液相色谱十篇
时间：2023-03-24 17:19:47
液相色谱篇1
关键词：高效液相色谱仪 缓冲液 流动相 调制
液相色谱法的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂,或它们的混合液。另外,水性溶剂也常用于缓冲液。有的资料[1]介绍了用于高效液相色谱法的代表性缓冲液的具体调制方法,但通常对缓冲液的解释往往含糊不清。因此,常因资料上表示的内容与实际的配置方法的不同,而产生流动相的差异,影响色谱图和分析结果。而且,不仅缓冲液,有时还要考虑到溶剂的混合方法等流动相调制方法方面的漏洞等因素[2]。本文以具体的事例,研究流动相调制方法对分析结果的影响。
1)缓冲液的调制
例如,写的是“20mM磷酸缓冲液(PH2.5)”在实际中该怎样调制?不妨举几个能想到的情况。首先,可以确定是使用磷酸的缓冲液,但是,是什么离子不明确。即使就以钠离子而言,“20mM”的浓度弄不清是指磷酸,还是指磷酸钠的浓度。若认为是“20mM”磷酸(钠)缓冲液,“20mM”可看作是磷酸的浓度。另一方面,若把“20mM”看作是钠的浓度,也可以认为是“20mM磷酸二氢钠水溶液调整PH后的缓冲液(而且, 20mM磷酸钠水溶液的PH在5.0附近,只要稍用一点酸就可以调到PH2.5)”,这时,由于调整PH用的酸,产生离子对的效果,或者也许会对分析结果有影响。从上述考虑,会产生对缓冲液有多种解释的可能性。
上述例,具体有3种解释。对分析结果会产生多大影响,见图1所示。上段是“20mM”作为磷酸浓度的解释,将作为“20mM磷酸(钠)缓冲液(PH2.5)”调制的溶液用于流动相的结果。中段和下段“20mM”作为磷酸二氢钠的浓度解释,分别加磷酸和高氯酸调整PH为2.5时的结果。像此例中的二氢可待因那样对保留时间有明显的影响时,给分析方法造成困难。对缓冲液应尽量明确溶液的特性和调制方法,以免产生不同的解释。(如图1）
2)有机溶剂和水性溶剂的混合方法
有机溶剂和水性溶剂的混合液作为流动相是经常的,但是由于混合方法的不同,有时分析结果相关很大。作为一例,20mM磷酸(钠)缓冲液(PH2.5)90%与乙腈10%的混合时,混合比为9:1的话,20mM磷酸(钠)缓冲液(PH2.5)与乙腈的体积比为9:1,也就是可以解释为各自按体积比率的相当量称取后进行混合。另外,按10%乙腈解释的话,解释为用20mM磷酸(钠)缓冲液(PH2.5),将乙腈稀释调制也可以成立。在后者的情况下,产生混合体积减少部分,余下的添加20mM磷酸钠缓冲液。两者虽然没有太大的差别,但,如图2所示,由于混合的方式不同,分析结果(特别是保留时间)也会有显著 差别,这点必须注意。（如图2）
在一般情况下,调制高效液相色谱法用流动相时,用A液:B液=3:2(V:V)的表示方法,即A液体积比相当于3,B液体积相当于2,分别称取混合(实际上本溶液混合后的溶液体积比合计体积比5要少)。
不仅是流动相的调制方法,试样溶液和其他溶液的调制也经常有上述问题。另外,在不同部门(医药部门或化工部门)各自都有自己的常识习惯,这也是困惑的原因,在这种情况下,例如,日本药典、卫生试验法、日本工业规格等法定书都有各自作为通则和定义涉及溶液的调制,因此可参考这些书,避免混乱,在日常更好地记住这些表示。
参考文献
液相色谱篇2
关键词：液相色谱 液相色谱-质谱联用 研究应用
中图分类号：O657 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2012）09（a）-0094-02
液相色谱-质谱联用（Liquid chromatography-mass spectormetry，简称LC-MS）技术是由于气相色谱-质谱（GC-MS）不能分离不稳定和不挥发性物质，于20世纪末迅速发展和成熟起来的一种较完美的、与传统分离分析方法相比具有独特优势的现代分离分析方法，在食品、医药、饲料、化学化工等领域起着十分重要的作用，已日益受到人们的关注。本文在综合国内外有关文献的基础上系统地阐述了液相色谱-质谱联用（LC-MS）技术及其在食品、医药、饲料、化学化工等领域的应用成果，以期为此技术在生产和科研中进一步发挥其独特的优势而提供理论参考。
1 LC-MS技术概述
LC-MS主要由液相色谱系统（LC）和质谱仪（MS）等部分组成。LC系统由储液器、泵、进样器等部分组成。MS又称质谱计，由离子源、质量分析器和离子检测器等部分组成，按应用范围分为同位素质谱仪、有机质谱仪和无机质谱仪；按工作原理分为静态仪器和动态仪器。简言之，此技术是先通过液相色谱对所检测物质进行分离，然后通过质谱来鉴定，具备LC的特性（如分辨率高、灵敏度高）和MS的特点（如测试速度快、精确度高）。
液相色谱的分析对象主要是难挥发和热不稳定物质，这与质谱仪中常用的离子源要求样品汽化是不相适应的。为了实现联用，一般是选用合适的“接口”以协调液相色谱和质谱的不同特殊要求。常用于液相色谱质谱联用技术的接口主要有移动带技术（MB）、热喷雾接口、粒子束接口（PB）、快原子轰击（FAB）、电喷雾接口（ESI）等。其中，电喷雾接口的应用极为广泛，其主要由大气压离子化室和离子聚焦透镜组件构成。喷口一般由双层同心管组成，外层通入氮气作为喷雾气体，内层输送流动相及样品溶液。通常要对LC-MS进行定期校准以保证其测量结果的准确性。
2 LC-MS技术的应用
2.1 应用于食品领域
张爱芝等[1]针对食品动物禁用的兽药中外源性激素，建立了超高效液相色谱一质谱/质谱（UPLC—MC/MC）法，研究表明该法检测外源性激素的灵敏度高，检出限低，分析时间短。杨成对等[4]用液相色谱-质谱法用于虾中微量的氯霉素残留的定量检测，结果发现该方法快速灵敏，定量范围宽，检验结果准确可靠，应用性强。周莉莉等[2]采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）测定食品中的三氯蔗糖含量，研究发现该方法用于乳制品及含乳制品、炒货类和酒类等食品中可以快速、准确地定性和定量检测这些食品中的三氯蔗糖含量。李秀琴等[3]则采用液相色谱-质谱/质谱法用于糕点、含乳饼干、饮料、蛋制品、调味品、豆类制品和鲜蛋等6类基体14种食品基体中的三聚氰胺的测定；陈波等[4]应用高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）用于植物源性食品中4种噻唑类杀菌剂的检测，发现4种噻唑类杀菌剂的分离效果良好，该方法检测的线性范围为20～100μg/L，检出限均为10μg/kg，回收率为64%～115%，相对标准偏差（RSD）为2.8%～12.5%；各项检测技术指标均达标，可满足植物源性食品中4种噻唑类杀菌剂的监测需求。
2.2 应用于医药领域
赵素敏等[5]利用LC-MS技术于卵巢肿瘤的磷脂轮廓分析以及研究卵巢癌（M）和良性卵巢肿瘤（B）的患者血清中磷脂代谢的差异情况，其研究结果为M组和B组与正常对照（N）组比较都存在明显的磷脂代谢差异，发生改变的磷脂主要为磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、鞘磷脂等。王兆基等用LC—MS-MS法探讨了中乌头硷及有关中成药中乌头硷含量的检测方法，被分析样品中各乌头硷浓度在0.5～40mg/L范围内，浓度与色谱峰面积存在较好的线性关系。刘国文等为了测定复方“清开灵”注射液中的鹅去氧胆酸（CDCA））和胆酸（cholicacid）等物质，通过保留时间、分子量和二级质谱等信息优化了相关技术条件，成功建立了一种对复方中相对含量较大的cholicacid的定量分析方法-液相色谱-质谱-质谱法，这种方法样品处理简单、选择性好、灵敏度高。褚扬等采用LC-MS-MS法用于人血浆中阿德福韦（Adefovir）浓度的测定，研究发现该方法具有快速、准确、灵敏等优势，认为其适用于Adefovir的药动学研究。李骁勇等[6]报道了液相色谱-离子阱质谱联用法用于西洋参特有指标成分拟人参皂昔p-F11含量的测定的线性范围为0.45～7.20μg，回收率为98.7%，重现性实验和精密度RSD值分别为2.8%和2.5%，且样品在48h内稳定性良好。
2.3 应用于饲料领域
黄芳等[7]将LC—MS法用于饲料中三聚氰胺（melamine）的检测，并结合实践经验对质谱条件进一步优化，研究发现应用此方法检测大量样品中三聚氰胺的含量的结果准确可靠、操作性强。高照等将LC-MS/MS应用于马复合饲料中吗啡、可待因和罂粟碱等三种天然痕量生物碱的快速筛查和定量测定，样品经充分粉碎后用1mmol/LHClO4溶液提取，并通过混合型固相萃取进行净化，实验结果令人满意，发现该方法可以满足马饲料中该类药物的常规检测分析且有较好的精密度和灵敏度。顾亮等[8]证实了HPLC-MS/MS用于饲料中喹烯酮含量的测定也收到较好的效果，研究发现喹烯酮浓度在0.01～0.2μg/g范围内标准曲线的相关系数大于0.998；在不同添加水平下的回收率为81.9%～111.6%，检出限（LOD）为5μg/kg。张毅等将LC-MS/MS用于谷物类饲料中雄性激素（10种）、孕激素（11种）、糖皮质激素（10种）、雌性激素（5种）及二羟基苯甲酸内酯类药物（5种）的检测，试验在优化条件下，这41种化合物在5.0～200.0μg/kg含量范围内有良好的线性相关性，相关系数均不低于0.99，定量限（S/N≥10）为0.123～2.72μg/kg；在5、40、200μg/kg或10、40、200μg/kg3个添加水平下，豆粕类饲料中各化合物的回收率为70.3%～118.1%，相对标准偏差（RSD）为0.82%～19.5%；而在玉米类饲料中各化合物的回收率为76.1%～122.8%，RSD为1.3%～15.0%；综合试验研究认为LC-MS/MS法操作简便、结果准确，适合谷物类饲料中孕激素、雄（雌）性激素、二羟基苯甲酸内酯类激素及糖皮质激素的筛查和测定。
2.4 应用于化学化工领域
任磊等[9]研究了LC—MS对乳化炸药爆炸残留物中失水山梨醇单油酸酯（SP-80）的检测效果，试验研究认为该方法操作简便、灵敏度高、样品用量少，线性范围广，并通过试验指出在法医微量物证检验中可用于乳化炸药的推断。黄少婵等研究认为LC—MS适用于塑料制品中双酚A和四溴双酚A的残留分析，研究表明高效液相色谱-质谱分离时间短、操作简便、实用性强、灵敏度高。马强州等[10]将高效液相色谱（HPLC）—— 二极管阵列检测器（DAD）用于化妆品中士的宁和马钱子碱的测定，探讨了清洁类、护理类、美容类等不同功能的花露水、清洁霜、浴液、润唇膏、护肤膏霜、粉饼、化妆水、洗发液、洗面奶、护发素等不同类型的进口化妆品样品共40件和国产化妆品样品共10件的分析测定方法，测试结果经LC—MS确证，均未检出含有士的宁和马钱子碱。
3 结语
LC—MS技术体现了色谱和质谱优势的互补，大量在食品、医药、饲料、化学化工等领域的试验研究结果表明，此技术为生产和科研提供了很多有实用价值的数据，成功解决了许多在此之前难以解决的问题。随着这项技术的不断成熟与完善，这项技术会越来越被人们熟练地掌握，相信一定有着很好的应用与发展前景。
参考文献
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[3] 李秀琴，张庆合，全灿，等.液相色谱-质谱/质谱法对多种食品基体中三聚氰胺的检测[J].2009，11（28）：1260-1265.
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液相色谱篇3
关键词：液相色谱仪器；液相色谱技术；实际应用
液相色谱法的应用十分广泛，并且，具有灵敏度高以及便捷实用等特点。近年来，结合有机质谱以及原子光谱等仪器联用，液相色谱仪器的性能以及应用范围大幅度提升。随着色谱仪器研究以及应用的不断推广，相关的技术标准的重要性也是逐渐显现出来。本文重点探索液相色谱仪器的相关技术标准，并对液相色谱仪器的主要应用进行分析。
1 液相色谱仪器相关技术标准
1.1 液相色谱产品和性能试验标准
目前，我国在分析仪器的测评标准制定上主要有：环境试验方法以及质量检验规则等。同传统的分析仪器比较来看，液相色谱仪器单元部件涉及多、关联强，并且，指标复杂。其产品与性能试验标准主要包括：分析仪器通用技术条件（GB/T 12519-2010）、高效液相色谱仪（GB/T 26792-2011）以及液相色谱仪测试用标准色谱柱（JB 5226-1991）等。
1.2 液相色谱数据处理系统标准
随着我国电子信息技术的快速发展，色谱数据系统已经在计算机技术的辅助下，成功地实现了仪器的有效控制、相关数据的收集以及处理，所以，数据系统实现标准化非常重要。目前，液相色谱数据系统标准主要包括：色谱分析数据互换协议标准导则（ASTM E1948-98 （2009））、色谱分析数据互换协议技术规范（ASTM E1947-98（2009））以及实验室信息管理系统验证标准导则（ASTM E2066-00（2007））等。
2 液相色谱技术的具体运用
2.1 液相色谱技术在生态纺织品检测中的应用
液相色谱技术不仅具有速度快、灵敏度高以及高分离效能等技术，还可以同相关的仪器设备进行联合使用，从而高效、及时地将有害物质检测出来，所以，在纺织品分析检测的应用过程中，越来越备受关注。
2.1.1 甲醛测定。在服装面料的生产过程中，无论是为了防皱、防缩，还是提高染色的耐久性，都需要添加甲醛。而当面料被制作成衣服之后，则会逐渐地释放到空气中，进而，随着人们的呼吸进入到人体的呼吸系统引发炎症，同时，甲醛对人们的眼睛以及皮肤都有刺激。所以，务必要确保服装中的甲醛含量为超出标准。色谱法是检测服装中甲醛含量的重要方法。其不仅能够将衣物中的衍生物同分异构体成功地分离，检测结果同实际含量非常接近，并且，分离出来的物质还可以高效回收。
2.1.2 全氟有机物测定。全氟有机物本身具有耐热性和化学惰性。其与水和油都不相容，所以，经常在纺织品的拒水拒油整理剂制作中被使用。然而，由于全氟有机物具有难降解、毒性大以及生物积累性等特点，所以，常常会对环境以及人类健康造成严重而持久的危害，所以，需要对出厂的纺织品的全氟有机物含量进行防控。张晓利等人研究出的液相色谱-串联质谱分析方法，能够有效地对样品前处理以及液相色谱柱等条件进行优化。事实证明，该方法不仅提取彻底、还大幅度降低杂质干扰，并充分满足欧盟标准。
2.1.3 农药残留测定。类似于六六粉之类的有机氯农药，其代谢产生的物质具有高度的化学稳定性，并且，很容易沉积到生物体的脂肪当中。随着高浓度农药的不断研发与应用，对农药残留分析检测质量要求越来越高。目前，在纺织品的农药残留成分检测方面，检测方法主要有气象色谱-质谱联用法，但是，其分析对象如果是高沸点或者热稳定性差的农药，则需要对农药进行衍生化处理，这样大幅度增加了样品前处理难度。张翔等人推出的高效液相色谱检测法不仅能够有效满足Oeko-Tex Stan100 要求，还能够做到简捷、准确，对于检测生物纺织品中农药残留非常适合。
2.2 液相色谱技术在油脂成分分析中的应用
2.2.1 借助高效液相色谱法对油脂肪酸含量进行检测。脂肪酸通常在可见光区吸收偏弱，并且，很难依靠光度法对其进行准确检测。高效液相色谱-荧光检测法能够借助高灵敏度以及对衍生剂类型进行变换，大幅度提高枸杞之类物质中游离的脂肪酸含量检测准确度。
2.2.2 与质谱联用。随着质谱技术的不断成熟，质谱法已经被广泛应用。但是，由于气象色谱质谱法对不稳定或不挥发物质无法分离，所以，常常与液相色谱联合使用。Suo和Wang利用荧光衍生剂1-[2-（对甲苯磺酸酯）乙基]-2-苯基咪唑[4，5-f]9，10-菲（TSPP）对白刺籽油中的游离脂肪酸进行柱前衍生，采用梯度脱洗在Eclipse XDB-C8色谱柱上对游离脂肪酸衍生物分离。利用柱后在线的串联质谱以大气压化学电离源（APCI）正离子模式实现了各组分的质谱定性。采用梯度洗脱实现了30种饱和脂肪酸和9种不饱和脂肪酸的同时分离。按照实验确定的色谱分离方法分别对采用不同的提取方法（超临界二氧化碳萃取，微波辅助回流提取，超声波辅助提取，溶剂回流提取）得到的白刺籽油分析测定，最佳的提取方法是超临界二氧化碳萃取，并且不饱和脂肪酸主要是油酸、亚油酸和亚麻酸。利用这种方法还可以分析苔藓等生物样品和天然环境样品（如土壤）中痕量游离脂肪酸的含量，200 mg的样品即可得到良好的线性关系和成分分析数据。王洪伦等利用荧光衍生剂1，2-苯并-3，4-二氢咔唑-9-乙基对甲苯磺酸酯（BDETS）测定白刺籽油中游离脂肪酸得到了相同的结果。说明这种方法具有良好的重现性。
3 结束语
近年来，随着我国工业化进程的不断加快，各行业的工业污染日趋严重，严重地阻碍了生态可持续发展的社会发展目标。为了更好地促进国内工业的健康、可持续发展，推动和谐社会的优质构建，实现人与自然的和谐发展，我国政府加大了对工业中危害成分的管控力度，并对产品的有害物质含量进行了严格规定。为了确保这些规定落到实处，大力加强此类物质的检测质量是非常重要的。液相色谱仪器以及相关技术在检查工作中的广泛应用，高效地推动了我国的检测技术发展，并有效地保障了工业产品的安全质量。
参考文献
[1]Grushka E. Grinberg N. Advances in Chromatography[J]. CRC Press， 2012， 50：10-12.
液相色谱篇4
【关键词】流动相配制 体积比 质量比 高效液相色谱法
【中图分类号】O657.72 【文献标识码】A 【文章编号】1674-4810（2013）33-0172-01
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，另外水性溶剂也常用于缓冲液。常因资料上表示的内容和实际的配制方法不同，而产生流动相的差异，影响了色谱图和分析结果。本文以具体的事例研究流动相调制方法对分析结果的影响。
一般来说，溶剂的混合按体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。溶液的体积因温度而变化，所以按重量比混合可调制再现性较好的混合溶剂，但由于操作较麻烦，通常多用体积比混合。因此，只要没有特别标明，就可按体积比进行混合。但在特殊情况下，如胺类粘度高的溶液混合时，有时用重量—体积比（W/V）的方法。
一 有机溶剂和水性溶剂的混合方法
有机溶剂和水性溶剂的混合液作为流动相是经常的，但由于混合方法不同，有时分析结果相差很大。如20mM磷酸钠缓冲液（pH 2.5）90%与乙腈10%的混合液，混合比为9∶1时，20mM磷酸钠缓冲液（pH 2.5）90%与乙腈10%的体积比为9∶1，也就是可以解释为各自按体积比例的相当量称取后进行混合。另外，按10%乙腈解释，用20mM磷酸钠缓冲液（pH 2.5）将乙腈稀释调制也可以成立。在后者情况下，产生混合体积减少部分，余下的添加20mM磷酸钠缓冲液。两者虽然没有太大的差别，但由于混合方式不同，分析结果，特别是保留时间，也会有显著的差别，这点必须注意。
二 50%或（V/V=1/1）乙腈水溶液的配制方法
对于用V/V=1/1的表示配制乙腈水溶液，多按这种方法进行：用量筒测定乙腈500ml，用另一量筒测定水500ml，两种液体在瓶内充分摇晃混合。
不过50%乙腈水溶液的表示时，同样也多是按上述方法配制，但查化学辞典时，实际上是按这种方法进行配制：首先将500ml乙腈，注入1L的量瓶中，量瓶边搅拌边加水，等待液温达到室温，用全量水，使溶液到1L。
这样一来，用%表示和“V/V”体积比表示，最终得出的流动相组成不同。也就是说，混合溶剂的密度，与由原溶剂密度计算的单纯平均值不相同，所以用上述两种方法调制的流动相组成差异。如在室温（25℃）附近水50ml和乙腈50ml混合时体积不是100ml，而有所减少，约为96ml。在一般情况下，多用操作简便的第一种方法。
三 溶剂体积的温度影响
如前所述，溶液的密度受周围温度的影响。刚从溶剂冷藏箱拿出来的溶液温度与实验室的室温相比，要低不少，乙腈和水混合液因发热反应，溶液温度升高。因此，为能调制再现性好的流动相，建议在使用前用水浴（或热水浴）将液温调到接近室温。
四 用两台泵进行溶剂混合
液相色谱篇5
尹 亮 安徽省计量科学研究院 230051
【文章摘要】
我国在经济发展的时期，每一个行业也都在快速发展，特别是工业等快速的发展，促进了经济的大发展。但是由于行业的快速发展，导致行业的内部也是良莠不齐，因此需要对生产产品用水加以严格的质量分析，这就应用到了液相色谱法，来分析水的质量，以便保证水被应用到产品中是符合规定的，减少造成生命危害的几率。
【关键词】
液相色谱仪；结构；维护
0 前言
随着社会的进步，每个行业产品的进步，经常会出现某些不法分子不用合格的水等，就需要用到液相色谱仪进行一定的分析，看是否符合实际的用水标准质量。但是由于液相色谱仪是一种高科技技术，对本身使用有着一定的要求。并且由于这种技术给了检测水质带来了一定的方便，还使得检测更加准确，使得这种技术很受欢迎。但是由于技术的不断发展，还会出现对水质要求更加严格的产业，因此就需要技术不断的更新发展，以便满足产业要求。
1 液相色谱法的定义和作用
液相色谱法是一种快速有效的有机化合物分析技术，在分析测定有机化合物方面，以其快速、灵敏、选择性好的特点， 倍受分析工作者青睐，是环境监测、卫生防疫、石油化工、食品生产等行业作为水质分析的标准仪器。
2 保养液相色谱仪的重要意义
液相色谱仪是是一个高科技的，高精密度的仪器。它不仅能够在一定时间内， 能够有效细致的分析出水质如何，还能分析出水中的各种物质的含量等。因此这种仪器就需要使用者更加重视保养。只有保养得当，才能最大限度的延长仪器的使用寿命。并且能够保证仪器的精密度，准确性。使得仪器在检测过程中能够更加准确检测出水中的物质，分辨更加清晰。因此为了保证仪器分析的灵敏度和准确性，都要保证对液相色谱仪进行良好的保养。以便能够在使用过程中更加放心其检测结果的真实性。
液相色谱法是一种快速有效的有机化合物分析技术，在分析测定有机化合物方面，以其快速、灵敏、选择性好的特点， 倍受分析工作者青睐，是环境监测、卫生防疫、石油化工、食品生产等行业作为水质分析的标准仪器。
这样的仪器在使用过程中也会因为其精密性更加的容易受到外界环境变化以及水质等问题的影响，甚至会出现检测结果的偏差。因此为了检测结果的真实有效，并且要延长液相色谱仪的使用寿命以及保证仪器的良好运转，就需要对仪器进行及时的维护和保养，这样才能保证在所有的检测过程当中，检验的更加的真实。
3 高效液相色谱仪的结构和原理
高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。
由于液相色谱仪是一件精密的仪器， 在使用的过程中，主要应用到了物理和化学的相关知识。在世界上所有的物体都有自己独特的生物波和有机构成，这样在使用液相色谱仪的时候，就会根据每一种食物的特性，应用相关的液体，把要检测的液体进行分离，并在液相色谱仪上进行分解出来，这样使得被检测的液体能够被有效的分析出来，从而使得液体的成分也都可以清晰的看见，并肯居所得到的数据进行分析，以便保证分析结果的有效性和真实性，从而达到检测液体所需要的结果。
4 操作注意事项
对于这样一种精密的仪器，不仅需要在操作之后进行仔细的保养，更要在使用过程中对使用者的操作加以规范，以便保证仪器能够在使用过程中不遭受破坏， 确保仪器在正常规范的使用方法下，得出最准确的使用的数据。帮助使用者技术人员进行分析。因此要想达到更好的使用效果，就需要对操作过程中的事项十分的注意，以减少出现错误。
4.1 色谱柱的柱效和保护柱
拿到一根新柱时，一定要先看其使用说明，然后测柱效，定期检测柱效，保留在新色谱柱上得到的色谱图，并记录条件， 定期检测仪器的谱带展宽，若应用于在线监测，应对色谱柱提供在线的物理保护和化学保护，例如采取安装在线过滤器，自装填料保护柱和预装保护柱等。
在线过滤器的作用是防止颗粒在柱头累计，优点是基本不影响柱效，在需要高柱效的时候常用，常更换的消耗品是滤芯和垫圈。
保护柱的作用是防止柱子被化学污染，缺点是多数保护柱影响色谱柱的柱效，特别是在用微柱时，常用的是普通自装填料的保护柱。
但是现在由于技术的进步，也出现了一些更加进步的保护住。不仅能够满足过去本来保护住应有的特点，又增加了新的技术特点，使得保护住更加符合时代的要求。其特点是，高质量、高效填料、增加分析柱效、对脏样品载荷能力大，能延长保护柱寿命，手可拧紧接头，可换芯式设计， 能采用各种不同的填料，主要适用于非常脏非常复杂的样品本底。
4.2 色谱柱的清洗
由于色谱柱是液相色谱仪这个精密仪器的重要一个组成部分，因此对于他的清洗要根据相关的规定进行操作，并且有相关的清洗液体，只有严格按照规定进行清洗，才能保证色谱柱的清洗特别的干净，从而不影响下一次的使用，不影响下一次的检测效果。
4.3 色谱柱的存放
色谱柱由于本身的特性决定了它存在的环境。为了减少空气和周围环境对他的污染，以及增加色谱柱的使用次数，在正确清洗之后，要把它放在规定的地方， 这里的空气温度湿度都是有严格规定的， 只有这样才能保证色谱柱在下次使用的有效性和检验结果的真实性。
5 色谱柱的常见故障及排除
5.1 柱压过高
可能是微粒堵塞，柱床膨胀，不可逆吸附，细菌生长等造成的。也有可能是系统反压问题，例如阻尼器堵塞，进样器堵塞，管路或连接口堵塞，在线过滤器不干净，压力传感器不准确等。
5.2 柱效低
可能是色谱柱被污染、过滤片部分堵塞、色谱柱内的死体积造成，例如流动相pH 值或者组成不合适造成固定相损失，流动相急剧变化造成固定相物理损坏，机械振动造成固定相产生裂缝，柱床收缩或干枯。
5.3 重复性差、不出峰、回收率低
在使用仪器进行检测的时候，是会受到色谱柱的效果影响的。在液相色谱仪中，要想保证得到的效果好，就需要保证色谱柱的使用效果好。但是现在的色谱柱更多会出现重复性差、不出峰、回收率低的问题，这样就会导致在色谱柱上回收的信号时不准确，有缺失的。并且得到的结果也会是偏差很大的，因此需要在色谱柱回收信息的过程加以重视并改进色谱柱， 以便保证结果的可靠性。
6 结束语
对于液相色谱仪来说，它在每一个行业都处于十分重要的位置，因为通过它可以检测出水质的好坏。但是这种高科技的仪器，通常也是一台十分精密的仪器。如果不能保养好，就会给它在成一定的损害，就会影响它的使用寿命以及仪器的见擦结果。所以在使用过程中，要严格按照使用说明来进行，并且在每一次受用完成后，都要清洁保养。
【参考文献】
液相色谱篇6
高效液相色谱（HPLC）是20世纪60年代末70年代初出现并发展起来的一项分离分析技术，随着科学技术的不断发展，色谱也不断的被改进与完善。由于其具有高分离速率，高分离效率，高检测灵敏度等特点，高效液相成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。尤其是药物，直接关系到人的生命健康，只有对药品的研制、生产、经营和使用各个环节进行全面的动态的药物分析研究和监测控制，才能确保药品使用的安全、有效与合理。因此，高效液相色谱广泛运用于药物分析的各个方面。
1高效液相色谱在药物鉴别中的应用
在H P L C法中，保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数，可用于药物的鉴别，中国药典采用此法进行药物鉴别。由于西红花价格昂贵，经常出现假品伪品，常见伪品有红花、、玉米须、莲须、纸浆等；其掺伪现象比较复杂，给真伪鉴别和优劣评价带来难度。安慧景采用高效液相色谱法对西红花及其伪品的特征成分进行鉴别，确定正品西红花中没有绿原酸和羟基红花黄素A，并建立了HPLC-DAD含量测定方法，通过测定样品中的绿原酸、HSYA，一次性鉴别西红花、常见伪品、红花，并测定掺伪量。此方法不仅能鉴别药材及提取物是否掺伪，而且能确定所掺伪品的种类并估测掺伪量，是对西红花掺伪鉴别方法的有益探讨和尝试[1]。随着高效液相色谱技术的发展和在药典中的重要性不断提高，出现了一些采用高效液相色谱法鉴别药物的新方法。例如，克拉霉素、利福平滴眼液、岗梅等七种冬青属中草药以及南北五味子的鉴别等[2-5]。这些新方法的发展无疑为进一步完善、开发药物鉴别的方法提供了一种新的思路。
2高效液相色谱在药物杂质检查中的应用
随着H P L C 技术的不断发展，有不少药物分析工作者研究和探讨了H P L C法在药物的有关物质检查方面的应用，并建立了一些新方法。例如，盐酸噻吩诺啡、奥沙西泮原料药及其片剂、盐酸喹那普利原料药、氟他胺中有关物质的检查等[6-9]。这些方法简便、可行且专属性较强，是药物杂质检测的新发展。程磊等通过合成胸腺法新杂质对照品后确证其结构，并进行杂质测定的方法学研究测得各杂质相对于胸腺法新的校正因子，从而建立一种高效液相色谱测定胸腺法新及其制剂中杂质的方法，并可对含量超过0.1%的杂质进行结构鉴定[10]。胡政华等建立苯磺酸左旋氨氯地平片中右旋杂质的HPLC检查方法，该方法专属性强，重复性好，结果准确，是手性药物中杂质分析方法的进步[11]。
3高效液相色谱在药物含量测定中的应用
用高效液相色谱法测定合成药及其制剂的含量，可以消除药物中的杂质、制剂中的附加剂及共存药物的干扰。张美娟采用高效液相色谱法测定舒心糖浆中阿魏酸的含量，所建立的方法分离效果好、灵敏、准确、简便[12]。此外，高效液相色谱在复方制剂中药物含量测试中也有广泛应用，如月乃汤中甘草的鉴别和甘草酸含量测定[13]以及复方葛斛胶囊中葛根素含量的测定等[14]。
4高效液相色谱在体内药物分析中的应用
与气相色谱法相比，高效液相色谱法不受样品挥发性、热稳定性及相对分子质量的限制，只需把样品制成溶液即可测定，非常适用于高沸点、热稳定性差、相对分子量大的有机合成药物。张莉等建立了一种快速、准确测定大鼠血清中（E）-3-（3，5-二羟基-4-异丙基苯基）丙烯酸含量的反相HPLC分析方法，该方法准确可靠，重现性好，可用于临床前药代动力学研究中血药浓度的测定[15]。付洪瑜等建立大鼠血浆中卡瓦内酯麻醉椒苦素的液相色谱质谱联用（LC-MS）定量分析方法，并用于大鼠体内药物动力学研究，该分析方法特异性好、分析速度快、灵敏度高，可用于临床前药物动力学研究[16]。
综上所述，高效液相色谱法分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高、检测自动化、适用范围广、组分易回收、样品处理简单。高效液相色谱法还可以在检查杂质的同时进行含量测定， 为分析工作节约了时间，同时也降低了分析成本。因此在药物分析的各个方面都有优势。该文原载于中国社会科学院文献信息中心主办的《环球市场信息导报》杂志http：//总第547期2014年第15期-----转载须注名来源近年来， HPLC 法在仪器、检测器、固定相等方面都有很大的发展，与其他分析技术的联用也越来越成熟。如高效液相色谱仪和电感耦合等离子体质谱仪联用、高效液相色谱与质谱联用以及高效液相色谱-傅立叶变换红外吸收光谱联用等多种技术。高效液相色谱与其他技术的联用是高效液相色谱今后的主要发展方向，也将是今后质量规范化、国际化的重要途径。
参考文献
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液相色谱篇7
【摘要】 建立了米面制品中硫脲的液相色谱串联质谱(LCMS/MS)测定方法。实验优化了样品提取方法、液相色谱条件和质谱参数。样品用80%乙醇超声波提取，离子交换色谱分离，色谱柱为NUCLEOSIL 1005SA 阳离子交换柱，流动相为乙腈(1%乙酸+0.2%乙酸铵)水溶液(30∶70)，流速0.5mL/min。采用电喷雾质谱正离子模式电离，多反应选择离子检测，检测离子对为m/z 77/60和m/z 77/43，其中m/z 77/60为定量离子对。结果表明: 本方法简便快速、准确可靠，相对标准偏差
【关键词】 硫脲， 液相色谱， 串联质谱， 面条， 米粉
1 引 言
硫脲(thiourea)又称硫代尿素，是一种纺织品的化学漂白剂，曾一度作为防腐剂，广泛用于各类需要漂白、保鲜防腐的食品。向食品中加入硫脲可阻止褐变，表观光亮，略带半透明。硫脲被人体摄入后危害健康，抑制甲状腺和造血器官的机能，引起中枢神经麻痹及呼吸和心脏功能降低等，甚至导致死亡。由于硫脲毒性大，我国已不允许其作为食品添加剂使用。近年有报道，我国东南沿海曾有用硫脲作为面条的增白剂、增筋剂，而目前我国尚无食品中硫脲测定的相关标准方法。在当今食品安全问题严峻的状况下，迫切需要尽快建立其检测方法。
目前，空气、水、土壤和生物等材料中硫脲的检测方法已有报道[1～4] ，通常采用高效液相色谱法;Raffaelli等[5]报道了用大气压化学电离质谱法测定废水中的硫脲。但至今未见食品中硫脲检测的相关报道。由于食品基质复杂，采用液相色谱法干扰很大，且灵敏度较低。本研究采用液相色谱串联质谱(LCMS/MS)法检测面条和米粉中的硫脲，考察了样品的提取方法，优化了色谱条件和质谱条件。本方法简便快速、准确可靠，检出限为0.5 mg/kg;定量下限为5 mg/kg，适用于面条、米粉等米面制品中硫脲的测定。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
Agilent 1200LC/6410B MS液相色谱/串联四级杆质谱联用仪;AS 3120超声波发生器(Auto Science公司)， 功率250 W，频率33 kHz。
硫脲(Thiourea，纯度≥98.0%);硫脲标准溶液的配制：以水为溶剂配制质量浓度为1000 mg/L的标准溶液，经0.22 μm滤膜过滤后作为储备液。使用时用水逐级稀释至所需浓度;乙腈和甲醇(HPLC级);乙酸、乙酸胺、乙醇等(分析纯，广州化学试剂厂);实验用水为二次蒸馏水。
2.2 样品预处理
将样品用粉碎机粉碎，取 2.0 g 粉碎后的样品置于具塞三角瓶中，加入20.0 mL 80%乙醇溶液，盖上盖，超声波振荡提取15 min，将超声波提取后的样品混合物全部转移至离心管中，以3500 r/min离心15 min。移取上清液10.0 mL 至50 mL烧杯中，在68 ℃水浴上浓缩至约1 mL。然后转移至5 mL刻度试管中，用水洗涤烧杯多次，洗涤液合并入1.0 mL刻度的梨形瓶中，在50 ℃下吹氮浓缩定容至1.0 mL。
2.3 LCMS/MS测定
2.3.1 HPLC条件 色谱柱：NUCLEOSIL 1005SA 阳离子交换柱(250 mm×4.6 mm， 5 μm); 流动相：乙腈(1% 乙酸+0.2% 乙酸铵)水溶液(30∶70， V/V)，流速0.5 mL/min。进样量5.0 μL。
2.3.2 质谱条件 电喷雾(ESI)正离子电离模式。干燥气(N2)温度350 ℃;雾化气(N2)压力276 kPa;干燥气(N2)流量9.00 L/min;电喷雾电压4000 V;检测离子对为 m/z 77/60和m/z 77/43，其中m/z 77/60为定量离子对;采集时间 200 ms;碎裂电压 80 V;碰撞能量 36 V(m/z 77/60)和48 V(m/z 77/43)。
2.3.3 测定方法 取样品溶液和标准溶液各5.0 μL注入液相色谱串联四级杆质谱仪进行分析，以其标准溶液峰的保留时间和质谱检测离子对 m/z 77/60 和 m/z 77/43 为依据进行定性分析，以定量离子对 m/z 77/60 的峰面积计算样品中硫脲的含量。
3 结果与讨论
3.1 液相色谱条件的优化
考察了C18柱、C8柱、NH2键合相柱及阳离子交换柱对硫脲分离的影响。结果表明：采用C18色谱柱时，当流动相为乙腈水体系时[4]，硫脲几乎无保留;当乙腈比例降低至10%时，硫脲仅有少许保留，保留时间为2.7 min(色谱柱规格为250 mm×4.6 mm，流速为1.0 mL/min，下同);当在流动相中添加庚烷磺酸盐离子对试剂时，硫脲的保留时间并无明显增加。采用C8色谱柱时，当流动相为乙腈庚烷磺酸盐体系时，随着乙腈比例从65%，40%至5%逐渐减少，硫脲的保留时间从2.9 min， 3.0 min至3.3 min逐步增加，但保留时间仍太短。采用NH2键合相色谱柱时，当流动相为乙腈水体系时，随着乙腈比例依次从70%， 80%， 90%增加到100%，硫脲的保留时间也从3.47 min， 3.55 min， 3.65 min延长到3.79 min，但增加幅度不大，保留时间较短，且峰形较宽。采用阳离子交换色谱柱时，当流动相为乙腈磷酸盐缓冲液和乙腈乙酸铵缓冲液体系时，乙腈比例为30%时，硫脲的保留时间为3.4 min，峰形较理想;随着乙腈比例的减少，硫脲的保留时间虽逐步增加，但增加幅度不大且色谱峰展宽严重;改变缓冲液的浓度和pH值，硫脲的保留时间并无明显改变。
以上实验表明，硫脲由于相对分子质量很小，极性较强，在各类型的色谱柱上保留时间均较小，用液相色谱紫外检测法测定实际样品时受到的干扰较严重。因此采用液相色谱串联质谱法测定。考虑到质谱法测定不能使用离子对试剂、磷酸盐缓冲液作流动相，并综合考虑保留时间和色谱峰形，故选择阳离子交换色谱柱和乙腈乙酸铵缓冲液体系。经实验本方法最终选择的色谱柱为NUCLEOSIL 1005SA 阳离子交换柱(250 mm×4.6 mm， 5 μm)，流动相为乙腈(1%乙酸+0.2%乙酸铵)水溶液(30∶70，V/V)，流速0.5 mL/min。此条件下硫脲的保留时间为6.7 min，峰形较好。
3.2 质谱参数的优化
用0.5 mg/L硫脲标准溶液，采用ESI正离子模式进行一级质谱扫描，得到硫脲准分子离子峰m/z 77，即[M+H]+。以m/z 77为母离子作二级质谱，得到硫脲碎片离子峰m/z 60和43，即[M+H-NH3]+和[M+H-H2S]+。选择m/z 77/60和m/z 77/43离子对进行MRM模式检测，并对各质谱参数进行优化。优化后的质谱条件见2.3.2节。硫脲的(+)ESI二级质谱图见图1。优化后的硫脲标准溶液的HPLCMS/MS色谱图见图2。
3.3 样品前处理条件的优化
3.3.1 不同提取剂对硫脲提取效果的影响 比较了用氯仿、甲醇、乙醇、乙腈和水作提取剂的提取效果。在2.0 g 粉碎后的面条样品中加入11.6 mg/L硫脲标准溶液1.0 mL，待溶液完全被样品吸收后，再分别用氯仿、甲醇、乙醇、乙腈和水进行超声波振荡提取。按前述LCMS/MS方法测定硫脲的提取效率。结果表明，氯仿几乎无法提取出硫脲，甲醇、乙醇、乙腈和水的提取效率分别为 86.5%， 70.0%， 67.1%和88.3%，可见以水作提取剂的效率最高。但用水提取时，样品中的淀粉及其它添加剂也会被提取出来，导致提取液混浊且粘稠，后续处理很麻烦;而用甲醇和乙醇提取虽然效率略低，但提取液较干净，处理过程简便快捷。因此结合二者的优点，考虑用甲醇或乙醇和水的混合溶剂进行提取。分别考察了甲醇比例为20%～80%时的提取效果和乙醇比例为20%～80%时的提取效果，结果见表1。由表1可见，80%乙醇水混合溶剂的提取效果最佳。表1 不同比例的醇和水对硫脲的提取效果
3.3.2 提取时间对硫脲提取效果的影响 考察了超声波提取10， 15， 20， 25和30 min时的提取效果，其回收率分别为87.3%， 88.1%， 86.3%， 85.6%和85.8%。可见超声波提取时间对硫脲的提取效果影响不明显，超声10 min后提取率已基本稳定。本实验选择超声波提取时间为15 min，可满足分析要求。
综合以上结果，确定样品的最佳前处理条件为2.2节所述。由于采用MRM方式测定，避免了样品基体杂质的干扰，故样品提取后无需净化即可直接上机分析，简便快速，回收率较高。
3.4 线性范围、线性方程与检出限
取硫脲标准储备液逐级稀释成0.501，1.002，2.004，5.01，10.02和20.04 mg/L的系列标准溶液，进行LCMS/MS分析。以峰面积(A)和质量浓度(ρ，mg/L)作定量工作曲线，线性方程为A=1209ρ-30.91，相关系数为0.9999，在0.5～20 mg/L浓度范围内线性关系良好。当样品中的硫脲超过此线性范围时，可适当加大样品的稀释倍数。以信噪比S/N=3确定样品的检出限为0.5 mg/kg，采用标准添加法进行实测确定硫脲的定量下限为5.0 mg/kg，可满足米面制品中对硫脲的检测要求。
3.5 回收率和精密度
取不含硫脲的面条和米粉样品各3组，分别加入5.01，10.02和50.10 mg/kg硫脲标准溶液，待完全被样品吸收后，按实验方法测定硫脲的回收率，每组样品平行测定6次，结果见表2。由表2可见，面条样品中硫脲在添加水平5～50 mg/kg，其回收率为83%～89%，相对标准偏差为0.8%～4.0%;米粉样品中硫脲在添加水平5～50 mg/kg，其回收率为88%～90%，相对标准偏差为1.7%～3.3%。面条空白及加标样品的HPLCMS/MS总离子流色谱图见图3a和b。本方法回收率较难达到90%以上，可能是基质表2 标准加入样品中硫脲的回收率和相对标准偏差
参考文献
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液相色谱篇8
【摘要】
目的建立蒲黄指纹图谱测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，测定蒲黄指纹图谱，色谱条件：色谱柱为Shimadzu C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（54∶46）；流速1.0 ml·min-1；检测波长254 nm；柱温25℃。结果建立了蒲黄指纹图谱标准。结论该指纹图谱方法简单、快速、重现性好，可作为蒲黄的一项质控指标。
【关键词】 蒲黄 指纹图谱 模糊模式识别
Abstract：Objective To establish the method of fingerprint in Typha angustifolia L. by HPLC．MethodsThe fingerprint was determined by HPLC. The analysis was carried out on Shimadzu C18 column(150 mm×4.6 mm，5μm).The mobile phase was MeOH-H2O (54∶46) with a flowrate of 1.0 ml·min-1at 254 nm and the seperation was performed at 25℃．ResultsThe standard of fingerprint in Typha angustifolia L. was established.ConclusionThe method is simple，quick and repeatable. It can be used in quality assessment of Typha angustifolia L..
Key words：Typha angustifolia L.； Fingerprint； Fuzzy pattern recognition
蒲黄为香蒲科植物水烛香蒲TyPha angustifolia L．，东方香蒲Typha orientalis Pres1或同属植物的干燥花粉，具有止血、化淤、通淋之功效［1］。常用于各种出血病症及心腹疼痛的治疗。现代药理研究表明蒲黄水提醇沉液具有明显的增加冠脉流量、降低心脑组织耗氧量、扩张血管、降低血脂及抗动脉粥样硬化等多方面活性。对蒲黄有效成分含量测定的文献［2］报道较多，迄今未见有关蒲黄指纹图谱的报道，作者对蒲黄指纹图谱进行了研究。现报道如下。
1 仪器与试药
岛津LC-6A高效液相色谱仪（LC-10ATVP泵，SCL-10AVP控制器，SPD-10AVP紫外检测器，CTO-10AVP柱温箱，CLASS-VP6.10数据工作站）。蒲黄 购于重庆市药材市场。
2 方法和结果
2.1 色谱条件的选择
参考文献［2］并经筛选确定其色谱条件为：色谱柱为Shimadzu C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（54∶46）；流速1.0 ml·min-1； 检测波长254 nm；柱温25℃。
转贴于
2.2 供试品溶液的制备分别称取经干燥粉碎的蒲黄1.0 g 3份，各加入20 ml甲醇液，超声提取30 min，过滤收集提取液，滤渣再各加15 ml甲醇液，超声提取20 min，重复提取2次，过滤收集提取液，合并3次提取液。将提取液减压浓缩干燥，残渣用甲醇超声溶解定容为5 ml，0.45 μm滤膜滤过，备用。
2.3 方法学考察与结果
2.3.1 专属性实验取空白溶剂与供试品溶液，分别在上述色谱条件下测定，结果空白溶剂不干扰测定（见图1～2）。
2.3.2 稳定性实验取蒲黄“2.2”项供试品溶液，在上述色谱条件下，分别于0，2，4，8，16 h进样10 μl，计算各主要共有峰的保留时间RSD为0.29%～0.94%，峰面积百分数RSD 为1.21%～1.77%，峰高百分数为1.01%～2.60%，即样品溶液在16 h内稳定。
2.3.3 精密度实验按“2.2”项方法制备蒲黄供试品溶液，连续进样5次（10 μl/次），计算各主要共有峰的保留时间RSD为0.46%～1.13%，峰面积百分数RSD 为 0.71%～1.23%，峰高百分数RSD为0.42%～1.73%，即该仪器精密度较高。
2.3.4 重现性实验按“2.2”项方法制备蒲黄供试品溶液6份，分别处理测定，计算各共有峰的保留时间的RSD 为0.82%～1.99%，峰面积百分数的RSD 为0.69%～1.44%，峰高百分数RSD为1.01%～2.47%，由此说明该方法重复性较好。
2.4 蒲黄样品指纹图谱模式标准的建立参考文献［3］，分别取10批不同批号的蒲黄，按供试品制备方法制备，在上述色谱条件下各进样10 μl，选择保留时间、峰面积百分数、峰高百分数为特征参数，计算各特征参数平均值，建立指纹图谱模式标准。结果见表1。表1 10批蒲黄指纹图谱标准（略）
2.5 样品测定与相似度计算取3批蒲黄，按“2.2”项方法制备样品，在相同色谱条件下测定，采用广义夹角余弦［4］，计算样品各共有色谱峰与标准模式中对应的色谱峰的相似度。结果3批样品中各共有峰相似度均大于0.9，表明各批样品有较好的相似性。结果见表2。表2 3批蒲黄相似度计算结果（略0
3 讨论
蒲黄为常用中药，文献仅有对蒲黄有效成分含量测定的报道，至今未见有对其指纹图谱的研究，本文对蒲黄多种特征参数，采用夹角余弦法［4］进行相似度计算，不仅可以从定性和定量角度评价中药指纹图谱，充分反映指纹图谱的整体性，而且还可较为直观地判断待测样品与模式标准的差异大小。
实验中曾用乙腈-水系统作为流动相，但分离效果不理想，出峰时间早，拖尾现象严重。经反复试验改用甲醇∶水（54∶46）为流动相，可达到理想的分离效果。
参考文献
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［2］高光耀，廖毛川，冯毓秀.中药蒲黄黄酮成分高效液相色谱测定及质量评价［J］.药学学报，1998，33（4）：300.
液相色谱篇9
关键词：超高效液相色谱 氯丙嗪 残留量 猪肉
中图分类号：R155.5 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2014）10（c）-0187-03
Determination of chlorpromazine residues in meat products by ultra high performance liquid chromatography
LIU Chun
（Dongcheng district Center for Diseases Prevention and Control，Beijing，100009，China）
Abstract：Objective： Ultra High Performance Liquid Chromatography（UPLC） method was determination of chlorpromazine residue in pork. Method： The target analyte was extracted form sample with acetonitrile and determined by UPLA. Chromatographic column： BEH C18 1.7 μm× 50 mm×2.1 mm， flow rate： 0.4 mL/min， mobile phase： acetonitrile∶ammonium acetate=60∶40， column temperature： 40℃， detection wavelength： 254 nm， injection volume：10μL.Result：The detection limit was 15.0μg/kg.The linearity ranged form 0 to 1.00 mg/L with the correlation coefficient of 0.9998. The recovery was 87.7% to 101.0%， RSD was 1.2% to 2.6%. Conclusion： The method was suitable for determination of chlorpromazine residue in pork.
Key word：UPLC;chlorpromazine;residues;pork
氯丙嗪（Chlorpromazine，CHL）又称冬眠灵，属于吩噻嗪类药物，是抗精神病类药的一种，涉及中枢神经、植物神经、心血管和内分泌系统等方面，其中主要被用作镇静药。一些养殖户因经济利益的驱使，在饲料中违规添加氯丙嗪抑制动物的运动，从而间接起到催肥作用。氯丙嗪在家畜饲养中的滥用，不仅会引起动物的中毒，还会通过在动物性食品的残留直接危害到人类。欧盟早已将氯丙嗪列入禁用清单中，我国也规定氯丙嗪禁止用于食品性动物。建立猪肉中氯丙嗪的检测方法，对于研究其在猪、禽体内的代谢及组织残留，实施猪、兽药残留监控具有重要的实际意义。
目前主要采用高效液相色谱法，液质联用法，气质联用法，化学发光法和免疫分析法检测氯丙嗪，采用超高效液相色谱测定猪肉中氯丙嗪含量鲜有报道。本文采用乙腈进行样品前处理，超声波提取，建立了超高效液相色谱测定猪肉在氯丙嗪的方法。
1 试验部分
1.1 主要仪器与试剂
Waters Acquity UPLC H-Class超高效液相色谱仪（美国，Waters公司）;3-30K冷冻高速离心机（美国，Sigma公司）。
氯丙嗪标准品（纯度≥99.0%，CAS：50-53-3，Dr.Ehrenstrfer公司）;乙腈（色谱纯，Fisher公司）;试验用水为电导率在18 MΩ・cm以上的超纯水。
1.2 分析方法
1.2.1 色谱条件
ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）;流动相乙腈∶乙酸铵=60∶40;检测波长254 nm;流速0.4 mL・min-1;柱温40 ℃;进样量5 μL。
1.2.2 标准曲线
精确称取氯丙嗪标准品0.0100 g，用少量乙腈溶解，并转移到10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，此氯丙嗪标准储备液浓度1.00 mg/mL。取氯丙嗪标准储备液1.00 mL，转移到100 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，此氯丙嗪标准使用液浓度10.00 μg/mL。4 ℃避光保存，保存期1个月。
精确吸取氯丙嗪标准使用液0.01 mL、0.50 mL、0.10 mL、0.50 mL、1.00 mL于10 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，过0.22 μm尼龙微孔滤膜，即为0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的氯丙嗪标准溶液。此溶液注意避光，现用现配。
1.2.3 样品制备
取适量粉碎混匀的样品于50 mL离心管中，加25.00 mL乙腈，漩涡混匀30 s，超声避光提取15 min，12000 r/min离心10 min，避光静置20 min，取上清液过0.22 μm尼龙微孔滤膜，上机测定。
1.2.4 样品测定
在色谱条件下，测定标准系列及样品。以目标化合物保留时间及特征光谱图定性;以峰面积为响应值，外标法定量。
1.2.5 定量计算
式中：X-试样中氯丙嗪的含量，单位为微克每千克（mg/kg）。
C-试液中氯丙嗪的含量，单位为微克每毫升（μg/mL）。
V-试样稀释总体积，单位为毫升（mL）。
m-试样质量，单位为克（g）。
计算结果保留两位有效数字。
2 结果与讨论
2.1 色谱条件的优化
采用不同体积比的乙腈∶水、乙腈∶乙酸铵作为流动相，将1.00 μg/mL的标准溶液进样检测，比较出峰情况。综合考虑峰形、峰宽、出峰时间，选择乙腈∶乙酸铵=40∶60作为流动相。图1为氯丙嗪标准品的色谱图。图2为氯丙嗪标准物质扫描光谱图。
按色谱条件进行分析，图3为空白猪肉样品的色谱图。图4为添加1.00 μg/kg氯丙嗪标准品样品色谱图。
2.2 方法的线性范围和检出限
精确吸取氯丙嗪标准使用液，用乙腈溶液依次稀释，配制成0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的氯丙嗪标准溶液，以氯丙嗪的浓度和峰面积进行回归，得回归方程y=69121.94x-396.59，相关系数=0.9999。
按照取样10.0 g，定容25.00 mL，以基线噪声3倍相当的标准物质为检出限，计算最低检出限为7.5μg/kg，最低检出质量浓度为0.01 μg/mL。
2.3 方法的准确度和精密度
以空白猪肉为测试对象，分别添加低（0.25 mg/kg）、中（2.50 mg/kg）、高（5.00 mg/kg）3个水平的氯丙嗪标准品做加标回收实验，以考察方法的准确度（结果见表1）。
实验结果表明，本方法均回收率为87.7%～101.0%，RSD为1.2%～2.6%，符合方法学要求。
要获得氯丙嗪理想的回收率和较低的检出限，需要注意以下方面：氯丙嗪见光易分解，样品前处理全程需进行避光操作，标准使用液要贮存在棕色容量瓶中;样品离心后，须避光静置20 min，使样品进一步沉降分层;微孔过滤膜须采用尼龙材质（Nylon），避免目标物吸附在微孔过滤膜;配制标准溶液时，需采用100%乙腈，避免产生溶剂效应。
3 结语
本方法采用乙腈溶液超声提取，建立了超高效液相色谱测定猪肉中氯丙嗪的方法。方法重现性好，灵敏度高，操作简便，精密度及准确度满意，适用于猪肉中氯丙嗪的日常监测工作。
参考文献
[1] 刘建静，杨曙明.氯丙嗪残留技术研究进展[J].中国兽牧兽医，2008，35（10）：141-144
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液相色谱篇10
【摘要】
目的建立宁心红杞胶囊HPLC 指纹图谱分析方法。方法采用kromasil C18色谱柱， 乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱，流速1.0 ml/min，柱温30℃，检测波长205 nm。结果对10个批号的样品进行了测定，标出21个共有峰。结论 该法快速、准确、可靠，为宁心红杞胶囊生产质量控制和药物质量评价提供了依据。
【关键词】 宁心红杞胶囊；高效液相色谱；指纹图谱
Abstract：ObjectiveTo establish a method of fingerprint analysis of Menoprogen by HPLC. MethodsKromasil C18 column was used，with mixtures of 0.1% phosphoric acid and acetonitrile as mobile phase in a gradient elution. The flow rate was 1.0 ml/min，the column temperature was 30℃，detection wavelength was 205 nm.ResultsTen different samples were determined and 21 common peaks of chromatogram were detected . ConclusionThis method is quick，accurate，reliable and can be used for quality control of menopenry.
Key words：Menoprogen； HPLC； Fingerprint
中药复方的药效是来自于组成该复方的各种成分之间的协同作用，因此中药复方具有成分非常复杂的特点，现行的仅以其中的一种和/或两种化学成分的含量来作为评价中药质量的方法已越来越不合时宜。如何确保复方中药质量的稳定性和一致性已经成为大家关注的焦点。随着分析技术的发展，建立具有综合性、整体性特点的指纹图谱对中药复方制剂进行质量评价的方法已经成为可能并得到了普遍认同，我国食品药品监督管理局也于2000年要求将色谱指纹图谱作为中药注射剂的评价标准。宁心红杞胶囊是由枸杞子、熟地黄、桑椹、红花、山楂5味药组成，该制剂是一种治疗“围绝经期综合征”方剂［1］，不但具有组方简单的特点，而且临床疗效确切，但目前国内外还没有关于宁心红杞胶囊指纹图谱的研究，本研究在严格考察了实验方法的基础上建立了宁心红杞胶囊HPLC指纹图谱分析方法，为宁心红杞胶囊生产质量控制和药物质量评价提供了依据。
1 仪器与试药
Agilent 1100 Series 高效液相色谱仪( G1311AQuaternary Pump，G1379A Degasser，G1313A Autosampler，G1314A Variable Wavelength Detector)；HP ChemSation 工作站( 美国Agilent公司)；KQ-250DE型医用数控超声波清洗器(昆山超声波仪器有限公司)；Sartorius电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司) 。
金丝桃苷(批号111521-200303，中国药品生物制品检定所)；宁心红杞胶囊样品由南京美福天然药物科技有限公司提供。
甲醇、乙腈(韩国SK chemicals 公司生产) 为色谱纯；磷酸（南京化学试剂有限公司生产）为分析纯；水为自制重蒸水。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件Kromasil C18(4.6 mm× 250 mm，5 μm)色谱柱，Phenomenex fusion-Rp C18(4.0 mm×3.0 mm)保护柱，柱温30℃，流速1 ml/min；检测波长205 nm，乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱，洗脱程序(见表1)。在选定条件下，金丝桃苷和相邻组分色谱峰分离度大于1.5，按金丝桃苷峰计算，理论塔板数在4 500以上，运行150 min，色谱图显示所有组分均在135 min内洗脱出柱。表1 流动相梯度变化程序（略）
2. 2 检测波长的选择本实验采用二极管阵列紫外检测器，在分析时进行全波长紫外扫描，并在不同波长下获取数据，经比较后表明205 nm色谱图出峰数目最多，峰形最好，基线平，各色谱峰相互之间分离度较好，故检测波长定为205 nm。
2. 3 溶液的制备
2. 3. 1 供试品溶液的制备精密称取宁心红杞胶囊内容物1 g，置10 ml容量瓶中，加甲醇适量，浸泡2 h，超声处理30 min，甲醇定容至刻度，摇匀，过滤，进样前取续滤液用0.45 μm 微孔滤膜过滤。
2. 3. 2 对照物溶液的制备精密称取金丝桃苷对照品10 mg置100 ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度摇匀得0.1 mg/ml的溶液作为对照物溶液，进样前0.45 μm 微孔滤膜过滤。
2. 4 指纹图谱测定的方法学考察
2. 4.1 空白及对照实验 吸取甲醇10 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。在选定条件下，空白溶剂(甲醇)对测定无干扰，见图1。
吸取参照物溶液10 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图2。
2. 4.2 精密度实验按“供试品溶液的制备”方法制备宁心红杞胶囊供试品溶液，连续进样5次，记录HPLC色谱图，结果各共有峰相对峰面积的RSD在0.31%～1.42 %，相对保留时间的RSD在0.06%～0.16%，表明仪器精密度良好。
2. 4. 3 稳定性实验按“供试品溶液的制备”方法制备宁心红杞胶囊供试品溶液，分别在0，2，4，8，12，24 h进样分析，记录HPLC色谱图，结果各共有峰相对峰面积的RSD在0.43%～1.87%，相对保留时间的RSD在0.13%～0.18%，表明样品在24 h内稳定性良好。
2. 4. 4 重复性实验取同一批样品按“供试品溶液的制备”方法平行操作，制备5份宁心红杞胶囊供试品溶液，记录HPLC色谱图，结果各共有峰相对峰面积的RSD在0.29%～1.68%，相对保留时间的RSD在0.08%～0.15 %，表明方法重复性良好。
2. 5 宁心红杞胶囊指纹图谱的测定及技术参数
2.5.1 指纹图谱的测定吸取10个不同批号的宁心红杞胶囊供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，按“2.1”项下条件进行HPLC分析，记录135 min的色谱图。比较10批样品色谱图，发现21个峰是各批样品共有的，因此确定这21个峰为共有指纹峰，见图3。
2. 5. 2 对照物的选择在HPLC图谱中选择峰面积较大、出峰时间适中且稳定的色谱峰作为对照峰，其中保留时间为36.5min的色谱峰(7号峰)是HPLC 图谱中峰面积较大、出峰时间适中并且很稳定的一个峰，经标准品对照认定为金丝桃苷，故选择金丝桃苷作为对照物。表2 10 批宁心红杞胶囊的HPLC色谱指纹图中共有峰的相对保留时间（略）表3 10 批宁心红杞胶囊的HPLC色谱指纹图中共有峰的相对峰面积（略）
2. 5. 3 标准指纹图谱的技术参数及相似度计算在共有指纹峰中，7号峰(S峰)、20号峰的峰面积大于总峰面积的10%，3，6，10号峰的峰面积大于总峰面积的5%，参照中药注射剂指纹图谱研究的技术要求，只考虑3号峰、6号峰、7号峰、10号峰及20号峰的峰面积比值，其余各共有峰均按其相对保留时间定性。
标准指纹图谱的技术参数：以金丝桃苷色谱峰的保留时间和峰面积积分值为1，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积；以21个共有峰峰面积的均值做模板，利用“相关系数”法和“夹角余弦”法［2］计算指纹图谱的相似度，结果见表2和表3，2种方法计算的相似度结果均在0.99以上。
3 讨论
3.1 检测波长的选择实验过程中运用PAD检测器对各色谱峰进行了200～400 nm 扫描，并根据宁心红杞胶囊中各化学成分的紫外吸收波形选择205，254，270，360 nm波长下的色谱图进行分析比较。结果表明，在205 nm下，各峰分离良好，共有峰较多且峰形较好，因此选定205 nm为指纹图谱测定波长。
3.2 柱温的选择
同一条件下考察柱温（25，30，35℃）对各峰的影响，结果柱温为30℃时峰形更好，故将柱温定为30℃。
3.3 流动相的选择
主要考察了水-甲醇、水-乙腈、0.1%磷酸-乙腈、0.1%甲酸-乙腈等多种流动相系统的色谱分离情况，结果表明，0.1%磷酸-乙腈流动相系统的色谱图基线不漂移且分离度良好，故选择0.1%磷酸-乙腈组成流动相进行梯度洗脱。比较了0.1%磷酸-乙腈系统不同梯度变化程序的色谱图分离情况，结果表明，表1中程序分离情况较好，最终选定为指纹图谱测定梯度洗脱程序。
3.4 提取方法考察
比较发现超声与回流两种提取方法供试品溶液色谱图基本一致，从操作方便等方面考虑，选择超声处理为提取方法。
本实验在严格考察实验方法的基础上，建立了宁心红杞胶囊的RP-HPLC分析方法，通过对10个不同批次宁心红杞胶囊的分析，确定了21个共有峰，利用“相关系数”法和“夹角余弦”法计算这10个色谱图的相似度，结果均在0.99以上，上述结果表明所建立的宁心红杞胶囊指纹图谱具有代表性，其技术指标可靠，稳定，重现性好。
【参考文献】