含量测定范文10篇

含量测定范文篇1

【关键词】甘草黄酮紫外分光光度法

Abstract:ObjectiveToselecttheappropriatestandardfordeterminationofflavonoidsinGlycyrrhiza.MethodsTocomparethelargestabsorptionwavelengthbywavelengthscanningofultravioletspectrophotometry.ResultsStandardLiquiritinandsamplesprocessedbyalkalihadthelargestabsorptionatthe334nmand334.5nmwavelength,andstandardNaringinatthe419.5nmwavelength.ConclusionTodeterminecontentofflavonoidsinglycyrrhizawithultravioletspectrophotometrybystandardLiquiritinisapracticalmethodwithhigheraccuracy.

Keywords:Glycyrrhiza;Flavonoids;Ultravioletspectrophotometry

甘草中的黄酮类成分包括黄酮类、二氢黄酮类、黄酮醇类、异黄酮类、查尔酮类和双黄酮类［1］化合物，其中以二氢黄酮类和查尔酮类含量较高［2］。二氢黄酮类包括：甘草苷(liquiritin)、甘草苷元(liquiritigenin)、新甘草苷(neoliquiritin)、甘草素（liquiritigenin）等，查尔酮类包括：异甘草苷(isoliquiritin)、异甘草素（isoliquiritigenin）、异甘草苷元(isoliquiritigenin)、新异甘草苷(neoisoliquiritin)等［3～7］。而其中比例较大的成分以甘草苷为主［8］。

甘草总黄酮的测定常用芦丁［9～10］、柚皮苷［11～13］为对照品通过紫外分光光度法进行测定，而《中国药典》中甘草项下没有规范总黄酮成分含量的测定方法［14］，导致甘草总黄酮成分有多种不同的测定方法。本实验研究通过对不同测定方法进行考察，比较不同对照品和样品采用相应方法显色后的最大吸收波长，对3种对照品相应测定结果分析，确定最适宜甘草总黄酮含量测定的对照品和测定方法。

1器材

1.1仪器HITACHIU-2000Spectrophotometer。

1.2样品甘草生药样品由北京中医药大学王文全教授提供和鉴定,全部为甘草GlycyrrhizauralensisFisch（样品按来源依次编号为1.杭锦旗1年生；2.杭锦旗2年生；3.杭锦旗3年生；4.杭锦旗4年生；5.杭锦旗5年生；6.新疆乌苏3年生；7.杭锦旗野生；8.杭锦旗野生横生茎；9.甘肃金塔野生；10.宁夏盐池野生；11.甘肃酒泉野生；除杭锦旗野生横生茎外其余10份样品均为根）。

1.3试剂供含量测定用甘草苷（编号：111610）、柚皮苷（编号：110722）：中国药品生物制品检定所；芦丁对照品由北京中医药大学马长华教授制备；氢氧化钾(AR)、甲醇(AR)、硝酸铝（AR）、亚硝酸钠（AR）、氢氧化钠（AR）。

2方法

2.1对照品溶液的制备精密称定甘草苷、柚皮苷、芦丁标准品适量,用甲醇溶解,分别定容于25，10，10ml容量瓶中,制得浓度为0.07504g·L-1的甘草苷对照品溶液、0.968g·L-1的柚皮苷对照品溶液和1.003g·L-1的芦丁对照品溶液。

2.2样品的提取取甘草粉末适量,精密称定,加甲醇50ml,称重,（250W,20kHz）超声提取80min,称重,补足损失重量,过滤,收集续滤液,即得。

2.3测定方法

2.3.1甘草苷为对照品的测定方法精确吸取提取液0.5ml,加入1ml甲醇,其中一份加入10%KOH溶液0.5ml显色,室温放置5min,用甲醇稀释至10ml，以相应溶剂为空白，在λ334nm处测定吸收度。

2.3.2柚皮苷为对照品的测定方法供试液制备同“2.3.1”项，在波长419nm处测定吸收度。

2.3.3芦丁为对照品的测定方法精确吸取提取液0.5ml，加3ml蒸馏水，5%亚硝酸钠溶液0.5ml放置6min，加10%硝酸铝溶液0.5ml，混匀后放置6min，加5%氢氧化钠2.5ml混匀，放置15min后蒸馏水定容至10ml。以相应溶剂为空白，在波长510nm处测定吸收度。

2.4方法学考察

2.4.1以甘草苷为对照品方法学考察甘草苷方法标准曲线的测定：精确吸取甘草苷对照品溶液0.25,0.5,0.75,1,1.25,1.5ml置6个10ml容量瓶中,按“2.3.1”项下操作。以吸收度A为纵坐标,对照品的浓度C(mg/ml)为横坐标,得线性回归方程:y=66.753x-0.0178,r=0.9999,线性范围为18.76～112.56μg。显色30min内稳定。

甘草苷方法重复性实验：取6份新疆乌苏3年生人工栽培甘草粉末按“2.2”项下制备，按“2.3.1”项下方法测定。黄酮平均含量为3.33%，RSD=3.23%,（n=5）。

甘草苷方法加样回收率实验：取5份新疆乌苏3年生人工栽培甘草粉末按“2.2”项下制备后分别精密量取已知总黄酮含量的提取液0.5ml，加入一定量甘草苷对照品溶液，λ334nm处测定吸收度。计算回收率,结果平均为98.7%,RSD=2.0%,（n=5）。

2.4.2另外两种测定方法的方法

学考察柚皮苷标准曲线以吸收度A为纵坐标,对照品的质量m（mg）为横坐标,得线性回归方程y=0.0048x-0.0157，r=0.9993，线性范围48.4～290.4mg，重现性RSD=1.38%（n=5），加样回收率98.73%RSD=1.35%（n=5）；显色30min内稳定。芦丁标准曲线：以吸收度A为纵坐标,对照品的质量m（mg）为横坐标,得线性回归方程y=1.3163x-0.0063,r=0.9987，线性范围0.1003～0.6018mg，重现性RSD=0.97%（n=5），加样回收率101.35%RSD=3.57%（n=5）。显色30min内稳定。

3结果和讨论

3.1不同对照品吸收峰比较分析通过实验测得甘草提取液样品经KOH显色后的最大吸收波长在334.4nm（图1），甘草苷对照品KOH显色后于200～500nm波长处扫描,最大吸收波长在334nm左右（图2），二者相符。

柚皮苷经过KOH显色后于200～500nm波长处扫描，最大吸收283.5nm红移到419.5nm（见图3），与样品显色后最大吸收波长不一致。

样品通过Al2(NO3)3-NaOH-NaNO2方法显色后最大吸收波长在363nm处（见图4），芦丁对照品通过Al2（NO3）3-NaOH-NaNO2方法显色后最大吸收波长在510nm左右，两者相距甚远。

3.2不同对照品方法实测结果比较分析对11份样品依“2.2”项下制备，分别依据甘草苷、柚皮苷和芦丁的显色方法在不同波长处进行测定，结果见表1。表13种方法总黄酮含量测定结果（略）

通过使用SPSS10.0对表3中数据进行多因素方差分析，3种方法测定结果方差分析F值17.845，P≈0.000说明3种方法测定结果有差异，两两比较结果见表2。表2不同方法测定结果间黄酮含量均数的两两比较（略）

按α=0.05水准，柚皮苷方法和芦丁方法测定的黄酮含量均数比较无统计学差异，而甘草苷方法分别与其他两种方法测定结果差异显著。柚皮苷和芦丁方法测定结果分别较甘草苷方法测定结果低29.6%和28.1%。

3.3超声提取时间考察在确定对照品等方法的基础上我们对样品提取时间进行了考察，分别对超声50，60，70，80，90，100min的样品进行测定，发现黄酮百分含量与时间关系如图6，随着时间的增加，黄酮百分含量有所提高，但达到80min后，升高趋势明显变缓，考虑到实验效率和成本，我们采用80min作为提取时间。

4讨论

在对照品的选择上,由于芦丁属于黄酮类化合物（结构为5、7、3''''、4''''-四羟基黄酮-3-芸香糖苷）,甘草中黄酮成分主要为二氢黄酮,其次为查尔酮,芦丁在结构上差异较大,因此不适合用于甘草总黄酮成分测定。柚皮苷（结构为5、7、4''''-三羟基二氢黄酮）虽然是二氢黄酮类化合物，但同甘草苷(结构为7-羟基二氢黄酮-4''''-葡萄糖苷)相比，除都具有7位羟基外，还有5位的游离羟基，且4''''位的羟基是游离的，未结合成苷，结构上的差异，导致与碱反应后最大吸收波长红移不一致，我们采用黄酮中含量最多的甘草苷为对照品，利用二氢黄酮与碱反应后生成查尔酮，由于带I吸收较弱，不灵敏，因此用带II最大吸收红移到330nm左右进行黄酮成分的含量测定。

在选定以甘草苷为对照品的基础上，我们进一步进行了显色方法的考察，尝试盐酸镁粉法进行测定，考察了镁粉用量、加热时间和温度对显色的影响，发现同样条件显色后甘草苷标准品和样品均在560nm左右有一吸收峰，然而样品在467nm处一吸收峰对其造成干扰（见图5）。

黄酮作为重要的药效组分在甘草中有着丰富的种类和较高的含量，如果不采用适宜的测定方法会使结果偏离真实值，从而影响我们对甘草质量客观真实的评价。

【参考文献】

［1］HongBAI,WeiLI,bKazuoKOIKE,etal.ANovelBiflavonoidfromRootsofGlycyrrhizauralensisCultivatedinChina［J］.ChemicalandPharmaceuticalBulletin,2003，51(9):1095.

［2］张雪辉.甘草中总黄酮的含量测定［J］.中国中药杂志,2001,26(11):746.

［3］朱绪民,邸迎彤,彭树林,等.乌拉尔甘草中的化学成分［J］.中草药，2003,34(3):199.

［4］沈凤嘉,胡金峰,虞亚川,等.乌拉尔甘草化学成分的研究［J］.高等学校化学学报，1995,16(4):572.

［5］高鸿霞,邵世和,王国庆.中药甘草研究进展［J］.井冈山医专学报，2004,11(5):8.

［6］TaroNomura,ToshioFukai,ToshiyukiAkiyama.Chemistryofphenoliccompoundsoflicorice(Glycyrrhizaspecies)andtheirestrogenicandcytotoxicactivities［J］.PureandAppliedChemistry,2002,74(7):1199.

［7］IsaoKitagawa.Licoriceroot.AnaturalsweetenerandanimportantingredientinChinesemedicine［J］.PureandAppliedChemistry,2002,74(7):1189.

［8］何三民,石森林.HPLC法测定甘草中甘草素、异甘草素、甘草苷的含量［J］.中草药，2003,34(7):618.

［9］孙萍.甘草总黄酮的微波提取及含量测定［J］.时珍国医国药,2003,14(5):266.

［10］吕欣.紫外分光光度法测定甘草黄酮含量［J］.植物研究，2003,23(2):192.

［11］汪河滨.甘草中黄酮的超声提取及含量测定［J］.时珍国医国药,2004,15(12):815.

［12］封士兰.甘草黄酮的提取分离和含量测定［J］.兰州医学院学报，1998，24(4):20.

含量测定范文篇2

【关键词】生脉；含量测定；研究进展

“生脉散”之方名首载于金元时期张元素所著《医学启源》(1186年)，定型于《内外伤辨惑论》，完善于《医方考》［1，2］。《医学启源》中记载，该方由人参、麦冬、北五味子组成。主治热伤元气、阴液亏耗的气阴两虚症。在现代科学技术的推动下，生脉散也研制为一些现代新剂型，其组方也发生了改变。例如，由红参替代人参，和麦冬、五味子组成生脉注射液［3］；去掉五味子，仅以人参和麦冬组成的参麦注射液等［4］。各种剂型的涌现对生脉制剂的质量有了更高的要求，而生脉饮在药典中并无含量测定项［3，5］。因此笔者对近年的相关文献进行了追踪、整理和分类，希望有助于生脉制剂的研究与质量标准控制，特别是含量测定的提高和完善。现将生脉制剂的含量测定研究情况综述如下。

1高效液相色谱法

1.1人参皂苷类李杰等［6］采用HPLC法测定了生脉饮中人参皂苷Rb1、Rb2、Re的含量。方法：采用LC-4A高效液相色谱仪，YWG-C18(5μm，4.6mm×250mm)色谱柱，流动相：甲醇-水(72∶28)，流速0.8ml·min-1，柱温47℃。

1.2人参二醇和人参三醇李章万等［7］考虑人参皂苷及其水解产物均无特征紫外吸收，常规方法在灵敏度或分离度等方面都不尽人意，采用3，5-二硝基苯甲酰氯为衍生化剂，反相HPLC法对生脉注射液中人参二醇和人参三醇含量测定方法进行了研究。用3，5-二硝基苯甲酰氯(3，5-DNB)为衍生化剂、高效液相色谱法测定了红参和生脉注射液中人参二醇及人参三醇的含量。以C18硅烷键合相为填料，甲醇-水(95∶5)为流动相，检测波长230nm，进行反相高效液相色谱法测定。

1.3五味子醇甲欧金梅，韦向红等［8,9］采用高效液相色谱法测定生脉饮中五味子醇甲的含量，色谱柱为十八烷基键和硅胶柱（5μm，4.6mm×250mm），流动相为甲醇-水(13∶7)，检测波长250nm，柱温30℃（或室温），流速1.0（或0.6）ml·min-1。

刘钰等［10］建立了高效液相色谱法测定生脉颗粒中五味子醇甲含量的方法：选用LC-10AT高效液相色谱仪，HypersilbdsC18（5μm，4.6mm×250mm）色谱柱，流动相为甲醇-水(62∶38)，检测波长为254nm。

陈平等［11］建立了屏风生脉胶囊中五味子醇甲的含量测定方法。色谱柱InertsilODS-3（5μm，4.6mm×150mm），流动相为乙腈-水(45∶55)，检测波长250nm，柱温25℃，流速1.0ml·min-1。

吴晓凤等［12］测定了生脉饮中五味子醇甲的含量。方法：样品减压蒸干，用乙酸乙酯超声提取，提取液过滤，蒸干，残渣用甲醇溶解后，经高效液相色谱仪测定；PHENOMENEXC18色谱柱(5μm，4.6mm×250mm)，流动相乙腈-甲醇-水(15∶15∶10)，柱温30℃，流速1.0ml·min-1，检测波长254nm。

1.4五味子甲素和五味子乙素杨滋渊等［13］采用HPLC法测定了生脉胶囊中五味子甲素的含量。色谱柱为PhenomenexC18柱（5μm，4.6mm×250mm），流动相为甲醇-水(80∶20)，检测波长252nm。

杨琼芳等［14］采用HPLC法测定了生脉袋泡茶中五味子甲素的含量。色谱柱为ShimPack-ODSC18柱（5μm，4.6mm×150mm），流动相为甲醇-水(76∶24)，检测波长254nm。柱温25℃，流速1.0ml·min-1。

张新奎等［15］采用HPLC法测定了生脉饮中五味子乙素的含量。色谱柱为十八烷基键和硅胶柱（5μm，4.6mm×250mm），流动相为甲醇-水(13∶7)，检测波长254nm，柱温室温，流速1.0ml·min-1。

1.5综合类夏晶等［16］

建立了同时测定生脉注射液(红参、麦冬、五味子)中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和五味子醇甲4种成分含量的方法。方法：Waters510高效液相色谱仪，色谱柱WaterssymmetryshieldTMRP18(5μm，4.6mm×250mm)，乙腈-水梯度洗脱，流速1.0ml·min-1，检测波长为203nm。

胡晓斌等［17］采用HPLC测定生脉胶囊中五味子甲素、乙素的含量,以控制成品的质量。方法：采用Shim-packODS色谱柱，柱温25℃，甲醇-水(78∶28)为流动相，流速1.0ml·min-1，检测波长254nm；并建立了生脉胶囊中人参皂苷Rg1、Re的HPLC含量测定方法：样品超声提取，采用LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测器，Shim-packODS色谱柱，柱温40℃，乙腈-0.05%磷酸（22∶78）为流动相，流速1.2ml·min-1，检测波长203nm［18］。

何海冰等［19］采用ODSC18柱(5μm，4.6mm×250mm)，流动相为乙腈-水（88∶12），流速1.0ml·min-1，检测波长204nm，柱温30℃，对生脉粉针剂中的薯蓣皂苷元进行含量测定。同时对五味子醇甲的HPLC含量测定方法进行了研究［20］。采用HiQSilC18柱（5μm，4.6mm×250mm），流动相为乙腈-水（50∶50），流速1.0ml·min-1，检测波长254nm，柱温25℃。

2分光光度法

何海冰等［20］采用紫外分光光度法对生脉粉针剂中总木脂素含量进行了测定。检测波长254nm。

张梅等［21］将样品经大孔树脂净化、显色剂的选择性显色后，使用UV-210A型紫外可见分光光度计，采用正交函数分光光度法使得麦冬和五味子对人参总皂苷测定的影响基本消除，测定了生脉注射液中人参总皂苷含量。

3薄层扫描法

彭勃等［22］认为人参为生脉饮口服液中君药，故应以人参为定量对象，但因复方制剂生脉饮在制成水剂时其内部成分发生了变化，人参皂苷Rb1、Rb2、Rf、Rd、Re均已消失，而Rg1、Rh1的含量比单昧人参中明显增高，在生脉饮口服液中Rg1、Rg2、Rh1、Rf为人参皂苷中的主要皂苷，所以该实验采用薄层扫描法测定生脉饮口服液中人参苷Rg2的含量，可以有效地控制产品质量。方法：CS-910型薄层扫描仪，薄层板为0.3％CMC-Na的硅胶G板(20cm×20cm×0.4mm)105℃活化30min，展开剂为氯仿-甲醇-水(65∶3∶10)10℃以下放置和下层溶液为好，人参皂苷Rg2为对照品，λs=525nm，λR=700nm。

4小结

综上所述，生脉制剂的含量测定主要采用高效液相色谱法，指标包括人参（红参或党参）中的皂苷类成分；五味子中的五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素；麦冬中的薯蓣皂苷元等，均取得较好效果并能有效控制制剂质量，而对大类成分研究较少。鉴于此，笔者认为《中国药典》生脉饮制剂可以考虑增加含量测定项以更有效地控制制剂质量。目前，国内外正积极开发研制其复合物、新制剂，通过提高和完善质量控制体系，特别是含量测定方法的改进，对增强疗效，扩大应用范围具有重要意义。

【参考文献】

［1］孙云.生脉散源流、衍化及应用［J］.山东中医学院学报，1996，20(5)：320.

［2］李东垣.内外伤辨惑论［M］.北京：人民卫生出版社，1959：16.

［3］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：424.

［4］张群智.古方生脉散现代应用探讨［J］.中成药，2001，23(4)：286.

［5］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：436.

［6］李杰，徐兴，韩振明.HPLC法测定生脉饮中的人参皂苷［J］.山东医药工业，2002，21(3)：19.

［7］李章万,徐秀荣,冯春琼,等.高效液相色谱衍生化法测定红参及生脉注射液中人参二醇和人参三醇的含量［J］.华西药学杂志，1999，14(4)：271.

［8］欧金梅，罗捷华.HPLC测定生脉饮中五味子醇甲的含量［J］.安徽中医学院学报，2006，25(1)：33.

［9］韦向红，唐敏玲.HPLC法测定生脉饮(党参方)中五味子醇甲的含量［J］.广西中医药，2005，28(4)：57.

［10］刘钰，丁丽萍，李德公.高效液相色谱法测定生脉颗粒中五味子醇甲的含量［J］.药品检测，2003，12(8)：39.

［11］陈平，蔡雄辉，张继良，等.高效液相色谱法测定屏风生脉胶囊中五味子醇甲的含量［J］.中国医院药学杂志，2004，24(8)：478.

［12］吴晓凤，陈虹，赵志茹.HPLC法测定生脉饮中五味子醇甲的含量［J］.中国中药杂志，2003，28(1):39.

含量测定范文篇3

海带采自青岛沙子口，经鉴定为Laminariajaponica；95％乙醇、浓硫酸、六水合氯化镁、氢氧化钠、三氟乙酸、盐酸羟胺等均为国产分析纯；5%苯酚（现配）；L－褐藻糖（Sigma公司）；D-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-木糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-果糖、葡萄糖、蔗糖等均购自于上海试剂二厂；肌醇（无锡默克尔精细化学品有限公司）。高压锅（山东新华医疗器械股份有限公司）；FA1004电子天平（上海天平仪器厂）；722型分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）；瑞士BüCHIR－114型旋转蒸发仪；东京理化EYELAFD－5N型真空冷冻干燥机；电热恒温水浴锅（天津泰斯特仪器有限公司）；TDL－40B离心机（上海飞鸽系列离心机厂）；HP5890Ⅱ气相色谱仪（美国惠普公司），氢火焰离子化检测器（FID）。

【摘要】目的探索正确测定海带多糖含量的方法。方法采用苯酚-硫酸法，按照不同糖溶液配制标准液在485nm处测定多糖含量。结果按照多糖中褐藻糖与半乳糖比例为标准测得多糖含量为60.42%，介于两种组成单糖测定结果之间。结论按照多糖中单糖组成比例为标准测定多糖含量具有可比性，可用于海带多糖含量测定。

【关键词】海带多糖苯酚硫酸法

Abstract：ObjectiveTodeterminethecontentofpolysaccharidesinLaminariajaponica.MethodsWeusedthemethodofvitriliccolorimetry,anddetectionwavelengthwas485nm.ResultsThecontentofpolysaccharideswiththemethodwhichwasaccordingtothecomposingsugarswas60.42%.ConclusionThismethodcanbeusedtodeterminethecontentofpolysaccharidesinLaminariajaponica.

Keywords：Laminariajaponica;Polysaccharides;Phenol-vitrioliccolorimetry

海带Laminariajaponica，又名纶布、昆布、江白菜，是多年生大型食用藻类。藻体为长条扁平叶状体，褐绿色，有两条纵沟贯穿于叶片中部，形成中部带，一般长1.5～3m，宽15～25cm，最长者可达6m，宽可达50cm。海带生于海边低潮线下2m深度的岩石上，人工养殖生长在绳索或竹材上，是我国、日本、朝鲜等东方人喜欢食用的经济藻类。我国海带养殖已发展成大规模产业，从辽宁一直到广东沿海，产量约占世界海藻的50％，居世界第1位。海带成本低廉，功能众多，在有益物质提取和食品加工中作用明显，市场潜力很大［1］。

海带富含多种功能性成分，如碘、甘露醇、维生素A、维生素B、维生素C、牛磺酸、海带多糖等，其食用和药用价值很早即为世人所关注［2］。研究表明，海带对外界恶劣环境所表现出来的抗逆耐受能力与它们所含的海带多糖有直接关系，海带多糖还具有稳定细胞膜和蛋白质结构的功能。海带多糖在医药、食品、化妆品、农业等方面也具有广阔的应用前景［3］。我国在对海带多糖的研究中所用的实验材料多是粗制品，缺乏纯化和组成鉴定过程，对海带的利用也局限于提取褐藻酸、甘露醇等。许多文献中，测定海带多糖时用葡萄糖或其组成的主要单褐藻糖作标准溶液，造成结果与真实值相差太大。本文采用水提醇沉的方法对海带多糖的进行提取、纯化，并采用按照组成样品的单糖比例配制标准液的测定方法对其多糖含量进行测定，对几种测定方法进行比较和准确性评价。

1材料与仪器

海带采自青岛沙子口，经鉴定为Laminariajaponica；95％乙醇、浓硫酸、六水合氯化镁、氢氧化钠、三氟乙酸、盐酸羟胺等均为国产分析纯；5%苯酚（现配）；L－褐藻糖（Sigma公司）；D-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-木糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-果糖、葡萄糖、蔗糖等均购自于上海试剂二厂；肌醇（无锡默克尔精细化学品有限公司）。高压锅（山东新华医疗器械股份有限公司）；FA1004电子天平（上海天平仪器厂）；722型分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）；瑞士BüCHIR－114型旋转蒸发仪；东京理化EYELAFD－5N型真空冷冻干燥机；电热恒温水浴锅（天津泰斯特仪器有限公司）；TDL－40B离心机（上海飞鸽系列离心机厂）；HP5890Ⅱ气相色谱仪（美国惠普公司），氢火焰离子化检测器（FID）。

2方法与结果

2.1海带多糖样品的制备

采用水提醇沉法提取纯化海带多糖样品（自制）。

2.2样品组成单糖的确定

2.2.1气相色谱条件

SGEAC2252.5mm×30m弹性石英毛细管柱；柱温215℃；进样口温度250℃；检测器温度250℃；分流比100∶1；高纯氮气为载气，流速1ml/min。

2.2.2标准糖样衍生物的制备

分别称取4～6mg的L-褐藻糖、D-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-木糖、D-甘露糖、葡萄糖、L-鼠李糖以及1mg的肌醇置1ml的离心管中，加入10mg盐酸羟胺和0.5ml的吡啶，在90℃水浴中加热反应30min，并不时振荡。取出后冷却至室温，加入0.8ml的乙酸酐，于90℃水浴中继续进行乙酰化反应30min，并不时振荡，冷却后即得适于气相色谱分析的标准单糖衍生物［4］。

2.2.3样品水解

称取多糖样品各1份，分别置于10ml水解管中，加10ml2mol/L的三氟乙酸(TFA)溶液溶解，封管，100℃水浴中水解4h,减压浓缩至干。

2.2.4组成样品单糖的确定

根据色谱图，确定组成样品的单糖为:鼠李糖、褐藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖，但褐藻糖和半乳糖含量远多于其它几种单糖，两者含量比例为1.83∶1。结果见图1～2。

2.3多糖含量测定

2.3.1标准曲线的绘制

准确称取葡萄糖、L-褐藻糖和D-半乳糖各50mg，分别溶于容量瓶中配成100ml溶液。按褐藻糖与半乳糖比例1.83:1，从两个标准溶液中各取64.66ml和35.34ml形成混合溶液为标准液。

分别精密吸取葡萄糖标准溶液、褐藻糖标准溶液、半乳糖标准液和混合标准溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6ml置于具塞试管中，加水使每管总体积为2.0ml，然后分别加入5％苯酚液1.0ml，混合均匀后快速加入95％浓硫酸5ml,室温放置30min，在485nm下测定吸光度。以蒸馏水试管为空白对照，绘制吸光度与浓度标准曲线。其相应标准曲线见图3。

2.3.2样品含量测定

准确称取干燥至恒重的样品100mg，置于100ml容量瓶中，加水至刻度。吸取样品溶液0.15ml置于具塞试管中，然后按照标准曲线制作的步骤，测得样品吸光度，根据上述4种标准曲线计算糖含量。经计算，样品含量分别为30.17％，72.95％，43.51％，60.42％。

2.3.3方法正确性验证

已知蔗糖组成的单糖比例为葡萄糖:果糖＝1∶1,从已经配好的葡萄糖和果糖两个标准液中各取相同适量配成混合标准液。按照上述比色条件分别以葡萄糖、果糖和混合标准液做标准曲线测定多糖含量，得到其含量分别为114.37％，83.64％和100.65％。由此证明按照组成多糖的单糖比例作标准液测定含量具有一定的准确性。

3讨论

由图3可知，同一样品用不同的标准溶液所作的标准曲线是不重合的，由此测得含量值是不同的。从图中标准曲线看出，混合液的标准曲线的斜率位于组成两种单糖的斜率之间。对杂多糖而言，测定值总是与真实值有差别，但对于未知确切组成比例的样品，可用主要组成单糖为标准；若知道其确切比例，就可以用混合液作标准。实际测定时，根据所选取的标准溶液做的标准曲线的斜率偏差，选取适当的方法作为测定方法可得到近似结果。

海带多糖为杂多糖，由7种以上的单糖组成，结构复杂。本文通过采用气相色谱测定其组成单糖的确切比例。按照其主要单糖的比例作标准溶液测定其多糖含量，可得到较准确的结果。

海带多糖初步药理研究表明，其具有免疫调节、降血脂、抗凝血等活性。样品中的多糖含量较高，可能是此活性较优的原因之一。海带多糖的结构组成和生理活性的关系有待于进一步研究。

【参考文献】

［1］刘树立，王春艳.我国海带的加工利用和开发［J］.食品与药品，2007，9(5)：34.

［2］李德远．海带的保健功效及海带生理活性多糖研究现状［J］.食品科学，2002,7：151.

［3］周裔彬，汪东风.酸化法提取海带多糖及其纯化的研究［J］.南京农业大学学报，2006，29(3)：103.

［4］张惟杰．糖复合物生化研究技术［J］.杭州：浙江大学出版社，1997：38.

含量测定范文篇4

［关键词］反相高效液相色谱法；妇血康胶囊；原儿茶酸；含量测定

ContentdeterminationofprotocatechuicacidinFuxuekangJiaonang

YANGYin-zhi，WANGShang-shu.HunanSanjinPharmaceuticalCo.，TDL，Changde415001，China

［Abstract］ObjectiveTostudyaRP-HPLCmethodsthatdeterminedtheprotocatechuicacidcontentinFuxuekangJiaonang.MethodsFuxuekangJiaonangwasseparatedcompletelyonanC18column，usingamixtureofmethanol，phosphateacidandwater（13∶87∶0.2）asmobilephase，withUVdetectionat256nm.ResultsProtocatechuicacidhasbetterlinearcorrelationbetween0.103μgand0.7725μg，theresultsalsohaveshowntherecoveryratewas97.76%，RSD1.01%.ConclusionThemethodsisverystableandaccurate，andhasgoodreappearance.ItcanbeusedforqualitycontrolofFuxuekangJiaonang.

［Keywords］RP-HPLC;protocatechuicacid;FuxuekangJiaonang;contentdetermination

妇血康胶囊由妇血康颗粒改剂型而来，是由滇桂艾纳香经提取、精制而制成的中药制剂。具有活血化瘀，止血调经的功效。用于瘀血阻滞所致的月经量多，经期延长。为了更全面地控制本产品质量，本文建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定妇血康胶囊中原儿茶酸的含量，控制妇血康胶囊的质量，以确保临床疗效。

1仪器与试剂

1.1仪器日本岛津LC-10A高效液相色谱仪，SPD-10AV紫外检测器，CT-100恒温箱，LC2002数据处理系统，CSB6L-180D超声波清洗器，电子天平（AEG-45SM，1/10万）。

1.2试剂甲醇为色谱醇，磷酸为分析纯，水为重蒸馏水。原儿茶酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号809-200102）。妇血康胶囊（产品开发部提供）。

2方法与结果

2.1色谱条件（1）色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱Diamonsil（TM）C18（250×4.6mm，5μm）（迪马公司）。（2）流动相为甲醇∶水∶磷酸（13∶87∶0.2）。（3）检测波长：256nm。（4）流速：1.0ml/min。（5）柱温：40℃。

2.2对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥12h的原儿茶酸对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.0412mg、0.0515mg的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备取妇血康胶囊10粒，倾出内容物，精密称定，研细，取细粉约1.8g，精密称定，加水20ml，超声波提取20min左右使溶解，放冷，滤过，滤液加0.5ml盐酸，用乙醚振摇提取4次，每次30ml，合并乙醚液，蒸干，残渣用甲醇溶液溶解并转移至10ml量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4阴性对照溶液的制备按处方比例称取糊精适量，依照妇血康胶囊的制备工艺和供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

2.5线性关系的考察分别精密吸取原儿茶酸对照品溶液（0.0515mg/ml）2μl、2.5μl、5μl、10μl、15μl，注入液相色谱仪，测定，以原儿茶酸的进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为X=6E+06斜+11494（r=0.9998）。结果表明原儿茶酸在0.103~0.7725μg范围内具有良好的线性关系。

2.6精密度实验精密吸取原儿茶酸对照品溶液（0.0412mg/ml）10μl，重复进样5次，峰面积积分值分别为2539158、2507078、2501244、2530911、2472997，RSD=1.04%。表明本方法精密度良好。

2.7重复性实验取同一批妇血康胶囊（批号：050804），倾出内容物，研细，取细粉5份，每份约1.8g，精密称定，按2.3项下的方法制备样品，进行含量测定。结果分别为0.0945mg/粒、0.0950mg/粒、0.0959mg/粒、0.0927mg/粒、0.0918mg/粒，平均为0.0940mg/粒，RSD为1.79%。表明本方法具有较好的重复性。

2.8稳定性实验取重复性实验项下实验号5的供试品溶液，每2h进样1次，每次10μl，连续进样6次，结果表明在10h内峰面积积分值基本稳定，RSD=0.91%。

2.9回收率实验贮备溶液：精密称取原儿茶酸对照品4.12mg，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1ml中含原儿茶酸0.0412mg的溶液。取已知含量（批号：050804、含量为0.0940mg/粒）的妇血康胶囊，倾出内容物，研细，取细粉约0.9g（6份），精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入贮备溶液3.6ml、4.5ml、5.5ml，置水浴上挥干，按供试品溶液制备方法进行制备并测定含量，计算回收率，结果平均回收率为97.76%，RSD为1.01%。见表1。表1回收率实验结果表2含量测定结果

2.10样品测定按拟定的含量测定方法测定10批妇血康胶囊中原儿茶酸的含量，结果见表2。

含量测定范文篇5

【关键词】银杏叶萜类内酯；含量测定；HPLC-ELSD；外标四点法

StudyonreliabilityofESMoffourpointstodeterminetheassayforGinkgoTerpeneLactones

【Abstract】ObjectiveStudyonthereliabilityofESMoffourpoints.MethodsHPLCsystemconsistingofanAlltechC18column(4.6mm×250mm，5μm)，andthemobilephasewasn-Propylalchol，tetrahydrofuranandwater(1:15:84)atflowrateof1.0ml/min.Thedetectortemperaturewas108.0℃andthedrygasflowratewas3.10L/min.ResultsTheESMoffourpointshasbeenestablished.ConclusionTheESMoffourpointscanbeusedondeterminetheassayforGinkgoTerpeneLactones.

【Keywords】ginkgoterpenelactones；assay；HPLC-ELSD；ESMoffourpoints

有关银杏叶中萜类内酯的含量测定方法的报道较多，目前银杏叶制剂的萜类内酯含量测定方法采用的多为HPLC法［1～3］。我们亦采用2005版中国药典收录的HPLC法［4］，蒸发光散射检测器进行测定。HPLC-ELSD使用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏叶内酯A、银杏叶内酯B和银杏叶内酯C的含量，四种银杏内酯的含量之和为萜类内酯含量。我们在实际工作中使用外标两点法时，直接从数值上难以判断对照溶液的配制是否准确，及其外标两点法对应的工作曲线(n＝2)是否可靠。因此，同时配制两份对照溶液各自分别测定5μl、10μl两点，将四个浓度和相应峰面积一条标准曲线（n＝4），得出回归方程及相关系数r，通过统计学方法考察曲线和回归方程是否成立［5］。

1仪器与试药

1.1仪器高效液相色谱仪：SHIMADZU-10A；蒸发光散射检测器ALLTECHELSD2000。

1.2试药白果内酯，银杏叶内酯B、银杏叶内酯C对照品购于中国药品生物制品检定所；银杏叶内酯A对照品购于SIGMA。甲醇为色谱纯；水为自制超纯水；其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适应性试验色谱柱：ALLTECHC18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：正丙醇-四氢呋喃-水(1：15：84)；流速1.0ml/min；ELSD参数：漂移管温度108.0℃；载气(压缩空气)流速3.10L/min；柱温35℃；进样量5、15μl。理论塔板数按白果内酯峰计算应不低于2500，相邻峰的分离度应＞1.5。

2.2对照品溶液的制备分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的白果内酯、银杏叶内酯A、银杏叶内酯B和银杏叶内酯C对照品适量，置同一10ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，混匀，即得。

2.2.1对照品溶液一白果内酯22.73mg、银杏内酯A13.42mg、银杏内酯B11.13mg和银杏内酯C9.05mg。

2.2.2对照品溶液二白果内酯14.71mg、银杏内酯A11.34mg、银杏内酯B12.24mg和银杏内酯C18.99mg。

以对照品浓度的自然对数InC(x)为横坐标，峰面积的自然对数InA(y)为纵坐标作图，见图2～5。

图中四点有成一条直线的趋势，在直线方程y＝ax+b中，通过统计计算按公式1、2、3分别求出两个常数a，b及直线的相关系数r，见表2。

2.3外标四点法直线回归方程的确定分别精密吸取对照品溶液一和二5μl、15μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图。结果：对照溶液中白果内酯(tR＝8.375)、银杏叶内酯A(tR＝9.811)、银杏叶内酯B(tR=12.040)和银杏叶内酯C(tR＝7.194)，相邻组分分离效果良好(见图1)。浓度与峰面积的数据及处理见表1。

(出峰顺序为银杏内酯C，白果内酯，银杏内酯A，银杏内酯B)

1

2.4直线回归方程的统计学检验

2.4.1相关系数检验法相关系数表示两变量间关系的密切程度。使用相关系数检验法来进行相关系数的显著性测验。见表2。

检验rn＝4，显著性水平α为0.01时，查相关系数临界值表得r0.01，4＝0.990，表2中r＞r0.01，4，说明确立的回归方程是有意义的。

2.4.2t检验法进行相关系数r的显著性测验t检验法进行相关系数的显著性测验，公式4如下：

t＞t(n-2)，0.01时，x(InC)与y(InA)间的相关关系有非常显著意义。查表得t（2）0．01＝9．93。表2中t均＞t(2)0.01，所以认为x(InC)与y(InA)之间存在线性相关关系。外标四点对数方程法的直线可确立。

2.4.3外标四点法的重复性考察取对照一与对照二，按照标准曲线的制备进行六次实验，分别得到六组标准曲线及相关系数r，见表3。

3结论

实验数据中外标四点法对应的标准曲线相关系数均大于r0.01，4＝0.990，线性相关且回归方程是有意义的。在实验得到的回归方程当相关系数＞0.990时可用计算内酯的含量，该方法增加了标准曲线的可靠性，可有效控制制剂的质量。

【参考文献】

1MarkBlumenthal.GermangovernmentlimitsGinkgolivlactonelevelsinginkgoleaf.HerralGram，1997，(41):29.

2ZhangL，ChenXP，DongXP，etal.DeterminationofGinkgolactoneinGinkgocapsulesbyHPLC(HPLC法测定银杏叶胶囊的含量).JiangsuPharmacyandClinicalResearch(江苏药学与临床研究)，2004，12(1)：29-32.

3TangJW.DeterminationofGinkgolactoneinKangmailingcapsulesbyHPLC(HPLC法测定康脉灵胶囊中银杏萜内酯的含量).TianjinPharmacy(天津药学)，2005，17(1)：11-13.

含量测定范文篇6

【关键词】溪黄草；多糖；含量测定；羟自由基；抑菌作用

Abstract：ObjectiveTostudythecontentofpolysaccharidefromRabdosiaserra(Maxim.)Haraanditseffectonhydroxylfreeradicalandantibacteriostaticeffect.MethodsPolysaccharidewasextractedfromRabdosiaserra(Maxim.)Hara,anditscontentwasmeasuredbywayofanthronesulphuricacid.ItsinhibitoryeffectonhydroxylfreeradicalwasstudiedbyFentonreactionsystemasamodel.Itsantibacteriostaticeffectwasalsostudied.ResultsTheresearchshowedthatpolysaccharidecontentofRabdosiaserra(Maxim.)Harareached4.18%.Ithadinhibitoryeffectonhydroxylfreeradical，staphylococcusaureusandB.subtili.ConclusionThemethodofmeasuringpolysaccharidecontentissimpleandreliable.Thepolysaccharidehassomeactivities.

Keywords：Rabdosiaserra(Maxim.)Hara；Polysaccharide；Contentdetermination;Hydroxylfreeradical；Antibacteriostaticeffect

溪黄草Rabdosiaserra(Maxim.)Hara为唇形科香茶菜属植物，是一种多年生小草本。具有清热袪湿、凉血散淤之功效，民间用于治疗急性肝炎、急性胆囊炎、跌打淤肿等症［1］。多糖是一类免疫活性物质，具有抗菌、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老等作用［2～5］。目前对溪黄草多糖的研究未见报道。本文建立石油醚去脂80%乙醇去杂热水提取氯仿、正丁醇去蛋白质活性炭去色素乙醇沉淀的提取工艺，从溪黄草中提取多糖，测得溪黄草多糖对葡萄糖的换算因子，用蒽酮硫酸比色法测定并计算出溪黄草多糖含量，根据实验条件研究了其对羟自由基的清除作用和体外抑菌作用，期望为肇庆山区中药材的综合开发利用提供一些参考。

1器材

1.1仪器DJ10A倾倒式粉碎机、A2004N和FA2004N电子天平、RE52AA旋转式蒸发器、HH-4型数显恒温水浴锅、低温冰柜、脂肪抽出装置、电热恒温真空干燥箱、752分光光度计、UVProbe2550型紫外可见光光度计、电热手提压力蒸气消毒器、水式热恒温培养箱。

1.2材料溪黄草购于肇庆中药材市场；大肠杆菌（Escherichiacoil）、枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）、金黄色葡萄球菌（Stapphylocacusaureus）、黑曲霉（Aspergillusniger）、酵母菌(Yeastfungus)均由肇庆学院生物学系微生物室提供。（细菌于牛肉膏蛋白胨培养基上活化（37℃，24h）；霉菌于查氏培养基上活化（28℃，48h）；酵母菌于无菌水中活化（28℃，4h）。

1.3试剂蒽酮、浓硫酸、硫脲、水杨酸、过氧化氢、硫酸亚铁、无水乙醇、丙醇、石油醚、乙醚、氯仿、正丁醇等为国产分析纯。

2方法与结果

2.1溪黄草多糖的提取与精制称取溪黄草粉末60g，置脂肪抽出装置中，加入石油醚（60～90℃）250ml，回流脱脂。滤渣挥干溶剂后，加入80%乙醇回流提取2次（1.5h/次）。将滤渣挥干溶剂后加蒸馏水400ml，回流提取1h。取滤液，滤渣再加蒸馏水300ml提1次，将两次所得滤液合并，减压浓缩至一定体积。加入氯仿正丁醇液（4∶1）轻摇，静置取多次，除去蛋白质。水溶液中加入适量活性碳60℃保温30min，过滤，滤液冷却后加入乙醇，使乙醇浓度达85%，放置4℃冰箱中过夜。抽滤，沉淀依次用95%乙醇、丙醇、乙醚各洗3次，真空干燥至恒重，即得精制溪黄草多糖，密封保存备用。

2.2样品中溪黄草多糖含量测定

2.2.1标准溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品0.2000g，置100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度；摇匀，制成2.000mg/ml的标准溶液，然后分别移取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml标准溶液。置于10ml容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀、配成系列标准溶液。

2.2.2蒽酮

硫酸试液的配制称取0.2000g蒽酮和1.000g硫脲，加入100ml浓硫酸，置于棕色瓶中，混合摇匀至暗处备用（现配现用）。

2.2.3标准曲线的绘制分别准确移取系列标准溶液1ml于具塞试管中（各平行3份），以1ml蒸馏水作空白，各加入5ml蒽酮试剂（立即摇匀，置冰水浴中），加完后一起沸水浴8min，取出流水冷却，室温静置10min，于620nm处测定吸光值，以吸光值（A）对葡萄糖浓度（C）作回归处理，得回归方程：A=3.359C－0.01119，r=0.9998。

2.2.4换算因子的测定精密称取2.1项下所得精制多糖10mg，置100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取此液1.0ml置10ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度摇匀作贮备液。精密吸取贮备液2.0ml，用标准曲线项的方法测吸光值，从回归方程中求出多糖供试液中葡萄糖浓度，按下式计算，测得换算因子F＝5.364。

换算因子F=w/c×d［w为多糖含量（mg），c为多糖稀释液中葡萄糖浓度mg/ml，d为多糖的稀释因素］

2.2.5样品溶液的制备精密称取溪黄草粉末0.5g（过60目筛、平行3份）置三角瓶中，加80%乙醇30ml，回流提取1h，趁热过滤，残渣用热乙醇洗涤（8ml×3次）。残渣连同滤纸置三角瓶中，加入40ml蒸馏水回流提取1h，趁热过滤，残渣用热水洗涤（8ml×3次），洗液并入滤液中，置冷后定容于100ml容量瓶中，摇匀备用。

2.2.6样品中溪黄草多糖含量测定精密吸取样品溶液2.0ml同

2.2.3项方法操作，测定供试液中葡萄糖含量。按下式计算样品中多糖的含量：多糖含量（%）＝C.D.F/W×100［C为供试液中葡萄糖浓度（mg/ml），D为供试液的稀释因素，F为换算因子，W为供试样品重量（mg）］。其结果见表1。表1溪黄草中多糖含量测定结果（略）

2.2.7重现性实验

精密称取过60目筛的溪黄草粉末0.5g5份，按2.2.5项方法制取5份样品溶液。精密吸取样品液2.0ml，同2.2.3项方法测定吸光值，计算其多糖含量。结果见表2。表2溪黄草多糖含量测定重现性实验结果（略）

2.2.8稳定性实验精密吸取2.2.5项中样品溶液2.0ml于具塞试管中，按2.2.3项方法测定吸光值，每隔1h测定1次，连续4次考察其稳定性。结果见表3。表3溪黄草多糖稳定性实验结果（略）

2.2.9回收率的测定精密称取溪黄草粉末0.5g3份，各加入精制多糖20mg，按2.2.5项样品溶液的制备和2.2.3项方法测定吸光值。计算回收率，结果见表4。表4加样回收率测定（略）

2.3溪黄草多糖活性研究

2.3.1溪黄草多糖对羟自由基的清除作用将2.1项下溪黄草多糖配制成不同浓度的水溶液，采用固定反应时间法，在相同体积的反应体系（8.8mmol/LH2O21ml，9mmol/LFe2+1ml,9mmol/L水杨酸-乙醇溶液1ml）中分别加入一系列不同浓度的多糖液。并以蒸馏水为参比，与试剂空白液比较，在λ=510nm处测量各浓度下的吸光度。计算被测物对羟自由基的清除作用。结果见图1。

清除率（%）=（A0-Ax）/A0×100

2.3.2溪黄草多糖的抑菌作用采用滤纸片法：将滤纸片灭菌、烘干，放到不同浓度的溪黄草多糖水溶液中浸泡2h。将活化好的各供试菌种用无菌水分别稀释制成含菌数约1000cfu/ml菌悬液，于固体培养基上制成含菌平皿，放置10min，待菌液稍渗入培养基后，每个平皿呈“+”形对称放置5片圆滤纸片，正中间的滤纸片浸双蒸水作为参照，其余4片浸多糖水溶液，每个浓度每种菌平行做4个样，每个皿做3次重复。然后把培养皿放到培养箱培养。培养结束后测定各供试菌的抑菌圈直径大小。结果见表5。表5溪黄草多糖水溶液的抑菌效果（略）

牛肉膏蛋白胨培养基pH为7.0；麦氏琼脂培养基、察氏培养基pH为自然；表中数据为3次（每次4个样）重复平行实验的平均值。

3讨论

实验2.1项中醇沉下来的白色物质，经紫外光谱检测在260～280nm处未见到核酸和蛋白质的吸收峰；在280nm处吸光值低于0.03，说明所提物中基本不含蛋白质杂质。经硫酸苯酚颜色反应为棕红色，与硫酸－蒽酮试剂反应呈深绿色，证明所提物质为多糖。实验2.2.5项中首先用80%乙醇回流以除去醇溶性的干扰成分防止其成为多糖中的杂质，再用水提取多糖成分，提取效果较好。

多糖是中草药的有效成分之一，而多糖多无法直接测定。本文利用多糖在硫酸的作用下水解成单糖分子，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与蒽酮生成深绿色化合物，以比色法测定其含量。结果表明，此方法简便，供试液显色稳定、重现性好。

在羟自由基产生体系中加入多糖溶液时，有色产物的生成量会随着多糖浓度的增大而不断减少，即随着多糖浓度的增大清除率也增大。实验结果表明溪黄草多糖对羟自由基有一定清除作用，且与溪黄草多糖的浓度成正相关性。由于本文所采用的自由基模型体系所产生的自由基浓度远大于体内该自由基的浓度，可见它是良好的自由基清除剂。

采用滤纸片法研究不同浓度的溪黄草多糖水溶液对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、酵母菌和黑曲霉的抑菌作用。从表5中可以看出该多糖水溶液对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌有一定的作用,并且浓度越高抑菌效果越好；5.0%浓度时对大肠杆菌有作用，2.5%浓度时对面包酵母有作用，5.0%浓度时对黑曲霉有作用。

【参考文献】

［1］孟艳辉.溪黄草的化学成分研究［J］.中草药，1999，30（10）：731.

［2］刘卫军，李书平，何云庆，等.植物多糖抗肿瘤活性研究进展［J］.中国野生植物资源，1997，16（1）：1.

［3］薛明，孟宪松.生物活性多糖的免疫研究进展与展望［J］.中兽医医药杂志，1996，3：16.

含量测定范文篇7

甘草为豆科植物甘草(glycyrrhizauralensisfisch)、胀果甘草（glycyrrhizainflatabat）或光果甘草(glycyrrhizaglabral)的干燥根及根茎，始载于《本经》，药用历史悠久。其功能补脾益气、润肺止咳、缓急止痛、清热解毒、缓和药性。主要含有甘草酸及甘草苷类成分，其中甘草酸为现代药理应用研究证实具有抗纤维化、抗炎、抗病毒和保肝解毒及增强免疫功能等作用［1］。目前针对甘草的内在质量控制，主要围绕甘草酸成分进行定性、定量一类的检查。2005版《中国药典》收载了RP-HPLC三元等度洗脱法测定甘草酸的方法，规定甘草酸含量不得低于2%［2］。本实验依托2005版《中国药典》一部甘草酸含量测定（附录VID）项下操作主线，采用RP-HPLC法测定甘草酸的含量，方法简便、快速，重现性好，结果稳定，用于甘草酸的检测专属性强，

1仪器与试剂

1.1仪器

Agilend1100系列液相色谱仪、四元泵、在线真空脱气、DAD检测器、化学工作站、1200型自动进样器。

1.2试剂

甘草酸单铵盐（monoam0niumglycyrrhitinate）对照品（中国药品生物制品检定所）；甘草(glycyrrhizainflatabat)样品，产地新疆（华东医药股份有限公司）；甲醇（色谱纯）、醋酸铵（分析纯）、冰醋酸（分析纯）、水（双蒸水）。

2实验方法与结果

2.1色谱条件

美国ZORBAXExundC18分析柱（4.6mm×250mm,5μm）为固定相；甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（67∶33∶1）为流动相；检测波长250nm；流速1ml·min-1；柱温为室温。柱效以甘草酸计，理论塔板数不应低于2000。结果被测成分于7min内即可出完，三元等度洗脱全程为0～20min。记录的色谱图结果见图1，2。

2.2对照品溶液的制备

精密称取80℃干燥至恒重的甘草酸单铵盐0.1g对照品，置100ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，使成每ml含有甘草酸单铵盐1mg对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备

取甘草，研细（过3号筛），置烘箱内80℃干燥至恒重，精密称取0.3g，置100ml量瓶中，加流动相约45ml，超声处理（功率250W，频率20KH2）30min，取出，放冷，加流动相至刻度，摇匀，微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.4测定方法

精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液色谱图中甘草酸的峰面积（3次平均）外标法计算甘草中甘草酸的含量（%，W/W）。

2.5线性关系

精密吸取对照品溶液1.0、2.0、4.0、8.0、10.0ml于100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，分别进样10μl，记录峰面积。以进样量（μg）为横坐标（X），峰面积(A)为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。甘草酸回归方程为Y=3.00029X+1.23099r=0.99989，线性范围0.1033～1.0330μg。

2.6精密度试验

精密吸取供试品溶液与上述色谱条件下进样10μl，重复5次，以被测成分峰面积分别计算，结果甘草酸RSD=1.21%。

2.7稳定性试验

精密吸取供试品溶液10μl，分别于0、2、4，6、8h进样，记录峰面积，结果甘草酸RSD=1.45%。(n=5)。

2.8重现性试验

取同一批次甘草药材按2.3项下提取制备5份供试溶液，分别精密吸取10μl进样，记录峰面积，结果甘草酸RSD=1.32%。

2.9回收率测定

取已知含量的甘草样品粉末约0.2g，精密称定9份，置10ml的量瓶中，样本中添加1mg/ml甘草酸对照品溶液1ml，按2.3项下操作，进样10μl，依2.4法测定,记录峰面积并计算回收率，甘草酸平均回收率为99.04%RSD=0.79%，结果见表1。表1甘草酸加样回收率实验结果（略）

2.10样品测定

取6批样品，按2.3项下提取制备，依2.4项方法测定，重复测定3次，结果生药甘草的平均含量为7.85%RSD=0.85%。

3讨论

3.1洗脱溶剂系统的选择

本实验为RP-HPLC三元等度洗脱法。选择甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（67：33：1）作为洗脱溶剂，是基于甘草酸对三元等度洗脱系统的适应性的考量。胀果甘草中含有甘草酸、甘草苷等成分，因此只要选择适宜的洗脱溶剂系统，以促使各组分的分配系数较大，达到基线分离的效果。实验证明该方法简单、易行，设备要求相较梯度洗脱为低，早期一类设备都可用于检测，且抗干扰性强，具有专属性特点。

3.2关于甘草酸

由生药甘草中提取的甘草酸，通常称之天然甘草酸，天然甘草酸存在顺反异构，且以顺式甘草酸含量为高，反式甘草酸含量极低。本实验未能揭示该异构体基线分离，可能与该异构体化学结构相似抑或是胀果甘草本身未含有反式甘草酸有关，尚待进一步研究。

【参考文献】

含量测定范文篇8

1仪器与试剂

Waters高效液相色谱仪：包括510型泵，991光电二极管阵列型检测器，U6K型进样器；NECPowerMate型计算机，黄芪甲苷标准品购自辽宁省药品检验所。甲醇、正丁醇为分析纯，乙腈为色谱纯、水为去离子水。试验用黄芪叶6月份采自沈阳医学院草药园。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱为NucleosilC18柱(4.6mm×250mm，5μm);流动相为乙腈-水＝1∶2；流速为0.8ml/min；检测波长为205nm；速度为0.4mm/min。

2.2标准曲线制作精密称取黄芪甲苷标准品2.128mg，加流动相定容至2ml，配制成1.064mg/ml的标准品溶液，分别以10、20、30、40、50μl进样测定，以峰面积对进样量作线性回归，得回归方程为Y＝－5.6×10-5＋6.9365×10-4X(Y为峰面积，X为黄芪甲苷量)，r＝0.9994，黄芪甲苷标准品在10.64～53.20μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.3提取方法的选择用3种不同提取方法(索氏提取器提取1h；80℃温浸提取1h和超声波提取1h)提取样品，后2种提取方法测得黄氏甲苷含量略低，故选索氏提取器提取方法。

2.4流动相的选择实验试用多种溶剂系统，最后确定以乙腈-水＝1∶2为流动相，黄芪甲苷分离效果最好，保留时间也较适宜。色谱图见上图2(ABC)。

2.5样品液制备将黄芪叶阴干后研成粉过40目筛，然后精密称取5.00g，放置索氏提取器中，用100ml80%甲醇加热提取2h，提取液减压蒸去甲醇，用20ml正丁醇分别萃取3次，合并正丁醇萃取部分，减压蒸干，残渣用重蒸甲醇定容至2ml，用0.45μ微孔滤膜过滤，滤液用于HPLC分析，每次进样10μl。.6加样回收率试验称取黄芪叶粉5.00g5份，分别精密加入黄芪甲苷标准品2.00mg，按样品制备方法提取样品并进行定量分析，将测定结果扣除样品中黄芪甲苷含量，与加入标准品的比为加样回收率。结果为96.1%(n＝5),RSD%=2.15(n=5)。

2.7精密度试验取同一样品液，重复进样5次，根据测得的样品中黄芪甲苷的浓度(μg/ml)计算其相对标准偏差为2.40%。又取同一样品5份，制备5份样品液，分别进样测出黄芪甲苷的浓度，计算其相对标准偏差为4.20%。

2.8稳定性试验取同一供试品溶液，每隔2h进样1次，分别测定其色谱峰面积。RSD%=2.2(n=5)，结果表明，谱峰面积在8h内基本无变化，表明本实验条件下稳定性良好。

2.9黄芪叶中黄芪甲苷的定量分析：依法测定黄芪叶中黄芪甲苷的含量

3讨论

黄芪甲苷是黄芪的主要有效成分之一，根上部分几乎全部落入地面，成为肥料，为了有效的利用自然资源，我们为定量分析黄芪叶黄芪甲苷的含量，本实验建立了黄芪甲苷的HPLC测定法，测得黄芪叶中黄芪甲苷的含量为4.20%(干重)，与黄芪标准含量(1.50%)相差2.70%。实验证明：黄芪叶中黄芪甲苷的含量非常高，人类应该广泛利用。本实验建立的HPLC测定法加样回收率高，精密度试验相对标准偏差小，测试数据更可靠。

【摘要】目的建立一种准确、简便测定黄芪甲苷含量的分析方法。方法色谱柱为NucleosilC18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈-水＝1∶2；流速为0.8ml/min；检测波长为205nm；速度为0.4mm/min。灵敏度为0.1AUFS,测定了黄芪甲苷的含量，平均回收率为96.1%，RSD为2.15%。结果样品浓度在0.01～0.2mg/ml之间与峰面积成良好的线性关系。结论本方法的重复性好、精密度高、稳定性强。

【关键词】HPLC黄芪叶黄芪叶中黄芪甲苷

【Abstract】0bjective:Establishesonekindaccurately,easilytodetermineAstragalosidethecontenttheanalysismethod.Method:ThechromatographiccolumnisNucleosiltheC18column(4.6mm×250mm,5μm);Flowingformethylcyanide-water=1∶2;Thespeedofflowis0.8ml/min;Theexaminationwavelengthis205nm;Thespeedis0.4mm/min.Thesensitivityis0.1AUFS,hasdeterminedtheAstragalosidecontent.Theaveragereturns-ratiois96.1%,RSDis2.15%.Result:Sampledensityin0.01～0.2mg/mlbecomesthegoodlinearrelationshipwiththepeakarea.Conclusion:Thismethod''''sduplicationisgood,accuracyhigh,stable.

【Keywords】HPLCLeafoftheAstragalusAstragalosidea

参考文献

[1]张宇,沈德凤,杨波.黄芪叶中黄芪甲苷的含量测定[J]中国野生资源，2002，（05）020.

含量测定范文篇9

【关键词】冠心病;MBL;ELISA;含量

【ABSTRACT】Objective:ThemainpurposeofthisstudyistomeasuretheMBLlevelinplasmawithcoronaryheartdiseaseandtrytoanalyzethepossiblemechanismofCHDsdevelopmentfromtheviewofinnateimmune.Methods:100bloodsamplesofCHDpatientsand60thatofhealthcontrolswerecollectedandtestedbyELISA.Results:TheplasmalevelofMBLwere3900μg/L,SD3209incases,while2056μg/L,SD1824incontrols.TheplasmalevelofMBLincasesishigherthanthatofcontrols(t=4071,P<001).Conclusion:TheplasmalevelofMBLishigherinCHDpatientsthanthatincontrols.

【KEYWORDS】CHD;MBL;ELISA;Plasmalevel

冠心病(coronaryheartdisease,CHD)是一种严重危害人类健康的疾病,其发病率和死亡率居首位,尤其在发达国家更为严重,而在我国也呈逐年上升趋势[1]。其病因和发病机制尚未完全阐明,近年来,冠心病发病的炎症学说越来越得到重视[2],对一些炎性因子和急性期蛋白的研究也越来越深入。甘露聚糖结合凝集素(mannanbindinglectin,MBL)是一种兼有调理素和直接激活补体功能的免疫分子,参与构成抗感染的第一道防线[3]。国外有些学者报道MBL与动脉粥样硬化发生、发展有关[4~7],但国内尚无报道,因此本研究主要测定冠心病患者血浆中MBL含量,并对其变化进行分析,从天然免疫的角度探讨冠心病的可能致病机制,为其辅助诊断和治疗提供资料。

1材料与方法

11实验材料

主要设备:低温冰柜(thermo,美国);酶标仪(Starfax2100,美国);普通高速离心机(TGL168,上海)

主要试剂:MBLELISA试剂盒(北京现代高达生物技术有限责任公司)

12实验方法

121标本的收集:空腹静脉血标本用EDTAK2抗凝管(2ml)收集。

冠心病(CHD)组:共100例,为河北北方学院附属第一医院20049~200510月住院的冠心病患者,男51例,女49例;年龄45~70岁,平均(6041±9443)岁。病例均经心电图、心肌酶谱和临床症状等综合诊断,符合WHO冠心病诊断标准。

健康对照组:60例,为来院进行健康体检者,男性32例,女28例,年龄43~71岁,平均(6027±7198)岁,病例无冠心病症状、体征,超声心动图及心电图均正常。冠心病组与健康对照组组间年龄无统计学差异。

122标本的处理

取1ml全血放入15ml离心管中,5000转/min离心5min,分离血浆,-86℃保存,供测定血浆MBL含量。

123血浆中MBL含量测定

按MBLELISA试剂盒说明书,基本操作如下:

标本及试剂准备:冠心病、健康对照血浆标本从低温冰柜(-86℃)中取出,溶解并恢复至室温,离心(3500转/min5min)。取上清2μl,用标本稀释液对标本进行200倍稀释(加入398μl标本稀释液[PBS+005%BSA]),混匀。所有实验用试剂均在室温平衡后使用。

操作步骤:

①取100μl稀释标本加入酶标板中,同时做对照,第一孔加100μl稀释液作空白,第二孔向后依次加含MBL不同浓度(0,1,2,5,10,25,50,100ng/ml)的标准液各100μl,标准孔均作复空;

②置37℃水浴1h;

③将板中的液体弃去,每孔加入150μl洗板液进行清洗,室温静置3min,弃去洗板液,反复3遍;

④清洗后,每孔加入100μl酶标记的MBL抗体,37℃1h,使酶标抗体与标本充分结合。

⑤清洗,操作同③;

⑥清洗后,每孔加入底物A、B各50μl,室温避光15min。每孔加入终止液50μl,轻轻混匀20s;

⑦用酶标仪比色测定波长为450nm,参考波长为620nm。在20min内完成。

2结果

用SPSS130软件进行统计分析,冠心病组、健康对照组血浆MBL含量的比较,采用两样本均数比较的t检验。

100例冠心病人血浆MBL含量的平均值为3900μg/L,标准差为3209;60例健康对照组血浆MBL含量的平均值为2056μg/L,标准差为1824。冠心病组血浆MBL含量高于健康对照组,经t检验,t=4071,P<001,差别有统计学意义,见表1。表1冠心病组与对照组MBL含量水平比较

3讨论

人类血清MBL浓度主要受结构基因外显子1密码子点突变的影响和启动子区多态性的调控[8~11]。国外已有一些MBL基因与冠心病的相关性研究[4~6],但对血浆MBL浓度与冠心病的相关性研究很少,只有冰岛的一份前瞻性研究报告[7]:高浓度的血浆MBL者,尤其是糖尿病病人、高血脂、血沉升高人群患心肌梗死的概率较低,提示MBL可能与清除动脉粥样硬化因素有关。雷克雅未克Landspitali大学的瓦尔迪马森(HelgiValdimarsson)和同事分析了当地的研究资料,共纳入了1967年以后的近2万参试者。在对其中987名70岁参试者的横断面研究中,作者发现,MBL水平高(>1000mg/L)与水平低相比,心肌梗塞风险下降36%(P<0001)。为证实此结论,研究者对另一个有1309名中年人的人群进行了前瞻性分析。结果发现MBL水平高和心肌梗塞风险减弱有关联的迹象,但不如前一横断面分析中的那样强烈,对总人群、吸烟者或高血压病人也没达到统计学意义。但这次分析证实,高水平MBL对糖尿病人(P=002)或高胆固醇血症病人(P=0004)与心肌梗塞风险大为减小有关。鉴于上述在糖尿病人中的结论“测量MBL可用于心性风险的辅助评估,也可能帮助评估预防治疗的需要”,本研究发现,100例冠心病人血浆MBL含量的平均值为3900μg/L;60例健康对照组血浆MBL含量的平均值为2056μg/L。经t检验,t=4071,P<001,二者均值比较差别有统计学意义,说明血浆MBL可能参与冠心病的发生、发展,但具体作用及机制还有待进一步研究。

参考文献

1杨功焕,王俊芳,万霞,等.影响中国人群疾病死亡因素的定量分析[J].中华流行病学杂志,2005,26(12):934938

2GranK.Inflammation,Atherosclerosis,andCoronaryArteryDiseaseN[J].EnglJMed,2005,352:16851695

3TakahashiK,EzekowitzRA.Theroleofthemannosebindinglectinininnateimmunity[J].ClinInfectDis,2005,41(7):440444

4AittoniemiJ,FanYM,LaaksonenR,etal.Theeffectofmannanbindinglectinvariantallelesoncoronaryarteryreactivityinhealthyyoungmen[J].IntJCardiol.,2004,97(2):317318

5RobertA,HegeleC.MannosebindingLectinGeneVariationandCardiovascularDiseaseinCanadianInuit[J].ClinChem,1999,45:1283

6FianeAE,UelandT,SimonsenS,etal.Lowmannosebindinglectinandincreasedcomplementactivationcorrelatetoallograftvasculopathy,ischaemia,andrejectionafterhumanhearttransplantation[J].EurHeartJ,2005,26(16):16601665

7SaedisS,OskarOO,ThorA,etal.Mannanbindinglectinasanadjuncttoriskassessmentformyocardialinfarctioninindividualswithenhancedrisk[J].JExpMed,2005,201:117125

8贾天军,李萍,张庶民,等.汉、蒙古族人MBL基因ExonI54位密码子点突变频率及其血浆含量相关性研究[J].中华微生物学和免疫学杂志,2004,24(2):115119

含量测定范文篇10

1.1材料

正己烷（A.R），天津化学试剂厂产品；无水乙醇（A.R），天津化学试剂厂产品；氢氧化钠（A.R），河北辛集化工厂产品；染料木素对照品（含量约为98%），Sigma公司产品。淡豆豉（SemenSojaePraeparatum）购自石家庄市乐仁堂药店，经河北医科大学中医学院药用植物教研室严玉平副教授鉴定为正品，留样凭证存放于河北医科大学中医学院药用植物教研室。

1.2仪器

λ-2紫外分光光度仪（美国PE公司）、RE-52A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）、BS223S电子天平（德国赛多利斯公司）。

1.3样品溶液制备［6］取符合实验要求的淡豆豉，粉碎，过10目筛，精密称取5g。加正己烷40ml超声振荡脱脂25min，弃去正己烷，重复1次。残渣加入50ml70%乙醇溶液，85℃热回流提取3次，1h/次，收集提取液。减压回收溶剂至干，加NaOH（0.01mol/L）溶液溶解，定容为250ml，作为供试品液。精密移取供试品液2ml置100ml量瓶中，加NaOH（0.01mol/L）溶液定容至刻度，摇匀。平行操作3份。

1.4标准曲线绘制精密称取120℃干燥至恒重的染料木素10.2mg，置50ml容量瓶中，加0.01mol/LNaOH溶液定容至刻度，摇匀。精密吸取此溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0ml分别置于100ml容量瓶中，加0.01mol/LNaOH定容至刻度，摇匀，以0.01mol/LNaOH溶液为空白溶液，在271nm处测吸收度。以吸收度（Y）为纵坐标，染料木素浓度(μg/ml)（X）为横坐标绘制标准曲线（见图1），结果表明染料木素浓度与吸收度呈良好线性关系。回归方程为Y=0.1698X+0.0059，r=1.0000。

1.5样品测定以0.01mol/LNaOH溶液为空白溶液，在271nm处测吸收度。每个样品重复测定2次。

2结果

2.1溶剂的选择从染料木素的结构特点及理化性质可知，其具有强疏水性，难溶于水、稀盐酸等，微溶于甲醇、乙醇。选择上述溶液作为染料木素的溶出介质不适宜。根据染料木素及异黄酮类化合物的理化特性（结构中含有酚羟基呈现弱酸性，易溶于稀碱），选择稀氢氧化钠（0.01mol/L）溶液溶解大豆提取物中异黄酮类化合物，是简便可行的。

2.2波长选择由对照品紫外扫描图谱(图2)可得知，最大吸收峰都在271nm，且最大吸收峰周围干扰较小，我们就把271nm作为测定波长。

2.3线性关系考察本法中，染料木素在0.51～4.08μg/ml范围呈良好线性关系(见图1)，相关系数r=1.0000，测定上限可达8.0μg/ml，下限为0.2μg/ml。

2.4回收率实验精密吸取标准品溶液25，50，25，50，25μl，分别置5只5ml容量瓶中,再分别精密加入供试液150μl，0.01mol/LNaOH定容至刻度，摇匀，按“1.3.3”项操作，计算回收率，结果平均回收率为99.3%，RSD为2.1%。见表1。

2.5精密度实验精密吸取标准品溶液100μl，分别置5只5ml容量瓶中,加0.01mol/LNaOH定容至刻度，摇匀，按“1.4”项操作，测定吸收度，RSD为1.9%。

2.6样品测定取已制备好的3份样品溶液测定，每份样品按测定程序测定2次，以染料木素计量大豆异黄酮含量，所得结果见表2。表1加样回收率（略）表2样品中大豆异黄酮含量（略）

3讨论

淡豆豉为常用药食同源物质，其最新报道有降血糖、血脂的作用，但有关淡豆豉中总异黄酮的质量分析报道较少［7］。我们经过研究对比，确定用一种简单易行的紫外分光光度法对其主要有效成分—异黄酮类成分进行测定，建立了一种淡豆豉的质量控制标准。

本法简便、快速、选择性好、线性范围宽、重复性好、能全面反映样品中大豆异黄酮的总含量，适用于淡豆豉中总异黄酮的质量检测和测定，尤其是生产过程的质量控制。

采用稀碱溶液溶解异黄酮，增加了异黄酮的溶解度，使得淡豆豉中总异黄酮含量测定准确度大大提高。同时由于淡豆豉中异黄酮与碱发生反应，使得其最大吸收波长发生红移，紫外吸收峰远离末端吸收，也提高了淡豆豉中总异黄酮含量测定准确度。

【参考文献】

［1］杨淑媛,田元兰,丁纯孝.新编大豆食品［M］.北京：中国商业出版社,1989：284.

［2］C．LeeHolder，MonaI.Churchwell，DanielR.Doerge.QuantificationofSoyIsoflavones，GenisteinandConjugatesinRatBloodUsingLC/ES-MS［J］.AgricFoodChem.，1999，47：3764.

［3］牛丽颖,王鑫国,葛喜珍,等.淡豆豉提取物降糖有效部位研究［J］.中药药理与临床,2002,20(5):21.

［4］王鑫国,葛喜珍,白霞,等.淡豆豉对去卵巢大鼠脂代谢的影响［J］.中药材,2003，26(9),652.

［5］王强,丛晓东,余伯阳,等.中药分析［M］.福州：福建科技出版社,1993:193.

［6］窦玉红,崔力剑,黄芸,等.正交设计优选淡豆豉中总异黄酮的提取工艺［J］.河北中医药学报,2006,21（2）:33.

［7］崔力剑,黄芸,杜淑娟,等.紫外分光光度法测定淡豆豉中异黄酮的含量［J］.河北中医药学报,2004,19(3):32.