提取物范文10篇

提取物范文篇1

关键词：青翘；提取物；抑菌活性

连翘为木犀科(Oleaceae)连翘属(Forsythia)植物连翘Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果实。连翘药材商品分为“青翘”和“老翘”。果实初熟尚带绿色时采收蒸熟，晒干，习称“青翘”；果实熟透颜色发黄时采收，晒干，习称“老翘”［1］。

连翘是中国临床常用传统中药之一，又名黄花条、连壳、青翘、落翘、黄奇丹等。已有的研究报道表明，连翘种子挥发油对3种真菌有明显的抑制作用，陕西产青翘、老翘和连翘叶均对大肠杆菌和金色葡萄球菌也有较好的抑制作用［2～6］，上述研究报道都没有对连翘的提取物进行系统的抑菌活性研究。本研究首次以山西道地药材青翘作为研究对象，比较其不同极性提取物的抑菌活性，旨在为临床应用连翘提供理论依据。

1材料与仪器

1.1药材青翘200806购自山西省安泽县连翘GAP生产基地，植物标本由山西省药检所郭文菊研究员鉴定，植物标本现存于山西中医学院实验中心。

1.2试剂与菌株金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus、大肠杆菌Escherchiacoli、白色念珠菌Candidaalbicans，均由山西省药品检验所提供。营养琼脂培养基，购自杭州天和微生物试剂有限公司；牛肉膏购自北京市海淀区微生物培养基制品厂，蛋白胨购自北京奥特博星生物技术有限责任公司，庆大霉素细菌药敏试纸购自杭州天和微生物试剂有限公司，所用试剂均为分析纯。

1.3仪器与设备LR4001型旋转蒸发仪（德国Heidolph公司）；CA-111型冷却水循环系统（上海爱郎仪器有限公司）；SHB-88型水循环真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；DHP-9162型电热恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；DSX-280B型手提式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；BBS-DSC型洁净工作台(上海巴艾贝斯科技有限公司)；BS224S-L型电子分析天平（德国Sartorius公司）。

2方法

2.1青翘提取物的制备取青翘1kg，粉碎，用95%乙醇加热至70℃回流提取4次，3h/次，减压浓缩回收溶剂至无醇味，得总提取物320g。总提取物经水悬浮后，用石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇依次萃取，得到的石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇萃取相及萃取后水相提取。取适量各部位浸膏及总浸膏，干燥成粉末，备用。

2.2抑菌活性分析

2.2.1药敏纸片的制备［4］

将普通定性滤纸用打孔机打成若干圆形纸片，直径为6mm，置于干燥洁净的试管内，放入压力蒸气灭菌器中经121℃，20min高压灭菌，干燥。分别取干燥后的不同待试样品0.5，1.0，2.0mg，用合适的溶剂溶解，将滤纸片放入溶液中，反复吸取、晾干，直至将溶液吸干，备用。

2.2.2培养基的制备固体培养基：用天平准确称取36g营养琼脂，加入蒸馏水1000ml，加热并不断搅拌，使琼脂完全溶解。然后放入压力蒸气灭菌器中经121℃，20min高压灭菌，取出趁热倒入经过高压灭菌的培养皿中，厚度约3～5mm,冷却凝固后备用。

液体培养基［7］：用天平准确称取牛肉膏0.3g，蛋白胨1g，氯化钠0.5g，加入蒸馏水100ml，加热并不断搅拌，用1%NaOH溶液调节pH7.2～7.4，然后放入压力蒸气灭菌器中经121℃，20min高压灭菌，分装于试管中，备用。

2.2.3菌悬液的制备用接种环分别取各菌种一环，接种于液体培养基中，放入37℃培养箱中培养24h，用灭菌生理盐水分别稀释至1×10-5CFU/ml浓度，备用。

2.2.4药物抑菌作用测定采用K-B纸片扩散法［8］，用无菌移液管吸取稀释好的菌悬液0.1ml，置于培养基中央，用涂布棒涂布均匀。用无菌镊子夹取含药滤纸片贴在培养基表面，以含药量为10μg的庆大霉素细菌药敏试纸为阳性对照。放入37℃培养箱中培养24h后，观察抑菌圈，并用十字交叉法测量抑菌圈直径,结果以毫米(mm)表示,见表1～3。每种不同含药量的样品对3种菌均做3组平行对照，结果取平均值。

3结果

用青翘不同提取物，以细菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和霉菌白色念珠菌作为指示菌进行抑菌实验。结果见表1～3。表1青翘不同提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌圈活性，表2青翘不同提取物对大肠杆菌的抑菌圈活性，表3青翘不同提取物对白色念珠菌的抑菌圈活性（略）。

从表1看出，除氯仿提取物外，其余各提取物均对金黄色葡萄球菌均有抑制作用，其活性比较：正丁醇提取物﹥醋酸乙酯提取物﹥石油醚提取物≈95%乙醇提取物﹥水提取物。并且，随着纸片含药量的增加，抗菌作用增强。

从表2可知，青翘不同提取物对大肠杆菌均有一定抑制作用。总体来看，氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和95%乙醇提取物对大肠杆菌抗菌活性较强，其次为石油醚提取物。并且，石油醚提取物与95%乙醇提取物在含药量为0.5mg时抗菌活性最强，氯仿提取物在含药量为1.0mg时抗菌活性最强，而其它提取物含药量为2.0mg时抗菌活性最强。这与文献报道的连翘乙醇提取物的浓度与抑菌作用强弱之间并不呈简单的正比关系［6］相一致，提示我们多种成分同时存在时可能仅存在“最适抑菌浓度”。

从表3可知，青翘不同提取物对白色念珠菌均有一定抑制作用。总体来看，醋酸乙酯提取物和正丁醇提取物对白色念珠菌的抑制作用较强，其次为95%乙醇提取物。所有提取物的抗菌作用受含药量改变的影响不大，并且，纸片含药量为0.5mg时，显示出略强的抗菌活性。与青翘提取物对大肠杆菌的抑菌作用一样，说明了浓度与抑菌作用强弱之间并不呈简单的正比关系。

4讨论

本研究表明，青翘不同提取物对3种菌株均表现了不同程度的抑菌作用，抑菌作用的顺序为金黄色葡萄球菌﹥大肠杆菌﹥白色念珠菌。金黄色葡萄球菌是目前引起上呼吸道感染的常见菌，这与中医药认为连翘具有清热解毒功效，以及连翘治疗呼吸道感染的临床应用基本吻合，临床上一些感染性疾病的最终治愈还是依赖清热药的抗病原体作用，因此抗菌是这类药物的主要药理作用［6］。对于金黄色葡萄球菌和白色念珠菌，抑菌活性成分集中于正丁醇和醋酸乙酯提取物中；而对于大肠杆菌，抑菌活性成分集中于醋酸乙酯和氯仿提取物中。这说明青翘中极性较大的成分具有较强的抑菌活性，是其发挥清热解毒功效的物质基础。青翘提取物对大肠杆菌的抑菌作用研究表明，95%乙醇、石油醚与氯仿提取物浓度与抗菌作用强弱之间不呈正比关系，查阅相关资料［5］，推测其原因可能是青翘提取物中的某些极性小的成分提供了菌体生长所需的“营养物质”，或是这些极性小的成分刺激了菌体的生长。由于中药成分的复杂性和各种成分性质的差异性，使药物作用过程和机理更加复杂。因此，以往参照抗生素求最小抑菌浓度(MIC)的方法很难准确地反映青翘的抑菌活性，应该寻求它的“最适抑菌浓度”。

研究结果可以指导青翘中抑菌活性成分的分离纯化，为更好地发挥青翘抗菌作用奠定基础。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005:117.

［2］牛新华，邱世翠，邸大琳，等.连翘体外抑菌作用的研究［J］.时珍国医国药，2002,13(6):342.

［3］杨天鸣，张志海,张虹.连翘水提物抗菌作用的实验研究［J］.兰州医学院学报，2003,29(1):40.

［4］段飞，张双民，杨健雄，等.连翘叶提取物抑菌作用的研究［J］.西北药学杂志，2005，20(2):66.

［5］刘世旺，徐艳霞，郑永良.连翘乙醇提取物对细菌生长曲线的影响［J］.安徽农业科学，2007,35(24):7383.

［6］张恩户，赵子剑，张英，等.连翘及其制剂抗菌效价的生物测定法［J］.中国中医基础医学杂志，2005,11(10):782.

提取物范文篇2

关键词：三七提取物；心血管疾病；三七总皂苷；作用机制

心血管疾病是全球第一大致死疾病，据不完全统计，全球死于心血管疾病病例达到1770万例，占全球病死率的31%左右[1]。一般心血管疾病的发生、发展由心肌缺血、缺氧等原因导致，既往西药治疗可取得一定成效，但长期、大剂量用药存在较多不良反应，整体效果欠佳[2]。近年来，传统中医药治疗心血管疾病的优势明显。三七在我国传统医学领域中应用悠久、广泛，初次记载于《本草纲目》中，别名有金不换、田参、田七等，随着现代医学提取技术的发展，三七含有的皂苷、蛋白氨基酸、黄铜、多糖、无机物、油脂类等生物药理成分，逐渐用于心血管疾病。基于此此，本文旨在对三七提取物在心血管疾病中的应用意义进行综述，分析其药理作用机制，现报道如下。

1冠心病

三七相关或三七提取物（三七总皂苷、三七冠心宁）能增加冠状动脉血流量，改善心肌微循环，纠正心肌组织缺氧缺血，起到显著的抗冠心病效果。李颖慧等[3]通过动物大鼠模型试验，证实三七总皂苷红花提取物复方配伍可纠正心肌缺血，减轻心肌再灌注损伤，并能抑制炎症反应。茹翱等[4]报道指出，给予冠脉介入术后冠心病患者三七粉冲服，可增加患者左心室心排出量、每搏量。董艳等[5]报道指出，三七总皂苷通过对血管内皮生长因子（vascularen-dothelialgrowthfactor，VEGF）、基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinases，MMP）-9、MMP-1等潜在靶基因进行调控，可发挥抗动脉粥样硬化、抗炎作用，减少血管内皮细胞的凋亡数量，保护缺血的心肌组织。因此，三七提取物对冠心病的作用机制主要有：①因冠心病由冠脉血栓形成、斑块破裂堵塞冠脉导致的心肌缺血，三七提取物可抑制机体氧化应激反应，减轻炎症反应，纠正心肌组织的缺血缺氧；②三七提取物通过增加冠脉血流，可加快冠脉微循环，改善心肌缺氧性坏死[6]；③抗血小板是治疗冠心病的基础，三七总皂苷可对血小板聚集产生抑制作用，且与阿司匹林联用，可提高阿司匹林的抗血小板功效，并能保护胃黏膜，减少胃肠道不适感，提高治疗有效性与安全性；后，会造成血管内皮功能损坏，导致内皮细胞凋亡并脱落，或冠脉斑块脱落并堵塞动脉血管，进而导致心肌组织缺血及缺氧。因此，三七提取物可通过降血脂、减轻血液黏稠、减少内皮细胞凋亡数量，起到纠正冠脉缺血、缺氧的作用。

2心律失常

三七及三七提取物可对抗多种实验性心律失常，徐煜凌等[7]证实，三七总甙片可改善慢性心律失常患者心悸心慌、晕厥、气短乏力等症状，并改善慢性心律失常患者的心率。匡荣仁等[8]报道指出，胺碘酮联合三七总皂苷能提高机体窦性心律维持率，降低房颤复发率，减低左心房内径。康玲玲等[9]通过建立动物试验，证实三七及其提取物对房颤有显著治疗作用，其保护机制主要是抑制血清炎症反应，降低心肌组织内MMP-2、细胞间黏附分子-1（in-tercellularadhesionmolecule-1，ICAM-1）表达，从而起到有效的防治作用。贺玥等[10]报道指出，三七总皂苷可对磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol3-kinase，PI3K）-丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（serinethreo-nineproteinkinase，AKT）信号通路产生活化作用，改善心房纤维化；且研究结果显示，干预组大鼠房颤持续时间[（24.3±2.6）s]低于房颤组[（43.2±4.6）s]，有效不应期[（95.0±10.0）s]长于房颤组[（75.5±7.6）s]，差异有统计学意义（P＜0.05）。贾成林等[11]报道认为，三七皂苷可调节心肌组织内miRNAs的表达，改善心房电重构和结构重构。Ma等[12]证实，含有三七制剂可抑制左心室重构，降低快速心律失常的易感性，减少房颤复发。因此，三七提取物通过降低炎症表达及心房内径，可抑制心肌纤维化，起到抗心律失常、抑制房颤复发的作用。

3心力衰竭

心力衰竭发生、发展过程中，心肌重塑是其主要病理生理学基础，心力衰竭会导致心肌细胞结构及细胞功能障碍，造成心肌细胞数量减少和心肌纤维增加[13]。高瑞敏等[14]证实，三七总皂苷可下调心肌组织内磷酸化c-Jun氨基末端激酶（c-JunN-termi-nalkinases，JNK）、磷酸化细胞外信号调节激蛋白表达，降低血清炎症表达，减少心肌细胞的凋亡数量，预防心肌重构，改善心脏功能。Chen等[15]研究证实，三七总皂苷通过调控下游能量代谢相关蛋白表达，增加过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisomeproliferatoractivatedreceptor，PPAR）-α表达，可改善心肌结构，阻断心力衰竭进展。Shao等[16]研究表明，人参皂苷通过改善活性氧诱导的能量代谢功能，增加细胞内三磷酸腺苷表达含量，增强线粒体功能，可改善心肌细胞能量代谢，保护心肌细胞功能，预防心肌损伤。因此，三七提取物治疗心力衰竭时，可通过改善心肌细胞结构，增强心肌细胞功能及心肌细胞结构，改善心肌重塑，控制心力衰竭的进展，提高抗心力衰竭效果。

4高血压

三七与三七提取物均能扩张机体血管，降低血压水平。王磊等[17]证实，复方三七护脉汤可提高血压控制效果。郭瑞友等[18]表明，三七粉可抑制血小板聚集，降低血小板粘附，扩张血管，减少高脂血症，起到降血压的作用。Loh等[19]研究证实，三七活性提取物PN95通过作用于一氧化氮-可溶性鸟苷酸环化酶-环磷酸鸟苷或调节钾离子、电压依赖性钙通道，可舒张血管张力，实现降低血压的目的。因此，三七或三七提取物主要通过降低多种血管收缩物质因子表达含量，调节血管动作电位，发挥舒张血管、降低血压的作用。同时，长期高血压会增加小动脉壁/腔比值，缩窄管腔内径，导致靶器官缺血，三七提取物可通过刺激机体周围血管，调节动脉血流微循环，扩张血管，起到降血压的作用。

5总结与展望

提取物范文篇3

【关键词】开口箭；皂苷；MTT法；细胞毒活性

Abstract：ObjectiveToobservethecytotoxicitiesoftheextractsofTupistrachinensisBak.withinvitrocellculturetechnology,andprovideevidenceforthefurtherresearch.MethodsThecytotoxicitieswereassayedbyMTTmethodsonHL-60andCaskitumorcells.ResultsTheinhibitioneffectoftheextractsofTupistrachinensisBak.,totalsaponins,30%totalsaponinsand70%totalsaponinsonHL-60andCaskicellswereallprominent,comparedwiththenegativemodelgroup(P<0.05).TheirinhibitionratiosonHL-60tumorcellswereasfollows:60.12%,72.25%,89.09%and95.17%，andtheirIC50were65.57,45.07,35.40and22.89μg/ml.TheirinhibitionratiosonCaskicellswere63.94%,71.48%,62.49%and73.43%，andtheirIC50were108.42,84.53,41.02,47.19μg/ml.ConclusionTheextractsofTupistrachinensisBak.havesignificantcytotoxicityonHL-60andCaskitumorcells.

Keywords：TupistrachinensisBak.；Saponin；MTTmethod；Cytotoxicity

开口箭（TupistrachinensisBak.）系百合科Liliaceae铃兰族开口箭属植物，为著名的传统中药，主治劳热咳嗽、跌打损伤、风湿痹痛等症，民间用于治疗咽喉炎、扁桃体炎等。现证明开口箭具有祛痰、抗炎、抑菌及醒酒作用［1，2］。

本实验室通过实验证实湖北省产开口箭含有甾体皂苷和甾体皂苷元,且含量较高［3］。皂苷具有增强免疫功能、抗辐射、抑制肿瘤生长、抗炎、降血糖等广泛的生物学活性,近年越来越受人们的普遍关注。有研究证实开口箭同属植物皂苷成分有细胞毒活性［4，5］。本文旨在通过体外抗肿瘤实验,观察开口箭提取物对HL-60和Caski细胞的细胞毒活性,现报告如下。

1材料

1.1细胞株人急性淋巴细胞性白血病细胞（HL-60）、人宫颈鳞状上皮癌细胞(Caski)均由三峡大学免疫教研室提供。

1.2药品与仪器RPMI-1640为美国GIBCO公司产品；新生小牛血清为杭州四季青生物材料有限公司产品；HEPES为美国Sigma公司产品，胰蛋白酶为美国GIBCO公司产品；四氮唑蓝(MTT)为美国AMRESCO公司产品；丝裂霉素(MMC，浙江海正药液股份有限公司，批号：051211)；酶联免疫检测仪(GENIOSTECAN)；CO2培养箱（日本三洋公司）；LD4-2A离心机(北京医用离心机厂)；96孔板(美国Cornning公司)。

开口箭根茎于2002-07采自湖北省神农架林区，经三峡大学化学与生命科学学院陈发菊副教授鉴定为TupistrachinensisBak.，标本存放于湖北省天然产物研究与利用重点实验室（编号：TC200207SNJ）。

1.3药物制备开口箭根茎粉碎后，用甲醇回流提取3次，合并3次提取液，浓缩后经石油醚脱脂用水饱和的正丁醇萃取，旋转蒸发回收正丁醇，浓缩液抽干后即得到开口箭总皂苷，配成水液，过大孔树脂柱，水洗，30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇梯度洗脱，得开口箭四部分皂苷。

分别取开口箭甲醇提取物、开口箭总皂苷、30%开口箭皂苷、70%开口箭皂苷4个样品，用含10%灭活的新生小牛血清RPMI-1640培养液将其配制成所需浓度，依次为62.5,125,250,500,1000,2000μg/ml。丝裂霉素(MMC)用含10%灭活的新生小牛血清RPMI-1640培养液将其配置为250μg/ml。所有受试样品均用0.22μm微孔滤膜过滤除菌。

2方法

2.1细胞培养HL-60和Caski细胞用RPMI-1640培养液（另加10mmol/LHEPES,2.0mg/mlNaHCO3，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素和10%新生小牛血清），于CO2孵箱中37℃，5%CO2饱和湿度下培养。贴壁细胞用含0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶消化传代。

2.2MTT比色法［6］按Mosmann氏法略加改进。将处于对数生长期的细胞制成单个细胞悬液，调整细胞浓度为0.8×105个/ml,接种于96孔培养板,每孔接种180μl，转板6h后加20μl受试药,另设阴性对照组(不加药)、空白凋零组（只有培养基）和阳性对照组（MMC组），每组均设6个复孔，培养48h后加MTT(5mg/ml)15μl,继续培养4h后,弃去上清液，加DMSO100μl,用全自动酶联免疫检测仪于492nm波长处测定吸光度(OD)值［7］,求出IC50。抑制率（%）=［1-（实验组OD均值-空白组OD均值）/(对照组OD均值-空白组OD均值）］×100%。

2.3统计学处理实验数据以±s表示，数据分析采用SPSS11.5统计软件进行。用Origin软件，通过半对数拟合直线求IC50值。

3结果

3.1开口箭总提取物和总皂苷对HL-60细胞的影响结果见表1。

表1总提取物和总皂苷对HL-60细胞的抑制作用（略）

与阴性对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；n=6

由表1可知开口箭总提取物和总皂苷对HL-60细胞的抑制作用显著，与阴性对照组相比有显著性差异（P<0.05或P<0.01），且呈良好的量效关系,总皂苷的抑制作用强于总提取物。

3.2开口箭30%总皂苷和开口箭70%总皂苷对HL-60细胞的影响结果见表2。

表230%总皂苷和70%总皂苷对HL-60细胞的抑制作用（略）

与阴性对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；n=6

由表2可知开口箭30%总皂苷和70%总皂苷对HL-60细胞的抑制作用显著，与阴性对照组比有显著性差异（P<0.05或P<0.01）。30%总皂苷最佳浓度为25μg/ml，其抑制率达89.09%，70%总皂苷对HL-60细胞的抑制作用虽药物浓度的增加而增大，量效关系明显。

3.3开口箭总提取物和总皂苷对Caski细胞的影响结果见表3。

表3开口箭总提取物和总皂苷对Caski细胞的抑制作用（略）

与阴性对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；n=6

由表3可知开口箭总提取物和总皂苷对Caski细胞抑制作用明显，与阴性对照组比有显著性差异（P<0.05或P<0.01）,呈良好的量效关系，总皂苷的抑制作用强于总提取物。

3.4开口箭30%总皂苷和70%总皂苷对Caski细胞的影响结果见表4。

表430%总皂苷和70%总皂苷对Caski细胞的抑制作用（略）

与阴性对照组比较，**P<0.01；n=6

由表4可知，开口箭30%总皂苷和70%总皂苷对Caski细胞抑制作用显著，与阴性对照组比有显著性差异（P<0.05或P<0.01）,呈现一定的量效关系。

4讨论

以上结果表明，开口箭甲醇提取物、总皂苷、30%皂苷和70%皂苷对体外培养的HL-60和Caski细胞株的抑制作用显著，与阴性对照组比均有显著性差异（P<0.05或P<0.01），其细胞毒作用呈现较明显的剂量依赖性。其中30%开口箭皂苷在25μg/ml时与同浓度下丝裂霉素作用于HL-60细胞的效果相当，70%开口箭皂苷在50μg/ml与丝裂霉素在25μg/ml浓度下作用于HL-60细胞的效果相当。药理实验显示开口箭毒副作用小，因此开发其细胞毒作用有潜在价值。

开口箭总皂苷上大孔树脂柱所得95%开口箭皂苷部分量较少，目前正在研究之中。至于不同的开口箭部位细胞毒活性存在差异，应与它们所含不同皂苷成分有关，还需要对其进行深入研究。

从植物中寻找抗肿瘤药物及抗肿瘤辅助药物，在国内外均为抗肿瘤药物研究的重要组成部分。据文献报道开口箭对HepG2和S180细胞株亦有明显的抑制作用［8］,本实验室发现开口箭对HL-60和Caski细胞有较强的细胞毒作用，可见开口箭具有广谱抗肿瘤作用，此外开口箭还有祛痰抗炎等作用。因此对开口箭的抗肿瘤作用及机制值得进一步研究。

【参考文献】

［1］杨春艳,邹坤,杨兴海,等.开口箭祛痰、抗炎和抑菌实验研究［J］.中国民族民间医药杂志,2005，2:103.

［2］汤子春,邹坤,汪鋆植,等.开口箭与筒鞘蛇菰提取物的醒酒作用的实验研究［J］.时珍国医国药,2006,17(11):2163.

［3］黄丽,廖全斌,邹坤,等.开口箭中甾体皂苷元含量的测定［J］.三峡大学学报·自然科学版,2003,25(6):562.

［4］沈平，王三龙,杨崇仁,等.弯蕊开口箭中的多羟基甾体皂甙元［J］.植物学报,2003,45(5):626.

［5］PanWb,ChangFR,WeiLM,etal.Newflavans,spirostanolsapogenins,andapregnamegeninfromTupistrachinensisandtheircytotoxicity［J］.J.Nat.Prod.,2003,66(2):161.

［6］司徒镇强,吴军正.细胞培养,第1版［M］.西安:世界图书出版公司,2004:199.

提取物范文篇4

关键词：青翘；提取物；抑菌活性

连翘为木犀科(Oleaceae)连翘属(Forsythia)植物连翘Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果实。连翘药材商品分为“青翘”和“老翘”。果实初熟尚带绿色时采收蒸熟，晒干，习称“青翘”；果实熟透颜色发黄时采收，晒干，习称“老翘”［1］。

连翘是中国临床常用传统中药之一，又名黄花条、连壳、青翘、落翘、黄奇丹等。已有的研究报道表明，连翘种子挥发油对3种真菌有明显的抑制作用，陕西产青翘、老翘和连翘叶均对大肠杆菌和金色葡萄球菌也有较好的抑制作用［2～6］，上述研究报道都没有对连翘的提取物进行系统的抑菌活性研究。本研究首次以山西道地药材青翘作为研究对象，比较其不同极性提取物的抑菌活性，旨在为临床应用连翘提供理论依据。

1材料与仪器

1.1药材青翘2008??06购自山西省安泽县连翘GAP生产基地，植物标本由山西省药检所郭文菊研究员鉴定，植物标本现存于山西中医学院实验中心。

1.2试剂与菌株金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus、大肠杆菌Escherchiacoli、白色念珠菌Candidaalbicans，均由山西省药品检验所提供。营养琼脂培养基，购自杭州天和微生物试剂有限公司；牛肉膏购自北京市海淀区微生物培养基制品厂，蛋白胨购自北京奥特博星生物技术有限责任公司，庆大霉素细菌药敏试纸购自杭州天和微生物试剂有限公司，所用试剂均为分析纯。

1.3仪器与设备LR4001型旋转蒸发仪（德国Heidolph公司）；CA-111型冷却水循环系统（上海爱郎仪器有限公司）；SHB-88型水循环真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；DHP-9162型电热恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；DSX-280B型手提式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；BBS-DSC型洁净工作台(上海巴艾贝斯科技有限公司)；BS224S-L型电子分析天平（德国Sartorius公司）。

2方法

2.1青翘提取物的制备取青翘1kg，粉碎，用95%乙醇加热至70℃回流提取4次，3h/次，减压浓缩回收溶剂至无醇味，得总提取物320g。总提取物经水悬浮后，用石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇依次萃取，得到的石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇萃取相及萃取后水相提取。取适量各部位浸膏及总浸膏，干燥成粉末，备用。

2.2抑菌活性分析

2.2.1药敏纸片的制备［4］

将普通定性滤纸用打孔机打成若干圆形纸片，直径为6mm，置于干燥洁净的试管内，放入压力蒸气灭菌器中经121℃，20min高压灭菌，干燥。分别取干燥后的不同待试样品0.5，1.0，2.0mg，用合适的溶剂溶解，将滤纸片放入溶液中，反复吸取、晾干，直至将溶液吸干，备用。

2.2.2培养基的制备固体培养基：用天平准确称取36g营养琼脂，加入蒸馏水1000ml，加热并不断搅拌，使琼脂完全溶解。然后放入压力蒸气灭菌器中经121℃，20min高压灭菌，取出趁热倒入经过高压灭菌的培养皿中，厚度约3～5mm,冷却凝固后备用。

液体培养基［7］：用天平准确称取牛肉膏0.3g，蛋白胨1g，氯化钠0.5g，加入蒸馏水100ml，加热并不断搅拌，用1%NaOH溶液调节pH7.2～7.4，然后放入压力蒸气灭菌器中经121℃，20min高压灭菌，分装于试管中，备用。

2.2.3菌悬液的制备用接种环分别取各菌种一环，接种于液体培养基中，放入37℃培养箱中培养24h，用灭菌生理盐水分别稀释至1×10-5CFU/ml浓度，备用。

2.2.4药物抑菌作用测定采用K-B纸片扩散法［8］，用无菌移液管吸取稀释好的菌悬液0.1ml，置于培养基中央，用涂布棒涂布均匀。用无菌镊子夹取含药滤纸片贴在培养基表面，以含药量为10μg的庆大霉素细菌药敏试纸为阳性对照。放入37℃培养箱中培养24h后，观察抑菌圈，并用十字交叉法测量抑菌圈直径,结果以毫米(mm)表示,见表1～3。每种不同含药量的样品对3种菌均做3组平行对照，结果取平均值。

3结果

用青翘不同提取物，以细菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和霉菌白色念珠菌作为指示菌进行抑菌实验。结果见表1～3。表1青翘不同提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌圈活性，表2青翘不同提取物对大肠杆菌的抑菌圈活性，表3青翘不同提取物对白色念珠菌的抑菌圈活性（略）。

从表1看出，除氯仿提取物外，其余各提取物均对金黄色葡萄球菌均有抑制作用，其活性比较：正丁醇提取物??醋酸乙酯提取物??石油醚提取物≈95%乙醇提取物??水提取物。并且，随着纸片含药量的增加，抗菌作用增强。

从表2可知，青翘不同提取物对大肠杆菌均有一定抑制作用。总体来看，氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和95%乙醇提取物对大肠杆菌抗菌活性较强，其次为石油醚提取物。并且，石油醚提取物与95%乙醇提取物在含药量为0.5mg时抗菌活性最强，氯仿提取物在含药量为1.0mg时抗菌活性最强，而其它提取物含药量为2.0mg时抗菌活性最强。这与文献报道的连翘乙醇提取物的浓度与抑菌作用强弱之间并不呈简单的正比关系［6］相一致，提示我们多种成分同时存在时可能仅存在“最适抑菌浓度”。

从表3可知，青翘不同提取物对白色念珠菌均有一定抑制作用。总体来看，醋酸乙酯提取物和正丁醇提取物对白色念珠菌的抑制作用较强，其次为95%乙醇提取物。所有提取物的抗菌作用受含药量改变的影响不大，并且，纸片含药量为0.5mg时，显示出略强的抗菌活性。与青翘提取物对大肠杆菌的抑菌作用一样，说明了浓度与抑菌作用强弱之间并不呈简单的正比关系。

4讨论

本研究表明，青翘不同提取物对3种菌株均表现了不同程度的抑菌作用，抑菌作用的顺序为金黄色葡萄球菌??大肠杆菌??白色念珠菌。金黄色葡萄球菌是目前引起上呼吸道感染的常见菌，这与中医药认为连翘具有清热解毒功效，以及连翘治疗呼吸道感染的临床应用基本吻合，临床上一些感染性疾病的最终治愈还是依赖清热药的抗病原体作用，因此抗菌是这类药物的主要药理作用［6］。对于金黄色葡萄球菌和白色念珠菌，抑菌活性成分集中于正丁醇和醋酸乙酯提取物中；而对于大肠杆菌，抑菌活性成分集中于醋酸乙酯和氯仿提取物中。这说明青翘中极性较大的成分具有较强的抑菌活性，是其发挥清热解毒功效的物质基础。青翘提取物对大肠杆菌的抑菌作用研究表明，95%乙醇、石油醚与氯仿提取物浓度与抗菌作用强弱之间不呈正比关系，查阅相关资料［5］，推测其原因可能是青翘提取物中的某些极性小的成分提供了菌体生长所需的“营养物质”，或是这些极性小的成分刺激了菌体的生长。由于中药成分的复杂性和各种成分性质的差异性，使药物作用过程和机理更加复杂。因此，以往参照抗生素求最小抑菌浓度(MIC)的方法很难准确地反映青翘的抑菌活性，应该寻求它的“最适抑菌浓度”。

研究结果可以指导青翘中抑菌活性成分的分离纯化，为更好地发挥青翘抗菌作用奠定基础。

参考文献：

［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005:117.

［2］牛新华，邱世翠，邸大琳，等.连翘体外抑菌作用的研究［J］.时珍国医国药，2002,13(6):342.

［3］杨天鸣，张志海,张虹.连翘水提物抗菌作用的实验研究［J］.兰州医学院学报，2003,29(1):40.

［4］段飞，张双民，杨健雄，等.连翘叶提取物抑菌作用的研究［J］.西北药学杂志，2005，20(2):66.

［5］刘世旺，徐艳霞，郑永良.连翘乙醇提取物对细菌生长曲线的影响［J］.安徽农业科学，2007,35(24):7383.

［6］张恩户，赵子剑，张英，等.连翘及其制剂抗菌效价的生物测定法［J］.中国中医基础医学杂志，2005,11(10):782.

提取物范文篇5

国际管理模式可借鉴

广义的中药提取物是指以世界范围内的传统草药为原料，利用现代植物化学提取分离技术，提取分离所获得的、具有明确指标成分的单一组分或混合组分。在国际市场，中药提取物商品形态包括三类：

一是纯度达到％以上的，以单一化合物为检测对象的中药提取物，其结构清楚、药效明确、药理学研究资料全面，属国外药典登载品种或药品专利保护品种，在国内一般称其为天然药物或植物化学药物，如芦丁、甘草酸、紫杉醇等均属此类。

二是经过一定分离如柱层析分离、沉淀分离、萃取分离等分离工艺过程所获得的部分成分较为集中的多组分中药提取物，或有效部位有明确的含量测试指标，被测成分一般为活性成分，含量在％之间，并得到药物学界相对公认的提取物，如银杏黄酮、蓝莓提取物。但由于它们还含有相当的其他成分，对这些未知成分的药理作用并未深入研究，因而，在使用时不断有新的发现。

三是经过水或乙醇提取、未加分离的单一中药浸膏粉或流浸膏，这些浸膏粉有明确的质量控制标准。

上述三种类型的中药提取物在不同国家、不同地区有不同用途和法规管理。

在美国，中药提取物主要有如下用途：第一类天然药物单体化合物，作为治疗性药物或添加剂使用；第二类和第三类多组分的植物提取物只作为健康食品原料或食品添加剂。目前美国正在组织科研机构，对在欧洲已经作为药品管理的一些多组分提取物的品种进行评价，对部分中药品种也已受理。从目前公布的资料来看，今后几年，美国将会完善对这些提取物的管理。

日本是世界上除中国以外，系统地完成了汉方药制剂生产的国家。日本约用年时间完成了汉方药制剂生产的规范化、标准化过程，结果大大提高了汉方药制剂的质量，汉方药制剂的生产得到了很大的发展。汉方药制剂从原来的《一般用汉方药制剂》发展到《医疗用汉方药制剂》，允许在《国民健康保险》中支付有关费用，并开始大规模进入国际医药主流市场。日本政府排除众议，承认汉方药制剂的组方合理性和疗效但仅限于张仲景时代的种中药经典方剂；内服制剂只承认浸膏制剂；日本政府出面组织研究，实行“官、产、学结合”，选择典型的汉方药制剂，从保证稳定的质量要求出发，对生产全过程进行全方位的质量监控研究，总结经验，制定有关规定《汉方》。

德国是进行植物药研究最古老、管理最完善的国家，既有有效的天然单体化合物药物，又有经过分离的多组分天然植物提取物，也有未经过任何分离的草药粉末和草药油脂等多种形式的组分。

目前，中药提取物的使用主要是国际市场，在国内应用还很少。绝大多数中药提取物在国际上的使用主要作为健康食品的原料，只有少数进入了国际医药领域。究其原因，并不是国外对这些中药提取物的药用疗效不认可，而是受法规和使用传统的限制。由于中医理论的复杂和深奥的描述语言使西方医药界无法深入理解，同时很多中药组方过于庞大，也使国外一些大的研究机构望而却步，从而将研究集中在单味中草药的多组分有效部位研究和较小的中药复方的研究上。

标准体系建立是关键

目前，绝大多数的中药提取物没有国家标准或行业标准，但是，生产企业不能没有组织生产的技术依据，商业企业不能没有产品交付的质量标准。因此，在无通用标准的情况下，建立企业标准是必需的。质量研究为标准的建立奠定了基础，相应的技术标准至少应包括“两个标准三个规程”：药材质量标准和提取物质量标准；药材栽培规程、提取物生产工艺规程和检验操作规程。

中药提取物质量研究和技术标准的建立是一个持续的、需要不断完善的过程，技术成熟往往滞后于市场的要求。质量管理的研究表明：在既无技术标准又无质保体系的情况下，是不可能生产出合格产品；有技术标准但无质保体系产品质量也是不稳定的，质保体系是对技术标准的有益补充。因此，对中药提取物生产经营企业来说，建立一个完整的、有效的质量保证体系非常必要。

中药提取物质量保证的重要组成部分是质量研究。因此，中药提取物生产经营的质量保证模式，以采用标准为宜，这样可以有效地防止从研究开发到售后服务等各个环节出现不合格情况。同时，由于中药提取物具有药品的质量特性，应充分借鉴具体的药品管理系列规范，如药材栽培管理规范、药品研究开发管理规范、药品生产管理质量规范、药品经营管理质量规范等。建立一个切实可行、合理的质量保证体系有助于提高企业中每个岗位、每个环节的质量意识，提高中药提取物的质量规范化和质量水平。

产业发展规划不可或缺

政策、法规环境是中药提取物及其技术应用到现代中药企业中的保证。

中药提取物能否应用到中药管理体系中，并将其扩大到传统中药企业是面临的主要问题。从这个意义上讲，国家政策的制定或修订是使中药提取物纳入到现代化的中药产业过程的保证，如果没有国家法规的出台和鼓励，这些先进的植物天然产物生产工艺过程和质量控制办法，进入产业化的整体进程将会延迟。因此建议：

相关部门应组织攻关团队，加强基础研究，组织产、学、研结合，制订中药提取物产业发展规划；

推动中药提取物的标准化进程，使其纳入到中药现代化的主流中去；

国家有关部门在制订产业发展时，应对中药提取物产业给予优惠政策，以推动中药提取物的产业化进程；

加强国际交流与合作，学习国内外一切先进的管理办法和经验，增强中药提取物产业的竞争力。

提取物范文篇6

1.1药物及试剂岗梅水提取物采用水煎法自制，方法为：取适量岗梅，每次用8倍量水煎煮1h，共2次，合并2次水煎煮液，浓缩，备用；阿司匹林片：河北石家庄制药集团生产，批号：041114；乌拉坦：国药集团化学试剂有限公司生产，批号：E60521；二甲苯：广东光华化学厂有限公司生产，批号：20050218；角叉菜胶购自美国Sigma公司,批号：59C-0328；青霉素和链霉素混合液（每毫升含800U青霉素和650U链霉素）。

1.2动物昆明种小鼠，雄性，体质量20～24g，SPF级，由第一军医大学实验动物中心提供，动物合格证号：2004A063号；SD大鼠，雄性，体质量150～180g，清洁级标准，由中山大学实验动物中心提供，动物合格证号：粤检证字2003A070。

1.3仪器大鼠足跖容积测定装置，参照文献［2］方法定制。

1.4方法

1.4.1对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响［2］取昆明种小鼠60只，随机分为正常对照组、模型对照组、岗梅水提取物低、中、高剂量组、阳性对照药物（阿司匹林）组，共6组，每组10只，实验前小鼠禁食不禁水12h，然后各组小鼠按0.1mL/10g体质量灌胃给药，1次/d，共7d，其中正常对照组和模型对照组给等体积蒸馏水。末次给药后30min，除正常对照组外，其余各组小鼠于右耳正反两面涂上二甲苯50μL致炎，致炎1h后脱颈椎处死动物，用直径9mm打孔器冲下左耳和右耳同一部位的圆片，于分析天平上称重，以两耳片重差值为炎症肿胀度。

1.4.2对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀及炎症组织中PGE2（前列腺素E2）的影响［2］取SD大鼠50只，随机分为空白对照组、岗梅水提取物低、中、高剂量组、阳性对照药物（阿司匹林）组，共5组，每组10只。实验前大鼠禁食不禁水12h，然后各组大鼠按1mL/100g体质量灌胃给药，1次/d，共7d，其中空白对照组给等体积蒸馏水。末次给药后1h，先按容积测定方法测量各鼠右踝关节以下容积，然后于各鼠右后足跖皮下注射ρ=1%角叉菜胶0.1mL致炎，分别于致炎后1h、2h、3h、4h时，按原法测量右踝关节以下容积。测完后，颈椎脱臼处死大鼠,于踝关节上0.5cm处剪下炎性肿胀足称重,将以上剪下的致炎足剥皮,剪碎放入5mL生理盐水中浸泡1h后,离心足浸出液,取上清液0.1mL,加0.5mol·L-1KOH-甲醇液2mL,在50℃下异构化20min,用甲醇稀释至5mL,于波长278nm处测定吸光度(A)值,A值的大小反应PGE2的含量。

1.4.3对大鼠棉球肉芽肿的影响［3］取SD大鼠50只，每只大鼠按1g/kg体质量腹腔注射乌拉坦进行麻醉，在各鼠的左右蹊部用碘酒消毒，75%（φ）乙醇脱碘后，各切开1cm长小口，用眼科镊子将已称重为30mg的灭菌脱脂棉球（直径6.5～8.5mm）一个植入皮下，每个棉球加青霉素和链霉素混合液0.3mL，以防感染，随即缝合皮肤。将所有大鼠随机分为空白对照组、岗梅水提取物低、中、高剂量组、阳性对照药物（阿司匹林）组，共5组，每组10只，实验前大鼠禁食不禁水12h，术后2h开始按1mL/100g体质量灌胃给药，其中空白对照组给等体积蒸馏水，1次/d，共7d。在第8天杀死动物，打开原切口，将棉球连同周围结缔组织一起取出，剥出周围已包裹肉芽组织的棉球，剔除脂肪组织，在60℃烘箱放置12h后称重，减去原棉球重量即为肉芽肿净重。

1.4.4对醋酸致小鼠毛细血管通透性增高的影响［3］取昆明种小鼠50只，随机分为空白对照组、岗梅水提取物低、中、高剂量组、阳性对照药物（阿司匹林）组，共5组，每组10只，实验前小鼠禁食不禁水12h，然后各组小鼠按0.1mL/10g体质量灌胃给药，1次/d，共7d，其中空白对照组给等体积蒸馏水。末次给药后1h，各组小鼠尾静脉注射0.5%伊文思蓝生理盐水溶液0.1mL/10g体质量，随即ip0.6%（φ）醋酸0.1mL/10g体质量，20min后,断头放血处死小鼠，腹腔注射6mL生理盐水，轻揉腹部,收集腹腔洗出液，1000r/min离心5min,取上清液用紫外－可见分光光度计于590nm处测吸光度值(A值)。

1.5统计学处理实验数据以±s表示，采用SPSS统计软件进行统计学处理,以P＜0.05为差异有显著性。

2结果

2.1岗梅水提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响岗梅水提取物中、高剂量组的耳重差与模型组比较，差异具有显著性（P<0.01），说明岗梅水提取物能抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀，提示岗梅水提取物对急性炎性肿胀具有抑制作用。见表1。

2.2岗梅水提取物对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀及炎症组织中PGE2含量的影响低、中、高剂量岗梅水提取物对角叉菜胶致炎后1h、2h、3h、4h时大鼠的足跖肿胀及炎症组织中PGE2含量增加均具有明显的抑制作用（P<0.05或0.01），提示岗梅水提取物对急性炎性肿胀具有显著抑制作用。见表2。

2.3岗梅水提取物对大鼠棉球肉芽肿的影响岗梅水提取物低、中、高剂量组的棉球肉芽肿净重与空白对照组比较，差异具有显著性（P<0.05或0.01），说明岗梅水提取物组能明显抑制大鼠棉球肉芽肿的形成，提示岗梅水提取物具有一定的抗炎作用。见表3。

2.4岗梅水提取物对醋酸致小鼠毛细血管通透性增高的影响岗梅水提取物低、中、高剂量组腹腔洗出液的吸光度值与空白对照组比较，差异具有显著性（P<005或0.01），说明岗梅水提取物组能明显抑制醋酸致小鼠毛细血管通透性增高，提示岗梅水提取物对炎性过程中毛细血管通透性增高具有一定的抑制作用。见表4。

表1岗梅水提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响（略）

Tab.1TheeffectsofthewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprellaeonxylene-inducedearedemainmice

与模型对照组比较：**P<0.01；与正常对照组比较：＃P<0.01(t检验）

表2岗梅水提取物对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀及炎症组织中PGE2含量的影响（略）

Tab.2TheeffectsofthewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprellaeonhindpawedemaandPGE2increaseinducedwithcarrageeninrats

与空白对照组比较：*P<0.05；**P<0.01(t检验）

表3岗梅水提取物对大鼠棉球肉芽肿的影响（略）

Tab.3TheeffectsofthewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprellaeongranulomainducedwithcottonballinrats

与空白对照组比较：*P<0.05；**P<0.01(t检验）

表4岗梅水提取物对醋酸致小鼠毛细血管通透性增高的影响（略）

Tab.4TheeffectsofthewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprellaeoncapillarypermeabilityincreaseinducedwithaceticacidinmice

与空白对照组比较：*P<0.05；**P<0.01(t检验）

3讨论

岗梅为两广地区的药材，有清热解毒、生津止渴、利咽消肿、散瘀止痛之功，民间多用于凉茶。关于岗梅现代研究的文献报道较少，化学研究表明：岗梅中含有三帖皂苷、内酯、生物碱、赪酮甾醇、赪酮甾醇3OβD葡萄糖苷、丁香脂素、丁香脂素OβD葡萄糖苷和19去氢乌索酸。现代药理学研究表明：岗梅在体外试验中对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌有抑制作用；可增加豚鼠离体心脏冠脉流量和心收缩力；对垂体后叶素所致家兔急性心肌缺血T波改变有保护作用［1，4］。但与岗梅“清热解毒”功效密切相关的抗炎作用未见系统的研究报道。

炎症是机体活组织在各种损伤刺激下所表现的以防御为主的反应，炎症渗出、组织肿胀是炎症早期的重要指标，在炎症晚期和慢性炎症期，表现为巨噬细胞和成纤维细胞增生，形成肉芽组织［5］。

本研究采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法、角叉菜胶致大鼠足跖肿胀法、大鼠棉球肉芽肿法和醋酸致小鼠毛细血管通透性增高法等经典动物实验方法，考察岗梅水提取物对炎症发生的早期和晚期的影响。结果表明：岗梅水提取物既可抑制炎症早期的水肿和渗出,又可抑制炎症晚期的组织增生和肉芽组织的生成，且能降低局部炎症组织中PGE2含量,提示岗梅水提取物具有显著的抗炎作用，且其抗炎机制之一可能与减少炎症组织中PGE2合成有关。本研究对岗梅清热解毒的功效进行了有益的探索，其实验结果为岗梅及相关凉茶的应用提供了一定的实验依据，但岗梅水提取物抗炎的作用机制及水提取物中发挥抗炎的物质基础尚需进一步研究。

【摘要】目的研究岗梅水提取物的抗炎作用。方法采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法、角叉菜胶致大鼠足跖肿胀法、大鼠棉球肉芽肿法和醋酸致小鼠毛细血管通透性增高法观察岗梅水提取物的抗炎作用。结果岗梅水提取物能明显抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶所致的大鼠足跖肿胀及炎性组织中PGE2的生成，减少大鼠棉球肉芽肿的形成，同时对醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高具有显著抑制作用。结论岗梅水提取物具有明显抗炎作用。

【关键词】岗梅；水提取物；抗炎；大鼠

Abstract:ObjectiveTostudytheanti-inflammatoryactivityofthewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprellae.MethodsThemodelsofxylene-inducedearedemainmice,hindpawedemainducedwithcarrageeninrats,granulomainducedwithcottonballinrats,andcapillarypermeabilityincreaseinducedwithaceticacidinmicewereusedtoobservetheanti-inflammatoryeffects.ResultsThewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprellaecouldinhibitxylene-inducedearedemaandcapillarypermeabilityincreaseinmice,hindpawedemaandPGE2increaseinducedwithcarrageenandgranulomainducedwithcottonballinrats.ConclusionThewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprellaehassignificantanti-inflammatoryeffects.

Keywords:RadixetCaulisIlicisAsprellae；waterextract；antiinflammatory；mice

岗梅是冬青科植物梅叶冬青Ilexasprella(Hook.etArm.)champ.exBenth.的干燥根及茎。其味苦、微甘、性凉。有清热解毒、生津止渴、利咽消肿、散瘀止痛之功,常用于感冒发热、肺热咳嗽、热病津伤口渴等［1］。岗梅主产于两广地区（广东、广西），是多种凉茶中的主要药味，应用较广。但目前尚未见有关岗梅水提取物抗炎作用的系统报道，笔者对岗梅水提取物进行抗炎作用的动物实验研究，报告如下。

【参考文献】

［1］广东省食品药品监督管理局.广东省中药材标准（第一册）［M］.广东：广东科技出版社，2004:111－113.

［2］徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2003:911－914.

［3］陈奇.中药药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1994:71－72.

提取物范文篇7

【关键词】岗梅;水提取物;抗炎;大鼠

Abstract:ObjectiveTostudytheanti-inflammatoryactivityofthewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprellae.MethodsThemodelsofxylene-inducedearedemainmice,hindpawedemainducedwithcarrageeninrats,granulomainducedwithcottonballinrats,andcapillarypermeabilityincreaseinducedwithaceticacidinmicewereusedtoobservetheanti-inflammatoryeffects.ResultsThewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprellaecouldinhibitxylene-inducedearedemaandcapillarypermeabilityincreaseinmice,hindpawedemaandPGE2increaseinducedwithcarrageenandgranulomainducedwithcottonballinrats.ConclusionThewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprellaehassignificantanti-inflammatoryeffects.

Keywords:RadixetCaulisIlicisAsprellae;waterextract;antiinflammatory;mice

岗梅是冬青科植物梅叶冬青Ilexasprella(Hook.etArm.)champ.exBenth.的干燥根及茎。其味苦、微甘、性凉。有清热解毒、生津止渴、利咽消肿、散瘀止痛之功,常用于感冒发热、肺热咳嗽、热病津伤口渴等[1]。岗梅主产于两广地区(广东、广西),是多种凉茶中的主要药味,应用较广。但目前尚未见有关岗梅水提取物抗炎作用的系统报道,笔者对岗梅水提取物进行抗炎作用的动物实验研究,报告如下。

1材料与方法

1.1药物及试剂岗梅水提取物采用水煎法自制,方法为:取适量岗梅,每次用8倍量水煎煮1h,共2次,合并2次水煎煮液,浓缩,备用;阿司匹林片:河北石家庄制药集团生产,批号:041114;乌拉坦:国药集团化学试剂有限公司生产,批号:E60521;二甲苯:广东光华化学厂有限公司生产,批号:20050218;角叉菜胶购自美国Sigma公司,批号:59C-0328;青霉素和链霉素混合液(每毫升含800U青霉素和650U链霉素)。

1.2动物昆明种小鼠,雄性,体质量20~24g,SPF级,由第一军医大学实验动物中心提供,动物合格证号:2004A063号;SD大鼠,雄性,体质量150~180g,清洁级标准,由中山大学实验动物中心提供,动物合格证号:粤检证字2003A070。

1.3仪器大鼠足跖容积测定装置,参照文献[2]方法定制。

1.4方法

1.4.1对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响[2]取昆明种小鼠60只,随机分为正常对照组、模型对照组、岗梅水提取物低、中、高剂量组、阳性对照药物(阿司匹林)组,共6组,每组10只,实验前小鼠禁食不禁水12h,然后各组小鼠按0.1mL/10g体质量灌胃给药,1次/d,共7d,其中正常对照组和模型对照组给等体积蒸馏水。末次给药后30min,除正常对照组外,其余各组小鼠于右耳正反两面涂上二甲苯50μL致炎,致炎1h后脱颈椎处死动物,用直径9mm打孔器冲下左耳和右耳同一部位的圆片,于分析天平上称重,以两耳片重差值为炎症肿胀度。

1.4.2对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀及炎症组织中PGE2(前列腺素E2)的影响[2]取SD大鼠50只,随机分为空白对照组、岗梅水提取物低、中、高剂量组、阳性对照药物(阿司匹林)组,共5组,每组10只。实验前大鼠禁食不禁水12h,然后各组大鼠按1mL/100g体质量灌胃给药,1次/d,共7d,其中空白对照组给等体积蒸馏水。末次给药后1h,先按容积测定方法测量各鼠右踝关节以下容积,然后于各鼠右后足跖皮下注射ρ=1%角叉菜胶0.1mL致炎,分别于致炎后1h、2h、3h、4h时,按原法测量右踝关节以下容积。测完后,颈椎脱臼处死大鼠,于踝关节上0.5cm处剪下炎性肿胀足称重,将以上剪下的致炎足剥皮,剪碎放入5mL生理盐水中浸泡1h后,离心足浸出液,取上清液0.1mL,加0.5mol·L-1KOH-甲醇液2mL,在50℃下异构化20min,用甲醇稀释至5mL,于波长278nm处测定吸光度(A)值,A值的大小反应PGE2的含量。

1.4.3对大鼠棉球肉芽肿的影响[3]取SD大鼠50只,每只大鼠按1g/kg体质量腹腔注射乌拉坦进行麻醉,在各鼠的左右蹊部用碘酒消毒,75%(φ)乙醇脱碘后,各切开1cm长小口,用眼科镊子将已称重为30mg的灭菌脱脂棉球(直径6.5~8.5mm)一个植入皮下,每个棉球加青霉素和链霉素混合液0.3mL,以防感染,随即缝合皮肤。将所有大鼠随机分为空白对照组、岗梅水提取物低、中、高剂量组、阳性对照药物(阿司匹林)组,共5组,每组10只,实验前大鼠禁食不禁水12h,术后2h开始按1mL/100g体质量灌胃给药,其中空白对照组给等体积蒸馏水,1次/d,共7d。在第8天杀死动物,打开原切口,将棉球连同周围结缔组织一起取出,剥出周围已包裹肉芽组织的棉球,剔除脂肪组织,在60℃烘箱放置12h后称重,减去原棉球重量即为肉芽肿净重。

1.4.4对醋酸致小鼠毛细血管通透性增高的影响[3]取昆明种小鼠50只,随机分为空白对照组、岗梅水提取物低、中、高剂量组、阳性对照药物(阿司匹林)组,共5组,每组10只,实验前小鼠禁食不禁水12h,然后各组小鼠按0.1mL/10g体质量灌胃给药,1次/d,共7d,其中空白对照组给等体积蒸馏水。末次给药后1h,各组小鼠尾静脉注射0.5%伊文思蓝生理盐水溶液0.1mL/10g体质量,随即ip0.6%(φ)醋酸0.1mL/10g体质量,20min后,断头放血处死小鼠,腹腔注射6mL生理盐水,轻揉腹部,收集腹腔洗出液,1000r/min离心5min,取上清液用紫外-可见分光光度计于590nm处测吸光度值(A值)。

1.5统计学处理实验数据以±s表示,采用SPSS统计软件进行统计学处理,以P<0.05为差异有显着性。

2结果

2.1岗梅水提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响岗梅水提取物中、高剂量组的耳重差与模型组比较,差异具有显着性(P<0.01),说明岗梅水提取物能抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀,提示岗梅水提取物对急性炎性肿胀具有抑制作用。见表1。

2.2岗梅水提取物对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀及炎症组织中PGE2含量的影响低、中、高剂量岗梅水提取物对角叉菜胶致炎后1h、2h、3h、4h时大鼠的足跖肿胀及炎症组织中PGE2含量增加均具有明显的抑制作用(P<0.05或0.01),提示岗梅水提取物对急性炎性肿胀具有显着抑制作用。见表2。

2.3岗梅水提取物对大鼠棉球肉芽肿的影响岗梅水提取物低、中、高剂量组的棉球肉芽肿净重与空白对照组比较,差异具有显着性(P<0.05或0.01),说明岗梅水提取物组能明显抑制大鼠棉球肉芽肿的形成,提示岗梅水提取物具有一定的抗炎作用。见表3。

2.4岗梅水提取物对醋酸致小鼠毛细血管通透性增高的影响岗梅水提取物低、中、高剂量组腹腔洗出液的吸光度值与空白对照组比较,差异具有显着性(P<005或0.01),说明岗梅水提取物组能明显抑制醋酸致小鼠毛细血管通透性增高,提示岗梅水提取物对炎性过程中毛细血管通透性增高具有一定的抑制作用。见表4。

表1岗梅水提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(略)

Tab.1TheeffectsofthewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprellaeonxylene-inducedearedemainmice

与模型对照组比较:**P<0.01;与正常对照组比较:#P<0.01(t检验)

表2岗梅水提取物对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀及炎症组织中PGE2含量的影响(略)

Tab.2TheeffectsofthewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprellaeonhindpawedemaandPGE2increaseinducedwithcarrageeninrats

与空白对照组比较:*P<0.05;**P<0.01(t检验)

表3岗梅水提取物对大鼠棉球肉芽肿的影响(略)

Tab.3TheeffectsofthewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprellaeongranulomainducedwithcottonballinrats

与空白对照组比较:*P<0.05;**P<0.01(t检验)

表4岗梅水提取物对醋酸致小鼠毛细血管通透性增高的影响(略)

Tab.4TheeffectsofthewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprellaeoncapillarypermeabilityincreaseinducedwithaceticacidinmice

与空白对照组比较:*P<0.05;**P<0.01(t检验)

3讨论

岗梅为两广地区的药材,有清热解毒、生津止渴、利咽消肿、散瘀止痛之功,民间多用于凉茶。关于岗梅现代研究的文献报道较少,化学研究表明:岗梅中含有三帖皂苷、内酯、生物碱、赪酮甾醇、赪酮甾醇3OβD葡萄糖苷、丁香脂素、丁香脂素OβD葡萄糖苷和19去氢乌索酸。现代药理学研究表明:岗梅在体外试验中对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌有抑制作用;可增加豚鼠离体心脏冠脉流量和心收缩力;对垂体后叶素所致家兔急性心肌缺血T波改变有保护作用[1,4]。但与岗梅“清热解毒”功效密切相关的抗炎作用未见系统的研究报道。

炎症是机体活组织在各种损伤刺激下所表现的以防御为主的反应,炎症渗出、组织肿胀是炎症早期的重要指标,在炎症晚期和慢性炎症期,表现为巨噬细胞和成纤维细胞增生,形成肉芽组织[5]。

本研究采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法、角叉菜胶致大鼠足跖肿胀法、大鼠棉球肉芽肿法和醋酸致小鼠毛细血管通透性增高法等经典动物实验方法,考察岗梅水提取物对炎症发生的早期和晚期的影响。结果表明:岗梅水提取物既可抑制炎症早期的水肿和渗出,又可抑制炎症晚期的组织增生和肉芽组织的生成,且能降低局部炎症组织中PGE2含量,提示岗梅水提取物具有显着的抗炎作用,且其抗炎机制之一可能与减少炎症组织中PGE2合成有关。本研究对岗梅清热解毒的功效进行了有益的探索,其实验结果为岗梅及相关凉茶的应用提供了一定的实验依据,但岗梅水提取物抗炎的作用机制及水提取物中发挥抗炎的物质基础尚需进一步研究。

【参考文献】

[1]广东省食品药品监督管理局.广东省中药材标准(第一册)[M].广东:广东科技出版社,2004:111-113.

[2]徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,2003:911-914.

[3]陈奇.中药药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,1994:71-72.

提取物范文篇8

1.1试药肠胃康颗粒剂（海口市制药厂生产，批号060709，规格：每袋袋装8g）；牛耳枫与辣蓼提取物(NLWE)（黑色粉末，自制，每克样品相当于原生药10.0g）；阿司匹林肠溶片（昆明云健制药有限公司生产，批号20060320，规格25mg）；硫酸阿托品注射液（天津药业集团新郑股份有限公司生产，批号0601181，规格：2ml∶1mg）；伊文思蓝（中国医药集团上海试剂公司生产，批号20030714，规格1.0g）；乙酰胆碱（Ach）（上海三爱思试剂有限公司生产，批号20030620，规格：1）；氯化钡（BaCl2）（广州化学试剂厂生产，批号040503-2，规格500g）。

1.2动物昆明种小鼠，体重18~22g，合格证号2006A070；Wistar大鼠，体重180~220g，合格证号2006A07；豚鼠，体重250~300g，合格证号2006A067。以上动物均由中山大学实验动物中心提供。适应环境一周，自由饮水进食。

1.3仪器YLS-6B智能热板仪（山东省医学科学院设备站）；BL-420E生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司）；ZH-Z型离体器官测量系统（安徽省淮北正华生物仪器设备有限公司）；UV22401PC紫外分光光度计(日本岛津)；分析电子天平（北京瑞利，精度0.1mg）。

1.4统计学方法本实验数据结果均以±s表示,剂量资料比较，采用t检验，统计软件为SPSS13.0。

2方法及结果［1，2］

2.1对醋酸致小鼠毛细血管通透性增加的影响实验方法：取50只昆明种小鼠，体重18~20g，雌雄各半，随机分为5组(n=10)，正常对照组：灌胃(ig)给予等容生理盐水；肠胃康颗粒阳性对照组10.0g·kg-1ig；阿司匹林阳性对照组0.2g·kg-1ig；牛耳枫与辣蓼提取物剂量为生药20.0和10.0g·kg-1ig高、低剂量组（以下简称提取物高、低剂量组）。各组动物按0.5ml/20g体重给药，每天分别给药1次,连续给药3d，末次给药后0.5h，各鼠尾静脉注射0.5%伊文思兰盐水溶液0.1ml/10g随即腹腔注射醋酸溶液0.2ml/只，20min后处死动物，轻揉腹部1min吸取4ml冲洗液，于3000r/min离心10min，取上清液于610nm处比色测定吸光度，记录A值，计算抑制率，进行组间比较。结果见表1。

抑制率(%)=(对照组A-给药组A)/对照组A×100%

结果表明：牛耳枫与辣蓼提取物高剂量、提取物低剂量组、阿司匹林组均对醋酸诱导的小鼠腹腔毛细血管通透性增高有显著抑制作用（P<0.01），肠胃康颗粒组对醋酸诱导的小鼠腹腔毛细血管通透性增高无抑制作用。

表1肠胃康颗粒及提取物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响（略）

与正常对照组比较,△P<0.01,△△P>0.05；n=10

2.2对热板所致小鼠疼痛的影响［3］实验方法：筛选痛阈值为5~30s之间的雌性昆明小鼠75只，体重18~20g，随机分成5组（n=15），正常对照组，肠胃康颗粒阳性对照组，阿司匹林阳性对照组，牛耳枫与辣蓼提取物剂量高、低剂量组。各组动物给药方法，给药途径及剂量均同“2.1”项，每天分别给药1次，连续给药3d后，末次给药后15，30，60，90，120min用热板法测量痛阈值。结果见表2。

表2肠胃康颗粒及提取物对热板法所致小鼠疼痛的影响（略）

与自身药前痛阈比较,**P<0.01,*P>0.05

结果表明，正常对照组实验过程中无变化，阿司匹林组90minP<0.05，均值大于自身给药前痛阈值；而其他组，P>0.05或P<0.05但其平均痛阈值均小于自身给药前痛阈值。结果显示，除阿司匹林外，其他组受试药均无镇痛作用。

2.3对离体豚鼠回肠平滑肌的影响［4，5］取豚鼠，按常规法制备离体回肠标本，标本置于18ml盛有台氏液的浴槽中，通氧，(38.0±0.5)℃恒温，张力负荷1g，用记录仪描记运动曲线，平衡30min，稳定后加入0.1ml0.1%Ach，记录收缩高度；随后用台氏液清洗回肠及浴槽两次，5min后注入0.5ml10%牛耳枫与辣蓼提取物高剂量溶液，30s后，再注入0.1%0.1mlAch，记录反应高度，用台氏液清洗浴槽两次，更换回肠，按照以上方法进行多次实验，记录数据作为一组数据值。随后将牛耳枫与辣蓼提取物低剂量溶液0.5ml组、26%肠胃康颗粒溶液0.5ml组及0.05%阿托品0.05ml组，按以上实验同法操作。对0.6ml1%BaCl2组所致豚鼠回肠收缩的影响，亦按上述方法进行实验操作，记录实验结果，进行组间比较，计算抑制率。结果见表3~4。

抑制率（%）=（给药前收缩幅度-给药后收缩幅度）/给药前收缩幅度×100%

表3肠胃康颗粒及提取物对豚鼠回肠平滑肌的作用（略）

与BaCl2比较,*P<0.001;与提取物高剂量组比较,#P>0.05；n=10

表4肠胃康颗粒及提取物对豚鼠回肠平滑肌的作用（略）

与Ach比较,#P>0.05,*P<0.001；n=10

结果表明：肠胃康颗粒、提取物高剂量、提取物低剂量皆对BaCl2引起的肠痉挛有明显的解痉作用（P<0.001），提取物高剂量组、提取物低剂量组作用结果无明显差别（P>0.05），颗粒组亦无明显差别，对乙酰胆碱引起的肠痉挛均无解痉作用。

2.4对乙醇致胃粘膜损伤的作用［6，7］取40只Wistar大鼠随机分为4组(n=10)，雌雄各半,正常对照组，灌胃(ig)给予等容生理盐水；肠胃康颗粒阳性对照组10.0g·kg-1ig；牛耳枫与辣蓼提取物剂量为生药5.0g和10.0g·kg-1ig剂量组。各组动物按2ml/200g体重给药，每天分别给药1次，连续给药3d，禁食48h，最后1次给药后1h灌胃95%乙醇1ml，正常饮水，1h后处死大鼠，结扎贲门和幽门，取出注入5ml生理盐水，于10%甲醛溶液中固定10min，沿胃大弯剪开冲洗观察结果。计算腺胃部出现溃疡点的数目及测量溃疡长度，依据GUTH法计算胃黏膜损伤指数，(每个出血点计1分，糜烂计2分，溃疡长度小于1mm计3分，大于1mm小于2mm计4分，长度在2mm以上计5分)将计分相加即为该只动物的溃疡指数，比较组间差异并计算出溃疡抑制率。结果见表5。

抑制率（%）=（空白对照组溃疡指数-药物治疗组溃疡指数）空白对照组溃疡指数×100%

表5肠胃康颗粒及提取物抗乙醇引起胃粘膜损伤的作用（略）

与正常对照组比较，*P<0.05；与提取物高剂量组比较，#P>0.05；与肠胃康颗粒组比较，△P<0.05；n=10

结果表明，各组与空白组比较均有效（P<0.05），但肠胃康颗粒组效果最好。而且提取物高低剂量组作用结果无明显差别（P>0.05），与肠胃康颗粒比较差别较大（P<0.05）。

3讨论

本实验结果表明，牛耳枫与辣蓼提取物具有降低毛细血管通透性、解痉及抗乙醇引起的胃粘膜损伤作用，但无镇痛作用，可用于急性胃肠炎的治疗。

Ach是胆碱受体激动剂，激动胃肠道平滑肌上的M胆碱受体，可引起平滑肌收缩。阿托品是胆碱受体阻断药，通过阻断M受体而拮抗Ach对平滑肌的收缩作用。离体豚鼠回肠实验结果显示，NLWE对Ach引起的肠痉挛则无解痉作用，提示其无阻断M受体的作用。Ca2+在介导平滑肌收缩反应中起核心作用，平滑肌收缩通过兴奋-收缩偶联过程而实现［8］。BaCl2是通过释放细胞内的Ca2+而引起肠管平滑肌痉挛［9］。NLWE对BaCl2引起的肠痉挛有明显的解痉作用，提示其具有钙拮抗作用。因此，可以推测NLWE是通过拮抗Ca2+而不是通过阻断M胆碱受体来起到解痉作用的。

【参考文献】

［1］姚干，何宗玉，方泰惠.芩栀胶囊抗炎、镇痛和解热作用的实验研究［J］.中成药,2006,28(5):694.

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［4］陈奇.中药药理研究方法学，第一版［M］.北京：人民卫生出版社,2000：442.

［5］陶勇,肖玉秀,石米扬,等.连钱草乙醇提取物对豚鼠离体肠平滑肌和小鼠肠运动功能的影响［J］.中国医院药学杂志,2004,24(2)：65.

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［7］谢秀琼.中药制剂开发与应用［M］.北京：人民卫生出版社,2000：441.

提取物范文篇9

【关键词】金钗石斛/药理学金钗石斛/化学白内障/中药疗法晶状体/病理学器官培养

白内障(cataract)是一种常见的致盲眼病,它是多种因素共同作用的结果,氧化损伤是其发病机制之一[1]。当前许多中药研究都是从提高晶状体抗氧化能力入手,利用抗氧化剂或抗氧化酶激活剂来消除或中和晶状体中的氧化产物,阻止或逆转晶状体变浑浊,从而抑制或延缓白内障的发生发展[2]。石斛是一种名贵中药材,抗白内障是其主治功效之一。已有研究证实,石斛水煎剂可通过改变晶状体相关酶的活性而对D半乳糖性白内障起到防治作用[3],石斛的乙酸乙酯提取物在体外还可抑制醛糖还原酶和过氧化脂质(LPO)的产生[4],这些研究在一定程度上揭示了石斛抗白内障的作用机理。然而,石斛化学成分复杂,其抗白内障的具体有效成分是什么,至今仍未见报道。本实验通过体外培养晶状体,对金钗石斛(DendrobiumnobileLindl.)的粗提物总生物碱(totalalkaloids)和粗多糖(polysaccharides)抗白内障作用进行了探讨,现报道如下。

1材料和方法

1.1动物4~5周龄Wistar大鼠20只,体质量80~120g,雌雄不限,由广州中医药大学实验动物中心提供,合格证号:粤临证字2007A025。

1.2药材和试剂金钗石斛由贵州赤水信天石斛有限公司提供,经广州中医药大学中药鉴定教研室李薇教授鉴定。DMEM低糖培养基(杭州吉诺生物医药技术有限公司);胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司);磷酸盐缓冲液(PBS,福州迈新生物技术开发公司);体积分数30%过氧化氢(H2O2,浙江临安化工二厂);吡诺克辛钠滴眼液(武汉天天明药业有限责任公司,批号:070102);Bradford蛋白质定量试剂盒(上海申能生物科技有限公司);谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)测定试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品;其他试剂均为国产分析纯。

试剂配制如下。改良碘化铋钾试剂:甲液:0.85g次硝酸铋溶于10mL冰醋酸,加水40mL;乙液:8g碘化钾溶于20mL水中;将甲液与乙液等量混合后,取1mL与2mL醋酸混合,供生物碱的显色用。Molish试剂:甲液:α萘酚1g,加体积分数75%乙醇至10mL;乙液:浓硫酸;供多糖的检测用。

1.3仪器E52AA型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);SHZDIII型循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂);BS110S型电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司);HI98128型pH计(北京HANNA);SWCJIF型超净台(苏州净化设备厂);Galaxys型CO2培养箱(美国RSBiotech);STPT型解剖显微镜(日本OLYMPUS);5810R型低温高速离心机(德国Eppendorf);7200型分光光度计(上海尤尼柯仪器有限公司)。

1.4金钗石斛总生物碱和粗多糖的分离提取及检识金钗石斛总生物碱和粗多糖的提取方法参照文献[5-6]并略加改进:干燥金钗石斛切碎打成粗粉,加入体积分数为95%乙醇85℃回流提取(4h/次×3次),合并提取液,减压回收乙醇后得到石斛浸膏,加1moL/LHCL调节浸膏的pH为3,氯仿萃取3遍后,弃氯仿层,加浓氨水调母液pH=11,再经氯仿萃取3遍,将氯仿层合并,减压浓缩,挥干氯仿后即得到总生物碱。将醇提后的药渣晒干后加入20倍体积的水,100℃回流提取(2.5h/次×4次),合并提取液,减压浓缩至一定容积后,加入体积分数95%乙醇,直至醇浓度为70%,置于冰箱内,隔夜取出沉淀用无水乙醇和丙酮各洗涤3遍,再经Sevag法除蛋白处理,冷冻干燥,得到粗多糖。总生物碱的检识参照文献[7]:取少量分离所得的总生物碱于试管内,加入蒸馏水和10μL二甲基亚砜(DMSO)将其充分溶解,滴在硅胶板上,喷雾改良碘化铋钾试剂后,可见硅胶板上滴了提取物溶液的点显现出非常明显的桔红色斑点,由此证明提取物为生物碱。粗多糖的检识参照文献[7]:取多糖水溶液1mL加入Molish试剂3滴,摇匀,倾斜试管,沿试管壁缓慢滴加1mL浓硫酸,静置,可见在试液与浓硫酸交界面产生非常明显的紫色环,证明提取物为多糖。

1.5药物配制用PBS分别将总生物碱和粗多糖配制成浓度为50mg/mL的溶液(生物碱加10μLDMSO助溶),0.22μm微孔滤膜过滤灭菌处理后-20℃保存待用。

1.6晶状体的培养及分组参照文献[8]的方法并略加改进:颈椎脱臼处死大鼠,用眼科剪镊迅速摘取双眼眼球,以含800U/mL青霉素、800μg/mL链霉素的冷PBS液漂洗眼球后,投入含相同浓度双抗液的PBS液中浸泡,转入超净台。约10min后将大鼠眼球转移至含500U/mL青霉素、500μg/mL链霉素的DMEM培养液中,小心从眼球后极部剪开巩膜,取出晶状体,去除晶状体表面的虹膜和玻璃体,晶状体经PBS液漂洗2遍后,再用DMEM液漂洗1遍,然后再放入已预热的24孔组织培养板中培养,每孔含1mLDMEM培养基(含体积分数20%胎牛血清、100μ/mL青霉素、100μg/mL链霉素),预培养5h(37.0℃、体积分数5%CO2)后,剔除受损伤或已混浊的晶状体。将35只未受损伤、透明的晶状体按照随机原则分7个组培养,每组5只:正常对照组(DMEM培养基+100μL胎牛血清),模型组(正常对照组培养基+2mmol/LH2O2),生物碱高、低剂量组(正常对照组培养基中各加入2mmol/L的H2O2,同时分别添加4、2mg/mL生物碱),多糖高、低剂量组(在正常组培养基中各加入2mmol/L的H2O2,同时分别添加4、2mg/mL粗多糖),阳性对照组(正常对照组培养基+2mmoL/L的H2O2+100μL吡诺克辛钠滴眼液)。上述各组培养基均含100U/mL青霉素及100μg/mL链霉素。

1.7观察并照相记录晶状体混浊度加药培养后,每6h更换1次培养液以保持H2O2浓度不变。同时观察并记录各组晶状体混浊度。离体培养晶状体混浊度的分级方法参照文献[9]:在黑色背景下设计1mm×1mm的黑色方格图,将被检晶状体置于"+"字交叉的黑色线条之上,在解剖显微镜下观察晶状体,按透过晶状体所能看到的线条清晰度进行分级。"-"表示线条清晰可见,为完全透明;晶状体"+"混浊:线条模糊,但轮廓尚可辨;"++"混浊:线条轮廓不清,仅中央部隐约可见;"+++"混浊:线条完全不见,晶状体全部混浊。最后以各组晶状体混浊度,即"+"出现量的多少进行统计学处理。培养后24h,给各只晶状体拍照。

1.8晶状体水溶性蛋白GSH含量及SOD、MDA活性检测晶状体拍照后,用冷PBS液洗涤2遍,尽量洗净培养液,再用滤纸吸干水分,称质量。按质量与体积比为1∶10的量加入冷PBS液,在冰浴上充分匀浆后倒入2mL离心管中,4℃、12000r/min离心20min,取上清即为晶状体水溶性蛋白,采用Bradford法检测定蛋白含量。取剩余上清,分别采用二硫代二硝基苯甲酸法检测GSH含量,采用黄嘌呤氧化酶法测定总超氧化物歧化酶(TSOD)活性,采用硫代巴比妥酸(thibabituricacid,TBA)法检测MDA活性,以上操作方法均严格按照试剂盒说明书进行。

1.9统计学方法应用统计软件SPSS11.5对所有数据进行统计分析。

2结果

2.1各组药物对晶状体混浊度的影响晶状体分组培养后6h,模型组晶状体均出现"+"度浑浊,其他各组均透明;继续培养6h,可见正常对照组晶状体均保持透明,模型组晶状体为"++"~"+++"度混浊,其他各组晶状体混浊度在"+"~"++"度不等;培养后24h,正常对照组晶状体均保持透明,模型组晶状体均为"+++"度混浊,肉眼观为乳白色,且晶状体体积明显缩小,其他各组晶状体混浊度表现为"+"~"+++"不等。各个药物添加组中,阳性对照组、生物碱高剂量组晶状体混浊度较模型组显着减轻(均P<0.05);生物碱高、低剂量组及粗多糖高、低剂量组晶状体混浊度与阳性对照组比较均无显着性差异(P>0.05)。将各组晶状体混浊度与过氧化氢损伤的时间进行相关性分析,其中生物碱高剂量组差异有显着性意义(P<0.01),其他各组差异也均有显着性意义(P<0.05),由此可见,随H2O2作用时间的延长,晶状体混浊度逐渐加重。结果见表1及图1。

表1不同时段各组晶状体混浊度量化比较(略)

Table1Comparisonofthelensopacityratioatdifferentstages

统计方法:t检验;①P<0.05,与正常对照组比较;②P<0.05,与模型组比较

a.正常对照组b.模型组c.阳性对照组d.生物碱高剂量组e.生物碱低剂量组f.多糖高剂量组g.多糖低剂量组

图1培养24h后各组晶状体混浊度比较(×25)(略)

Figure1Thelensopacityindifferentgroupsafterculturingfor24h(×25)

2.2各组药物对晶状体水溶性蛋白、GSH含量及MDA、TSOD活性的影响由表2可见,模型组与正常对照组比较,水溶性蛋白含量、GSH含量、TSOD活性均显着降低,MDA活性显着升高(均P<0.05),而阳性对照组、生物碱组、粗多糖组可显着升高水溶性蛋白、GSH含量以及TSOD活性,降低MDA活性,各给药组与模型组比较,差异均有显着性意义(P<0.05)。生物碱高剂量组水溶性蛋白含量显着高于阳性对照组(P<0.05),GSH含量除多糖低剂量组显着低于阳性对照组外(P<0.05),其他各实验组与阳性对照组比较均无显着性差异(P>0.05);TSOD活性除生物碱低

表2各组晶状体水溶性蛋白、GSH含量及MDA、TSOD活性变化比较(略)

Table2Comparisonofthecontentsofwatersolubleprotein,GSH,andtheactivityofMDA,TSODindifferentgroups

统计方法:t检验;①P<0.05,与正常对照组比较;②P<0.05,与模型组比较;③P<0.05,与阳性对照组比较剂量组和多糖低剂量组显着低于阳性对照组外(P<0.05),其他各组与阳性对照组比较均无显着性差异(P>0.05);MDA活性除生物碱高剂量组显着低于阳性对照组(P<0.05)外,其他各组与阳性对照组比较均无显着性差异(P>0.05)。

3讨论

晶状体的氧化损伤是目前常用的白内障研究模型,而H2O2是很好的氧化损伤诱导剂。体内抗氧化系统功能下降或氧化作用增强均可导致眼组织的损伤,诱发或促进白内障的形成[10-11]。而活性氧簇,如H2O2、超氧阴离子、单态氧、氢氧根等可以引起很多生物学变化,最终使晶状体的水不溶性蛋白增加而形成白内障[12]。GSH是一种抗氧化酶,在晶状体中含量较高,对晶状体起着多方面的重要作用[13]。SOD和MDA常常相互配合用以反映组织细胞氧化/抗氧化系统功能的平衡。此外,氧化损伤等因素致晶状体蛋白质分子构型发生改变,造成可溶性蛋白质含量的减少和不可溶性蛋白质含量的增高[14],而不溶性蛋白质聚集,即导致晶状体光散射作用增加,即失去透明性。本研究采用体外构建氧化损伤白内障模型的方法,对金钗石斛总生物碱和粗多糖的抗白内障作用进行探讨。结果显示,模型组可溶性蛋白含量显着低于正常对照组,而各用药组可显着缓解可溶性蛋白的减少,生物碱高剂量组尤其明显;同时,金钗石斛的提取物总生物碱和粗多糖均可提高晶状体GSH含量及SOD活性,同时降低MDA活性,即通过提高晶状体抗氧化能力而达到抑制白内障的作用。

石斛具有抗白内障的作用早已被证实,但其抗白内障的确切有效成分至今仍未见报道。本实验证实,金钗石斛的两种药效部位(总生物碱和粗多糖)在体外可通过减轻晶状体的氧化损伤而抑制白内障的进程,且总生物碱的效果优于粗多糖。然而,金钗石斛化学成分复杂,据文献报道,其总生物碱含量达0.4%~0.6%,种类有30多种,多糖含量也高达4%,并以各种不同的形式存在[15],因此,下一步研究可从这两种粗提物入手,进一步挖掘金钗石斛抗白内障的确切有效成分,并阐明其抗氧化的具体反应过程,这对于抗白内障的药物研究以及金钗石斛药用价值的开发都有着重要的意义。

【参考文献】

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[3]杨涛,梁康,侯纬敏,等.四种中草药对大鼠半乳糖性白内障相关酶活性的影响[J].生物化学杂志,1991,7(6):731.

[4]杨涛,梁康,侯纬敏,等.四种中草药成分对醛糖还原酶和脂类过氧化的抑制作用[J].生物化学杂志,1992,8(2):169.

[5]陈晓青,蒋新宇,刘佳佳.中草药成分分离分析技术与方法[M].北京:化学工业出版社,2006:17.

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[9]刘兴强.晶状体上皮细胞凋亡与白内障形成的实验研究[J].中华实用医学,2001,3(21):1.

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[11]DownesJE,SwannPG,HolmesRS.Ultravioletlightinducedpathologyintheeye:associatedchangesinocularaldehydedehydrogenaseandalcoholdehydrogenaseactivities[J].Cornea,1993,12:241.

[12]CarperDA,SunJK,IwataT,eta1.Oxidativestressinducesdifferentialgeneexpressioninahumanlensepithelialcellline[J].InvestOphthalmolVisSci,2002,40:400.

[13]ReddyVN.Glutathioneanditsfunctioninthelens:AnOverview[J].ExpEyeRes,1990,50:771.

提取物范文篇10

【关键词】葫芦钻；抗肿瘤

Abstract:ObjectiveToinvestigatetheantitumoractivityofYaoHerb--Huluzuan.MethodsTheantitumoractivityinvitroagainsthumancancercelllines--hepatocarcinomaBEL-7404wasdeterminedbyMTTmethod.Theantitumoractivityinvivowasevaluatedbytheprolongationratiosoflife-spanandtheinhibitionratiosofthetumorweightoftransplantedmouseS180、H22solidandascitescarcinomamodelfedonextractedsubstancesfromHuluzuan.ResultsWhenthedoseofwater,alcoholextractedsubstancesfromHuluzuanwas20mg/ml,theinhibitionratiosofthetumorcellinvitrowasinexcessof50%.Bothmaximumtolerateddoseofwater,alcoholextractedsubstancesfromHuluzuanwere150g/kg.Inthreetimesoftheexperiment,prolongationratiosoflifespanathighandlowdoseofwater,alcoholextractedsubstancesexceed50%onmiceS180ascitescarcinomamodelinaverage,andathighdoseofalcoholextractedsubstancesexceeded50%onmiceH22ascitescarcinomamodelinaverage,inhibitionratiosathighandlowdoseofwater、alcoholextractedsubstancesexceed30%onmiceS180solidcarcinomamodelandexceed50%onmiceH22solidcarcinomamodelinaverage.ConclusionWater,alcoholextractedsubstancesfromHuluzuanhasantitumoractivitytosomeextent.

Keywords:Huluzuan；Antitumor

葫芦钻为天南星科植物石柑子Pothoschinensis(Raf.)Merr.的全草，为广西瑶医老班药“五虎、九牛、十八钻、七十二风”之一，瑶族传统治癌“打药”［1］，具有理气止痛，清热解毒的功效。根据民间用药经验，开展抗肿瘤作用实验研究，作者通过体内药效实验和体外药效实验评价葫芦钻提取物的抗肿瘤效果。

1材料

1.1药材葫芦钻采自广西金秀瑶族自治县，经广西民族医药研究所戴斌主任药师鉴定为天南星科植物石柑子。

1.2动物昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄兼用，SPF级，购自广西医科大学实验动物中心（生产许可证号：SCXK桂20030003），动物分组分笼饲养，自由饮水，喂全价颗粒饲料，动物室温度（24±2）℃，相对湿度50%～60%。

1.3主要药品与试剂RPMI1640培养基为Gibco公司的产品；MTT为Sigma公司的产品；小牛血清为杭州四季清公司的产品；DMSO（二甲基亚砜）为Sigma公司的产品；其余试剂均为分析纯。

1.4细胞系人肝癌细胞BEL7404引自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库；用RPMI1640培养液（含10%的小牛血清，100ku·L-1青霉素，100mg·L-1链霉素）37℃，5%CO2，相对湿度100%培养，0.25%胰蛋白酶消化传代。

1.5瘤株小鼠S180，H22腹水瘤株和小鼠S180，H22肉瘤株均由广西中医药研究所引进，本实验室冷冻保存，用昆明种小鼠接种传代。

2方法

2.1葫芦钻提取物的制备葫芦钻水提物：取药材加10倍量水水煎两次，1h/次，滤液合并浓缩，4℃冰箱保存备用；葫芦钻醇提物：取粗粉加5倍量95%乙醇回流提取3次，第1次2h，第2，3次各1h，合并滤液减压回收乙醇至无醇味，浓缩，4℃冰箱保存备用。

2.2体外药效实验MTT法测定：BEL7404经胰蛋白酶处理制成单细胞悬液，接种96孔板，每孔接种3000个细胞/100μl，含10%FBS的RPMI1640培养液，培养24h后，实验组分别加入最终浓度为1，5，10，20mg/ml葫芦钻水提物和醇提物的培养液，对照组则加入等体积溶剂的培养液。每组均设7个平行孔。置37℃，5%CO2培养箱培养5d后，加入MTT20μl，4h后弃上清，每孔加入DMSO100μl，1h内在BioRad550MicoplateReader上用波长546nm比色，测定OD值，按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率［2］。

肿瘤细胞生长抑制率(%)=（1实验组平均OD值/对照组平均OD值）×100%

2.3急性毒性实验在预试验基础上，取40只昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，随机分为两组。以动物能耐受的最大浓度，最大容积的剂量，灌胃给药，葫芦钻水提物3.75g生药/ml，葫芦钻醇提物3.75g生药/ml，0.4ml/10g体重。给药后连续观察7d，逐日观察记录动物反应情况［3］。

2.4体内药效实验［4］

2.4.1对S180，H22腹水瘤小鼠生存天数的影响在无菌条件下，抽取小鼠腹腔内连续传代的S180，H22细胞，从右下腹部注入受体动物腹腔内，每鼠0.2ml。接种24h后随机分组，每组10只。接种次日葫芦钻水提物高、低剂量组（37.5，12.5g/kg），葫芦钻醇提物高、低剂量组（37.5，12.5g/kg），模型对照组（蒸馏水），连续ig给药10d后，停止给药，正常饲养，直到自然死亡，逐日记录荷瘤小鼠的存活状况，按下式计算各组平均生命延长率。

生命延长率=治疗组平均存活天数-对照组平均存活天数对照组平均存活天数×100%

上述实验均重复3次，并计算3次的平均值。

2.4.2对S180，H22肉瘤小鼠的抑瘤作用分别选择接种7d后的S180，H22肉瘤（腹水型）小鼠，颈椎脱臼致死，固定于板上，消毒腹部皮肤，用无菌空针抽吸含瘤细胞腹水，接种于受体动物右前肢腋部皮下，每鼠0.2ml。24h后将已接种的小鼠随机分为对照组、治疗组（高，低剂量组），每组10只。治疗组每天ig给药1次，连续10d，对照组ig等量的蒸馏水。于停药后第2天处死，称体重和瘤重，按下式计算抑瘤率。

肿瘤抑制率=对照组瘤重－给药组瘤重对照组瘤重×100%

上述实验均重复3次，并计算3次的平均值。

2.5统计学处理应用t检验进行统计学分析，数据以±s表示。

3结果

3.1MTT法不同浓度葫芦钻水、醇提取物对人肝癌细胞株BEL7404的抑制。结果见表1。

表1不同浓度葫芦钻水、醇提取物对体外培养的人肝癌细胞BEL7404的影响（略）

结果显示，葫芦钻水、醇提取物对体外培养的人肝癌细胞BEL7404增殖都表现较强的抑制作用，抑制率与提取物浓度正相关。当葫芦钻水、醇提取物浓度为20mg/ml时，抑制率均＞50%，且葫芦钻醇提取物作用效果强于葫芦钻水提物。

3.2葫芦钻水提物日总剂量为150g/kg，葫芦钻醇提物日总剂量为150g/kg，给药当天动物出现便溏现象，其后观察7d，对小鼠体重、行为、进食、皮毛、眼和黏膜、呼吸、四肢活动均无任何影响。说明葫芦钻水、醇提取物的急性毒性小。

3.33次实验结果显示，葫芦钻水、醇提取物高、低剂量组对S180腹水瘤小鼠平均生命延长率均＞50%，葫芦钻醇提物高剂量组对H22腹水瘤小鼠平均生命延长率＞50%。结果见表2。

表2葫芦钻提取物对S180和H22腹水瘤小鼠存活期的影响（略）

与模型组比较，※P<0.05，※※P<0.01；n=10

3.43次实验结果显示，葫芦钻水、醇提取物高、低剂量组对S180肉瘤小鼠平均瘤重抑制率均＞30%，对H22肉瘤小鼠平均瘤重抑制率均＞50%，结果见表3。

表3葫芦钻提取物对S180和H22肉瘤小鼠的抑制作用（略）

与模型组比较※P<0.05※※P<0.01;n=10

4讨论

寻找具有抗癌作用强，抗癌谱广，副作用小的天然活性化合物是抗癌药物研究的重要途径。近年来对传统瑶药开展抗肿瘤作用的筛选研究，发现瑶药葫芦钻具有一定的抗肿瘤作用。本研究结果显示，通过MTT法检测葫芦钻水、醇提取物对人肝癌细胞生长有抑制作用。当药物浓度低于5mg/ml时，对肿瘤细胞的抑制作用不明显。随着药物浓度升高至20mg/ml，药物对肿瘤细胞生长的抑制较明显，抑制率在50%以上。且葫芦钻醇提物的作用效果强于水提物。急性毒性实验中，葫芦钻水、醇提取物的最大耐受剂量均是150g/kg，急性毒性较小。从实验结果可以看出，葫芦钻水、醇提取物在改善S180腹水瘤小鼠存活率方面作用非常明显，生命延长率为73.65%～97.43%，与模型组比较，平均生存期延后10d以上。葫芦钻醇提物高剂量组在改善H22腹水瘤小鼠存活率方面作用明显，生命延长率为54.75%。葫芦钻水、醇提取物对S180肉瘤和H22肉瘤均具有明显的抑制作用，对S180肉瘤平均抑制率＞30%，对H22肉瘤平均抑制率＞50%，与模型组比较有显著性差异（P<0.01）。这些说明葫芦钻提取物具有较强的体内和体外抗肿瘤作用，有进一步研究的价值。本研究结果为葫芦钻的临床抗肿瘤应用及抗肿瘤活性成分的进一步分离筛选提供了依据和资料。

【参考文献】

［1］戴斌，丘翠嫦，李钊东，等．瑶医用药品种调查报告［J］.中草药，1997，28（12）：746.

［2］张均田．现代药理实验方法（上册）［M］．北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1998：819.