蒲公英提取物质量标准论文

1仪器与试药

1.1仪器Waters高效液相色谱仪（Waters515高压泵，microliterTM#702型手动进样针，Waters2487紫外检测器，Empower数据处理系统），SIGMA3K15型离心机，MettlerToledoAG135型电子天平。

1.2试药蒲公英药材由亳州济人药业有限公司提供，咖啡酸和绿原酸对照品购于中国药品生物制品检定所。硅胶G（青岛海洋化工厂），甲醇为色谱级，磷酸和磷酸二氢钠为分析纯，水为超纯水。其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1定性鉴别

2.1.1供试品溶液的制备取蒲公英提取物1g，加甲醇20ml，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，滤过，滤液用醋酸乙酯振摇提取2次，10ml/次，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

2.1.2对照品溶液的制备取咖啡酸对照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.3薄层层析吸取上述3种溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸丁酯－甲酸－水（7∶2.5∶2.5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检测。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.2含量测定

2.2.1色谱条件色谱柱为AgilentHypersilODS柱，（5μm，4.6mm×250mm）；流动相为甲醇－磷酸盐缓冲液（pH4.0）：（23∶77），检测波长323nm，柱温25℃，流速为1.0ml/min。灵敏度：1.0AUFS；理论塔板数按咖啡酸峰计算应不低于3000，咖啡酸峰与其他峰能达到基线分离，且出峰时间适宜，峰形较好。

2.2.2对照品溶液的制备分别精密称取在110℃干燥至恒重的绿原酸和咖啡酸对照品各2.5mg，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得0.025mg/ml的对照品溶液。

2.2.3供试品溶液的制备取蒲公英提取物干粉0.5g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加含5％甲酸的甲醇溶液50ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30min，取出，放冷，再称定重量，用含5％甲酸的甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，用微孔滤膜（0.22μm）滤过，滤液置棕色量瓶中，即得。

2.2.4线性关系考察分别精密称取在110℃干燥至恒重的绿原酸和咖啡酸对照品各2.5mg，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，再用甲醇逐级稀释得0.05，0.025，0.0125，0.00625，0.003125mg/ml5个不同浓度的对照品溶液，分别进样10μl，测定其峰面积，然后分别以绿原酸和咖啡酸的浓度为横坐标，5次测定峰面积的均值为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为绿原酸：Y＝3×107X-24923,R2=0.9995；咖啡酸：Y＝5×107X+8862.3,R2=0.9999。实验结果表明绿原酸和咖啡酸的浓度在0.003125～0.05mg/ml范围内均与所测得的相应峰面积呈良好的线性关系。

2.2.5精密度实验精密吸取对照品溶液10μl进样，重复进样6次。按上述色谱条件测定绿原酸的峰面积分别为735557，723229，730246，735043，720147，724230，RSD＝0.89％。咖啡酸的峰面积分别为1255324，1275697，1267064，1270335，1292704，1243824，RSD＝1.33%。结果表明本方法的精密度良好。

2.2.6稳定性实验精密吸取供试品溶液，按上述色谱条件，每隔1h进样1次，共进样6次。绿原酸峰面积分别为505928，506310，510911，515970，518800，510034，RSD＝1.01％。咖啡酸的峰面积为798944，797559，803781，811651，820222，816674，RSD＝1.17％。结果表明，绿原酸和咖啡酸的峰面积在5h内无明显变化，供试品溶液稳定性好。对照品及供试品色谱图见图1~2。

2.2.7重复性实验取同一批样品，平行实验6次，测得绿原酸含量为1.775，1.734，1.808，1.750，1.788，1.75，RSD＝1.52％。咖啡酸含量为1.606，1.583，1.628，1.567，1.613，1.601，RSD＝1.36％。结果表明，在同一条件下，6次测得样品绿原酸含量及咖啡酸含量一致，本方法重复性好。

图1对照品色谱图（略）

图2供试品色谱图（略）

2.2.8回收率实验采用加样回收法，精密称取已知含量的样品6份，每份0.5g，分别精密添加绿原酸对照品1.8mg和咖啡酸对照品1.6mg，按“2.2.3”的方法制成供试品溶液，各取10μl进样，测定绿原酸和咖啡酸的含量。计算平均回收率分别为98.89％和99.65％，RSD分别为1.05％和1.34％。实验结果表明，本方法回收率好。

2.2.9样品含量测定按“2.2.3”项的方法制备样品，用上述方法对以下不同批次样品进行含量测定。结果见表1。

表1蒲公英提取物中绿原酸和咖啡酸含量测定结果（略）

3讨论

有人以单独的咖啡酸或绿原酸为指标，对蒲公英药材或制剂进行质量评价［4，7］。蒲公英提取物与蒲公英药材的化学成分及含量有所不同。为了更好地评价蒲公英提取物，本实验在前人研究的基础上同时以绿原酸和咖啡酸为指标，对蒲公英提取物进行质量标定。

本法参考了《中国药典》2005年版Ⅰ部蒲公英中咖啡酸的测定方法，并新加入了绿原酸作为检测指标，考虑同时以咖啡酸和绿原酸作为检测指标，本实验在原有的检测条件下做了若干改进，获得较好的效果，能有效控制蒲公英提取物质量。

【参考文献】

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［5］晏媛,许重远,陈志良,等.高效毛细管电泳法测定蒲公英中咖啡酸的含量［J］.中药材,2004,24(2):100.

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【摘要】目的以绿原酸和咖啡酸为定量指标，建立蒲公英提取物的质量标准。方法采用薄层色谱法（TLC）为蒲公英提取物制定定性鉴别方法；采用高效液相色谱（HPLC）法测定其中的绿原酸和咖啡酸含量。结果绿原酸在0.003125~0.05mg/ml与峰面积具有良好的线性关系，R2=0.9995。咖啡酸在0.003125~0.05mg/ml与峰面积具有良好的线性关系，R2=0.9999。绿原酸和咖啡酸平均回收率分别为98.89％和99.65％，RSD分别为1.05％和1.34％。结论建立的方法简便、准确、可靠，可作为控制该药品的质量标准。

【关键词】蒲公英提取物绿原酸咖啡酸质量标准高效液相色谱