃的冰箱中过夜。最后，向其滴入二抗，DAB显色后，再采用苏木素进行复染，并用盐酸乙醇对其进行分化，并将切片脱水、封片。

1.3评价指标 阳性的评判标准主要包括三种，分别是：①CEA、D2-40以及Tg等部分肿瘤细胞的细胞质着色；②CK-H、CKlow、Calretin以及CA125肿瘤细胞的细胞膜着色；③Ki-67、TTF-1肿瘤细胞的细胞核着色。

1.4统计学方法 采取统计学软件SPSS19.0对上述数据处理，计数采取率（%），组间率对比采取χ2检验，对比以P

2 结果

2.1两种方法检测胸腹水的检出率比较分析 沉渣石蜡包埋联合免疫组化检测法检出的阳性率为82.1%，高于液基细胞学检测法，组间比较有差异（P

2.2免疫组化检测法结果分析 沉渣石蜡包埋联合免疫组化检测法检出的46例患者中，其中，表现为肺腺癌的患者共21例，表现为鳞癌的患者共10例，表现为卵巢癌的患者共4例，表现为胃腺癌的患者共9例，表现为间皮瘤的患者共2例。见表2。

3 讨论

胸腹水脱落细胞学检查是临床上一种常用的检测方法，该方法具有简便、准确性高等特点，是临床上诊断良恶性胸腹水的一种常用方法[1]。近几年，随着检测技术的不断发展，膜式超薄液基细胞学检测技术以及沉渣石蜡包埋法已经广泛应用于胸腹水细胞的涂片中，其中，采用沉渣石蜡包埋法制作切片，不仅可以提升切片的制作数量，保存细胞的完整性，提升临床检出率，同时还能够对其进行免疫组化染色，在此基础上还可以联合使用抗体检测，从而能够对肿瘤细胞进行有效分类[2]。

目前，临床上采用胸腹水脱落细胞学检查时，诊断较为困难的是对间皮细胞与癌细胞的区分，特别是当间皮细胞退化后，由于不具有典型性，更易被误诊[3]。针对较难确诊的患者，可以进一步采用免疫组化联合抗体法进行检查。临床实践中，我们依据单个抗体对不同的肿瘤细胞具有不同的特异性与敏感性的原理，在此基础上，根据胸腹水沉渣石蜡包埋切片的结果选取相应的抗体，进而采用多种抗体进行联合检测[4]。目前，在胸腹水细胞学涂片中，我们常常采用Calretin、CK-H、CEA以及TTF-1四种抗体进行肿瘤的鉴别。其中，Calretin属于一种钙结合蛋白，该物质主要存在于人体的神经元以及其他细胞中，常见于间皮瘤中，而在腺癌中则较少见，因此，该物质可以作为恶性间皮瘤的标志物[5]；CK-H属于一种高分子量的细胞角蛋白，往往在人体皮肤的基底细胞、棘层细胞以及部分前列腺基底细胞等细胞层均有所表达，既可以作为鳞癌与腺癌之间鉴别的标志物，同时还可以作为间皮瘤与腺癌之间鉴别的标志物[6]；CEA主要存在于人体各种腺皮上皮源性肿瘤中，特别是在各种腺癌细胞中广泛存在，其中，该物质在人体的胃肠道腺癌中具有较高的阳性率，而在人体的体腔间皮细胞中则不存在，且在间皮瘤与增生性间皮细胞中呈现为不表达或者是低表达，因此，该物质是腺癌与间皮癌之间鉴别的重要标志[7]；TTF-1主要存在于原发性肺腺癌中，且对其具有较高的敏感性与特异性，因此，该物质可以作为原发性肺腺癌与转移性肺腺癌之间鉴别的标志物，同时该物质对于肺原发性低分化腺癌与鳞癌也具有一定的鉴别价值[8]。临床上采用CKlow、CK-H、CEA以及TTF-1一组抗体联合应用作为鳞癌与腺癌的鉴别，同时还可以作为肿瘤细胞来源于肺脏的依据。Calretin呈现为阳性表达说明患者为间皮瘤间皮增生，但是对其良恶性的具体判断还需依据患者肿瘤细胞的异型性、核分裂数等进行综合判断。CKlow与CK-H均呈现为阴性，但TTF-1呈现为阳性，则应该考虑患者为肺未分化癌。

综上所述，在胸腹水沉渣石蜡包埋中联合应用免疫组化进行检查，能够提升临床检出率，确定肿瘤细胞的来源及其发病部位，为临床治疗提供参考意见。

参考文献：

[1]奉孝荣，陈莉，梁辉，等.胸腹水沉渣切片在脱落细胞学中的作用[J].西部医学，2010，22（7）：1230-1231.

[2]黄金长，张功亮，郭广秀，等.细胞块石蜡包埋及免疫细胞化学染色技术在胸腹水细胞病理学诊断中的应用价值[J].实验与检验医学，2013，31（5）：489-490.

[3]朱利，刘双元，冯君，等.胸腹水沉渣切片对肿瘤细胞诊断的意义[J].临床和实验医学杂志，2011，10（13）：1037，1039.

[4]邢荣格，张晓玲，高远，等.免疫组化联合抗体在胸水析出物诊断中的应用[J].河北医药，2012，34（5）：710-711.

[5]翟辉霞，李文灿.免疫组化联合抗体在胸腹水沉渣石蜡包埋病理诊断中的应用[J].卫生职业教育，2014，32（4）：144-145.

[6]陈学敬，周立娟，曲杨，等.沉渣包埋联合免疫组化在胸水转移性肺腺癌与胸膜恶性间皮瘤鉴别诊断中的应用[J].诊断病理学杂志，2014，21（5）：263-266.

篇10

1资料与方法

1．1方法

1．1．1分离培养hBMSCs在志愿者髂前上棘抽取骨髓10mL。采集的骨髓用生理盐水1∶1稀释，密度为1．077g／L的淋巴细胞分离液2000r／min离心15min，收集白膜层，生理盐水漂洗2次。以含10％FBS的L－DMEM作为完全培养液，以一定密度接种于75mL培养瓶中，置于37℃，5％CO2饱和湿度培养箱内培养，3d后换液去除非贴壁细胞，以后每2～3d换液1次，待细胞达80％融合时，用0．25％胰酶＋0．02％ED－TA消化，以1∶3的比例传代培养。

1．1．2流式检测hBMSCs表型hBMSCs用0．25％胰酶＋0．02％EDTA消化，1000r／min离心5min，生理盐水洗涤，制备成1×106／mL单细胞悬液，分别加入荧光标记的鼠抗人CD34、CD29、CD105抗体，设置空白对照，避光冰育30min，生理盐水洗涤3次后重悬细胞，上流式细胞仪检测。

1．1．3鉴定hBMSCs多向分化潜能以4×103／cm2密度将第3代hBMSCs接种于6孔板，每孔2mL。（1）成脂诱导及鉴定：细胞达到完全融合后4d，实验组加入脂肪诱导液（H－DMEM，10％FCS，0．5mmol／LIBMX，10μg／mL牛胰岛素，0．2mmol／Lindomethacin，1μmol／L地塞米松）诱导3d，再用脂肪保持液（H－DMEM，10μg／mL牛胰岛素，10％FCS）处理1d，循环3次，再用脂肪保持液处理2d。对照组加入含10％FCS的H－DMEM，每3天换液1次。2周后油红O染色鉴定。（2）成骨诱导及鉴定：细胞达到60％～70％融合后，实验组加入成骨细胞诱导液（OS，含1×10－7mol／L地塞米松，10mmol／L甘油磷酸钠，50g／mL维生素C），对照组加入L－DMEM完全培养液，置培养箱中，每2天换液1次，第21天终止诱导。茜素红S染色鉴定。

1．1．4分组处理hBMSCs采用0．25％胰酶＋0．02％EDTA消化hBMSCs，用不同输注液制备单细胞悬液。根据输注液不同分为生理盐水组（9g／L氯化钠注射液）、糖盐组（50g／L葡萄糖氯化钠注射液）、清蛋白组（含5％人血清蛋白的氯化钠注射液）。分别在4℃和25℃温度条件下置于不同时间点（0．5、1．0、2．0、4．0，6．0h）后进行以下检测。（1）取90μL细胞悬液与10μL胎盘蓝混匀，3min内计数活细胞（未染色）和死细胞（染色），测定细胞存活率。（2）另取1×106／mL细胞行流式细胞术检测细胞表型CD34、CD29、CD105。（3）再将不同分组细胞悬液，1000r／min离心5min，采用含10％FBS的L－DMEM作为完全培养液，以1×103／mL密度接种于96孔板，每组设3个复孔，置于37℃，5％CO2饱和湿度培养箱培养7d。采用CCK－8在酶联免疫检测仪上测定450nm各孔波长吸光度（A）值，以时间为横轴，A值为纵轴绘制生长曲线。

1．2统计学处理采用SPSS17．0进行数据分析，结果用x±s表示。采用t检验进行两组均数间比较，采用单因素方差分析进行多组均数间比较，采用LSD最小显著差数法进行均数间两两比较。P＜0．05表示差别有统计学意义。

2结果

2．1hBMSCs形态观察原代hBMSCs贴壁后，呈圆形，散在分布。3d后完全换液，去除未贴壁细胞，可见少量分散短梭形贴壁细胞。第14天时，贴壁细胞融合成单层，细胞排列有明显方向性，呈漩涡状。见图。

2．2hBMSCs的表型流式检测第3代hBMSCs的表型发现，CD105阳性率98．7％，CD29阳性率97．7％，表达率极高；CD34阳性率为2．9％，表达呈阴性。

2．3hBMSCs分化能力鉴定hBMSCs成脂诱导2周后，光学显微镜下可见大量融合成串珠状的圆形脂滴。油红O染色可见被染成橙红色的脂滴，显示分离的hBMSCs可被诱导向脂肪细胞分化。成骨诱导3周，细胞逐渐融合，失去细胞结构，14d左右出现明显钙结节，茜素红S染色后可见散在大量橘红色钙结节，显示培养的hBMSCs可被诱导向成骨细胞分化。

2．4hBMSCs存活率检测在5个时间点（0．5、1．0、2．0、4．0、6．0h）对保存在25℃、4℃的3个实验组的细胞存活率检测，结果见表1～2。结果显示，糖盐组细胞存活率最低，25℃保存4．0h时只有约10％细胞存活；而清蛋白组细胞存活率最高，25℃保存2．0h时清蛋白组细胞存活率仍可达90％，差异有统计学意义（P＜0．05）。25℃和4℃条件下，保存0．5h时，生理盐水组及清蛋白组细胞存活率都超过90％，随着保存时间延长，各组细胞存活率逐渐下降。

2．5不同分组细胞表型检测25℃和4℃条件下，在5个时间点（0．5、1．0、2．0、4．0、6．0h）对3个实验组的细胞表型检测，结果见表3～5。结果表明，不同输注液、保存温度及保存时间对细胞表型影响差异无统计学意义（P＞0．05）。

2．6细胞生长曲线测定将不同分组处理后的细胞，采用L－DMEM完全培养液重新接种培养，检测细胞增殖能力，结果见图2（见《国际检验医学杂志》网站“论文附件”）。50g／L葡萄糖氯化钠注射液组保存的细胞增殖能力最差，保存4h后细胞失去贴壁和生长能力（无细胞贴壁无法完成生长曲线）。5％人血清清蛋白氯化钠注射液组细胞增殖能力比9g／L氯化钠注射液组细胞增殖能力强。同一组细胞4℃条件下不同时间点的增殖能力比25℃条件下强。随着保存时间延长，各组细胞增殖能力逐渐下降。

3讨论

hBMSCs是来源于骨髓的间质干细胞，不仅能分化成肝细胞、胆管上皮细胞［4］、血管内皮细胞［5］、不同类型的皮肤细胞［6］、神经样［7］细胞，还具有免疫调节、炎症趋化等特性，使其在肝脏疾病、血管外科、烧伤整形外科及神经损伤等疾病治疗中发挥越来越重要的作用。干细胞注射液从实验室制备到运送至病房回输给患者具有一定时空距离，特别是随着异地移植病例的增多，如何有效地保存干细胞注射液，对于细胞移植的临床应用非常重要。目前相关研究更多集中于将干细胞冷冻于－80℃或液氮等进行长期保存的探讨［8－9］，有关短时保存条件对干细胞生存和生长影响的研究不多。本实验探讨了几种临床常用注射液在不同温度下短时保存干细胞对细胞存活和增殖能力等状况的影响。形态学观察显示，培养的细胞呈均一长梭形，辐射状生长；流式细胞术检测细胞表型显示CD34表达阴性，CD29、CD105表达阳性；成脂诱导后出现大量脂滴，成骨诱导后出现钙结节，表明该细胞确为hBMSCs。