苜蓿总黄酮分析论文

1器材

1.1原料现蕾期紫花苜蓿〔品种为WL323〕采自于河北省保定市河北农业大学实验基地。将苜蓿洗净，40℃下烘干，用粉碎机在40目下粉碎成粉末。

1.2试剂与仪器乙醇、石油醚、芦丁、实验用水为去离子水。VIS-7220型紫外分光光度计，F2102微型植物粉碎机，SHB-IIIA循环水式多用真空泵，KQ2200DE型数控超声波清洗器，756PC型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司），索氏提取器等。

2方法

2.1标准曲线的绘制准确配置100ml浓度为0.168mg/ml的芦丁储备液。准确吸取芦丁储备液0.00，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00，10.00ml放入7个25ml的容量瓶中，用30%的乙醇定容到刻度，在266nm下测定吸光度并绘制标准曲线。标准曲线的线性回归方程为Y=0.18222×C+0.05853（C:mg/ml），线性相关系数r=0.9988。

2.2单因素及正交实验设计见表1。表1正交实验因素水平

3结果

3.1单因素实验结果与分析

3.1.1乙醇浓度的确定称取1g苜蓿粉末3份，分别加入20ml的60%，70%，80%的乙醇，加热回流提取2h，溶液冷却后离心5min，再取0.5ml稀释到10ml在266nm下测吸光度。测定吸光度分别为0.220，0.444，0.421。

随乙醇浓度的增加，吸光度亦随之增大。当浓度达到70%时，黄酮类化合物溶解度最大，吸光度最高。乙醇浓度再增加，黄酮类化合物溶解度减小，同时一些醇溶性杂质、色素、亲脂性强的成分溶出量增加，这些成分与黄酮类化合物竞争同乙醇-水分子结合，从而导致黄酮化合物提取率下降。因此确定乙醇浓度为70%。

3.1.2提取方法的确定称取1g苜蓿粉末3份，分别加入20ml70%的乙醇，分别用加热回流萃取、索氏提取器提取、超声萃取的方法提取2h，然后取部分溶液离心5min，再取0.5ml稀释到10ml测吸光度。测定吸光度为0.443，0.499，0.538，因此确定提取方法为超声提取法。

3.1.3提取时间的确定称取1g苜蓿粉末5份，分别加入20ml70%的乙醇，用超声萃取的方法分别提取0.5，1，1.5，2，2.5h，然后取部分溶液离心5min，再取0.5ml稀释到10ml测吸光度。测定结果为0.321，0.385，0.531，0.527，0.520。可以确定提取时间为1.5h。

3.1.4料液比的确定称取1g苜蓿粉末4份，按1∶10，1∶20，1∶30，1∶40（g/ml）的料液比加入70%的乙醇，用超声提取的方法提取1.5h，然后取部分溶液离心5min，再取0.5ml稀释到10ml测吸光度。测定结果0.512，0.537，0.602，0.497。可以确定料液比为1∶30（g/ml）。

3.1.5提取次数的确定称取1g苜蓿粉末4份，分别加入70%的乙醇，用超声提取法分别提取1，2，3，4次，1.5h/次，然后取部分溶液离心5min，再取0.5ml稀释到10ml，测吸光度。测定结果0.525，0.545，0539，0.521。可以确定提取次数为两次。

3.2正交实验结果与分析在单因素实验基础上，采用L9（34）正交实验对提取工艺条件进一步优化。结果见表2～3。

由表2和表3知，在超声提取下，各因素对提取结果的影响大小依次为B>A>C>D，其中影响因素A、B表现为极显著，因素C表现为显著，因素D对结果的影响不显著，从节省原料的角度考虑选择60%的乙醇。所以最佳组合为A3B2C1D1。表2正交实验设计及结果表3方差分析

3.3苜蓿中黄酮的测定准确称取1.00g苜蓿粉末，加入30ml60%乙醇，用超声法提取3次，1h/次。合并提取液定容到250ml。取1ml样液，放入25ml容量瓶中，用30%的乙醇稀释至刻度，试剂为空白参比。根据测得吸光度，利用标准曲线计算样品中总黄酮含量为3.81%，3.75%，3.69%。

4结论

经正交实验，确定了超声法提取苜蓿总黄酮的最佳工艺为：60%乙醇，30∶1的液固比，提取3次，1h/次。测量结果表明苜蓿全草中含有总黄酮3.75%，苜蓿叶子中含有总黄酮4.85%。

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【摘要】目的检测苜蓿中总黄酮的含量，并研究其提取工艺。方法通过加热回流、索氏提取、超声提取3种工艺比较，确定采用超声提取。以总黄酮含量为考察指标，采用正交实验法优化超声提取的工艺条件。结果所考察因素中，苜蓿的提取工艺各因素影响程度为：料液比＞提取次数＞提取时间＞乙醇浓度，最佳水平搭配为A3B2C1D1。结论苜蓿总黄酮最佳提取工艺参数为：超声法提取，60%乙醇，30∶1的液固比，提取3次，1h/次。苜蓿全草中含有总黄酮3.75%，苜蓿叶子中含有总黄酮4.85%。

【关键词】苜蓿；总黄酮；正交实验