三仙壮骨胶囊提取工艺研究论文

时间:2022-08-10 09:41:00

三仙壮骨胶囊提取工艺研究论文

摘要:目的优选三仙壮骨胶囊水提部位的最佳提取工艺。方法采用高效液相色谱法测定川续断皂苷VI的含量,并以川续断皂苷VI的含量作为指标,采用正交设计试验考察三仙壮骨胶囊的最佳提取工艺。结果最佳提取工艺为:加10倍量的水煎煮2次,每次1h。结论该提取方法合理、可行,为生产提供了实验依据。

关键词:三仙壮骨胶囊;提取工艺;高效液相色谱法;川续断皂苷VI

三仙壮骨胶囊是由续断、淫羊藿、独一味、当归等几味中药组成,本品为研制者常年行医的经验方,临床用于治疗跌打损伤、筋骨扭伤、瘀积肿痛。方中续断、淫羊藿、独一味主要含有皂苷类成分及黄酮苷类成分,在水中溶解性较好,故此三味药材采用水煎煮方式提取。本研究采用正交设计法,以川续断皂苷VI为指标,用高效液相色谱法测定其含量[1-4],以优选三仙壮骨胶囊水提部位的最佳工艺。

1材料与试剂

Waters2695高效液相色谱仪,Waters2996PDA检测器,Empowers色谱工作站,DiamonsilC18柱(5μm,250mm×4.6mm,迪马公司)。KQ100型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);BSZZ4S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。

川续断皂苷VI对照品(中国药品生物制品检定所,批号:111685200401);乙腈为色谱纯;水为屈臣氏蒸馏水;其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1正交试验设计

按处方称取续断、淫羊藿、独一味药材,加水进行煎煮,在煎煮过程中,采用L9(34)表安排正交试验,以续断中川续断皂苷Ⅵ的含量为指标,对提取效果影响较大的加水量、煎煮次数及煎煮时间3个因素进行考察,各因素水平见表1。表1因素水平表

2.2川续断皂苷VI含量测定

2.2.1色谱条件色谱柱为DiamonsilC18柱(5μm,250mm×4.6mm);流动相为乙腈水(体积比30∶70);检测波长为210nm;柱温为25℃;流速为1mL/min;进样量为10μL。

2.2.2对照品溶液的制备精密称取川续断皂苷VI对照品3.09mg,置2mL容量瓶中,用甲醇溶解配制成质量浓度为1.545mg/mL的对照品溶液。

2.2.3供试品液的制备取水提取液适量(相当于续断药材0.75g),置圆底烧瓶中,减压浓缩至干,精密加入甲醇25mL,称定重量,超声提取30min,放冷,用甲醇补足重量,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。

2.2.4标准曲线的制备精密吸取对照品溶液2、4、8、12、16、20μL,依次注入高效液相色谱仪,各重复3次,记录峰面积。以川续断皂苷VI峰面积均值(A)对进样质量浓度(ρ)进行线性回归,得回归方程为A=191595.75ρ97704.96,r=0.9998(n=6)。表明川续断皂苷VI在3.09~30.9μg/mL之间与峰面积具有良好线性关系。

2.2.5样品含量测定精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10μL,注入液相色谱仪,按“2.2.1”项下条件进行测定,测得的川续断皂苷Ⅵ对照品和样品色谱图见图1。

2.2.6精密度试验精密吸取同一对照品溶液10μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件进行测定,连续测定6次,结果RSD值为0.66%(n=6),表明本法精密度良好。

2.2.7重复性试验分别取同一批号样品6份,按“2.2.3”项方法制备溶液,依法测定川续断皂苷Ⅵ的含量,结果测得含量的RSD值为0.92%(n=6),表明本法重复性良好。

2.2.8稳定性试验精密吸取同一供试品溶液10μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件,间隔不同时间进行测定,结果RSD值为0.50%(n=5),表明供试品溶液在4h内测定基本稳定。

2.2.9加样回收率试验取已知含量的样品,分别加入一定量的对照品,置圆底烧瓶中,按“2.2.3”项方法制备供试品溶液并在上述条件下测定,其平均回收率为100.30%,RSD为2.84%(n=6)。

2.3正交实验结果

结果见表2、表3。表2正交试验结果表3方差分析表从表2、表3中可见,因素A、因素C对实验结果有显著影响,因素B对实验结果影响较小。综合正交实验结果及节约生产成本的角度考虑,确定最佳工艺为A3B2C2,即加10倍量水煎煮2次,每次1h。按最佳工艺对3批样品进行验证实验,结果3批样品的平均含量分别为11.57、12.19和12.02mg/粒,可见该工艺稳定可行。

3讨论

3.1有关续断等药材成分提取的研究报道很多,综合文献研究和预试验,采用水煎煮方式进行提取,并以川续断皂苷VI含量作为考察工艺的指标,采用L9(34)正交实验表进行试验,得出三仙壮骨胶囊的水提部位最佳工艺条件。该工艺简便可行,有良好的可操作性。

3.2鉴于川续断皂苷Ⅵ有防止骨质疏松、增强骨密度的作用,与续断的传统功效吻合[5],本文对提取液中川续断皂苷Ⅵ的含量进行了测定,其总量转移率为90.03%。

【参考文献】

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005版一部[M].北京:化学工业出版社,2005:231.

[2]谭洪根,林生,张启伟,等.高效液相色谱法测定续断药材中川续断皂苷Ⅵ的含量[J].中国中药杂志,2006,31(9):726-727.

[3]马新飞,陆兔林,毛春芹,等.HPLC法测定不同续断炮制品中川续断皂苷Ⅵ[J].中草药,2007,38(5):707-708.

[4]王初.发汗与不发汗续断中水溶性浸出物和川续断皂苷VI的比较[J].中草药,2007,38(6):865-866.

[5]王岩,周莉玲,李锐.川续断的研究进展[J].时珍国医国药,2004,4(13):233-234.