核酸检测情况十篇

核酸检测情况篇1

疫情期间核酸检测也是最常用到的方式，而有关核酸检测的费用问题同样是大家咨询比较多的。核酸检测可以用医保卡吗？有时候出入某个地区要求提供48小时核酸检测证明的，这种情况下自己去做核酸能不能用医保卡报销呢？下面来看下相关介绍。

核酸检测可以用医保卡吗

据悉，核酸检测是否可以用医保卡，需要看实际情况，如果是个人主动进行核酸检测，则可以用医保卡个人账户里的钱支付，但是不能使用医保卡统筹账户里的钱进行报销，但如果是政府部门组织进行核酸检测，那么是免费的，也无需使用医保报销。如果是住院做核酸检测，则医保统筹账户可以全额报销。

以上就是关于核酸检测能不能用医保卡报销的相关介绍，具体要根据实际情况来分析，更多的有关核酸检测费用问题关注本站。

（来源：文章屋网 ）

核酸检测情况篇2

   11月25日18:00，上海举行疫情防控工作第107场新闻会，邀请市卫生健康委、浦东新区相关负责人和有关专家介绍有关情况。东方网进行现场直播。

   截至11月25日17时，本市新增3例新冠肺炎本土确诊病例。市、区疫情防控应急处置机制立即启动，全面开展流行病学调查、相关人员排查、采样检测和隔离管控，落实相关场所及环境终末消毒等防疫措施。目前这3例病例均已转运至上海市公共卫生临床中心隔离治疗，病情稳定。病例的具体情况如下：

   病例1：女，34岁，常住福建厦门，11月12日自厦门前往北京，15日自北京抵沪，临时居住于浦东新区锦绣路香梅花园。25日上午，新冠病毒核酸检测结果为阳性，后经市、区疾控中心复核为阳性。市级专家组结合临床、影像学表现和实验室核酸检测结果，诊断为新冠肺炎确诊病例（普通型）。该病例已接种2剂新冠疫苗。

   病例2：女，32岁，家庭住址为浦东新区海阳路1080弄。25日上午，新冠病毒核酸检测结果为阳性，后经市、区疾控中心复核为阳性。市级专家组结合临床、影像学表现和实验室核酸检测结果，诊断为新冠肺炎确诊病例（轻型）。该病例已接种2剂新冠疫苗。

   病例3：女，31岁，家庭住址为青浦区赵巷镇业文路189弄。作为病例1、病例2的密切接触者，25日核酸筛查结果异常，后经市、区疾控中心复核为阳性。市级专家组结合临床、影像学表现和实验室核酸检测结果，诊断为新冠肺炎确诊病例（轻型）。该病例已接种2剂新冠疫苗。

   这3例确诊病例为朋友关系，在19-21日曾先后至苏州共同游玩，有较长时间密切接触史，有明确流行病学关联。

   截至11月25日17时，已累计排查到在沪密切接触者27人，均已落实集中隔离管控，其中16人核酸检测结果为阴性，其余正在检测中。

   累计排查到在沪密接的密接103人，均已落实集中隔离管控，其中27人核酸检测结果为阴性，其余正在检测中。

   累计排查到相关筛查人员10653人，其中5628人核酸检测结果为阴性，其余正在检测中。

   累计排查相关场所的物品和环境样本972件，其中29件核酸检测结果为阳性（均为病例1临时居住地环境样本），513件阴性，其余正在检测中。

   防范疫情宣传口号

   1、防控疫情、法治保障！

   2、防控疫情、与法同行。

   3、尊法学法守法用法，依法依规防控疫情。

   4、履行法定义务，配合政府防疫。

   5、增强法律意识，自觉抵制谣言。

   6、网络不是法外之地，不造谣、不信谣、不传谣。

   7、把人民群众生命安全和身体健康放在第一位。

   8、依法科学防控，及时诊疗救治，保障人民群众生命健康安全。

   9、众志成城，齐心协力防控疫情。

   10、早发现、早报告、早隔离、早治疗，对自己负责，对他人负责。

   11、戴口罩、勤洗手，测体温、勤消毒，少聚集、勤通风。

   12、手牵手心连心，阻击疫情法在心！

   13、法律法规是防治疫情的.坚固堤坝。

   14、疫情面前有担当，法治思维克时艰。

   15、疫情重、防控严，遵纪守法保平安！

   16、严打涉医违法犯罪，维护正常医疗秩序。

   17、制假售假，触犯刑法，依法重罚！

   18、哄抬物价、牟取暴利，依法重罚！

核酸检测情况篇3

时空伴随是绿码就不用隔离吗

时空伴随是绿码也是需要居家隔离的，但不强制，需要提供核酸证明，也会有专门的网格员来联络你。

单纯的时空伴随者并不需要集中隔离，只需要在3天内进行2次核酸检测，2次核酸检测间隔应在24小时以上，获得核酸阴性结果前请居家，不要外出即可。

被误判为时空伴随者怎么办

一般不会被误判，如果在家里哪里都没出去的话，是不需要做核酸的，这样也不建议出门，在家隔离就可以了，或者是有专门人员过来给你做核酸检测。

收到短信后请立即向你居住的社区、居委会、单位或宾馆报备，然后戴好口罩，前往就近的核酸检测机构，并在3天内完成2次核酸检测（2次核酸检测间隔应在24小时以上，途中切勿乘坐公共交通工具）。在获得核酸阴性结果前请居家，不要外出。

在家隔离别人能来找我吗

不可以。居家隔离期间不仅自己不能随意外出，就是其他人也不能外出，而且附近的邻居，自己的亲朋好友等其他人也不可以上门探访，因为居家隔离的情况下，自己属于医学观察期间，是有可能发生新冠感染的，一旦自己有新冠的情况下，会因为接触到他人而出现交叉感染现象。

核酸检测情况篇4

2022过年回南京有什么要求

春节能回南京老家过年不过具体的要看你所在地区的规定。

因为近期疫情反复大家纷纷担心自己又将于春节无关，不过就南京的规定看是可以回来过年的，不过所有来自或途经国内疫情中高风险地区及所在地，或有本土确诊病例所在地来南京人员，应在抵达南京后尽快且不得超过12小时向所在社区报告，需持有48小时内核酸检测阴性证明，主动配合做好信息登记、后续根据在南京停留时间按要求配合做好核酸检测。

春节去南京需要隔离或是核酸吗

看疫情的控制情况。

春节前后南京还能不能正常返乡是大家时下最为好奇的，不过目前还不清楚南京在春节期间是否可以自由进出，但根据以往的数据，低风险地区的人是可以的。根据有关规定，低风险地区人员进出南京不受限制，无需集中隔离14天，无需持有核酸检测阴性证明。中高风险地区人员需要集中隔离或家庭隔离才能到达南京，核酸检测至关重要。

春节回南京过年要准备什么

核酸检测情况篇5

一、制定依据

《病毒肺炎防控方案（第七版）》《肺炎聚集性疫情处置指南（试行）》《不同场景不同情形肺炎疫情防控应对实操指南（实行）》《核酸复查稀释混样检测技术指引》《市病毒肺炎疫情防控应急预案》《市应对秋冬季肺炎疫情应急预案》《市肺炎常态化监测预警工作方案》《区全员核酸检测工作方案》等。

二、工作目标

按照精准施策，分区分级开展肺炎疫情防控工作总要求，迅速研判疫情可能来源、播散程度，科学划定高、中、低风险等级区域，实施差异化核酸检测。村、社区为单位实现5天内完成区内全员核酸检测，进而以镇为单位完成全员核酸检测。全镇常住人口4157人。

三、启动情形

区域内发生散发病例或局部聚集性疫情，经区疫情防控指挥部组织卫健部门和专家进行疫情形势分析研判，划定高、中、低风险等级区域后实施，低风险区人员10：1混样检测、中风险区人员5：1混样检测、高风险区人员1：1检测。

四、工作内容

（一）科学设置核酸采样点。

各村、社区以划定的单元设置临时采样点，可选择在居（村）委会、村卫生室、卫生院（社区卫生服务中心）等通风、空旷场所，采样人员在室内，被采样人员在室外排队等候，保持间距，逐一进行采样。对失能、半失能等残疾人采取集中入户采样。每个采样点配备联络员、登记员、消杀员，辖区公安派出所配备现场维持秩序人员。采样点应室外悬挂相关标识，入口处设置登记区。

（二）做好组织动员工作。

各社区（村）要周密安排辖区居民有序进行核酸采样，明确调查登记、宣传动员、人员通知、志愿者招募、工作人员培训、秩序维持等发动工作。为每个临时采样点配备3-5名人员，包括登记员、召集员、联络员、消毒员等工作人员。

（三）组建核酸采样队伍。

各类核酸采样队伍以被采样人员所在风险等级区、居住小区（村）为单位，实行分区、分类开展人员采样，明确被采样人员类别、地点，分类收集装箱。

1.镇级医疗机构采样队伍。组织辖区医疗单位建立核酸采样队伍，承担区域内采样任务。签约的第三方检测机构为每支采样队伍配备身份证读卡器、条形码扫描枪、笔记本电脑。每支采样队伍3人（采样1人，登记1人，辅助1人），镇6支，每支队伍每天采集样本300人份，全镇3天内完成全员核酸采样。

2、疾控机构采样队伍。镇卫生部门分别建立2支核酸采样队伍，承担集中隔离和居家隔离人员采样，按照防控要求及时完成密切接触者、次密接触者、一般接触者的采样频次。

（四）核酸样本收集储运。

1、区疾控承担密切接触者、次密接触者、一般接触者等重点人员核酸检测样本的收集、储运。其他需复核的核酸样本由采样单位收集、运送至辖区疾控机构实验室。

2、医疗机构承担发热门诊发热人员核酸样本的收集、储运。高风险区等人员的核酸检测样本由采样单位（乡镇卫生院、社区卫生服务中心）送医疗机构实验室。

3、第三方检测机构承担低风险区与中风险区人员核酸检测样本的收集、储运。由采样单位（乡镇卫生院、社区卫生服务中心）送至区域内指定地点，第三方负责接样，自行运送至本检测机构实验室。所需样本运送箱由第三方提供。

五、保障措施

（一）制定方案，明确工作任务。镇疫情防控领导小组办公室要按照属地化管理原则，按照区级《方案》总体要求，制定辖区全员核酸检测实施方案，细化工作内容，明确部门职责和任务，确保各村、社区能够同步开展核酸检测，同步完成全镇全员核酸检测目标。

（二）做好物资储备，保障供应充足。镇财政所负责制定全员核酸检测物资储备方案，与物资供应方建立物资采购快捷通道，确保启动全员核酸检测工作后，物资供应及时、充足。在做好辖区检测物资储备计划的同时，要统筹做好采样人员、志愿者等工作人员的车辆、就餐、保暖及支援人员住宿事宜，切实做好生活保障服务。

（三）维持检测秩序，严厉打击虚假疫情信息传播。派出所要为每个采样点配备1名公安干警，维持全员核酸检测现场秩序，保障现场采样有序开展；同时加大各类网络媒体的舆情监管，严厉打击虚假疫情信息传播。

（四）加大宣传，正确引导舆情。宣传部门要及时全员核酸检测公告，加大全员核酸检测的正面宣传、报到，引导广大群众积极配合检测工作，避免出现恐慌、焦虑等不良情绪，同时做好舆情监测，及时纠正社会负面影响。

核酸检测情况篇6

【摘要】目的：观察卵巢癌SKOV3细胞转染chk2反义寡核苷酸后在顺铂作用下细胞凋亡的变化.方法：用MTT法检测不同浓度顺铂对SKOV3细胞的抑制率，WesternBlot法检测SKOV3细胞中Chk2蛋白的表达.流式细胞仪及TUNEL法检测转染chk2反义寡核苷酸后顺铂作用下SKOV3细胞凋亡情况.结果：顺铂对SKOV3细胞的生长抑制率随浓度增高和时间延长而升高.WesternBlot法检测证实转染chk2反义寡核苷酸后SKOV3细胞中Chk2蛋白表达受到明显抑制.流式细胞仪检测抑制chk2基因表达后SKOV3细胞凋亡率为（77.6±1.7）%，明显高于正常组（24.7±1.76）%，空脂质体组（35.6±1.4）%及转染正义寡核苷酸细胞组（47.6±1.2）%.TUNEL法检测结果与流式细胞法一致.结论：chk2可作为卵巢癌增敏治疗的有效靶点.

【关键词】chk2基因；反义核酸技术；卵巢肿瘤；顺铂

0引言

肿瘤细胞的多耐药性已成为恶性肿瘤化疗失败的重要原因［1］，进行化疗增敏或寻找新的治疗手段具有重要意义.细胞周期检测点是增强肿瘤治疗敏感性研究的热点之一［2］.肿瘤的耐药与肿瘤细胞逃避放化疗诱导的肿瘤细胞凋亡有关，因为放化疗作用下可使细胞周期检测点激活，导致细胞周期停滞和细胞的损伤修复，从而使肿瘤细胞避免凋亡.周期检测点激酶1，2（checkpointkinase1，2，Chk1，Chk2）是细胞周期检测点中最关键的效应蛋白酶［3］.国外一些研究表明，转染chk1/chk2反义寡核苷酸可明显提高一些肿瘤模型对抗肿瘤药物的敏感性，说明chk1/chk2可能是一些肿瘤增敏治疗的有效靶点［4］.本研究通过检测chk2反义寡核苷酸对顺铂诱导的SKOV3细胞凋亡的影响，以探讨chk2能否作为卵巢癌增敏治疗的有效靶点.

1材料和方法

1.1材料SKOV3细胞株由西安交通大学临床医学研究分子中心提供.RPMI1640购自Gibco公司，胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司，噻唑蓝（MTT）购自Amressco公司，转染试剂Lipofectamine2000购自Invitrogen公司，鼠抗人Chk2mAb购自NEOMARKERS公司，辣根酶标记羊抗鼠二抗购自博士德公司，原位细胞凋亡检测试剂盒购自华美生物工程公司.

1.2方法

1.2.1细胞培养人卵巢癌细胞SKOV3常规培养在含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养基中，培养条件为37℃，50mL/LCO2饱和湿度，待细胞长满瓶底时，2.5g/L胰蛋白酶消化传代.

1.2.2MTT法测定不同浓度顺铂在不同时间对SKOV3细胞生长的抑制率取对数生长期的SKOV3细胞，调整细胞密度为5×107/L，接种于96孔板,200μL/孔,37℃，50mL/LCO2培养箱中培养24h后加药，使顺铂终浓度为10，20，40，80，160μmol/L,每个浓度设四个平行孔，并同时设不加药物的阴性对照和无细胞的空白对照，分别于作用24，48，72h后加入20mmol的MTT溶液，20μL/孔，继续培养4h后，吸去上清，加入DMSO，150μL/孔，振荡器震荡10min，使结晶溶解完全，用酶标仪(650BIORAD公司)在490nm处测量A值，计算细胞增殖抑制率（inhibitionrate,IR%）.绘制顺铂对SKOV3细胞的生长抑制曲线.

1.2.3脂质体介导寡核苷酸转染SKOV3细胞株

1.2.3.1寡核苷酸链的设计和合成根据文献［5］合成chk2的反义寡核苷酸链（antisenseoligodeoxynucleotide，Adosn:5′TCCACAGGCACCACTTCC3′）,并同时合成其正义的寡核苷酸链(oligodeoxynucleotide,odn:5′GGAAGTGGTGCCTGTGGA3′)作为对照.均采用全硫代修饰，其中部分寡核苷酸链的5′端以FITC标记.

1.2.3.2实验分组与转染细胞分4组,A：正常组：未经任何处理；B：转染空脂质体组(LP);C：转染chk2正义链组（chk2odn组）；D：转染chk2反义链组（chk2Asodn组）.B至D两组在转染终止10h后同样用40μmol/L顺铂处理细胞24h.

1.2.3.3转染效率的测定于转染前一日用无抗生素的含10mL/L胎牛血清的RPMI1640调整细胞密度为2.5×108/L，接种于24孔板，500μL/孔.转染当天细胞密度达到90%~95%，并换为500μL无抗生素无血清RPMI1640培养.分别取不同量的荧光标记的寡核苷酸链(0.6，0.8，1.0μg)加到50μL的RPMI1640中，混匀.再取2μL的Lipofectamine2000，加到50μL的RPMI1640中，混匀.室温放置5min后，将分别混有寡核苷酸链和Lipofectamine2000的RPMI1640混合，室温放置20min（寡核苷酸链与脂质体比值分别为0.6μg∶2μL，0.8μg∶2μL和1.0μg∶2μL）.将上述混合物加入24孔板中，轻轻混匀，放37℃，50mL/LCO2培养箱中，培养6h后将培养基换为500μL含100mL/L胎牛血清的RPMI1640，继续培养至24h，荧光倒置显微镜下观察转染效率.

1.2.4WesternBlot法检测Chk2蛋白的表达用酶抑制剂法提取细胞总蛋白，并用Bradford比色法作蛋白定量，煮沸5min使蛋白变性，120g/L聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质，转膜，加入1∶400稀释的鼠抗人Chk2mAb，室温孵

育1.5h，TBST洗膜3min，6次.加入1∶3000稀释的辣根酶标记的羊抗鼠二抗室温孵育1h，TBST洗膜3min，6次.ECL(购自Amershambioscience)显色，X光胶片暴光，洗片，扫描存档.

1.2.5流式细胞仪检测细胞凋亡收集细胞，调整细胞密度为1×109/L，取1mL细胞悬液，离心，PBS洗涤3次,加10μLAnnexinVFITC,轻轻混匀，加入5μLPI避光室温反应15min，上流式细胞仪（EPLCSELITECOULTERCORPORATION公司）检测.

1.2.6TUNEL法检测细胞凋亡将SKOV3单细胞悬液接种于24孔培养板培养，使细胞爬于盖玻片，按前述分组处理细胞后捞出盖玻片，多聚甲醛固定，按TUNEL试剂盒说明进行操作.

统计学处理:实验结果均采用SPSS13.0软件进行方差分析及两两比较.P<0.05为差异有统计学意义.

2结果

2.1顺铂对SKOV3细胞的生长抑制作用对照组SKOV3细胞体外生长良好，10，20，40，80，160μmol/L顺铂对SKOV3细胞均有明显的抑制效应（P<0.05）,10μmol/L顺铂作用SKOV3细胞24，48，72h后的抑制率分别为29.1%，18.2%，50.4%，160μmol/L顺铂作用SKOV3细胞24，48，72h后的抑制率分别为78.9%，78.5%，88.4%.随着时间延长和浓度增加，其抑制作用越来越明显（图1）.DDP作用24h的IC50值为37.2μmol/L.

图1顺铂对卵巢癌SKOV3细胞株生长抑制曲线

2.2chk2反义寡核苷酸转染SKOV3细胞的效率用FITC标记的寡核苷酸转染SKOV3细胞，24h后用荧光倒置显微镜观察转染效率，发现DNA/Lipofectamine2000脂质体比率为0.6μg∶2μL，0.8μg∶2μL和1.0μg∶2μL时的转染效率分别为98.2%，98.9%和99.3%，其中DNA/Lipofectamine2000脂质体比率为1.0μg∶2μL时转染效率最高（图2）.

A:DNA/Lipofectamine2000脂质体比率为0.6μg∶2μL；B:DNA/Lipofectamine2000脂质体比率为0.8μg∶2μL；C:DNA/Lipofectamine2000脂质体比率为1.0μg∶2μL；A1,B1,C1:光镜检测；A2,B2,C2:荧光倒置显微镜检测.

图2不同比率的DNA/Lipofectamine2000脂质体转染效率×20

2.3转染chk2反义寡核苷酸对Chk2蛋白表达的影响WesternBlot检测结果显示其灰度值分别为1.26，0.76，0.29，0.06,可见转染chk2反义寡核苷酸可明显抑制Chk2蛋白的表达（图3）.与空白对照组，空脂质体组和转染chk2正义链组比较差异有统计学意义（P<0.01）.

A:正常组；B:转染空脂质体组(LP);C:转染chk2正义链组（chk2odn组）；D:转染chk2反义链组（chk2Asodn组）.

图3chk2反义寡核苷酸对SKOV3细胞Chk2蛋白表达的影响

2.4转染chk2反义寡核苷酸对SKOV3细胞早期凋亡的影响40μmol/L顺铂处理各组细胞24h后，流式细胞仪检测转染chk2反义链组细胞凋亡率为（77.6±1.7）%，明显高于正常组（24.7±1.76）%，空脂质体组（35.6±1.4）%及转染正义寡核苷酸细胞组（47.6±1.2）%（P<0.05）.说明转染chk2反义寡核苷酸可诱导SKOV3细胞的凋亡增加.TUNEL染色后，转染chk2反义寡核苷酸链后SKOV3细胞在顺铂作用下凋亡细胞数明显高于正常组，空脂质体组和转染chk2正义寡核苷酸链组凋亡细胞数（图4）.检测结果与AnnexinV/PI流式细胞仪检测法获得结果一致.

A：正常组；B：转染空脂质体组(LP)；C：转染chk2正义链组（chk2odn组）；D：转染chk2反义链组（chk2Asodn组）.

图4TUNEL法检测顺铂处理24h后各组细胞的凋亡×40

3讨论

由于对卵巢癌仍缺乏有效的早期诊断方法，多数患者确诊时已属晚期，卵巢癌亦成为死亡率最高的妇科恶性肿瘤.手术治疗后辅以化学治疗是目前卵巢癌的标准治疗方案，然而，肿瘤对化疗药物的耐药常导致治疗失败.有报道约15%的卵巢癌患者对化疗原发性耐药，至少80%的卵巢癌患者最终形成多种药物联合化疗的耐药.研究发现，肿瘤细胞的多耐药性以成为恶性肿瘤化疗失败的重要原因之一［1］，因而进行化疗增敏或寻找新的治疗手段具有重要意义.

chk1/chk2在细胞周期检测点中起重要作用.国外一些研究表明通过阻断chk1/chk2可以明显增加肿瘤细胞的凋亡［6-8］.大量研究表明，chk1,2主要在G2/M期检测点发挥作用［9］.DNA受损后，活化的chkl/2磷酸化CDC25上的Sevr216，使其形成与1433蛋白质结合的位点，从而阻止CDC25的去磷酸化作用.如此cdc2因未脱磷酸化不具活性最终影响cdc2与CyclinB构成的活性复合体从而引起G2M期阻滞［10-11］.卵巢癌细胞对化疗药物的耐药是治疗失败的重要原因.为了证明chk2是否是卵巢癌增敏治疗的有效靶点，通过反义寡核苷酸杂交技术，合成chk2反义寡核苷酸链，经过杂交，用WesternBlot法检测Chk2蛋白在肿瘤细胞中的表达情况.并用顺铂处理杂交后细胞，通过流式细胞术检测，比较其与其他对照组肿瘤细胞凋亡率的改变情况.我们的实验结果表明，通过阻断chk2，可明显增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性.

本研究首先用MTT法检测不同浓度的顺铂在不同时间点对卵巢癌SKOV3细胞的抑制率的变化.通过本试验，我们了解到顺铂对SKOV3细胞的抑制率随时间和浓度的增加上升.并计算出DDP作用24h的IC50值为37.2μmol/L.所以我们在后面的实验中均选择用40μmol/L顺铂处理SKOV3细胞24小时.并通过检测chk2反义寡核苷酸转染细胞的效率，获得一个最佳的寡核苷酸和脂质体的比例，使实验结果更加稳定可靠.以上结果表明DNA/Lipofectamine2000脂质体比率为0.6μg/2μL,0.8μg/2μL和1.0μg/2μL时的转染效率均接近100%.我们选择寡核苷酸/Lipofectamine2000脂质体比率为0.8μg/2μL来转染SKOV3细胞.转染后，用WesternBlot法检测各组SKOV3细胞的Chk2蛋白表达情况，发现转染chk2反义寡核苷酸链组chk2蛋白的表达明显降低.用40μmol/L顺铂处理SKOV3细胞24h后，用流式细胞仪及TUNEL法检测显示转染chk2反义寡核苷酸链组SKOV3细胞的凋亡率明显增加（P<0.05）.证明了阻断chk2来增加宫颈癌对顺铂敏感性的有效性.

综上所述，采用反义寡核苷酸可以有效地抑制Chk2蛋白的表达，并增加顺铂诱导的SKOV3细胞的凋亡.因此，本试验结果可以证明chk2可以作为卵巢癌增敏治疗的有效靶点.

【参考文献】

［1］王世阆.卵巢疾病［M］.北京：人民卫生出版社，2004：329-333.

［2］MeloJ,ToczyskiD.AunifiedviewoftheDNAdamagecheckpoint［J］.CurrOpininCellBiol,2002,14:237-245.

［3］WalworthNC.DNAdamage:Chk1andCdc25,morethanmeetstheeye［J］.CurrOpinGenetDev,2001;11:78-82.

［4］HiroseY,BergerMS,PieperRO.AbrogationoftheChk1mediatedG(2)checkpointpathwaypotentiatestemozolomideinducedtoxicityinap53independentmannerinhumanglioblastomacells［J］.CancerRes,2001,61:5843-5849.

［5］HuBC,HouXY,WangX,etal.TheradioresistancetokillingofA125cellsderivesfromactivationoftheChk1pathway［J］.BiolChem,2001,276(21):17693-17698.

［6］RouseJ,JacksonSP.Interfacesbetweenthedetection,signaling,andrepairofDNAdamage［J］.Science,2002,297(5581):547-551.

［7］CaporaliS,FalcinelliS,StaraceG,etal.DNAdamageinducedbytemozolomidesignalstobothATMandATR:Roleofthemismatchrepairsystem［J］.MolPharmacol,2004,66(3):478-491.

［8］ZhuW,ChenY,DuttaA.Rereplicationbydepletionofgemininisseenregardlessofp53statusandactivatesaG2/Mcheckpoint［J］.MolCellBiol,2004,24(16):7140-7150.

［9］AhnJ,UristM,PrivesC.TheChk2proteinkinase［J］.DNARepair,2004,3(89):1039-1047.

核酸检测情况篇7

方法设计合成能特异性封闭Cmyc基因mRNA第二外显子翻译起始区的反义寡核苷酸、硫代寡核苷酸和锁核酸，分别以阳离子半乳糖配体介导转染HepG2细胞，采用RTPCR法检测细胞内Cmyc的mRNA表达变化；Western blot法检测细胞内Cmyc的蛋白表达变化；流式细胞技术检测细胞凋亡情况；MTT法检测反义锁核酸的细胞毒性作用。

结果转染第5 d后，反义锁核酸组Cmyc mRNA相对表达量为（0.335±0.016），明显低于对照组（1.014±0.022），差异有统计学意义（P=0.015）；Cmyc蛋白相对表达量为（0.448±0.037），也明显低于对照组（1.00±0.00），差异有统计学意义（P=0.008）；细胞凋亡比例为（32±6）%，显著高于对照组（0），差异有统计学意义（P=0.032）。

结论针对Cmyc第二外显子翻译起始区的反义锁核酸能有效抑制肝癌细胞增殖和促进细胞凋亡。

【关键词】肝细胞癌；Cmyc基因；反义锁核酸；外显子2

中图分类号：R961文献标识码：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2017.01.001

Effects of Cmyc locked nucleic acid mediated by galactose ligand on proliferation and apoptosis of hepatoma carcinoma cell

[HJ1*2][HJ]

XIAO Shurong，DENG Yibin，XU Guidan，HUANG Zansong

（Center for Medical Laboratory Science， Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities， Baise 533000， China）

[HJ2][HJ]

【Abstract】ObjectiveTo observe effect of proliferationassociated gene Myc locked nucleic acid（LNA） on the second exon of translation initiation region on proliferation and apoptosis of hepatoma carcinoma cell.

MethodsAntisense oligonucleotides， phosphorothioate oligonucleotides and nucleic acids on the second exon of translation initiation region which could specifically block Cmyc mRNA were designed and synthesized. And transfection HepG2 cells were mediated by cationic galactose ligand， mRNA expression in Cmyc was detected by RTPCR， expression of Cmyc protein in cells was detected by Western blot method， cell apoptosis was detected by flow cytometry， and cytotoxicity of locked nucleic acid was detected by MTT， respectively.

Results5 days after transfection， relative expression of Cmyc mRNA levels in LNA group was （0.335±0.016）， significantly lower than that （1.014±0.022） of control group， difference was statistically significant（P=0015）. Relative expression quantity of Cmyc protein of the LNA group was （0.448±0.037）， also significantly lower than that（1.00±0.00） of the control group， difference was statistically significant（P=0.008）. The ratio of cell apoptosis in the LNA group was（32±6）%， statistically higher than that（0） of the control group，difference was statistically significant（P=0.032）.

ConclusionAntisense locked nucleic acid that targeting at the translation initiation region of Cmyc exon 2 shows strong inhibitory effects on the proliferation and apoptosis of hepatocellular carcinoma cells.

【Key words】hepatoma carcinoma cell； Cmyc gene； LNA； exon2

原发性肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）是世界上最常见的恶性肿瘤之一，占我国肝癌的90%以上，严重威胁着人类的生命健康，自20世纪90年代起，我国肝癌死亡率上升为肿瘤的第二位。增殖相关基因（Cmyc）是细胞原癌基因之一，与肿瘤的发生发展关系密切，位于人类染色体8q24区，由3个外显子和2个内含子组成，其中第1个外显子无编码序列，只起调控作用，第2、3外显子共同编码包含439个氨基酸残基的蛋白质，该蛋白主要与Max形成异二聚体后再与DNA核心序列结合，调控基因转录与表达[1～3]。据此推测，针对Cmyc第二外显子翻译起始区设计合成反义锁核酸有可能会影响Cmyc mRNA及蛋白的表达，进而影响肿瘤细胞增殖和凋亡，从而发挥抗肿瘤作用。因此，在前期研究基础上[4～5]，我们进一步设计合成能特异性封闭Cmyc基因mRNA第二外显子翻译起始区的反义锁核酸（locked nucleic acid，LNA），以阳离子半乳糖配体介导转染HepG2细胞，观察其对Cmyc基因mRNA及蛋白表达的影响，以期为抗肝癌基因治疗寻找一种新型分子药物。

1材料与方法

1.1材料

HepG2肝癌细胞株（中国人民空军医院刘光泽博士惠赠）常规培养于含G418（380 ITI1）、10%胎牛血清的DMEM培养基中，37℃、5% CO2条件下5～6 d传代1次。DMEM培养基和G418购自Gibco公司；胎牛血清购自杭州四季清公司；阳离子半乳糖配体购自美国Invitrogen公司；RNA抽提试剂盒购自美国Sangon公司；寡聚脱氧胸腺嘧啶核苷酸、禽成髓细胞瘤病毒逆转录酶、RNA酶抑制剂、Taq酶、缓冲液、三磷酸脱氧核苷酸等购自日本TaKaRa公司；Annexin VFITC细胞凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物公司；BCA Protein Assay Kit试剂盒、十二烷基磺酸钠（SDS）、硝酸纤维膜、ECL Western blotting Kit试剂盒等购自美国Sigma公司；实时定量PCR仪（美国ABI公司）；FACS AriaTM流式细胞分析仪（美国BD公司）；半干电转系统（美国BioRad公司）。

1.2方法

1.2.1反义LNA设计与合成

根据反义寡核苷酸作用原理及设计原则，利用RNAstructure 5.0 软件设计并筛选出一条总自由能最低的互补于Cmyc的mRNA第二外显子翻译起始区（368390 nt）的寡核苷酸片段，修饰如下：（1）LNA：5’TGAAGCTACCGTACTACGAC3’；（2）硫代寡核苷酸：5’TGA#AGCT#ACCGT#ACT#ACGA#C3’；（3）未修饰寡核苷酸：5’TGA AGCTACCGTACTACGAC3’；（4）无关序列：5’CGC TATGTAATGCGCTATGG3’。其中，代表LNA修饰，#代表硫代修饰。各序列经BLAST排除与人同源后由Genelink公司合成修饰并纯化。

1.2.2实验设计与脂质体转染

实验设对照组和实验组。对照组包括空白对照组（半乳糖配体DMEM混合液）和无关序列组。实验组包括未修饰寡核苷酸组（ODN）、硫代寡核苷酸组（SODN）和反义锁核酸组（AntiLNA）。将HepG2细胞按1×105个/ml接种于16孔培养板，每孔100 μL，共设6个组，每组各设6个复孔，待细胞贴壁后，分别在各组每孔中加入含LNA（或寡核苷酸）的半乳糖配体DMEM混合液1 ml，培养后第5 d收集细胞进行mRNA、蛋白等指标检测。转染按脂质体说明书操作。

1.2.3Cmyc mRNA检测

（1）RNA提取：于细胞收集管中加入RNA抽提试剂1 ml，迅速置于冰上，加入0.2 ml氯仿，室温静置15 min，4℃ 12 000 rpm离心15 min；取上清液，加入0.5 ml异丙醇，室温静置10 min，4℃ 12 000 rpm离心10 min；弃上清液，加入75%焦碳酸二乙酯乙醇溶液1 ml，4℃ 7500 rpm离心5 min；弃上清液室温干燥5 min，溶于焦碳酸二乙酯无菌水中。（2）RNA逆转录：根据目的基因片段碱基序列利用软件设计并评价引物，交由上海英骏生物技术有限公司合成纯化。在微反应管中配制模板RNA和引物（各组均取上游引物）混合液，总体积为12 μL。65℃保温5 min后，冰上迅速冷却；加入2×PCR预反应液8 μL，轻轻混匀，室温静置10 min，移入42℃恒温箱中保温60 min后，升至70℃保温10 min，移到冰中冷却2 min。（3）cDNA扩增：上述反应管移入PCR扩增仪中，按Cmyc基因设计的上游引物为5’TCAACGTTAGCTTCACCAAC3’；下游引物为5’TGGGCGAGCTGCTGTCGT3’，产物长度为245 bp。反应条件：94℃预变性5 min，94℃ 30 s，58℃ 30 s，72℃ 1 min，共35个循环；72℃终延伸10 min。取PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，并与内参βactin（550 bp）电泳条带比较，计算相对灰度比值。

1.2.4Cmyc蛋白检测

（1）总蛋白提取：收集细胞弃上清，用RIPA细胞裂解液（0.01 M Tris.HCl pH75，0.15M NaCl，1% Triton X100，0.1% SDS pH7.4，临用前加入1 mM PMSF 100 μmol/ml）重悬，转入Eppendorf管，冰上静置1 h，4℃ 12 000 rpm离心15 min。取上清于新Eppendorf管，用BCA Protein Assay Kit定量，于-70℃保存。（2）电泳：取30 μg蛋白质样品与缓冲液（100 mM Tris.HCl pH6.8，200 Mm DTT，4% SDS，0.2%溴酚蓝，20%甘油）混合煮沸5 min变性后点样于预先制备好的12% SDSPAGE电泳胶板上，30～40 mA电泳，当溴酚蓝到达胶板底部时停止电泳。（3）转膜：取预处理过的2张3MM滤纸和1张硝酸纤维膜，按下列顺序放入半干电转仪的正极板上：滤纸、凝胶、硝酸纤维膜、滤纸，接好负极板后，10～12 V电转30 min。（4）Western blot分析：采用ECL Western blotting Kit试剂盒进行检测，并利用凝z图像分析系统曝光、拍照和定量分析。

1.2.5HepG2胞凋亡检测

采用Annexin VFITC/PI双染色流式细胞技术检测HepG2细胞凋亡情况。根据双变量流式细胞仪的散点图来判断结果，左上象限（Q1）为损伤细胞，右上象限（Q2）为坏死细胞，左下象限（Q3）为活细胞，右下象限（Q4）为凋亡细胞。严格按试剂盒说明书和仪器说明书操作。

1.2.6反义LNA的细胞毒性检测

采用MTT比色法检测反义LNA对细胞活性的影响。

1.3统计学方法

所有数据采用均数±标准差（±s）表示，应用SPSS 19.0统计软件分析，组间比较采用重复测量单因素方差分析的LSD检验，检验水准：α=0.05，双侧检验。

2结果

2.1反义LNA对Cmyc mRNA表达的抑制作用

各组肝细胞Cmyc mRNA逆转录cDNA与内参βActin（设为1）灰度比值，1～4泳道分别为（1014±0022）、（0.843±0.028）、（0661±0021）和（0.335±0016），与对照组相比，硫代寡核苷酸组和反义锁核酸组肝细胞中Cmyc mRNA表达量均明显下调，其中反义锁核酸组下调尤为明显（P=0.015）。见图1。

注：M：DNA 相对分子质量标准；1：空白对照组；2：未修饰寡核苷酸组；3：硫代寡核苷酸组；4：反义锁核酸组。

图1各组肝细胞Cmyc mRNA表达水平电泳图

2.2反义LNA对Cmyc蛋白表达的抑制作用

Western blot检测各组肝细胞中Cmyc蛋白相对表达量分别为（1.00±0.00）、（0.915±0.031）、（0.846±0041）和（0.448±0.037），与对照组相比，反义锁核酸组肝细胞中Cmyc蛋白相对表达量明显下降（P=0008）。见图2。

2.3反义LNA对HepG2细胞凋亡的影响

采用Annexin VFITC/PI双染色流式细胞技术检测HepG2细胞凋亡情况，结果发现转染第5 d后，凋亡细胞数比例，硫代寡核苷酸组（18±4）%和反义锁核酸组（32±6）%均显著高于对照组（0），差异有统计学意义（P=0.032），反义锁核酸组的细胞凋亡数比例更高一些。见图3。

2.4反义LNA对细胞的毒性作用

用药5 d后，采用MTT比色法测定各组A值，未修饰寡核苷酸组、硫代寡核苷酸组和反义锁核酸组的A值分别为（118±0.05）、（1.16±0.04）和（1.15±0.05），与空白对照组的（1.39±004）比较均无统计学意义（P>005）。

注：1：空白对照组；2：无关序列组；3：未修饰寡核苷酸组；4：硫代寡核苷酸组；5：反义锁核酸组。

图2各组肝细胞Cmyc蛋白表达水平电泳图

注：A：空白对照组；B：无关序列组；C：未修饰寡核苷酸组；D：硫代寡核苷酸组；E：反义锁核酸组。

图3各组肝细凋亡散点图

3讨论

目前认为，肿瘤细胞的恶性转化是一个由多细胞信号转导通路异常活化，使多种癌基因或抑癌基因表达异常，进一步促进癌症细胞异常增殖的多环节、多阶段、多步骤的复杂过程，而癌基因突变则是肿瘤细胞增殖的分子基础[6]。常见的癌基因有Cmyc、Nras（转化基因）等，其中Cmyc是新近研究发现的与肝细胞癌变密切相关的癌基因，是myc基因家族的重要成员之一，其编码蛋白属于核内转录因子，介导细胞生物信号转导，在细胞凋亡与增殖调控中发挥重要作用[7～8]。因而推测，封闭Cmyc第二外显子翻译起始区的基因表达有可能会影响Cmyc mRNA及蛋白的表达，进而可能会影响肿瘤细胞增殖和凋亡，从而发挥抗肿瘤作用。

本研究利用计算机辅助药物设计软件设计合成能特异性封闭Cmyc基因mRNA第二外显子翻译起始区的反义锁核酸片段，以阳离子半乳糖配体介导转染HepG2细胞，利用RTPCR、Western blot等分子生物学技术检测细胞内Cmyc mRNA及蛋白的表达情况，评估反义锁核酸的抗病毒效果。结果发现，反义锁核酸作用 5 d后，Cmyc mRNA及蛋白质表达均较对照组明显下降，差异有统计学意义（P

参考文献

[1]Cheng Q，Yuan F，Lu F，et al.CSIG promotes hepatocellular carcinoma proliferation by activating cMYC expression[J].Oncotarget，2015，6（7）：17331744.

[2]Pannem RR，Dorn C，Ahlqvist K，et al.CYLD controls cMYC expression through the JNKdependent signaling pathway in hepatocellular carcinoma[J].Carcinogenesis，2014，35（2）：461468.

[3]Chauhan A，Paul R，Debnath M，et al.Synthesis of fluorescent binaphthyl amines that bind cMYC Gquadruplex DNA and repress cMYC expression[J].J Med Chem，2016，59（15）：72757281.

[4]罗艳红，邓益斌，邹佳峻. 反基因锁核酸体外阻断肝癌细胞系乙肝病毒S基因表达[J].基础医学与临床，2014，14（2）：206210.

[5]Deng YB，Qin HJ，Luo YH，et al.Blocking the expression of hepatitis B virus S gene in hepatocellular carcinoma cell lines with anti gene locked nucleic acid in vitro[J].GENET MOL RES，2015，14（2）：54455451.

[6]Ho C，Wang C，Mattu S，et al.AKT（vakt murine thymoma viral oncogene homolog 1） and NRas（neuroblastoma ras viral oncogene homolog）coactivation in the mouse liver promotes rapid carcinogenesis by way of mTOR（mammalian target of rapamycin complex 1），FOXM1（forkhead box M1）/SKP2，and Cmyc pathways[J].Hepatology，2012，55（3）：833845.

[7]Xiao W，Wang J，Ou C，et al.Mutual interaction between YAP and Cmyc is critical for carcinogenesis in liver cancer[J].Biochem Bioplys Res Commun，2013，439（2）：167172.

[8]Lin F，Ding R，Zhang S，et al.Decrease expression of microRNA744 promotes cell proliferation by targeting Cmyc in human hepatocellular carcinoma[J].Cancer Cell Int，2014，14：5860.

[9]蒋建伟，张洹.受体介导的Cmyc反义核酸抑制肝癌移植瘤生长[J].中国肿瘤临床，2006，33（22）：13071311.

（收稿日期：2016-11-17修回日期：2016-12-30）

核酸检测情况篇8

艾滋病即获得性免疫缺陷综合症，由感染“HIV”病毒引起。HIV是一种能攻击人体免疫系统的病毒，它可以侵袭人的免疫体系，并终极损坏人体的免疫功效。随着人体免疫力的下降，人会越来越频繁地感染上各种致病微生物，而且感染的水平也会变得越来越来重，终极会因各种复合感染而导致逝死亡。艾滋病严重威胁人类的身心健康，当我们出现一些异样的症状后，应该选择什么样的检测方法，怎样确诊自己是否患有艾滋病就显得格外重要。按规定的检测程序对艾滋病的检测方法研讨如下。

1 材料和方法

1.1 材料：选取我院临床初筛检测病例72例，其中男性40例，女性32例。年龄28-63岁，平均39岁。

1.2 临床症状：初期的开始症状像伤风、流感、全身疲劳无力、食欲减退、发热、体重减少、随着病情的加重，症状日见增多，如皮肤、粘肤出现白色念球菌感染，单纯疱疹、带状疱疹、紫斑、血肿、血疱、滞血斑、皮肤容易损伤，伤后出血不止等。

1.3 方法：目前作为诊断手段使用的检测主要包括抗HIV病毒抗体检测、核酸检测和抗原检测。其中对病毒抗体的检测是艾滋病初筛实验室常规使用的方法

1.3.1 酶联免疫吸附试验（ELISA）：目前应用的ELISA法有8种之多。它们的特异性和敏感性超过99%。在一些特殊情况下，当抗体检测无法满足HIV感染诊断的需要时，病毒分离及测定、核酸检测、抗原检测可作为辅助手段使用，这包括对非典型血清学反应样品的诊断、HIV感染的窗口期诊断、新生儿早期诊断和对特殊样品的诊断。

1.3.2 明胶颗粒凝集法（PA）：它是快速、简便的一种筛选方法。PA的基本过程是先将样品稀释，然后分别加入经抗原致敏的和未致敏的明胶颗粒，混匀后保温(一般为室温)。当血清中有HIV抗体存在时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。PA操作简便,无需特殊仪器设备,适合对少量标本的检测。是对大量人群初筛实验使用的方法，例公民义务献血的初筛检测。

1.3.3 免疫荧光试验(IFA)：基本原理为应用H9或HUT78培养细胞作为载体，用HIV感染细胞,该细胞内就会含有HIV抗原,将HIV感染的淋巴细胞涂于玻片上固定，制备为抗原片，加入待检血清，待检血清中的抗 HIV抗体与抗原结合后，再与荧光素标记的抗人Ig结合，在荧光显微镜下可见到细胞内有黄绿色荧光。

1.3.4 免疫印迹试验：主要用于确认试验，基本原理是HIV全病毒抗原经过SDSPAGE电泳，将分子量大小不等的蛋白带分离开来，然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状，每一条硝酸纤维素膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。将待检血清样品用稀释液稀释成1/100，再把它直接加到硝酸纤维素膜上，恒温震荡，使其充分接触反应,血清中若含有抗HIV抗体，就会与膜条上的抗原带相结合并呈现紫褐色。此确认实验室是初筛阳性的标本送检省疾控的HIV确认实验室或市疾控的HIV中心实验室进行的。

1.3.5 病毒核酸检测：是通过检测HIV RNA水平来反映病毒载量，具有很高的灵敏度，使用适时荧光聚合酶链反应(PCR)技术，能够在HIV感染的前2周检测到病毒核酸。病毒核酸检测方法可用于HIV的早期诊断，如窗口期辅助诊断、病程监控、指导治疗方案及疗效测定、预测疾病进程等。目前常用的测定方法有逆转录PCR实验(RT PCR)、核酸序列扩增实验(NASBA)、分支DNA杂交实验(bDNA)等。使用高灵敏度的适时荧光PCR技术，能够在HIV感染的前2周检测到病毒核酸。此种检测是在HIV感染确诊之后，判定使用抗病毒药物的检测指标，现在可有省疾控中心的艾滋病检测实验室完成。

2 结果

经过我院的检测和分析后，14例送检经确认实验，未确诊艾滋病感染。

3 讨论

近年来，HIV检测技术取得了很大进展，但是仍有不足的地方。例如ELISA法第四代试剂增加了P24抗原的检测， p24抗原检测能够在病毒开始复制后检测到血液中的可溶性p24抗原，但易出现假阳性。因此，阳性结果必须经中和试验确认，该结果才可作为HIV感染的辅助诊断依据。还有病毒核酸检测方法具有很高的灵敏度，对疾病进展的监测、抗病毒疗效观察和耐药性监测非常重要。但是，由于HIV基因的多样性，没有一套引物可以覆盖所有的HIV序列，使检测的敏感性又受到限制。

HIV感染的诊断是艾滋病预防控制工作的重要组成部分，建立敏感实用的检测方法对于监测、诊断或血液筛查，控制艾滋病的流行显得尤为重要。总结以上讨论的检测方法，我们得出的结论是，既要提高检测的敏感性、特异性，缩短窗口期，又要简便、快速和降低成本已成为HIV检测技术发展的要求和方向，很多的研究正致力于寻找病毒检测的替代技术。

参考文献

[1] 曹韵贞我国艾滋病的现状中国抗感染化疗杂志 2002,2(2):65 66

核酸检测情况篇9

今天的会议非常重要，大家务必高度重视，主要目的就是对防控漏洞再排查，对防控任务再明确，确保我县疫情防控形势持续向好。刚才，卫健、市场监管都作了很好的发言，提的意见建议比较到位，请相关单位认真抓好落实。今年6月以来，全国10多个省份在冷链冻品中检测出新冠病毒阳性。近期，国内多地又连续出现新增病例以及进口冷链食品核酸检测阳性，省内，福州、厦门、泉州也陆续在进口冷链食品包装中核酸检测阳性；11月13日，一批关联天津市疫情冷冻食品输入我市。再加上境外疫情扩散蔓延的势头仍然没有得到有效的控制，境外累计输入病例已达3600多例，10月比9月增长了45%。当前，疫情形势依然复杂严峻，大家对疫情的警惕性不能降低，对防控工作的要求不能降低。这里，就做好今冬明春疫情防控工作，我再强调四点要求。

一、思想一刻都不能放松

低风险不等于无风险，防控常态化不等于正常化。外防输入、内防反弹仍然是重中之重，尤其是要加强进口冷链食品疫情防控。当前的防控压力并没有减少，原来是“人防”，现在既要防“人”，又要防“物”，而且防“物”的难度并不比防“人”小。为什么这么说？主要有两个方面难度：一是病毒在低温环境，比如摄氏零下十几度下，并不会被冻死。冷链造就的低温环境，为病毒提供了一个很好的存活空间。即使是普通的冷链运输，病毒也可存活数周。二是在食品生产、装卸、搬运、运输、贮存和销售的各个环节，如果周围的环境被新冠病毒污染，或者食品从业人员本身是新冠病毒感染者，都可能对食品及其包装材料造成污染。如果新冠病毒感染者带病工作，在工作环境中，打喷嚏、咳嗽等方式都会将病毒附着在货品上。

这些新情况新问题给我们带来了新压力，大家要坚决做到“三个不放松”：一是学习不放松。近期，中央和省里下发了不少防控文件，大家一定要认认真真学，把文件精神吃透，把新要求掌握清楚，特别是对防控技术要求和工作规范，要心中有数，不折不扣执行、落实到位。二是责任不放松。万众一心，没有翻不过的山。大家要拧成一股绳，根据职责分工，按照指挥部要求，时刻保持临战状态，以最快的速度落实好各项防控工作。各防控工作组组长对工作任务要再细化，人员职责再明确，及时做好与市里工作组的无缝对接，进一步细化工作方案，配强工作力量，确保工作有序推进。三是联动不放松。要坚持常态化疫情防控与应急处置相结合，根据今冬明春疫情的变化，进一步健全完善疫情防控指挥体系，强化工作力量，做到防控指挥体系不变，指令清晰、执行有力。大家遇事不要推诿扯皮，对照工作职责，按照工作流程，对号入座，及时、规范处置，只有这样，才能确保第一时间发现问题、第一时间应对处置，才能赢得工作主动。

二、防控一点都不能马虎

高中风险地区人群、进口冷链食品是疫情防控的关键点和风险点，要坚持人物同防、人物同查，全力筑牢疫情防控防线。

“人防”方面，要重点抓好三类人群管理。一是入境人员健康管理。交通检疫组要进一步查漏洞、补短板、强弱项，优化完善“点对点”转运工作有关规定，严格落实人员“点对点”闭环转运管理和信息对接等工作，确保转运全过程环环相扣。二是中高风险来将人员管理。卫健部门要加强国内中高风险地区相关信息的收集，根据各省情况，第一时间启动中高风险地区入(返)将人员排查追踪。各乡（镇）要落实属地责任，落实人员健康等相关信息申报制度，按照常住人口、流动人口和重点人员进行分类管理，落实好分区分级健康管控措施。卫健局、总医院要加强集中隔离场所管理，按照“一点一专班、一点一预案”要求，进一步充实开发区、天源集中隔离医学观察点卫生防疫力量，落实定点通风、清洁、消毒等防控措施。交通运输、文旅、工信、公安等相关行业主管部门要重点抓好客运站、动车站、景区、宾馆等重点场所的健康管控工作，严防输入性感染病例。特别是动车站、高速路口疫情防控力量要根据实际工作需求，强化人员、体温测量配备，严格落实“八闽健康码”检测、发热人员转运等措施，确保检疫全覆盖、无盲区。要充分利用大数据+网格化手段，及时发现疫情线索，及时报告、规范处置。三是重点行业从业人员管理。特别是要加强冷链食品、外卖配送、快递等相关从业人员管理。针对冷链物流运输从业人员要严格落实“验码、测温、戴口罩”等各项常态化防控措施，严格实施应检尽检，确保每7天检测一次；要引导掌握防治相关知识和技能，养成良好习惯。针对快递管理人员，要严防寄送过程疫情输入风险，收取、处理快递物品过程中要自觉加强自我防护。

“物防”方面，重点强调一下冷链食品防控工作。按照技术指南等相关要求，全力抓好两件事。一是要严把准入关。目前，全县共有进口冷链食品经营者10家，其中有自建冻库8家，使用市场冷柜经营者2家。市场监管部门要督促食品生产经营者落实主体责任，加强进口冷链食品的索票索证、进货查验，追溯凭证、核酸检测证明、消毒证明“三证”齐全，方可入库、投用、销售，凡是不能提供合格证明的一律不准上市销售。二是要把好检查关。市场监管部门要牵头开展流通环节食品安全风险排查整治、冷藏冷冻肉品排查等专项行动，强化对冷链食品的日常定期抽检，加强对食品生产经营企业、餐饮服务企业冷链食品追溯。建立冷链追溯系统非常必要。从天津疫情来看，在短时间内就追溯到了冷冻食品的流向，为防控措施争取了时间并提供了有力依据。要牵头建立进口冷链食品全过程追溯管理制度，督促落实一品一码制度，对不落实索取查验产品合格证明等工作的，要依法予以查处。

三、短板一项都不能落下

11月17日起，省卫健委组织2个巡查组，分片开展为期15天的冬春季疫情防控检查，重点检查入境人员闭环管理、进口冷链食品“一线两重点”防疫管理、医疗物资储备、核酸检测能力和质量控制等情况。这段时间，效能办、卫健、市场监管等部门正在开展疫情防控督导及物质储备情况检查，各有关单位要配合做好检查，对标对表抓好问题自查，对反馈的问题，要逐一抓好整改，及时加强和完善防控措施。重点要抓实抓细五项工作：

一是核酸检测。提升核酸检测能力是硬任务、硬指标，更是打好疫情防控阻击战的关键手段，没有这个保障，就是最大的漏洞。上级三令五申强调要做好这项工作，这也是省市常态化防控巡查的重点。市里给我们的任务是每日检测量2200份，按1:10混检测算的话就是2.2万份，5-7天内实现辖区常住人口全员核酸检测能力全覆盖。我县常住人口是X万，目前每日检测量能够达到2400-2600份，看似达到要求，但实则面临不少压力：一是万一发生疫情，被列入中风险地区，就是按照1:5测算，目前检测能力远远达不到要求。二是具备资质的核酸检测员仍然只有6名（总医院、疾控中心分别3名），数量远远不足。虽然省里建立了片区机动支援制度，采取片区机动支援办法，调度核酸检测力量，市里也会统一调配力量，但千万不能抱有侥幸心理，一旦发生疫情，各地肯定先保障自己的需求，哪里顾得上别人。总医院、疾控中心要学习借鉴其他地方经验做法，该要花的钱一分都不能少，通过实验室改造扩建、添置仪器设备、充实检测人员等方式，真正把核酸检测能力提上去。卫健部门要在完成应检尽检的基础上，着重提高对重点人群核酸检测频次，并建立重点人群核酸检测情况“一周一通报”制度。

二是院内管理。上个月青岛市发生的聚集性疫情事件，主要原因就是医院相关负责人对院内感染控制重视不够，部分医务人员感染基本知识和技能欠缺，医院医疗区域设置不规范，虽然制定了防控制度，但是没有严格落实。总医院要引以为戒、举一反三，认真排查漏洞，持续强化医院感染控制管理，落实落细县乡医疗机构内感染防控的各项工作。要严格按照规范，进一步健全医院感染管理体系，特别是要规范发热门诊管理，完善发热病人接诊、筛查、留观、转诊工作流程，确保一体化闭环管理。要对发热门诊、住院患者及陪护人员全部进行核酸检测，可疑病例全部留观。要按照有关技术规范和标准，做好诊疗环境、医疗器械、患者用物等的清洁消毒，严格医疗废物处置，防止交叉感染和疫情传播。针对发现问题、薄弱环节要立即整改落实。

二是物资储备。物资储备要备足，宁可备而不用不可用而不备。总医院、疾控中心要综合考虑人口数量、既往消耗量等客观因素，加大核酸检测试剂、医用防护服、医用N95口罩等物质采购力度，为疫情防控提供坚实后盾。卫健局要抓好体育中心篮球馆方舱医院建设，按照集中医学观察功能需求做好物资采购，力争月底前完成设计，确保战时能拿得出、用得上。

四是队伍建设。要继续加强核酸采样、核酸检测、流调、消杀“四支队伍”建设。通过线上线下、知识理念与模拟实训等方式，持续提升核酸检测能力。要强化疾控人员流行病学调查、实验室检测和应急处置等业务培训，适时组织开展新冠肺炎诊疗技术交流，切实提高医务人员诊疗能力和水平。

五是应急演练。要坚持平战结合、人物同防的原则，根据今冬明春多种影响因素交织特点，结合近期一些地方暴露出的薄弱环节，全面开展疫情应对处置大演练。通过演练，查找薄弱环节，修订相关预案方案流程，提高疫情准备和处置水平，确保出现疫情能够及时响应、迅速启动、高效处置。

四、氛围一丝都不能减弱

核酸检测情况篇10

关键词：水质；自动监测站仪器；运行分析；测试

中图分类号：X832 文献标识码：A 文章编号：1006-8937（2015）33-0175-02

水质自动监测站主要核心就是在线分析仪器，通过现代自动检测技术、自动控制技术、计算机应用技术、网路通讯技术以及相关技术来建立综合性在线水质自动监测系统，可以连续进行存储和检测，而且可以进行数据远程传输。大多数情况下，国内水质自动监测站一般都处于湖、河流的敏感水域、重要水源地、重要水质断面。基本参数包括电导、浊度、氨氮、总氮和总磷、高锰酸盐指数、pH、水温、溶解氧。

1 基本案例

某水质监测站是国家利用世界银行进行贷款在国内主要流域断面上建立的水站，在2003年4月的时候水站完工并开始使用，水站具备大量水量，具有一定代表性，可以实际反映当地的水质情况。现阶段，此水站合理安置了氨氮测定仪和AQUIAB5参数，主要包括浊度、pH、溶解氧、电导率、温度，以及SERES2000高锰酸盐指数测定仪。2003年7月本站对配水系统、提水系统、传输部分设备和控制部分以及自动监测水质系统进行一定的考核验收，依据自动在线监测分析仪器来对该区域内部的水质进行分析，为了保证具备可比性和准确性的监测数据，需要对自动监测设备实施仪器检出限，以便于可以确定设备精密度和准确性，对比分析国家标准监测方式和仪器检测方式，合理评估水质在线自动检测仪器方式，保证空间、具备有效合理的监测数据[1]。

2 水质自动监测站仪器运行校验方法

2.1 分析自动监测仪器的方法

浊度：光学法（透射原理）；溶解氧、氨氮、pH、电导率：电极法；温度：温度传感器方式；高锰酸盐指数：高锰酸钾氧化-电位滴定法。

2.2 校验水质自动监测仪器的方法

2.2.1 校验项目

由于测量基本原理是电极方式，pH值、溶解氧、浊度、电导率、水温、氨氮等六个指标，需要依据一个或者两个点进行定位，基本的校验方式实际上就是对比法，也就是对比分析国家标准方式的检测数据和自动检测设备检测的数据，利用t检测方式来分析检测两种结果的时候，不会出现明显性差异。在分析高锰酸盐指标的时候，基本方式就是高锰酸钾氧化-电位滴定法，需要合理应用独立分析仪器，基本校验方式就是工作曲线、仪器检出限、精密度、精确度，此外，对高锰酸盐指数进行比对自动检测仪器和国家标准方式。利用定期标准溶液来合理检测和校验设备仪器的实际稳定性[2]。

2.2.2 采集样品的数目和位置

在整体启动水质自动检测系统以后，提水系统进行五分钟泵水冲洗管路，配水系统之后考试进行抽样，水样会经过高锰酸盐指数测定仪、各个电极，从出水管中排出多余的河水水样，在进行校验的时候，需要对采集的水样进行同步出水管水样处理，在水质自动检测站每次进行往复都需要经过2 h，一次性分析一个水样七项指标的过程，需要一小时进行分析仪器实际运行情况，因此，需要合理进行分段校验，持续五周每周安排两天，每个项目需要适当采集10个样品。

3 运行校验结果

3.1 准确度与精密度

在得到国家相关标准认可控制质量样品的时候，需要连续八次测定高锰酸盐指数测定仪，结果见表1，发现具备的高锰酸盐指数测定仪的精密度和精确度都能够完全符合小于等于10%的实际需求。

3.2 检测限

依据实际情况达到相应的检测限，依据检测限的实际需求，需要配置的标准溶液是三倍的检测限溶度，进行八次测定，见表2，计算的基本公式是：

L=K’Sb/k

其中，Sb是标准偏差，K’是常数，属于方法灵敏度，也就是校验曲线斜率，一般取值为3。

从表2可以发现，高锰酸盐指数测定仪具备0.42 mg/L的检出限，最低要求检出限就是0.5 mg/L，能够符合实际区域情况[3]。

3.3 工作曲线

依据实际测量过程中仪器的规定范围，合理选择五个溶度标准液，其中包括空白，进行样品检测，平行测定某点两侧，选择平均值来计算标准曲线中的系数，经过分析和对比可以发现具有大于0.9990的高锰酸盐指数线性，可以发现配置标准溶液和分析仪器测试结果之间存在一定比较熊搞得相关性，可以满足实际需求：见表3。

3.4 标准溶液核查

配置间苯二酚标准液3.0 mg/L，与其对应的就是高锰酸盐指数溶液5.0 mg/L，利用高锰酸盐指数测定仪器进行定期检查，见表4。

可以发现在运行仪器的时候，具有相对稳定测量结果，长时间下去，会使得仪器出现漂移的问题，会超过10%的相对误差，所以，需要定期核查运行设备[4]。

3.5 对比试验

在自动水质监测站出水口的位置进行同步手工采集姜水样品，采用国标手工分析方式，对比项目以下方式见表5，可以得到自动检测仪器和手工检测数据，对分析数据依据t检测方式进行相应的数据对比。利用查表的方式可以额达到自由度和显著水平的临界值。如果计算t值如果大于临界值，两种结果具备明显差异，如果计算值t小于临界值，见表6，两种检测方式没有明显差异。数据分析结果可以发现国标检测方式和自动检测方式没有明显的差异性，存在可比性的结果[5]。

4 评估和分析仪器运行

通过实验可以发现，具备符合要求的高锰酸盐指数分析仪器的实际工作曲线，具备大于0.99990的相关系数，良好的溶度相关性。满足负荷条件的仪器检出限，小于10%的标准溶液的精密度和准确度，符合自动分析仪器实际需求。在半个月内高锰酸盐指数测定仪器具有比较好的稳定性，在以后实际运行时候设备的时候，需要两周校准一次仪器设备，经过对比可以发现，两种分析方式没有明显差异[6]。

5 结 语

本文主要研究了水质自动监测站仪器运行分析测试，依据实际案例来进行分析，找到符合实际运行条件，促进水质自动监测站仪器的发展和进步。

参考文献：