乌蕨不同部位总黄酮分析论文

乌蕨［Stenolomachusanum(L.)Ching］为鳞始蕨科植物乌蕨的全草，又名野鸡尾、金花草、中华金粉蕨，具有清热、解毒、利湿、止血的功效［1］。本文就乌蕨全草、根、茎、叶等不同部位的总黄酮和微量元素含量进行比较分析，为乌蕨的进一步研究和资源开发提供依据。

1仪器与试药

1.1仪器

WND200A型高速中药粉碎机（上海微型电机厂），BS224S精密电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，TU1900双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司），IRIS/AP型电感耦合等离子体发射光谱仪(美国TJA公司)，全自动回流消化仪(重庆南岸玻璃仪器厂)。

1.2试药

芦丁标准品(中国药品生物制品检定所，批号为0080-9705)；硝酸、高氯酸均为优级纯，其他试剂均为分析纯，测微量元素用水为双蒸水。乌蕨药材于2008年10月采于杭州九溪，经熊耀康教授鉴定为乌蕨Stenolomachusanum(L.)Ching的地上部分，阴干，粉碎，备用。

2实验方法与结果

2.1总黄酮含量测定［4］

2.1.1对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥恒重的芦丁对照品16.50mg，加60%乙醇溶解定容于50ml容量瓶，得浓度为0.33mg/ml对照品溶液，备用。

2.1.2供试品溶液的制备：定量称取乌蕨干燥粗粉5.0g，加16倍量0.1％HCl-60％乙醇回流提取4h，提取1次，提取液减压浓缩，加60%乙醇定容至25ml，作为供试品溶液备用。

2.1.3标准曲线的制作：精密吸取标准品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，分别置25ml容量瓶中，加入5%NaNO21.0ml，摇匀，放置6min后加入10%Al(NO3)31.0ml，摇匀，放置6min后加入4%NaOH10ml，再加60%乙醇稀释至刻度，混匀，静置15min，于510nm处，以相应试剂作空白，测定吸光度，以芦丁浓度为纵坐标，以吸光度值为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=2.778X-0.0775（r=0.9991），结果表明芦丁在0.016～0.99mg范围内呈良好的线性关系。

2.1.4精密度实验：取芦丁对照品溶液2.0ml，置25ml容量瓶中，按“2.1.3”项操作，平行测定5次，结果其RSD为0.21％，表明精密度良好。

2.1.5重复性实验：取同1份样品溶液5份，分别按“2.1.3”项操作，结果RSD为0.72%。

2.1.6稳定性实验：取1份样品溶液，按上述实验方法在显色完全后0、10、20、30、45、60min分别测定吸光度，结果RSD为1.08%。实验表明：供试品溶液在1.0h内稳定的。

2.1.7加样回收率实验：取已知总黄酮含量的乌蕨样品6份，分别精密添加已知浓度的芦丁对照品适量。按供试品溶液制备方法制备，按“2.1.3”项操作，测定总黄酮含量，计算测定回收率，结果平均回收率为99.34％，RSD为1.82％。

2.1.8乌蕨不同部位总黄酮含量的测定：精密吸取提取液适量，按“2.1.3”项操作，测定吸光度A，结果见表1。表1乌蕨根、茎、叶、全草等不同部位总黄酮含量测定结果（略）

2.2微量元素含量的测定［5］

2.2.1供试品溶液的制备：各取药材约0.5g，精密称定，置50ml凯氏烧瓶，加8.0ml消化液［V(HNO3)∶V(HClO4)=4∶1］，静置过夜，加热回流消化至无色透明，冷却后，定量转移至100mL容量瓶中，加超纯水稀释至刻度，摇匀，备用。取相同体积的消化液，同法消化，制备空白溶液。

2.2.2混合标准溶液的制备：分别取各重金属元素标准品溶液适量，用5%硝酸溶液制成混合溶液，梯度稀释，作为混合标准品溶液备用。

2.2.3测定方法：仪器工作参数：检测器CID的低波段（＜265nm）积分时间：15s；高波段（＞265nm）积分时间：5s；进样蠕动泵转速：100r/min；进样雾化器氩气压力：28psi；辅助气流量：1.0L/min；高频发生器功率：1500W；样品冲洗时间：5s；测定波长范围：193.7～407.7nm。

依次将仪器的进样管插入各个浓度的混合标准品溶液中进行测定，以每一浓度测得的3次读数的平均值为纵坐标，相应元素标准溶液浓度为横坐标，作标准曲线，并进行方法学考察。由各元素的标准曲线计算微量元素的含量，测定结果见表2。表2乌蕨根、茎、全草、叶等不同部位微量元素含量测定结果（略）

3讨论

3.1由实验可知，乌蕨全草、根、茎、叶等不同部位总黄酮含量分别11.89%、4.47％、3.46％和11.75%，总黄酮含量在叶中较高，而根与茎中总黄酮含量较低。乌蕨富含黄酮类化合物，而黄酮类化合物在临床上具有预防血液类疾病、治疗冠状动脉硬化、抗癌、抗菌、抗衰老、抗糖尿病等作用，食品上作为甜味剂、天然色素等食品添加剂。因此提取乌蕨中的黄酮类化合物，不单可以用于临床药物的研究，也可用于食品与工业方面。

3.2元素测定结果表明，乌蕨全草、根、茎、叶等不同部位均含有丰富的微量元素，其中含B、Ca、K、Na、P、S等多种常量元素；此外还含Cu、Fe、Zn、Cr、Co等多种人体必需的微量元素。其中K、Fe、Ca、Na等元素含量均较高，其次为Mn、Zn、Cu。而有害元素Pb、As、Cu在地上部分含量较低，根中Pb、As、Cu含量都高出了《药用植物及制剂进口绿色行业标准》（Hg≤0.2μg/g、Pb≤5.0μg/g、As≤2.0μg/g、Cd≤0.3μg/g和Cu≤20.0μg/g），可能是由于本身的沉积或者土壤受到污染造成。

【参考文献】

［1］江苏新医学院.中药大辞典(上册)［S］.上海:上海人民出版社,1985：157158.

［2］马莺,王静.功能性食品活性成分测定［M］.北京:化学工业出版社,2005:253.

［3］吴巧凤,曾晓艳.苏州荠苧总黄酮与微量元素含量的测定［J］.广东微量元素科学，2004,11(9):3437.

【摘要】：［目的］比较乌蕨全草、根、茎、叶等不同部位总黄酮和元素的含量差异。［方法］采用可见分光光度法测定不同部位总黄酮的含量；采用电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICPAES法)测定不同部位元素的含量。［结果］乌蕨全草、根、茎、叶等不同部位总黄酮含量分别11.89%、4.47％、3.46％和11.75%，不同药用部位元素的含量存在一定的差异。［结论］乌蕨含有丰富的黄酮类化合物和多种元素，具开发价值。

【关键词】乌蕨；不同部位；总黄酮；元素