外聘合同范文
时间:2023-03-29 21:59:30
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篇1
乙方:
经甲乙双方协商达成聘用合同,条款如下:
1、甲方聘用乙方工作,时间为 年 月 日至 年 月
日。
2、在聘用工作期间,乙方为甲方工作,乙方必须遵守甲方规定的工作职责要求,工作由甲方安排。
3、在聘用期间,甲方只负责乙方的工资,不负责四金交纳和其它福利待遇(斟情考虑其它待遇)。聘用工资每月为 元。如有缺勤,适当扣除相应工资。如有工作变动,双方协商,调整聘用工资。
4、在聘用期间,如乙方有重大违反校纪、校规的行为,本合同将中止,责任由乙方自负。对重大违纪违规的解释权在甲方。
5、乙方聘期满,甲乙双方均感到合适,双方可以签订续聘合同。
6、本合同经双方签字后生效。
7、本合同一式两份,甲、乙双方各执壹份,具有同等法律效力。
8、合同双方签字。
甲方代表:
乙方:
9、签字时间: 年 月 日
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_________公司(单位)(以下简称甲方)
_________(以下简称乙方)
身份证号:
家庭住址:
联系电话:
依照国家有关法律条例,就聘用事宜,订立本劳动合同。
第一条 试用期及录用
(一)甲方依照合同条款聘用乙方为员工,乙方工作部门为_________职位,工种为,乙方应经过三至六个月的试用期,在此期间,甲乙任何一方有权终止合同,但必须提前七天通知对方或以七天的试用工资作为补偿。
(二)试用期满,双方无异议,乙方成为甲方的正式合同制劳务工,甲方将以书面方式给予确认。
(三)乙方试用合格后被正式录用,其试用期应计算在合同有效期内。
第二条 工资及其它补助奖金
(一)甲方根据国家有关规定和企业经营状况实行本企业的等级工资制度,并根据乙方所担负的职务和其他条件确定其相应的工资标准,以银行转帐形式支付,按月发放。
(二)甲方根据盈利情况及乙方的行为和工作表现增加工资,如果乙方没达到甲方规定的要求指标,乙方的工资将得不到提升。
(三)甲方(公司主管人员)会同人事部门,在如下情况,甲方将给乙方荣誉或物质奖励,如模范地遵守公司的规章制度,生产和工作中的突出贡献或物质奖励,技术革新、经营管理改善,乙方也
由于有突出贡献得到工资和职务级别的提升。
(四)甲方根据本企业利润情况设立年终奖金,可根据员工劳动表现及在单位服务年限发放奖金。
(五)甲方根据政府的有关规定和企业状况,向乙方提供津贴和补助金。
(六)除了法律、法规、规章明确提出的要求补助外,甲方将不再有义务向乙方提供其它补助津贴。
第三条 工作时间及公假
(一)乙方的工作时间每天为8小时(不含吃饭时间),每星期工作五天半或每周工作时间不超过44小时,除吃饭时间外,每个工作日不安排其它休息时间。
(二)乙方有权享受法定节假日以及婚假、丧假等有薪假期。甲方如要求乙方在法定节假日工作,在征得乙方同意后,须安排乙方相应的时间轮休,或按国家规定支付乙方加班费。
(三)乙方成为正式员工,在本企业连续工作满半年后,可按比例获得每年根据其所担负的职务相应享受________天的有薪年假。
(四)乙方在生病时,经甲方认可的医生及医院证明,过试用期的员工每月可享受有薪病假一天,病假工资超出有薪病假部分的待遇,按政府和单位的有关规定执行。
(五)甲方根据生产经营需要,可调整变动工作时间,包括变更日工作开始和结束的时间,在照顾员工有合理的休息时间的情况下,日工作时间可做不连贯的变更,或要求员工在法定节假日及休息日到岗工作。乙方无特殊理由应积极支持和服从甲方安排,但甲方应严格控制加班加点。
第四条 员工教育
在乙方任职期间,甲方须经常对乙方进行职业道德、业务技术、安全生产及各种规章制度及社会法制教育,乙方应积极接受这方面的教育。
第五条 工作安排与条件
(一)甲方有权根据生产和工作需要及乙方的能力,合理安排和调整乙方的工作,乙方应服从甲方的管理和安排,在规定的工作时间内按质按量完成甲方指派的工作任务。
(二)甲方须为乙方提供符合国家要求的安全卫生的工作环境,否则乙方有权拒绝工作或终止合同。
第六条 劳动保护
甲方根据生产和工作需要,按国家规定为乙方提供劳动保护用品和保健食品。对女职工经期、孕期、产期和哺乳期提供相应的保护,具体办法按国家有关规定执行。
第七条 劳动保险及福利待遇
(一)甲方按国家劳动保险条例规定,为乙方支付医药费用,病假工资、养老保险费用及工伤保险费用。
(二)甲方根据单位规定提供乙方宿舍和工作餐(每天________次)。
第八条 解除合同
(一)符合下列情况,甲方可以解除劳动合同
(1)甲方因营业情况发生变化,而多余的职工又不能改换其它工种。
(2)乙方患病或非因工负伤,按规定的医疗期满后,不能从事原工作,也不能调换其它工种
(3)乙方严重违反企业劳动纪律和规章制度,并造成一定后果,根据企业有关条例和规定应予辞退
的,甲方有权随时解除乙方的劳动合同。
(4)乙方因触犯国家法规被拘留,劳动教养、判刑,甲方将作开除处理,劳动合同随之终止。
(二)符合下列情况,乙方可以解除劳动合同。
回答人的补充 XX-05-10 06:07
(1)经国家有关部门确认,劳动安全,卫生条件恶劣,严重危害了乙方身体健康的。
(2)甲方不履行劳动合同或违反国家政策、法规、侵害乙方合法利益。
(3)甲方不按规定支付乙方劳动报酬的。
(三)在下列情况下,甲方不得不解除劳动合同。
(1)乙方患病和因工负伤,在规定的医疗期内的。
(2)乙方因工负伤或患职业病,正在进行治疗的。
(3)女员工在孕期、产期或哺乳期的。
(四)乙方因工负伤或患职业病、医疗终结经政府有关部门确认为部分丧失劳动能力的,企业应予妥善安置。
(五)任何一方解除劳动合同,一般情况下,必须提前一个月通知对方,或以一个月的工资作为补偿,解除合同的程序按企业有关规定办理。
(六)乙方在合同期内,持有正当理由,不愿继续在本企业工作时,可以提出辞职,但须提前一个月书面通知甲方,经甲方批准后生效。辞职员工如系由企业出资培训,在培训期满后,工作未满合同规定年限的,应赔偿甲方一定的培训费用。未经甲方同意擅自离职,甲方有权通过政府劳动部门,要求乙方返回工作岗位,并赔偿因此给甲方造成的经济损失。
回答人的补充 XX-05-10 06:08
第九条 劳动纪律
(一)乙方应遵守国家的各项规定和企业的《员工手册》以及单位的各项规章制度。
(二)乙方如触犯刑律,受法律制裁或违反《员工手册》和甲方规定的其它规章制度,甲方有权按《员工手册》等规定,分别给予乙方相应的纪律处分,直至开除,因乙方违反《员工手册》和其它规章制度,造成本企业利益受到损害,如企业声誉的损害、财产的损坏,甲方根据严重程度,可采取一次性罚款措施。
(三)如果乙方违反合同规定,贪污受贿,严重玩忽职守或有不道德、粗鲁行为,引起或预示将引起严重损害到他人人身和财产利益,乙方触犯刑律受到法律制裁等,上述种种,甲方有权立即予以开除,并不给予"合同补偿金"和"合同履约金"。乙方贪污受贿或损害他人人身和财产利益所造成的损失。由乙方负完全承担赔偿责任。
回答人的补充 XX-05-10 06:08
(四)乙方在合同期内和以后,不得向任何人泄漏本企业的商业机密消息。乙方在职期间不得同时在与本企业经营相似的企业、团体以及与本企业有业务关系的企业团体兼职。乙方合同终止或其他原因由本企业离职时,应向部门主管人员交回所有与经营有关的文件资料,包括通信、备忘录、顾客清单、图表资料及培训教材等。
第十条 合同的实施和批准
(一)本合同经_____________讨论制定,报经_______批准,用_______文字书写,内容以中文为准,合同解释权属本公司人事部。
(二)单位《员工手册》、《雇员犯规及警告通告》及其它经济纪律规定均为合同附件,是合同的组成部分。
回答人的补充 XX-05-10 06:08
(三)本合同一经鉴定,甲、乙双方必须严格遵守,任何一方不得单方面修改合同内容,如有未尽事宜或与政府有关规定抵触时,按政府有关规定处理。
(四)本合同自鉴定之日生效,有效期为________年于________年_______月_______日到期,合同期满前两个月,如双方无异议本合同自行延长________年。
(五)本合同一式两份,甲乙双方各执一份,由甲方上级主管部门和国家劳动管理部门监督执行。
篇2
二、合同期自 年 月 日起至 年 月 日止;
三、受聘方的工作任务(另附页);
四、受聘方的月薪为人民币 元,其中 %可按月兑换外汇;
五、聘方的义务:
1、向受聘方介绍中国有关法律、法规和聘方有关工作制度以及有关外国专家的管理规定。
2、对受聘方的工作进行指导、检查和评估。
3、向受聘方提供必要的工作和生活条件。
4、配备合作共事人员。
5、按时支付受聘方的报酬
六、受聘方的义务:
1、遵守中国的法律、法规,不干预中国的内部事务。
2、遵守聘方的工作制度和有关外国专家的管理规定,接受聘方的工作安排。业务指导、检查和评估。未经聘方同意,不得兼任与聘方无关的其他劳务。
3、按期完成工作任务,保证工作质量。
4、尊重中国的宗教政策。不从事与专家身份不符的活动。
5、尊重中国人民的道德规范和风俗习惯。
七、合同的变更、解除和终止:
1、双方应信守合同,未经双方一致同意,任何一方不得擅自更改、解除和终止合同。
2、经当事人双方协商同意后,可以变更、解除和终止合同。在未达成一致意见前,仍应当严格履行合同。
3、聘方在下述条件下,有权以书面形式通知受聘方解除合同:
(1)受聘方不履行合同或者履行合同义务不符合约定条件,经聘方指出后仍不改正的;
(2)根据医生诊断,受聘方在病假连续30天后不能恢复正常工作的;
4、受聘方在下述情况下,有权以书面形式通知聘方解除合同:
(1)聘方未按合同约定提供受聘方必要的工作和生活条件;
(2)聘方未按时支付受聘方报酬。
八、违约金:
当事人一方不履行合同或者履行合同义务不符合约定条件,即违反合同时。应当向另一方支付500-20xx美元(或相当数额的人民币)的违约金。
受聘方因不可抗力事件要求解除合同,需出具有关机构证明,经聘方同意后,离华的费用自理;受聘方若无故解除合同,除离华费用自理外.还应当向聘方支付违约金。
聘方因不可抗力事件要求解除合同.经受聘方同意后,离华费用由聘方负担;聘方若无故解除合同.除负担受聘方离华费用外,还应当向受聘方支付违约金。
九、本合同附件为合同不可分割的-部分,与合同具有同等效力。
十、本合同自双方签字之日起生效,合同期满即自行失效。当事人一方要求签订新合同,必须在本合同期满90天前向另一方提出,经双方协商同意后签订新合同。
受聘方合同期满后,在华逗留期间的一切费用自理。
十一、仲裁
当事人双方发生合同纠纷时,尽可能通过协商或者调解解决。若协商。调解无效,可向国家外国专家局设立的外国文教专家事务仲裁机构申请仲裁。
本合同于 年 月 日在 (地点)签订,一式两份,每份都用中文和文写成.两种文本同等作准。
篇3
乙方:_________
一、双方本着友好合作精神,自愿签订本合同并保证认真履行合同中约定的各项义务。
二、甲方的义务:
1.甲方必须有聘专资格证书,必须在外教到学校后2周内与其签订国家外专局标准合同。
2.向外教介绍中国有关法律、法则和聘方有关工作制度以及有关外国专家的管理规定。
3.对外教的工作进行指导、检查和评估。
4.向外教提供必要的工作和生活条件。
5.配备合作共事人员,协助办理签证、居留证等手续。
6.按时支付外教的报酬,严格按合同兑现外教所有待遇。
7.按时结算本中心服务费用。
三、乙方的义务:
1.按甲方学校(企业)的要求按时按质提供外教。
2.乙方有权对甲方的外事工作进行协查和评估。
3.合同期间免费为甲方提供外事咨询。
四、服务费的收取:
本次服务共为甲方聘请美国外教(_________)名。甲方需在外国专家(外教)到甲方单位(学校)的七个工作日内向乙方支付全部服务费用共计人民币(_________)元整。
五、合同的变更、解除和终止:
1.双方应信守合同,未经双方一致同意,任何一方不得擅自更改、解除和终止合同。
2.经当事人双方协商同意后,可以变更、解除和终止合同。在未达成一致意见前,应当严格履行合同。
六、本合同自双方签字之日起生效,自双方各自义务履行完毕即自行失效。当事人一方要求签订新合同,必须在本合同期满30天前向另一方提出,经双方协商同意后签订新合同。
七、受聘方合同期满后,在华逗留期间的一切费用自理。
八、仲裁
当事人双方发生合同纠纷时,尽可能通过协商或者调解解决。若协商、调解无效,可向国家外国专家局设立的外国文教专家事务仲裁机构申请仲裁。
九、本合同一式两份,传真件有效。
甲方(盖章):_________ 乙方(盖章):_________
篇4
二、合同期自年月日起至年月日止。
三、受聘方的工作任务(另附页):
四、受聘方的月薪为人民币元,其中%可按月兑换外汇。
五、聘方的义务:
1.向受聘方介绍中国有关法律、法规和聘方有关工作制度以及有关外国专家的管理规定。
2.对受聘方的工作进行指导、检查和评估。
3.向受聘方提供必要的工作和生活条件。
4.配备合作共事人员。
5.按时支付受聘方的报酬。
六、受聘方的义务:
1.遵守中国的法律、法规,不干预中国的内部事务。
2.遵守聘方的工作制度和有关外国专家的管理规定,接受聘方的工作安排、业务指导、检查和评估。未经聘方同意,不得兼任与聘方无关的其他劳务。
3.按期完成工作任务,保证工作质量。
4.尊重中国的宗教政策。不从事与专家身份不符的活动。
5.尊重中国人民的道德规范和风俗习惯。
七、合同的变更、解除和终止:
1.双方应信守合同,未经双方一致同意,任何一方不得擅自更改、解除和终止合同。
2.经当事人双方协商同意后,可以变更、解除和终止合同。在未达成一致意见前,仍应当严格履行合同。
3.聘方在下述条件下,有权以书面形式通知受聘方解除合同:
(1)受聘方不履行合同或者履行合同义务不符合约定条件,经聘方指出后,仍不改正的;
(2)根据医生诊断,受聘方在病假连续30天后不能恢复正常工作的。
4.受聘方在下述情况下,有权以书面形式通知聘方解除合同:
(1)聘方未按合同约定提供受聘方必要的工作和生活条件;
(2)聘方未按时支付受聘方报酬。
八、违约金:
当事人一方不履行合同或者履行合同义务不符合约定条件,即违反合同时,应当向另一方支付500—2000美元(或相当数额的人民币)的违约金。
受聘方因不可抗力事件要求解除合同,需出具有关机构证明,经聘方同意后,离华的费用自理;受聘方若无故解除合同,除离华费用自理外,还应当向聘方支付违约金。
聘方因不可抗力事件要求解除合同,经受聘方同意后,离华费用由聘方负担;聘方若无故解除合同,除负担受聘方离华费用外,还应当向受聘方支付违约金。
九、本合同附件为合同不可分割的一部分,与合同具有同等效力。
十、本合同自双方签字之日起生效,合同期满即自行失效。当事人一方要求签订新合同,必须在本合同期满90天前向另一方提出,经双方协商同意后签订新合同。
受聘方合同期满后,在华逗留期间的一切费用自理。
十一、仲裁
当事人双方发生合同纠纷时,尽可能通过协商或者调解解决。若协商、调解无效,可向国家外国专家局设立的外国文教专家事务仲裁机构申请仲裁。
本合同于年月日在(地点)签订,一式两份,每份都用中文和文写成,两种文本同等作准。
聘方受聘方
外国文教专家标准聘用合同附件
一、工作任务
(业务部门应将受聘方担任的工作任务详细列出,不能简单化。对受聘方的工作应有质量要求。)
二、工资待遇
1、直接报酬(货币工资)每月人民币元。工资以人民币支付,工资自到职之日起至合同期满之日止.按月发给,不足整月的,按日计发。日工资为月工资的1/30(二月份同)。工资的70%以内可按月兑换外汇,受聘方应当按照《中华人民共和国个人所得税法》依法交纳个人所得税。
2、间接报酬聘方将保障受聘方在华生活的基本条件:
(1)提供附设家具、卧具、电话、电视机,电冰箱。卫生间、取暖和降温设备的住房。(对聘期在半年(一学期)以上的受聘方提供的住房须配有厨房。)
(2)提供公费医疗(聘方应支付受聘方的全部医疗费用。就目前在华工作的外国文教专家的工资水平和我国涉外医院对外国人的医疗价格,尚不具备让他们自己负担一部分医疗费用的条件)。受聘方须在聘方指定的涉外医院就医,在非指定医院就医费用自理。受聘方的挂号、就医交通、镶牙、整容、保健按摩.配眼镜。住院用餐和服用非医疗性的滋补药品以及医生出诊等费用自理。
(3)为工作地点和住所相距较远的受聘方提供上下班交通,或给予适当的交通补贴。
(4)国际机票(中国至受聘方国家最近距离经济舱国际机票)
(5)行李运输费(如果空运,应以24公斤行李分离运输价格计价.不要以随机运输价格计价。也可按国际机票费的1/5人民币[大致等于24公斤行李分离运输费]支付受聘方。因中美航线规定可免费承运两大件64公斤,所以,对来自美国的受聘方可不负担其行李运输费。)
三、工作时间和休息休假
1、受聘方每日工作时间为八小时,每周工作时间为五天。
2、聘方安排受聘方延长工作时间,将依据法定标准支付高于正常工作时间的工资报酬。
3、受聘方享受中国下列节日休假:
元旦、春节、国际劳动节、国庆节以及法律、法规规定的其他节假日。
4、受聘方可按其国籍和信仰相应享受下列节日休假:
圣诞节两天;宰牲节(古尔邦节)三天;开斋节一天、泼水节一天。
5、受聘方可享受带薪年休假。受聘方合同期为一年的,享受带薪休假四周。受聘方在教育机构工作,合同期为一学年的,享受所在教育机构的一个假期(寒假或暑假)带薪休假。
6、受聘方连续在华工作一般不得超过五年,再次应聘来华工作须在两年以后。
四、病假和事假
1、受聘方请病假,须凭聘方指定的涉外医生证明,受聘方在一个合同期(一年或一学年)内,累计病假不满三十天,工资按照100%发给;超过三十天后,聘方有权解除聘用合同;若未解除合同,工资将按70%发给,直至恢复正常工作为止。
2、在合同期内受聘方因公在中国境内出差,在当地政府指定的涉外医院就诊的医疗费用,由聘方支付;因私外出就诊的医疗费用自理。在合同期内,聘方在台湾、香港、澳门地区和中国境外就诊的医疗费用自理。
3、受聘方请事假须经聘方同意,聘方将按日扣发工资,在合同期(一年或一学年)内,事假累计不得超过十天,连续事假不得超过三天:超过一天,将扣发两天工资。
4、未经聘方同意而擅离职守的,旷职一天,扣发三天工资,情节严重的,聘方有权解除合同,并追究受聘方的违约责任。
五、合同试用期和信誉保证金
1、受聘方的试用期为60天,在试用期内,聘方如发现受聘方健康状况或专业水平等不能胜任本聘用合同规定的工作任务,有权解除合同。
2、受聘方属自荐或他人介绍而应聘的,应在来华前交纳一定数额(600-900美元.聘方也可自行确定)的信誉保证金以证明自己确有诚意应聘,聘方收到钱款后办理受聘方来华手续。聘期结束后聘方将如数退还本人。
3、聘方提供受聘方来华国际机票的,可由受聘方自购机票{以旅费作信誉保证金},合同期满前予以报销。
六、(当事人双方认为标准聘用合同中没有涵盖的其他事项。)
七、聘用合同附件各项条款的确定和变更均须由当事人双方协商,并以书面形式做出约定,任何口头协议均视为无效。
篇5
一、 合同期自________________ 年 _________ 月 _________ 日起至 _______________ 年 ___________ 月 __________ 日止。
二、 受聘方的工作任务(另附件):
三、 受聘方的月薪为人民币 ________________ 元,其中_______%可按月兑换外汇。
四、聘方的义务:
1、向受聘方介绍中国的有关法律、法规和聘方有关工作制度以及有关外国专家的管理规定。
2、对受聘方的工作进行指导、检查和评估。
3、向受聘方提供必要的工作的条件和居住的条件。
4、配备合作共事人员。
5、按时支付受聘方的报酬。
五、受聘方的义务:
1、遵守中国的法律、法规,不干预中国的内部事务。
2、遵守聘方的工作制度和有关外国专家的管理规定,接受聘方的工作安排、业务指导、检查和评估。未经聘方同意,不得兼任与聘方无关的其他劳务。
3、按期完成工作任务, 保证工作质量。
4、尊重中国的宗教政策。不从事与专家身份不符的活动。
5、尊重中国人民的道德规范和风俗习惯。
六、合同的变更、解除和终止:
1、双方应信守合同,未经双方一致同意,任何一方不得擅自更改、解除和终止合同。
2、经当事人双方协商同意后,可以变更、解除和终止合同。在未达成一致意见前,仍应当严格履行合同。
3、聘方在下述条件下,有权以书面形式通知受聘方解除合同:
(1)受聘方不履行合同或者履行合同义务不符合约定条件,经聘方指出后,仍不改正的;
(2)根据医生的诊断,受聘方在病假连续30天后不能恢复正常工作的。
4、受聘方在下述情况下,有权以书面形式通知聘方解除合同:
(1)聘方未按合同约定提供受聘方的工作条件;
(2)聘方未按时支付受聘方报酬。
七、违约金:
当事人一方不履行合同或者履行合同义务不符合约定条件,即违反合同时,应向另一方支付500~2000美元(或相当数额的人民币)的违约金。
受聘方因不可抗力事件要求解除合同,需出具有关机构证明,经聘方同意后,离华的费用自理;受聘方若无故解除合同,除离华费用自理外,还应当向聘方支付违约金。聘方因不可抗力事件要求解除合同,经受聘方同意后,离华的费用聘方负担;聘方若无故解除合同,除负担受聘方离华费用外,还应当向受聘方支付违约金。
八、本合同附件为合同不可分割的一部分,与合同具有同等效力。
九、本合同自双方签字之日起生效,合同期满即自行失效。当事人一方要求签定新合同,必须在本合同期满90天前向另一方提出,经双方协商同意后签定新合同。
受聘方合同期满后,在华逗留期间的一切费用自理。
十、仲裁
当事人双方发生合同纠纷时,尽可能通过协商或者调解解决。若协商、调解无效,可向国家外国专家局设立的外国文教专家事务仲裁机构申请仲裁。
本合同于年月日在
篇6
1.总则
2.注册资本
3.批准及注册
4.资本转让
5.董事会
6.总经理、副总经理
7.场地使用费
8.技术合作
9.采购及销售
10.利润
11.财务会计
12.外汇收支
13.税务
14.职工录用和奖励
15.工资标准和奖励
16.合营期限
17.其他事项
18.仲裁
19.合同文本
20.法定地址、文件通知
_________、_________和_________、_________、_________,根据《中华人民共和国中外合资经营企业法》(以下简称《合资法》)以及《实施条例》规定,按照平等互利的原则,在中华人民共和国_________市建立合营企业。从事生产反射器、注塑模具及其他资料制品,供出口和在中华人民共和国境内销售,经多次商谈,一致同意订立本合同。
第一章 总则
1.本合同的各方为:
_________、_________为一方(以下简称甲方),由_________代表甲方对本合同负责。
_________、_________、_________为一方(以下简称乙方),由_________代表乙方对本合同负责。
本合同由甲、乙双方授权的代表签订。
2.双方同意成立的合营企业定名为:_________(以下简称“合营企业”)
中 文:_________
英 文:_________
地 址:_________
3.双方根据平等互利的原则,为了有利发展中国国民经济,而从事反射器;注塑模具、以及其他塑料制品的设计、生产和内外销售。
合营企业将尽力在中华人民共和国境内采购原材料及包装材料,如遇无货供应或质量、价格不符合要求时,也可由合营企业进口解决。
4.双方本着长期真诚合作的愿望,在产品质量、规格品种、包装装璜及经济效益等方面力求达到国际同类产品的先进水平。
合营企业的初期生产规模为:年产_________套符合_________国_________标准的_________反射器,接受订单生产年产值为_________元的注塑模具。乙方负责_________反射器的返销,保证投产后的前_________年使合营企业的外汇收支达到自身平衡。且_________年后返销比例不低于_________%,乙方负责为合营企业每年从中国境外承接不少于_________元产值的注塑模具订单。合营企业产品的内销由甲方负责。
5.合营企业为中华人民共和国的法人,必须遵守中华人民共和国有关的法律、法令、条例和规则,并受中华人民共和国法律的管辖和保护。
第二章 注册资本
6.合营企业为有限责任公司,各方的经济责任以注册资本为限,并按资本比例分配利润,分担风险及亏损。
7.合营企业总投资为_________美元。注资本总额为_________美元,其中甲方占资本额的_________%,乙方占资本额的_________%。
8.甲、乙方出资如下:
甲方:_________美元,其中:
(1)机器设备,价值约_________美元;
(2)厂房,价值约_________美元;
(3)现金,相当于_________美元的人民币现金。
乙方:_________美元外汇现金。
第三章 批准及注册
9.本合同应由_________市批准,自批准之日起生效。并送交中华人民共和国对外经济贸易部备案。
10.合营企业接到上述批准证书后,应向工商行政管理局办理注册登记、领取营业执照。在合营企业取得营业执照后,甲、乙双方将根据工程进度需要,分别缴付资金,每期各方须缴付数额由董事会决定。
各方缴资后,由合营企业发给投资证明书。
第四章 资本转让
11.注册资本转让时合营者拥有先买权,未经合营者同意,不得转让或抵押给他。但当一方提出转让时,合营者应在_________个月内给予答复,否则作为放弃先买权论。
12.转让注册资本的价格,应根据合营企业中该方投资的帐面价值,由合营双方本着公平合理的原则协商解决。
13.注册资本转让时,应_________个月内向原审批机构申请批准。并向中华人民共和国对外经济贸易部备案,批准后再向工商行政管理局办理变更注册手续。
第五章 董事会
14.合营企业领到营业执照之日,即为合营企业董事会成立之日,董事会人数为_________人,其中甲方_________人,乙方_________人,董事人选由双方各自委派和调换、董事长由甲方委任,副董事长二人,由甲方委派一人,乙方委派一人担任。
15.董事会是合营企业的最高权力机构,其职权在合营企业章程内规定,董事长是合营企业的法定代表,董事长不能履行职责时,应授权副董事长或其他董事代表合营企业。
16.董事会会议每年至少召开一次,由董事长召集并主持。董事会会议应由_________分之_________以上董事出席才能举行。董事不能出席时,可出具委托书,委托他人代表其出席和表决。董事会的决议应由出席董事或其代表一致同意才能通过。董事会会议一般在合营企业的法定地址举行,也可以在董事会同意的其他地点举行,合营企业不负担出席董事会会议的旅费。董事会会议期间的膳宿由合营企业安排并支付费用。
17.董事不从合营企业支付薪金,他们的酬劳将在合营企业的全年净利中提取一定比率(比率由董事会议定)作为董事会的分红。并按下列比例分配:
董事长_________%
副董事长各_________%
董事各_________%
第六章 总经理 副总经理
18.合营企业设总经理一人,副总经理三人,均由甲方提名,董事会聘任,负责执行董事会会议的各项决议,组织领导合资企业的日常经营管理工作。在董事会授权范围内,总经理对外代表合营企业。对内任免下属人员,并行使董事会授予的其他职权。
19.合营企业的重要文件由总经理签署后生效。
20.若总经理或副总经理未能适当履行职务时,董事会有权解聘或降职。
第七章 场地使用费
21.合营企业使用的土地是中国政府的资产,合营企业须向政府交付适当的土地使用费,合营企业与所在地土地主管部门签订的租用土地使用权协议,应为本合同不可分割的一部分。
22.最初_________年的土地使用费,定为每年每平方米人民币_________元,其后,土地使用费可按市政建设发展的情况而调整。
第八章 技术合作
23.合营企业与_________签订的技术转让协议,作为本合同不可分割的一部分,其有效期与本合同相同。
24.合营企业根据技术转让协议,向_________支付技术转让费_________美元,技术转让内容及技术转让费的支付办法,在技术转让协议中另行规定。
第九章 采购及销售
25.合营企业与乙方签订的采购与销售协议,作为本合同不可分割的一部分,其有效期与本合同相同。
26.合营企业所需的原材料应尽先在国内购买。对无法供应的品种或质量、价格不符合合营企业要求时,可由合营企业从国外进口。
27.根据双方签订的采购与销售协议,合营企业在中国国内销售的产品,在由甲方负责通过其销售部门销售。合营企业的出口产品,由乙方负责在中国国外销售,具体办法在采购与销售协议中另行规定。
第十章 利润
28.合营企业所获得的全部利润,按《中华人民共和国中外合资经营企业所得税法》规定缴纳所得税后,按下列百分比提取:储备基金_________%;企业发展基金_________%;职工奖励及福利基金_________%。
缴税与提取上述三项基金后的净利润,每年根据合营双方的出资比例进行分配。
29.对于乙方分得的利润,应根据合营企业的外汇结余情况,在不影响正常生产的原则下,此利润可根据董事会的决定分一次或几次支付,以前年度的亏损未弥补前不得分配利润,以前年度未分配的利润,可并入本年度利润分配。
第十一章 财务会计
30.合营企业应执行中华人民共和国有关中外合营企业的财务会计规定,必须建立完整、严格的财务制度。
31.合营企业的一切单据、帐簿、报表均使用中文记载,同时应用英文定期编制财务报表。合营企业董事会聘请的在中国注册的会计师有权查阅合营企业的一切单据、帐簿、报表,并直接向董事会提出报告。
32.合营企业以人民币为记帐单位,人民币与其他货币间的换算,按同时期中华人民共和国外汇管理局_________分局汇率牌价结算。
33.合营企业的固定资产,按《中华人民共和国中外合资经营企业所得税法施行细则》的规定,由董事会决定其折旧年限。
34.合营企业应在中国银行_________分行分别开立外汇帐户和人民币帐户,并接受开户银行对外汇支出的监督。
35.合营企业在经营过程中遇流动资金不足时,总经理可根据董事会规定的权限,向中国银行或国外银行借款,但不得移作它用或弥补亏损。
36.合营企业的财政会计年度,从每年一月一日起至十二月三十一日止。
第十二章 外汇收支
37.合营企业的一切外汇事宜,必须按《中华人民共和国外汇管理暂行条例》和有关管理办法的规定办理。
38.合营企业的外汇收支必须做到:
(1)保证合营企业的每年外汇收入大于支出。
(2)外汇结算人民币时,应按照当时规定的牌价办理。
(3)合营企业在中国境内支付费用、货款、劳动报酬等,除根据有关规定支付外汇者外,一律以人民币结算。
39.根据《合资法》的规定,下列外汇可以汇出:
(1)乙方分得的利润及技术转让费。
(2)乙方资本转让后所得的资金。
(3)合同期满或合同期满前应清偿给乙方的资金。
(4)用于进口原料、设备、备件所需的外汇,以及派往国外人员的旅差费。
(5)其他按有关规定可以汇出的开支。
第十三章 税务
40.合营企业按照中国的有关法律和条例规定缴纳各项税金。
41.合营企业职工按照《中华人民共和国个人所得税法》规定缴纳个人所得税。
第十四章 职工录用和辞退
42.合营企业所需职工,由甲方或中国劳动管理部门采用公开招聘方式,经考试择优录取后,签订劳动合同。
43.如因生产技术等变化,职工确有多余,或经培训后仍不能适应要求,也无法改调其他工种时,合营企业可按劳动合同解雇并给补偿。
44.合营企业应制订规章制度和职工守则,对违反者分别予以警告、记过、扣薪直至开除处分。
第十五章 工资标准和奖励
45.合营企业职工工资目前按平均月薪_________元人民币计算,其中包括合营企业向中国政府指定的部门缴纳国家对职工的各种保险费、补贴费和福利措施费等。随着合营企业生产发展,职工工资应逐步增加。今后中国政府对工资、福利、补贴等有新的规定时,合营企业应据此相应调整。
46._________方高级职员工资、社会保险、旅差费标准参照_________方国家或地方标准,由董事会核定。_________方高级职员原则上与_________方高级职员同工同酬。
47.按照合营企业的经营结果,年终从奖励和福利基金中提出一定数目的基金,奖给工作好的职工,对于在技术上、生产上或管理上有特殊贡献者,由董事会决定给予特殊奖励。
第十六章 合营期限
48.合营双方同意,合营企业的期限为_________年。自营业执照签发之日起算,期满前一年经一方提出,其他方同意可以延长,延长期限由双方协商决定,并在期满前六个月向原审批机构办理延长报批手续。
49.在发生下列情况之一时,可以提前终止合同:
(1)在一个适当的开始期后,合营企业因严重亏损而不能继续营业;
(2)由于一方不履行合同或章程规定的义务,致使合营企业无法继续营业;
(3)由于不可抗力的事件,如严重自然灾害或战争等,致使合营企业无法继续营业;
(4)不能达到预期的目标并看不到发展的前景。
提前终止合同必须经董事会召开特别会议作出决议,报请原审批机构批准。
50.合同期满或提前终止时,董事会应组成清算小组负责清理。董事会在清算完毕后才能解散。清算办法按照《合资法》的《实施条例》第103—105条所规定的清算程序和手续办理。同时董事会应向原审批机构及工商行政管理局办理注销手续,缴回营业执照。清算后应还给各方的财产,必须按照各方在合营企业的投资比例计算。
第十七章 其他事项
51.合营双方履行下列事项:
_________方:
(1)负责向政府申请批准,并向工商行政管理局办理注册登记。
(2)负责将厂房及租用的场地等,交给合营企业使用。
(3)负责招聘职员职工。
(4)负责合营企业的产品及原材料国内运输。
(5)负责办理保证提供水、电、煤气、燃料、电话、电报挂号及电传的工作。
(6)负责办理乙方人员的签证及其办公、交通、生产等安排。
(7)负责向所在地的环境卫生管理部门申请许可证。
_________方:
(1)负责按期提供所需的全部机器设备。仪器、原材料、技术资料和文件及原料、产品的国外运输。
(2)负责提供建厂规划,并负责设备安装、试车、试生产的全面技术指导。
(3)负责按照生产的需要,对职工进行技术培训。
(4)负责提供有关合营企业产品在国外市场上销售趋势的报告的技术资料。
(5)按照双方签订的《技术转让协议》,提供技术和设计,如有任何关于侵犯第三者权益的争议时,由签订该协议的转让方负责,_________方将不分担任何法律责任。
(6)负责_________方人员到_________方国内学习、培训的安排。
第十八章 仲裁
52.合营各方如在解释或履行本合同及其附件发生争议时,应首先在董事会内本着互相信赖、平等互利的精神进行协商,求得解决。若不能解决时,可以邀请双方同意的第三者进行调解。
53.调解不成时,则申请仲裁解决。仲裁在中国国际贸易促进委员会对外经济贸易仲裁委员会进行。按该会《对外贸易仲裁委员会仲裁程序暂行规则》办理。费用由败诉方承担;仲裁机构的裁决是终局的,对各方都有约束力。
54.在解决争议期间。除争议事项外,合营各方应继续履行合营企业合同、章程所规定的其他各项条款。
第十九章 合同文本
55.本合同和附属协议的修改。须经董事会协商同意,经各方授权代表签署书面文件,并报原审批机构批准。
56.本合同用中文和英文写成,均为正式文本。具有同等效力。本合同所有附件,均为本合同不可分割的部分。
第二十章 法定地址、文件通知
57.合营各方的法定地址:
甲 方:_________
乙 方:_________
58.合营各方发送通知的办法,如用电报、电传通知时,凡涉及各方权利、义务的,应随之以书面信件通知。
合同各方的法定地址即为各方的收件地址。
59.本合同于_________年_________月_________日由甲、乙双方的授权代表在中国签字。
甲方(盖章):_________
乙方(盖章):_________
法定代表或授权代表(签字):_________ 法定代表或授权代表(签字):_________
_________年____月____日
_________年____月____日
篇7
注册地址: _________________________
工商登记号码:_________________________ 邮政编码:____________________
电子信箱: _________________________ 联系电话:____________________
网址: _________________________ 传真: ____________________
乙方: _________________________ (正文中简称乙方)
注册地址: _________________________
工商登记号码:_________________________ 邮政编码:____________________
电子信箱: _________________________ 联系电话:____________________
网址: _________________________ 传真: ____________________
根据《中华人民共和国劳动法》与《中华人民共和国合同法》等有关法律规定,本着平等互利原则,甲乙双方经友好协商,就乙方聘用中国员工事宜达成本合同。
第一条 甲乙双方有关乙方聘用中国员工及相关事宜,适用本合同。本合同未尽事宜,双方另有约定的,从约定;双方没有约定的,从法律、法规、规章和政策;法律、法规、规章或政策没有规定的,由甲乙双方协商确定,并签订协议作为本合同的附件,与本合同具有同等效力。
第二条 甲方向乙方派遣中国员工或乙方聘用中国员工的,双方应按照本合同有关约定另行订立《聘用中国员工合约》,明确乙方聘用中国员工的具体人数、姓名、聘期、聘用费等事宜并作为本合同的附件,与本合同具有同等效力。
第三条 乙方与被聘用的中国员工之间系聘用与被聘用的劳务关系,双方可以根据本合同有关规定,另行订立《聘用约定》,确定乙方与中国员工之间的权利义务,《聘用约定》副本需送甲方备案。
第四条 乙方与中国员工之间因购房贷款(含担保)等民事事宜,应另行订立相关协议,确定各自的权利义务。所生争议,与甲方及本合同无关,甲方不承担中国员工之连带责任。
篇8
师),双方本着友好合作的精神,签订本合同。
第一条聘期为__年(学校可按学期、学年定),自__年__月__日到
职之日起,至__年__月__日离聘之日止。
第二条受聘方的工作任务,商定如下:
__________________________________
受聘方应按时、按质完成以上工作任务。聘方应为受聘方提供必要的工作生活
条件。受聘方在工作中提出的合理化建议,聘方应予采纳。双方应积极合作。
第三条中国政府法定的工作日为:每周六天,每天八小时(教师按周课时填
写)。
第四条聘方每月付给受聘方工资人民币____元,并按附件规定提供各项
生活待遇。
第五条受聘方应遵守中国政府的法律、法令、有关规定和聘方的工作制度。
第六条双方均不得无故提前终止合同。受聘方如中断合同,必须在离华前一
个月向聘方提出书面申请,未经聘方同意,受聘方仍应照常进行工作。聘方自同意
之日起的两周后,停发工资,并停止提供受聘方及其家属的有关生活待遇,回国的
一切费用自理。
受聘方违犯中国政府法令,聘方有权提出解聘。自提出解聘之日起一个月内工
资照发,但受聘方应在此期间内安排回国。聘方负担受聘方及其家属在中国境内的
旅费,国际旅费自理。
对渎职的受聘方,聘方有权提出解聘,自提出解聘之日起一个月内,安排受聘
方回国。受聘方及其家属回国的旅费,由聘方支付,其它一切费用自理。
第七条受聘方因健康原因,经医生证明连续病休两个月后仍不能继续工作,
聘方有权提出提前终止合同,并根据受聘方的健康状况,于一个月内安排其回国。
聘方提供受聘方及其家属回国的飞机票和负担按规定限量的行李托运费。
第八条本合同自聘期开始之日起生效。任何一方如要求延长聘期,均应在合
同期满前三个月向对方提出,由双方协商确定,并另签延聘合同。延聘合同系本合
同不可分割的组成部分。本合同的各项条款在延聘期内继续有效。双方均未提出延
长聘期或一方不同意延长聘期时,本合同期满即失效。
第九条本合同在执行中如有争议,由双方协商解决。
第十条本合同用中文和____文(外文略)写成,两种文本具有同等效力。
聘方____(盖章)
篇9
MSP430作为电子标签主控芯片,超低功耗设计;设计了无线阅读器和无线智能电子标签通信系统,所设计的车辆无线阅读识别系统采用韦根、485协议与数据采集主板相连接,兼容所有传统停车场;可实现远距离自动读取车辆信息并进行不停车收费。
关键词:红外;射频;STC10F08XE;MSP430;不停车收费
1 概述
随着社会经济的飞速发展,人们生活水平大大提高,汽车尤其是私家车越来越多地走进百姓家里。据工业化和信息化部统计,2010年全国共生产汽车1826万辆,销售1806万辆,俨然我国已经成为了一个汽车消费大国。但随之而来的是在停车场进出时会出现严重的堵塞现象。为了提高人们的生活质量以及出行安全,现代的停车场管理系统有必要引入智能化、网络化的控制,即具有远距离读卡功能的不停车收费管理系统[1]。
文章首先对停车场读卡系统的各模块进行选型分析,得出适合小区停车场管理系统的最佳方案。因此文章主要考虑对现有停车场管理系统进行优化。通过对比现有停车场,定量分析电子标签的功耗情况以及实际测量读卡角度、距离等参数,从而提出一种低功耗、远距离,兼容性好的停车场管理系统方案。
2 系统方案设计
一个完整的停车场远距离读卡系统主要包括一个阅读器和一个电子标签(即用户使用的卡片),然后在两者之间使用某种无线通信技术进行数据通信,进而实现远距离读卡的功能[2]。
目前市场上的远距离读卡系统主要包括超声波读卡和2.4G蓝牙读卡,两种方案都各有优缺点,而本系统结合现在小区停车场的实际需求,自主引入一种红外触发机制来实现电子标签的低功耗和方向性,通信距离虽然较另外两种较短,但完全满足现实需求,即成本较低、无辐射的红外射频读卡设计方案。详细对比如表1所示。
阅读器通过一组红外发射管在停车场出入口形成一个红外检测区域,电子标签放在汽车里面,在平常处于睡眠状态,当汽车进入到红外检测区域时,电子标签通过一个红外接收管接收红外触发信号,若触发信号正确,则电子标签会被唤醒[3],然后利用射频发射电路将车主的信息发送给阅读器,阅读器通过射频接收模块接收数据并对数据进行解码,最后通过韦根或485上传给管理系统。
3 硬件设计
根据上述的停车场方案,设计出硬件系统框图如图1所示。
3.1 阅读器设计
3.1.1 阅读器主控芯片
由于本系统是放置在露天环境中,各种干扰较多,需保证系统的抗干扰能力和稳定性;而且本设计方案所需资源至少为2个定时器、红外数据IO口、射频数据IO口以及3中通讯协议IO口,故采用STC10F08XE作为微处理器,其硬件资源丰富,机器周期为1T,是新一代的8051单片机,指令代码完全兼容传统8051,但是速度快8至12倍。
篇10
[关键词]水蛭;炮制;仿生提取;抗凝活性
[Abstract]In order to determine the scientificalness of traditionally processed Whitmania pigra, water extraction method and bionic extraction method were used respectively to extract the anticoagulating active components in W pigra hanging dry products, talcum powder fried products and wine immersingbaked products Activated partial thromboplastin time (APTT), prothrombin time (PT), thrombin time (TT), and antithrombin activity were selected as the activity indexes to evaluate the anticoagulant activities of different processed W pigra Then the contents of protein in different processed W pigra were measured by Coomassie brilliant blue method to preliminarily explain the reason of anticoagulant activity changes When water extraction method was used, the results of APTT, PT, TT and antithrombin activity showed that the anticoagulant activities of W pigra were decreased both in talcum powder fried products and wine immersingbaked products, and the activity order was as follows: hanging dried products> wine immersingbaked products>talcum powder fried products This order was same as the protein content order While when bionic extraction was used, APTT was shortened in talcum powder fried products, but all the other results indicated the anticoagulant activities of W pigra processed products were increased, and the activity order was as follows: wine immersingbaked products>talcum powder fried products>hanging dry products As compared with water extraction, the bionic extraction was more similar to the absorption process of W pigra in human digestive system after oral administration and was more scientific Therefore, the traditional processing method can not only modify the taste and smell, but also enhance the anticoagulant activity of W pigra
[Key words]Whitmania pigra; processing; bionic extraction; anticoagulant activity
doi:10.4268/cjcmm20161013
水蛭是一味传统的动物类中药,具有明显的抗凝血作用,近年来广泛用于心脑血管疾病的治疗。《中国药典》2015年版(一部)收录了3种水蛭,分别为水蛭科动物蚂蟥,即宽体金线蛭Whitmania pigra Whitman、水蛭Hirudo nipponica Whitman和柳叶蚂蟥W. acranulata Whitman[1]。调查显示,临床使用的水蛭95%以上为宽体金线蛭[2]。其常用的处理方法为清水吊干,炮制方法为滑石粉烫制、酒浸闷烘(酒炙)等,其中《中国药典》2015年版(一部)收录的炮制方法为滑石粉烫制[1]。目前研究表明,炮制使水蛭的抗凝活性降低[35],可能基于此原因,临床应用中多选用其清水吊干品,少数选用滑石粉烫制品。在现有的研究水蛭炮制品抗凝活性的报道中,研究者所采用的提取方法大多为水提取法。而水蛭的抗凝活性成分为蛋白类物质[69],口服后需经胃肠道消化降解入血发挥作用,因此水提取所得活性成分与水蛭在体内发挥作用的物质可能完全不同。本实验模拟蛋白质在体内代谢的真实过程,以蛋白质在胃肠内消化吸收的实际时间和生理环境对水蛭及其炮制品进行仿生酶解提取,针对不同的凝血途径,选取活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和抗凝血酶活性作为指标测定其体外抗凝活性,同时与水提取法进行对比,最后采用考马斯亮蓝法测定各提取物的蛋白含量,综合评价不同炮制方法对水蛭抗凝活性的影响,为水蛭炮制提供科学依据。
1材料
DF101S集热式恒温加热磁力搅拌器(河南省予华仪器有限公司);梅特勒托利多FE20实验室pH计(梅特勒托利多仪器上海有限公司);LGPABER型血小板聚集凝血因子分析仪(北京世帝科学仪器公司);TU1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。
水蛭,市售,清水吊干品,经北京中医药大学中药学院鉴定系杨瑶B教授鉴定为宽体金线蛭W pigra;滑石粉,市售;黄酒,市售,古越龙山牌绍兴黄酒五年陈(浙江古越龙山绍兴酒股份有限公司)。胃蛋白酶(1∶1万,北京拜尔迪生物技术有限公司);胰蛋白酶(1∶250,北京拜尔迪生物技术有限公司);APTT,PT,TT试剂盒(上海太阳生物技术有限公司);牛血清白蛋白(BSA,SigmaAldrich);考马斯亮蓝G250(北京拜尔迪生物技术有限公司);凝血酶(SigmaAldrich);纤维蛋白原(来源于牛血浆,北京拜尔迪生物技术有限公司);95%乙醇、85%磷酸、浓盐酸、氢氧化钠、三羟甲基氨基甲烷(Tris)等为分析纯试剂;实验用水为去离子水。
健康日本大耳白兔(雄性),质量约2 kg,符合国家健康一级动物标准,动物许可证号为SCXK(京)20150005。
2方法
21水蛭的炮制
211清水吊干品净制取水蛭清水吊干品,洗净,切段,冷冻干燥24 h后,打粉,过3号筛,得清水吊干品粗粉,-20 ℃密封保存。
212滑石粉烫制将滑石粉置锅内,武火炒至灵活状态时后,加入水蛭的清水吊干品适量,不断翻动,烫至微鼓起时取出,筛去滑石粉,放凉[1],去离子水快速冲洗去除残存的滑石粉,冷冻干燥24 h后,打粉,过3号筛,得滑石粉烫制品粗粉,-20 ℃密封保存。
213酒浸闷烘取水蛭清水吊干品称重,切段,加黄酒,水蛭黄酒10∶1,拌匀至酒吸尽,闷透,放入40 ℃烘箱中干燥至微变色,质酥脆时取出[1011],冷冻干燥24 h后,打粉,过3号筛,得酒浸闷烘品粗粉,-20 ℃密封保存。
22水蛭及其炮制品活性成分的提取
221水提取法称取水蛭及其炮制品粗粉各150 g,分别加入10 mL去离子水(抗凝血酶活性测定实验中:取各炮制品粗粉100 g加入5 mL去离子水,其余操作相同),室温下磁力搅拌5 h,15 000 r・min-1离心20 min,取上清液,备用。
222仿生提取法取10 mL人工胃液(人工胃液:9 mL浓HCl,加水定容至1 000 mL),加入胃蛋白酶(酶底比125%[12]),搅拌均匀后分别加入水蛭或其炮制品粗粉150 g(抗凝血酶活性测定实验中:取各炮制品粗粉100 g加入5 mL人工胃液,其余操作相同),37 ℃磁力搅拌3 h(蛋白质在胃内的消化吸收时间);用pH 1300的NaOH溶液将反应液pH调至胰蛋白酶生理条件(pH 680),加入胰蛋白酶(酶底比75%[12]),37 ℃磁力搅拌2 h(蛋白质在小肠内的消化吸收时间);将反应样品取出,置于85 ℃的水浴中灭活15 min,自然冷却至室温;以15 000 r・min-1离心20 min,取上清液,备用。
23抗凝活性测定
231血浆制备将健康兔耳缘静脉注射乌拉坦麻醉后,颈动脉取血,与质量浓度为38%的枸橼酸钠抗凝剂(9∶1)混匀后以4 000 r・min-1离心15 min,分离出贫血小板血浆(PPP)。
232APTT测定取PPP 50 μL于测试杯中,分别加入水蛭各样品提取液50 μL,APTT试剂50 μL,测试珠1粒,37 ℃孵育5 min后,立即取出加入37 ℃预温的0025 mol・L-1的CaCl2溶液50 μL,记录凝固时间,同时以试剂空白为参比记录其APTT(其中水提样品以水为空白参比,仿生提取样品以空白酶解液为空白参比。空白酶解液按22项下仿生提取法所述,除不加水蛭粗粉外,其余操作相同)。
233PT测定取PPP 50 μL于测试杯中,分别加入水蛭各样品溶液50 μL,测试珠1粒,37 ℃孵育3 min后,立即取出加入37 ℃预温的PT试剂100 μL,记录凝固时间,同时以试剂空白为参比记录其PT。
234TT测定取PPP 50 μL于测试杯中,分别加入水蛭各样品溶液50 μL,测试珠1粒,37 ℃孵育5 min后,立即取出加入37 ℃预温的TT试剂50 μL,记录凝固时间,同时以试剂空白为参比记录其TT。
24抗凝血酶活性测定[1]
241三羟甲基氨基甲烷盐酸(TrisHCl)缓冲液的配制取02 mol・L-1三羟甲基氨基甲烷溶液25 mL与01 mol・L-1HCl溶液40 mL,加水定容至100 mL,调节pH 740。
242抗凝血酶活性测定取样品上清液100 μL,置试管中,加入含纤维蛋白原05%的TrisHCl缓冲液(临用配制)200 μL,摇匀,置37 ℃水浴中温浸5 min,滴加10 U・mL-1的凝血酶溶液(每4 min滴加1次,每次2 μL,边滴加边轻轻摇匀)至凝固,记录消耗凝血酶溶液的体积,并计算抗凝血酶活性。
25蛋白质含量的测定
251BSA标准溶液的制备精密称取1000 mg牛血清白蛋白(BSA),加水定容至10 mL,摇匀,即得质量浓度为10 g・L-1的BSA母液,备用。
252考马斯亮蓝溶液的制备精密称取1000 mg考马斯亮蓝G250,加入95%乙醇5 mL溶解,再加入85%磷酸10 mL,加水定容至100 mL,摇匀,过滤,得质量浓度为010 g・L-1的考马斯亮蓝溶液,备用。
253牛血清白蛋白标准曲线的制作取BSA母液,用水稀释成一系列质量浓度(005,01,02,04,06,08,10 g・L-1),取不同浓度的BSA标准液各50 μL,分别加入4 mL考马斯亮蓝溶液,摇匀,避光反应5 min后立即取出,选取595 nm,测吸光度(空白对照:50 μL水加4 mL考马斯亮蓝溶液,摇匀后避光保存5 min,测吸光度)。
254水蛭不同炮制品的蛋白含量测定将水蛭各水提取样品与各仿生提取样品均稀释20倍,各取50 μL,分别加入4 mL考马斯亮蓝溶液,摇匀,避光反应5 min后立即取出,选取595 nm,测吸光度。水提取法以水为空白对照(50 μL水加4 mL考马斯亮蓝溶液),仿生提取法以空白酶解液(按22项下仿生提取法操作,除不加水蛭粗粉外,其余操作相同)为空白对照(50 μL空白酶解液加4 mL考马斯亮蓝溶液)。
3结果
31APTT测定
测定水蛭及其炮制品水提物及仿生提取物的APTT,结果见表1。
无论采用水提法还是仿生提取法,与空白组相比,不同炮制品均有显著的抗凝效果,但是炮制前后抗凝活性对比时,不同提取方法显现出明显的差异。
APTT所反映的内源性凝血途径中,水提取法结果显示,2种炮制品较清水吊干品APTT均缩短,表示炮制降低了清水吊干品的抗凝活性。仿生提取法结果显示,滑石粉烫制品较清水吊干品APTT缩短,表示滑石粉烫制使清水吊干品的抗凝活性降低;酒浸闷烘品较清水吊干品APTT延长,表示酒浸闷烘使清水吊干品的抗凝活性升高。
32PT测定
测定水蛭及其炮制品水提物及仿生提取物的PT,结果见表2。
PT所反映的外源性凝血途径中,水提取法结果显示,2种炮制品相比清水吊干品PT均缩短,表示炮制降低了清水吊干品的抗凝活性。而仿生提取法结果中,2种炮制品与清水吊干品相比PT均延长,表示炮制使清水吊干品的抗凝活性升高。
33TT测定
测定水蛭及其炮制品水提物及仿生提取物的TT,结果见表3。
TT所反映的共同凝血途径中,水提取法结果显示,2种炮制品相比清水吊干品TT明显缩短,表示炮制降低了清水吊干品的抗凝活性。而仿生提取法结果与水提取法结果相反,2种炮制品相比清水吊干品TT均大幅延长,表示2种炮制法均显著提高了清水吊干品的抗凝活性,此结果与PT测定结果一致。
34抗凝血酶活性测定
记录各样品消耗凝血酶体积,并计算抗凝血酶活性,结果见表4。
水提取法结果显示,滑石粉烫制后抗凝活性降低,酒浸闷烘品与清水吊干品抗凝血酶活性相同。而仿生提取法结果显示,2种炮制品相比清水吊干品抗凝血酶活性显著提升,表示2种炮制法均提高了水蛭的抗凝活性,且酒浸闷烘优于滑石粉烫制。凝血酶滴定法测定抗凝血酶活性反映了凝血酶催化下纤维蛋白原向纤维蛋白转化的过程,与TT反映的作用途径类似,因此活性顺序与TT测定结果基本一致。但此法测定过程中每次加入的凝血酶体积为2 μL,因此灵敏度不够,在水提法中不足以反映清水吊干品和酒浸闷烘品的差异。
35蛋白质含量测定
以BSA为对照品,采用考马斯亮蓝染色法测定水蛭及其炮制品中(稀释20倍)蛋白质的含量,标准曲线线性回归方程为Y=0383 93X+0046 51(R2=0998 0,n=7)。采用水提取法和仿生提取法所得水蛭及其炮制品中的蛋白质含量(以BSA计),见表5。
采用水提取法时,水蛭不同炮制品中蛋白质含量顺序为清水吊干品>酒浸闷烘品>滑石粉烫制品。采用仿生提取法时,水蛭不同炮制品蛋白质含量顺序为清水吊干品>酒浸闷烘品>滑石粉烫制品。
36水蛭及其不同炮制品性状比较
实验中发现,不同炮制方法得到的水蛭粗粉颜色,气味及粉碎难度也有明显不同,结果见表6。
可见,炮制使水蛭更易粉碎,同时很好地矫正了水蛭的浓烈腥味。
4讨论
水蛭发挥抗凝作用的活性成分为蛋白质类物质[68],因此采用水提取法和仿生提取法所得到的成分将会产生很大的差异,这将对抗凝活性产生决定性的影响。本实验的研究结果表明,采用2种提取方法研究炮制对水蛭抗凝活性的影响时,所得到的结果几乎完全相反。水提取法中,APTT,PT,TT及抗凝血酶活性4种抗凝评价指标均显示,炮制使水蛭抗凝活性明显降低,这一结果与多数采用水提法的研究者所得到的结论相同[35]。而在仿生提取法中,采用滑石粉烫制法时,除反映内源性凝血途径的APTT指标较炮制前缩短外,反映外源性凝血途径的PT与反映共同凝血途径的TT和抗凝血酶活性均较炮制前大幅增加;酒浸闷烘炮制品的4种指标均较炮制前明显延长,明确表示水蛭经此法炮制后抗凝活性升高。
由于水蛭通常以口服形式给药,因此采用仿生提取法所测定的抗凝活性与在人体内发挥药效作用的过程更接近,结果也比水提取法更具科学性。对于2种提取方法所得到的抗凝活性结果相悖的情况,可能的原因分析如下。
41滑石粉烫制对水蛭抗凝活性的影响
水蛭在经滑石粉烫制过程中,高温使蛋白质变性失活,水溶性降低[4,13]。因此采用水提取时水溶性蛋白减少,会造成抗凝活性降低。实验中,水提取法所得样品蛋白质含量测定结果表明,炮制后蛋白质的含量明显降低,且蛋白质含量与抗凝活性具有直接的相关性。经过滑石粉烫制后,水蛭中蛋白质高级结构被破坏,结构变得疏松,与炮制前相比变性后的蛋白质一级结构更容易被酶解而释放出活性肽,这与蛋白类食物加热制熟后更易于消化吸收的现象相似,原因可能是酶解反应的存在促进了蛋白质的进一步溶解。反映外源性凝血途径的PT、反映共同凝血途径的TT和抗凝血酶活性均较炮制前升高;但反映内源性凝血途径的APTT有所降低,推测作用于APTT途径的活性物质主要是分子量较大的蛋白质,而作用于其他2种途径的活性物质主要是相对分子质量较小的肽类成分。
此外,采用仿生提取法时,各炮制品抗凝活性顺序与蛋白质含量没有表现出相关性,原因可能是考马斯亮蓝染色法要求标准品与待测样品结构性质相近,水提取法活性物质主要是大分子蛋白质类物质,比较适合采用该法测定;而仿生酶解法活性产物多为相对分子质量较小的肽类物质,与BSA结构性质差异较大,此法所得蛋白含量结果不能有效反映酶解产物中全部蛋白及肽类物质含量。水蛭酶解后抗凝活性增强可能是活性肽含量升高导致,而与蛋白含量没有直接的相关性。
42酒浸闷烘对水蛭抗凝活性的影响
对于水蛭酒浸闷烘品,采用水提取法时抗凝活性也较炮制前有所降低,但活性明显高于滑石粉烫制品。推测黄酒中的乙醇(含量约为15%)使活性蛋白变性,烘干时选取的温度虽远小于烫制的高温,但在某种程度上也会导致蛋白质的变性,温度和有机溶剂的共同影响导致水溶性降低,但其破坏程度远小于滑石粉的高温烫制。蛋白质含量测定结果也表明,酒浸闷烘品的蛋白含量较炮制前降低,但远高于滑石粉烫制品。采用仿生提取法时,结果表示酒浸闷烘使水蛭抗凝活性大幅升高,可能是发挥抗凝作用最好的炮制方法,在此之前有研究者也得出过相同的结论[10]。传统炮制认为酒制可增强药物活血的作用,有文献报道虎杖、丹参、大黄等经酒制后活血作用显著提升[1516]。有研究者指出,黄酒闷水蛭一可矫味、矫臭;二可增强其破血逐瘀通经之功效;三可引药上行,在治疗脑血管疾病方面更能发挥较好的疗效[14]。本实验结果也为酒浸闷烘的炮制方法提供了理论依据。
实验中所使用的黄酒成分复杂,为确定黄酒中的其他成分是否会对体外抗凝活性测定产生影响,将黄酒中液体成分减压蒸干后,剩余的焦糖色素和糖类、氨基酸、维生素等加水复溶(质量浓度与提取所用相同),测定其APTT,PT,TT,其结果与水的凝血时间接近。因此,水蛭酒浸闷烘品的抗凝活性大幅提升与黄酒中这部分成分无关。此外,实验中发现在打开酒浸闷烘品的密封包装后,能闻到明显的醇味,于是进一步对粗粉烘烤(70 ℃)4 h,期间不断翻动,尽可能除去残留的微量乙醇,但处理后仍然可以闻到轻微醇味。而醇的存在会影响凝血酶的活性,导致凝血时间延长。酒浸闷烘品在体内是否也具有最好的抗凝效果有待进一步考证。
43炮制的去腥、矫臭作用
滑石粉烫制法与酒浸闷烘法均能很好地起到去除腥味的作用。而且由于黄酒中含有糖和乙醇,去腥作用更好,酒浸闷烘品不仅没有清水吊干品的浓烈腥味,还具有明显的肉类香味。炮制后,水蛭的腥臭味得到了极大地改善,从而易被患者接受,因此炮制后的水蛭更适合临床应用。
5结论
采用水提取法和仿生提取法研究水蛭不同炮制品的抗凝活性结果几乎完全相反,水提取法显示水蛭经炮制后APTT,PT,TT,抗凝血酶活性均降低。而采用仿生提取法时,滑石粉烫制后除APTT外,PT,TT,抗凝血酶活性均较炮制前显著增加;酒浸闷烘使4个抗凝指标全部较炮制前增加。仿生提取法模拟了胃肠吸收的实际过程,其结果相比于传统的水提取法有更高的可信度。
此外,炮制可使水蛭更易粉碎,同时能够矫臭、矫味,易被患者接受。因此,建议临床上在使用水蛭作为抗凝药时,采用滑石粉烫制或酒浸闷烘法进行炮制,打粉冲服,将取得较好的疗效。
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