牡丹皮乙醇提取工艺研究论文

【摘要】目的：探讨牡丹皮提取工艺的最佳条件。方法：采用正交实验法，以芍药苷含量为指标，用高效液相法测定。结果：提取次数和乙醇浓度对提取效果有非常显著性和显著性影响。结论：最佳工艺条件为5倍量75%的乙醇提取3次，每次1h。

【关键词】牡丹皮；正交设计；提取工艺；芍药苷；高效液相色谱法

牡丹皮为毛茛科植物牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr.)的干燥根皮，具有清热凉血，活血化瘀的功效。牡丹根皮中含芍药苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷、丹皮酚、丹皮酚苷、丹皮酚原苷和丹皮酚新苷等成分。药理实验表明，芍药苷体内、体外均能抑制ADP或胶原诱导的血小板聚集［1］，应属牡丹皮抗缺血性中风的主要有效成分之一。本文采用正交实验法，以HPLC法测定的芍药苷的提取量为指标，对牡丹皮乙醇提取工艺进行优选，为牡丹皮的开发应用提供了实验依据。

1仪器和试药

高效液相色谱仪：日本岛津10Avp高效液相色谱仪(LC10Atvp双泵，SPDM10Avp二极管阵列检测器，SIL10Advp自动进样器，CTO10Avp柱温箱);HypersilODS填料色谱柱(ID4.6×250mm)(大连依利特化学仪器有限公司);分析天平：LIBRORL16ODTP分析天平(日本岛津)、AE240分析天平(瑞士METTLER);芍药苷对照品(07369710)：中国药品生物制品检定所(为含量测定用)。牡丹皮药材(购自四川省电江药材基地，经鉴定为牡丹皮正品)，所用乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。

2提取工艺研究

2.1方法本文采用乙醇加热回流法对牡丹皮进行提取，选择回流次数、乙醇浓度、回流时间和乙醇用量等4个主要影响因素，每个因素选取3个水平。选用L9(34)正交实验法进行实验，选定的因素水平表见表1。

表1因素水平表（略）

2.1.1色谱条件经试验，确定流动相为乙腈水(20：80)，流速1ml/min，柱温40℃，测定波长为230nm进样量4μl。

2.1.2对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品2.40mg，置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含芍药苷96μg)。

2.2供试样品溶液的制备精密称取9份牡丹皮药材粗粉50g，按L9(34)表各试验号规定方法进行实验，提取液分别浓缩并转移至100ml容量瓶，用适量乙醇稀释至刻度，摇匀，静置，即得样品溶液。精密吸取上述样品溶液各1ml，分别置25ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试样品溶液。

2.3供试样品溶液测定及结果精密吸取供试样品溶液与对照品溶液各4μl，注入液相色谱仪，测定，计算出供试样品溶液中芍药苷的浓度，结果见表2；方差分析见表3。

表2正交试验设计及结果（略）

由以上结果可知，牡丹皮乙醇提取的最佳工艺条件确定为A3B2C1D1，即5倍量75%乙醇提取3次，每次1h。

表3方差分析（略）

3小结

3.1芍药苷为牡丹皮中主要活性成分之一，其含量测定方法较多，如毛细管区带电泳法［2］，薄层扫描法［3］，高效液相色谱法［4-5］等。笔者采用HPLC法进行实验，并进行了相应的方法学试验。结果表明本法各方面符合中华人民共和国药典(2005版)和中药新药研制的有关规定。在试验中，根据牡丹皮含量测定结果，制定了牡丹皮中芍药苷的含量限度，为控制实验用牡丹皮药材的质量提供了依据。本文所选含量测定方法操作简单，结果准确，重现性好。

3.2关于芍药苷含量测定方法中流动相的选择，曾选用乙腈水(10：90、20：80、30：70)和甲醇水(20：80、30：70、40：60)等依次进行实验，结果显示乙腈水(20：80)作流动相时，牡丹皮供试品色谱中芍药苷与杂质峰可达基线分离，峰形对称，且保留时间适宜，故采用乙腈水(20：80)作为流动相。

3.3有文献记载以水提醇沉法提取丹皮中芍药苷［6］，但考虑到芍药苷醇溶性优于水溶性，在前期实验中经比较，水提醇沉提取物中芍药苷得率低于乙醇提取物，且其操作较繁，故本文直接采用乙醇提取法，正交实验得出最佳提取工艺条件为乙醇浓度75%，乙醇用量为药材量的5倍，加热回流时间为1h，回流次数为3次。

致谢；河南省驻马店市药品检验所

【参考文献】

［1］洪涛，张家勋，李嘉珏，等.中国野生牡丹研究(一)［J］.中草药,1994,(4):16.

［2］沈保安.药材牡丹皮的原植物·芍药属一新种［J］.植物分类学报，1997，35(4):360.

［3］洪德元，潘开玉，谢中稳.银屏牡丹·花王牡丹的野生近亲［J］.植物分类学报，1998，36(6):515.

［4］黄泰康.常用中药成分与药理手册［M］.北京：中国医药科技出版社，1994.

［5］中华人民共和国卫生部.中国药典［M］.北京：化学工业出版社，2005.

［6］赵新峰，王伟，孙毓庆.毛细管区带电泳法测定牡丹皮中芍药苷的含量［J］.中草药，2003，34(3):271-272.