曹禺雷雨范文
时间：2023-04-09 21:31:05
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篇1
下了整个月，
路边的草，
湿了整个月，
多希望有一天，
让太阳，
温暖潮湿的心，
却总盼不到。
雷却来了，
轰隆隆的，
震天动地，
那一夜，
雷雨交击，
草睡了，
累了。
一觉醒来，
哦，太阳!
篇2
2.鼓励学生不断努力的评语胜利的果实,永远挂在树梢上,你可要努力往上跳,才能摘到啊!不要等待明天向我们走来,让我们走向明天!只有当我们将“等待”改为“开创”时,才能拥有一个真正属于自己的、美好的明天!一个爱好音乐的人,可不可以对音乐课及考试马马虎虎?一个想当警察的人,可不可以在体育课里偷懒?一个到重点中学读书的人,可不可以在学习上不尽力?如果不可以的话,该怎么做?本学期你有所进步,但凭你的能力,你是可以有更大的进步的。老师期待着你! 篮球运动很有魅力,它的对抗,它的拼抢、它的战术、它的一个接一个的投篮令人着迷。你是有这方面素质的,所以你能进学校篮球队。在学习这个赛场上,你的素质也是优秀的,但是要想取得胜利,也一样需要拼抢、需要战术、需要不停歇,如果站着不动,是不会得球、不会进篮的,在对抗中必败无疑。而学习这个赛场上对手更多,拼抢更烈,时间更长。你想比赛吗?你想赢得喝彩吗?那么,上场战斗吧!
3.为学生解除心理压力的评语你那原本美丽慧黠的双眸为什么被忧愁遮掩,开朗大方犹如银铃般的笑声什么时候销声匿迹了?你是班级的“种子选手”,为什么轻易地把它让给了别人?记得你曾偷偷地塞给我一个纸条,说你愿意成为我的骄傲。可是现在怎么了?能告诉我吗?老师愿意成为你的知音,你的朋友,老师愿意为你保密。希望你会成为我永远的骄傲。惊悉你的身世,我为你感到不平,并付以深深的同情。对于家庭,我们谁都无法选择,可对自己的未来,却可以作出选择。坚定你的信念,用自己的努力,用自己的拼搏,拼出一个崭新的未来。努力吧,你会成功的!若有困难,别忘了你还有老师和同学,我们随时会向你伸出援助之手的!你的苦恼老师知道:父母的望子成龙,老师的殷切期望,你都很在意。只是你的成绩不够理想,你也想好好学,但基础太差总是学不好,认为自己是个坏学生。对吗?其实,老师从未用学习成绩去划分学生的好坏,你有能力,你善良有礼貌,关心集体,同学关系处得很好,这些都是你的优点与长处。今天,让我告诉你:老师很喜欢你,即使你将来没能考上大学,我相信踏入社会后,你也一定会成为一个事业有成的人。抛开苦恼,还自己一个真实的自我,好吗?当你尽了自己的最大努力时,失败也是伟大的!
4.劝戒学生克服缺点、弱点的评语老师刚接班时,同学们最信任的是你,各科成绩最好的仍是你。可能是故意想找你的不足吧?我渐渐发现了你学习上有些知识点掌握得不灵活,体育达标成绩不够理想。希望你在下学期发扬优点,克服弱点,让实践证明你是一名永远经得起推敲的好学生! 你是个感情世界丰富的女孩,你比同龄人富有,因为你有一枝善于表情达意的笔,可以写出你心底的烦恼和快乐,让关爱你的人了解你,与你分担,与你共享。能与人顺利地沟通,你应该意识到这是一种难得的幸福。但也正像你所说的,初三了,好多风花雪月的心情要暂时收起来。学习很累,但斑斓的世界不会因为你的疲惫停下来。人,生来有许多责任要负担,照顾好自己却是自己最推卸不掉的责任!为了追求我们所爱好的一切东西,以及那些爱我们的动人双眸,我们整日地奔波忙碌,而又甘之若饴。成功是人生的一种异样的幸福,但幸福需要付出、等待和忍耐。明白了这个道理,可以让我们甘心地付出,也可以让年轻的心不再那样躁动,对吗? 看你作业认真,字写得漂亮,的确是一种享受,说明你有着认真的态度。老师一直认为上课好讲话的同学一定不会是你,但为什么又偏偏是你?如果你的课堂表现也能像你的字一样漂亮,那么老师和所有的同学一定会对你另眼相看,那时的你一定是很优秀的,我期待着你以后有更好的表现。
5.为学习上的“差生”鼓劲儿的评语在老师的眼里,你是一个热情奔放、热爱集体的好学生,愿意主动与老师亲近、接触。但每当想起你及格线以下的学习成绩,我的心里总是酸酸的、涩涩的。在新的学期里,你愿意挥动勤奋的双桨,为老师掠去心头的这片阴影吗?“有志者,事竟成”,老师相信你一定会成功的!你聪明伶俐,活泼可爱,你那一张张彩照多漂亮呀!老师还特别爱听你唱歌。但为什么你的学习却和你的外表、歌声有那么大差异呢?下学期,老师希望看到你的成绩能像你唱歌和舞蹈一样那么优秀!当你一次次主动地帮助同学打扫教室时,当你为一道难题凝神沉思时,当你单薄的身体奔跑在运动场上时,当你弯腰拾起地上的纸屑时……作为老师的我,是多么高兴!我为你的热心、勤奋和勇敢而高兴!如果你能在学习上抓紧时间,精力集中,踏实认真,那么,我想目前你的学习成绩不会如此不如人意的。因为你具备飞跃的基础。中学期间所剩余的学习时间不多了,衷心希望你在下学年能够尽力往前赶,别让今天的失误变为永久的懊悔。
篇3
【关键词】防雷工程；安全施工；操作
0 前言
建设单位要重视防雷工程的安全施工，规范防雷装置的施工，及时发现并解决防雷工程中的问题。在防雷工程施工中，要强化施工人员的安全意识和技能，进行工程施工过程中的安全施工和操作，提高建筑物的防雷系数。防雷工程是建筑物的重要组成部分，要结合其在建筑物中的重要性进行综合考虑，好防雷措施，做好防雷工作。
1 强化防雷施工人员的安全意识和技能操作能力
工程建设中加强防雷知识的宣传力度，提高施工人员的防雷意识，重视防雷减灾工作，因此，政府部门和施工单位都要重视工程的防雷减灾。比如气象部门就可以与施工单位配合，宣传防雷减灾知识，提高施工人员的防雷减灾意识，普及推广防雷减灾知识。因为防雷减灾工作的特殊性，是一项安全防护类的工程，在具体施工中就要求施工人员要有更高的安全意识和专业技能。施工人员必须持证上岗，有专业的技能和知识，并经过专业培训，在涉及到用电、高处作业等特殊操作时要具备一定的资质[1]。在防雷工程的施工中，要有安全施工的管理方案，安全操作监督管理员进行统筹管理，保证在施工过程的每个环节中都运用了安全施工理念，强化施工的安全作业。
2 防雷工程中安全施工与操作的具体措施
2.1 严格保障施工现场的安全用电
防雷工程中的防护对象和电有着密切的关系，电气设备是其主要的防雷设置。如果施工过程中出现问题，就有可能出现防护设备系统的损坏，更严重会出现人身伤亡，并引发次生灾害，因此，在施工现场要加强安全用电工作，关注临时用电设施和线路的安装、拆除，具体施工必须由专业的电工进行操作。施工现场临时用电的运用系统一般是三相五线制，用电功率大、时间长的工程的防护都运用三级配电和两级漏电对策保护，保证在用电设备和控制开关箱间的距离小于3m，与二级配电柜的距离小于30m，匹配漏电保护器和控制设备容量。临时用电线路的设置需要注意，对路面塔吊等水平和垂直运动物体的场所要避开，要进行整齐合理的布线。在架设好引线后，标注"禁止断电"等警示语在配电室外或配电箱处，也可以实行专人守护，避免意外事故的出现[2]。结合施工场所及其环境，施工人员要安装规定进行绝缘手套、绝缘鞋等防护品的装置，及时检查电气装置和防护设施，保证设备使用达标。因为多次改动线路，有些配电箱的线路就会出现紊乱复杂的情形，使得线路不规范不合理，此时施工人员就要理清线路的走向，逐个测试安装线路，确定具体断电线路，再进行防雷工程的安全施工。在安装的整个过程中，要有专人进行监督操作，做好每个环节的安全监督，及时准确的进行意外事故的处理。在带电作业中，电工要严格按照规范程序进行操作，保证地线、零线和相线接线的正确性，再理顺线路，拆相线、零线和地线，在检查合格后才可以送电，保证保护器火线、零线和地线的电压都正常且不带电，在工程全部结束后施工现场要彻底清理，防止有用电隐患的情形。
2.2 做好施工现场噶出作业的安全防护
防雷工程的施工中一般都是高处作业，在屋顶上进行避雷针和避雷带的安装、布设改造工程监控系统、安装信号避雷器等。如果施工中天气比较恶劣，出现了4级以上的大风或雷电、雨雪、浓雾时，就要停止高处作业。在防雷工程的高处施工作业中，施工人员要严格遵守高处作业的安全操作规范，保障自身的安全。防雷人员如果经常进行高处作业，就要定期体检，对患有心脏病和高血压等疾病的施工人员一律不准进行高处施工。高处作业要借用安全带、脚手板、索具、吊篮和平台等高处施工的必要设备进行，并且要先进行技术鉴定。高处作业的现场必须设置安全防护标志，劳动保障用品也要配置，施工前期检查安全标志、工具、仪表等设备，保证设备的安全齐全就可以开始施工。在施工过程中施工人员要合理放置工具，不能随便放置，对余料和废料要及时处理，高处作业中不能抛掷工具物件。如果需要悬空作业，要固定悬挂和立足点，可以配置护安全防护设施。施工人员的操作不能在门窗外墙樘子和阳台栏板上展开，这是保障施工人员安全的重要措施，要保证在作业区两侧的间距大于2m，可以进行上下间的立体交叉和上下方向的作业，对于2m的间距可以设置挡板来弥补，避免上方物体对施工人员的安全产生威胁。在高处作业的材料垂直运输中，要禁固绑靠，注意材料运行中的滑落，在确定高处下方及其附近没有施工人员进行活动和逗留后，就可以运输材料。
2.3 加强危险防雷场所的安全施工
防雷工程中的化工和易燃易爆场所不仅特殊，而且危险性比较大，是防雷工作的重点对象，但在施工操作中严重阻碍了施工的安全性。在施工中要了解施工场所的环境特点和管理要求，了解危险场所的安全防护知识，对施工的安全防范和管理制度进行有针对性的制定，要配备消防通信报警等设备，并依法办理施工需要的安全作业证，保证防雷施工操作的安全性。对在易燃易爆场所工作的施工人员必须有防火鞋、防火面罩的配戴，保证焊接、切割、磨光操作的连接方式是螺栓压连接等非动火连接方式，浪涌保护器可以选用防暴型的。
2.4 做好施工现场环境和设施的保护工作
建筑物、系统及其设备都要采取防雷措施，在施工操作过程中场所或设施原状就会受到破坏和影响，因此，在进行防雷建设的同时，也要关注防护对象的完整性，减少对防护对象的影响破坏。在施工中，安装完避雷针和避雷带后，如果建筑物顶面的钢筋混凝土和防水隔热层受到了破坏，要及时处理受损部位，修复防水隔岵恪T谑┕ぶ校要避开人行通道，保证安全防护距离在3-5m，并安装明敷引下线，对接地体的施工要注意对埋地高、低压电缆和通信光缆等的保护，在完工后修复被破坏的路面、绿化带和草坪[3]。在进行浪涌保护器的信息安装和系统监控时，技术人员要协助防护对象，备份重要防护对象的信息和数据，然后才能够断开线路或实行系统停电实施安装，减少数据丢失的损失。要正确的进行移动设备、插拔接口等接线，如果施工安装中出现了信号干扰、系统不稳定、无信号等情形要及时排查并解决，保证其可以正常运行，尤其是在学校、金融、科研等社会重要的行业和敏感部门，最好可以在休息日和夜间施工，减少施工带来的影响。
3 结束语
我国目前的建筑防雷市场的发育还需要继续健全完善，企业中的自律性比较差，违法分包和转包的现象严重，在施工过程中要制定相关制度提高防雷工程的效率。施工过程中，要提高施工人员的安全意识和专业技能，加强工程的现场管理，注重施工中的安全用电、安全防护和安全施工，做好施工现场环境和设施的保护工作，最终提高建筑工程防雷施工的管理。
【参考文献】
[1]梁宏文，温耀美，苏志聪.浅谈防雷工程的安全施工与操作[J].科技风，2012，（01）：143.
篇4
海带，是一种在低温海水中生长的大型海生褐藻植物，属海藻类植物，可以适用于拌、烧、炖、焖等烹饪方法。褐藻纲，海带科。孢子体大型，褐色，扁平带状，最长可达20米。分叶片、柄部和固着器，固着器呈假根状。叶片为表皮、皮层和髓部组织所组成，叶片下部有孢子囊。具有黏液腔，可分泌滑性物质。固着器树状分支，用以附着海底岩石。
生长于水温较低的海中。中国北部沿海及浙江、福建沿海大量栽培。富含褐藻胶和碘质，可食用及提取碘、褐藻胶、甘露醇等工业原料。其叶状体可入药。
（来源：文章屋网 ）
篇5
（威海市烟草专卖局（公司），威海 264200）
（Weihai Tobacco Monopoly Bureau （Company），Weihai 264200，China）
摘要： 随着客户细分理论的不断丰富和完善，构建合理的客户细分指标体系，借助聚类分析的方法，来实现对企业客户的细分。本文针对当前烟草公司在客户细分方面工作的不足，结合烟草行业及零售户的特征通过聚类分析实现烟草行业零售户的细分，帮助烟草公司实现零售户的合理分类，优化客户资源与卷烟货源的配置。
Abstract: With the customer segmentation theory being enriched and perfected, by cluster analysis method, this paper constructs reasonable index system of customer segmentation and realizes the customer segmentation. Aiming at the disadvantage of current tobacco company in customer segmentation, the research through cluster analysis realizes the retailers of the tobacco industry subdivision and helps tobacco company achieve reasonable classification of retailers according to the characteristics of the tobacco industry and retailers, customer resources and configuration of the cigarette supply is also optimized.
关键词 ： RFM；客户细分；聚类分析
Key words: RFM；customer classification；cluster analysis
中图分类号：F274 文献标识码：A
文章编号：1006-4311（2015）06-0020-03
0 引言
在卷烟供应链中，地市烟草公司处在卷烟工业企业和卷烟零售客户之间，真正直接面向消费者、面向市场的是卷烟零售客户。因此，各地级市烟草公司要想提高对区域市场的市场需求情况的把握，就必须先充分了解和研究零售户的需求，改善卷烟零售客户的客户关系，制定精准营销策略，提高营业收入，实现“卷烟上水平”有重要的作用。过去十年，信息技术的发展对烟草行业也产生了巨大的推动作用，烟草企业CRM系统中不仅收集了大量的业务数据，还收集了大量的客户数据，使得烟草公司多年积累的业务数据开始发挥价值。数据挖掘是一门涉及人工智能、机器学习、统计学等技术的交叉学科，它的主要作用就是实现从海量数据中提取出对应用者潜在的有价值的信息。通过对大量数据的分析处理，结合具体的业务模型，经过数据挖掘算法的分析，可以发现数据之间潜在关系所隐含的机会，挖掘潜在客户价值。
1 理论基础
1.1 RFM模型
RFM模型是由美国著名的数据库营销研究所Arthur Hughes提出的，已经被实践所检验的，对企业客户价值衡量有较好效果的客户数据三要素。RFM是指在客户的一个考察周期内，从最近一次消费至现在的时间间隔（Recency）、购买次数（Frequency）、消费总金额（Monetary）三项指标来描述该客户的价值状况。
①最近一次消费时间至现在的时间间隔（Recency）。该时间间隔越短，则R值越大。根据相关研究者的研发现，R越大的客户越有可能在最近的一段时间内产生新的消费行为。R越大，企业对该客户的记录的信息资料就越全，反之，随着R的减小，该客户的数据资料会越来越少。研究发现，如果时间间隔超过一年，则该企业50%的客户信息将无效。
②购买次数（Frequency）。客户在该考察周期内，购买该企业产品或服务的次数。购买的次数越多，说明该客户的忠诚度越高，该客户对企业依赖性越大。
③消费总金额（Monetary）。客户在该考察周期内，购买的所有产品或服务的总金额。客户购买的总金额越大，对企业的利润的贡献也就越大。
RFM从三个关键维度描述客户的购买行为，且可以较好地表示客户当前为企业带来的现实价值。根据国内外的研究与实践，RFM是表示客户当前价值的充分变量。
1.2 K-Means聚类算法
聚类，是指按照对象的某些属性，以某种相似度的测量方法，把相似的事物聚集成为一类，其结果是获得的类群中，不同类的对象之间相似性小，同一类对象的相似性大。K-MEANS算法是聚类分析中最常用，也是最主要的算法之一。K-MEANS算法也被称为K-均值，是当前最广泛应用的基于划分的聚类算法。K-MEANS算法以输入的分类个数k为参数，把n个目标对象划分为k个簇，簇内具有较高的相似度。K-MEANS算法的基本思想为：算法首先随机的选取k个对象，并把这k个对象初始化为K个簇的平均值或中心，算法计算并根据其他每个对象到这K个簇中心的距离，将它付给最近的簇，重新计算每个簇的平均值，重复进行，直到准则函数收敛。
2 基于聚类挖掘技术的客户细分实现过程
2.1 客户细分聚类模型指标体系的构建
烟草公司目前对公司的客户分类主要从业态、经营规模、市场类型进行考察，并结合零售户的上述情况，及所处的地理位置对其商铺类型进行了划定。但上述分类标准存在着一定的模糊性，导致了对零售户的划分产生了多种问题，如划分概念存在一定的重复性、公司对零售的细分标准不明确等。因此，如何采用适当的科学的客户细分方法，对客户实现精确的细分，对客户所在的市场容量进行精确分析、精准营销，对于烟草公司提高对市场的控制能力，增加营业收入，具有重要的意义。
本文所研究的客户分类模型，是指客户价值和客户行为。客户价值，包括客户当前价值和客户的潜在价值，客户价值默认指客户的当前价值。目前对客户价值研究和应用比较成熟的为从客户行为角度构建的RFM模型。客户的行为研究，可以借助烟草公司业务数据库中的数据交易行为来分析。
RFM模型是被广泛使用和认可，用来衡量客户价值的重要工具。本文研究的是某烟草公司2013年的全年销售数据，假定研究时点为2013年1月1日至2013年12月31日，对应客户价值的衡量的三个指标参数分别为客户12个月内的总订烟金额（Monetary）、客户最近一次定烟时间到现在间隔的天数（Recency）、客户最近12个月内订烟的总次数（Frequency），RFM模型字段如表1。
2.2 数据预处理
根据烟草公司客户信息表，首先，根据目标工作需要，单独选取出2013年中参与有营销服务的客户数据，入库到新的数据表中。其次，根据客户细分模型的需要，对客户信息表的数据进行补全处理。对订单信息表和客户信息表中的是否存在空值、NULL、异常值，进行检测。发现订单信息表中，没有空值、NULL值，但是在客户购货数量（Quantity）存在负值，经过与业务人员沟通了解到，存在退货的情况。因此，在计算客户购货数量，购货金额时，要考虑到其正负值的实际意义。
在公司业务人员交流时，了解到数据库中存在着一部分小客户，订单量非常少，而且订过一次后，可能就没有再继续零售，即该零售网点已停止服务，利用spss中的直方图工具分析客户的订烟次数、最近一次订烟时间，现收集到的数据中，存在较多已经6个月未进行订货的零售户。根据地市烟草专卖局规定客户每周必须订一次烟。对这些已经有超过6个月及以上时间为从事零售活动的零售户，下一年会被注销零售资格，在对客户进行聚类分析时，可以不予考虑。
2.3 基于K-MEANS算法的客户细分模型应用
K-MEANS算法的缺点有：需要用户事先给出簇的个数，而这个信息通常是聚类之后才知道的；无法处理有分类属性（caetgorical atttribute）的数据；对孤立点敏感。从本文研究的内容来讲，对于客户的划分事先己经有了大概的目标，那就是将客户群细分为：VIP客户，重要客户，普通客户，小客户四个群。所以对于K-MEANS算法的需要事先给出簇的个数的缺点，在本文研究的问题中并不突出。在进行数据挖掘前，己经对原始数据做了较为充分的清理和转化，数据中存在的噪声已经很少，孤立点的影响己经不大。所以，在本文研究的内容中，使用K-MEANS算法是可行的。
全部的12357个客户中，聚类后最终分为4个簇。聚类结果如表4。
根据上述统计信息，可以对零售户的聚类结果进行归纳概括，总结出4个类簇的结果集特征。
RFM-1类：这部分客户的数量非常少，只有6个客户，仅占客户总量的0.048%，但平均订烟金额和平均订烟数量非常大。他们可以说是客户中的“巨无霸”。这类客户需要的烟的品牌档次比较高，价格亦较高。烟草企业可以将这6个客户中的每一个客户作为战略伙伴，一定要与他们维持良好的伙伴关系。在客户细分后，他们作为最顶级的客户，应该被看作是最重要的客户，将这一类客户称为VIP客户。
RFM-2类：订烟次数与订烟时间距今天数与前两个类别的客户没有明显差别，区别在于平均订烟数量与平均订烟金额。虽然这一类的客户不是数量最多的，但是他们的总订烟量和总订烟金额却是在四个类别客户中占比重最大的。将这一类别的客户称为普通客户。
RFM-3类：这部分客户的数量也很少，只有191个，这191个客户与前面6个客户情况类似，只是平均订烟数量和平均订烟金额要比RFM-1类少。他们同样属于重要客户。
RFM-4类：这类客户的数量在所有类别中占的比重最大，但是这类客户的订烟数量和订烟金额最小，平均订烟次数也是最少，订烟时间距今时间也是最长。这个类别客户包括了众多小客户，将这一类别的客户定位于小客户。
上述分类情况，与烟草零售户的实际情况相吻合，即零售户中绝大部分是小门户性质的网点，这些网点占总网点数量的89%，销量占总销量的50%。
3 总结
本文通过系统的分析国内外对客户细分、客户价值、聚类分析的理论研究和实践应用，并研究了这些理论与技术在烟草以及其他行业中的应用情况及效果。通过对比分析，吸收和借鉴现有的研究成果，本文在此基础上，针对烟草公司提供的相关业务数据，根据客户价值、客户行为等理论模型，借助K-MEANS聚类分析技术，构建了烟草客户细分模型，为烟草企业实现“精准营销”、“精确运营”，提高对市场的调控能力提供了支持。
参考文献：
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[2]刘英姿，何伟.基于不同视角的客户细分方法研究综述[J].商场现代化，2009（1）：271.
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[6]Jiawei Han，Micheline Kamber著.数据挖掘-概念与技术[M].范明，孟小峰，等译.机械工业出版社,2001.DataMining:Concepts and Techniques. San Mateo, CA:Morgan Kaufmann,2001.
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[8]胡少东.客户细分方法探析[J].工业技术经济，2005，24（7）：66-69.
篇6
关键词视觉工作记忆，记忆更新，刺激类型，2-back。
分类号B842.3
1前言
记忆更新(memory updating)功能是根据新呈现的信息，对工作记忆（working memory, WM）中的内容进行持续修正的能力[1]。一般认为它是中央执行系统的主要功能之一。更新功能要求对WM中的内容进行动态的操作：对新进入WM中的信息进行监控和编码，以使之与当前进行的任务相关；然后再适当地修正WM中的项目，用新的更为相关的信息来代替那些已经不再与当前任务有关的信息。概括来说，不同的更新任务主要都包含两个成分：更新操作和与任务相关信息的存储[2]。
以往研究发现工作记忆中，当信息是通过听觉获得时，呈现出与视觉相当不同的脑激活模式[3]。但在工作记忆更新任务中，不同通道类型的刺激更新成绩是一样的[4]。在不同的通道（视、听）信息的更新过程激活了同样的脑区（主要是左半球的背外侧前额皮层，布洛卡区，辅助运动区，前运动区；以及双侧顶叶皮层的上部和后部，双侧的前扣带回；以及右侧的小脑）。虽然在反应时上，对视觉刺激的反应明显快于对听觉刺激的反应，但在准确率上，两者之间没有差别。这提示我们，更新操作可能表现出与一般的工作记忆任务不同的模式，即与刺激输入的通道无关。
虽然更新任务的操作可能独立于刺激输入的通道，但在同一通道（如视觉）内部，不同类型、不同性质的刺激材料是否具有相似的更新操作过程呢？以往的许多研究发现，人们对不同类型的刺激材料的记忆成绩是不一样的。Cavanaugh发现，不同材料的短时记忆容量按照数字、颜色、字母、字词、几何图形、随机图形、无意义音节依次下降[5]，但对更新成绩、更新过程是否依不同材料的类型而有所差异，目前几乎还没有研究。本研究将采用N-back范式，考察4种实验材料（英文辅音字母、抽象意义的汉语单字词、具体意义的汉语单字词、以及有意义并且可用汉语单字词命名的图片）在视觉更新任务中是否存在作业成绩上的差异，从而探讨视觉工作记忆中的更新操作是否受到材料性质的影响。
N-back范式常用于考察记忆的更新能力。其中项目系列呈现，被试要评估每个项目是否与n个项目之前的那一个相似或相关。这一任务一般包含编码、暂时保持和复述信息、系列顺序的追踪、更新和比较、以及运动反应等一系列过程。归纳起来，它包含两种最主要的操作成分：一个是要求被试在工作记忆中储存一个或多个项目，项目数量取决于任务中n的值；另一个是要求被试在每出现一个新项目时，对工作记忆中的内容进行更新，即删除最旧的、加入最新的，并且在记忆中保持项目呈现的顺序。该任务显然既要求存储也要求加工。通过变化n值而增加任务负载的研究已经有很多[6～10]，本实验中不再考察这一变量，只是利用2-back任务来考察不同刺激更新过程的一致性。
本研究主要考察以下两个方面的问题。首先，不同材料的更新操作是不是存在差异。已往的较多研究常采用无意义的材料（如字母，数字等），很少采用有意义的材料，更没有对它们加以对照。其次，对不同的材料，更新操作的更新成分和存储成分是否具有不同的表现。虽然许多研究明确区分了工作记忆中的存储和操作成分，但对于更新功能过程本身所具有的操作和存储成分并没有作明确区分。在N-back 范式中，一般以0-back任务作为基线条件，这时并没有存储成分的参与；或以对项目序列呈现时前面几个固定项目的记忆准确性为基线条件。但更新过程中的存储是一种动态的存储，每次更新后被试的记忆中保持的项目是不同的，以固定项目的存储作为基线对照条件，无法恰当模拟更新过程中的存储。但是，对更新操作中即刻的记忆存储进行考察是比较困难的，本实验采用在每个更新任务序列结束后立即进行再认任务的方法，近似地分离出更新操作中的存储成分。
2实验方法
2.1被试
17名本科生或研究生（6男，11女）参加了实验，年龄在21到27岁间，平均年龄为23.1岁。
2.2实验设计
本实验为 4×2 被试内实验设计，更新刺激类型有4个水平，即英文辅音字母、抽象意义的汉语单字词、具体意义的汉语单字词、可以用汉语单字词命名的图片。执行要求有高和低2个水平，以更新速度（刺激间间隔为1000/2000ms）来表达。变化执行要求的目的是考察它对更新操作成分和存储成分是否有不同的作用。
2.3材料和仪器
刺激呈现在计算机屏幕的中央，被试离计算机60cm。共有4种刺激材料：除了L，W，Y之外的所有英文辅音字母（共18个），18个抽象意义的单字词，18个具体意义的单字词，以及18幅有意义的可用单字命名的图。所选取的具体或抽象的单字在字频上匹配。所有刺激材料在屏幕上呈现的水平和垂直方向的视角为：字母的视角为1.0°×1.7°，汉字的视角为1.7°×1.7°，图的视角为10.4°×7.6°。
2.4实验程序
正式实验由4个BLOCK组成，每个BLOCK中采用不同的刺激材料。BLOCK间可以自由休息。一个BLOCK中有12个项目序列（试次，trial）。每个试次中包含更新任务和再认任务两部分，其中更新任务由14个项目组成，再认任务包含8个项目。在更新任务和再认任务前均有提示。被试按空格开始每个试次。
每个试次中，首先呈现注视点2000ms，之后出现字母、单字或图500ms，然后呈现1000ms/2000ms的注视点（取决于执行要求的高低），这样持续下去。更新任务采用2-back任务，要求被试决定每一个出现的项目是否与先前呈现过的、与之隔一个项目的那个项目相同。每个试次的更新任务共14个项目，其中前两个项目不需要做出反应，被试从第三个项目开始做反应。在整个实验序列中有33%的项目是匹配的项目，即每个序列中有4个项目是2-back的靶子。此外还包含1-back和3-back的干扰项目各1个，其余的为无关项目，且随机呈现。以字母为例，刺激的呈现如图1所示。
字母材料呈现时以大小写混合呈现，汉字的呈现为红蓝两种颜色混合呈现。要求被试忽略大小写和颜色信息来做反应。这样可以排除被试进行简单知觉匹配上的可能性。
每个试次的更新任务结束后，要求被试完成1个再认任务。系列呈现8个项目，每个项目为2000ms，项目之间呈现注视点2000ms。8个项目中有4个为刚才更新任务中出现过的词，4个为新词。要求被试判断当前再任任务呈现的项目是否在刚才的更新序列中出现过。在实验时，要求被试优先保证第一部分的正确率，不需要为完成好再认任务而在做更新任务时对项目进行有意记忆。
被试在实验之前更新任务的练习正确率达到85%以上，方可进行正式实验。
3实验结果
删除1名在更新任务中平均正确率低于75%的被试（男），最后共有16名被试的数据参与了最后的统计分析。不同条件下的作业成绩如表1所示。
对更新任务进行重复测量的方差分析，其中有两个被试内因素：执行要求（刺激间间隔1000ms，2000ms）和刺激类型（字母，具体的汉字，抽象的汉字，以及图片）。反应时数据表明，执行要求的主效应显著，F（1,15）=6.031，p＜0.05，表现为被试反应时在执行要求高时（910ms）显著快于执行要求低时（942ms）。刺激类型的主效应不显著，F(3,45)=1.612，p＞0.1，且与执行要求没有交互作用，F(3,45)=0.753，p＞0.5。这说明，虽然在更新任务中对不同类型刺激的反应时在数值上有所不同，但在本质上并没有绝对的差别。
更新任务正确率的模式表现出与反应时数据类似。执行要求的主效应显著，F（1,15）= 23.734，p
对再认任务中不同条件下的再认率（正确反应的旧词―错误反应的新词）进行重复测量的方差分析，结果表明，不同类型的材料间存在显著差异，F（3,45）=17.557，p＜0.001。进一步分析表明，对字母的再认率（61.5％）明显低于对具体汉字（71.6％）、抽象汉字（72.3％）和图片（77.5％）的再认率。两种汉字之间没有差异，但它们都略低于对图片的再认率。更新材料和执行要求间的交互作用显著，F（3,45）=4.956，p＜0.01。对二者间的交互作用做进一步的简单效应检验，发现字母、具体汉字和抽象汉字3种材料的再认率在不同的执行要求下没有显著差异，但图片的再认率在执行要求高时显著高于执行要求低时（p＜0.01）。
4讨论
4.1不同类型材料的更新
视觉工作记忆系统对于人类的思维过程具有重要的作用，但目前的已有研究一般都采用抽象刺激，比如字母和数字（如Smith，1996；Jonides，1997）[6,11]，只有较少的研究采用了具体的词（Clark，2000）[12]。本研究中同时采用不同类型的视觉刺激材料，除抽象的字母外，还增加了具体意义的单字词，抽象意义的单字词，以及可用单字命名的实物图片，发现材料之间在更新成绩上没有差异。这说明更新操作是一种程序化的认知过程，独立于呈现的刺激类型。
本研究发现不同视觉刺激类型的更新操作没有差异，那么其它类型的刺激，包括任务类型、听觉通道内部等是否也表现出类似的模式？更新过程功能上的一致性是否具有同样的神经基础？有研究发现，丘脑损害的病人在完成更新任务时，相对于言语和空间的更新作业来说，客体的更新成绩损害较少[13]，这暗示着不同的更新任务可能具有不同的脑机制。Rama等人采用不同情感的语音材料（如生气、害怕、惊讶、责备的语调等），完成从0-back到2-back3个水平的更新任务，结果发现一个在枕叶、顶叶，以及额叶区域的分散性的神经网络参与不同情感的语音加工，说明更新任务不一定只基于额叶，可能随着采用的任务类型或刺激材料而有变化[14]。Alexander等人的研究也支持这一观点[15]。他们采用2-back任务，发现对语音（voice）和词（word）进行更新操作时，二者涉及的神经系统是截然不同的。
早期的证据表明额叶和顶叶的激活与工作记忆中言语材料的保持和复述相关：额下回以及与言语相关的区域用于复述，而上顶皮层和后顶皮层与存储有关。本研究中采用不同视觉刺激材料，尽管更新成绩在反应时和正确率上没有显著差异，表现出功能层次上的一致性，但它们是否使用相同的神经网络还有待于进一步的研究。
4.2更新过程中操作与存储的分离
再认作业的结果表明，在完成更新任务时，不同材料在记忆中保持有所不同，越是抽象的材料保持效果就越差。这说明更新任务所涉及的2个成分，即更新操作过程与存储成分是相互独立的。Dick等人曾把N-back任务和Sternberg任务分别作为操作任务和存储任务，采用参数控制的方法来增加操作负载或存储负载，发现言语工作记忆任务中的操作和存储有区别地激活了同一区域[16]。这一结果与本研究所发现的更新与再认分离是一致的。对于更新操作过程而言，无论刺激的性质如何，加工是否达到较深的（语义或形象）层次，更新操作针对的只是某种代码；而再认所依赖的存储则与刺激的特性、刺激加工的深度相关。
5结论
（1）工作记忆的更新是一种程序化的认知过程，独立于刺激类型。
（2）更新任务中的存储与更新操作是相互独立的过程，在作业任务上可以产生分离。
参考文献
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14 Rama P, Martinkauppi S, Linnankoski I, et al. Working memory of identification of emotional vocal expressions: A fMRI study. NeuroImage, 2001, 13: 1090～1101
篇7
关键词：夏玉米；杂草；优势种群；群落构成
中图分类号：S513：S451.0文献标识号：A文章编号：1001-4942（2013）09-0096-03
泰安市地处鲁中山区，属温带大陆性气候，四季分明，寒暑适宜，光温同步，雨热同季，适宜玉米的生长发育。2012年全市夏玉米种植面积19×104 hm2，产量153×104 t。由于玉米田杂草种类多，危害严重，一般减产20%～30%，严重的达到40%以上，严重影响玉米产量和品质。掌握夏玉米田间杂草种类和优势种群落，可以为制定切实可行的综合治理技术、合理地选用除草药剂、掌握防除适期提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 试验时间及地点
试验地点为泰安市岱岳区大汶口镇。试验田前茬种植冬小麦，麦收后直播玉米，播种时间为6月15日，玉米品种为郑单958。
1.2 调查方法
采取倒置“W”9点取样法（如图1），田间调查取各样方面积0.25 m2 （50 cm × 50 cm）内杂草种类、株数和平均高度，同时记载所调查地块的其它有关资料。
图1 倒置“W”9点取样示意图
1.3 量化指标及计算方法
以上四式中，n为调查样地数；9为调查样方数；Xi为某种杂草在调查样地i中出现的样方次数；Di为某种杂草在调查样地i中平均密度（株数/m2）；Yi为某种杂草在调查样地i中出现与否，为1或0；Ci为某种杂草在调查样地i中的平均盖度。盖度是指杂草在样地中的投影面积所占样地面积的百分比，由于杂草的叶片高低分层，互相重叠，各种杂草的总盖度或一种杂草的盖度可能超过100%。盖度实测比较复杂，一般采用目测估值法计算。
2 结果与分析
篇8
【摘要】 目的研究草酸在光照和不同温度条件下对人参愈伤组织细胞生长及次生代谢物质积累的影响。方法利用人参悬浮细胞培养体系，通过改变培养条件和在培养基中添加草酸，通过一定时间的培养后检测细胞增长和次生代谢成分的积累。结果光照和培养温度对草酸的诱导效果有很大影响，其中在12 h/d的光照下， 0.01～1 mmol·L-1的草酸对细胞生长和皂苷积累都有促进作用，而10 mmol·L-1的草酸对多糖积累有促进作用;在4个温度(22，24，26和28℃)水平下，随着培养温度的升高，添加草酸对细胞生长的抑制作用增强，但有利于多糖和皂苷的积累。结论在使用草酸作为诱导子时，选择合适的培养温度和光照条件有利于培养细胞的生长和次生代谢物质积累。
【关键词】 人参; 草酸; 愈伤组织; 多糖; 皂苷
Abstract：ObjectiveTo study the effects of oxalate treatment on both the growth and secondary metabolite accumulation of Ginseng callus cells. MethodsExamine the cell growth and accumulation of secondary metabolites of suspension Ginseng cells after modulation of culture conditions and addition of oxalate into the medium.ResultsBoth culture temperature and lumination braught about manifest effect on the induction of cell growth and secondary metabolite accumulation by oxalate. In a 12 h cycle of light/darkness， the oxalate at the concentration range of 0.01 to 1 mmol·L-1 improved the cell growth and saponin accumulation， however， 10 mmol·L-1 oxalate could exhibit effective induction on polysaccharide accumulation. In the four levels of culture temperature (22，24，26 and 28℃)， addition of oxalate could increase its inhibition on the cell growth with the elevation of culture temperature， however， which could increase the accumulation of both polysaccharides and saponin. ConclusionAdoption of proper lumination period and culture temperature will favor the accumulation of secondary metabolies accumulation and cell growth when oxalate is applied to the cell culture as an elicitor.
Key words：Ginseng; Callus; Oxalate; Polysaccharide; Saponin
在培养基中添加诱导子是提高植物细胞次生代谢能力的有效手段，它们的诱导效果都得到了大量试验结果的验证[1]。在红豆杉细胞培养时加入水杨酸，可以使紫杉醇最高含量达到6.8 mg/ L ，比对照提高约6倍[2]。Ketchum等[3]发现加入茉莉酮酸甲酯， 也能促进紫杉醇合成。国内外均有报告认为草酸是一种非常有效的非生物诱抗剂，张宗申等[4]和李玉红等[5]发现草酸可以诱导黄瓜对炭疽病和霜霉病产生局部和系统的持久抗性。上述结果说明，使用诱导子可以改善培养细胞在逆境下的生长和次生代谢状况。
本研究以人参愈伤组织为材料，研究在不同温度和光照条件下添加草酸对细胞生长和次生代谢的影响，找出草酸作为诱导子的合适使用方法。
1 材料
本研究所用的新鲜4年生人参RadixGinseng Ginseng.根均来源于吉林人参养殖场，取侧根的根尖部分作外植体诱导人参愈伤组织。
2 方法
2.1 诱导子的添加 草酸溶液在使用前均用微孔滤膜(0.45 μm)进行过滤灭菌。取一定量的草酸溶液加入到培养基中使其终浓度为0.01，0.1，1，10 mmol·L-1，分别在22，24，26，28℃和24，26℃下光照12 h/d培养到28 d收获细胞，然后测定其干重、人参多糖和人参皂苷的含量。
2.2 细胞干重的测定收集愈伤组织在60℃恒温箱中干燥至恒重，精确称重、保存。
2.3 人参多糖的测定
2.3.1 提取[6]将愈伤组织在50℃下烘干至恒重，粉碎，准确称取1.500 g，用滤纸包好置索氏提取器中加入适量70% 的乙醇提取3 h。滤纸包挥干乙醇，放于小烧杯中加入20倍量的去离子水超声波提取110 min。水提液浓缩定容于25 ml的容量瓶中备用。
2.3.2 含量测定 采用蒽酮比色法[7]的方法测定人参多糖。
2.4 人参皂苷总量的测定人参中人参总皂苷含量的测定采用国家标准的方法-GB/T15517.1-1995。对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re标准品10 mg，加甲醇5 ml，振荡，摇匀，待用。
精密称取对照品溶液与样品溶液各50 μl，分别置具塞刻度试管中，蒸干后，加入8%香草醛乙醇试剂液0.5 ml(8%香草醛乙醇试剂液：取香草醛0.8 g，加无水乙醇使溶解成10ml，摇匀，即得)，体积分数72%硫酸试剂液5 ml，充分摇匀，混匀后置60℃恒温水浴锅上加热10 min，立即用冷水冷却10 min，摇匀，以试剂作空白，于544 nm波长下分别测定吸收度[8]。
3 结果
3.1 草酸在不同温度下对细胞生长及代谢物生成的影响见图1。
由图1-a对照组可知随着温度的上升细胞生长受到了抑制，0.1和1 mmol·L-1组在各个温度下均高于对照组，1 mmol·L-1组在26℃时显著促进了细胞生长，而10 mmol·L-1草酸抑制细胞的生长。从图1-b对照组可以看出温度对多糖含量影响不大，在各个温度下均有高于对照组，其中在28℃草酸浓度0.01 mmol·L-1时取得最高值24.33 mg·g-1。从图1-c对照组可以看出温度升高皂苷含量略有升高，在22℃时0.1，1 mmol·L-1组高于对照组，24℃时0.01 mmol·L-1高于对照组，26℃时0.01，0.1高于对照组，28℃时0.01，1 mmol·L-1高于对照组，其中28℃1 mmol·L-1组取得最高值16.09 mg·g-1。
3.2 光照条件下草酸对细胞生长及代谢物生成的影响见图2。由图2-a可知草酸在0.01～1 mmol·L-1范围内，24℃，26℃光照条件下对细胞生长有很大的促进作用，0.01 mmol·L-1组和0.1 mmol·L-1组分别在两个温度中达到最高，10 mmol·L-1草酸抑制细胞的生长。由图2-b可知，除10 mmol·L-1草酸处理的细胞中多糖含量高于对照组，其它浓度下细胞中多糖含量无明显变化。由图2-c可知，草酸浓度在0.01～1 mmol·L-1范围内，人参细胞中的皂苷含量均高于对照组。草酸浓度为1 mmol·L-1时，在两个温度下含量都达到最高值20.19 mg·g-1和13.81 mg·g-1。培养基中加入一定浓度的草酸对细胞中皂苷的积累有促进作用，草酸浓度的控制起关键作用。
4 讨论
草酸在植物细胞内主要以草酸钙结晶的形式存在，草酸钙沉淀与细胞质中的游离态Ca2+之间处于动态平衡之中，可以调节细胞内外Ca2+的分布[9]。张宗申等[10]发现外源草酸处理可以减轻热胁迫下辣椒叶片的伤害，与草酸影响了细胞内外Ca2+分布、结合态钙比例升高有很大关系。Volk等[11]在研究Pistia stratiotes 细胞代谢时发现，钙离子通道参与了细胞中草酸钙形成过程，直接调节细胞内外Ca2+浓度。Sanders[12]等提出，细胞质中Ca2+的不同进出路线均能影响胞内Ca2+的动态变化。结合本研究结果，草酸能保护高温、光照逆境下的人参细胞并且促进人参多糖和皂苷含量增加，可能与它调节细胞内外Ca2+分布或引起Ca2+信号有关。
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篇9
[关键词] 断肠草；水提液；特异性PCR；分子鉴定
[收稿日期] 2013-01-16
[基金项目] 北京市科技专项“道地中药功能基因组北京市重点实验室2012年阶梯计划项目”；贵州省中药现代化科技产业研究开发专项（黔科合ZY字[2013]3001号）；公安部重点研究计划项目（2013012DYJD07）
[通信作者] *袁媛，E-mail： 断肠草为马钱科植物钩吻 Gelsemium elegans （Gardn.el Champ） Benth. 的茎藤。又名胡蔓藤、野葛、水莽草、大茶叶、烂肠草，是一种剧毒草药[1]。有祛风攻毒、消肿、止痛之功效。可治湿疹、痈肿、风湿痹痛等[2-3]。由于断肠草常常缠绕和混杂在其他植物中，且其花蕾形状与具有清热解毒功能的金银花 Lonicera japonica Thunb.极为相似。由于二者较难辨认、容易混淆，近年来调查发现误将断肠草为金银花煮水当凉茶喝而中毒的事件时有发生，在断肠草中毒的78例临件中，发现43例为因误将断肠草为金银花煮水当凉茶喝而中毒[4]。因此，建立一种用于快速鉴别断肠草和金银花水提液的方法对保障人民群众生命安全是十分重要的。
目前，国内外一般采用高效液相色谱法、气相色谱—质谱联用法等通过分析断肠草中的生物碱的含量对断肠草进行鉴定[5-8]；但这些方法比较繁琐，不利于推广。近年来，药材分子鉴别技术如DNA条形码、位点特异性PCR等方法迅速发展，其克服了药材传统鉴别方法中样品需求量大、主观性大等问题。其中位点特异性PCR方法已成功用于人参、陈皮、藁本、金银花等中药材的真伪鉴别[9-12]，但对断肠草与金银花等易混品之间的分子鉴别还尚未见报道，而且通过分子手段鉴别药材水提液的报道也相对较少。本研究建立了水提山银花药材的DNA提取方法，同时通过特异性PCR的方法实现了断肠草与金银花类药材水提液的快速、准确鉴别，为今后中毒诊断提供参考依据。
1 材料
2×CTAB提取液，1×TAE缓冲液，琼脂糖（Promega公司），溴化乙锭（Fluka公司），DNA Taq 聚合酶（Takara公司），2 000 bp DNA Markar（Takara公司），三氯甲烷﹑无水乙醇﹑异丙醇均为国产分析纯。
PCR仪（德国Eppendorf， 型号5332），电泳系统（北京市六一仪器厂，型号DYY-12），低温冷冻离心机（德国Eppendorf， 型号5810R），紫外凝胶成像分析仪（英国Syngene， 型号GBOXHR），混合型球磨仪（德国Retsch，型号MM400），数控超声波清洗器（型号KQ-500DE），微量移液器（德国Eppendorf）。
本实验选取71份材料：包括采自广西的断肠草7份；采自贵州的断肠草3份，采自安徽的断肠草3份，金银花25份，分别采自山东、河南、广西、江苏和北京；山银花20份，分别采自广西、云南、贵州和山东；水银花5份，采自广西；以及7批购自市场上经过炮制处理的金银花药材和1批山银花样品。凭证标本保存于中国中医科学院中药资源中心和广西药用植物园，见表1。
表1 实验材料
Table 1 Plant samples
2 方法
2.1 鉴别引物的设计 选择通用引物 psbA-trnH （上游引物 psbA：5′-GTT ATGCATGAACGTAATGCTC-3′；下游引物 trnH：5′-CGCGCATGGTGGATTCACAATCC -3′）对断肠草样品进行扩增，经过PCR扩增后，PCR产物由北京六合华大基因科技股份有限公司测序部测序。搜索Genbank中金银花的 psbA-trnH 序列（Genbank登录号GU1353313.1；JN045253.1），然后进行同源比对，根据其变异区使用primer premier 5.0软件设计一对特异引物GEF1/GER1，设计的特异引物扩增片段大小为97 bp，引物序列见表2。
2.2 药材水提液的总DNA提取 取1.0 g断肠草和金银花类药材的干燥粉末，加入50 mL蒸馏水，沸水煮30 min。冷却放置室温，用滤纸滤过，吸取上清溶液25 mL，加入30%乙醇10 mL，轻微振摇混匀15 min，离心30 min （ 6 000 r·min-1）。离心后弃上清，沉淀加入CTAB提取液，采用CTAB法进行DNA提取。提取后的DNA采用特异性引物进行扩增。反应体系总体积为20 μL，包括10×buffer缓冲液2 μL， dNTP1.6 μL，引物各0.5 μL， EX Taq 酶0.2 μL，25% PVP 0.5 μL，BSA 0.2S5 μL，DNA0.5 μL，灭菌蒸馏水13.95 μL。进行如下反应：解链温度95 ℃，时间5 min，退火温度53 ℃，时间30 s，复性温度72 ℃，时间为45 s， 35个循环后72 ℃延伸7 min，获得扩增产物。分别取3 μL扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。
2.3 模板DNA质量的检测 为了保证特异性PCR的扩增成功率，对不同样品的DNA进行了质量检测。取不同样品DNA，终浓度约为10 mg·L-1，使用通用引物psbA和trnH进行PCR反应以检测模板DNA质量。反应体系总体积为20 μL，包括10×buffer缓冲液2 μL， dNTP 1.6 μL，引物各0.5 μL， EX Taq 0.2 μL，DNA 0.5 μL，灭菌蒸馏水14.7 μL，约10 ng模版DNA。PCR反应液配制完后，轻轻震荡混匀，将PCR管放入PCR仪中，进行如下反应：解链温度95 ℃，时间5 min；退火温度57 ℃，时间30 s；复性温度72 ℃，时间为1 min 40 s；35个循环后72 ℃延伸7 min，获得扩增产物。取3 μL扩增产物，采用1%的琼脂糖凝胶，在电压100～150 V下电泳15 min，凝胶成像系统下观察并拍照。
2.4 水煮时间、样品量、通用引物对水提山银花药材扩增的影响 根据上述提取DNA的方法，选取水提山银花药材DNA作为模板，并分别对以下因素：①不同水煮时间、②不同提取样品量、③不同通用引物进行了研究，引物序列见表2。
3 结果及讨论
3.1 药材水提液DNA提取及质量检测 DNA的提取是分子鉴别的关键步骤，本研究用于提取DNA的样品为水煮药材后的溶液，因此给DNA提取带来很大的困难。本文采用了首先对溶液中的DNA进行富集，然后再利用CTAB法进行提取的策略。
通过琼脂糖凝胶电泳检测药材水提液DNA，结果发现提取出的DN段呈弥散状态，分析可能是由于高温水煮后造成DNA的降解。
3.2 药材水提液提取方法 在上述建立的药材水提液DNA提取方法基础上，本文利用山银花药材分别考察了水提时间（30， 60， 90， 120，150， 180， 210， 240 min），药材质量（0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 g）对PCR扩增效率的影响。扩增引物为ITS通用引物。结果表明，在0.5～4 h的水提时间和4.0～24.0 g·L-1的药材质量与水提液体积比例，提取的水溶液DNA均可以有效的扩增出ITS DNA条带。
3.3 不同通用引物扩增药材水提液DNA 为了进一步分析药材水提液DNA对PCR反应中不同引物的适应性，以山银花水提液DNA为模板，利用 rbc L （1F/724R）， psbA-trnH （psbA/trnH），ITS （ITS2F/ 表2 本实验中的引物及反应条件
Table 2 Primers and reaction conditions for study
ITS2R）， trn L-trn F（trnL/trnF），matK（3F/1R）引物进行PCR扩增。结果表明，使用以上通用引物在山银花水提液DNA中均可扩增出条带。
3.4 鉴别特异性PCR引物设计 选择通用引物 psbA-trnH 对断肠草样品进行PCR扩增，搜索Genbank数据库中金银花的 psbA-trnH 序列，然后通过ClastulW软件进行序列比对。两物种 psbA-trnH 序列相似度仅为12.15%，且存在350 bp的大片段缺失，根据其变异区采用Primer Premier 5.0软件设计特异性鉴别引物GEF1/GER1，鉴定片段大小为97 bp。
利用特异性PCR方法对特异性鉴别引物进行验证，选取13个断肠草、25个金银花、20个山银花、5个山银花及7批不同药店采购的金银花药材和1批山银花药材DNA 为模板进行PCR，结果发现在断肠草样品DNA中可以扩增出一条带，而金银花类药材DNA则扩增不出条带，表明本研究所设计的特异性鉴别引物GEF1和GER1可以作为断肠草和金银花类药材及其水提液的鉴别引物。
3.5 断肠草及金银花类药材及其水提液特异性PCR鉴别 利用特异性鉴别引物GEF1和GER1对部分断肠草、金银花和山银花水提液DNA进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳结果见图1。断肠草可扩增出97 bp片段，而金银花类药材则不能扩增出条带。
4 小结
通常人们误服断肠草水煮液中毒，因此找出一种鉴别断肠草水提液的方法至关重要。本研究建立了一种断肠草与金银花类药材水提液DNA提取的方法，这为鉴别断肠草水提液提供了基础。利用特
1. 断肠草水提液（广西）；2. 断肠草水提液（安徽）；3. 断肠草（贵州）；4. 金银花（河南）；5. 金银花（广西）；6. 金银花水提（江苏）；7. 金银花（北京）；8. 山银花（广西）；9. 山银花（云南）；10. 山银花水提液（贵州）；11. 水银花（广西）12. 空白对照。M.DNA分子量标准：从上至下依次为2 000，1 000，750，500，250，100 bp。
图1 断肠草及金银花类药材水提液特异性PCR鉴别
Fig.1 Specific PCR amplification of Gelsemium elegans and Lonicera japonica and its close species
异性PCR方法可解决断肠草与金银花类药材水提液的鉴别问题，该方法简单、快速，重复性强，利于推广。同时也将为今后有关断肠草中毒事件的分析与鉴定提供新的思路。
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Study on molecular identification of water extracts from Gelsemium elegans and
Lonicera japonica and its close species by specific PCR amplification
CUI Zhan-hu1，2， JIANG Chao， HUANG Lu-qi1， LI Min-hui ZHOU Tao， ZHOU Li-she YUAN Yuan（1.National Resource Center for Chinese Materia Medica， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China；
2. Inner Mongolia University of Science and Technology， Baotou Medical College， Baotou 014060， China；
3. Guiyang Collage of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550002， China）
[Abstract] Objective： To explore the new method of discriminating Gelsemium elegans from Lonicera japonica and its close species by using specific PCR amplification. Method： Thirteen samples of the different G. elegans materials and 58 samples of L. japonica ， L. macranthoides and L. dasystyla were collected. The total DNA of the samples were extracted， and the DNA of G. elegans ， L. japonica and L. macranthoides water extracts were extracted. Psb A-trn H sequence from G. elegans was amplified by PCR and sequenced unidirectionally， ClustulW was used to align psb A-trn H sequences of the G. elegans and L. japonica and its close species from GenBank database. Result： All samples were amplified by PCR with specific primer， DNA from G. elegans would be amplified 97 bp whereas PCR products from all of Lonicera samples had not bands. Conclusion： Specific PCR amplification can be used to identify G. elegans from L. japonica and its close species successfully and is an efficient molecular marker for authentication of G. elegans and L. japonica and its close species.
篇10
1 茬口安排
大棚草莓于9月中上旬定植，10月上旬覆盖地膜，12月至翌年1月陆续开始采收，4—5月份采收完毕。东方蜜1号甜瓜于2月初至2月中旬育苗，3月上旬至中旬定植于草莓垄间，“五一”节前后坐果，6月上旬成熟上市。3月下旬至4月份为草莓和甜瓜的共生期，此时草莓已处于生长结果后期，所以套种甜瓜后相互间的生长影响较小。
2 甜瓜育苗
东方蜜1号甜瓜采用营养钵育苗。营养土配制采用未种植过瓜类作物的土壤与腐熟有机肥按3 ∶ 1的体积比混合，过筛后拌入500倍的多菌灵消毒。甜瓜种子用55 ℃ 温水浸泡24 h后，在28 ℃ 恒温下催芽24 h，待种子露白后，即可播种。把发芽的种子播入苗床上浇足底水的营养钵中（每钵1粒），边播边盖营养土，覆土厚度 1 cm左右。播种后在营养钵上盖1层地膜，打开电热线电源进行加温，在苗床上加盖小拱棚，加上塑料大棚，共3层膜，这样可较好的保温保湿。待甜瓜出苗后及时去除覆盖在营养钵上的地膜。苗期每隔5～7 d喷药1次，以预防苗期猝倒病和枯萎病。
3 甜瓜定植
待甜瓜幼苗长至2叶1心时即可定植，一般定植时间在3月上旬至中旬。在种植草莓的畦上用打孔器打孔，将幼苗从营养钵中取出，尽量防止散坨，定植于孔内，浇透底水。套种方式可分3种：（1）爬地式。3畦草莓组成1个种植单元，甜瓜苗套种在中间1条草莓畦上，双蔓整枝。2条瓜蔓分别爬向两侧的草莓畦。株距45 cm左右，667 m2约定植500株，每株留2果。（2）半爬地式。2畦草莓组成1个种植单元，甜瓜苗套种在其中1条草莓畦上，双蔓整枝。1条瓜蔓搭架直立上爬，另1条瓜蔓爬向一侧的草莓畦上。株距45 cm左右，667 m2约定植750株，每株留2果。（3）立架式。甜瓜苗套种在每条草莓畦上，单蔓整枝，立架栽培。株距45 cm左右，667 m2约定植1 500株，每株留1果。3种方式均可采用，其中立架式与半爬地式甜瓜产量相对较高，但对草莓后期生长的影响相对较大。爬地式对草莓后期生长影响相对较小，但甜瓜产量相对较低。生产者可根据具体情况，选择最佳的套种方式。
4 田间管理
4.1 整枝留果
甜瓜立架栽培时宜采用单蔓整枝，即每株留1果，坐果节位15～18节，坐果子蔓留1片叶摘心，主蔓28节左右（1.8～2 m） 打顶，去除其他子蔓。爬地栽培和半爬地栽培时宜采用双蔓整枝，即在4片真叶时摘心，选留2条健壮子蔓，其余子蔓全部摘除。每条子蔓可留2批或3批果，即每条子蔓的首批坐果节位13～15节，22～25节坐第2批果，27～28节打顶，待第2批瓜采收前，在后部新发出的侧枝上再每蔓选留1果，即第3批果。整枝应遵守的原则：晴天整枝，阴雨天不整；上午整枝，下午不整；整枝宜早不宜迟（即减小伤口）。
4.2 棚温控制
甜瓜苗定植后，与草莓有1个多月的共生期，此时草莓已接近收获末期，要以甜瓜管理为主，使棚内小气候尽量符合甜瓜的生长要求，但也要尽可能不影响草莓的采收。在瓜苗定植后2～3 d，大棚内要尽量保温保湿，以促进瓜苗缓苗。缓苗后还应兼顾到草莓的生长，要注意大棚通风排湿，并使白天棚温控制在25～30 ℃，夜间不低于10 ℃。温度过低不适合甜瓜生长，过高则对草莓生长不利，因此要协调好两者关系。当草莓采收完毕后，要及时拔除草莓残株，为甜瓜提供更大的生长空间。甜瓜蔓伸长至坐果节位时，要注意通风降湿，防止霜霉病的发生。果实膨大阶段，棚温白天控制在30 ℃ 上下，夜间18 ℃ 左右，昼夜温差10～15 ℃。
4.3 人工辅助授粉
为保证适时坐果，要人工辅助授粉，授粉时间在 7：00—9：00。在难坐果的情况下，可合理使用坐果灵，在雌花开花当天或开花前2～3 d使用，需注意坐果灵的使用浓度，要严格按照使用说明进行。人工授粉或使用坐果灵时，每蔓均处理2果。
4.4 定果及吊瓜
为保证甜瓜果实的品质及商品率，幼果长至鸡蛋大时应及时进行疏果，每蔓保留1个果形端正、无畸形的果实，其余全部摘除。当果实长至拳头大时，及时用绳子一端绑于瓜柄部位，另一端绑于棚架上，将瓜吊起，以减轻瓜蔓负载，防止后期果实掉落。
4.5 病虫害防治
病虫害防治应采取“预防为主、综合防治”的方针。优先采用农业防治措施，选用生物性及高效低毒低残留农药，按无公害农药使用准则，在病害发生初期可使用嘧菌酯、霜脲氰·锰锌、百菌清、雷多米尔、金雷多米尔防治霜霉病等；用它信防治白粉病；用百菌清■甲基硫菌灵、可杀得、农用链霉素防治蔓枯病；用烟熏灵防治棚内多种病害，以控制病害发生与危害。发现害虫时，及时用吡虫啉等防治蚜虫，用阿维菌素防治潜叶蝇，用安打、除尽、清敌、万绿等防治瓜绢螟。
4.6 防止裂瓜
东方蜜1号甜瓜果实成熟后期易发生裂瓜，在果实成熟前15 d应停止浇肥水。当果实接近成熟时，如遇阴雨天气或土壤、棚内空气湿度过大时，应及时通风排湿，或适当伤根、伤茎（果柄部位），使植株呈适当失水的萎蔫状态，从而控制向果实输送水分，减少裂瓜。