男宝片的健脾作用探讨论文

1材料与仪器

1.1药品与试剂男宝片，石河子市中医医院研制，新疆维吾尔药厂生产，每片相当于含生药0.41g,批号为990421，使用时将药片研磨，加双蒸水配成每毫升含药0.025，0.05，0.1g或0.035，0.07，0.14g的混悬液，古汉养生精片，湖南古汉集团股份有限公司产品，每片0.4g,(97)卫药准字Z-125号,具补肾益脾、健脑安神等功能，批号990425，使用时将药片研磨，加双蒸水配成每毫升含药0.05或0.07g的混悬液，氢化可的松，湖北制药厂出品，鄂卫药准字（1981）第001709号，每支5ml/25mg，使用时灌胃0.2ml/只，戊巴比妥钠，上海行知化工厂出品，批号951019，使用时用生理盐水配成1%的溶液，40mg/kg腹腔注射，乙烯雌酚，上海第九制药厂产品，批号980403，使用时用麻油稀释配成200ng/ml的溶液，黄体酮注射液，上海第九制药厂产品，批号980402，使用时用麻油稀释配成500μg/0.1ml的溶液,实验前4h皮下注射500μg/只。生大黄液，称取一定重量的大黄浸泡后用温火煎煮，纱布过滤后，在80℃浓缩成每毫升含生药1g的药液；D-木糖临床诊断试剂，南京建成生物工程研究所提供，批号990826；D-木糖（D-Xylose）Sigma，进口分装，批号980812，北京化学试剂公司提供；地塞米松磷酸钠注射液，江苏省溧阳市制药厂，5mg/ml安瓿，苏卫药准字（1987）218212-10号，批号951025，；Alsever`s液，葡萄糖2.05g、柠檬酸钠8.0g、氯化钠4.2g加双蒸水至1000ml溶解后，高压消毒，作为绵羊红细胞（SRBC）保存液；都氏液，碳酸氢钠1.0g，氰化钾0.05g，高铁氰化钾0.2g加双蒸水1000ml溶解，用于测定血红蛋白；绵羊红细胞（SRBC）自治区医学实验动物中心提供；免疫球蛋白G、M试剂，上海长征医学科学有限公司提供；RPMI-1640培养基，美国GIBCO产品；刀豆蛋白A（ConA），美国Sigma公司产品。植物血球凝集素（PHA），美国Sigma公司产品；牛血清，北京华美公司提供；四甲基偶氮唑（MTT），北京华美公司提供；Hank`s液，南京建成生物工程研究所提供；酵母多糖，Sigma公司产品，使用时用PBS溶液配成浓度为10mg/ml的混悬液；鲁米诺，Sigma公司产品，使用时准确称取1.77mg加PBS至4.8ml溶解,调节pH值为7.2备用；金黄色葡萄球菌，新疆医科大学微生物学教研室提供，菌号26003；I125睾酮放射免疫分析测定盒北京北方生物技术研究所产品，（94）卫药准字R-29号，批号990611。

1.2动物昆明种，NIH小鼠，Wistar大鼠，均由新疆维吾尔自治区医学实验动物中心提供，二级，合格证书：新疆医动字（94），16-001号。

2方法与结果［1～3］

2.1对小鼠小肠推进性运动的影响（墨汁法）选取小鼠57只，雌雄兼用，体重(18.9+1.0)g。随机分成5组，即正常对照组、古汉养生精片组（0.7g/kg，ig，qd×10d）、男宝片小剂量组（0.5g/kg，ig，qd×10d）、男宝片中剂量组（1.0g/kg，ig，qd×10d）、男宝片大剂量组（2.0g/kg，ig，qd×10d）。给药第10天动物禁食12h，用50%碳素墨汁生理盐水溶液0.2ml/10g体重灌胃，20min后脱颈椎处死，立即剖腹，将消化管幽门至直肠末端完整地摘出，不加牵引平铺于玻璃板上，轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度作为小肠总长度。以幽门至墨汁前沿的距离为“墨汁在肠内推进距离”，用公式计算墨汁推进百分率，并注意观察各组小鼠小肠是否增大。

墨汁推进率（%）=墨汁在肠内推进距离（cm）肠管全长（cm）×100%

结果，3个不同剂量组的男宝片能降低小肠墨汁推进率，提示该药对肠蠕动有抑制作用。结果见表1。表1男宝片对小鼠小肠运动的影响（墨汁法）（略）

2.2对生大黄所致脾虚小鼠耐常压缺氧的影响选取小鼠80只，雌雄兼用，体重（20.4±1.3）g，随机分8组，即正常对照组、长正常组、脾虚模型组、长脾虚模型组、古汉养生精片组（0.7g/kg，ig，qd×10d）、男宝片小剂量组（0.7g/kg，ig，qd×10d）、男宝片中剂量组（0.7g/kg，ig，qd×10d）、男宝片大剂量组（0.7g/kg，ig，qd×10d）。正常组和长正常组不进行任何处理，其余组给生大黄液（1g/只，ig×8d），第8天造成脾虚小鼠模型。模型建立后正常组和脾虚模型组小鼠进行常压缺氧实验，其余6组继续给生大黄或和给药治疗，治疗第9天，末次给药后1h将小鼠放入盛有15g钠石灰的广口瓶内（体积200ml），用凡士林涂抹瓶口盖严，使之不漏气，立即计时，以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间。

结果，3个不同剂量的男宝片明显延长脾虚小鼠常压缺氧条件下存活时间，提示该药有明显的增强脾虚小鼠耐缺氧能力。结果见表2。表2男宝片对生大黄致脾虚小鼠耐常压缺氧的影响（略）

2.3对生大黄致脾虚小鼠抗疲劳能力的影响（游泳实验）选取小鼠60只，雌雄兼用，体重（19.4+1.2）g，随机分6组，即正常对照组、脾虚模型组、古汉养生精片组、男宝片3个不同剂量组。正常组不进行任何处理，其余5组小鼠ig生大黄药液1g/只（1ml/只），连续给药8d，造成脾虚模型。并于第9天起按下述剂量进行治疗，同时继续ig生大黄药液，即古汉养生精片组（0.7g/kg，ig，qd×9d）；男宝片小剂量组（0.5g/kg，ig，qd×9d）；男宝片中剂量组（1.0g/kg，ig，qd×9d）；男宝片大剂量组（2.0g/kg，ig，qd×9d），治疗9d后小鼠各种症状消失。第17天末次给药1h后，在（15±1）℃冷水中进行游泳实验，以下沉水底5s以上，未能再上浮为死亡指标，记录小鼠游泳存活时间。

结果，3个不同剂量的男宝片组使脾虚小鼠游泳时间明显延长。结果见表3。表3男宝片对生大黄致脾虚小鼠耐常压缺氧的影响（略）

2.4对生大黄所致脾虚耐高温的影响选取小鼠60只，雌雄兼用，体重(20.7±0.9)g。随机分6组，即正常对照组、脾虚模型组、古汉养生精片组、男宝片3个不同剂量组。正常组不进行任何处理，其余5组小鼠ig生大黄药液1g/只（1ml/只），连续给药8d，造成脾虚模型。并于第9天起按下述剂量进行治疗，同时继续ig生大黄药液，即古汉养生精片组（0.7g/kg，ig，qd×9d）；男宝片小剂量组(0.5g/kg，ig，qd×9d)；男宝片中剂量组（1.0g/kg，ig，qd×9d）；男宝片大剂量组（2.0g/kg，ig，qd×9d），治疗9d后小鼠各种症状消失。第17天末次给药1h后，将小鼠每只分别放入45℃恒温孵育箱1h，以每组小鼠死亡数为指标进行耐高温试验。结果进行χ2检验。

结果，3个不同剂量的男宝片组可提高脾虚小鼠45℃环境中的生存能力，尤其是大剂量组作用明显。结果见表4。表4男宝片对生大黄致脾虚小鼠耐高温能力的影响（略）

2.5对生大黄所致脾虚耐寒能力的影响选取小鼠90只，雌雄兼用，体重(20±2)g。随机分9组，即正常对照组、长正常对照组、脾虚模型组、长脾虚模型组、古汉养生精片组（0.7g/kg，ig，qd×9d）、男宝片小剂量组(0.5g/kg，ig，qd×9d)、男宝片中剂量组（1.0g/kg，ig，qd×9d）、男宝片大剂量组（2.0g/kg，ig，qd×9d）、自然恢复组（生大黄液1g/只，ig×8d）。正常对照组和长正常对照组不进行任何处理，其余组给生大黄液（1g/只，ig×8d），第8天造成脾虚小鼠模型。模型建立后，正常组和脾虚模型组小鼠在-5℃进行耐寒试验；其余除自然恢复组以外继续给生大黄或和给药治疗，治疗第9天，给药后1h将小鼠分别放入-5℃恒温箱2h，以每组小鼠死亡数为指标进行耐寒实验，结果进行χ2检验。

结果，3个不同剂量的男宝片可提高寒冷环境中脾虚小鼠的生存百分率，大剂量组作用更明显。结果见表5。表5男宝片对生大黄致脾虚小鼠耐高温能力的影响（略）

2.6对生大黄致脾虚大鼠木糖排泄率的影响选取大鼠60只，雌雄兼用，体重(227±14)g。随机分6组，即正常对照组、脾虚模型组、古汉养生精片组（0.5g/kg，ig，qd×9d）、男宝片小剂量组(0.35g/kg，ig，qd×9d)、男宝片中剂量组（0.7g/kg，ig，qd×9d）、男宝片大剂量组（1.4g/kg，ig，qd×9d）。正常对照组不进行任何处理，其余组ig生大黄液（1.25ml/100g，qd×8d）造成脾虚。第9天开始加药治疗9天。末次给药后禁食5h，ig10%木糖溶液4.5ml/只，收集5h尿液，同时尾静脉采血分离血清，按试剂盒操作要求进行实验。

结果，模型组大鼠尿木糖排泄率和血清木糖量明显低于正常组，3个不同剂量的男宝片组与模型组比较尿木糖排泄率和血清木糖水平明显提高。结果见表6。表6男宝片对生大黄致脾虚大鼠木糖排泄率的影响（略）

2.7对生大黄致脾虚小鼠免疫器官重量的影响选取小鼠72只，雌雄兼用，体重(19.4±1.1)g。随机分6组，即正常对照组，脾虚模型组、古汉养生精片组、男宝片3个不同剂量组。正常对照组不进行任何处理，其余5组小鼠ig生大黄药液1.0g/只(1.0ml/只)，连续给药8d，造成脾虚模型（症状有便溏、体重减轻、低温偏低、畏寒等）。并于第9天起按下述剂量进行治疗，同时继续ig生大黄药液：即古汉养生精片组（0.7g/kg，ig，qd×8d）；男宝片小剂量组(0.5g/kg，ig，qd×8d)；男宝片中剂量组（1.0g/kg，ig，qd×8d）；男宝片大剂量组（2.0g/kg，ig，qd×8d）。末次给药后1h，摘眼球放血处死，摘出胸腺及脾脏称重。以胸腺和脾脏重量（mg）与体重10g之比为胸腺指数和脾脏指数。

结果，脾虚组与正常对照组比较，胸腺指数和脾脏指数明显降低，而男宝片3个不同剂量组与模型组比较，其胸腺指数和脾脏指数明显增加，其中大剂量组基本恢复正常。结果见表7。表7男宝片对生大黄致脾虚小鼠免疫器官重量的影响（略）

2.8对生大黄致脾虚小鼠体温变化的影响选取小鼠72只，雌雄兼用，体重(19.4±1.1)g。随机分6组，即正常对照组、脾虚模型组、古汉养生精片组、男宝片3个不同剂量组，并测定肛温作为正常体温。正常组不进行任何处理，其余5组小鼠ig生大黄药液1.0g/只(1.0ml/只)，连续给药8d，造成脾虚模型（症状有便溏、体重减轻、体温偏低、畏寒等）后测定肛温作为造模后体温。并于第9天起按下述剂量进行治疗，同时继续ig生大黄药液：即古汉养生精片组（0.50g/kg，ig，qd×8d）；男宝片小剂量组(0.35g/kg，ig，qd×8d)；男宝片中剂量组（0.70g/kg，ig，qd×8d）；男宝片大剂量组（1.40g/kg，ig，qd×8d），分别于给药后第4天和第8天再各测肛温1次。

结果，脾虚模型组与正常对照组比较小鼠体温下降，而男宝片3个剂量与模型组比较，治疗第8天其体温明显升高。见表8。表8男宝片对生大黄致脾虚小鼠体温变化的影响（略）

2.9对生大黄致脾虚小鼠体重变化的影响选取小鼠72只，雌雄兼用，体重(19.1±1.1)g。随机分6组，即正常对照组、脾虚模型组、古汉养生精片组、男宝片3个不同剂量组。正常组不进行任何处理，其余5组小鼠ig生大黄药液1.0g/只(1.0ml/只)，连续给8天，造成脾虚模型，并于第9天起按下述剂量进行治疗，同时继续ig生大黄药液：即古汉养生精片组（0.7g/kg，ig，qd×8d）；男宝片小剂量组(0.5g/kg，ig，qd×8d)；男宝片中剂量组（1.0g/kg，ig，qd×8d）；男宝片大剂量组（2.0g/kg，ig，qd×8d）。观察造模后、治疗第4天和第8天小鼠体重变化。

结果，脾虚模型组与正常组比较小鼠体重显著下降，而男宝片3个剂量组与模型比较，治疗第8天其体重明显增加。结果见表9。表9男宝片对生大黄致脾虚小鼠体重的影响（略）

3讨论

男宝片经上述4项实验，在以生大黄造成大鼠、小鼠脾虚模型中，本片剂可使其耐常压缺氧、低温游泳、耐高温、耐寒时间明显延长；使免疫器官重量（脾脏和胸腺）、体温和体重均高于模型组；使脾虚大鼠尿木糖排泄率提高等均提示本片剂有健脾、纠正脾虚症状的作用。对正常小鼠肠推进性运动有抑制作用，依据理气健脾药物多有抑制胃肠运动，少部分兴奋胃肠运动的原则，本实验结果符合健脾理气药的作用规律。本实验为男宝片健脾作用提供了药理学依据。

【参考文献】

［1］徐叔云，卞如濂，陈修，等.药理实验方法学，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，1991：155.

［2］陈奇.中药药理研究方法学，第2版［M］.北京:人民卫生出版社，1996：335，438，442，443，768，779，1029，1023.

［3］中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南(药学、药理学、毒理学)［M］.1999

【摘要】目的研究男宝片的补肾健脾作用。方法实验观察男宝片对小鼠和大鼠的抗应激反应以及免疫器官重量的影响，探讨男宝片的健脾作用。结果男宝片能抑制小鼠小肠推进性运动，即由（88.4±4.3）%降为（71.1±9.0）%～（75.5±5.0）%。以ig大黄(1.0g/只)qd×8d造成脾虚模型(下同),以使脾虚小鼠耐常压缺氧时间、低温游泳时间、耐高温(45℃)时间、耐寒时间（-5℃）明显延长；使脾虚小鼠的脾脏和胸腺等免疫器官重量增加（中剂量优佳）；治疗4～8d后使小鼠体温和体重高于模型组。以1.25g/100g大黄煎液给大鼠ig.qd×8d造成脾虚模型,可使脾虚大鼠尿木糖排泄率和血清木糖高于单纯脾虚模型组。结论男宝片有健脾功效。

【关键词】男宝片健脾生大黄小鼠