医学细胞生物学重点笔记十篇

医学细胞生物学重点笔记篇1

关键词 医学细胞生物学；互动式教学；多媒体教学；案例教学

中图分类号：G642 文献标识码：B

文章编号：1671-489X（2016）20-0092-03

Abstract As an imperative fundamental course in medical univer-sity， Medical Cell Biology has a crucial significant on the part of me-dical students’ further study in their specialized courses as well as their future career developments. It is a hard obligation for every teacher professing Medical Cell Biology to instruct relevant basic knowledge systematically， introduce further development in related field and train students’ scientific thinking ability. Illustrate how tointegrate methods such as interactive teaching， multimedia teaching， case teaching， bilingual teaching， heuristic teaching into the teachingpractice of Medical Cell Biology.

Key words Medical Cell Biology； interactive teaching； multimedia teaching； case teaching

1 前言

现代医学教育呈现出向多学科交叉渗透的发展趋势，而作为一门生命科学领域的重叠核心学科，医学细胞生物学的理论知识已经渗透到医学的各个领域。因此，掌握医学细胞生物学的基础知识和基本思维方法，成为每一名医科生进一步学习专业知识的必备要素[1]。

值得一提的是，细胞生物学是生命科学领域的四大前沿学科之一，近几年来一直发展迅速[2]，无数新理论、新发现的诞生，更使得细胞生物学总体呈现出知识更新周期短、速度快的特点。要跟上细胞生物学飞速发展的步伐，医学细胞生物学的教学工作不可以再沿袭老一套枯燥乏味的教学模式，而是应该优化教学方法，整合教学内容，合理利用教学资源，力求让学生掌握基础知识的同时，开阔眼界并培养科研思维能力。以下是笔者在自己的实际教学经历中总结出的一些经验。

2 互动式教学

传统的教学模式往往以教师讲解课本内容，学生被动地听讲记忆为主。这种教学模式效率高，可以在短时间内灌输给学生大量的知识，很容易就能达到教学进度，也给教师的备课减小了难度；但是容易造成学生的主动性不强，无法对所学内容及时地进行消化，对记住的知识点理解也不够深刻等一系列问题。而医学细胞生物学本来就有知识点杂散、抽象、难以理解的学科特点，填鸭式的教学往往会让学生失去学习的热情，造成“台上一家言，台下百家梦”的现象。针对这一问题，本着教学平等的理念，采取多种形式和学生教学互动，有利于增强他们的课堂参与度，集中注意力，提高教学效率。

课堂提问 课堂提问是一种很好的互动式教学方法。回答问题可以帮助学生巩固所学知识，加深对知识点的印象，也可以使他们听课时注意力更加集中。除此之外，课堂提问也有助于学生从整体上掌握所学得的知识。

细胞生物学涵盖了近几百年来人类在分子水平、亚细胞水平和细胞水平上对细胞内的生命现象进行研究而得到的众多的知识，其内在联系是相当复杂的。虽然现行的教材已经根据知识点之间的关联程度将这些散乱的内容整合成为十几个大章节、60多个小章节的有机体系，再加上编排这些内容的人士都是细胞生物学领域拥有多年从教经验和科研经验的资深学者，其科学性和严谨性不容置疑，但这并不意味着整本教材就已经是一本面面俱到的完美之作了。事实上，为了要满足整本教材的编写思路，还是有相当一部分存在内在联系的知识点被打散分割到不同的章节、不同的部分中去了。对于学生而言，只有找出这些被打散的知识点之间的联系，才能够从整体上把握所学到的知识，才能够在真正意义上学好细胞生物学，而这恰恰就是学生普遍感到困难的地方。这就需要教师平时在课堂上多提醒学生养成课后多总结、平时多留意的习惯。这种习惯当然不是一朝一夕就可以养成的，它需要长时间的训练和积累，而课堂提问恰恰就是一种训练学生总结归纳能力的很好的方法。

具体来讲，教师在讲到某一个重点时，没必要完全按照书本的内容一口气讲完，而是可以放慢节奏并适时地向学生提问前几章里与该知识点相关的内容。比方在讲到细胞有丝分裂的胞质分裂期收缩环形成的内容时，就可以提问学生收缩环是由哪种细胞骨架构成的？这种问题对学生发现不同章节知识点之间的内在联系大有帮助，也锻炼了学生的发散性思维。久而久之，学生就拥有了自发跳出书本框架，按照自己的理解梳理所学知识的意识，并逐步建立起一套只属于自己的知识架构网络图。

鼓励学生复述所学知识中的重点和难点 一般来讲，完整地复述出一个新学的知识，尤其是一个相对比较复杂的生物学过程，对大多数学生而言应该是一件比较困难的事情。但是，医学细胞生物学这门学科有其特殊性。由于有着高中生物以及大一开设的基础生命科学的基础，许多学生在系统地学习医学细胞生物学之前就已经对教学大纲中的某些内容拥有一定程度的了解；再加上课前预习和课堂教授，基本上可以掌握其中的大部分知识点，因此，当堂复述对他们来说是完全有能力办到的。这种方式可以让学生在巩固原有知识的基础上理顺知识脉络，锻炼对科学问题的口头表述能力，有利于他们的全面发展。另外，在学生复述的同时，教师也可以对他们理解不到位的地方加以引导，对他们疏漏忽视的问题进行补充，协助他们完成整个复述过程，这样可以极大地提高学生的自信心，鼓舞他们的学习热情。

结合不同专业的实际情况，适当补充介绍细胞生物学的前沿进展和科研方法 就比如生物技术专业，该专业的大多数学生将来的工作方向可能和科研联系很紧密，在不影响主干知识讲解的前提下，向他们介绍一些科研的方法和思路，对他们未来的发展帮助很大。笔者有过多年从事科研的经验，对细胞生物学最前沿的进展又有相当的了解，曾在课上向该专业学生介绍PCR、RTPCR、Western Blot、DNA ladder、荧光可视化技术等细胞生物学的传统研究方法。但是必须指出的一点是，如果只是机械式的讲授，这种扩展教学可能很难引起学生的兴趣。因此，笔者同样采取师生互动的方法：先鼓励一些对科研有兴趣学生大胆谈谈自己对某种技术的了解，然后在此基础上补充他们认识上的欠缺，一定程度上起到激发他们学习兴趣的作用。

3 多媒体教学

作为一种现代化的教学手段，计算机辅助教学（Computer

Assisted Instruction，CAI）的优越性是显而易见的。它可以把文字、图像、声音、动画等多种信息表现媒介综合起来，直观地呈现在学生的眼前，从而大大地提高了教学效率和教学质量[3]。尤其是对于细胞内一些比较复杂的生化过程，利用Flas演示的教学手段可以达到事半功倍的效果。

举个例子来说，用来解释新合成肽链如何转移至内质网的信号肽假说一直以来是教学中的一个重点和难点。由于这个过程中涉及的分子机制比较复杂，再加上作为一种细胞内不可见的生化反应，整个过程又显得很抽象，单纯只靠教师口头描述，学生可能很难对信号肽、信号肽识别颗粒（SRP）、信号肽识别颗粒受体（SRPR）产生直观的印象。但是如果采用多媒体教学手段，只需要一段1分钟左右的Flas，就可以把整个复杂的过程形象生动地呈现在学生的眼前：信号肽识别颗粒结合信号肽，并同时被位于内质网膜上的信号肽识别颗粒受体特异性识别，从而介导整个核糖体锚着到内质网上；然后信号肽识别颗粒脱离复合体，肽链也通过核糖体大亚基中央管和易位子蛋白形成的通道进入内质网；最后信号肽切除，肽链继续延伸。

显而易见，用Flas代替枯燥无味的理论讲解，能够使课堂的气氛更加活泼，从而让学生产生一种浓厚的学习兴趣，大幅度提高学习效率；同时也替教师省去了费尽心思让学生理解细胞内一些动态的抽象过程的麻烦，节省了大量时间。

此外，在短短四十几分钟的课上，教师没法做到向学生传达所有的重点。但如果事先在教学PPT上标注出一些比较重要的内容，课堂上学生自然就能一目了然。同时，一些有需要的学生还可以在课后拷贝走教学课件作为他们课后复习的重要资料。

4 双语教学

不得不承认的一点是，当下，我国在生物医学领域与西方发达国家存在不小的差距，该领域的最新信息和研究成果大多数是以英语论文的形式发表在西方发达国家的学术期刊上。因此，必须要促进教学和全球化接轨，培养国际型的医学专长人才。在这样的时代背景下，双语教学也就显得尤为重要[3]。

然而，由于大二学生的英语基础普遍较差，开展全英语式的教学显然不切实际。笔者认为，双语教学应该以母语传道为主，外语拓展为辅。举个例子来说，在细胞器这章的教学过程中，如果纯粹采用外语教学的方式，大量的专有名词一定会让绝大多数的学生感到不明所以，从而打击他们的学习积极性。但是假如只是要求学生识认细胞内的一些重要细胞器以及生化过程的英语名词，就显得相对容易得多。

此外，笔者还采用了一种全新的教学形式，帮助学生有效地记忆相对比较复杂的专业名词：取一张全英文标注的细胞模式图，让学生不查阅字典直接进行识认。由于之前的教学工作已经让学生对各种细胞器的形态结构有了形象的了解，对照着图片，他们基本上可以明白各个专业名词的含义，并在脑内产生直观的记忆。实践证明，这种方法能够推进双语教学有效开展。

5 案例教学法

胡以平教授主编的第三版医学细胞生物学教材为了保证全面性和系统性，许多内容和生物化学、分子生物学、医学遗传学有重复[4]。要在有限的教学时间内完成教学任务，必须侧重于本学科特有知识的讲解，对于重复的知识点则以学生自习为主。比如在线粒体功能这一节里，三羧酸循环、电子传递链、氧化磷酸化等过程在生化课上已经重点介绍过，在课堂上就无须赘述；反之，线粒体的显微结构与亚微结构、线粒体的半自主性以及线粒体的发生机制等内容在其他科目里较少涉及，应该重点介绍。

此外，医学细胞生物学和普通高校开设的细胞生物学最大的区别就在于它突出了细胞生物学和医学之间的联系。因此，教师在讲课过程中也应该特别注意强调细胞生物学的基本理论和人类健康问题间的关联，培养学生用所学得的细胞生物学知识理解、分析相关疾病发病机制的能力。比如：在讲完细胞骨架这一章的主干知识后，教师可以适当花费一些时间讲述细胞骨架和肿瘤、遗传性疾病以及阿尔兹海默症等神经退行性疾病的关系；在讲完细胞器这章后，教师可以简要地谈及一些细胞器损伤引发的疾病，比如溶酶体异常引发的泰-萨克斯病、过氧化酶体异常引发的脑肝肾综合征、线粒体mtDNA缺陷引起的亨廷顿舞蹈症等疾病。

医学细胞生物学重点笔记篇2

【关键词】  胃癌hlaⅰ;cd68;cd3;免疫组化

【摘要】 

目的 探讨hlaⅰ、cd68和cd3抗原在胃癌及周围淋巴结的表达。方法 胃癌组织30例，胃重度不典型增生组织30例做对照。周围淋巴结共40个。用抗hlaⅰ、cd68和cd3的单克隆抗体采用sp法做免疫组化分析。结果 阳性组织中细胞膜和细胞浆着色。hlaⅰ抗原阳性表达率胃癌组织为16.67%，胃不典型增生组织为40%，二者差异有统计学意义(p＜0.05)；cd68阳性表达率为36.67%，胃不典型增生组织为26.67%，二者差异无统计学意义(p＞0.05)；cd3阳性表达率为20%,胃不典型增生组织为36.67%，二者差异无统计学意义(p＞0.05)。淋巴结cd68阳性表达率为20%，cd3阳性表达率为35%。hlaⅰ和cd68、cd3三者表达呈直线相关关系。 结论 胃癌hlaⅰ表达下降，hlaⅰ和cd68、cd3浸润有相关关系。

【关键词】  胃癌hlaⅰ;cd68;cd3;免疫组化

the expression and significance of  hlaⅰ cd68 and cd3in gastric carcinoma and lymph node 

zhang guojian,wu aixu,yan qinghui, et al.

department of surgery,the second hospital of hebei medical university,shijiazhuang 050000,china

    【abstract】  objective   to investigate the protein expression of hlaⅰ, cd68 and cd3in gastric carcinoma and lymph node. methods  30 cases of gastric carcinoma tissue,30 cases of gastric severe dysplasia and 40 lymph nodes were enrolled in the study. the expression of hlaⅰ, cd68 and cd3 was detected by immunohistochmical staining method.results  the expression of hlaⅰ, cd68 and cd3on cell membrane and cytoplasmic expression in positive tissues were found. the positive expression of hlaⅰ was observed in 16.67% gastric carcinoma cases and 40% gastric severe dysplasia, and there was a significant difference between the two kinds of tissues(p<0.05). the positive expressions of cd68were observed in 36.67% gastric carcinoma cases and 26.67% gastric severe dysplasia, and there was no significant difference between the two kinds of tissues(p>0.05). the positive expressions of cd3 were observed in 20% gastric carcinoma cases and 36.67% gastric severe dysplasia, and there was no significant difference between the two kinds of tissues(p>0.05).the expressions of cd68and cd3were found in 20% and 35% lymph node. the expression of hlaⅰ, cd68 and cd3  had linear correlation with each other. conclusion   the expression of hlaⅰon gastric carcinoma decreases. the expression of hlaⅰ, cd68and cd3has a linear correlation with each other in gastric carcinoma.

    【key words】  gastric caicinoma;hlaⅰ; cd68;cd3;  immunohistochemistry

    肿瘤宿主免疫功能异常可能导致细胞恶变后继续生长发展成肿瘤和转移的原因之一［1］。研究表明，癌细胞可以通过多种机制使宿主免疫功能异常，其中包括细胞表面hlaⅰ的表达缺乏。因此笔者探讨胃癌组织及周围淋巴结中hlaⅰ和cd68、cd3抗原的表达，以期望对影响肿瘤预后的因素及机体的免疫功能进行评价。

1  资料与方法

1.1  一般资料

选择河北医科大学第二医院外科2005年10月至2006年10月30例胃癌标本和30例胃重度部典型增生标本。所有标本均经10%甲酫固定，石蜡包埋。30例胃癌患者男12例，女18例;年龄41～72岁，平均53.5岁。30例重度不典型增生患者男11例，女19例；年龄35～75岁，平均年龄56.8岁。2组在年龄和性别比上差异无统计学意义（p>0.05）。

1.2  试剂与方法 

hlaⅰ单克隆抗体w6/32购自美国sigma 公司。cd68和cd3抗体及免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。石蜡标本常规脱蜡至水化。采用免疫组化sp法染色，染色程序严格按照试剂盒说明。pbs代替一抗做空白对照。

1.3  结果判断标准 

细胞膜和细胞质出现棕黄色颗粒为阳性。光镜下按着色范围结合着色强弱进行分级。着色范围以阳性细胞数百分率判定：未着色为0分；着色25%以下为1分；着色25%～50%为2分；着色50%以上为3分。着色强度判定：无着色为0分；浅着色为1分；棕色为2分；深棕色为3分。上述两项相加为分级标准。阴性：＜3分；阳性：≥3分。

1.4  统计学分析 

应用spss 11.0统计软件，计数资料采用χ2检验，相关性采用相关分析，p＜0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  hlaⅰ和cd68、cd3在大肠癌的表达及相关分析结果 

hlaⅰ抗原阳性表达于细胞膜和细胞浆，hlaⅰ抗原阳性表达率胃癌组织为16.67%，胃不典型增生组织为40%，二者差异有统计学意义（p＜0.05）； cd68阳性表达于细胞浆，cd68阳性表达率胃癌组织为36.67%，胃不典型增生组织为26.67%，二者差异无统计学意义（p＞0.05）。cd3阳性表达于细胞浆，cd3阳性表达率胃癌组织为20%；胃不典型增生组织为36.67%，二者差异无统计学意义（p＞0.05）。hlaⅰ和cd68阳性表达呈直线负相关（r=-0.627，p＜0.05）。hlaⅰ和cd3阳性表达呈直线正相关（r=0.904，p＜0.05）。

2.2  cd68和cd3在淋巴结的表达及相关性分析结果

cd68阳性表达于细胞浆，40个淋巴结中阳性表达率为20%；cd3阳性表达于细胞浆，阳性表达率为35%；cd68和cd3阳性表达呈直线负相关（r=-0.694，p＜0.05）。

3  讨论

    机体的免疫功能状态是影响肿瘤发生的一个重要因素，恶变细胞可通过多种机制逃避机体的免疫监视，使机体的免疫系统出现障碍而无法对肿瘤细胞进行识别和杀伤。hlaⅰ分子表达下调是一个普遍的肿瘤生物学现象［2］。我们之前研究发现大肠癌组织与正常组织比较，hlaⅰ表达明显下降，不同组织学分级中hlaⅰ蛋白的表达有明显统计学意义，组织学分化越差，hlaⅰ表达越低［3］。笔者研究结果表明，与重度不典型增生比较，胃癌组织hlaⅰ蛋白表达明显下降。hlaⅰ抗原在t细胞清除转化中起重要作用，胃癌组织hlaⅰ表达下降可能与肿瘤免疫逃逸有关。

    肿瘤相关的巨噬细胞是指移行到肿瘤间质的巨噬细胞，其表面标记为cd68，是机体抗肿瘤免疫中重要的效应细胞，它在肿瘤免疫中的作用日益受到人们的重视。王光芬等［4］研究发现胃癌中肿瘤相关巨噬细胞计数明显高于胃炎组织，并且有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组。笔者研究结果表明胃癌组织中cd68细胞广泛存在与肿瘤间质中，与重度不典型增生比较，cd68阳性细胞表达明显增多，cd68阳性细胞在肿瘤微环境中具有促进肿瘤血管生成作用，影响肿瘤的生物学行为导致肿瘤转移［5］。同时结果表明胃癌组织中hlaⅰ的表达与cd68的浸润呈明显负相关，说明hlaⅰ表达越低，肿瘤间质中的巨噬细胞越多，肿瘤转移性就越强，这可能胃癌组织易发生转移的原因之一。

    齐朝阳等［6］研究发现胃癌间质中有不同程度淋巴细胞浸润，淋巴细胞浸润明显组与少量浸润组比较，胃癌伴淋巴结转移率低。肿瘤中浸润的淋巴细胞其表面标记为cd3。t细胞在免疫识别和清除肿瘤细胞方面具有重要作用。笔者研究结果表明与重度不典型增生比较，胃癌组织中cd3阳性细胞表达降低；胃癌组织中hlaⅰ的表达与cd3的浸润呈明显正相关，说明hlaⅰ表达越低，t细胞的免疫活性就越下降，机体免疫细胞对肿瘤细胞免疫识别能力降低。

   

巨噬细胞的浸润和t细胞的免疫活性密切相关。笔者研究结果表明与重度不典型增生比较，胃癌组织中cd68阳性细胞增加，cd3阳性细胞减少，不论胃癌组织还是周围淋巴结中cd68阳性细胞和cd3阳性细胞的浸润呈负相关。说明胃癌组织巨噬细胞浸润增加而t细胞免疫活性下降，这可能导致t细胞不能识别并对肿瘤细胞发起攻击，是胃癌发生免疫逃逸，从而转移和复发的机制之一。

    综上结果,提示胃癌细胞是通过多种途径逃脱机体的免疫抑制，这些生物学特性可能影响胃癌转移和预后，是临床诊疗中需要引起注意的。

【参考文献】

 

1 hosch sb, meyer aj, schneider c, et al. expression and prognostic significance of hla class ⅰ，icam, and tumor infiltrating lymphocytes in esophageal cancer. j gastrointest surg, 1997, 1:316323.

2 hirata s, yamazaki k, kubo y, et al. dna content analysis and expression of human leucocyte antigen on esophageal cancer. rinsho byori，1995，43：227232.

3 张国建，闫庆辉，王凤安，等. 大肠癌组织hlaⅰ基因蛋白的表达及意义.河北医药,2006，28：78.

4 王光芬，郑海燕，辛琪，等.胃癌中upa、肿瘤浸润性巨噬细胞的表达及其与血管生成的关系.安徽医药,2008，11：3133.

医学细胞生物学重点笔记篇3

[摘要] 目的：探讨医学免疫学中学生颇感头痛的各种疑难问题的解决方法。方法：笔者经过长期的教学研究和课堂授课的实际检验后，运用比喻比拟、回顾联系、图像实说、深化记忆等相应的对策进行化解，并对具体情况进行了较为详细的分析。结果：可以达到赋予形象、促进理解、避免误会、巩固效果等切实可行的教学作用和效果，大大提高了学生们的学习积极性。结论：只要肯动脑筋，深入研究，医学免疫学的各种疑难问题，都是可以解决的。

[关键词] 医学免疫学；疑难；对策

[中图分类号] G642[文献标识码] C [文章编号] 1673-7210（2010）10（a）-119-02

Medical immunology difficult question and answer for four plans

WANG Jian

(Zhangzhou Healthy Vocational College, Zhangzhou 363000, China)

[Abstract] Objective: To dicuss how to resolve students come across the various difficult problems in the medical immunology curriculum learning. Methods: After a long research in teaching and the practical teaching, the use of metaphor analogy, review contact, imaging actually said that the deepening memory and so on corresponding countermeasures to resolve, and the circumstances for a more detailed analysis. Results: It can be achieved giving image, promoting understanding and avoiding misunderstanding, building effect etc. The practical teaching can greatly enhance students′ learning initiative. Conclusion: As long as we are willing to use our brains, in-depth study, various difficult problems of medical immunology can be solved.

[Key words] Medical immunology; Difficult question; Countermeasures

医学免疫学是一门比较重要的医学基础课程，同时又是一门比较深奥难懂的学问。由于其内容抽象复杂，难以理解，难以形成印象，学生每学到此，莫不深感头痛。甚至有许多本科或硕士毕业的医务工作者，已经工作多年，对医学免疫学的理论、概念仍然一知半解[1-2]。能从何处着手，使这门过于深奥的课程，较为容易地被学生所理解接受呢？笔者在经过长期教学研究的揣摩和课堂授课的实际检验后，反复梳理、推敲、验证，认为以下几个方面是值得考虑、深思和采纳的。

1 比喻、比拟赋予形象

医学免疫学的许多基本理论和概念，就其本身而言，已经脱离现实生活很远，是抽象后再抽象的集合。如果简单地照搬书本来进行讲授，学生往往听了半天还云里雾里、不知所然。例如，“免疫”本身就是一个抽象的概念，“免疫耐受”又当如何？“抗原”自身已很费解，“胸腺非依赖性抗原”又是怎么回事？以抽象的语言和概念来解释抽象的概念是最使人费解、也最使人头疼的。所以，我们应该想办法，使这些过于抽象的理论、概念与现实生活中的某种事物联系起来，赋予它们一定的形象，才便于学生理解[3]。例如，我们可以把人比喻为一个国家，把免疫系统比喻为这个国家的军队和警察。这样，免疫系统的三大功能（免疫防御、免疫稳定、免疫监视）就比较容易解释了，免疫细胞的分化、分布与分工也较为容易说明了。再如，免疫应答与超敏反应的关系，学生总是感到费解，免疫应答不是专门保护机体免受微生物等损害的防御机制吗？为什么又会反过来损伤机体自身呢？我们可以这样解释：免疫应答消灭微生物就好像警察消灭匪徒一样，在射击匪徒的过程中，有可能误伤平民；如果匪徒过多，过于顽强，或躲在居民建筑物里，不得不动用炸弹等激烈手段时，还有可能毁坏民房和其他建筑物，有时甚至造成更大的损失和不应有的平民伤亡。这种情况，就有点类似于超敏反应的发生。这样一解说，学生就比较容易理解、也比较容易听懂了。

2 回顾、联系促进理解

由于医学免疫学的理论、概念是从抽象到抽象，如果我们不把一个内容的上下关系理清，并反复进行联系对比，学生往往是不易理解、也不易记住的，不但每一章节内的各部分应互相联系；各章节之间，尤应互相呼应，学生才容易搭起记忆的桥梁，做到融会贯通[4]。这在免疫学的教学上，特别重要。有许多内容，特别是在教学时段上分隔较远的内容，如果以为教师能够及时回忆并进行联系的，学生也能做到，是一种教学上的误解（这也是刚踏入教学领域不久的青年教师最容易犯的毛病之一，主要是没有能做到设身处地地从学生的角度考虑问题）。因为，学生对免疫学的内容绝对没有教师娴熟，对许多部分的理解，也还远远达不到教师的程度，更何况，免疫学是一门那么难懂费学的课程。因此，及时地对前面章节已经讲过的内容进行回顾、联系，在免疫学的教学中，是有非同一般的重要意义的。例如，我们在前面章节讲过免疫细胞的受体、细胞因子、主要组织相容性抗原、抗原提呈细胞的种类与功能等内容后，在新的一堂课中继续讲到免疫应答章节时，就应适当进行回顾，把前述章节的那些内容，与它们在免疫应答中的具体作用联系起来，以便互相呼应、加深理解。这样，才能使各章节的那些看似抽象、纷杂、散乱的理论和概念有机地结合起来，成为一个完整的免疫学整体，学生才能够较为容易地做到上下联系并确实理解，同时较为牢固地记住这部分内容，也才有可能真正进入到这门以抽象和枯燥闻名的学问中去。

3 图像实说、避免误会

书上画的免疫球蛋白，像一个形状奇特的大叉子。学生们总是感到困惑：这么一个叉叉棒棒一样的东西，怎么会有那么多神奇复杂的作用和功能？在现实生活中实在没有见过这样类似的东西，这有点近乎于神话了。为了解除学生的这种理解上的心理障碍，我们最好给他们进行实际说明。我们可以说，免疫球蛋白实际上虽是由四条多肽链构成，但在现实生活中，它既看不见，也没有书上划的那么直，之所以画成这个样子，是为了理解上的需要。作为一种蛋白质，它当然是有多种功能的，划得直，便于我们解说在哪个部位有哪种特性和功能。这样说明后，学生在理解上的心理障碍大都可以消除。另如，抗体的各种协同杀菌作用（如ADCC作用――抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用），虽然可以基本上依照书上的插图或类似的挂图、图片来进行解说，但我们必须同时声明，实际上抗体作为一种蛋白质分子，它的大小远远小于细菌细胞，两者相差悬殊。这犹如在地球上站着一个人一样，当地球缩小到一个篮球大小时，这个人实际上已经微小到我们无法看见了。同样，我们可以在光学显微镜下看到细菌细胞，但却看不见抗体这种蛋白质分子。如果照实画，那就没法画了，只能按照书上的这种比例画出来，才能便于理解。同时它自身也没有穿孔、杀伤等毒性作用，故抗体与细菌细胞的结合并不能直接杀死细菌，甚至还不能限制大多数细菌的运动。它是借助于NK细胞、补体、吞噬细胞等其他杀菌因素来消灭细菌的，这样做接近于真实的补充说明，可能对学生的理解更有帮助。

4 深化记忆、巩固效果

医学免疫学实在太抽象，不但在学生第一次看过、听过后留不下什么印象，而且有许多学生在课堂上听懂后，过后又会完全忘记。造成这种情况的原因是多方面的，最主要的原因还是课程本身的高度抽象性。它从一开始就是抽象的，而且后面的内容又是在前面抽象的基础上再进行抽象论证，不断推进，不断演化。在反复抽象的情况下就容易造成思维脱节，学生难以跟进。其次的原因是，学生要学的课程很多，医学基础课又大都比较艰深，都要分去学生不少精力。另外相当重要的是，教师的教学方法、教学态度和学生的学习方法、学习态度。从免疫学教学本身而言，我们是应该多想办法，让学生有更深刻的学习印象和更牢固的学习记忆。除了前面所讲的那几点外，从笔者多年反复揣摩、反复验证的经验结果来看，在每堂课讲课前，一定要郑重叮嘱学生们做好课前预习（要说明原因，以免学生等闲视之、不以为然），看不懂也要看一至数遍（要强调看不懂也要看下去这一点），以便建立起最初印象或至少引起学习上的疑惑或感到疑难，为接下来上课时能够用心听讲做好心理准备。在上课时，应要求所有的学生专心致志听课，而任课教师应调动一切语言的、声调的、动作的、形色的以及各种辅助教学手段、辅助教学工具，帮助学生建立印象、加深理解[5-6]。这时教师要像一个小品演员或一个节目主持人一样，充分调动起课堂上的学习气氛，使每一个学生都积极地参与到热烈的讨论和认真的思考中来。课后则应要求学生，当晚把本次课学过的内容再好好复习一遍，时间不需太长，但必须做到。在复习的过程中要注意回顾联系以前学过的内容，并找到相应章节一并加以复习[6]。同时告诉学生，以上这些内容，应分别在1周、1个月、数月后再重复复习，以便加深印象，建立牢固的学习记忆。在这个深化记忆三步曲的基础上，教师还应时时鼓励学生，有任何不懂的地方，都可在下课后的任何时候向教师请求解疑[7]。这是学生最容易做到也最乐意采取的学习方式，学习成绩好的学生都大多如此。往往学生的困惑之处只是一个小小的死结，如同一层薄薄的窗户纸，教师只需关键性的一句话，就可以点破窗纸，使之恍然大悟、豁然开朗。这是学生们在学习上极容易留下深刻印象的瞬间，也是学好这门知识的一个重要的转折点，但往往有许多教师恰恰忽略了这一点，不愿意或不屑于做这一件对教学效果、对学生的成长而言，都是事半功倍的事情。笔者所教过的课程或参观考察过的许多医学院校，成为医学专科院校中的一种极普遍现象。这是专业学校的历史惯性？还是现时社会大环境的熏陶？或是许多人认为这种方法太简单，不值得去做或不屑于去做？这个问题确实值得我们深思。

总之，在医学免疫学的教学中，我们一定要注意及时地从学生中发现问题，并且站在学生的角度上，根据学生的实际情况，多动脑筋，多想办法，才能把这门过于抽象、过于复杂、过于晦涩难懂的学问，较为容易地传授给学生，而不致造成费解、误解，甚至泛泛不着边际的局面。当然，医学免疫学教学中可能碰到的问题还很多，但只要我们重视这些问题，反复研究，不断探索，不管什么样的疑难问题，都是可以化解的。

[参考文献]

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医学细胞生物学重点笔记篇4

【关键词】 再生障碍性贫血； 医院感染； 危险因素 

中图分类号 R556.5 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2016）3-0097-02 

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.3.052 

再生障碍性贫血（简称AA），造血骨髓造血功能衰竭症，一般临床表现为贫血、出血、感染、发烧，并伴有走路乏力、头晕等症状，因为其死亡率极高的特点，故再生障碍性贫血有“软癌”之称。由于其会导致骨髓造血功能降低、全血细胞减少，从而使得白细胞数量减少，机体免疫出现异常情况，患者往往会因各种感染而死亡[1]。而医院感染常指患者在医院内所获得的感染，主要包括入院时、出院后发生的感染，入院前感染不是院内感染，主要是因为患者在医院环境及接触人、物、空气等存在一定细菌所引起。目前，医院感染已成为严重的公共卫生问题，是发病率和死亡率上升的重要原因，它不仅对患者健康造成严重损害，还增加了医疗开支，对患者家庭造成不必要的负担。据调查研究显示，多数医院中导致再生障碍性贫血医院感染的因素较多，故此，对再生障碍性贫血患者进行有效的预防和控制感染具有重要意义[2]。本研究对笔者所在医院就诊的再生障碍性贫血患者178例中46例医院感染患者的相关感染特点及危险因素进行有效分析，现报道如下。 

1 资料与方法 

1.1 一般资料 

选取2008年12月-2014年12月来笔者所在医院就诊的再生障碍性贫血患者178例，男93例，女85例，年龄14～75岁，平均（42±6.13）岁，其中46例发生院内感染。所有患者均经笔者所在医院检查临床诊断或经上级医院确诊为再生障碍性贫血，诊断标准为国内标准。而感染的46例患者中，男25例，女21例，平均年龄（41.00±5.22）岁，急性再生障碍性贫血6例，慢性再生障碍性贫血40例。 

1.2 方法 

本研究主要采用资料回顾性分析，所有患者入院后，均需要填写笔者统一制定的感染调查表（主要记录患者的年龄、性别以及相关病史），根据之后的诊治情况记录患者入院后所使用的抗菌药物、血常规白细胞总数、医院感染时间、病症以及相关检查结果等，并对感染患者的痰液、血液、尿液以及分泌物等进行相关细菌培养，对比分析。 

1.3 统计学处理 

该项研究所得结果数据均由计算机整理完毕并采用spss 18.0软件对所得数据进行统计分析，资料中计量资料统计采用2个样本均数两两比较（Wilcoxon 两样本比较法），记数数据运用（x±s）表示，组间差异运用字2或t检验。结果对比数据运用P表示，P<0.05为差异有统计学意义。 

2 结果 

2.1 46例医院感染的发生部位及比例情况 

医院感染主要发生在患者的上呼吸道部位，而肺部、消化道等地方也有感染，详见表1。 

表1 感染部位情况 

感染部位 例数（例） 比例（%） 

上呼吸道 12 26.1 

肺部 8 17.4 

消化道 7 15.2 

口腔 6 13.0 

感染灶不明 5 10.9 

泌尿道 4 8.7 

肛周 2 4.3 

皮肤软组织 2 4.3 

2.2 医院感染后病原菌检查结果 

46例患者进行取样细菌培养后，共有31株病原菌，感染患者主要是革兰阴性细菌感染，见表2。 

表2 患者感染后病原菌检查结果 

病原菌型 株数 

（株） 比例 

（%） 主要类别 

革兰阴性菌 16 51.6 大肠埃希菌、肺炎克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌 

革兰阳性菌 13 41.9 金黄色葡萄球菌、粪肠球菌 

真菌 2 6.5 白色假丝酵母菌 

2.3 医院感染危险因素分析情况 

医院感染危险因素，详见表3。 

3 讨论 

再生障碍性贫血，主要由于化学、物理、生物以及不明原因所导致的骨髓功能障碍疾病，临床主要表现症状为全血细胞减少，病因尚不清楚，现有研究认为其可能与化学药物、遗传因素等有关[3]。医院感染部位主要以呼吸道感染为主，其次便是口腔和消化道感染，一方面可能是因为呼吸道和外界直接相通，病原菌很容易就通过飞沫空气传播引起系统感染；另一方面，吸入口咽部的定植菌也是引起感染的重要原因之一。由于患者白细胞的生成相对减少，同时其免疫出现异常，再加上疾病治疗时对免疫抑制剂和激素的使用，导致了患者免疫力严重下降，因此在整个治疗过程中，出现医院感染的概率较高[4]。 

表3 医院感染危险因素 

项目 住院例数（例） 感染例数（例） 感染率（%） P值 

性别 男 93 25 26.9 >0.05 

女 85 21 24.7 

年龄 ≥60岁 43 21 48.8 <0.01 

<60岁 135 25 18.5 

住院时间 ≥30 d 42 15 35.7 <0.05　<30 d 136 31 22.8 

白细胞计数 ≥2.0×109/L 117 20 17.1 <0.01 

<2.0×109/L 61 26 42.6 

合并其他疾病 有 55 23 41.8 <0.01 

无 123 23 18.7 

抗菌药物应用 有 96 29 30.2 <0.01 

无 82 17 20.7 

医院感染，在医院内获得的感染，由于感染性质有所差异，故也分为住院期间发生的感染和出院后所发生的院内感染。随着医学技术的不断发展，抗菌药物滥用日渐增多，化疗、放疗等治疗手段也广泛应用，使得医院感染的概率也呈现增多趋势。它不仅感染患者、家属，还会感染医护人员，后勤人员，给我国的经济造成了严重损失，已成为现在较为突出的公共卫生问题。因此，加强医院规范化的管理，有效控制医院感染对患者疾病的治疗至关重要[3]。此外，感染部位不明的患者也占有相当大的比例，其原因可能是患者的免疫力低下而使临床表现不具典型性，也可能是同时患有其他疾病，在治疗时给予抗感染治疗，一定程度上控制了病情的扩大，从而未出现明显的临床症状[5]。 

本研究结果显示，来笔者所在医院就诊的178例再生障碍性贫血患者中，其中有46例发生了院内感染，主要的感染部位是呼吸道感染，这可能是由于呼吸道直接与外界环境相接触，存在于空气中的病原菌很容易借助空气等介质的传播，引起呼吸道感染。而呼吸道感染之后的消化道感染往往也会因为前期呼吸道对病原的吸入而成为病原菌寄居的场所。在46例患者中，其中有5例患者的感染灶不明显，这可能是由于其免疫力较低，在感染症状轻微时被所使用的抗生素部分抑制，但又未完全抑制所出现的情况。有研究表明，在再生障碍性贫血的医院感染患者中主要是革兰阴性菌，与本研究具有一致性[6]。且从感染的细菌种类来看，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等多数在体内有定植，故此可说明再生障碍性贫血的院内感染中有很大一部分是内源性的感染。 

就相关医院感染的影响因素来看，在本研究中，不论是男女，其感染率都相近，说明院内感染与性别无较大关系；就年龄来看，年龄≥60岁的患者感染率较高，这可能是由于老年人本身的造血功能和机体免疫力均有明显的下降，再加上老年患者的自理能力较差，与家属和医护人员的接触频率较高而导致的感染；就患者住院时间来看，住院时间长，感染概率高，其道理显而易见，与Cagatay等[2]研究具有一致性；再者就是患者自身的白细胞数量，白细胞减少，由于白细胞的趋化作用及吞噬功能降低引起感染；最后就是患者所患有的其他合并疾病以及相关抗菌药物的使用，机体长期处于疾病状态，其机体免疫力均会有所降低，且长期的抗菌药物治疗会导致患者机体内部的正常菌群失调，从而给病原菌创造了感染的机会。医院是众多病原微生物的聚集地，患者之间、患者与医务工作人员之间的接触很多，也容易引起医院感染。此外，有侵入性操作的AA患者明显比无侵入性操作的AA患者的医院感染率高，说明侵入性操作也是高危因素之一[7]。 

针对以上再生障碍性贫血医院感染的特点以及危险因素的分析，作为医护人员，可以采取以下措施予以预防医院感染：（1）对患者进行正确的治疗引导，加强患者及其家属的疾病教育和管理，合理限制陪护人员数量；（2）严格执行相关消毒隔离制度，尤其是在白细胞数量相对极低时，需进行特殊隔离护理措施；（3）合理使用抗生素等，重视和积极防范院内感染，给患者创造一个良好的就医环境；（4）对老年患者、住院时间长的患者应该加强教育和管理，增强其自我管理意识，并且需要在一定程度上限制其接触人群的次数和人数；（5）严格执行无菌操作技术规程，并且尽可能的减少侵入性操作，以降低医院感染发生率[8-9]。综上所述，再生障碍性贫血的院内感染院因素较多，应及时控制相关危险因素，才能有效预防医院感染，减少患者治病开销，保障患者就医条件，进而提高其治愈率，最终提高生活质量。 

参考文献 

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医学细胞生物学重点笔记篇5

8月31日，宁夏新日恒力钢丝绳股份有限公司（600165.SH，下称新日恒力）2016年半年报，其子公司博雅干细胞科技有限公司（下称博雅干细胞）实现营业收入5043.76万元，归属于母公司所有者净利润1162.69万元。

博雅干细胞是新日恒力在去年举债斥资收购的。根据彼时新日恒力与博雅干细胞签署的业绩承诺协议，2016年博雅干细胞需要完成的归属母公司所有者净利润目标为不低于5000万元。扣除非经常性损益后，博雅干细胞上半年完成业绩1294万元，仅为承诺业绩的25.88%，差额巨大。

不仅与新日恒力之间的业绩承诺难以完成，《财经》记者调查发现，这笔收购背后，博雅干细胞还存在关联交易做高业绩、对外虚假宣传的嫌疑。 新日恒力负债收购

这笔收购之前，新日恒力是一家主营金属制品的上市公司。公司主导产品是钢丝绳、预应力钢绞线、钢丝。受煤炭、钢铁行业不景气及金属制品行业竞争加剧的影响，新日恒力在2014年、2015年1月-9月分别亏损1.08亿元、1733.63万元，将面临被ST的局面。在主营业务短时间内没有起色的情况下，重组成为可供选择的一个途径。

2015年8月25日，新日恒力晚间公告称，第一大股东上海中能企业发展（集团）有限公司（下称上海中能）筹划重大资产重组。11月19日，新日恒力重大资产购买报告书（下称购买报告书），以现金支付的方式跨界购买博雅干细胞80%股权，交易价格为15.656亿元。新日恒力复牌后股价连续8个交易日上涨，前7个交易日均封住涨停板。

新日恒力的购买报告书采用收益法的评估结果，博雅干细胞全部股权于评估基准日的股东全部权益价值为19.76亿元，较经审计净资产金额增值18.88亿元，增值率2152.83%。根据普华永道出具的审计报告，博雅干细胞2013年、2014年度以及2015年1月-6月的净利润为7371.36万元、8521.38万元、4013.77万元，归属于母公司所有者的净利润分别为123.53万元、102.42万元、833.16万元。

川财证券分析，可比业务类似的上市公司中源协和2015年干细胞存储份数约能达到36万份，2014年市盈率为864.11倍。此外，2015年11月，南京新百接受以72.55亿元的预期估值收购中国脐带血库集团（下称CO集团）65.1%股权，对应CO集团2014年业绩的市盈率为84.11倍。以2015年博雅干细胞业绩承诺3000万元计算，本次交易价格的动态市盈率为65.23倍，低于同行业上市公司水平。

有业内人士表示，博雅干细胞处于干细胞产业的上游，收取干细胞存储的管理费用，毛利率很高。不过其长期发展还有赖于干细胞应用的突破，而下游产业受政策收紧、技术有待突破等因素影响，目前只能说是“稳步发展”。

这笔收购前后，新日恒力分别向其大股东上海中能借款5亿元，并追加3亿元，用于公司支付并购资金、补充流动资金、归还高息贷款等。其还同时向广东南粤银行股份有限公司、平安信托有限责任公司分别申请总额不超过9亿元的并购资金贷款及流动资金贷款。

现金支付方式不用通过证监会重组委审核，这将大大缩短重组时间。然而，新日恒力的账面资金并不宽裕。这笔收购直接导致新日恒力负债率高企。此后，新日恒力先后两次筹划非公开发行股票以偿债，减轻财务压力。

这笔收购之前，新日恒力资产负债率一直维持在较高水平。根据信永中和出具的备考合并财务报表审阅报告，本次交易后新日恒力截至2015年6月30日的资产负债率将由原先的65.16%上升至78.82%。

随后，新日恒力谋划非公开发行事宜来偿还债款。2015年12月22日，新日恒力定增预案，拟以21.45元/股向上海中能非公开发行6937.06万股，募集资金总额14.88亿元，用于偿还股东借款、职工内部借款及银行贷款。

2016年6月14日，新日恒力财务总监陈瑞在投资者关系互动平台上回答提问时称：公司目前债务高企是因为收购博雅干细胞80%股权引起的，公司通过定增改善公司资本结构，降低公司财务费用，提高公司短期偿债能力及盈利能力。一周后的6月21日，由于其保荐机构西南证券被证监会立案调查，新日恒力宣告该次募资终止。

7月28日，新日恒力再次定增预案，公司拟向上海中能非公开发行不超过5042万股股票，发行价格为11.90元/股，募集资金总额不超过6亿元。募集资金将用于偿还银行贷款。 国资风险收益不对等

2006年，江苏省无锡市提出“530”计划，即“5年内引进不少于30名领军型海外留学人才来无锡创业”。博雅干细胞董事长许晓椿作为无锡“530”计划人才引进无锡。2010年4月9日，许晓椿成立无锡博雅生物工程有限公司（后更名为博雅干细胞科技有限公司）。

许晓椿是北京大学前校长许智宏之子。许智宏是无锡人士，亦在博雅干细胞的专家顾问委员会之列。

创立之初，博雅干细胞由无锡新融和药业有限公司（下称新融和药业）、无锡市马山生物医药工业园有限公司（下称马山医药园）、无锡金源产业投资发展集团有限公司（下称金源投资）发起设立的有限责任公司共同出资。其注册资本为1亿元，三名股东股权比例分别为 60%、20%、20%；最初实缴资本2000万元，金源投资、马山医药园各实缴1000万元。

金源投资和马山医药园都是无锡市属的国有企业。新融合药业则是许晓椿母亲李琦华实际控制的企业。多名熟悉博雅的人士表示，两家国企前后总计4000万元的出资相当于无锡政府方面为许晓椿做的风险投资。2010年8月14日，新融和药业将其所占有的博雅干细胞 60%股权无偿转让给许晓椿。

此后，许晓椿以转让其本人所持有的四项专利权进行作价出资。四项专利分别为“含鱼腥草素钠的非注射药剂”、“含有吗多明的喷雾剂”、“酮洛芬东干粉剂”、“治疗疼痛的药物组合”。四项专利分别用于治疗盆腔炎、缓解疼痛等。

据中国医学科学院的一位专家介绍，就专利内容看，该四项专利和干细胞技术不存在直接关联，若有间接关联，如果内容不直接体现在专利中也不被专利所保护，也就不存在细胞公司认定的价值。

根据资产评估报告记载的用途，四项专利也与博雅干细胞目前主营的干细胞业务毫无关联。

对于与干细胞业务并无关联的专利高价入股，博雅干细胞方面解释称，公司早期业务除了干细胞之外还有新药研发。这四项专利皆为新药研发相关专利。此后公司业务逐渐集中至干细胞行业。2014年上述四个专利由博雅控股集团旗下的新药研发公司以现金方式购回，并完成交割。公司在2015年完成的重大资产收购时标的资产不包含此部分。

两家无锡国企的“风险投资”并不对等。根据博雅干细胞设立时的出资协议约定，自标的公司成立之日起六年内，许晓椿有权回购70%马山医药园及金源投资出资持有的标的公司股权，其回购价格为马山医药园及金源投资相应出资金额乘以6.0%的年利率。此基础上，许晓椿有权以市场价格回购剩余30%马山医药园和金源投资出资持有的标的公司股权。

对于许晓椿来说，这是一笔稳赚不赔的买卖。如果博雅干细胞效益良好，许晓椿有权回购股份。两家国企拿到的收益款中70%的部分只是享受了每年6%的利息，只有30%的部分可以分享股权增值。如果博雅干细胞后续经营状况恶化，许晓椿可选择不回购股份，两家国企将面临投资减值的风险。

根据上述协议，2012年6月，金源投资将所持博雅干细胞20%股权作价2101.78万元转让给许晓椿，许晓椿持有博雅干细胞80%股份。金源投资2000万元投资，两年时间仅获得101.78万元投资收益。

2015年4月1日，马山医药园在无锡产权交易所挂牌转让博雅干细胞20%股权，获得2364.30万元价款，转让对象是无锡新融和投资中心（有限合伙，下称无锡新融和）。无锡新融和股东为许晓椿及其配偶李诣书。

根据江苏公勤资产评估有限公司出具的评估报告，此次转让以2014年10月31日评估基准日标的公司股东全部权益价值按收益法评估的市场价值为1.02亿元。博雅干细胞表示，实际转让总体估值约为1.18亿元，高于评估报告的评估值。转让后，许晓椿、无锡新融和分别持有博雅干细胞80%、20%的股权。

不过购买报告书在对2364.30万元价款进行说明时却使用了1.02亿元的评估值。30%部分以评估报告的评估公允价值1.02亿元为依据，乘以股权比例20%，即610.8万元。这与上述高于评估报告评估值的表述并不一致。

新日恒力收购前，博雅干细胞还进行一次股权转让。2015年4月5日，马山医药园转让股权四天后，无锡新融和将其持有的博雅干细胞15.75%股权分别转让给北京明润、茂信投资管理（杭州）有限公司（后解除转让协议）、杭州茂信、福茂及自然人杨利娟、王建荣。由于该次转让与马山医药园转让标的公司20%股权的时间间隔较近，因此该次标的公司股权的转让未再做评估。

半年之后，博雅干细胞股权再次进行转让。新日恒力购买博雅干细胞80%股权，采用收益法估值19.76亿元。资本市场人士分析，这笔收购考虑下游产业的未来发展，会有一定的估值溢价。

博雅干细胞表示，前次股权转让为财务投资人的少数股权收购，该等投资人不以控制企业为目的，不参与企业经营决策，交易价格由交易各方协商确定，因此交易价格较低。 许晓椿的对赌

新日恒力的收购并不是当期完成全部付款，其与许晓椿签有《业绩承诺及补偿协议》。按照协议，新日恒力先支付本次资产购买价款60%，这之后除资产购买价款的40%需根据业绩承诺完成情况分期支付给许晓椿外，已付清北京明润、杭州茂信、福茂、杨利娟、王建荣的所有资产购买价款。至此，许晓椿实现股权变现6.62亿元。

购买价款的剩余40%，即6.26亿元，则按照许晓椿对标的公司股权交割后的三个会计年度即2016年、2017年、2018年的业绩承诺及标的公司业绩完成情况，按照20%、10%、10%的比例分期支付。

许晓椿承诺2015年-2018年（下称承诺期）合并报表口径下归属于母公司所有者净利润分别不低于3000万元、5000万元、8000万元、14000万元，后三年的年增长率分别是66.67%、60%、75%。

根据协议安排，如果当期实际净利润大于承诺净利润，则应支付当期应付资产购买价款的全额；实际净利润低于承诺净利润，但高于承诺净利润的90%，那么则支付当年应付金额的50%；如果实际利润低于承诺利润的90%，则不进行支付。

实现这一业绩要求并不轻松。

据《财经》记者向熟悉干细胞行业的人士求证，博雅干细胞从事的干细胞分离存储业务属于干细胞产业的上游，其业务增长与新生儿增长速度正相关，同时也取决于公司在医院的推广力度。上述人士表示，随着婴儿潮来临，今年新生儿药品的销售增长幅度大约在30%左右，干细胞存储业务可参考这一数据。

许晓椿在向新日恒力转让博雅干细胞股权时签署了对赌协议。如博雅干细胞未完成2015年度承诺净利润，则许晓椿不仅无法获得当期的股权转让对价，还要在约定的期限内以自筹现金方式将承诺净利润与实际净利润之间的差额予以补偿。

2015年新日恒力年报显示，博雅干细胞去年实现营业收入9551.5万元，扣除非经常性损益后的净利润为2599.62万元。许晓椿需要以现金方式向新日恒力补偿400万元。

业绩承诺的兑现与否直接关系到许晓椿能否拿到剩余的6.26亿元。根据上述协议，如果博雅干细胞2016年、2017年、2018年度中某年度未达到承诺净利润，则许晓椿应按照对应的当期应补偿金额免除新日恒力与当期应补偿金额等额的资产购买价款的支付义务，实现业绩补偿义务的履行。如未支付的资产购买价款不足以通过上述补偿方式覆盖当期应补偿金额，则许晓椿还应按照协议约定的方式另行补偿。

2016年8月31日，新日恒力2016年半年报，显示博雅干细胞实现营业收入5043.76万元，扣除非经常性损益后归属于母公司所有者的净利润为1294万元。上半年博雅完成业绩仅为承诺业绩（5000万元）的25.88%。

今年7月15日，新日恒力的一份关联交易公告显示，博雅干细胞向无锡英科赛尔细胞工程有限公司（下称英科赛尔）提供技术服务。交易内容为博雅干细胞为其提供临床国际认证和技术咨询、服务，英科赛尔向博雅干细胞支付技术咨询服务费总计1440万元。英科赛尔是许晓椿夫妇全资控股的公司。

这引起了质疑，许晓椿是否为做高博雅干细胞业绩而由自己向博雅干细胞输送利益，来实现业绩承诺获得剩余的资产购买价款。据了解，英科赛尔近一年的股东权益为负399万元，营业收入274万元，净利润负266万元。

博雅控股集团为该协议的履行提供了连带责任保证。据新日恒力方面向英科赛尔求证，该笔资金将来源于博雅控股集团。博雅控股集团的实际控制人同样是许晓椿。

买方“扫货”，卖方则大方打折。新日恒力在给交易所的回函中表示，由于FACT标准国内尚无任何一家机构完成认证，博雅干细胞参考了较为类似的国际AABB标准认证的总费用进行测算，预估了英科赛尔对应FACT认证的技术咨询总费用为1440万元。博雅干细胞的AABB认证总费用约1800万元，博雅干细胞在此基础上“打8折”。

《财经》记者采访业界人士并查阅相关材料发现，AABB标准即美国血液银行协会制定的关于血液采集运输保存的一系列操作规范。企业可以向该协会提出申请，协会考察后认为企业符合标准的，在缴纳相关费用后即可以获得认证。此后每年需缴纳一定的费用。

前述行业的相关人士也表示，干细胞行业目前并没有强制性的国家标准。相关的国际认证可能会对拓展客户有一些帮助，但不能说有太好的可比性。像同行业的中原协和、CO集团这些上市公司基本上也符合这些标准，只是代表了业内的一种认可。

根据新日恒力9月14日回复上交所问询函的公告，这笔技术咨询服务费中仅有5000美元为博雅干细胞代为支付的申请FACT标准认证费用，剩余近1400多万元均为英科赛尔支付给博雅干细胞的“咨询服务费用”。

依靠着一项并非强制且影响有限的认证申请服务，博雅干细胞有望将2016年的经营业绩大幅提升。 涉嫌夸大宣传

脐血干细胞存储的资质审批由行政机关掌握。卫生部门曾在2010年批准设置北京、上海、天津、山东、广东、浙江、四川、重庆共计七家脐血库，此后再无增设。按照法规，只有这七家脐带血库可以进行脐血采集存储。

当时干细胞行业兴起，由于脐带血干细胞相关技术较为简单，在国际范围内早已成熟，且容易获得，尽管并无行政许可但大部分企业仍在开展相关业务。多名熟悉博雅干细胞的人士都对《财经》记者表示，当时，博雅干细胞亦在其中之列。

2011年10月，原卫生部了《关于加强脐带血造血干细胞管理工作的通知》，要求“未经批准，任何机构不得开展脐带血造血干细胞采集和脐带血造血干细胞治疗技术临床应用工作”。这一规定出台后，2012年，博雅干细胞的脐血业务增长量一落千丈，“掉了一半不止”。

博雅干细胞开始转向脐带干细胞和胎盘干细胞等领域。这些组织干细胞的分离存储业务并未受到行政法规的限制。此后两年业务规模才逐渐恢复到2012年的水平。

购买报告书显示，2013年到2015年上半年，博雅干细胞的收入构成按照销售区域分类，华东和华北地区的合计占比一直保持在85%-90%之间。多名博雅干细胞前高管表示，博雅干细胞在这两个市场占有率较高，江苏省内约有50%的市场占有率，北京则约有30%的市场占有率。

《财经》记者证实，在2013年至2015年间，博雅干细胞有包括首席技术官、销售总负责人在内的多名早年参与创业的副总级员工离职。其雅干细胞最主要的两个市场江苏和北京的两名负责人先后离开博雅干细胞，这恐对其未来市场带来负面影响。据熟悉博雅干细胞的人士称，多年来，博雅干细胞在江苏和北京市场之外都少有建树，市场开辟成效不大。

博雅干细胞目前从事的干细胞业务之干细胞主要来源于新生儿围产期组织中的胎盘干细胞。一名博雅干细胞原区域经理表示，干细胞提取和存储服务的销售，一般需要由销售人员做好医院妇产科医生的公关工作，“打点好关系”，才能获得允许在医院开展业务。此后一方面靠医生推荐，另一方面则由销售人员直接向孕妇推销。该名经理表示，一般需要给医生一定的返点，“销售很依赖销售人员与医院医生之间相互信任关系，没那么好做”。而销售负责人离开往往会带走自己手下所积累的医院资源。

博雅方面回复表示：“博雅的发展并不依靠任何一个人员的力量，靠的是团队的力量。而博雅的销售负责人是公司总裁李诣书，从未离职。”

多名博雅干细胞离职高管告诉《财经》记者，截至2015年，博雅干细胞所存储的干细胞存储份数在7000份-8000份左右，并未达到1万份。这与购买报告书中所披露的约1.6万份的总数相去甚远。不过，这一数据并未得到任何书面文件的证实。

博雅干细胞在不少对外宣传的内容存在夸大嫌疑。

在博雅干细胞的自我介绍、购买报告书等各类资料中，博雅干细胞均被描述为国内领先的干细胞行业企业，是国内唯一一家“通过了国际AABB标准、NRL标准和美国病理学会CAP标准认证”三个标准认证的干细胞企业。NRL是澳大利亚国家血清参比实验室的缩写，CAP是美国病理学家协会的缩写。与AABB类似，其认证都是对整体操作流程规范。

相关业内人士表示，这些认证与ISO质量管理体系认证相似，拥有这些认证说明机构在涉及血液的服务和产品的操作流程符合一定的要求和标准，但并不意味着在干细胞领域有多高的技术水平。之所以如此是因为目前国内干细胞行业缺乏政府或者行业标准，业内企业转而寻求国际标准认证来提升自身整体的品牌形象。

另外，在博雅干细胞的官方网站和新日恒力购买报告书中，都提到一个名为国际干细胞联合研究中心（International Consortium of Stem Cell Research， INCOSC）的机构。

根据博雅干细胞官网介绍，国际干细胞联合研究中心成立于2009年7月，占地250亩，由许晓椿教授联合了北京大学、中国科学院、英国罗斯林研究所、苏格兰再生医学中心等七所国内外知名干细胞研究机构共同参与发起成立。博雅干细胞正是隶属于该联合研究中心。

对于国际干细胞联合研究中心，博雅干细胞方面给与《财经》记者的书面回复称，英国罗斯林研究所所长、苏格兰再生医学中心主任多次到无锡并签署三方协议，并在2009年12月在无锡共同奠基了研究中心。

然而英国罗斯林研究所和苏格兰再生医学研究中心给《财经》记者的答复是，他们从未与博雅干细胞或者“国际干细胞联合研究中心”有任何联合或者研究上的合作。2009年，两所研究机构的代表曾与许晓椿有过会面并讨论合作的可能，但并没有达成任何协议。

一位熟悉博雅早期情况的人士表示，2009年，创业初期的许晓椿为了争取地方支持曾组织无锡卫生条线的相关领导前往两个研究所考察，但并没有达成任何合作。

被列为博雅科学顾问委员的苏格兰再生医学研究中心教授，克隆羊多莉之父伊恩・维尔穆特（Ian Wilmut）表示，他与博雅干细胞从未有过任何合作。

医学细胞生物学重点笔记篇6

关键词： 注意 规律 生物教学 学习效率

经常有教师抱怨说：某某学生上课注意力不集中，经常开小差。以前，我也有过这样的抱怨，但从心理学角度去分析，这种现象是非常正常的。有心理学家做过试验，在被动和无目的地去看一个单调而没有变化的事物时，要想注意力集中5秒钟都很困难，这是大脑皮层保护性抑制的表现，它可以避免不必要的精力消耗。反之，复杂而多变的事物，则可延长注意集中和稳定的时间。维持时间之长短，又取决于事物的复杂程度和变化程度的高低。但是，任何人的注意都不能以同样的强度维持20分钟以上。而在实际工作和学习中,如果允许在10―20分钟的集中注意后，松弛几秒钟，那么，注意的稳定性可保持数小时之久。由此，我们教师就应该好好思考，如何更好地让学生集中注意力，来提高课堂的学习效率。这引起我对“注意”的关注。

一、有关概念的阐述

注意是心理活动对一定对象的指向和集中，是心理过程的动力特征之一。它不是一种独立的心理过程，它与认识过程、情感过程、意忘过程难以分开，具有选择、保持、调节、监督的功能，是学生学习和记忆产生的前提。根据有无目的和意志努力程度，注意分为有意注意和无意注意。

无意注意，也称不随意注意，是没有预定目的，无需意志努力的，不由自主对一定事物所发生的注意，它易受刺激物本身的强度、对比度、活动性、变化性、新异刺激的影响，以及学生自身的需要、特殊情绪状态、直接兴趣等的影响。

有意注意，也称随意注意，是有预先目的，必要时需意志努力，主动地对一定事物所发生的注意。要保持有意注意，就必须加深对目的任务的理解，合理组织活动,培养间接兴趣，排除干扰。

二、注意规律在教学中的应用

（一）运用无意注意的规律组织教学

无意注意是由刺激物本身的特点引起的，刺激物本身的特点既可以成为顺利完成教学任务的因素，又可以成为造成学生学习分心的因素。因此，在教学过程中教师要善于利用有关刺激物的特点组织学生的注意。

1.消除无意注意的消极因素

消除那些容易分散学生注意教学内容的无意注意的消极因素，如保持教室的安静，教室内布置简朴，课件中没有教学内容无关的内容，如活动的卡通动物等。

2.利用无意注意的积极因素

充分利用容易引起学生注意教学内容的无意注意的积极因素，使学生在课上比较轻松地集中注意听讲。如教师文雅、大方、庄重、稳健的仪态和在学生中适当地走动。不但能增加生物课的吸引力和可信度，而且能给学生以美的享受，有利于学生注意力的集中。还有是教学方法要避免单调呆板、教学形式要多样化、教学组织要生动有趣、教学内容要丰富且逻辑性强等。

无意注意还可以由人本身的状念引起。因此，教师在教学中要考虑学生的需要、兴趣、知识经验和情绪状态，使教学方法、教学形式、教学内容符合学生的需要，切合学生的实际，引起学生的注意。

（二）运用有意注意的规律组织教学

学习是经验获得及行为改变的过程，是一种复杂的活动。学习过程中会遇到很多困难和干扰，如果学生只凭借无意注意是难以完成学习任务的，必须培养学生的有意注意。

1.进行学习目的性教育

经常进行学习目出性教育，明确为什么学习、每一部分学习内容的具体要求是什么，目的越明确，注意就越集中。

2.合理组织教学活动

合理组织教学活动，采取具体措施促使学生保持有意注意，如向学生提出问题，在学生刚开始注意分散时给予提示和批评，智力活动和实际操作相结合等。例如：在《细胞膜的成分和结构》教学时采用巧妙设计问题的方法，取得了很好的效果。具体做法如下：

在讲解细胞膜的化学组成时，设计了下述问题，要求学生用已有知识分析讨论：

（1）科学家在实验中发现：脂溶性物质极易通过细胞膜，并且细胞膜很容易被脂溶性溶剂所溶解。你认为，这一事实说明细胞膜的组成成分中应有什么物质。

（2）科学研究发现：细胞膜易被蛋白酶水解，说明细胞膜的组成成分中有什么物质。

（3）细胞膜中只有蛋白质和脂类这两种物质吗？

（4）1925年Gorter Grendel用丙酮提取了红细胞膜的磷脂，并将它在空气、水界面上展开，发现这片油脂层的面积相当于原来红细胞膜表面积的2倍。可以得出什么结论？为什么？

（5）蛋白质和糖类物质在膜上又是如何分布的？

当讲到《细胞膜的结构特点》时，我用闭路电视放了人鼠细胞融合的过程，同时讲述了如下内容：在人的细胞表面标记上红色的荧光物质，在鼠的细胞表面标记上绿色荧光物质，然后让两细胞融合，融合后的细胞膜上具有两种荧光，且分别位于细胞膜的两侧互不干涉，一段时间后，红色、绿色荧光交互排列布于整个胞膜的表面。根据这一事实，要求学生讨论回答:被标记的物质在膜上可以流动，说明构成细胞膜的成分不是静止的，而是可以流动的。

整个教学活动安排有序,问题环环相扣，学生的注意力得到了有效集中。而且在学生刚开始注意分散时给予提示和批评，并将智力活动和实际操作相结合等。

3.培养间接兴趣和坚强的意志品质

间接兴趣就是对事物或活动本身没有兴趣，但对事物或活动的未来结果感到需要而产生的兴趣。人对有间接兴趣的活动本身并没有需要，这种活动也不可能使人产生愉快的体验。如有的学生对学医感兴趣，将来想成为一名医生，由于要学好医学，就必须学好生物，这些学生对学习生物的兴趣就是间接兴趣。间接兴趣在一定条件下可以转化为直接兴趣，但需要坚强的意志努力。

（三）运用两种注意相互转换的规律组织教学

在教学中，如果教师过分要求学生以有意注意来进行学习，容易引起疲劳；反之，如果只让学生凭借无意注意来学习，则不利于他们克服学习过程中的困难去完成学习任务。所以，无论在整个教学过程中，还是在一堂课上，教师都应充分利用两种注意转换的规律来组织教学。

如在一堂课中，上课之初，教师就应该采取措施，通过组织教学活动把学生停留在上节课或课间的注意转移到本节课上来，对新的一节课形成有意注意。良好的开端往往是一节课成功的基础。如果在一节课的开始，教师就能抓住学生的心理，对整节课中学生注意力的集中会大有裨益。如，在讲“水分代谢”时，我设计了这样的引言：“把一块萝卜放在清水中一段时间后，重量会增加,而放在盐水中一段时间后，重量会减小，这是为什么？”这样一个一个的悬念引起了学生强烈的好奇心，并由此产生了思考，一下子将注意力集中起来。

当讲授新的教学内容时，教师可以使学生对教学内容产生无意注意。面部能表达非常丰富的情感，教师的面部表情是学生在生物课堂教学中体验教师情感的“温度计”，满面笑容，和颜悦色，给人以轻松欢愉的暗示；双眉紧锁，“板着脸”，给人以紧张忧虑的暗示。课堂教学的实践使我深深地感到:在生物课堂教学中，教师面带微笑、亲切自然的表情能给学生以积极的情绪体验，使他们感到老师和蔼可亲，从而勇于积极思维，敢于大胆发言。这样做有助于学生学习兴趣的激发，注意力集中的维持，记忆力的增强，理解力的加深。眼睛是人心灵的窗户，透过这扇窗户，师生间有效地交流着大量的情感信息。生物课堂教学中，教师的眼神对控制学生的注意力起着重要的作用。如教师亲切的目光会使整个课堂充满和谐的气氛；教师对某个思想“开小差”的学生的注视会使他马上产生“纠错意识”，把注意力重新集中到学习内容上来，起到“此时无声胜有声”的作用。

当讲授教学内容的重点、难点时，则必须设法让学生保持有意注意，充分理解和思考问题。在生物学教学中，教师要根据学生已有的认知结构和思维层次，有意识地制造矛盾，设疑问难,强化学生的思维，以利于解决问题。例如，在讲“蒸腾作用”时，向学生提出：“俗话说‘水往低处流’，为什么高大树木体内的水能从根部流到树冠？”又例如，在讲完“顶端优势”后，我向学生提出：“果树修剪、棉花适时打顶为什么能提高产量？”学生议论后得出：果树修剪、棉花打顶是为了打破顶端优势，使侧枝生长良好。接着我乘势追问：“所有的植物都要打破顶端优势吗？梧桐树长到一定的高度不打顶，会更好地遮荫吗？松树、杉树长到一定高度打顶，会获得高大的木材吗？”这样有意制造冲突，引起学生有意注意，积极思考答案，比教师直接阐明打破顶端优势和利用顶端优势的效果好得多。

当学生保持一段时间的高度紧张的有意注意后，教师要改变教学方式，使学生适当放松一下，或结合教学内容讲授一些有趣的例子，使学生由有意注意转为无意注意。例如，在讲过重点难点后，为了让学生放松一下，可以让学生跟教师一起画简笔画。简笔画可以使静态的过程动态化，教师通过边讲边画，由局部到整体，逐层深入地表现生物的动态变化过程，使学生对生物的本质有更深刻的认识。它与静态的挂图相比，可以避免过早暴露未讲授的部分，分散学生的注意力。讲“物质出入细胞的三种方式”时，为了让学生理解物质出入细胞时由高浓度运输到低浓度的过程不需要消耗细胞内的能量，反之则需要能量这个知识点，可以用一名高山滑雪者的滑雪过程来说明。高中生物理论性强，不可能要求学生每时每刻都能聚精会神，这就要求教师要注意捕捉学生的兴奋点。以简笔画来活跃课堂气氛，可谓寥寥几笔，胜似千言。这样，将有意注意转换成无意注意，让学生得到短时休息的同时，还巩固了学习的重点和难点。

在课要结束时，教师要提出明确的要求，使学生保持有意注意，然后布置作业。生物课堂总结是对一节生物课所学知识的提炼、概括和升华，是“压轴戏”。由于一节课结束前，学生的思维一般比较疲劳，注意力容易分散，教师进行课堂总结要力求做到：（1）内容要概括，不要泛泛而论；（2）语言要简炼，不要拉杂重复；（3）重点要突出，不要面面俱到。这样既可使学生注意力集中，又能加深学生对所学知识的理解，起到及时强化复习的作用。

无意注意和有意注意是两种性质不同的注意，但在实际教学工作中，两种注意都需要。如果只有有意注意，长时间学习会使学生疲劳。注意力容易分散，使学习进行不下去；如果只有无意注意，稍遇困难和干扰，注意力也容易分散，学习同样也进行不下去。无意注意和有意注意常常交替发生，运用好两者，能有效提高生物课堂的教学效率。

参考文献：

［1］周秋竹.浅析注意在课堂教学中的心理效果.鄂州大学学报，2004，（03）.

［2］林文瑞.论注意是心理过程的共同特征.福建教育学院学报，2003，（10）.

［3］吴雪琴.“有意后注意”在数学教学中的培养.江西教育，1997，（02）.

医学细胞生物学重点笔记篇7

回春术是按照宇宙“圆周运动”和“螺旋推进”理论，将人的动态形式按圆旋规则换化出有节奏的规律运动，通过这种运动形式便能激活人体细胞，达到治病、抗衰和返老还童的目标。

回春术有四个方面的内容：即一个目标，两个结合，三大特点，四个净化。

一个目标：练五环养生回春术将会使你健健康康、高高兴兴欢度120岁的自然天寿。曾老将军1986年因脑萎缩经点穴治愈后，如今96岁高龄仍兴致勃勃地准备突破百岁大关。

两个结合：

1． 肌体健康与精神健康并重养练结合。2．功能运动与静态兼修养练结合。

三大特点：

1．按照宇宙“圆周运动”和“螺旋推进”本源的运动规律进行养练，就能产生治病、健身、抗衰老特效。

2．五环养生回春术可以彻底消除“亚健康”状态，并能治疗一些医学顽症，如脑萎缩、痴呆症。

3．适合各年龄段的人养练。实践证明：青少年习练后能够开发智力，在上海丰收小学实践中已证明了这一点；中青年习练可以增强体质和提高工作效率；中老年习练后可以治病抗衰老和延年益寿。

四个净化：净化肠胃，净化血液，净化细胞，净化心灵。

第一个净化肠胃：

人的大小肠全长4.5―5米，排泄较慢，肠内溶物较多，一般情况下肠中废物有1―1.5公斤，长时间存留腹中，这还包括每天的正常大便在内，因此我们每个人都应经常排毒清肠净化肠胃功能。

我们通过多次办班观察，在每次节食训练中，有35%的人排黑便，92%的人达到了减肥的效果。

闵某，男，72岁，在学习班的第4天，排出两条约10cm的黑便臭不可闻，半个月的学习体重减了8公斤。贝某，女，74岁，巩膜检查体内毒素较重，肠胃功能自觉还好，每天1、2次大便。通过辟谷第5天时，开始排出像羊粪蛋大小的硬块，随后有一更大硬物卡在内，一个多小时也未排出来，后来将牙刷把洗干净后从里撬了出来，钉当一声落在便池，仔细一看原来是一个鸡蛋大的黑色结石，经追问病史，她说年青时患过肠结核。同时左膝患骨关节炎不能伸直，走路一瘸一拐，医院要她做手术，经过数月的锻炼，膝关节也意想不到的伸直痊愈了。巩膜检查也得到了根本改变。

现在肥胖的人越来越多，给健康带来很大的危害，2004年4月办班时，30人参加学习，半个月下来，体重减得最多的10公斤，最少的2公斤，平均减9公斤。

李某，57岁，身高168cm，体重80公斤，半个月下来，体重降至70公斤。学习前每天喝两顿酒，两包烟，学习后烟酒自然戒掉了，再闻着烟酒味就不舒服。

张某，女，40岁，身高155cm，体重81公斤，通过意能点穴和练操3个月减到62.5公斤，减掉18.5公斤，颈椎病、心脏病、坐骨神经痛，下肢浮肿也好了，一年多来一直保持较好的健康体型。

第二个净化血液：

血液循环是能量物质运输的重要环节之一。我们所吃的营养物质经消化、吸收后，需要血液运送到全身每一个细胞里去。如果血液里不干净，存在杂质或毒素，就会影响健康，导致细胞提前老化萎缩。如营养过盛时就会使血液黏稠度增高，造成千万微血管阻塞，会造成中风、偏瘫。如果血液酸碱平衡失调就会造成肝、肾结石。如果你生气就会在体内产生毒素，引发疾病等。因此人的循环特别是微循环系统，医学称为人的第二心脏。前苏联一位医学家称：“几乎所有的疾病都跟微循环有关。”我们在临床发现，许多脑供血不足的人，脑内微血管都有阻塞现象，因而造成脑梗塞、脑血栓甚至脑萎缩。

董某，男，72岁，医院磁共振检查确诊为脑梗塞，出现记忆力减退，神情冷漠，流口水，行动迟缓。老伴陪他来参加学习，练操时动作不协调，回家后经老伴领着每天3、4个小时锻炼，坚持不间断苦练，奇迹终于在他身上出现了，半年后不仅练操动作协调，也爱说话，还教别人练操。去空军总院体检时，保健科主任拿着磁共振片子惊奇地发现，前后片子反复对照观察简直不敢相信自己的眼睛，原来大脑中一块硬币大小的梗塞阴影消失了。再看前列腺检查结果，原来6.2cm现在也缩回到3.8cm正常范围。董老更是高兴的合不拢嘴，逢人主动讲话，锻炼更加积极了。

郝某，男，83岁，抗战时期老干部，患心房纤颤，发作时心跳每分钟200多次，上气不接下气。还有高血压、动脉硬化等10几种病。医院交待卧床休息，当得知办班消息后，他毅然决定要参加学习，全家十几口人都反对，最后谁也没说服他，女儿只好带着氧气瓶陪他来参加学习。到了养生基地当即吸了六袋氧气，随即马上给老人点穴治疗，当晚睡了一个好觉。第二天起床感到一切良好，他就跟大家一起上课和锻炼。两天后他感觉到全身都很轻松，就把所有药停了，每天在大院里散步，几次散步加起来2公里，连续半个月的学习锻炼，身体发生了明显的变化，杂志社记者来采访感叹不已。学习结束后和女儿高高兴兴回家，半年后领着老伴再次来学习了一个月。

第三个净化细胞：

细胞是人体组织的基本单位，细胞健康与否直接关系到身体健康和生死存亡。什么样的体质才算健康呢？一般认为细胞无病理病化，生理功能旺盛，精神状态良好，耐疲劳，有活力才算真正健康的体质。

如果细胞出现老化或萎缩，这是医学认为不可逆转的顽症。笔者通过实践观察，细胞萎缩经治疗可以复苏，如曾老将军1986年因脑萎缩影响到正常生活，经过半年多的意能点穴和锻炼奇迹般的恢复了健康。董老经过半年的锻炼，脑萎缩和脑梗塞得到了治愈，肖记者牙龈萎缩，牙已松动，经过半年的锻炼长出满口鲜嫩的牙龈来，白发也变黑了。张老师头面部老年斑较多，经过半年的锻炼，成块的老年斑脱落下来，这些都是人体细胞发生根本变化的结果。

凡是参加学习，经过数月的锻炼后，全身细胞活力都会增强，面部皮肤焕发出青春的光泽，显得年青有精神。

第四个净化心灵：

净化心灵就是人的心理要健康，心灵美。世界卫生组织提出亚健康一词后，又提出了精神健康。精神又体现在人的心情、情绪上面，人的健康与心情密切相关，一切着急、上火、担心、牵挂、害怕、生气、发怒等等不安心情都会影响健康。

医学细胞生物学重点笔记篇8

摘要:目的观察异十三基二胺(D79)的体内外抗肿瘤作用。方法应用锥虫蓝排染法、MTT法检测D79对多种体外培养肿瘤细胞的细胞毒作用;Bliss法观察D79急性毒性实验;在可耐受剂量下观察D79对小鼠移植性实体瘤U14、腹水瘤EAC、HAC的抑制率。结果D79显著杀伤多种体外肿瘤细胞,药物作用48h,IC501.24~3.36μg/mL;D79的LD50为36.49mg/kg(静脉注射)。D79抑制小鼠移植性实体瘤U14体内生长、提高移植性腹水瘤EAC、HAC小鼠生存时间的作用呈剂量依赖性。结论D79有较强的体内外抗肿瘤作用。

关键词:抗肿瘤药;肿瘤细胞,培养的;肿瘤移植;异十三基二胺

ABSTRACT:ObjectiveToobservetheantitumoreffectofallotritridecyldiamidogen(D79)invivoandinvitro.MethodsThecytotoxiceffectsofD79onvarioustumorcellslinesculturedinvitroweredeterminedbytrypanbluedyeexclusiontest,MTTmethod.AcutetoxicityofD79wasevaluatedbyBlissmethod:atatolerabledoselevel,D79wasadministratedtotreattransplantedsolidtumorU14andascetictumorsEACandHAC.Tumorweightinhibitionandlifeextensionwereobserved.ResultsD79inducedsignificantgrowtharrestinvariousmalignanttumorcelllinesculturedinvitro.IC50ofthesetumorcellsexposedtothedrugfor48hoursrangedfrom1.24~3.36μg/mL.LD50ofD79was36.49mg/kg(mice,iv).D79inhibitinvivogrowthofimplantedsolidtumorU14andprolongedlivetimeimplantedascetictumorsEACandHACofmiceinadosedependmentmanner.ConclusionD79hadobviousantitumoractivityinvivoandinvitro.

KEYWORDS:antineoplasticagents;tumorcells,cultured;neoplasmstransplantation;allotritridecyldiamidogen

2000年,Yang等证实末端支链饱和脂肪酸13甲基肉豆蔻酸(13MTD)体内外抗肿瘤作用并发现其主要通过诱导肿瘤细胞凋亡发挥作用[1]。异十三基二胺(D79)是在13MTD基础上合成的一种新型胺类化合物,其化学结构明显区别于当前常规抗肿瘤药物。笔者研究其体内外抗肿瘤作用,初步结果报告如下。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1药品

2%D79溶液(福建省振华851生物制药有限公司,批号040507);RPMI1640培养基干粉(美国Gibco公司);小牛血清(美国HyClone公司);胰蛋白酶(美国Difco公司);锥虫蓝及噻唑蓝(MTT,美国Sigma公司);环磷酰胺(上海华联制药厂生产,批号040202);氟尿嘧啶(250mg/10mL,天津金耀氨基酸有限公司,批号0501182);其余试剂均为国产分析纯。

1.1.2仪器

6孔及96孔细胞培养板(美国Coster公司);生物安全柜(HFSafe1200型)及气体培养箱(BB5060,上海力申科学仪器有限公司);全自动酶标仪(Mod550,美国BioRad公司);倒置显微镜及正置显微镜(日本Olympus公司);微量称质量仪(BP221S,德国Sartorius公司);电子天平(TD6001B,余姚市金诺天平仪器有限公司);振荡器(2002型,常州国华电器有限公司)。

1.1.3动物及瘤株

昆明种小鼠,体质量(20±2)g,雌雄不限,由福建医科大学实验动物中心(合格证号:医动字2306号)。每次实验使用同一性别小鼠。小鼠子宫颈癌实体型瘤株(U14)、小鼠艾氏腹水瘤(EAC)及肝癌腹水瘤(HAC)均引自福建医科大学药学系。

1.1.4肿瘤细胞

人慢性粒细胞白血病细胞株(K562)、人早幼粒白血病细胞株(HL60)、小鼠黑色素瘤细胞株(B16)、人肝癌细胞株(HEPG2)、人胃腺癌细胞株(SGC7901)均引自福建医科大学药学系。

1.2方法

1.2.1细胞培养

K562、HL60、B16、HEPG2、SGC7901细胞株培养于含10%小牛血清、青霉素100IU/mL、链霉素100μg/mL的RPMI1640培养液中,每3天换液一次,每5天传代一次。细胞均置于37℃、体积分数为0.05的CO2,饱和湿度的气体培养箱中。

1.2.2锥虫蓝排染法

取对数生长期的HL60、K562细胞,以全培养液稀释成5×104mL1单细胞悬液,接种于96孔细胞培养板,每个浓度复种4孔,每孔190μL,置于气体培养箱培养。12h后D79组每孔加不同浓度D7910μL,对照组加等量溶剂。共培养48h后每孔加0.4%锥虫蓝100μL,染色5min。计数各组拒染活细胞数,按下式计算抑制率：

抑制率%=(1药物组活细胞数/对照组活细胞数)×100%

直线回归法测该药的半数抑制浓度(IC50)。实验重复3次[2]。

1.2.3MTT法

取对数生长期的B16、HEPG2、SGC7901细胞,0.25%胰酶PBS液消化后,全培养液稀释成5×104mL1单细胞悬液,接种于96孔细胞培养板,每个浓度复种4孔,每孔190μL。置于气体培养箱内,12h后D79组每孔加不同浓度D7910μL,对照组加等量溶剂,共培养48h。反应结束前4h每孔加入MTT(1mg/mL)50μL。继续培养4h,吸尽上清,每孔加入DMSO200μL充分溶解MTT还原产物。酶标仪550nm检测光密度(Dλ)并计算抑制率。直线回归法计算IC50。实验重复3次[2]。

抑制率%=[1药物组D(550nm)值/对照组D(550nm)值]×100%

1.2.4D79急性毒性实验

根据文献[3]方法,小鼠静脉注射(iv)不同剂量D79,连续观察7d。

1.2.5小鼠移植性肿瘤接种及传代

1.2.5.1U14实体瘤接种传代[4]

取肿瘤生长旺盛的小鼠,无菌操作摘取实体肿瘤,称质量,按1∶4比例加入无菌生理盐水,磨成匀浆,取0.2mL接种于小鼠右腋部皮下。

1.2.5.2EAC、HAC腹水瘤接种传代[4]

取肿瘤生长旺盛的小鼠,无菌操作抽取腹水,称体积后按1∶4比例加入无菌生理盐水,取0.2mL接种于小鼠腹腔内。

1.2.6D79对小鼠移植性肿瘤的抑制作用

根据急性毒性实验结果,选择3个剂量(10.0,7.0,4.9mg・kg1・d1)连续腹腔注射(ip)。接种肿瘤后按体质量随机分组,设阴性对照组、阳性对照组及D79组。阳性对照组给予环磷酰胺或氟尿嘧啶[1，3],阴性对照组给予等量溶剂,D79组按给予剂量分为高、中、低剂量组;于接种当日开始给药(ip),连续10d。U14荷瘤小鼠于实验第12天取瘤称质量,计算瘤质量抑制率。EAC、HAC荷瘤小鼠记录实验小鼠生存时间,并计算生命延长率。

瘤质量抑制率%=(1药物组平均瘤质量/阴性对照组平均瘤质量)×100%

生命延长率%=(药物组平均生存时间/阴性对照组平均生存时间1)×100%

1.3统计学处理

数据以x±s表示。采用SPSS11.5统计软件处理,差异显著性检验采用方差分析。

2结果

2.1D79对多种肿瘤细胞的体外细胞毒作用

D790.25~4.00μg/mL作用48h,对多种体外培养肿瘤细胞均产生显著杀伤作用,抑制率随药物剂量的增加而升高,IC501.24~3.36μg/mL(表1)。表1D79对肿瘤细胞的体外细胞毒作用（略）

2.2D79小鼠急性毒性实验

小鼠ivD79后未发现明显异常。死亡小鼠解剖观察主要脏器未发现明显异常。D79急性毒性实验结果见表2。表2小鼠静脉注射D79急性毒性实验（略）

2.3D79对小鼠移植性肿瘤U14的抑制作用

结果见表3。表3D79对小鼠移植性肿瘤U14的抑制作用（略）

2.4D79对小鼠移植性肿瘤EAC、HAC的抑制作用

结果见表4。表4D79对小鼠移植性肿瘤EAC、HAC的抑制作用（略）

3讨论

恶性肿瘤是本世纪人类面临最大威胁的疾病之一。目前临床常用抗肿瘤药物广泛存在对肿瘤选择差、毒副作用大以及易产生耐药性等缺点，因此,寻找疗效好、毒副作用小的新型抗肿瘤药已成为人类战胜恶性肿瘤的当务之急。D79是在13MTD基础上合成的一种新型胺类化合物,其化学结构明显区别于当前常规抗肿瘤药物[5],因此可能不易与临床常规抗肿瘤药物发生交叉耐药。

13MTD对多种体外培养肿瘤细胞具有杀伤作用,抑制裸鼠原位移植人前列腺癌细胞株及肝癌细胞株肿瘤的生长,其体内外抗肿瘤作用主要通过诱导肿瘤细胞凋亡发挥作用[1]。本实验中,D79对K562、HL60、B16等5种体外培养肿瘤细胞均有显著杀伤作用,并且作用呈剂量依赖性。对人早幼粒白血病细胞株HL60最敏感,对人肝癌细胞株HEPG2最不敏感,平均IC50在1.24~3.36μg/mL。D79小鼠急性毒性实验结果Bliss法计算LD50=36.49mg/kg(iv),其LD95是32.34~41.18mg/kg(iv)。D79在可耐受剂量下,其对小鼠移植性宫颈癌U14实体瘤和肝癌HAC及EAC腹水瘤亦有明显的剂量依赖性抑制作用。D79体内外抗肿瘤作用明显强于13MTD[1]。D79是在13MTD基础上合成的一种新型胺类化合物,因此笔者推测D79可能亦通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。

D79有较强的体内外抗肿瘤作用,有望成为一种广谱、强效、毒性小的新型抗肿瘤药物,笔者将进一步研究其抗肿瘤作用机制。

参考文献：

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[3]徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].2版.北京:人民卫生出版社,1991:201206.

医学细胞生物学重点笔记篇9

【摘要】 目的 研究阿米卡星(amikacin，amk)在不同给药时间内对豚鼠耳蜗毛细胞的损伤作用，探讨amk的耳毒性。方法 豚鼠随机分为对照组、amk 3 d组、amk 7 d组和amk 11 d组。采用异硫氰酸四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽荧光染色方法，并结合听脑干反应(auditory brainstem response，abr)测试，观察用药前后耳蜗毛细胞形态及听功能的改变。结果 amk首先损伤耳蜗底回的外毛细胞,并且随着给药时间延长，损伤逐渐向顶回发展，外毛细胞缺失明显增多，而amk对内毛细胞的损伤要轻于外毛细胞。听功能改变与形态学变化基本一致。结论 amk可损伤豚鼠耳蜗毛细胞，导致听功能下降。

【关键词】 阿米卡星;豚鼠;耳蜗;听脑干反应

impairment effect of amikacin on cochlear hair cells in guinea pigliu shuangyue, wang aimei, xu tao, mu hua(department of physiology, liaoning medical university, jinzhou 121001 china)abstract:objective to investigate the impairment effect of amikacin (amk) on cochlear hair cells in guinea pig at different injection time, and to explore ototoxicity of amk. methods guinea pigs were randomly assigned to four groups: control group, amk 3-day group, 7-day group and 11-day group. tetramethylrhodamine isothiocyanate-labeled phalloidine staining and auditory brainstem response (abr) measurement were used to evaluate the changes of hair cells morphology and auditory function before and after the drug treatment. results outer hair cells (ohcs) in the basal turns were first impaired by amk, and the impairment of ohcs developed to the apical turns with time prolonging, and the loss of ohcs was increased significantly. the injury of inner hair cells (ihcs) induced by amk was lighter than ohcs. change of auditory function was basically consistent with that of morphology. conclusions amk can damage the cochlear hair cells, leading to decline in auditory function.

key words:amikacin; guinea pig; cochlea; auditory brainstem response

氨基糖苷类抗生素(aminoglycoside antibiotics，aman)具有强大的抗革兰氏阴性杆菌的作用, 加之价格低廉, 是临床控制感染的常用抗生素[1]。但是aman具有严重的耳毒性，可导致耳蜗毛细胞、前庭毛细胞及螺旋神经节细胞的损伤[2-3]。阿米卡星(amikacin, amk)为半合成的aman，亦可对耳蜗毛细胞造成不可逆性的损伤[4]，然而amk在不同给药时间内对豚鼠耳蜗毛细胞的损伤特点及其与听功能变化的关系，目前尚不清楚。据此，本研究应用异硫氰酸四甲基罗丹明(tetramethylrhodamine isothiocyanate，tritc)标记的鬼笔环肽荧光染色方法，并结合听脑干反应(auditory brainstem response，abr)测试，观察用药前后豚鼠耳蜗毛细胞形态及听功能的改变，以探讨amk的耳毒性。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康白毛红目豚鼠47 只，体重250～300 g，雌雄不限，耳廓反射灵敏，无中耳炎，由辽宁医学院实验动物中心提供。实验期间所有豚鼠均在安静状态下饲养并给予常规饮食。

1.2 主要试剂和仪器

阿米卡星注射液(0.1 g/ml，批号090327)由苏州第六制药厂生产，tritc-鬼笔环肽购自美国sigma公司，smart ep & oae听觉诱发电位-耳声发射记录系统由美国智听公司生产，zeiss a1荧光显微镜由德国zeiss公司生产。

1.3 动物分组与耳毒模型建立

将动物随机分成4 组，即对照组10 只，amk 3 d组11 只，amk 7 d组12 只，amk 11 d组13 只。以上4 组中，amk 3 d组、7 d组和11 d组每天肌肉注射amk 400 mg/kg，分别连续给药3 d、7 d和11 d;对照组则每日肌肉注射等量生理盐水。用药期间监测动物体重以调整药量。

1.4 abr测试

各组动物于用药前及停药后24小时内分别测试abr。操作在隔音屏蔽室内进行。豚鼠用1 %戊巴比妥钠40 mg/ kg 经腹腔麻醉后，将电极的正极置于动物颅顶正中皮下，负极置于给声侧耳廓后下，接地电极置于对侧耳廓后下，屏蔽耳机距测试豚鼠外耳道口0.5 cm。应用smart ep & oae听觉诱发电位-耳声发射记录系统给予短纯音(tone burst)刺激, 选取4、12、24 khz 3个频率分别进行测试并记录abr阈值(听阈)。重复率39.10次/s，带通滤波100～1 500 hz，叠加1 024 次，扫描时程16.0 ms。声刺激强度从95 db spl开始，以5 db逐次递减，听阈判定以刚出现abr ⅲ波为准并至少重复两次。同一刺激频率下给药前后的听阈差值记为abr阈移。

1.5 耳蜗铺片tritc-鬼笔环肽荧光染色

各组豚鼠于最后一次abr测试结束后，快速断头，取出听泡。解剖显微镜下去除镫骨，打开前庭窗和蜗窗，用含有4%多聚甲醛的0.1 m pbs(ph 7.4)灌流3 次，并置于该溶液中4 ℃下固定24 h。然后将标本置于8 % edta中脱钙2～3 d。pbs漂洗2 次后，于解剖显微镜下分离全耳蜗基底膜。将基底膜置于0.25% triton x-100溶液中浸泡50 min，然后进行tritc-鬼笔环肽染色45 min。pbs漂洗后分回铺片，以荧光封固剂封片。荧光显微镜下观察各回毛细胞损伤情况。

1.6 统计学分析

应用spss 16.0统计软件包对实验数据进行统计学分析，数据以±s表示。各组之间abr阈移的比较采用单因素方差分析，p<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 tritc-鬼笔环肽荧光染色

荧光显微镜下观察，可见tritc标记的鬼笔环肽染色呈现红色荧光，主要定位在外毛细胞(outer hair cell, ohc)和内毛细胞(inner hair cell, ihc)的静纤毛、表皮板。此外，deiter细胞等亦有丝状f-肌动蛋白(f-actin)的表达。

对照组耳蜗毛细胞形态结构完好，三排ohc的纤毛呈v 形排列整齐，一排ihc的纤毛呈一形排列，耳蜗各回ohc 和ihc均无缺失(图1 a)。amk 3 d组耳蜗底回ohc偶有缺失，而其它回ohc以及各回ihc均无损伤(图1b)。amk 7 d组耳蜗底回ohc的缺失有所增多，并向上发展到第二回;ihc基本正常(图1 c)。amk 11 d组耳蜗底回ohc出现大量缺失并向上延伸到顶回，缺失区域被deiter细胞取代形成网状瘢痕;ihc出现散在损伤(图1 d)。

2.2 abr测试

连续给药后，在各刺激频率下，amk 3 d组豚鼠的abr阈移与对照组比较均无显著性差异(p>0.05);amk 7 d和11 d组豚鼠的abr阈移与对照组比较均有显著性差异 (p<0.01)，并且随着amk给药时间的延长，abr阈移亦明显增大(p<0.01)(图2)。注：与对照组比较p<0.01，*与amk 3 d组比较p<0.01，与amk 7 d组比较p<0.01

3 讨 论

f-actin是一种耳蜗毛细胞骨架蛋白，具有收缩及固定静纤毛、使ohc运动、保持毛细胞形状以及支持和传导等多种作用[5]。tritc标记的鬼笔环肽是一种特殊的f-actin标记物，因此可以用于识别耳蜗毛细胞，判断其形态变化。我们采用耳蜗基底膜铺片，观察到经tritc标记的鬼笔环肽染色呈现红色荧光，主要定位在ohc和ihc的静纤毛、表皮板，并且在deiters等支持细胞也有f-actin的表达。这与以往学者的观察结果相一致[6]。

在体和离体实验表明，aman引起的耳蜗毛细胞损害总是从耳蜗底回开始并逐渐向顶回发展，并且ohc的损伤要先于ihc [7]。本实验观察到，amk首先损伤耳蜗底回的ohc，并且随着给药时间延长，ohc损伤从底回向顶回延伸，ohc缺失数量逐渐增多，而ihc的损伤要远轻于ohc，符合aman耳毒性的损伤规律。丁大连等[7]125-131将bodipy标记的庆大霉素投放到耳蜗器官培养系统，观察到ohc摄取庆大霉素的能力强于ihc，底回ohc摄取庆大霉素的能力强于顶回ohc。因此，豚鼠耳蜗顶回和底回对amk的敏感性不同，可能与耳蜗顶回和底回ohc对amk的摄取能力不同有关。

巴云鹏等[8]报道，豚鼠连续注射amk 3 d之内，听力损伤不明显，而连续用药6 d后，与用药前相比abr阈值则有显著的变化。我们观察到的结果与巴云鹏等的研究结果基本一致。本实验连续注射amk 3 d后，abr阈移较对照组无明显变化(p>0.05);而连续注射amk 7 d后，abr阈移明显增大，并且在连续注射11 d后，abr阈移达到最大，与形态学损伤相平行;并且随着给药时间的延长，amk的耳毒性效应亦逐渐增强，呈现明显的时效关系。此外，本实验还观察到，虽然amk 3 d组豚鼠abr阈移与对照组比较无显著性差异，但是耳蜗底回已开始有ohc缺失，表明amk引起耳蜗形态方面的损伤要早于听功能的改变，同时也进一步证实了aman可在内耳蓄积，而最后的听力损伤是这种蓄积的结果[7]125-131。

目前认为，aman可以与金属铁形成aman-铁复合物，其具有氧化还原活性，可催化体内自由基的大量产生。过多的自由基将打破其在体内的平衡，通过激活调节细胞死亡的信号转导途径及其相关基因，使构成生物膜的脂质或蛋白质、核酸等生命大分子发生过氧化，从而引起耳蜗毛细胞损伤及死亡，最终导致听力丧失。为此，人们尝试应用依布硒啉、甲磺酸去铁胺(deferoxamine mesylate，dfo)等抗氧化剂来防护amk的耳毒性并取得了较好效果[4]213-217,[8]157-161，表明amk的耳毒性亦与其促进自由基的过量生成有关。至于amk的耳毒性损伤中，自由基通过激活哪些信号转导途径继而引起耳蜗毛细胞的死亡，尚需进一步深入研究。

【参考文献】

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医学细胞生物学重点笔记篇10

1　材料与方法

1.1　实验材料　pIRES-p21waf1真核表达载体、人胃癌细胞系BGC-823（由青岛大学医学院附属医院中心实验室构建并惠赠），基因转染试剂盒（QIAGEN公司），Trizol试剂、DMEM-高糖培养基（Invitrogen公司），RT-PCR试剂盒（Takara公司），p21waf1及3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）引物及各自Taqman探针（由青岛大学医学院附属医院中心实验室提供），鼠抗人p21waf1单克隆抗体（Santa Cruz公司），兔抗鼠二抗、四甲基偶氮唑蓝（MTT）（QIAGEN公司）。

1.2　细胞培养方法　人胃癌细胞系BGC-823培养条件为含10％胎牛血清的DMEM-高糖完全培养液，37 ℃、5％CO2饱和湿度孵箱中孵育。倒置相差显微镜观察细胞形态，取对数生长期细胞进行相关实验。

1.3　基因转染条件和方法　参照QIAGEN转染试剂盒说明书进行。采用24孔板转染细胞，分三个组，分别为pIRES-p21waf1转染组、pIRES-neo空载体组、未转染组。

1.4　p21waf1 mRNA表达的检测　依次收集转染后12 h、24 h、48 h、3 d、5 d的各组细胞，按照Trizol试剂盒说明提取总RNA。p21waf1基因引物设计：上游：5’-GGACAGCAGAGCACC

1.5　p21waf1蛋白表达的检测　依次收集转染后12 h、24 h、48 h、3 d、5 d的各组细胞，提取细胞总蛋白，进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，转膜，进行一抗（鼠抗人p21单克隆抗体）、二抗（辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠二抗）孵育和显色，曝光并照相。使用HPIAS-1000型全自动图像分析仪分析蛋白条带灰度值。

1.6　细胞增殖能力的检测　各组均取对数生长期的细胞，采用经典的MTT法检测后，绘制细胞生长曲线，分析各组细胞的增殖能力。

1.7　细胞周期分布的检测　依次收集转染后12 h、24 h、48 h、3 d、5 d的各组细胞，各约1×106个细胞，加入终浓度70％冷乙醇，4 ℃固定24 h，PBS洗涤离心三遍，加入Rnase酶（2 mg/ml）于37 ℃水浴30 min，再加碘化丙啶（25 mg/ml）染色，4 ℃避光20 min，经尼龙网滤过后，上流式细胞仪检测各组细胞周期分布情况。

1.8　统计学处理　采用SPSS 13.0统计软件包进行处理，计量资料以（x±s）表示，两组间比较采用t 检验，计数资料采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.3　p21waf1基因转染对胃癌细胞BGC-823细胞增殖的影响　MTT证明，p21 waf1转染组胃癌细胞系BGC-823的增殖速度明显要低于空载体组、未转染组，p21waf1转染组在生长5 d后出现增殖速度减慢，而空载体组及未转染组则表现出持续增殖的态势，差异有统计学意义（P<0.01）。而空载体组及未转染组两组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。各组p21waf1蛋白表达见图3。

3　讨论

据众多研究表明，细胞周期失去控制是肿瘤细胞恶性增殖重要原因之一。

本研究将外源性p21waf1基因转染人胃癌细胞系BGC-823中后，p21waf1转染细胞组，p21waf1mRNA和p21waf1蛋白均高表达；p21waf1转染组BGC-823细胞生长速度低于空载体组和未转染组；流式细胞仪观察到p21waf1蛋白高表达使BGC-823细胞发生G1/S阻滞，G1期细胞数目明显要多于空载体组和未转染组，而S期细胞数则明显要低于空载体组和未转染组，并出现凋亡峰。笔者认为，外源性p21waf1基因转染且稳定表达后，可能通过p21waf1-cyclins-CDKs途径，起到对CDKs和PCNA的活性的双重抑制，进而使癌细胞DNA合成及细胞周期演进受阻，最终导致癌细胞增殖活性明显降低，大量停滞于G1期。根据本文结果，笔者认为，外源性p21waf1基因转染可以抑制人胃癌细胞系BGC-823细胞增殖和促进细胞凋亡，将来可能为研究胃癌的治疗方法提供一条新的思路。

参考文献

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