杆菌范文10篇

杆菌范文篇1

结核病防治知识

肺结核病也叫肺痨，是青年公务员之家，全国公务员共同的天地人容易发生的一种慢性传染病。一年四季都可以发病，15岁到35岁的青少年是结核病的高发峰年龄。因此青年人更应该注意预防。

结核病是结核杆菌引起的一种呼公务员之家，全国公务员共同的天地吸道传染病。多数患者是通过呼吸道感染的。结核杆菌在阴暗潮湿的环境中可以存活几个月。当患有活动期肺结核的病人吐痰后，结核菌就可随干了的痰迹飞散到四周。随时都可以感染健康人。人体除毛发外几乎全身所有组织都可以感染结核病，入肠结核、骨结核、淋巴结核等。由于结核病主要经呼吸道进行传播，因此肺结核的感染率比其他器官高，占人体结核病的首位。患结核病后，病人可有低烧、盗汗、疲乏无力、干咳或痰中带血丝、颜面潮红、身体瘦弱等症。如不及时彻底的治疗，会使病情转为慢性，甚至造成病人死亡。

杆菌范文篇2

【关键词】结核分枝杆菌ImmuneresponsesandprotectiveefficacyinducedinmicebyMycobacteriumtuberculosisMPT64ESAT6fusionprotein【Abstract】AIM:ToevaluatehumoralandcellmediatedimmuneresponsesbyMPT64andESAT6fusionproteinsandtotestprotectiveefficacyagainstMycobacteriumtuberculosis(MTB)challenge.METHODS:BALB/cmicewereimmunized3timesat2weekintervalsubcutaneouslyonthebackwithfusionproteinMPT64ESAT6.Inthespleenlymphocytesofimmunizedmicestimulationindex(SI)wasmeasuredbyMTTmethodandthelevelofsecretedIFNγwasdetectedbyELISA.SomeofvaccinatedBALB/cmicebyfusionproteinswereintravenouslyinfectedwith1×105CFUMTBstrainH37Rv.Fourweekslater，bacterialloadinspleenswasdetermined.RESULTS:ThetiterofseraspecificantibodyinBALB/cmiceimmunizedwithfusionexpressionproteinMPT64ESAT6was1∶1500.TheSIoflymphocytesinfusionproteinimmunizedgroupwas2.23,significantlyhigherthanthatofsalineimmunizedgroup(0.88).TheIFNγlevelinculturesupernatantofspleenlymphocytesfromthemiceimmunizedwithfusionproteinswere(4.28±0.27)μg/L,significantlyhigherthanthatofsalineimmunizedgroup［(0.48±0.17)μg/L,P<0.05］,butlowerthanthatofBacillusCalmetteGuerin(BCG)immunizedgroup［(5.18±0.31)μg/L］.Comparedwithsalineimmunizedmice（bacterialloadwas6.45±0.17）,dramaticreductionswereobservedforMTBreplicationinthespleenfromBALB/cmiceimmunizedwithfusionproteins(bacterialoadwas5.04±0.11)followingasubsequentchallenge,buttheprotectiveefficacyinmiceimmunizedwithMPT64ESAT6wasnotasgoodasthatofBCGimmunizedgroup(bacterialloadwas4.38±0.22).CONCLUSION:MPT64andESAT6fusionproteinscouldbeusedasanovelcomponentofthenewTBvaccine.【Keywords】Mycobacteriumtuberculosis；vaccine；MPT64；ESAT6；fusionexpression【摘要】目的：测定MPT64与ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力.方法：将MPT64与ESAT6的融合蛋白皮下免疫小鼠3次，每次间隔2wk，ELISA测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度.最后一次免疫完成后4wk，分离部分免疫小鼠脾淋巴细胞，MTT法检测淋巴细胞刺激指数，ELISA检测悬液中IFNγ水平.另一部分免疫的BALB/c小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv，4wk后计数脾脏细菌负荷数.结果：MPT64ESAT6融合蛋白免疫小鼠血清特异性抗体滴度1∶1500，免疫小鼠后淋巴细胞刺激增殖指数为2.23，而生理盐水免疫组只有0.88；脾淋巴细胞悬液中诱发的IFNγ为（4.28±0.27）μg/L，显著高于生理盐水免疫组［（0.48±0.17）μg/L，P<0.05］，但不及BCG免疫组［（5.18±0.31）μg/L］.与生理盐水免疫组（细菌负荷6.45±0.17）相比较，融合蛋白免疫的小鼠，对攻击感染后抗MTB在脾脏中增殖有显著作用，细菌负荷为5.04±0.11，但与BCG免疫组相比脾脏细菌负荷减少甚微（细菌负荷4.38±0.22）.结论：MPT64与ESAT6融合蛋白可作为新型结核疫苗的候选组分.【关键词】结核分枝杆菌；疫苗；MPT64；ESAT6；融合表达0引言ESAT6（Mr6000的早期分泌蛋白）和MPT64是结核分支杆菌（Mycobacteriumtuberculosis，MTB）中重要的保护性抗原,编码这两种蛋白的基因只存在于MTB毒株中而卡介苗（BacillusCalmetteGuerin,BCG）中缺失［1］，研究发现重组的MPT64和ESAT6蛋白免疫小鼠后均可有效抵抗MTB感染.本研究在成功获得MPT64与ESAT6融合蛋白的基础上［2］，研究该融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答水平和对MTB毒株H37Rv攻击的保护力.1材料和方法1.1材料MTB毒株H37Rv由陕西省结核病防治研究所王瑞副主任技师惠赠；卡介苗疫苗株由兰州生物制品研究所出品（国药准字SF20010035，批号20011201）；鼠IFNγ和ELISA检测试剂盒购自晶美公司；潮霉素（GIBCOBRL公司）.BCG培养增强剂（albumindextrosecatalaseADC）和RPMI1640培养基均购自GIBCO公司.7H9液体培养基购自美国Difco公司；改良罗氏培养基由本室自制，MTB的培养滤液蛋白(culturefiltrateproteins,CFP)由本室制备.羊抗鼠IgGHRP购自华美生物公司.6~8周龄BALB/c小鼠，雌性，由第四军医大学实验动物中心提供，饲养于第四军医大学动物中心感染实验室.1.2方法1.2.1MTB毒株H37Rv的培养和定量取罗氏培养基中保存的MTB毒株H37Rv接种到7H9培养基（含100g/LADC和0.5g/LTween80），37℃振摇培养3wk，5000r/min离心10min，收集细菌，保存于-20℃备用.用7H9液体培养基系列稀释浓缩液，接种于罗氏培养基37℃培养2wk，计数浓缩液细菌的CFU.1.2.2BCG的培养和定量取BCG疫苗株接种到7H9液体培养基（含100g/LADC和0.5g/LTween80），相同方法培养、收集BCG，并计数细菌的菌落形成单位（colonyformingunits,CFU）.1.2.3融合蛋白的大量制备取MPT64pProEXHTESAT6阳性克隆［2］，活化后分别接种到1000mLLB培养液中，37℃振摇培养至对数生长期，IPTG诱导，集菌，先进行SDSPAGE，采用Invitrogen的NiNTA纯化试剂盒纯化目的蛋白，分光光度法测定蛋白浓度.1.2.4免疫动物实验随机分为3组，每组10只小鼠，一组用MPT64ESAT6融合蛋白免疫BALB/c小鼠；免疫剂量均为1mg/只，共免疫3次，第一次和第二次免疫加有不完全福氏佐剂，第三次单纯免疫融合蛋白，每次间隔2wk，免疫结束后，收集小鼠血清，用CFP作为抗原，ELISA测定免疫小鼠血清特异性抗体滴度,其余两组分别为BCG和生理盐水对照组.最后一次免疫结束后4wk，进行以下实验：每组取5只小鼠，用于测定淋巴细胞刺激指数(stimulationindex,SI)和IFNγ水平；其余5只用于毒株攻击实验.1.2.5脾脏淋巴细胞的分离与制备将免疫的小鼠断颈处死，无菌取脾脏，置于平皿内200目的钢网上，用注射器针芯研磨，并加入RPMI1640培养液冲洗.将上述细胞悬液转入2倍体积的淋巴细胞分离液，1000r/min离心20min.吸取中间单核细胞层，用RPIM1640液洗涤两次后计数.1.2.6特异性淋巴细胞增殖实验将分离的淋巴细胞浓度调整至5×108/L，在96孔板中用100mL/LFCS的RPMI1640完全培养液培养，200μL/孔，同时实验组每孔加入25μLMTBCFP（25mg/L溶于PBS，本室制备），对照组不加CFP，调零孔不加脾细胞，37℃50mL/LCO2孵箱培养68h后，每孔加20μLMTT（5g/L，溶于PBS，pH7.2，过滤除菌），继续培养4h后弃上清，加DMSO150μL/孔，振荡10min，测定A490nm值.结果用刺激指数SI=实验组A值/对照组A值表示.1.2.7IFNγ的诱生及含量的测定5×109/L脾细胞在24孔板用含10mL/LFCS的RPMI1640完全培养液中培养，800μL/孔，同时加入MTBCFP100μL/孔，37℃50mL/LCO2孵箱培养72h，收集培养液，5000r/min离心5min，取上清，-20℃冻存备检.参照试剂盒说明（夹心ELISA法）测定各标本所含IFNγ浓度.1.2.8MTB毒株H37Rv的攻击实验最后一次免疫完成后4wk，用MTB毒株H37Rv经尾静脉感染小鼠，剂量为105CFU/只，4[1][2]wk后，断颈处死小鼠，脾脏匀浆，计数细菌CFU.统计学处理：实验数据以x±s表示,统计分析采用单因素方差分析，两两比较采用LSDt检验,P<0.05有统计学意义.2结果2.1小鼠体内特异性抗体滴度MPT64ESAT6融合蛋白免疫小鼠三次后血清特异性抗体滴度平均值为1∶1500.2.2抗原特异性脾脏淋巴细胞增殖实验分离免疫小鼠的脾脏淋巴细胞，在体外用CFP抗原刺激，测定了淋巴细胞的增殖反应，与生理盐水对照组（SI为0.88）相比较融合蛋白MPT64ESAT6免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖明显，SI为2.23，BCG免疫组SI为3.58，高于融合蛋白免疫组.2.3脾脏淋巴细胞中诱生的IFNγ水平MPT64ESAT6免疫的小鼠的脾淋巴细胞悬液，体外用CFP刺激，其悬液IFNγ含量分别为（4.28±0.27）μg/L，与生理盐水对照组（0.48±0.17)μg/L相比较有明显增加（P<0.05），但不及BCG免疫组［（5.18±0.31）μg/L,P<0.05］（图1）.2.4免疫小鼠对MTB毒株攻击时的抵抗作用免疫完成后4wk，H37Rv经尾静脉感染BALB/c小鼠，4wk后计数脾脏细菌负荷数，与生理盐水免疫组（细菌负荷数6.45±0.17）相比较，融合蛋白MPT64ESAT6免疫的BALB/c小鼠，对攻击感染后抗MTB在脾脏中增殖有显著作用（细菌负荷数分别为5.04±0.11），但与BCG免疫组（细菌负荷数为4.38±0.22）相比较脾脏细菌负荷减少甚微.aP<0.05vs生理盐水.n=5.图1融合蛋白在小鼠脾脏淋巴细胞中诱生的IFNγ水平（略）3讨论卡介苗（BCG）是目前唯一的预防结核病疫苗，但其对成年人结核病的预防效果不稳定，保护力常发生变化（0~80%）［3］，因此，研制全面有效的新疫苗是控制结核病的重要途径.融合亚单位疫苗具有成分明确，使用安全，可减少纯化步骤等优点而受到国内外的重视.目前已知的保护性抗原有MTB早期分泌蛋白Ag85B复合物、ESAT6和MPT64［4］等，选择这几种抗原制备的亚单位疫苗可诱导强烈的特异性免疫应答，并不受先前接触分枝杆菌的影响.单个蛋白构成的亚单位疫苗产生的特异性体液和细胞免疫应答是针对每一组分抗原的，机体获得的免疫保护力有限，因此新型TB疫苗着重于融合多个免疫表位［5］.本研究中将纯化的MPT64与ESAT6融合蛋白，免疫小鼠，特异性抗体滴度可达到1∶1500，显著高于已报道文献［6］中抗体的滴度，融合蛋白免疫三次后，小鼠特异性淋巴细胞增殖指数显著升高，说明淋巴细胞被有效活化.IFNγ常被认为是抵抗MTB感染的一个关键性细胞因子，也是Th1型细胞免疫反应的重要指标，TB的保护性效应与分泌IFNγ的淋巴细胞的产生密切相关.融合蛋白MPT64ESAT6免疫小鼠诱生的IFNγ水平显著高于生理盐水对照组（P<0.05），提示这两种融合基因可能是TB疫苗中理想的候选基因.MTB毒株攻击实验中，与生理盐水组相比较，MPT64ESAT6免疫组使得细菌数由6.45±0.17降为5.04±0.11，有效控制了MTB的感染，但与BCG免疫组相比免疫保护力还是有一定差距.研究发现，单独使用结核杆菌短期培养液中分离纯化的分泌型蛋白免疫动物，只会产生很弱的免疫应答，亚单位疫苗必须配以适宜的佐剂多次接种才能达到效果［7］，在本研究中，采用不完全福氏佐剂具有很强的免疫调节作用，可刺激产生IL2，IFNγ和IL12，是本室较常用的一种免疫策略.MPT64ESAT6融合蛋白诱导的保护力有限，分析原因可能是因为保护性抗原种类不多，难以诱导产生广泛而全面的细胞免疫应答；同时蛋白质在体内的滞留时间短并且其产生的免疫应答的持续时间也较短，需选择合适的剂量［8］，多次免疫才能达到有效的保护水平.【参考文献】［1］KamathAT,FengCG,MacdonaldM,etal.DifferentialprotectiveefficacyofDNAvaccinesexpressingsecretedproteinsofMycobacteriumtuberculosis［J］.InfectImmun,1999,67(4):1702-1707.［2］师长宏,王晓武,生,等.结核分枝杆菌差异蛋白MPT64与ESAT6的融合表达与纯化［J］.第四军医大学学报,2005,26(20):1840-1842.［3］范雄林,徐志凯,李元,等.结核分枝杆菌Ag85B成熟蛋白基因免疫［J］.第四军医大学学报,2001,22(14):1283-1287.［4］DohertyTM,AndersenP.Tuberculosisvaccinedevelopment［J］.CurrOpinPulmMed,2002,8(3):183-187.［5］师长宏,范雄林,徐志凯,等.结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85BESAT6的融合表达及纯化［J］.中华结核和呼吸杂志,2004,(2):89-92.［6］薛莹,李元,史皆然,等.结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的免疫学特性［J］.第四军医大学学报,2002,23(13):1203-1205.［7］LangermansJA,DohertyTM,VervenneRA,etal.ProtectionofmacaquesagainstMycobacteriumtuberculosisinfectionbyasubunitvaccinebasedonafusionproteinofantigen85BandESAT6［J］.Vaccine,2005,23(21):2740-2750.［8］DietrichJ,AagaardC,LeahR,etal.ExchangingESAT6withTB10.4inanAg85Bfusionmoleculebasedtuberculosissubunitvaccine:EfficientprotectionandESAT6basedsensitivemonitoringofvaccineefficacy［J］.JImmunol,2005,174(10):6332-6339

杆菌范文篇3

关键词:猪;巴氏杆菌;肺疫;诊断;防控

猪巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌感染而引发的一种以全身败血症为特征的急热性传染病，由于病猪大部分表现呼吸道症状，故又称“肺疫”，严重的能导致咽喉部位肿胀，压迫气管使气流进出受阻，民间称其为“锁喉疯”，主要影响仔猪和育肥猪，每年都会给养猪业带来较为严重的经济损失［1］。

1巴氏杆菌

巴氏杆菌是一种革兰氏染色呈阴性的短杆菌，大小为(0．2～0．4)μm×(0．4～1．8)μm，病料中直接抹片分离的病原大部分为单个存在，极少数成双排列，且呈现出两端浓染的特征。该菌表面无鞭毛，恶劣环境中不形成芽孢，不会自主运动，新分离的毒株表面有荚膜，经传代培养后荚膜消失。本菌可在体外进行培养，最佳培养温度为32℃～38℃，需氧或兼性厌氧，最适pH为7．0～7．5，培养时对培养基的营养有一定要求，普通肉汤中生长较差，加入血清或血液后生长速度加快。在绵羊血琼脂平板表面培养24～48h能见到表面光滑、湿润、边缘整齐、形似露珠的菌落，不发生溶血，有荧光，接种至麦康凯琼脂表面则无法生长。

2猪巴氏杆菌病简介

该病主要发生于仔猪和育肥猪，性成熟后的猪机体抵抗力强，猪感染后大多能自行耐过，症状表现轻微。巴氏杆菌在我国很多地方常年发生，病原体甚至能在健康猪体内长期存在，由于机体免疫屏障的作用一般毒力减弱或受到抑制而不发病。但若机体因多种因素影响免疫力下降时这些菌仍会被激活而大量繁殖，从而暴发疫情。常见的影响因素有天气突变、长期高温高湿环境、频繁断水断料或更换饲养员、猪舍有害气体浓度过高、长途运输、暴力转群、滥用药物等，这种机体自身携带的巴氏杆菌引发的称之为内源性感染，一般不会造成严重死亡，用药后易康复，病程短，后期无不良影响。还有一种为外源性入侵，这种巴氏杆菌往往对本地场的猪侵袭力强，感染后可快速繁殖，表现出发病急、病程短、致死率高、损失大的特点。临床在对本病防控时，应根据发病的具体特点和病原来源针对性采取措施。

3流行特征

该病呈世界流行，大多数养猪业发达的国家和地区都有报道，以北美洲、欧洲、东亚、南亚等地区报道最多。其流行无明显的季节性，但秋季和春季因温差大更易流行，这和天气变化快引发机体免疫力下降有关。我国以山东、河南、四川、广东、江西等省份较易流行，经过近年来疫苗的普及以及程序性预防制度的完善，本病基本未出现过大面积的剧烈暴发，只是在个别地区表现散发。病猪、潜伏期感染猪和刚刚康复的猪是本病的主要传染源，呼吸道是病原入侵的主要门户，除此之外，消化道、血液等也能传播。感染猪通过咳嗽、喘气、打喷嚏等方式将病原体排入环境中，这些病原或随飞沫粘附在墙面，或以尘埃粒子为载体悬浮空气中，或直接污染饲料和饮水，或直接黏着于其他猪体表，健康猪吸入或食入后便存在感染的可能。免疫疫苗或注射药物时，如果针头未严格消毒，病原体也能经污染的针头以血液方式传播。临床上存在有些病例剖检后症状并不典型，实验室检测后发现有其他病原混合感染的情况，巴氏杆菌和其他病原混感可使病猪发病更快，症状更重，死亡率也会更高，常见的混感病原有支原体、巴氏杆菌、链球菌、弓形虫、丹毒杆菌、蓝耳病毒、猪瘟病毒等。

4诊断

该病根据发病缓急程度不同分为慢性型巴氏杆菌病和急性型巴氏杆菌病两种。前者多为条件致病性巴氏杆菌感染，即内源性感染;而后者多为外源入侵的巴氏杆菌感染，为外源性感染。

4．1临床表现诊断

1)慢性型诊断:慢性型通常表现慢性经过，起初体温升高，但不呈现高热，一般在40℃～41℃，同时伴发长期咳嗽和呼吸困难，咳嗽前期以湿咳为主，后期可转为干咳，采食量正常或微降，机体渐进性消瘦，料肉比升高，鼻腔中有大量黏性分泌物，对胸部触诊敲击猪有疼痛性反抗，听诊有肺脏层和胸腔壁层间粘连产生的摩擦音。长期呼吸困难导致机体缺氧，血液中还原性血红蛋白升高，可视黏膜出现发绀、发紫，血液循环发生障碍。同时，由于有氧代谢水平降低，机体产热下降，病猪畏寒怕冷，软组织处有红斑出现。部分猪伴发关节肿大，跛行，行走困难，消化也随之出现障碍，前期表现便秘，后期为腹泻症状，病程一般为7～21d。单纯巴氏杆菌感染病程较长，混感后病程缩短，最终因机体衰竭而死。耐过猪后期生长发育受阻，料肉比增高，生产性能下降。2)急性型诊断:急性型通常是地区外的病原传入本地导致，由于本地猪普遍没有新血清型的抵抗力，使得该病容易暴发蔓延，表现发病急、病死率高、病程短、治疗难度大的特点，并具有高度的传染性。由于病原菌首先在咽喉和扁桃体部位繁殖，导致咽喉炎和颈部水肿，病猪外表看起来下颌部急性肿胀［2］。腹部、耳根和四肢内侧皮肤出现紫红色斑块，指压褪色，口腔、鼻腔中流出带血的泡沫样液体。同时体温升高，采食量锐减或废绝，眼结膜潮红，眼角常留泪斑，精神极度差，对外界刺激不敏感。

4．2病理剖检诊断

1)慢性型诊断:病猪剖检后可见肺部病变显著，有纤维素性肺炎不同发展阶段的各种变化，病变可波及一侧或两侧肺叶大部分，尤以尖叶、心叶和膈叶前部最为严重，同时肺小叶肿大，间质增宽，病灶实质化，表面呈现出暗黑红色或灰黄红色，被膜粗糙，有时会有一层淡黄色或白色的纤维素性薄膜覆盖，胸膜腔中充满淡黄色液体，将肺和胸腔内壁分离。病变的实质部分与周围组织交界明显，病程较长的呈现肝变样。还有些病灶以支气管为中心发生坏死和化脓，有的能发展成为坏疽性肺炎。病灶部位肺小叶增宽后眼观为大理石样花纹，周围组织以淤血、水肿和气肿为特征。除了肺之外，心包出现扩张，积液增多，心外膜充血出血，在心外膜上或心包液内有絮状或膜状的纤维素，后期心包积液中的水分被吸收后能导致心包膜发生粘连。腹腔中的肝脏、脾脏、肾脏以及肠道等有轻度充血和出血的病变。2)急性型诊断:急性型主要表现咽喉急性水肿［3］，触摸硬实，切开后有大量的淡黄色略带透明的浆液流出，被水肿液浸润的组织呈黄色胶冻样。炎性水肿向前端可扩展至舌根，向后方延伸到下颈部，甚至能达到胸部。咽喉周围组织呈现出血性和浆液性炎症，声门变得狭窄。下颌、咽后及颈部淋巴结显著充血和出血，同时体积变大，呈现出急性淋巴结炎病变。全身浆膜及黏膜有点状出血，胸腔、腹腔和心包腔中充满炎性渗出性液体，有时还有纤维素性蛋白。肺脏淤血水肿，有时可见肺组织内有散在的局灶性红色肝变病灶。脾脏无明显病变或稍有充血。

4．3实验室诊断

实验室诊断最常用的方法为病原分离培养法、ELISA检测法、PCR法等。病原分离培养法是将采集的病料通过在血液培养基表面进行划线分离，于35℃～38℃的培养箱中恒温培养24～48h，之后通过长出的菌落特征，并结合单个菌落的生化特性进行诊断。ELISA法是酶联免疫吸附试验，利用抗原抗体特异性结合的原理，用已知抗原来检测可疑猪的血清，如果有抗体存在则代表有感染。PCR法是分子生物学检测法，用已知巴氏杆菌的特有核酸序列引物对病料中的核酸片段进行扩增，如果能成功扩增则代表病料中肯定存在巴氏杆菌，由于引物是针对巴氏杆菌的，故特异性较强，诊断准确率更高，也是目前最为流行的诊断方法。需要提醒的是，实验室诊断主要目的是为了确诊所感染的微生物类型，但诊断过程会暴露一些问题，就是如果通过检测分离到了巴氏杆菌，也不能代表就是巴氏杆菌引发了疾病。这是因为一方面巴氏杆菌可能以条件致病菌的形式存在，通过RCR分子生物学方法扩增其核酸序列，结果也会呈阳性，但条件致病的形式存在可能不是该菌引发的。另一方面，在检测过程中还需要对其他易混感的病原进行检测，通过综合分析来确定病因是否为巴氏杆菌，如果发生混感，则可能存在2种甚至2种以上的病原，即使能分离到巴氏杆菌，但按照发病的主次顺序也存在巴氏杆菌是继发感染者而处于次要地位的可能。鉴于此，实验室诊断只是辅助性诊断措施，临床必须结合病猪的具体临床表现及剖检病变，再通过实验室检查结果分析才能确诊。

5防控措施

防控本病需做好疫苗的程序性免疫，加强猪舍内环境消毒，减少养殖过程中应激因素对猪群的影响，提升猪场生物安全管理水平，对病猪进行科学治疗。

5．1做好疫苗的程序性免疫

疫苗接种是预防本病的最佳措施之一，目前市售的猪巴氏杆菌疫苗以活苗为主。活苗免疫后毒株可增殖，且产生体液免疫的同时也能刺激机体产生细胞免疫，免疫效果优于灭活疫苗。从疫苗所含免疫物种类划分，该疫苗又分为联苗和单苗种，联苗一般以猪瘟－猪丹毒－猪多杀性巴氏杆菌三者联合出现，单苗则是单独的猪巴氏杆菌成分。常规免疫选择接种联苗即能满足需求，如果本地发生疫情，或者猪群中发现有病例进行紧急免疫时可选择单苗。疫苗接种后能在7～14d内产生高滴度的血清抗体，这些抗体具有至少6个月以上的免疫周期，对于育肥猪场来讲能维持其足够出栏，种猪则免疫2次/年即可保持对本病的免疫。需要提醒的是，疫苗接种前后7d内不要使用对免疫有抑制作用的药物，特别是糖皮质激素类、解热镇痛消炎类药物。

5．2加强猪舍内环境的消毒

巴氏杆菌对环境不良因素的抵抗力非常弱，兽医常用消毒方法和常规消毒剂都能将其杀灭，从而减少疾病扩散的概率。环境消毒以舍内环境消毒为主，非疫区猪场带猪消毒1次/d，疫区猪场至少消毒2次/d，消毒剂宜选择刺激性小、使用安全、杀菌力强的品类，如0．1%新洁尔灭溶液、0．2%过硫酸氢钾溶液、0．1%戊二醛癸甲溴铵溶液以及稀碘溶液等。猪舍地面用2%火碱喷洒，也可撒生石灰。猪出栏后必须彻底打扫卫生，之后将所有可移动的杂物腾出舍外，在太阳下晾晒杀菌，舍内进行密闭熏蒸，消毒剂可选择福尔马林或二氯异氰尿酸钠。疫病流行期间所有员工进舍都必须更换专用衣物，同时将手臂、鞋底等消毒，出舍时将衣物挂于紫外灯下照射不低于5min。

5．3减少饲养过程中应激对猪群的影响

应激容易引发机体免疫力出现暂时性下降，从而为条件致病性巴氏杆菌的增殖提供可乘之机。仔猪断奶后根据体重大小进行分级，体重大、体质强的猪分到同一舍，体重小、体质弱的猪分到同一舍，杜绝以强欺弱的现象。管理者应做好猪场的后期保障，防止出现断水断料现象，同时每天关注天气变化，做到未雨绸缪，尤其是气温突降的天气，必须提前关闭猪舍门窗，必要时增加垫料进行保温。保育期和育肥期的猪最好为同一饲养员，保持固定的饲喂习惯。育肥猪严格控制饲养密度，推荐按照高于1．5m2/头的密度进行饲养。接种疫苗时操作一定要轻柔，不可暴力驱赶和暴力免疫。在炎热的夏季需要进行防暑，可在饲料或饮水中加入VC进行抗应激。新猪场在选址时应远离公路、铁路、机场、闹市、村庄及工业区，降低噪声对饲养管理的影响。有些猪场的保育区和育肥区距离较远，运输前可提前在饲料中加入高剂量的电解多维，以对抗运输过程中的应激。

5．4提升生物安全管理水平

大型猪场的管理层岗位要定期进行生物安全管理培训，提升生物安全意识，制定适用于本场的管理制度。高级管理人员每年可外派到国外知名养殖集团进行交流和学习，将外企先进管理经验带回国内。小型猪场的场主建议定期参加行业内的培训会，了解疫病最新防控进展，掌握基本的疫病防控要领，条件允许的情况下可聘请有大场管理经验的兽医人员作为顾问来辅助管理。饲养员、清粪员等是和猪接触最多的岗位，通过设定奖惩机制来促使其工作之余多对猪进行观察，便于发现有异常表现猪，将疾病风险降至最低。所有病死猪尸体、实验室采集的病料、污染的饲料等通过焚烧或填埋的方式做无害化处理，防止病原菌扩散。新进员工应先做生物安全知识培训，通过“老带新”的方式进行适应性考察，合格后再予以转正和定岗。

5．5病猪的科学治疗

已经确诊的病猪则要尽早隔离治疗，对巴氏杆菌敏感的药物有硫酸头孢喹肟、盐酸头孢噻呋、氟苯尼考、泰拉霉素、强力霉素、利高霉素、琥乙红霉素、替米考星等。对于急性型病猪，建议将药物以肌注的方式用药，肌注药物生物利用度更高，药物见效更快，利于疾病的快速控制。慢性病例在采食量未受影响的前提下可通过拌料方式用药，但要求药物务必拌匀，减小用药误差。有些已经处于疾病中后期或濒临死亡的猪建议放弃治疗，因这种猪即使用药将体内病原菌杀灭，其呼吸系统的多处组织已经发生器质性病变，功能不会恢复到疾病前水平，对后期生长发育有较大影响，直接淘汰有助于降低损失。

6结语

猪巴氏杆菌病是我国流行的主要细菌性疾病之一，每年都会发生，主要集中在散养户、家庭农场和小型农民专业合作社模式的小型猪场。这些猪场由于资金、规模和养殖技术限制，往往疾病防控理念差，发生疾病时不懂得科学用药，而是病急乱投医，使用一些不规范的化药和饲料添加剂治疗，使疾病不但没有治好，还出现了药物中毒现象，导致死亡率增加。对于广大养殖朋友来讲，一定要遵循“养大于防、防大于治”的疾病防控理念，将疾病控制在预防和治疗早期阶段。发现可疑猪要找正规执业兽医师进行诊断和治疗，用药讲究科学，不可胡乱配伍和使用未印制可追溯二维码标识的产品，将疾病造成的损失降至最低。

参考文献:

［1］夏伟．猪巴氏杆菌病的诊治［J］．新农业，2017(1):46．

［2］杨金生，刘云志，宫江．猪巴氏杆菌病的诊断与防治［J］．兽医导刊，2016(15):22－24．

杆菌范文篇4

1.1苏云金芽孢杆菌（Bt）的发现

1901年日本学者石度繁从患猝倒病的家蚕幼虫中分离到第1个产生晶体的芽孢杆菌。10年后Berliner从德国苏云金地方一家面粉厂染病的地中海粉螟中分离到一个相似的菌株，并正式定名为苏云金芽孢杆菌（Bt）。4年后，一个叫克林诺的科学家发现，在这种细菌的细胞中可以形成方形或菱形的晶体，可惜这个发现并未被重视。直到40年后的1953年，一位叫汉纳的生物学家证明了这种晶体是有毒的蛋白质晶体，才揭示了粉螟死亡的原因。在1920～1930年间，Bt作为微生物杀虫剂主要用来防治玉米螟。1938年第1个商品制剂Sporeine在法国问世，从此拉开了生物杀虫剂的序幕。以后相继发现了对鞘翅目、螨类、同翅目、膜翅目、直翅目昆虫、动植物寄生线虫、鞭毛虫、变形虫、吸虫、绦虫有毒杀作用的Bt菌株。

进一步的研究发现，Bt是革兰氏阳性菌，另外，它可寄生在一些蛾类和蝶类的幼虫上，甚至是植物表面。

苏云金芽孢杆菌分泌出的由Cry基因编码的、有杀虫活性的δ-毒素（或被称为杀虫晶体蛋白）的蛋白结晶构成了内孢子。Cry蛋白对鳞翅目（如蛾与蝶）、双翅目（如苍蝇、蚊子）和鞘翅目（甲虫）有很大杀伤力。因此，可将苏云金芽孢杆菌发酵生产制成高效生物杀虫剂，或用Cry基因制成防虫害的转基因产品。

1.2苏云金芽孢杆菌（Bt）的杀虫机理

苏云金芽孢杆菌（Bt）之所以能够杀虫，是由于它们的细胞内存在着一种有毒的蛋白质，叫做伴孢晶体，昆虫吞食后就会中毒而死。而这种活细胞及伴孢晶体对环境无毒无害。因为在动物的胃肠道内，酸性环境下蛋白质晶体不能溶解，从而对人畜无害。所以它是一种高效安全的生物杀虫剂，可用来杀灭多种农作物害虫。苏云金芽孢杆菌（Bt）杀虫机理主要是：昆虫取食苏云金芽孢杆菌后，杆菌在其胃肠道内产生蛋白质晶体内毒素（δ-内毒素）、热稳定毒素（β-外毒素）、叶蜂毒素（α-外毒素）及Bt-γ外毒素。这些毒素能侵蚀昆虫肠道细胞，破坏肠道内膜，并进入血淋巴组织，使害虫因饥饿而出现败血症最后死亡。苏云金芽孢杆菌的防治对象是鳞翅目、膜翅目、双翅目、鞘翅目等多种害虫，其药性的持效期可达7～10d左右。需要特别注意的是：苏云金芽孢杆菌（Bt）及其制剂对蚕具有很高的毒性，桑园必须禁用。另外，勿与碱性杀菌剂混合施用，晴天的傍晚或阴天施药效果最佳。

2苏云金芽孢杆菌（Bt）的研究现状

2.1苏云金芽孢杆菌（Bt）的研究主要集中在分子水平上

过去Bt是作为一种制剂应用于农林害虫的防治，随着生物技术的发展，现在已对苏云金芽孢杆菌的杀虫蛋白质和相关基因作了深入而透彻的研究，也就是说在基因的水平上对它有了更多的了解。研究发现，在其体内具有一种Cry基因，正是这种基因编码产生的蛋白质对上述昆虫具有极大的毒性，所以这种基因的结构和特性就影响到它本身，也影响到它的杀虫范围。当然某一基因的长期应用会刺激昆虫产生抗体。因此，现在对苏云金芽孢杆菌的研究更多地集中在分子水平上。

2.2国内主要研究成果

中国现在在苏云金芽孢杆菌杀虫剂的商品化生产和防治农林害虫的系统工作方面，取得的主要成果有：研制和生产质优价廉的Bt悬浮剂和高效价的粉剂，实现了中国Bt杀虫剂的商品化生产；建立了以生物测定为基础的产品毒力效价测定的质量标准化技术化系统；研究了助剂及贮存条件对Bt的影响，为助剂的筛选和有效存贮提供了可靠的依据；大规模推广应用Bt杀虫剂以防治棉、粮、果疏及林业害虫，并取得了良好的效果。该研究中研制和生产的适合中国的优质廉价的Bt悬浮剂，已在农林害虫防治中得到广泛应用；Bt粉剂的毒力效价和防虫效果，已达到国际同类产品先进水平；以棉铃虫和小菜蛾为标准昆虫，建立了中国Bt产品质量标准化测定技术系统，为国产Bt杀虫剂的行业标准的建立奠定了良好基础，为与Bt杀虫剂国际质量标准接轨提供了保障。

3研究中存在的问题及解决的思路

3.1主要问题

苏菌基因的表达会发生变化。例如，如果温度不理想，就可能降低毒素的产生，使植物易受侵蚀。更加严重的是，试验证明毒素减少的晚季植物会形成启动子的DNA甲基化。另外，毒素的持续使用会使普通害虫演化为抗性虫。试验发现，小菜蛾对苏菌毒素的喷雾形式就已产生抗性。

苏菌毒素的运用还有一些可能的危险，如：如果转基因玉米与变异野草杂交，苏菌基因的抗性就有可能因食物链来到食草动物群落中，蜂群衰竭失调（CCD），也可能跟苏菌转基因作物有关。

3.2解决的思路

（1）有抗植株与无抗植株间种。减少害虫抗药性的一个有效方法就是将有抗植株与无抗植株间种，目的是减少抗性基因频率，牺牲少量无抗植株保证产量。美国和欧洲的某些区域已经立法要求使用上述方法种植。这种方法的理论依据是假设抗性基因是隐性的。依目前来看，这种方法应该可以延迟害虫对苏菌的抗性；另一方面，假如产生了多种苏菌毒素的农作物可以完全灭绝害虫，抗性基因的存在也就不可能了。不过，至今为止，害虫灭绝的情况还未出现。

（2）通过接合构建新菌株。苏云金芽孢杆菌菌株的特定质粒可以自行转移，这些质粒可以通过接合来构建新菌株。例如，科罗拉多马铃薯甲虫（鞘翅目）是北美最具破坏性的马铃薯害虫，欧洲玉米螟和土豆块茎蠕虫，对马铃薯也有很大的破坏作用。从自然界中分离的苏云金芽孢杆菌菌株，没有一个菌株对所有这些昆虫都具毒性。然而，通过质粒转移杂交，现在已经构建出对3种害虫都有效的新菌株，田间试验表明，该菌株作为广谱的马铃薯杀虫剂很有前途。

4苏云金芽孢杆菌（Bt）的应用前景

微生物农药是21世纪农药工业的新产业，代表着植物保护的方向，其最大的优势在于能克服化学农药对生态环境的污染，并减少农药在农副产品中的残留量。同时，在推广微生物农药应用过程中，农副产品的品质和价格将大幅度上升，有力地促进农村经济增长和农民增收，社会效益不可估量。

我国是一个农业大国，农业的发展事关重大。为了更好地落实科学发展观，建立环保型、节约型农业，微生物农药将为农产品优质安全生产和降低有毒物质残留提供技术和物质保证。微生物农药研究与发展，将有效地实现农产品的优质安全生产，提升农产品的经济附加值，扩大我国农副产品外销市场，推进绿色产业的发展。所有这些均对发展农村经济、增加农民收入、促进农村繁荣具有重要的推进作用。

参考文献

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[7]金莉莉，王秋雨，侯萧.ERIC-PCR技术在李斯特氏菌种、菌株鉴定中的应用[J].遗传，2003，25（2）：195-197.

杆菌范文篇5

幽门螺杆菌（Hp）作为慢性胃炎、胃十二指肠溃疡、胃癌、胃淋巴瘤发生发展中的重要致病因素已为大量研究证实，其致病机理包括Hp的尿素酶、蛋白酶、脂酶、磷脂酶A、趋化因子及细胞空泡毒素（VacA）等直接致病，也包括Hp引起宿主的炎症及免疫应答致病[1]。本文主要就Hp菌苗与宿主的免疫应答及相关问题的研究进展作一简要综述。

hp与菌苗研究

Hp感染是世界范围的，而且是终身感染。新近研究显示，口服菌苗可诱导针对Hp感染的保护性免疫，并且菌苗可治愈已存在的HP感染性病变，从而表明用菌苗治疗Hp感染是可行的[2]。用霍乱毒素（CT）B亚单位或大肠杆菌不耐热毒素（LT）作粘膜佐剂的Hp抗原诱导免疫已获成功，即Hp对宿主自然免疫应答的抵抗能被瓦解。成功用作Hp菌苗的抗原有Hp细胞裂解产物、尿素酶、VacA、热休克蛋白和过氧化物酶等。免疫学研究及动物模型也证实口服免疫不仅可以预防而且能治愈Hp感染，并且鼻内及结肠免疫均可引起胃粘膜的免疫保护[3]。新近Ghiara等用重组VacA或细胞毒素相关蛋白（CagA）作抗原，减毒的大肠杆菌LT突变体作为佐剂，成功地根除了小鼠模型中的慢性Hp感染，并证明该治疗性菌苗对Hp再感染有同样有效的免疫防御作用[4]。总之Hp作为非侵入性细菌，定居于胃粘膜表面，可引起机体的免疫及炎症反应。面对机体强大的免疫应答，Hp仍能继续生存并致病，其机理尚不清楚。免疫效应分子必须进入胃粘膜表面，才能中和和杀伤Hp。目前认为该作用与胃分泌液中出现抗Hp特异性分泌型IgA抗体相关。这种抗体也在感染的动物及人体中出现，所以细胞免疫效应在防御或治疗Hp感染中的作用仍需进一步研究。另外，了解Hp逃逸免疫效应分子的机理以及Hp菌苗诱导宿主的免疫保护及免疫损伤的机理，将为更有效的菌苗筛选提供可能。最近报道对Hp感染的易感性与小鼠中主要组织相容性复合体（MHC）位点直接相关，这是否适用于菌苗设计也需进一步研究证实[5]。

hp与宿主免疫

Hp诱导宿主免疫应答的途径，目前认为包括Hp可溶性产物的被动吸收，上皮细胞直接内吞细菌抗原，抗原通过被破坏的胃上皮进入组织激发机体的免疫应答[6]。粘膜对不同Hp免疫应答的差异是决定病变后果的重要因素。其中包括B细胞及相应的IgG、IgM的体液免疫应答，以及在Hp感染相关慢性活动性胃炎病变局部出现T淋巴细胞浸润的细胞免疫应答[1]。

Hp与体液免疫

实际上所有Hp感染慢性胃炎病人胃粘膜中均有针对Hp的特异性IgA出现，而IgM应答一般只发现于Hp感染急性期的胃粘膜局部。产生IgG（特别是IgG1）的浆细胞，在慢性胃炎中明显增加。在胃十二指肠粘膜局部证明有针对Hp感染的特异性IgG应答。粘膜表面分泌型IgA的出现对于抑制细菌抗原的摄取、阻止Hp的粘附和移动以及中和毒素都非常重要，即IgA在Hp感染中起保护性免疫作用。另外，由于IgA不能有效地激活补体，从而在阻滞Hp特异性IgG介导的补体活化及相关的中性粒细胞活化炎症及介质释放中起重要作用。Hp特异性IgE抗体在感染病人的血清中同样存在，但依赖Hp特异性IgE的肥大细胞释放组胺是否在胃粘膜病变中起作用尚不清楚[6]。

Hp与细胞免疫

针对Hp特异性T细胞也出现于Hp感染病人的胃粘膜中，其中CD45RO+T细胞在Hp感染相关的慢性胃炎病人的胃粘膜中明显增加。分泌γ干扰素而不是白细胞介素4（IL-4）的T细胞在病变局部的浸润也证实Hp诱导的特异性免疫应答以Th1型应答为主。Hp抗原特异性T淋巴细胞应答，不仅参与调节针对Hp的体液免疫应答，而且参与调节胃粘膜上皮中与粘膜防御及抗原呈相关的关键分子的表达[6]。新近研究发现，Hp诱导的抗原特异性T淋巴细胞以辅助性T淋巴细胞为主，包括Th1及Th2细胞。其作用包括两个方面：增强炎症反应及减少Hp在胃粘膜表面生存。未免疫小鼠感染Hp主要诱发Th1型应答，通过增加γ干扰素分泌而增强胃粘膜损伤性的炎症反应。相反，Hp菌苗抗原免疫后的小鼠感染Hp既诱发Th1型应答，又诱发Th2型应答。Th2型应答通过增加IgG1抗体、IL-4和IL-5的产生而减少Hp在胃粘膜表面的生存，起免疫保护作用。Hp及其菌苗诱导Th1和Th2细胞的作用共存，即增强炎症反应的损伤性作用及减少Hp在胃粘膜表面生存的免疫保护作用同时存在。Hp感染诱导的应答以Th1型为主，即以炎症性损伤为主；而疫苗诱导的应答以Th2型为主，即以免疫保护为主。中和γ干扰素可阻断Th1型免疫应答，减轻Hp的致病作用，及增强Th2细胞在疫苗免疫保护中的作用，从而达到治疗目的[7]。hp诱导的自然杀伤（NK）细胞在宿主的防御及炎症反应中起重要作用。外周血淋巴细胞与Hp的相互作用诱导非MHC限制的NK细胞活化并分泌γ干扰素，NK细胞的活化及γ干扰素的分泌对于激活巨噬细胞及促进Th1型抗原特异性T细胞应答均非常重要。另外，作为NK细胞的活化因子，IL-12可由Hp刺激的中性粒细胞及单核细胞产生[6]。

Hp与自制免疫

一些Hp中脂多糖（LPS）的O-特异性多糖链抗原区结构与岩藻糖化的Lewisy血型抗原类似，而另一些菌株与LewisY血型抗原类似[8]。一些抗Hp的单克隆抗体与人和鼠的胃上皮细胞存在交叉反应。这种交叉反应与LPS模拟或Hp58kDa蛋白相关。该58kDa蛋白属于热休克蛋白（hsp60）家族成员，与人hsp60有高度同源性。而在T细胞水平上不存在宿主与细菌hsp60的交叉反应。根除Hp感染的结果表明无论是抗LPS决定簇还是hsp60的自身免疫应答，对胃粘膜的完整性没有长期的破坏作用[6]。Ko等用214种抗Hp的单克隆抗体检测其与人组织交叉反应能力，结果发现71种抗体与胃粘膜中Hp起反应，25种抗体与胃上皮细胞反应，8种抗体与十二指肠上皮细胞反应。与胃上皮细胞起交叉反应的抗体包括抗Hp尿素酶抗体、抗鞭毛抗体、抗LPS抗体及抗热休克蛋白抗体。提示Hp引起的宿主自身免疫应答涉及多种Hp成分[9]。Faller等发现Hp感染与抗胃小凹上皮细胞膜及壁细胞中小管结构的自身抗体明显相关[10]。另外新近研究发现，HpLPS表达人血型抗原并非固定不变，而是呈现期相性改变，包括三种类型变异体：第一种是表达Lewisx型抗原的LPS失去α1，3-岩藻糖，变为I抗原，这种改变是可兼管的；第二种是LPS的Lewisx抗原失去聚合主链成为表达单体的LewisY抗原；第三种是LPSlewisY抗原获得α1，2-岩糖，使LewisX和LewisY抗原的表达均被增强。表明同一Hp菌珠存在不同的Lewis血型抗原[11]。HPLPS的O-多糖抗原与Lewis血型抗原这种类似结构是否有种于Hp生存、引起宿主的自身免疫应答、促进Hp粘附及增强炎症反应尚需进一步研究证实[8]。

Hp与免疫抑制

有研究提出Hp直接诱导宿主的免疫调节，使针对Hp的有效免疫不能发生。Hp胞浆中一种非细胞毒素蛋白可以抑制外周血单个核细胞增殖，该蛋白分别抑制单核细胞表面CD14及T细胞表面CD25分子的表达[12]。Hp诱导的免疫调节对免疫介导的粘膜损伤有一定的保护作用，但同时也导致Hp感染的长期持续存在。尽管Hp能刺激宿主免疫系统产生抗体及细胞因子，但是Hp亦产生一种介导抑制人细胞免疫的蛋白质，并且Hp编码的超氧化物歧化酶（SOD）基因与侵袭性细胞内致病菌的SOD基因存在同源性，提示SOD涉及辅助Hp抵抗吞噬细胞的杀伤作用[8]。另外也有研究发现活Hp可下调病毒特异性CD8+细胞毒性T细胞应答及Th1细胞分泌细胞因子的反应，从而降低宿主的细胞免疫应答[13]。

hp与MHC

hp诱导的NK细胞分泌的γ干扰素使胃上皮细胞MHCⅡ类抗原表达增高，即增加对胃上皮细胞的细胞毒损伤作用[6]。Maekawa等发现Hp诱导胃上皮细胞MHCⅡ类抗原分子的表达比γ干扰素的作用强，并且胃上皮细胞可以起抗原提呈细胞的作用而参与对Hp的免疫应答[14]。

结语

Hp对宿主的影响及宿主对Hp菌苗的应答既包括炎症反应，也包括免疫应答；既涉及体液免疫应答，也涉及细胞免疫应答；既存在免疫保护作用，也存在免疫损伤作用。因此，深入研究并阐明Hp及其菌苗诱导宿主免疫应答的机理，将为有效的Hp菌苗的研制提供正确的理论指导及新的研究思路。

参考文献

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7MohammadiMetal.Gastroenterology,1997;113:1848-1857

8MoranAP.ScandJGastroenterol,1996;31(Suppl215):22-31

9KoGHetal.Helicobacter,1997;2(4):210-215

10FallerGetal.Gut,1997;41(5):619-623

11AppelmelkBJetal.InfectImmun,1998;66(1):70-76

12KnippUetal.FEMSImmunolMedmicrobiol,1994;8:157-166

杆菌范文篇6

关键词:重组酶聚合酶扩增;结核分枝杆菌;特异性;诊断;检测

结核病(tuberculosis)是由结核分枝杆菌(Mycobacte-riumtuberculosis，MTB)引起的一种古老的慢性传染病，以肺部感染最为常见［1］。2019年世界卫生组织统计，全球报告结核病患者710万例，与估算的1000万例有所差异，可能与大部分患者未被诊断出来有关［2］，可见结核病的诊断存在一定的难度。肺结核是结核病中具有传染性的一类，临床上对这类患者的诊断主要通过痰涂片法和痰培养法，按照世界卫生组织的统计，临床上的诊断率只有不到70%。由于部分患者未得到及时诊断，使其成为持续的传染源，发病数持续增加。基于此，需改进现有的诊断方法，以提高结核病的诊断率。重组酶聚合酶扩增(RecombinasePolymeraseAmplification，RPA)技术被称为是可以替代PCR技术的核酸检测技术［3－7］。该技术对硬件设备的要求很低，特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物防御、农业等领域［8－11］。本研究利用RPA技术建立结核分枝杆菌的快速检测方法，现报告如下。

1材料与方法

1.1材料结核分枝杆菌标准株H37Rv由中国疾病预防控制中心提供，该研究涉及的菌株标本和痰标本均来源于邯郸市第六医院;引物与探针(表1)交由上海生工有限公司合成;DNA提取采用江苏硕世公司的磁珠提取试剂盒，RPAMasterMix购自潍坊安普未来生物科技有限公司，培养基选用珠海贝索的酸性罗氏培养基和中性罗氏培养基。1.2仪器西安天隆Real－timePCR仪，江苏硕世全自动核酸提取仪，热电培养箱。1.3方法1.3.1痰涂片镜检抗酸染色［12］，用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2～3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3～5min，待标本冷却后用水冲洗。3%盐酸酒精脱色30s～1min，用水冲洗。用碱性美兰溶液复染1min，水洗，用吸水纸吸干后用油镜观察。1.3.2分离培养取目标痰液经4%氢氧化钠溶液消化处理15min后，酸性罗氏培养基37℃培养7周，分离得到菌株。1.3.3DNA制备取1ml菌悬液或痰液于1.5ml离心管中，7500rpm离心10min，弃上清，加入180μl溶有溶菌酶的缓冲液BL，充分混匀，低速离心，于37℃水浴温育30min(温浴期间每隔10min颠倒混匀一次)。加入10μl蛋白酶K至样品中，充分混匀，低速离心，56℃水浴温育10min。将消化液全部加入到试剂板AT中的第1、7列中。将加入样本的试剂板AT放置在核酸提取仪中，试剂板AT的缺口朝外。插入八联磁棒套，关上试验仓，按下设置核酸提取程序，并选择运行。1.3.4RPA反应体系每份反应液中含有A反应液29.4μl，上、下游引物(10μmol/μl)各2μl，探针(10μmol/μl)2μl，灭菌水11.5μl，结核分枝杆菌DNA样品2μl，反应液总体系50μl。1.3.5PCR反应条件39℃30s(×1)，39℃10s→39℃20s(×40)。1.3.6结果分析采用SPSS21.0对数据进行整理分析，采用χ2检验对不同检测方法的结果进行统计学分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1RPA技术检测结果80例疑似肺结核患者的痰标本中检测出70例阳性，结果见图1。对余下的10例患者标本分别进行痰涂片以及痰培养，结果均为阴性，又对10例患者进行流行病学调查，综合实验结果可以排除结核病的可能。2.2痰涂片镜检结果对80例疑似肺结核患者的痰标本进行痰涂片镜检，阳性45例，再进行RPA检测，45例患者标本全部阳性;对35例涂片阴性的标本进行RPA检测，其中检出25例阳性、10例阴性。在80例疑似肺结核患者的痰标本中，RPA检测阳性率为87.50%，痰涂片检测阳性率为56.25%，RPA阳性检测率较高，对两种检测方法进行配对设计的χ2检验，差异有统计学意义(χ2=25.00，P＜0.01)。2.3痰培养结果80例疑似肺结核患者的痰标本中培养出60株结核分枝杆菌。与RPA技术比较见表3。60例培养阳性的标本进行RPA检测，全部阳性，对20例痰培养阴性的标本进行RPA检测，其中检出10例阳性、10例阴性。在80例疑似肺结核患者的痰标本中，RPA检测阳性率为87.50%，痰培养检测阳性率为75.00%，RPA阳性检测率较高，对两种检测方法进行配对设计的χ2检验，差异有统计学意义(χ2=10.00，P＜0.01)。

3讨论

杆菌范文篇7

1材料与方法

1.1材料。选取本院2018-05—08间临床诊断的活动性胃炎胃黏膜活检标本65例。1.2方法。将65例石蜡标本连续切片，制成4μm厚的切片，每例取3张，分别进行硼酸亚甲蓝染色、改良Giemsa染色和硝酸银染色。1.2.1试剂配制①硼酸亚甲蓝染液配制:把1g亚甲蓝和1g硼酸加入100ml蒸馏水中充分混合溶解。②改良Giemsa染液配制:Giemsa染液:Giemsa染液0.75g加甲醇50ml于50度水浴箱中使其充分溶解，其间不断搅拌，冷却后加入50ml甘油;石炭酸复红液:碱性品红50mg溶于95%乙醇100ml，再加入4%苯酚250ml及蒸馏水650m，充分混合即可。③硝酸银液配制:醋酸贮备液:双蒸馏水加1%柠檬酸液，调节PH值为3.6～4.0之间;5%明胶液:明胶5g加醋酸贮备液100ml溶解;③显影液:3%对苯二酚1ml与5%明胶15ml充分混合，显影前5min加入2%硝酸银3ml混合。1.2.2染色步骤①硼酸亚甲蓝染色:切片脱蜡至水，硼酸亚甲蓝染液染色5min，水洗，烘干切片，中性树胶封固。②改良Giemsa染色:组织切片脱腊至水，改良Giemsa染液染色20min后水洗，石炭酸复红液染1min，不洗直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。③硝酸银染色:切片脱蜡至水，醋酸贮备液洗切片，把切片置入1%硝酸银于56℃水浴箱45min，切片取出不经水洗，滴入显影液56℃水浴反应2min，切片立即取出，自来水稍洗，无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。1.3结果判定。切片高倍镜下，阳性的幽门螺杆菌形态弯曲，短杆状，分布在胃黏膜凹陷内。硼酸亚甲蓝染色法幽螺杆菌呈蓝色;改良Giemsa染色法幽门螺杆菌呈红色;硝酸银染色法幽门螺杆菌呈棕黑色。

2结果

65例胃黏膜标本中，经硼酸亚甲蓝检出55例HP阳性，阳性率85%(图1);经Giemsa染色49例阳性，阳性率75%(图2);经硝酸银染色检出52例阳性，阳性率80%(图3)。三项染色阳性的数据比较差别显著(P＜0.05)。

3讨论

杆菌范文篇8

［关键词］儿童；幽门螺杆菌；胃癌

近年来儿童纤维胃镜开展普及，我院216例胃黏膜活检标本中检出胃腺癌1例，且伴重度幽门螺杆菌（HP）感染。成人HP感染与胃癌关系为近年来研究热点之一，但对儿童胃癌与HP感染关系国内鲜有报道，故本文就我院胃黏膜活检分析，以初探儿童HP感染与胃癌关系，现将资料报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料216例胃黏膜标本均系我院消化科纤维胃镜下活检送检标本，男121例，女95例，年龄最小1岁，最大16岁，平均9.6岁，年龄分布情况，见表1。以8～12岁组共164例为最多（占76%）。表1216例胃镜活检年龄分布（略）

1.2临床表现216例中临床表现为：轻度慢性胃炎174例，上消化道出血17例，十二指肠球炎11例，消化性溃疡12例，便血2例。

1.3方法所有送检标本进行常规10%缓冲中性福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色镜检，其中190例于加染HP染色（Giemsa染色）油镜下确诊；1例胃腺癌者石蜡切片加PAS染色及免疫酶标AE1/AE3、KP1、CK8、LCA、SMA检测。

1.4统计学方法采用医学统计学PEMS软件包进行χ2检验。

2结果

2.1216例胃黏膜活检病理诊断见表2。胃腺癌患者（表2中Δ）女12岁，血便2个月，胃镜下胃黏膜活检：一块为少量异形细胞（见图1、图2），一块为中度慢性浅表性胃炎（见图3），HP强阳性（见图4），异形细胞PAS染色，浆内阳性（见图6）；AE1/AE3（见图7）、CK8（见图8）均阳性；KP-1，LCA，SMA均阴性。活检病理诊断：（胃窦部）胃腺癌，后经外科手术胃切除标本病理证实，胃腺癌Ⅱ级，浸润深肌层，淋巴结10/21只有转移。表2216例胃黏膜活检病理诊断（略）

2.2190例胃黏膜活检结果190例石蜡切片HP染色及58例同时胃黏膜印片HP染色结果46例HP阳性，见表3。

图1异形细胞图2异形细胞图3中度慢性浅表性胃炎图4胃黏膜小凹HP（+++）图5异常胃黏膜HP--图6异形细胞浆PAS+图7异形细胞AE1/AE3+图8异形细胞CK8+表3190例胃黏膜活检，印片HP染色（略）注：χ2=7.14，P=0.0281中、重度慢性浅表性胃炎HP阳性检出率高于轻度慢性浅表性胃炎，3组经统计学分析，差异有显著性（P=0.0281）。其中16例石蜡切片HP染色阴性者14例（轻度炎5例，中度炎8例，重度炎1例）印片HP阳性，故HP阳性总检出率为24.2%，加用印片HP染色，增加了HP阳性检出率7%。

2.3胃黏膜活检病理诊断临床诊断与胃黏膜活检病理诊断比较，见表4，经统计学分析，差异无显著性（P=0.25）。表4活检病理诊断（略）注：χ2=10.16，P=0.253讨论

自Warren和Marshall于1882年发现HP以来，已知HP感染是全世界范围内广泛存在且最常见的细菌感染，目前已证实其是胃癌主要的危险因子之一

［1，2］；1994年国际癌症研究机构就已将HP列为人类Ⅰ类致癌原，可至今对此仍有争论，致癌机制尚不明。

由本组胃镜活检分析提示儿童中、重度慢性浅表性胃炎HP阳性检出率明显高于轻度慢性浅表性胃炎者，经统计学分析，P=0.0281，差异有显著性，而且1例中度慢性浅表性胃炎有胃腺癌患儿为HP重度感染，提示HP感染与胃炎程度及胃腺癌确有关系，此与文献报道相似［1～4］。

在成人胃癌与HP感染研究已不断深入，已从细胞水平发展到分子水平，基因水平［3，5～10］认为HP致癌机制可能由于HP感染后产生NH3引致低胃酸或HP代谢产物直接损伤胃黏膜，增加DNA受损机会，还是导致基因突变，癌基因ras、c-mye等或抑癌基因P16，P53等突变率增加或表达异常；流行病学也认为二者相关，如我国胃癌高发区兰州HP感染较早出现，10岁以下儿童感染率已达40%～50%［1］，然而也有学者持怀疑态度；因为一些发展中国家HP感染率高达90%，但胃癌发生率却很低；儿童是HP感染的高危人群，但儿童发生胃癌远较成人为低。我院5505例外检中仅发现儿童胃腺癌3例（0.054%）。因此HP感染与儿童胃癌发生间确切关系尚不清楚，有待进一步探讨。

本组分析认为HP阳性检出率在活检标本石蜡切片同时加行新鲜胃黏膜标本印片HP染色，可提高HP阳性检出率，本组由此提高7%阳性检出率。

由于胃镜检查联合活检对胃癌发现仍是目前主要且准确、可靠的方法，其准确率可达97.4%，敏感性为93.8%，特异性高达99.6%，本组1例胃腺癌患儿因便血2个月才胃镜确立诊断，立即手术已属晚期，此提醒临床医生，对有便血患儿必要时还需及早胃镜检查加活检及HP检测，以便及时治疗HP感染，早期预防、早期发现、早期治疗胃癌。

［参考文献］

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杆菌范文篇9

关键词：布氏杆菌病；马尔他热；波浪热；乳制品；家畜；护理

布氏杆菌病(Brucellosis)又称马尔他热(MoltaFever)或波浪热(UndulantFever)，是由布氏杆菌引起的一种人畜共患的地区性流行病。本病的主要传染源是羊，其次是牛和猪。病菌可以从破损的皮肤进入体内，也可随乳制品进入体内。我科2006年收治1例布氏杆菌病患者，经密切观察、及时确诊并给予对症治疗和护理后好转而转入专科医院继续治疗。

一、病例简介

男，21岁，学生。患者于入院前3个月无明显诱因出现低热，体温波动在37．5℃左右，伴流涕、打喷嚏，有轻咳、咳少量白色泡沫样痰，自服阿莫西林、APC、维C银翘片等药物后体温可降至正常，咳嗽、咳痰、流涕症状好转。3～4d后体温复升并波动在37～39℃，伴畏寒、寒战、乏力、腹胀；l周前出现双侧踝、膝关节疼痛，伴右足第1跖趾关节持续性肿痛；3d前出现右上腹压痛。于我院就诊，行腹部B超检查示“脾稍大，肝大，左肾结石或钙化灶，盆腔少量积液”，于2006年5月10日以“发热原因待查”收入院。个人史：出生并久居于山西省，家中养羊，否认疫区居留史及疫水接触史，否认长期放射线、毒物接触史。人院后查体：体温36．8℃，脉搏84次／min，呼吸20次／min，血压100／70mmHg，皮肤温度及湿度增高。左侧颈后可及淋巴结1枚，直径约o．5cm，双侧腹股沟可及淋巴结数枚，最大直径1cm，质韧，活动度可，无压痛。球结膜轻度充血，右侧颜面部稍肿胀。右侧颌下腺略饱满，表面不平，质软。脾肋下约3cm，质软，叩诊肝下界于肋弓下5cm，肝区叩痛阳性，脾区叩痛阳性。脊柱T。。棘突可及压痛及叩击痛。双手细颤。患者入院后仍间断发热，体温最低36．8℃，最高40℃，呈波状热。人院后行骨穿检查提示骨髓增生活跃，中性粒细胞可见中毒颗粒，不除外感染。5月12日患者出现左侧睾丸部位疼痛，逐渐加重并转为双侧，查体：右附睾头、体、尾均肿大，约4cm×2cm×2m，左附睾轻度肿大，压痛(+)，左侧精索静脉曲张，阴囊B超提示：双侧附睾略增大并血流丰富，双侧精索静脉轻度曲张。反复查布氏杆菌凝集试验3次均为阳性，滴度为1：20，血培养结果支持，因而确诊为布氏杆菌感染。给予抗感染(利复星O．2g静脉滴注，每日2次)、营养支持及对症治疗后体温呈下降趋势，5月23日转入传染病医院继续治疗。

二、护理

2．1心理护理患者由于持续发热，反复治疗反复发作，同时伴全身多处不适，关节和睾丸疼痛，以及对疾病及预后的不确定，感焦虑、抑郁、悲观和恐惧，不愿与人交流，有时会对医护人员发脾气。在此情况下，我们积极主动与患者及家属沟通，耐心听取患者的主诉与抱怨，说明我院的医疗设备和技术水平，会尽快检查确诊，以消除患者的顾虑，树立战胜疾病的信心。同时，在每次进行治疗、检查、护理工作前充分向患者及家属讲解其意义、目的、配合方法和注意事项等，并做好思想工作，从而建立了相互信任的护患关系。在双方共同努力之下，患者能够正视自己的病情，并愿意积极配合治疗和护理工作，情绪状态较前明显好转。

2．2病情观察密切观察患者的体温变化及热型，关节肌肉疼痛的部位、性质、持续时间等，注意有无关节强直、畸形。观察患者生殖系统症状，如睾丸炎、附睾炎等，了解有无神经系统症状，如腰痛、胸痛、腿痛等。观察患者淋巴结肿大的程度、部位及肝脾有无肿大及其程度，此患者左侧颈后及双侧腹股沟可触及肿大淋巴结，肝脏、脾脏肿大，叩痛阳性。此外，还应监测患者的血常规、电解质、生化、布氏杆菌凝集试验结果、出入量、生命体征等，发现异常情况，及时通知医生。在给予患者抗感染、退热、补液治疗时，随时观察药物的治疗效果及用药后的反应。

2．3发热护理

2．3．1监测体温变化向患者讲解发热的相关知识，如发热的原因、诱因、治疗等；介绍发热的处理方法和注意事项，如冰袋冷敷的部位、乙醇擦浴的方法等；每日测量体温4次。该患者体温循环起伏呈典型的波状热，每次测量体温前30min不进食或饮用热水，测量时用毛巾擦干腋下汗液，以保证结果准确。物理降温时可用冰袋冷敷前额、头顶或体表大血管处，如颈部、腋下、腹股沟等处，也可用30～40℃温水或35％～50％乙醇100～200ml擦浴。严格掌握禁用冷的部位，注意避免长时间冷敷同一部位，以防止局部冻伤。同时观察周围循环情况，如患者出现脉搏细弱、面色苍白，四肢厥冷时，及时处理，此患者未出现上述表现。

2．3．2做好基础护理患者多于夜间或凌晨退热时大汗淋漓，盛汗后感全身软弱无力，口腔黏膜干燥。嘱患者卧床休息，除如厕外不下床活动。给予温水擦浴并及时更换潮湿的衣裤。保持床单元清洁干燥，注意保暖，让患者穿棉质透气性好的衣裤，以利于散热。出汗后及时帮助患者擦干，避免受凉。指导患者漱口，避免口腔感染并给予少量液体石蜡涂抹口唇。保持环境整洁，空气清新，病室内温湿度适宜，每日通风换气2次，每次30min。患者住院期间未发生口腔及其他部位的感染。

2．3．3及时补充营养和液体遵医嘱给予高热量、高维生素、易消化的半流质饮食，如面条汤、面片汤、蔬菜粥等。鼓励患者少食多餐，每日进餐5次，每次200～300ml。指导患者每日至少饮水2000ml，可饮用蔬菜汁、水果汁以补充维生素和电解质，防止脱水。当患者食欲差，进食少时，遵医嘱给予静脉补液，以保持电解质平衡和体液充足，并监测生命体征、出入量、电解质指标，有异常时及时报告医生给予处理。

2．4疼痛护理布氏杆菌能够进入细胞内，侵犯关节肌肉组织、生殖系统、神经系统等多系统多器官，从而引发一系歹{j临床症状。疼痛多发生在大关节，呈游走性，有时疼痛十分剧烈，如锥刺样或顽固性钝痛，一般镇痛剂不能缓解。当神经干或神经根受累会出现幸孛经痛，可表现为腰部、下肢及胸部剧痛。当病变侵犯生殖系统时，会出现睾丸炎、附睾炎等。该患者出现双侧踝关节和膝关节疼痛，疼痛为持续性钝痛，伴有右足第1跖趾关节持续性胖痛。双侧睾丸部位疼•87•痛，为持续性胀痛。遵医嘱针对不同的疼痛部位分别给予处理：①关节疼痛时遵医嘱给予5％～lo％硫酸镁热敷局部，每日2～3次，同时配合水浴疗法等以减轻疼痛，协助按摩、肢体被动运动以防止关节强直、肌肉萎缩及关节活动障碍。在采取上述措施后，患者双侧膝关节及踝关节疼痛较前明显减轻，右足第l跖趾关节肿痛减轻。②睾丸胀痛不适时遵医嘱给予“十”字吊带托扶，将睾丸位置提高，避免下垂，以促进静脉回流，减轻局部胀痛。患者诉使用“十”字吊带后睾丸胀痛较前减轻。教会患者使用放松术，如深呼吸、肌肉放松疗法，以缓解病痛。公务员之家

2．5健康教育

选择适宜的时间，向患者分次讲解布氏杆菌病的相关知识。强调及时就诊并说明急性期彻底治疗的重要性，以免复发和慢性化。羊是主要传染源，牲畜得病后早期往往导致流产，其阴道分泌物、胎盘、羊水、乳汁中带菌率最高。因此，注意管理好传染源，防止病畜或患者排泄物污染水源、食物，禁食病畜肉及乳品，对牲畜开展普查普治，必要时应宰杀，以切断传播途径，保护易感人群。3小结布氏杆菌病是人畜共患、自然疫源性疾病。近年来，布氏杆菌病较为少见，很容易被入忽视，但仍有散在发病。对于该病在问诊时详细了解流行病学史尤为重要。此患者既往有与羊的接触史，病情发展中有波状发热、淋巴结肿大、肝脾肿大、关节疼痛、睾丸胀痛等表现，连续3次检验血清布氏杆菌凝集试验均为阳性，从而支持了本病的诊断。提示对于布氏杆菌病只有做到早发现、早诊断、早治疗，早期应用抗生素，才能降低并发症的发生，降低病死率。同时，给予患者积极合理的治疗与精心周到的护理，是提高疗效、促进康复的关键。

参考文献：

杆菌范文篇10

目前世界范围的细菌耐药性是近几年医学科学领域中研究的热点问题。流感嗜血杆菌（Haemophilusinfluenzae,Hi）是小儿呼吸道感染的常见致病菌，对临床常用抗生素的耐药性呈上升趋势，引起了医学界普遍关注。继β内酰胺酶阴性耐氨苄西林Hi（BLNAR）发现之后，世界各地又陆续报道了多重耐药菌株的出现。本文就流感嗜血杆菌的耐药现状及其对常用抗生素的耐药机制作一综述。

1流感嗜血杆菌的一般情况

Hi分型研究的常用方法有生物型、血清型和荚膜型等多种，其中荚膜型/血清型对Hi致病性研究和菌苗研制意义重大。根据该菌细胞壁外荚膜多糖的有无，可将Hi分为有荚膜的可分型和无荚膜的不可分型两类，前者再可根据其荚膜多糖抗原的不同，分为a、b、c、d、e、f六个血清型。

研究表明不同年代、不同地区Hi血清型存在较大地区差异。用直接原位聚合酶链反应（ISPCR）杂交法，20世纪50～60年代Hib的检出率是14.3%，80年代至2002年Hib的检出率是20.5%［1］。陈民钧等［2］用Hib型抗原乳胶凝集试验对北京、上海和广州地区的菌株进行研究，发现三个地区Hib分别占1.8%、32.3%和6.5%。之后报道北京2000年Hib检出率是13.7%［3］，上海2003年是19%［4］。华春珍等［5］对247株Hi血清分型研究中不可分型菌株占61.9%，可分型菌株占38.1%，其中可分型菌株中以d型为主，构成比达90.4%，b型仅1.1%。

在国外，孟加拉国化脓性脑膜炎由Hi引起的占35%，这其中有97.1%为Hib感染［6］。意大利学者报道了1997～1998年分离的Hi菌株中b型占91.2%，f型占0.9%，不可分型占7.9%［7］，1998～1999年分离的Hi菌株均为Hib，2000～2001年在对7例病人标本进行追踪检测，其中有5株为e型［8］。波兰学者从感染的下呼吸道分泌物中分离的Hi菌株中b型占40.3%，e型占38.9%，f型占16.7%，d型占4.1%［9］。

Hi作为流感时继发感染的常见细菌，在我国尤其是儿童呼吸系统感染中占重要地位。不同型的菌株引起的疾病种类和感染宿主年龄不尽相同，其中b型致病力最强，对儿童常常危及生命。Hib可引起严重感染，但近些年来由于Hib疫苗的推广使用，Hib感染率逐渐下降，而其它型及无荚膜型Hi感染日益增多。在美国，非b型菌株发病率有上升趋势，在成人慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者及中耳炎患儿中的检出率越来越高［10］。荚膜作为本菌的主要毒力因子，是产生致病性的主要原因。有荚膜株常引起肺炎、败血症等侵袭性感染，而无荚膜株是引起儿童中耳炎和呼吸道感染的重要病原并且也可引起侵袭性感染，这与正常人呼吸道寄居者中绝大多数是无荚膜型相关联。

2流感嗜血杆菌对抗生素的耐药现状

2.1Hi对β内酰胺类的耐药性

2.1.1青霉素类

以氨苄西林为代表，氨苄西林在70年代作为治疗该菌感染的首选药，自1972年在欧洲首次发现Hi对氨苄西林耐药后，世界各地相继报道了其耐药性，呈现出明显的地区差别。我国国内各地报道不一，在4.8%～40.2%之间［11］，如Hi对氨苄西林耐药率北京地区为14.3%［12］，上海为13.6%［4］，杭州为14.2%［5］。SENTRY抗生素检测项目研究中氨苄西林耐药率亚太地区是16.2%，美国是31.5%，加拿大是27.0%，拉丁美洲是12.5%，欧洲是11.8%［13］。Tarnargo等［14］对古巴1990～2002年938株Hi的耐药性研究显示Hi对氨苄西林的耐药呈上升趋势，为40.7%～54.8%。

2.1.2头孢菌素类及其它β内酰胺类

北京俞桑洁等［12］对2000～2004年临床分离的521株Hi耐药性监测结果显示：该菌对阿莫西林/克拉维酸、头孢曲松和头孢呋辛非常敏感，对头孢克洛不敏感率由2%增加到14.3%；上海张泓等［4］对2000～2002年分离的Hi药敏检测显示：该菌对头孢唑林、头孢克洛和头孢噻肟的耐药率分别为16.1%、7.7%和4.0%；杭州华春珍等［5］对233株Hi药敏试验显示：该菌对头孢克洛、头孢噻肟、头孢曲松、亚胺培南的敏感率分别高达98.7%、99.6%、99.6%、99.6%，所有菌株均对阿莫西林/克拉维酸敏感。

2.2Hi对大环内酯类、四环素类、喹诺酮类等抗生素的耐药性

北京地区Hi对四环素、磺胺甲基异口恶唑甲氧苄啶、氯霉素的敏感性分别在55%～79%、22.9%～46.1%、82.4%～93.3%［12］；上海地区Hi对环丙沙星、复方新诺明、氯霉素和阿奇霉素的耐药率分别为0.9%、59.6%、5.9%和0.8%［4］；杭州地区Hi对利福平、克拉霉素和氯霉素的敏感率分别为98.7%、91.0%、90.6%，对氧氟沙星敏感，对甲氧苄啶磺胺甲基异口恶唑的耐药率最高达45.9%［5］。

在国外，SENTRY抗生素检测项目［13］研究显示，Hi对氯霉素、四环素、复方新诺明耐药率美国分别为0.4%、0.7%、14.6%；拉丁美洲分别为1.7%、1.5%、30.8%；欧洲分别为1.6%、2.6%、17.8%；亚太地区分别为2.6%、2.6%、13.9%。在古巴Hi对常用抗生素的耐药率较高，1999～2002年期间耐药呈上升趋势，对氯霉素、四环素、复方新诺明耐药率分别为40.1%～51.6%、23%～45.2%、45.4%～58.1%［14］。

3流感嗜血杆菌的耐药机制

Hi对抗生素的耐药机制可分6个方面：第一类为产酶机制即菌株产生质粒介导的β内酰胺酶；第二类为不产酶机制，由青霉素结合蛋白（PBPs）改变和外膜蛋白（OMP）通透性下降引起的耐药；第三类为氯霉素乙酰转移酶的产生和外膜渗透性的降低；第四类为获得外源性DNA编码产生四环素耐药或产生具有核蛋白保护作用的蛋白质；第五类为二氢还原酶的产生；第六类为编码DNA解旋酶和拓扑异构酶IV上的A亚单位的gyrA和parC基因的变异。

3.1Hi对氨苄西林的耐药机制

Hi对氨苄西林耐药的主要机制是菌株产生质粒介导的β内酰胺酶，PBPs改变和OMP通透性下降引起的耐药较为少见［15］。

3.1.1Hi的产酶耐药机制

Hi产生的β内酰胺酶主要是由质粒介导的TEM1型酶，其次为ROB1型酶。对于编码TEM1酶的耐药基因主要位于质粒pBR322上或转座子A上，而编码ROB1酶的耐药基因位于4.4kb的pROB质粒上。有关研究发现Hi耐氨苄西林的机制，尤其是b型菌株，90%产生TEM1酶，只有8%产生ROB1酶，没有同时产生两种酶的菌株存在。在近几年的研究中，对头孢克洛耐药的产酶菌株中ROB1占66.7%，TEM1占33.3%，并且研究中ROB1型Hi对头孢呋辛、头孢噻肟、头孢克肟和亚胺培南的敏感性与TEM相似［16］。虽然ROB1底物构象与TEM1非常类似，但其pH值为8.1使它具有能够更快速地水解氨苄西林和更慢地水解头孢噻啶类抗生素，而且更易被邻氯西林抑制的特点。

3.1.2Hi的不产酶耐药机制

β内酰胺酶阴性的耐药菌株（βlactamasenegativeandampicillinresistance,BLNAR）在1980年首次被报道，其耐药机制主要是由于菌株细胞壁上一种或多种青霉素结合蛋白发生改变，引起青霉素结合蛋白与靶位亲和力的降低，其次是由于外膜蛋白改变导致耐药［17］。PBPs的本质是细菌细胞膜的膜蛋白，通过短链的羧基或氨基疏水性末端连接于细菌细胞膜的表面，含量约占细胞膜干重的1%，相对分子质量一般在（20～120）×103。PBPs作为参与细菌细胞壁肽聚糖生物合成的酶，有催化肽聚糖聚合（转糖基作用）和交联（转肽作用）的活性及在肽聚糖生物合成的末端反应、形态维持和糖肽结构调整等方面具有重要功能，因此它的结构功能是细菌保持正常形态及功能的必需条件。1981年第一次报道了氨苄西林敏感的Hi的PBPs，根据相对分子质量的大小，可将PBPs分为两类：一类是低分子质量的PBPs，具有转肽酶和（或）水解酶活性；另一类是高分子质量的PBPs，在某些细菌具有转糖基酶活性。研究发现PBPs可分成1、2、3、4、5、6等，同时根据不同基因编码的相对分子质量情况，又将其分为多个亚种，如1a、1b、2a、2b等。HiOMP通透性下降所致的耐药性并非是由于任何染色体的突变或是耐药质粒的获得，往往是对抗菌药物特异性较差，因此具有了多重耐药性。Arbing等［18］用X线衍射晶体分析HiOMP的结构，认为Hi对抗生素的耐药性与特异性OMPP2的氨基酸序列的改变有关。此研究从电生理变化与抗生素敏感性关系角度出发，通过了对离子通道选择性，电压门控及单离子通道传导等指标的检测，来观察OMP对MIC的影响，认为其中单离子通道传导性的降低直接影响了Hi对抗生素的敏感性。

3.2Hi对氯霉素、四环素、复方新诺明、氟喹诺酮的耐药机制

Hi对氯霉素的耐药多见于氯霉素乙酰转移酶（CAT）的产生，而Jane等证实还与外膜渗透性的降低有关。对四环素的耐药主要为获得外源性DNA编码产生四环素或产生具有核蛋白保护作用的蛋白质，也可能与前些年常用该药有关。对复方新诺明的耐药主要是由染色体介导的二氢叶酸还原酶的过量产生。Jone等［19］认为染色体编码的floh基因突变引起对甲氧苄啶的耐药性，对磺胺类的耐药性是由染色体编码在SulA类似物中的基因突变，而Enne等［20］认为，对磺胺类的耐药机制有别于以前，在英国和肯尼亚Hi对磺胺类的耐药主要是由于SU12基因介导和变型的flop基因介导。对氟喹诺酮的耐药主要是编码DNA解旋酶和拓扑异构酶IV上的A亚单位的gyrA和parC基因的变异［21］。

3.3Hi多重耐药产生的机制

目前，越来越多的研究发现多重耐药Hi的存在，这是临床治疗中最棘手的问题。不同的耐药基因可以整合在同一转座子或质粒上进行传播引起Hi多重耐药，而β内酰胺酶中由染色体介导的广谱β内酰胺酶也有可能引起多重耐药。相关报道认为可能是Hi的一种接合性质粒可以同时编码产生β内酰胺酶和乙酰转移酶，从而决定了氨苄西林及氯霉素的双重耐药性。

4结束语

抗生素的广泛应用是细菌耐药性形成和耐药程度增加的重要原因，因此，合理慎用抗生素仍是减慢耐药菌株快速增长的好方法。当Hi逐步地被我们认识的时候，深入了解其耐药情况和耐药机制对指导临床用药是非常有意义的。

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