葛根素范文10篇

葛根素范文篇1

［关键词］反相高效液相法；心舒片；葛根素；含量测定

ContentdeterminationofpuerarininXinshupian

［Abstract］ObjectiveTostudyaRP-HPLCmethodsthatdeterminedthepuerarincontentinXinshupian.MethodsPuerarinwasseparatedcompletelyonanC18column，usingamixtureofacetonitrileandwater（10∶90）wasmobilephase，withUVdetectionat250nm.ResultsPuerarinhasbetterlinearcorrelationbetween0.079μgand1.185μg，theresultsalsohaveshowntherecoveryratewas96.21%，RSD1.10%.ConclusionThemethodsisverystableandaccurate，andhasgoodreappearance.ItcanbeusedforqualitycontrolofXinshupian.

［Keywords］RP-HPLC；puerarin；Xinshupian;contentdetermination

心舒片是本院的院内制剂，由葛根、毛冬青、红花、益母草等9味中药组成，具有活血化瘀的功效，用于心脉瘀阻所致的胸痹心痛、冠心病、心绞痛、冠状动脉供血不全，临床应用多年，疗效确切。为了更好地保证临床疗效，本文建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定心舒片中葛根素的含量，控制心舒片的质量。

1仪器与试剂

1.1仪器

日本岛津LC-10A高效液相色谱仪，SPD-10AV紫外检测器；CT-100恒温箱。上海必能信CQ-250型超声波清洗器。BP211DAG电子天平（德国Sartorius）。

1.2试剂

乙腈为色谱醇，水为重蒸水。葛根素（中国药品生物制品检定所，批号：110752-200209）；心舒片（本院制剂室生产）。

2方法与结果

2.1色谱条件

（1）色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱KromasilC18（250×4.6mm，5μm）（天津市琛航科技仪器有限公司）。（2）流动相：乙腈∶水（10∶90）。（3）检测波长：250nm。（4）流速：1.0ml/min。（5）柱温：40℃。

2.2对照品溶液的制备

精密称取经五氧化二磷干燥12h的葛根素对照品，加50%的乙醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备

取心舒片10片，除去糖衣，精密称定，研细，取细粉约0.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入50%的乙醇25ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率50kHz）30min，放冷，再称定重量，以50%的乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

2.4阴性对照溶液的制备

按处方比例称取除葛根的其他药材适量，依照心舒片的制备工艺和供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

2.5线性关系的考察

分别精密吸取葛根素对照品溶液（浓度为0.079mg/ml）1μl、2μl、6μl、10μl、15μl，注入液相色谱仪，测定，以葛根素的进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y=1E+07X+196030（r=0.9999）。结果表明葛根素在0.079~1.185μg范围内具有良好的线性关系。

2.6精密度试验

精密吸取葛根素对照品溶液10μl（0.039mg/ml），重复进样6次，峰面积积分值分别为4682219、4622176、4671835、4712194、4666457、4622364，RSD=0.76%，表明本法精密度良好。

2.7重复性试验

取同一批心舒片（批号：060321），除去糖衣，研细，取细粉5份，每份约0.1g，精密称定，按2.3项下的方法制备样品，进行含量测定。结果分别为5.503mg/片、5.511mg/片、5.547mg/片、5.378mg/片、5.322mg/片，平均为5.452mg/片，RSD为1.78%。表明本方法具有较好的重复性。

2.8稳定性试验

取重复性试验项下试验号5的供试品溶液，每2h进样1次，每次10μl，连续进样6次，结果表明在10h内峰面积积分值基本稳定，RSD为0.48%。

2.9回收率试验

贮备溶液：精密称取葛根素对照品7.9mg，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1ml中含葛根素0.79mg的溶液。

取已知含量（5.452mg/片）的心舒片小试样品（批号：060321），除去糖衣，研细，取细粉约0.05g（6份），精密称定，1号、2号分别精密加入贮备溶液0.61ml，3号、4号分别精密加入贮备溶液1.0ml，5号、6号分别精密加入贮备溶液1.4ml，水浴蒸干，按供试品溶液制备方法进行制备并测定含量，计算回收率，结果平均回收率为96.21%，RSD为1.10%。见表1。表1回收率试验结果（略）

2.10样品测定

按拟定的含量测定方法测定三批心舒片中葛根素的含量，结果见表2。表2含量测定结果（略）

葛根素范文篇2

【关键词】液相色谱质谱法;葛根素;血药浓度

Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCMSMSmethodfordeterminingthecontentofplasmapuerarin.MethodsTheplasmasamplepretreatedwithsolidphaseextractionafteradditionofinternalstandardofhesperidinwasanalyzedonanAglientC18column(150mm×2.1mm,3.5μm).Themobilephaseconsistedofmethanol10mmol·L-1NH4ACbufferacetonitrile(70∶20∶10)withtheflowrateof0.2mL·min-1.Thesamplewasionizedbyelectrosprayionizationsourceinthetriplequadrupletandemmassspectrometer,then,itwasquantitatedwithmultiplereactionmonitoringmode.ResultsTherewasagoodlinearityovertheconcentrationrangesof10~3000ng·mL-1(r=0.9986).Thedetectionlimitofthismethodwas10ng·mL-1.Therecoveryandabsoluterecoverywere99.91%~103.92%and91.33%~100.40%,respectively.Thewithindayandbetweendaydeviationswerelessthan15%andthechromatographypeaktRwas1.67min.ConclusionThemethodissensitive,accurate,rapidandsuitableforthedeterminationofpuerarininhumanplasma.

Keywords:liquidchromatography-tandemmassspectrometry;puerarin;plasmaconcentration

葛根素(puerarin)是中药葛根的主要成分之一,具有扩张冠脉血管、降低血压和心肌耗氧量、抗心律失常等作用[1]。文献报道的葛根素血药浓度测定方法多数是高效液相色谱法[2-4],但有时也难以满足药动学研究中微量血药浓度的测定要求,且分析用时较长。本文建立测定葛根素血药浓度的液相色谱串联质谱(LCMSMS)法,具有简便、灵敏度高、特异性强且检测快速等优点,适用于葛根素的药动学研究。

1材料与方法

1.1仪器与试药美国AB公司API3000型液质联用系统;Waters20管型固相萃取仪;TECHNE样品浓缩仪;WatersHLB固相萃取小柱(100mg)。葛根素注射剂(浙江康恩贝制药股份有限公司,0.25g/5mL);葛根素、橙皮苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号分别为:0752200108,0721200104);甲醇、乙腈为色谱纯;醋酸胺为分析纯;重蒸馏水。

1.2色谱及质谱条件色谱柱:AglientC18(150mm×2.1mm,3.5μm),流动相:甲醇10mmol·L-1醋酸铵缓冲液乙腈(体积比70∶20∶10),流速为0.2mL·min-1。辅助气化电喷雾离子源(ESI),多反应离子监测(MRM)模式正离子检测,检测离子对:m/z417.2→267.2(葛根素),m/z611.2→303.2(内标橙皮苷),辅助气化气流量:7500CC·min-1,雾化气流量:8L·min-1,气帘气流量:8L·min-1,碰撞气流量:6L·min-1,离子源喷雾电压:5500V,离子源雾化温度:350℃。

1.3对照品及内标溶液的配制精密称取适量的葛根素对照品,用甲醇溶解并定容得160μg·mL-1的对照品溶液;精密称取适量的橙皮苷对照品,用甲醇溶解并定容得500ng·mL-1的内标溶液。

1.4血浆样品处理固相萃取小柱用1.0mL甲醇活化和1.0mL双蒸水平衡,取血样300μL加入10mmol·L-1醋酸铵缓冲液300μL和内标溶液20μL,混匀后上样,双蒸水1.0mL洗涤,0.5mL甲醇洗脱,收集洗脱液于45℃水浴下用N2吹干浓缩,加入150μL流动相复溶,取5μL进样。

2结果

2.1方法专属性根据葛根素和内标物橙皮苷的子离子质谱扫描结果(见图1),分别选择特异的m/z417.2→267.2和m/z611.2→303.2用于定量监测。按照血浆样品处理方法和检测条件,空白血浆的色谱图、空白血浆加葛根素和内标对照品的色谱图、用药后血浆色谱图,分别见图2A、图2B和图2C。结果表明,葛根素和内标物的保留时间分别为1.67min和1.75min,血浆中无内源性物质和基质效应干扰,方法特异性强。

图1葛根素(1)和橙皮苷(2)的质谱子离子扫描图(略)

Fig.1FullscanMS-MSspectraofpuerarin(1)andhesperidin(2)

A.空白血浆;B.空白血浆加入葛根素和橙皮苷对照品;C.兔给药后血浆

1.葛根素m/z417.2→267.2,tR=1.67min;2.橙皮苷m/z611.2→303.2,tR=1.75min

图2血浆中葛根素和橙皮苷的色谱图(略)

Fig.2ChromatogramsofpuerarinandhesperidininplasmabyLCMSMS

2.2标准曲线及线性范围取空白血浆加入葛根素对照品溶液,配制成浓度为10、30、100、300、1000、3000ng·mL-1的血浆标准曲线样品,按“1.4”项下方法操作,计算葛根素与内标峰面积比,得回归方程为:Y=0.00299C+000234,r=0.9986,权重1/X2。血浆中葛根素在10~3000ng·mL-1范围内与峰面积比线性关系良好,定量下限为10ng·mL-1。

2.3精密度与相对回收率取空白血浆加入葛根素对照品溶液,制备浓度为10、1500和2500ng·mL-1的血浆质控样品,按“1.4”项下方法操作测定,每个浓度的样品在1d内作5份样品分析,连续测定3d,计算方法的日内和日间差,结果低、中、高3种浓度的日内RSD分别为7.56%,4.43%,9.66%(n=5);日间RSD分别为13.58%,7.20%,7.06%(n=15);将实测值与真实值相比得相对回收率,结果低、中、高3种浓度的相对回收率分别为(103.92±14.12)%,(99.91±719)%,(100.29±7.08)%(n=15)。

2.4提取回收率取空白血浆样品按“1.4”项下提取、吹干,然后加入分别含10、1500和2500ng·mL-1葛根素对照品的流动相150μL复溶(n=5),使对照品溶液含空白血浆基质,测定其峰面积并计算得均值A1,A2,A3;另取低、中、高浓度的质控血浆各5份,按“1.4”项下方法操作、测定峰面积,分别与A1,A2,A3进行比较,计算本法的提取回收率(n=5),分别为(91.33±11.06)%,(100.40±7.97)%,(96.36±6.28)%。

2.5稀释能力试验取浓度为2500ng·mL-1的血浆质控样品5份,用空白血浆稀释5倍后按“1.4”项下方法操作,将测定值乘稀释因子后与标示值比较,准确度为(98.45±3.57)%。所以对高于定量上限的样品可用空白血浆稀释后测定。

2.6稳定性试验取低、中、高3种浓度的血浆质控样品各5份,分别在-75℃保存5个月、室温21℃放置24h及经3个冷冻融解循环处置,然后按“1.4”项下方法操作,测定值与真实值比较,相对偏差均<15%,表明血浆样品稳定;血样制备后的待测液在自动进样器中放置6h,其测定值与真实值比较,相对偏差均<15%,表明待测液在测定过程中也是稳定的。

2.7兔体内血药浓度的测定取新西兰兔6只(广州中医药大学动物实验中心提供),雌雄兼有,体重2.0~2.5kg,禁食12h后于耳缘静脉注射葛根素100mg,于注射前、注射结束后0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12h取耳缘静脉血2mL,置肝素抗凝管中,离心(3500r/min)15min,吸取上层血浆进行分析,以标准曲线计算各时间点样本中的葛根素浓度,同时测定质控样本以保证结果的可靠性。兔静脉注射葛根素后的平均药时曲线见图3。

3讨论

葛根素选择m/z417.2→267.2作为监测离子对,特异性强且具有较高的仪器响应值。以含醋酸铵缓冲液的甲醇乙腈作为流动相,可使灵敏度进一步提高和有利于检测体系稳定。使用SPE法净化血浆样品,能有效消除LCMSMS法检测生物样品时常有的基质效应的影响,而且使用WatersHLB小柱,提取效率很高,本试验曾对提取步骤中的洗涤液和二次甲醇洗脱液进行跟踪检测,均无葛根素的检出。药动学研究涉及一系列的血样采集、保存、制备和测定等步骤,药物在纷繁的操作过程中是否保持稳定,需预先在方法学确证试验中进行考察,稳定性试验结果表明,在上述条件下血样中的葛根素是稳定的。LC/MS/MS技术已开始在中药药动学研究得到应用,其特异性强、灵敏度高等优点可满足在复杂的生物样品中进行微量成分分析的要求。本试验采用此技术测定中药葛根素的血药浓度,定量下限达到10ng·mL-1,目标物和内标物的保留时间均在2min之内,检测快速。本方法的各项指标符合生物样品定量分析方法学的要求,可用于药动学研究的大量血样的测定。

图3兔静脉注射葛根素100mg后的平均血药浓度时间曲线(n=6)(略)

Fig.3Theconcentrationtimecurveofpuerarininrabbitplasmaafteriv100mg(n=6)

【参考文献】

[1]朱庆嘉,吕欣然.葛根素的药理学和临床应用研究进展[J].中草药,1997,28(11):693.

[2]潘远江,王骊丽,黄敬群,等.三维HPLC法同步测定犬血浆中的葛根素及阿魏酸[J].沈阳药科大学学报,2001,18(1):45-49.

葛根素范文篇3

葛根素(puerarin)为豆科植物野葛Puerarinlobata(Willd.)Ohwi的干燥根中提取并分离出来的一种单体，属异黄酮类化合物。葛根素具有广泛的肾上腺素β受体阻滞作用，能改善高粘血症和高凝血症，改善微循环，扩张冠状动脉和脑血管，降低心肌耗氧量，抗血小板聚集，清除自由基和保护血管内皮细胞等多种药理活性。临床用于治疗冠心病、脑梗死［1，2］。在治疗眩晕的古方中，有用葛根素升清治清阳不升眩晕的记载［3］。我们应用葛根素治疗眩晕38例，并与纳洛酮(naloxone)比较。

临床资料本组眩晕病人均为住院病人，眩晕呈持续性，发作性加重，生活不能自理，加重时伴心悸、头胀、恶心等症状。诊断根据内科疾病诊断标准及《实用内科学》第9版中有关标准［4，5］。眩晕病人共70例，以抓阄法随机分为葛根素组38例，其中男性30例，女性8例，年龄49a±s7a，病程8mo±13mo(7d～5a)，颈椎性眩晕18例，脑动脉硬化性眩晕20例；伴高血压病30例，冠心病14例，腔隙性脑梗死6例。纳洛酮组32例，其中男性26例，女性6例，年龄47a±8a，病程8mo±13mo(6d～5a)，颈椎性眩晕15例，脑动脉硬化性眩晕17例，伴高血压病25例，冠心病12例，腔隙性脑梗死5例。2组在性别、年龄、病情、病程及并发症等方面均相近，具有可比性。

治疗方法葛根素组给予葛根素注射液［益侨(湖南)制药有限公司生产，商品名伦尔欣，每支100mg·2mL-1］500mg加入5%葡萄糖注射液250mL中，iv,drip,qd;纳洛酮组给予纳洛酮注射液［益侨(湖南)制药有限公司生产，商品名金尔伦，每支0.4mg·1mL-1］1.2mg加入5%葡萄糖注射液250mL中，iv,drip,qd;2组均7d为一个疗程。疗程结束，统计疗效，并观察其副作用。

疗效评定标准显效：眩晕症状完全消失，随访1wk无复发者；有效：眩晕症状明显减轻，偶有发作性加重，头晕和(或)轻微飘浮感；无效：眩晕症状无明显改善或虽有改善但未达到有效标准者。

结果葛根素组显效30例(79%)，有效6例(16%)，无效2例(5%)，临床总有效率95%；纳洛酮组显效24例(75%)，有效6例(19%)，无效2例(6%)，临床总有效率94%。2组经Ridit分析，R葛=0.5,R纳=0.5197，差异无显著意义(P＞0.05)。在用药之初，2组均有3例轻度头胀感，不影响治疗，继续用药，症状消失。

讨论纳洛酮治疗眩晕疗效显著［6］。本研究结果与之相符。证明葛根素与纳洛酮治疗眩晕临床疗效相仿。葛根素治疗眩晕的机制与其扩张脑血管，改善微循环，清除自由基等作用有关，且有轻度降压作用，无纳洛酮可能导致心动过速和升高血压的副作用。笔者认为，葛根素更适用于伴高血压病、冠心病的眩晕病人，较纳洛酮为优，值得临床推荐应用。眩晕是机体对空间关系的定向感觉障碍，在疗效评定标准中缺乏量化指标，是本文之不足。

［参考文献］

［1］徐济民，郑慧君，黄震华，吴士尧，周礼明.葛根素静脉输注治疗冠心病［J］.新药与临床，1996，15：207-210.

［2］门琼，崔怀静，张正英.葛根素治疗脑梗死152例［J］.中国新药与临床杂志，1998，17：120-121.

［3］杜力军，徐治国，於兰，陈迪华，孙虹，李敏.从葛根黄酮的药理作用探讨其中药药性［J］.中医杂志，1998，39：626-628.

［4］朱文炳.美尼尔病［A］.见：上海医科大学实用内科编辑委员会，编.实用内科学；下册.第9版［M］.北京：人民卫生出版社，1993.2034.

葛根素范文篇4

［关键词］反相高效液相法；心舒片；葛根素；含量测定

ContentdeterminationofpuerarininXinshupian

［Abstract］ObjectiveTostudyaRP-HPLCmethodsthatdeterminedthepuerarincontentinXinshupian.MethodsPuerarinwasseparatedcompletelyonanC18column，usingamixtureofacetonitrileandwater（10∶90）wasmobilephase，withUVdetectionat250nm.ResultsPuerarinhasbetterlinearcorrelationbetween0.079μgand1.185μg，theresultsalsohaveshowntherecoveryratewas96.21%，RSD1.10%.ConclusionThemethodsisverystableandaccurate，andhasgoodreappearance.ItcanbeusedforqualitycontrolofXinshupian.

［Keywords］RP-HPLC；puerarin；Xinshupian;contentdetermination

心舒片是本院的院内制剂，由葛根、毛冬青、红花、益母草等9味中药组成，具有活血化瘀的功效，用于心脉瘀阻所致的胸痹心痛、冠心病、心绞痛、冠状动脉供血不全，临床应用多年，疗效确切。为了更好地保证临床疗效，本文建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定心舒片中葛根素的含量，控制心舒片的质量。

1仪器与试剂

1.1仪器

日本岛津LC-10A高效液相色谱仪，SPD-10AV紫外检测器；CT-100恒温箱。上海必能信CQ-250型超声波清洗器。BP211DAG电子天平（德国Sartorius）。

1.2试剂

乙腈为色谱醇，水为重蒸水。葛根素（中国药品生物制品检定所，批号：110752-200209）；心舒片（本院制剂室生产）。

2方法与结果

2.1色谱条件

（1）色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱KromasilC18（250×4.6mm，5μm）（天津市琛航科技仪器有限公司）。（2）流动相：乙腈∶水（10∶90）。（3）检测波长：250nm。（4）流速：1.0ml/min。（5）柱温：40℃。

2.2对照品溶液的制备

精密称取经五氧化二磷干燥12h的葛根素对照品，加50%的乙醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备

取心舒片10片，除去糖衣，精密称定，研细，取细粉约0.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入50%的乙醇25ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率50kHz）30min，放冷，再称定重量，以50%的乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

2.4阴性对照溶液的制备

按处方比例称取除葛根的其他药材适量，依照心舒片的制备工艺和供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

2.5线性关系的考察

分别精密吸取葛根素对照品溶液（浓度为0.079mg/ml）1μl、2μl、6μl、10μl、15μl，注入液相色谱仪，测定，以葛根素的进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y=1E+07X+196030（r=0.9999）。结果表明葛根素在0.079~1.185μg范围内具有良好的线性关系。

2.6精密度试验

精密吸取葛根素对照品溶液10μl（0.039mg/ml），重复进样6次，峰面积积分值分别为4682219、4622176、4671835、4712194、4666457、4622364，RSD=0.76%，表明本法精密度良好。

2.7重复性试验

取同一批心舒片（批号：060321），除去糖衣，研细，取细粉5份，每份约0.1g，精密称定，按2.3项下的方法制备样品，进行含量测定。结果分别为5.503mg/片、5.511mg/片、5.547mg/片、5.378mg/片、5.322mg/片，平均为5.452mg/片，RSD为1.78%。表明本方法具有较好的重复性。

2.8稳定性试验

取重复性试验项下试验号5的供试品溶液，每2h进样1次，每次10μl，连续进样6次，结果表明在10h内峰面积积分值基本稳定，RSD为0.48%。

2.9回收率试验

贮备溶液：精密称取葛根素对照品7.9mg，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1ml中含葛根素0.79mg的溶液。

取已知含量（5.452mg/片）的心舒片小试样品（批号：060321），除去糖衣，研细，取细粉约0.05g（6份），精密称定，1号、2号分别精密加入贮备溶液0.61ml，3号、4号分别精密加入贮备溶液1.0ml，5号、6号分别精密加入贮备溶液1.4ml，水浴蒸干，按供试品溶液制备方法进行制备并测定含量，计算回收率，结果平均回收率为96.21%，RSD为1.10%。见表1。表1回收率试验结果（略）

2.10样品测定

按拟定的含量测定方法测定三批心舒片中葛根素的含量，结果见表2。表2含量测定结果（略）

葛根素范文篇5

【关键词】消渴胶囊；制备工艺；葛根素；干浸膏得率；黄芪甲苷；正交设计法

糖尿病是胰岛功能受损，胰岛素分泌不足而引起的糖代谢紊乱的一种内分泌疾病。其患病率在全球逐年增长。据世界卫生组织(WHO)估计，至2050年，全球糖尿病患病数将达3亿，较目前增长近两倍［1］。针对糖尿病发病率高、并发症多、目前不能根治的特点，中医学在糖尿病的治疗上提出了不少独到治法，并收到了很好的临床效果。

历代医家多数认为糖尿病的病机以阴虚为本，燥热为标，因此，滋阴清热法为指导古今医家治疗糖尿病的基本法则［2］。本方是经多年临床实践而总结的治疗糖尿病的经验方。处方中以黄芪、葛根益气养阴为主，配以知母、生地、天花粉、山萸肉、黄连滋阴清热，辅以山药扶正固本、益气健脾，白芍养血柔肝，从而达到治疗“消渴病”的目的。实验采用L9（34）正交设计法优选，对其制备工艺进行考察。

1器材

高效液相色谱仪（Varian公司5060型）、UV-100可变波长紫外检测器、真空干燥箱（南京索物DZF-6020型）、FA1104电子天平（上海天平仪器厂生产）、双槽层板缺、玻璃板10cm×20cm。

2方法与结果

2.1实验因素水平的选定

2.1.1溶媒的选择根据方中各药所含有效成分的化学性质，原拟定醇提和水提两个方案。预试验中选用8倍量70%乙醇溶液，回流提取两次，1.5h/次；与同条件下的水提液分别对黄芪、葛根、白芍、山萸肉、黄连等5味药进行薄层定性检出，均检出黄芪甲苷、葛根素、芍药苷、熊果酸、盐酸小檗碱等有效成分，从实验观察来看，斑点均清晰，颜色、大小无明显差异；取醇提物和水提物各50ml，浓缩蒸干，醇提物得干浸膏2.4031g，水提物得干浸膏2.3628g，二者之间无明显差异；黄芪采用水提或醇提，其黄芪甲苷提取量无明显差异［1］。鉴于以上三点，且醇提成本远远高于水提，故选用水提工艺。

2.1.2正交实验根据中药提取原理以及实际应用条件，分别确定溶媒用量、浸泡时间、提取时间、提取次数为实验因素，每个因素选了3个水平。结果见表1。

2.2制备工艺优选

2.2.1实验方法采用L9(34)正交实验表设计，每次实验按处方比例取药材量的1/10，按正交表中所列实验条件进行实验。煎煮，脱脂棉滤过，合并滤液，浓缩至250ml。

表1正交实验因素水平（略）

2.2.2葛根药材对照称取葛根药材2g，按《中国药典》方法进行回流提取。

2.2.3葛根阴性对照去葛根药材，其余药材按处方比例取药材量的1/10，加10倍量水，浸泡30min，煎煮2次，1.5h/次。

2.2.4干浸膏得率取浓缩物25ml置恒重过的蒸发皿中，水浴蒸干，置80℃的烘箱3h，取出放入干燥器中30min后精密称定。结果见表2。

2.2.5用HPLC法测定葛根素的相对含量取上述各实验方法中的浓缩液25ml，浓缩成稠膏，加甲醇25ml，超声处理1h，滤过，取续滤液，过微孔滤膜(0.45μm孔径)处理，取续滤液，即得供试品［3］。另取葛根素对照品0.9mg，用甲醇溶解并定容至5ml容量瓶中，摇匀即得。

HPLC法条件［3］：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为甲醇-水(25∶75)；流速1.0ml/min；检测波长为250nm；柱温为室温；定量方法：外标峰面积法。标准品对照：葛根素(0.18mg/ml)；并以葛根药材对照根素含量(3.0mg/ml)为100%，得到各实验方法的相对回收率。数据及结果见表2。

本实验从干浸膏得率、葛根素含量两个因素对工艺进行了考察，对数据进行直观分析，由表中R值可知，RD＞RA＞RB＞RC，影响因素大小顺序为D＞A＞B＞C，综合考察得到最佳制备工艺为原药材加10倍量水，不浸泡，煎煮3次，1.5h/次。

表2L9(34)正交实验表及结果分析（略）

3讨论

3.1处方中以黄芪为君药，而黄芪甲苷又是黄芪中具有代表性的活性成分，因此原拟定以黄芪中黄芪甲苷的含量作为工艺考察指标。按《中国药典》中的方法处理样品，按含量测定项下的方法(双波段反射式锯齿法扫描)测其含量，效果不理想；又采用HPLC法测定含量，由于样品处理后以甲醇作为溶剂，在200nm的检测波长下，溶剂峰和黄芪甲苷的样品峰分离度不好，测定效果亦不好。在多种努力下，仍不能得到好的效果，故决定另选择工艺考察指标。

3.2本方中葛根的处方量与黄芪的处方量相同，在方中均为君药，故决定以葛根素含量作为工艺考察指标。按《中国药典》中用高效液相色谱法测定葛根素含量，相关资料表明，样品的浓缩液用甲醇超声提取法所测样品中葛根素含量明显高于原溶剂萃取法，据此，确定选用超声处理方法来提取葛根素。同时，比较了不同超声时间对提取率的影响，认为超声处理60min后可提取完全。本实验依据此方法处理样品，用HPLC法测定葛根素的含量，结果较为满意。此含量测定方法简便，迅速，结果准确可靠。因此决定采用葛根素的含量作为工艺考察指标。

【参考文献】

［1］魏敏，江雪华.正交设计法优选黄芪提取工艺研究［J］.基层中药杂志，2000,14(6)：23.

葛根素范文篇6

【关键词】反相高效液相色谱法；薄层色谱法；葛根素；川芎；三棱；眼络通冲剂

Abstract：［Objective］ToobservetheindexesofqualitycontrolofnatureandquantityofYanluotongInfusion.［Method］Makeauthenticationtothe2maincomponentsofLigusticumwallichiiandrhizomasparganiiontheirnaturewithSilicagelGthinlayerchromatography;makecontentmeasurementtopuerarinwithRPHPLC,takeKromasil1005C18（4.6mm×250mm，5μm）aschromatogramcolumn,methanolwater（30:70）asflowphase;themeasuredwavelengthis250nm.［Result］Thepuerarinsamplingintherange0.06～0.65μgisingoodlinearrelationshipwiththesummitarea,therelativecoefficientr=0.9999，theintradayanddaysnicetyRSDarerespectively0.85%and0.48%（n=5）;theaveragesamplereclaimratesofhigh,middleandlowconcentrations（n=3）arerespectively101.2%,101.1%and101.4%，RSDis1.1%,0.94%and0.41%separately.［Conclusion］SilicagelGthinlayerchromatographyandRPHPLCarecorrectandreliablefornatureandquantitycontrol,withgoodrepeatability,andcanbetakenasqualitycontrolstandardofthepreparation.

Keywords：RPHPLC;thinlayerchromatography;Ligusticumwallichii;rhizomasparganii;puerarin;YanluotongInfusion

眼络通冲剂具有活血通络之作用，结合氩激光，用于治疗视网膜静脉血栓。该药由葛根、水蛭、人工麝香、川芎、三棱等6味中药经水煎煮、浓缩，加适量辅料制得。但审批标准中原质控标准提供的鉴别方法专属性差且无含量测定方法。为了有效提高及控制本品的质量，我们对标准生产工艺制作的眼络通冲剂的质控项目进行实验室研究，现报道如下。

1仪器与试药

1.1仪器日本岛津LC10ATvp高效液相色谱仪、SPD10Av紫外检测器；7725i手动进样阀（20μl定量管），10μl微量注射器；HS色谱数据工作站V4.0+（杭州英谱）；CQ250超声波清洗器。

1.2试剂与药材葛根、川芎、三棱等药材，βCD（上海伯奥生物科技有限公司），葛根素对照品（供含量测定用）、川芎对照药材均由中国药品生物制品检定所提供，批号分别为752200801和091820007；薄层层析硅胶G（浙江雁荡山试剂厂），甲醇（色谱纯），正己烷、乙酸乙酯、乙醚及石油醚均为分析纯，水为蒸馏水。

2方法与结果

2.1眼络通冲剂的制备将处方量饮片打成粗粒，混合均匀，加10倍水量，按审批标准制剂工艺水煎煮法提取2次，第1次1.5h，第2次1h，提取液合并，静置，取上清液，浓缩至比重1.25以上的浸膏。加入人工麝香、少量糊精及矫味剂，混合均匀，用70%乙醇适量制软材，过10目筛制粒，50℃低温烘干，分装，规格为15g/袋。如上制作三批，批号分别为：080310、080320、080401。

2.2川芎定性鉴别

2.2.1供试品溶液的制备取本品细粉4g，加无水乙醇5ml，摇匀，再加入乙醚30ml，加热回流1h，放冷，滤过，取滤液挥干，加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺川芎的阴性对照样品4g，同法制成阴性对照溶液。

2.2.2对照药材溶液的制备取川芎对照药材1g，加乙醚30ml，加热回流1h，同法制成对照药材溶液。

2.2.3薄层层析板的涂铺取硅胶G3.5g，置研钵中，加水12ml，研磨均匀，铺板10×20cm2薄板一块，晾干，于110℃烘箱中活化30min，置干燥器中备用。

2.2.4薄层色谱法照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录）试验，吸取上述3种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（9：1）为展开剂，展开12cm，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，结果供试品色谱图中，在与对照药材色谱相对应的位置上，显相同颜色的亮蓝色荧光斑点，Rf=0.40，阴性样品无此斑点。

2.3三棱定性鉴别

2.3.1供试品溶液的制备取本品细粉4g，加无水乙醇5ml，摇匀，再加入乙醚30ml，50℃水浴加热回流1h，放冷，滤过，取滤液置40℃水浴上浓缩至约2ml，作为供试品溶液。另取缺三棱的阴性对照样品4g，同法制成阴性对照溶液。

2.3.2对照药材溶液的制备取三棱对照药材2g，加乙醚30ml，加热回流1h，同法制成对照药材溶液。

2.3.3薄层层析板的涂铺取硅胶G3.5g，置研钵中，加0.6%羧甲基纤维素钠溶液12ml，研磨均匀，铺板10×20cm2薄板一块，晾干，于110℃烘箱中活化30min，置干燥器中备用。

2.3.4薄层色谱法照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录）试验，吸取对照药材溶液5μl，供试品溶液与阴性对照溶液各10μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯（17∶3）为展开剂，展开12cm，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，结果供试品色谱图中，在与对照药材色谱相对应的位置上，显相同颜色的亮蓝色荧光斑点，Rf=0.45，阴性对照样品无此斑点。

2.4葛根素含量测定

2.4.1色谱条件与系统适用性试验以Kromasil100-5C18（4.6mm×250mm，5μm）为色谱柱；甲醇-水（30：70）为流动相；流速1ml/min；检测波长为250nm；进样量为5μl，柱温为室温。在此条件下，样品色谱图中葛根素与其他相关峰均能达到基线分离，保留时间为16.4min，葛根素峰理论板数应不低于3000，与相邻杂质峰的分离度应大于1.5。阴性样品色谱图表明，处方中其他几味中药对测定无干扰。

中国论文联盟-2.4.2对照品纯度检查取每1ml含葛根素1.29mg的70%甲醇溶液，进样10μl，在本实验条件下，未见杂质峰，按面积归一法计算纯度为100%。

2.4.3线性关系精密称取经60℃减压干燥至恒重的葛根素对照品12.98mg，置10ml量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分置10ml量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，按本文给定的色谱条件，各进样5μl，测定峰面积，以峰面积积分值Y与对照品进样量X（μg）进行线性回归，回归方程为

Y=4.526×106X+5.464×104r=0.9999

结果表明：葛根素进样量在0.06～0.65μg范围内与峰面积具有良好的线性关系。因此，在线性范围内可采用外标一点法定量。

2.4.4精密度和重复性试验取同一对照品溶液，重复进样5次，求得葛根素峰面积的RSD为0.77%。另称取同一批号（080310）样品5份，每份约0.5g，分别按“2.4.9”项下方法制备样品溶液进样测定含量，求得含量的RSD为0.51%（n=5）。

2.4.5稳定性试验取供试品溶液1份，在0、2、8、24、48h分别按“2.4.9”项下方法进样测定含量，结果表明在48h内供试品溶液是稳定的。

2.4.6日内和日间精密度取同一份对照品溶液，在日内每隔2h取样测定1次，连续5次，求得峰面积的RSD为0.85%（n=5）；另取同一批号样品，每天取样按“2.4.9”项下方法测定含量，连续测定5d，求得含量的RSD为0.48%（n=5）。

2.4.7提取条件选择

2.4.7.1提取溶剂选择文献报道［12］多用甲醇水提取样品中葛根素，故考察不同浓度甲醇对提取的影响，称取样品5份，每份0.5g，置100ml量瓶中，分别加50%、60%、70%、80%甲醇约150ml，超声处理30min，按“2.4.9”项下方法进样测定含量，根据测定结果，确定用70%甲醇作溶剂。

2.4.7.2溶剂体积选择精密称取本品3份，每份0.5g，置200ml量瓶中，分别加70%甲醇80、120、180ml，摇匀，超声溶解30min，按“2.4.9”项下方法进样测定含量，根据测定结果，本法确定加入溶剂体积约120ml。

2.4.7.3提取时间的选择精密称取本品5份，每份2.0g，置200ml量瓶中，各加入70%甲醇约180ml，分别超声溶解10、20、30、40、50min，按“2.4.9”项下方法进样测定含量，结果表明，超声处理30min含量已不再增加，故确定超声时间为30min。

2.4.8加样回收率测定精密称取已知含量样品9份，每份0.25g，置50ml量瓶中，分别精密加入葛根素对照品溶液（取12.44mg+70%甲醇→20ml）1，2，3ml（0.622，1.244，1.866mg），再各加入70%甲醇至40ml，超声溶解30min，按“2.4.9”项下方法进样测定含量，计算回收率，得高、中、低3个浓度平均加样回收率分别为101.2%、101.1%、101.4%，RSD分别为1.1%、0.94%、0.41%（n=3）。

2.4.9样品测定取本品约20g,研细,再精密称取细粉约0.5g，置200ml量瓶中，加70%甲醇120ml，超声溶解30min，放冷，加70%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取葛根素对照品用70%甲醇配制成浓度约为60μg/ml的对照品溶液,各进样5μl，记录色谱图，按外标法计算葛根素含量，结果见表1。

表1眼络通颗粒样品测定结果（略）

3讨论

本制剂处方中川芎、三棱两味中药均含有挥发油，按标准制剂工艺采用水煎煮提取、再浓缩制粒方法，其中的挥发油成分损失较大，影响疗效，且自拟质量标准中制定的川芎挥发油定性鉴别为将样品溶液直接点样于滤纸上，置紫外光灯（365nm）下观察，显亮蓝色荧光。经检测发现，该方法受到样品中相关组分干扰，荧光斑点不明显，缺乏专属性。因此参照中国药典（2005版）一部建立了川芎挥发油的薄层色谱鉴别方法，展开剂采用正己烷-乙酸乙酯（9∶1）可获得满意结果。参照文献［3］建立了三棱挥发油的薄层色谱鉴别方法，展开剂采用石油醚-乙酸乙酯（17：3）可获得满意结果。

经试验发现，用不同溶剂提取葛根，在反相色谱柱上可得到不同的色谱图，主要表现在水煎煮提取葛根时，在色谱图上可分离到葛根素峰两个相关组分峰，葛根素峰与相关峰之间分离度良好。本文针对用醇提取葛根工艺制备的样品，建立的色谱条件能较好地分离样品中葛根素与相关组分峰，适用样品中葛根素的分离测定。三批样品测定结果表明，葛根素含量在5.90～6.78mg/g之间，考虑到不同来源葛根其葛根素含量差异较大，暂定本品葛根素含量限度应不低于4.5mg/g。

【参考文献】

［1］黄亚非.采用高效液相色谱法测定心脉通口服液中葛根素的含量［J］.中国中药杂志，2001，26（11）：760.

葛根素范文篇7

1.1仪器日本岛津LC10ATvp高效液相色谱仪、SPD10Av紫外检测器；7725i手动进样阀（20μl定量管），10μl微量注射器；HS色谱数据工作站V4.0+（杭州英谱）；CQ250超声波清洗器。

1.2试剂与药材葛根、川芎、三棱等药材，βCD（上海伯奥生物科技有限公司），葛根素对照品（供含量测定用）、川芎对照药材均由中国药品生物制品检定所提供，批号分别为752200801和091820007；薄层层析硅胶G（浙江雁荡山试剂厂），甲醇（色谱纯），正己烷、乙酸乙酯、乙醚及石油醚均为分析纯，水为蒸馏水。

2方法与结果

2.1眼络通冲剂的制备将处方量饮片打成粗粒，混合均匀，加10倍水量，按审批标准制剂工艺水煎煮法提取2次，第1次1.5h，第2次1h，提取液合并，静置，取上清液，浓缩至比重1.25以上的浸膏。加入人工麝香、少量糊精及矫味剂，混合均匀，用70%乙醇适量制软材，过10目筛制粒，50℃低温烘干，分装，规格为15g/袋。如上制作三批，批号分别为：080310、080320、080401。

2.2川芎定性鉴别

2.2.1供试品溶液的制备取本品细粉4g，加无水乙醇5ml，摇匀，再加入乙醚30ml，加热回流1h，放冷，滤过，取滤液挥干，加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺川芎的阴性对照样品4g，同法制成阴性对照溶液。

2.2.2对照药材溶液的制备取川芎对照药材1g，加乙醚30ml，加热回流1h，同法制成对照药材溶液。

2.2.3薄层层析板的涂铺取硅胶G3.5g，置研钵中，加水12ml，研磨均匀，铺板10×20cm2薄板一块，晾干，于110℃烘箱中活化30min，置干燥器中备用。

2.2.4薄层色谱法照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录）试验，吸取上述3种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（9：1）为展开剂，展开12cm，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，结果供试品色谱图中，在与对照药材色谱相对应的位置上，显相同颜色的亮蓝色荧光斑点，Rf=0.40，阴性样品无此斑点。

2.3三棱定性鉴别

2.3.1供试品溶液的制备取本品细粉4g，加无水乙醇5ml，摇匀，再加入乙醚30ml，50℃水浴加热回流1h，放冷，滤过，取滤液置40℃水浴上浓缩至约2ml，作为供试品溶液。另取缺三棱的阴性对照样品4g，同法制成阴性对照溶液。

2.3.2对照药材溶液的制备取三棱对照药材2g，加乙醚30ml，加热回流1h，同法制成对照药材溶液。

2.3.3薄层层析板的涂铺取硅胶G3.5g，置研钵中，加0.6%羧甲基纤维素钠溶液12ml，研磨均匀，铺板10×20cm2薄板一块，晾干，于110℃烘箱中活化30min，置干燥器中备用。

2.3.4薄层色谱法照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录）试验，吸取对照药材溶液5μl，供试品溶液与阴性对照溶液各10μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯（17∶3）为展开剂，展开12cm，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，结果供试品色谱图中，在与对照药材色谱相对应的位置上，显相同颜色的亮蓝色荧光斑点，Rf=0.45，阴性对照样品无此斑点。

2.4葛根素含量测定

2.4.1色谱条件与系统适用性试验以Kromasil100-5C18（4.6mm×250mm，5μm）为色谱柱；甲醇-水（30：70）为流动相；流速1ml/min；检测波长为250nm；进样量为5μl，柱温为室温。在此条件下，样品色谱图中葛根素与其他相关峰均能达到基线分离，保留时间为16.4min，葛根素峰理论板数应不低于3000，与相邻杂质峰的分离度应大于1.5。阴性样品色谱图表明，处方中其他几味中药对测定无干扰。

2.4.2对照品纯度检查取每1ml含葛根素1.29mg的70%甲醇溶液，进样10μl，在本实验条件下，未见杂质峰，按面积归一法计算纯度为100%。

2.4.3线性关系精密称取经60℃减压干燥至恒重的葛根素对照品12.98mg，置10ml量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分置10ml量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，按本文给定的色谱条件，各进样5μl，测定峰面积，以峰面积积分值Y与对照品进样量X（μg）进行线性回归，回归方程为

Y=4.526×106X+5.464×104r=0.9999

结果表明：葛根素进样量在0.06～0.65μg范围内与峰面积具有良好的线性关系。因此，在线性范围内可采用外标一点法定量。

2.4.4精密度和重复性试验取同一对照品溶液，重复进样5次，求得葛根素峰面积的RSD为0.77%。另称取同一批号（080310）样品5份，每份约0.5g，分别按“2.4.9”项下方法制备样品溶液进样测定含量，求得含量的RSD为0.51%（n=5）。

2.4.5稳定性试验取供试品溶液1份，在0、2、8、24、48h分别按“2.4.9”项下方法进样测定含量，结果表明在48h内供试品溶液是稳定的。

2.4.6日内和日间精密度取同一份对照品溶液，在日内每隔2h取样测定1次，连续5次，求得峰面积的RSD为0.85%（n=5）；另取同一批号样品，每天取样按“2.4.9”项下方法测定含量，连续测定5d，求得含量的RSD为0.48%（n=5）。

2.4.7提取条件选择

2.4.7.1提取溶剂选择文献报道［12］多用甲醇水提取样品中葛根素，故考察不同浓度甲醇对提取的影响，称取样品5份，每份0.5g，置100ml量瓶中，分别加50%、60%、70%、80%甲醇约150ml，超声处理30min，按“2.4.9”项下方法进样测定含量，根据测定结果，确定用70%甲醇作溶剂。

2.4.7.2溶剂体积选择精密称取本品3份，每份0.5g，置200ml量瓶中，分别加70%甲醇80、120、180ml，摇匀，超声溶解30min，按“2.4.9”项下方法进样测定含量，根据测定结果，本法确定加入溶剂体积约120ml。

2.4.7.3提取时间的选择精密称取本品5份，每份2.0g，置200ml量瓶中，各加入70%甲醇约180ml，分别超声溶解10、20、30、40、50min，按“2.4.9”项下方法进样测定含量，结果表明，超声处理30min含量已不再增加，故确定超声时间为30min。

2.4.8加样回收率测定精密称取已知含量样品9份，每份0.25g，置50ml量瓶中，分别精密加入葛根素对照品溶液（取12.44mg+70%甲醇→20ml）1，2，3ml（0.622，1.244，1.866mg），再各加入70%甲醇至40ml，超声溶解30min，按“2.4.9”项下方法进样测定含量，计算回收率，得高、中、低3个浓度平均加样回收率分别为101.2%、101.1%、101.4%，RSD分别为1.1%、0.94%、0.41%（n=3）。

2.4.9样品测定取本品约20g,研细,再精密称取细粉约0.5g，置200ml量瓶中，加70%甲醇120ml，超声溶解30min，放冷，加70%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取葛根素对照品用70%甲醇配制成浓度约为60μg/ml的对照品溶液,各进样5μl，记录色谱图，按外标法计算葛根素含量，结果见表1。

表1眼络通颗粒样品测定结果（略）

3讨论

本制剂处方中川芎、三棱两味中药均含有挥发油，按标准制剂工艺采用水煎煮提取、再浓缩制粒方法，其中的挥发油成分损失较大，影响疗效，且自拟质量标准中制定的川芎挥发油定性鉴别为将样品溶液直接点样于滤纸上，置紫外光灯（365nm）下观察，显亮蓝色荧光。经检测发现，该方法受到样品中相关组分干扰，荧光斑点不明显，缺乏专属性。因此参照中国药典（2005版）一部建立了川芎挥发油的薄层色谱鉴别方法，展开剂采用正己烷-乙酸乙酯（9∶1）可获得满意结果。参照文献［3］建立了三棱挥发油的薄层色谱鉴别方法，展开剂采用石油醚-乙酸乙酯（17：3）可获得满意结果。

经试验发现，用不同溶剂提取葛根，在反相色谱柱上可得到不同的色谱图，主要表现在水煎煮提取葛根时，在色谱图上可分离到葛根素峰两个相关组分峰，葛根素峰与相关峰之间分离度良好。本文针对用醇提取葛根工艺制备的样品，建立的色谱条件能较好地分离样品中葛根素与相关组分峰，适用样品中葛根素的分离测定。三批样品测定结果表明，葛根素含量在5.90～6.78mg/g之间，考虑到不同来源葛根其葛根素含量差异较大，暂定本品葛根素含量限度应不低于4.5mg/g。

【参考文献】

［1］黄亚非.采用高效液相色谱法测定心脉通口服液中葛根素的含量［J］.中国中药杂志，2001，26（11）：760.

［2］向大雄.离子对色谱法测定心脑安颗粒剂中葛根素含量［J］.中国医院药学杂志，2002，22（5）：261.

［3］伍月红.三棱与莪术的比较鉴别［J］.广东药学，1994，4（4）：25.

葛根素范文篇8

中药复方药代动力学研究的关键问题是根据其指标成分(Markers)的体内动力学过程来反映整体的动力学规律，在选择Markers的同时，对其药效作用规律探讨也是工作的重点所在。杜力军等［2］利用PK-PD线性模型对清热复方中3种Markers与发热大鼠体温变化进行相关分析，确定了其中黄芩苷有较高的相关性，由此以黄芩苷体内动力学变化表征该清热复方的体内动力学过程;同时对活血化瘀复方中葛根素和人参皂苷Rg1与所测的药效指标间进行分析，发现葛根素和人参皂苷Rg1仅在给药后5～10min体内浓度与血小板抑制率呈正相关(r=0.999和0.996)，且符合线性效应模型(对数浓度-效应)。但葛根素和人参皂苷Rg1在体内的整个浓度变化区间与所测的药效指标之间无明显的全程相关性。分析原因，本文作者认为:一方面可能与所选的药效指标的非即时性(存在作用时间的延迟效应)有关;另一方面，也可能由于中药复方中药效物质在体内存在多途径和多靶点的协同或拮抗作用，以单一的Marker(即使是有效成分)与整体药效学指标的变化难以直接相关。为此，本文作者提出“组合血药浓度”的概念，即将Markers的血药浓度，以对药效学指标的贡献大小作为权重，进行加权组合，以“组合血药浓度”(或称“表观药效浓度”)替代单一Marker的血药浓度，进行“组合药代动力学”(combinatorialpharmacokinetics，CPK)研究，并进行CPK-PD线性模型拟合。以活血化瘀中药复方脑得生为例，以脑得生中的Markers与大鼠全血黏度(bloodviscosity，BV)、红细胞聚集指数(erythrocyteaggregationindex，EAI)和红细胞压积(hematocrit，HCT)等血液流变学特性的改变进行相关分析，探索中药复方药效物质基础及其药代动力学研究的新方法。

1仪器与材料

LCMS2010EV高效液相色谱质谱仪(日本Shimadzu公司)，LCMSsolution3.0色谱工作站(日本Shimadzu公司)，LC-10ATvp高效液相色谱仪(日本Shimadzu公司)，ANASTAR色谱数据处理系统(美国SuntekScience公司)，微量取样器(上海求精生化试剂仪器有限公司)，XW-80A型旋涡混合器(江苏海门市麒麟医用仪器厂)，TGL-16C台式离机(上海安亭科学仪器厂)，LG-R-80F血液流变仪(北京世帝公司)，TDZ4-WS低速自动平衡离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)。甲醇(色谱纯，天津康科德科技有限公司)，磷酸(分析纯，天津市大茂化学试剂厂)，丙酮(分析纯，天津市大茂化学试剂厂)，肝素钠注射液(上海生物化学制药厂)。人参皂苷Rg1对照品(0703-200221)、人参皂苷Rb1对照品(110704-200216)、葛根素对照品(752-200108)、黄芩苷对照品(0715-9708，LC/MS内标物)(中国药品生物制品检定所)，大豆苷元对照品(美国Sigema公司)，人参皂苷Rd、三七皂苷R1(HPLC法检测纯度质量分数均＞96%)、葛根异黄酮(总黄酮含量质量分数为70%)(沈阳药科大学天然药物化学教研室)，红花黄色素A(红花黄色素含量质量分数为90%)、脑得生注射液(含红花黄色素A0.10μg•L－1、葛根素0.76μg•L－1、人参皂苷Rg10.42μg•L－1)(本实验室自制)，香兰素(HPLC-UV内标物，分析纯，沈阳市试剂厂)。健康Wistar大鼠，体质量200～220g〔沈阳药科大学动物中心，实验动物生产许可证号:SCXK(辽)2003-008;实验动物使用许可证号:SYXK(辽)2003-0012〕;体质量180～220g(中国医科大学实验动物室提供)。实验期间自由饮水，大鼠静脉给药试验前禁食12h。

2方法与结果

2.1指标成分药代动力学

2.1.1色谱条件血浆中红花黄色素A与葛根素及其相关异黄酮的HPLC测定［3］.色谱柱:KromasilC18柱(250mm×4.6mm，5μm，Scienhome公司)，流动相:乙腈-体积分数为0.1%的磷酸溶液-四氢呋喃(体积比为8∶92∶2)，流速:1.0mL•min－1，检测波长:250nm。血浆中大豆苷元、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd与三七皂苷R1的LC-MS测定［4］.色谱柱:LunalC18柱(150mm×4.6mm，5μm，Phenomenex公司)，流动相A:体积分数为0.1%的甲酸溶液，流动相B:甲醇，梯度洗脱程序:0～5min［30%(φB)～40%(φB)］、5～20min［40%(φB)～80%(φB)］，流速:0.8mL•min－1，大气压化学电离，负离子方式，选择离子监测。

2.1.2血浆样品处理方法取肝素抗凝血浆100μL，置2.0mL具塞离心试管中，加入内标溶液50μL、甲醇50μL和丙酮400μL，涡旋混合2min，离心(4000r•min－1)15min。分取上清液，于40℃氮气流下吹干。残渣加入甲醇-水(体积比为1∶1)溶液100μL，超声溶解1min，涡旋混合1min，离心(12000r•min－1)3min，取上清液10μL进样，记录色谱图，根据标准曲线计算血浆药物浓度。

2.1.3给药方案与血浆样品采集Wistar大鼠6只，以10mL•kg－1剂量尾静脉注射给予脑得生注射液，于给药前(0h)和给药后0.033、0.170、0.330、0.670、1.000、2.000、(3.000)、4.000、8.000h由眼眶后静脉丛取血约0.3mL，置于肝素化试管中，混匀，离心(10000r•min－1)5min，分离血浆，于－20℃冰箱中保存，直至分析测定。

2.1.4数据处理以待测物峰面积与内标物峰面积比值，用标准曲线计算各指标成分的血药浓度，并将各血药浓度-时间数据用3p87药动学程序进行曲线拟合。

2.1.5药代动力学结果经测定，除3''''-羟基葛根素(3''''-hydroxypuerar-in，P3)表现为类似口服给药的一级吸收过程，红花黄色素A(saffloryellowA，SyA)和葛根素(puer-arin，Pu)及其相关异黄酮大豆苷元(daidzein，Da)、大豆苷元-7，4''''-二葡萄糖苷(daidzein-7，4''''-O-glucoside，P2)、3''''-甲氧基葛根素(3''''-methoxypu-erarin，P4)、葛根素芹菜糖苷(puerarinapioside，P5)、未知物I(unknown1，U1)及代谢物I(metab-olite1，M1)在大鼠体内的药动学过程均符合二室模型;三七皂苷中，人参皂苷RbRb1，GRb1)、人参皂苷Rd(ginsenosidesRd，GRd)、人参皂苷Rg1(ginsenosidesRg1，GRg1)、三七皂苷R1(notoginsenosideR1，NGR1)等动力学过程亦符合二室模型。其中，与药效动力学过程呈正相关的大豆苷元以及葛根异黄酮代谢物M1的药-时曲线(根据文献［3－4］拟合)如图1、2所示。

2.2药效动力学文

2.2.1给药方案与血浆样品采集Wister大鼠，随机分为给药前(对照)、给药后0.5、1.0、1.5、2.5、4.0h6组，每组5只。对照组不经处置，其他各组大鼠以10mL•kg－1剂量尾静脉注射给药后，分别于不同时间心脏穿刺取血4mL，进行血液流变学测定［5］。

2.2.2血液流变学与凝血因子活力测定血液流变学的测定.取肝素抗凝血样，置血液流变仪中测定BV、HCT和EAI。

2.2.3药效学结果Markers对BV的影响.对4个切变率(200/s、30/s、5/s、1/s)下的大鼠BV均具有随时间变化的趋势，在低切变率下的BV下降幅度大于高切变率。1.0h时BV开始下降，1.5h时下降非常显著，4.0h时BV同步恢复。时-效曲线见图3。Markers对HCT的影响在0.5h时HCT开始出现下降趋势;1.5h时下降显著，作用持续至4.0h以上。时-效曲线见图4。Markers对EAI的影响对EAI的影响具有时间依赖性，其变化规律与对BV的影响基本一致。在1.0h以前呈现上升趋势，1.5h时EAI时显著下降，作用持续至2.5h，在4.0h时开始恢复。时-效曲线见图4。

2.3药代动力学与药效动力学拟合

2.3.1PK-PD拟合在药效学检测指标发生改变的时间区间内(各时间点)，将脑得生中各指标成分的血浆浓度数据(取自然对数值)与药效学指标数据进行线性拟合，相关系数(R2)和曲线斜率(k)见表1。以R2=的大小作为其相关性评价指标;k作为其贡献评价指标。Markers与BV的相关性由表1数据可见，Da对BV的下降呈正相关(R2=0.7801～0.9429);GRg1(R2=0.5941～0.8146)和NGR1(R2=0.5594～0.7390)呈负相关;其他各成分无显著相关性。Markers与EAI的相关性各指标成分与EAI的相关性和与BV的相关性一致。Da对EAI的下降呈显著正相关(R2=0.9939，r23，0.05=0.994);GRg1(R2=0.9430)和NGR1(R2=0.7305)呈负相关。Markers与HCT的相关性M1对HCT的下降呈一定的正相关(R2=0.6435);P2(R2=0.8245)、SyA(R2=0.7091)、Pu(R2=0.6957)、P5(R2=0.6781)、U1(R2=0.6780)和P4(R2=0.6547)呈负相关;P3(R2=0.5496)、GRb1(R2=0.5168)和GRd(R2=0.4899)呈一定的负相关。经PK-PD线性模型拟合，Da是大鼠BV下降(特别是BV1的下降，EAI=BV1/BV200)的主要药效物质，M1是HCT下降的主要药效物质;GRg1和NGR1对BV的下降存在拮抗作用，对HCT下降表现拮抗作用的Markers主要是SyA和葛根黄酮。

2.3.2CPK-PD拟合以药效学指标发生改变的时间区间内的PK-PD相关曲线的斜率(k)为权重，用公式(1)将不同时间点的大鼠血浆中Markers的浓度(取自然对数)进行加权组合，绘制“组合血药浓度”-时间曲线、计算“组合药代动力学”参数，并以“组合血药浓度”(ρcombinatory)与相同时间点的药效学指标的相对值(以给药前指标值为基数的比值)进行CPK-PD线性模型相关分析。lnρi=∑nj=1［kjlnρij］(1)式中，ρi为第i时间点血浆中相关Markers(包括正相关和负相关成分)的“组合血药浓度”;ρij为第i时间点血浆中第j相关Markers的浓度;kj为第j相关Markers的PK-PD相关曲线的斜率，当正相关(药理指标的变化趋势与效应一致)时，其符号不变;当负相关(药理指标的变化趋势与效应相反，如本研究中的全血黏度下降表示药理效应增强)时，其符号相反。经“组合血药浓度”计算和CPK-PD拟合，上述各项“组合血药浓度”-时间曲线与药理效应-时间曲线存在全程相关性。

葛根素范文篇9

1钩藤

钩藤味甘、性微寒。《本草学》载有清热、平肝熄火、镇痉等功效，用于头痛眩晕、惊痫抽搐、妊娠子痫、高血压等。钩藤中含有多种吲哚类生物碱，其中有效降压成分为异钩藤碱和钩藤碱。

钩藤是治疗高血压的常用中药，不但具有抗高血压作用，而且具有抗血小板聚集的抑制血栓的形成松弛血管平滑肌作用。其降压机制被认为是由于直接和反射性的抑制血管运动中枢及其对交感神经或神经节的阻断作用。钩藤碱通过Ca2+通道的阻滞作用而引起血管扩张，使外周阻力降低，此作用与经典的钙拮抗剂相似，故推测钩藤也是一种钙拮抗剂。

2葛根

异黄酮类化合物是葛根的主要有效成分，其中含量较多的有葛根素、黄豆甙元。葛根素能增强心肌收缩力，保护心肌细胞，扩张脑血管，增加脑血流量，改善大脑氧供的作用，对高血压患者有一定的降压作用。其降压机制是通过β肾上腺受体阻滞患者作用而完成的。还能对抗异丙肾上腺素引起的升压作用，减弱甚至完全抵消肾上腺素的升压作用，增强其降压作用，葛根对高血压有双向调节作用。葛根能抑制肾素血管紧张类系统和降低儿茶酚胺含量有关，还能逆转高血压患者左心肥厚，降低心血管病危险，对高血压患者有积极的治疗作用。

3夏枯草

夏枯草具有抗肿瘤、降压、抗类、抗菌、利尿等作用，且对血压有双重调节作用。夏枯草提取物夏枯草甙（PVS）有降压作用，PVS具有心肌保护作用。夏枯草治疗辨证为肝火上炎络脉郁滞的高血压患者，具有较好的降压作用，还可改善患者的内皮功能，延缓动脉粥样硬化的发展。

4罗布麻叶

罗布麻叶主要降压成分是槲皮素、总黄酮，具有降血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉、增加冠状动脉血流量作用。并通过对血管平滑肌细胞电压依赖性Ca2+通道和受体操纵性Ca2+通道双重抑制作用，降低细胞内游离Ca2+水平，这可能是舒血管降压机制之一。

5决明子

决明子的水浸液、醇水浸液和乙醇浸出液有降低血压及利尿作用。动物实验对大鼠收缩及舒张压明显降低，其降压作用强度及持续时间显著强于利血平。经实验研究，决明子中蛋白南、低聚糖及蒽醌苷有降压作用。决明子蛋白质产生的降压作用，与该蛋白质在肠道内分解后形成的氨基酸和多肽短链的吸收入血有关。决明子低聚糖产生的降压作用，与其促进肠道双歧杆菌的增殖有关。决明子蒽醌类还有利尿作用，可能是决明子起降压作用的原因之一。

6黄芪

黄芪降压成分是r-氨基丁酸及黄芪甲甙，具有扩张血管、抗缺氧、降低大鼠肺动脉中肢原纤维含量及强心利尿作用。其降压机制可能与扩张血管、抑制Ca2+内流、中枢神经、肾素-血管紧张素-醛固酮系统、激肽释放与羟脯氨酸有关。黄芪降压特别迅速、短暂，连续给药无快速耐受现象。

7桑寄生

桑寄生含广寄生甙及槲皮素等，常用作治疗原发性高血压。其降压机制是通过调节血清激素水平、血管活性物质的释放及碱性成纤维细胞生长因子的含量，达到保护中小动脉内皮细胞，逆转平滑肌细胞增殖，对抗动脉粥样硬化的效果。

8杜仲

葛根素范文篇10

【关键词】胰岛素抵抗.中医药疗法;综述

胰岛素抵抗（insulinresistance，IR）是指胰岛素作用的靶器官、组织，主要指肝脏、肌肉、脂肪组织对同等剂量的胰岛素生物学效应反应性降低或消失而产生的一系列病理和临床表现，它不但与糖尿病的发生密切相关，还是肥胖、高血压、高脂血症、冠心病及慢性血管并发症的危险因素。

1治法研究

王智明等［1］认为调肝泻火法具有调肝泻火、调理脏腑气血津液、平衡阴阳水木之功效，首次提出“从肝论治”治疗IR学说［2］，并用实验方法初步阐明从肝论治IR学说能有效预防高脂饮食大鼠发生IR［3］，并在此基础上观察调肝泻火法对2型糖尿病胰岛素抵抗患者的影响，有明显疗效。徐云生等［4］认为IR的病理机制及脂代谢异常与中医学脾虚痰浊血瘀密切相关，并以具有健脾、化痰、活血功效之胰苏灵治疗2型糖尿病疗效显著。戴小良等［5］认为肝失疏泄，心用过度，心肝火旺，消灼阴精是消渴发病的重要病理基础之一，从而提出清肝泻心法，并主张该法与滋阴润燥法联用治疗消渴病，收到明显疗效。汪何［6］在对照组治疗上加用益气养阴活血化瘀中药2型糖尿病治疗证属气阴两虚夹血瘀者，对照组以磺脲类和双胍类药物治疗，结果:两组治疗前后FINS无明显变化，但IAI均有升高（P<0.05），治疗组比对照组升高明显（P<0.05）。武士芬［7］以具有益气养阴活血清热功效之芪萸汤为基本方加减治疗2型糖尿病患者，对照组以二甲双胍治疗，结果显示:治疗组总有效率为86.11%，高于对照组（P<0.05），IAI较治疗前显著改善，FINS也明显下降（P<0.01）。

2单味中药研究

玉从荣等［8］以高脂高糖高盐饮食建立胰岛素抵抗综合征大鼠模型，肌肉注射葛根素4周，结果显示:

葛根素高、中剂量组均能明显降低TC和TG，与模型组比较有显著差异（P<0.01），葛根素高剂量组、卡托普利组均能明显降低FINS，提高IAI（P<0.01）。刘月丽等［9］采用高脂高糖饮食建立胰岛素抵抗脂肪肝动物模型，并连续8周以红丝线草提取物（HSX）分高低剂量灌胃，结果:低剂量组可以增加IAI（P<0.05），高、低剂量组FFA、TG水平基本恢复正常，并提高HDL-C水平。

3复方中药研究

姜淼［10］在口服降糖药的基础上以三黄安消胶囊治疗2型糖尿病，结果:治疗组治疗后PBG、餐后2h血糖（P2BG）、IAI、HOMA-IR均有明显改善。对照组汪何［11］在原有降糖药基础上加以三芪丹颗粒治疗30例老年糖尿病患者，结果:治疗组治疗后β细胞功能指数（HOMA-IS）、IAI、HDL-C上升，FPG、TG下降，与治疗前和对照组比较有显著差异（P<0.05）。陈俊等［12］以白虎人参汤随证加减治疗2型糖尿病患者，结果:治疗组FPG、P2BG、FINS下降明显，而IAI明显改善（P<0.05，P<0.01），TC、TG治疗前后相比差异明显（P<0.05）。陈维铭等［13］以半夏白术天麻汤治疗60例单纯肥胖症患者，对照组以防风通圣丸治疗，结果显示:治疗组治疗后BMI、腰臀比（WHR）、FINS明显下降（P<0.05），IAI明显上升（P<0.05），优于对照组（P<0.05）。高允珊［14］在对照组的治疗上加用活血降糖方治疗2型糖尿病，结果:治疗组总有效率为90.0%，对照组总有效率为72.9%，差异有显著性（P<0.05）。毛振营［15］以加味桃仁承气汤治疗2型糖尿病胰岛素抵抗患者，对照组给予二甲双胍治疗，结果:治疗组总有效率76.2%，对照组总有效率80%，两组比较无差异性（P>0.05），两组治疗后FINS显著下降，IAI显著提高，同组治疗前后比较差异性显著（P<0.01），组间比较差异无显著性（P>0.05）。左文标［16］等以糖脉康治疗2型糖尿病，对照组以二甲双胍治疗，结果:两组治疗前后FINS、IAI均有显著改善（P<0.01），但两组间比较差异无显著性（P>0.05）。张海燕等［17］以糖消汤治疗空腹血糖异常伴胰岛素抵抗患者35例，对照组以二甲双胍治疗，结果:两组治疗后FBG、FINS、BMI均明显下降，IAI显著升高，与治疗前比较差异有显著性（P<0.01），两组治疗后比较差异无显著意义（P>0.05），治疗组治疗后TC、TG、LDL明显下降，HDL明显升高（P<0.01），对照组血脂变化不明显（P>0.05），两组比较差异有显著意义（P<0.01）。

4动物实验研究

李学军等［18］以高热量饲料加小剂量链脲佐菌素（STZ）制造糖尿病大鼠模型，随机分为糖尿病组、化痰方组及化痰活血方组，化痰方由二陈汤加味而成，化痰活血方在化痰方的基础上加丹参及地龙，结果显示:化痰方组及化痰活血方组的血糖有所降低（P<0.05），同时FINS水平显著降低（P<0.01），IAI明显升高（P<0.05，P<0.01），但化痰活血组作用更佳（P<0.05）。姜淼等［19］采用高糖高脂饲料和小剂量STZ制造2型糖尿病IR大鼠模型，随机分为病理模型组、黄连人参组和吡格列酮组，结果显示:黄连人参组与吡格列酮组各指标与病理模型组比较，差异有显著性或非常显著（P<0.05，P<0.01），且胰腺病理观察均较病理模型组有所改善，黄连人参组与吡格列酮组各指标比较差异无显著意义（P>0.05）。王立琴等［20］采用高脂饲料和STZ制造糖尿病IR小鼠模型，随机分为4组:治疗组（芪黄胶囊加黄连素组）、对照1组（黄连素组）、对照2组（二甲双胍组）、空白对照组及正常对照组，结果:治疗组优于黄连素组及二甲双胍组（P<0.05）。李瑾等［21］以高热量饲料和STZ制造2型糖尿病大鼠IR模型，并随机分成4组:正常对照组、模型对照组、糖抗宁小剂量组、糖抗宁大剂量组和二甲双胍对照组，结果显示:糖抗宁合剂小剂量组及大剂量组均可明显降低FPG、BMI、FINS（P<0.05，P<0.01），提高IAI（P<0.05，P<0.01）。钱秋海等［22］以高脂饮食和STZ造成2型糖尿病IR大鼠模型，并随机分成4组:模型对照组、三黄消渴胶囊小剂量组及大剂量组和二甲双胍模型对照组，结果显示:三黄消渴胶囊能明显降低FINS，提高IAI，与治疗前及对照组治疗后对比，差异有显著性（P<0.01），且大剂量组更明显。

5结语

近几年中医药改善IR确实取得了可喜的成绩，但是仍存在许多不足之处:目前中医对IR的研究尚处于初级阶段，重复性研究较多，缺乏科学客观化指标的大样本研究。对于单味药改善IR的机理缺乏在分子生物学上的研究，应采用新技术、新方法力求建立病证结合的2型糖尿病动物模型。今后我们应加强这方面的工作，不断规范深入地开展中医药改善IR的研究，提高中医药疗效的可信度。

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