总皂苷范文10篇

总皂苷范文篇1

【关键词】白英总皂苷薯蓣皂苷元分光光度法

白英为茄科植物SolanumlyratumThunb.的干燥全草，性微寒，味苦。最早见于《本经》记载，列为上品，为传统中药，具有清热解毒、祛风化痰、除湿等功效，用于治疗癌症肿瘤、疱疹、疟疾、黄疸、水肿、淋病、风湿性关节炎、白带异常等病证。白英含有多种化学成分，主要有甾体皂苷类、甾体生物碱类、有机酸类等化合物，其中皂苷类成分主要包括以薯蓣皂苷元、替高皂苷元、雅姆皂苷元等皂苷元为非糖部分的多种甾体皂苷。药理研究显示白英中总皂苷体内外具有一定的抗肿瘤作用，且存在一定的选择性。因此，测定白英中总皂苷的含量对评价白英药材质量具有重要意义。总皂苷的测定方法有重量法，UV，TLCS，HPLC，GC－MS法。目前有关白英中总皂苷的含量测定尚未见报道，本文建立了用UV测定白英中总皂苷含量的方法，并比较了24种不同来源的白英中总皂苷的含量，为白英的质量控制提供一定的依据。

一、仪器与材料

紫外分光光度计(上海棱光技术有限公司)、旋转蒸发器(RE-52AA，上海亚荣仪器厂)、水浴锅(巩义市杜甫仪器厂)。

薯蓣皂苷元标准品（中国药品生物制品检定所提供，I539-200001，含量测定用），无水乙醇（AR，天津百盛化工有限公司），甲醇（AR，山东禹王实业有限公司），三氯甲烷（AR，沈阳经济技术开发区试剂厂），盐酸（AR，天津市大茂化学试剂厂），高氯酸（AR，天津市东方化工厂）。

24种不同来源的白英药材均由沈阳药科大学孙启时教授鉴定为茄科植物SolanumlyratumThunb.的干燥全草。

二、方法与结果

2.1对照品溶液的制备精密称定薯蓣皂苷元对照品约3mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容即得。

2.2样品溶液的制备精密称定1.0g白英药材，置索氏提取器内，加60ml三氯甲烷脱脂2h后，挥去三氯甲烷溶剂；用200ml80%乙醇在80℃下提取至无色，将乙醇液旋转蒸发至干；残渣加2.5mol·L-1盐酸50ml加热回流3h，过滤；冷却后用三氯甲烷分3次（30，20，20ml）回流萃取，15min/次；合并三氯甲烷萃取液,水洗至中性，水洗液再加入20ml三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷萃取液，水浴蒸干溶剂,残渣用甲醇溶解并定容至10.0ml即得。

2.3吸收光谱的测定分别精密量取薯蓣皂苷元对照品溶液与样品溶液1.0ml，置水浴中挥干溶剂，精密加入10.0ml高氯酸，摇匀。65℃水浴加热15min，取出立即置于冰水浴中15min后，以空白作参比，在200～600nm波长范围内绘制吸收曲线，薯蓣皂苷元在405nm处有最大吸收，样品溶液在405～412nm处有较强吸收，故选择410nm作为测定波长。

2.4标准曲线的制备精密吸取对照品溶液0.3，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分别置于三角瓶中，挥干溶剂，精密加入10.0ml高氯酸，摇匀。65℃水浴加热显色15min，取出后立即置于冰水浴中15min后停止反应，以空白作参比，在410nm处测定吸光度值。计算得回归方程为A＝0.0276C+0.0055，r=0.9992，结果表明薯蓣皂苷元在8.91～29.70μg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系。

2.5正交实验法对制备样品溶液的优选本实验选定盐酸浓度(mol/L)、乙醇体积分数(%)、水解时间(h)作为考察因素，每个因素各取3个水平，以总皂苷含量为评价指标，应用L9（34）正交表安排实验。因素水平表见表1，正交实验结果见表2。

通过直观分析表明：影响因素的主次顺序为水解时间＞盐酸浓度＞乙醇体积分数，经过分析，选择优化条件为：水解时间3h，盐酸浓度2.5mol/L，乙醇体积分数80%。

2.6稳定性实验准确吸取样品溶液1.0ml，按“吸收光谱的测定”项下显色，于410nm波长处每隔10min测定其吸光度，结果表明样品溶液的RSD为0.4%，样品溶液显色后在60min内稳定性良好。

2.7精密度实验精密吸取对照品溶液1.0ml，共5份，按“吸收光谱的测定”项下显色，410nm波长处测定，RSD为0.8%。实验结果表明，方法的精密度良好。

2.8重复性实验取样品5份，按样品溶液的制备法和显色法，依法测定，计算样品中总皂苷含量。平均总皂苷含量2.12mg·g-1，RSD=1.4%（n=5），表明方法的重复性良好。

2.9回收率实验准确称取一定量已知总皂苷含量的白英样品，每份0.5g，加入一定量的薯蓣皂苷元对照品，按样品溶液的制备和测定步骤进行，计算得回收率。

2.10样品的测定准确吸取样品溶液1.0ml，按“吸收光谱的测定”项下进行测定。分别测定了24种不同来源的白英药材中总皂苷的含量。

从上表中可以得出：不同来源的白英中总皂苷含量不同，产于江苏与昆明的白英中总皂苷含量最高。

三、讨论

皂苷一般易溶于热水、含水乙醇、热甲醇、热乙醇，几乎不溶或难溶于乙醚、苯、石油醚等极性较小的有机溶剂。考虑到甲醇对身体有害，无水乙醇提取不完全等因素，选择乙醇水溶液作为提取溶剂。

根据文献选用含一定浓度的甲醇水溶液和石油醚（氯仿）回流提取，用TLC检查得不到薯蓣皂苷元的斑点。原因是苷类水解时有醇存在，长时间加热可引起其他副反应，皂苷元往往会发生脱水、环合、双键位移和构型改变等变化。

在实验过程中根据文献采用活性炭脱色5min，结果测定吸光度值非常小，原因是活性炭吸附某些苷类物质。比色法所显颜色随显色温度和时间变化而变化，因此，必须严格控制条件，尽量排除干扰。本实验选用的显色条件稳定。

【参考文献】

［1］陈雪梅，陈谦海.中药白英及其混淆种［J］.中药材，2005，28（6）：462.

［2］孙立新，毕开顺，王敏伟.中药白英的研究进展［J］.沈阳药科大学学报，2006，23（4）：251.

［3］任靖，冯国楠，王敏伟，等.白英总苷抗肿瘤作用初步研究［J］.肿瘤防治研究，2006，33（4）：262.

［4］张娟，路金才.皂苷的提取方法及含量测定研究进展［J］.中国现代中药，2006，8（3）：25.

［5］石艳霞.银屑灵冲剂中薯蓣皂甙元的重量测定法［J］.医药动态，1993，（增刊）：77.

［6］王曙，徐小平，李涛.川贝母与其他贝母类药材总生物碱和总皂苷的含量测定与比较［J］.中国中药杂志，2002，27（5）：342.

［7］李敏，费曜，李丽霞，等.天冬中总皂苷含量测定方法的探讨［J］.成都中医药大学学报，2004，27（4）：46.

［8］黄俊斌.黄芪注射液中黄芪总皂苷的含量测定［J］.时珍国医国药，2001，12（5）：394.

［9］严芳芳.比色法测定健之宝口服液中绞股蓝总皂苷的含量［J］.广东药学，2001，11（4）：14.

［10］王强，俞祥生，潘如涛，等.重楼类中药中甾体皂甙元的含量测定［J］.药物分析杂志，1991，11（2）：90.

［11］都述虎，王晓华，夏重道，等.RP－HPLC法测定穿龙薯蓣总皂甙中薯蓣皂甙元的含量［J］.中国药科大学学报，2001，32（1）：37.

［12］陶莉，达晖宁，达世禄.盾叶薯蓣中薯蓣皂甙元气相色谱测定［J］.中草药，1991，22（6）：252.

总皂苷范文篇2

日本岛津紫外分光光度计UV-2401PC（北京）；电子天平MettlerCE240(上海)；试剂均为分析纯；齐墩果酸标准品（供含量测定用）购于中国药品生物制品检定所；紫丁香叶为200609采摘的新鲜叶(由长春中医药大学邓明鲁教授鉴定)，干燥备用。

2方法与结果

2.1紫丁香叶总皂苷的不同提取方法

2.1.1水煎法

取干燥的紫丁香叶100g，加水文火煎煮3次。第1次12倍量水煎2h，后2次加10倍量水，煎1.5h，合并3次提取液，过滤，浓缩，80℃减压干燥，称重。同法做3次平行实验，计算平均得膏率。得膏率(%)=干膏重/生药量×100%。

2.1.2醇提法

传统的提取总皂苷的方法为乙醇提取，因此本实验选用70%乙醇回流提取。取干燥的紫丁香叶100g，用70%乙醇回流提取3次，1.5h/次，加醇量分别为12，10，8倍量。合并提取液，过滤，浓缩80℃，减压干燥，称重。同做3次平行实验，计算平均得膏率。

2.1.3超声波法

取两份干燥的紫丁香叶100g，分别加10倍量水和70%乙醇超声3次，30～40min/次，合并提取液，过滤，浓缩，减压干燥，称重。同法做3次平行实验，计算平均得膏率。

2.2紫丁香叶总皂苷含量测定方法

2.2.1对照品溶液的制备

以齐墩果酸作为标准品，精密称取干燥至恒重的齐墩果酸对照品11.04mg置于25ml容量瓶中，加甲醇5ml超声处理5min，用甲醇定容至刻度，摇匀得浓度为0.44mg/ml的对照品储备液。

2.2.2测定波长的选择

精密吸取齐墩果酸对照品溶液0.05ml及供试品溶液1ml于10ml具塞试管中，水浴挥干溶剂，精密加入新配制的5%香草醛－冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，加塞，摇匀，于60～65℃水浴中加热15min，取出，流水冷却至室温后，精密加入醋酸乙酯5ml，摇匀，以相同试剂为空白，在450～900nm波长范围内扫描。齐墩果酸对照品在553nm处有最大吸收，样品溶液在546nm处有最大吸收（见图1），但在550nm处也有强吸收，故选择550nm为测定波长。

2.2.3标准曲线的制备精密吸取齐墩果酸对照品溶液(mg/ml)0.05，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50ml分别加入6支具塞试管中，即各试管中标准品的量分别为0.022，0.044，0.088，0.132，0.176，0.220mg，按照“2.2.2”项下操作，按分光光度法［5］,于550nm处测定吸光度。得到吸光度与浓度的方程：A=8.3425C+0.0527,r=0.9995(n=6)。在22～220μg范围内齐墩果酸对照品显色后的吸光度与浓度呈良好线性关系。

2.2.4供试品含量测定取“2.1”项下的5组干粉各2.5g，30ml甲醇溶解，称重，超声20min，补足损失的重量，摇匀过滤，取续滤液1ml甲醇定容到100ml，作为供试品溶液。取供试品溶液1ml于10ml具塞试管中，按照标准曲线项下的操作方法测定样品的吸光度。然后根据线性方程计算其总皂苷的含量。结果见表1。表1紫丁香叶中总皂苷不同提取方法含量比较（略）

2.3正交实验法优选紫丁香叶总皂苷醇提工艺通过表1可以看出，不同提取方法直接影响着紫丁香叶总皂苷的测定结果，虽然超声波提取法是近几年发展起来的提取方法，节省时间，而且溶剂用量少，但该法出膏率低，提取得到的总皂苷含量较低，不宜采用。综合考虑，70%乙醇提取总皂苷是比较合适的提取方法。为此，设计醇提正交，以进一步优化醇提工艺。

2.3.1因素水平的确定根据实际情况，选择提取次数（A），提取时间（B），溶媒量（C），醇浓度（D）4个考察因素，每个因素各设置3个水平。因素水平见表2。

2.3.2实验方法及指标考察取紫丁香叶100g，按L9(34)正交表安排实验。共9组实验，每组两次平行实验，以总皂苷含量为指标，测定结果取其平均值。结果见表3，方差分析见表4。表2醇提因素水平（略）表3正交实验结果（略）

3讨论

目前《中国药典》尚未收录紫丁香叶，而且尚未见国内有关于紫丁香叶总皂苷含量的报道。本实验中选用皂苷类比较常见的母核结构——齐墩果酸为对照品，对总皂苷的含量进行测定，不失为一种较好的选择。

在提取时间因素的水平选择上，提取时间太长，成本高，不利于生产，时间短提取不完全。因此选择了1.0，1.5，2.0h3个提取水平；溶媒用量根据实际的浸渍情况，选择12，13，14倍量3个水平；同时预实验结果表明50%以下醇提所得总皂苷含量较低，因此选择50%，70%，90%3种醇浓度水平。表4方差分析（略）

由表3的直观分析结果可知，优选出的提取工艺为A2>C2>D3>B2。由表4的方差结果分析可知，A，C因素对醇提工艺均有显著影响，D因素对醇提有影响，而B因素对结果没有影响。因此，为节省能源，选择提取1.0h。即最佳提取工艺为A2B1C2D2，即以70%乙醇回流提取2次，1h/次，加醇量为13倍量/次。验证实验表明，此提取工艺得到满意的实验结果。

【参考文献】

［1］孙传奇．辽宁省中药资源名录［M］.沈阳：辽宁省中药资源普查办公室，1987：46.

［2］Harbome,J．B．AchemotaxonomicsurveyofflavoriodsinleavesoftheOleaceae［J］.Bot．J．Linn,soc,1980,8(2)：155.

总皂苷范文篇3

【关键词】三七总皂苷氧化铝高效液相法

三七为五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根及根茎，三七总皂苷是中药三七的有效部位，主要含有三七皂苷R1，人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1等达玛烷型三萜皂苷类化合物。现代药理研究证明：三七总皂苷具有多方面的生物活性，主要表现在扩张冠状动脉、增加冠脉血流量、改善心肌代谢、抗自由基、抗凝、钙拮抗等方面。

目前三七总皂苷的富集与纯化一般采用大孔吸附树脂来完成[4]，纯化后三七总皂苷的含量达到60%以上。为了提高药物的安全性和有效性，提高其成药原料药的纯度。本实验拟采用氧化铝柱层析对三七总皂苷的纯化物进行精制，并对工艺进行了考察，为进一步的制剂学研究打下基础。

1仪器与试药

1.1仪器与设备

RE52-99旋转蒸器（上海亚荣生化仪器厂）；DK-S22型电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；JA-1003型电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；电热鼓风干燥箱（上海博迅实业有限医疗设备厂）；美国Tsp高效液相色谱仪；TspP-2000泵、TspUV-1000UV-VIS检测器；TspPC1000色谱工作站；色谱柱：ODSC18柱（250×4.6mm,5μm,大连依利特科学仪器有限公司）。

1.2材料与试剂

三七总皂苷提取物（云南玉溪天然药物有限公司）；三七总皂苷对照品：三七皂苷R1（0745-200008）、人参皂苷Rg1（0703-200015）、人参皂苷Rb1（0704-200115）对照品（中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯，水为二次蒸馏水。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：ODSC18柱（250×4.6mm,5μm）；流动相：A为乙腈，B为水；流速：1.0mL·min-1；采用梯度洗脱法，0～8分钟（26:74），8:10～40:40分钟（34:66）；检测波长203nm；柱温：30℃；进样量20μL。

2.2线性范围关系的考察

分别精密称取三七总皂苷对照品三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1各约6.0mg、2.5mg和2.5mg置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取此溶液3、4、5、6、7mL置50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述对照品溶液各注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，以峰面积(A)对进样量(μg)进行线性回归，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1回归方程分别为：A=327127.8W－681.2（r=0.9991）；A=406964.1W+787.9（r=0.9991）；A=262563.9W－5498.7（r=0.9996），三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂Rb1分别在进样量0.2981～0.6956μg、1.2768～2.9792μg和1.1539～2.6925μg范围内时，峰面积与进样量具有良好的线性关系。

2.3精密度试验

取含量测定项下对照品溶液，连续进样六次，记录色谱图，量取峰面积，计算平均值及相对标准偏差，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的峰面积平均值分别为151792、802039.7和476940.7，RSD分别为0.81%、1.73%和1.62%，结果表明，本方法精密度良好。

2.4供试品溶液的制备

取上柱流出液浓缩至干，精密称定干粉一定量，用甲醇溶解并转溶至10mL量瓶，滤过。精密量取续滤液1mL置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.5工艺参数的考察

2.5.1洗脱剂浓度的考察

取三七总皂苷原料3份，每份10g。分别用50%乙醇适量溶解，分别转移至氧化铝柱（中性氧化铝50g，内径4cm，干法装柱），然后分别用35%、55%和75%乙醇洗脱，分别收集洗脱液，减压回收乙醇，真空干燥，按HPLC法测定总皂苷含量和收率。

从以上结果可知，当用75%乙醇洗脱时，总皂苷含量最高，但收率太低，而用55%乙醇洗脱时虽然收率比用35%乙醇洗脱时略低，但总皂苷含量高6%左右，因此，洗脱剂确定为55%乙醇。

2.5.2洗脱剂用量考察

取三七总皂苷原料3份，每份10g。分别用50%乙醇适量溶解，分别转移至氧化铝柱（中性氧化铝50g，内径4cm，干法装柱），然后用55%乙醇洗脱，分别收集洗脱液，减压回收乙醇，真空干燥，按HPLC法测定总苷含量和收率。

从以上结果可知，随着洗脱剂用量的增加，得到总皂苷的含量逐渐下降，考虑收率，以10倍量55%的乙醇洗脱比较合适。

2.5.3吸附剂用量考察

取三七总皂苷原料3份，每份10g。分别用50%乙醇适量溶解，分别转移至氧化铝柱（柱1：中性氧化铝25g，内径2cm；柱2：中性氧化铝50g，内径4cm；柱3：中性氧化铝100g，内径5cm），然后用10倍量55%乙醇洗脱，分别收集洗脱液，减压回收乙醇，真空干燥，按HPLC法测定总苷含量和收率。

从以上结果可知，随着吸附剂氧化铝用量的增加，收率逐渐降低，而含量呈上升趋势，氧化铝用量为5倍与10倍相比较，前者虽然总皂苷含量略低，但已经大于80%，而且收率较高，因此吸附剂氧化铝的用量确定为5倍。

2.6中试验证结果

取三七总皂苷原料3份，精密称取质量分别为44.4g，42.8g和47.9g，分别用50%乙醇适量溶解，分别转移至氧化铝柱，中性氧化铝用量为三七总皂苷的5倍，然后用10倍量55%乙醇洗脱，分别收集洗脱液，在60℃以下减压回收乙醇，真空干燥，按HPLC测定方法，分别测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量。

从以上三批中试结果可知，按选定的精制工艺可以制备总皂苷含量大于80%的三七总皂苷原料，且收率大于70%，说明此精制工艺是可行的。

3结论

3.1氧化铝柱层析精制三七总皂苷的最佳工艺为：洗脱剂的浓度为55%乙醇，洗脱剂的用量为10倍量吸附剂的用量，吸附剂用量为5倍三七总皂苷的用量。

3.2本实验提出了一种新的三七总皂苷的精制方法—氧化铝柱层析，具有分离效果好、工艺简单、投资少、处理量较大等优点。有文献报道，大孔吸附树脂法具有选择性好、吸附容量大、安全无毒、再生容易等优点，但由于应用时间相对较短，还存在着一些问题，因此，在纯化中药有效成分的工艺过程中，两种纯化方法可以互相结合，取长补短，共同促进中药制剂的不断发展。

参考文献

[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典2005年版二部[S].北京：化学工业出版社，2005:9.

[2]甘烦远.三七的化学成分研究概况[J].中国药学杂志，1992，27(3):128.

[3]ChanP,TomlinsonB.AntioxidantefectsofChinesetraditionalmedicine:focusontrilinoleinisolatedfromtheChineseherbsanchi(Panaxpseudoginseng)[J].JClinPharmacol,2000,40(5):457.

[4]孙建平，崔淑霞，等.大孔吸附树脂富集三七总皂苷的工艺研究[J].黑龙江医药，2007，3(20):232-233.

总皂苷范文篇4

【关键词】开口箭总皂苷开口箭比色法

Abstract:ObjectiveTosetupanassaymethodforthedeterminationoftotalsaponininTupistrachinensisBak.MethodsThesamplesweredeterminedbyspectrophotometry.Thedetectivewavelengthwas(458±2)nm.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.1～0.4mgandtheaveragerecoverywas97.2%(RSD＜4.57%).ConclusionThemethodisreliable,accurate.ItcanbeusedforthequalitycontrolofthetotalsaponininTupistrachinensisBak.

Keywords:Totalsaponin；TupistrachinensisBak.；Spectrophotmetry;Spectrophotometry

开口箭TupistrachinensisBak.系百合科（Liliaceae）铃兰族开口箭属植物。其原植物又名开喉箭、万年青，为多年生常绿草本，以其根状茎入药，作为药用又名岩七、竹根七、竹节参、竹根七、竹节七、牛尾七等。医学古籍记载，开口箭味甘微苦，性寒，主治劳热咳嗽、跌打损伤、风湿痹痛、月经不调等症。土家族民间用其漱口液治疗咽喉炎、扁桃体炎，疗效显著［1］。我国开口箭属植物约占全世界的70%,分布于陕西、甘肃、湖北、四川、云南、贵州等省。主产于湖北三峡库区及神龙架林区，栽培面积大，产量高，资源十分丰富。

本实验室对神农架产开口箭TupistrachinensisBak.的生药学、化学成分和药理活性进行了研究，结果表明开口箭正丁醇提取物对Hela，K562，A2780a等具有很好的抑制作用，细胞毒活性好，抗炎活性也很好。也曾报道了“开口箭中甾体皂苷元的含量测定”［2］。本文进一步探索建立了香草醛-冰醋酸-高氯酸-比色法测定开口箭中总皂苷含量的方法。

1材料与仪器

1.1材料

开口箭根茎，采自湖北省神农架林区，其原植物标本于200207采自同一地区，经三峡大学化学与生命科学学院陈发菊副教授鉴定为TupistrachinensisBak.，原植物及药材现保存于本实验室（编号TC200207SNJ）。总皂苷对照品，本实验室自开口箭分离纯化的皂苷单体3-O-b-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-b-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-b-D-吡喃葡萄糖基(25R)-5(6)-烯-呋甾-3b,22a,26-三羟基26-O-b-D-吡喃葡萄糖苷。含量>98%（HPLC测定）。其他试剂均为分析纯。

1.2仪器S3100紫外分光光度计（韩国Scinco公司），BP211D型电子天平（德国Sartorius公司）。

2方法

2.1对照品、供试品溶液的制备

2.1.1对照品溶液的制备精密称取经干燥至恒重的开口箭总皂苷对照品0.0050g，加甲醇溶解定容至5ml，制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.2供试品溶液的制备精密称取开口箭粉末0.70g（60目筛，50℃干燥4h）置圆底烧瓶中，加入25ml70%乙醇溶液，浸泡过夜，60℃回流提取两次，2h/次,减压抽滤，滤液合并，置蒸馏烧瓶中，在旋转蒸发仪上减压浓缩，除尽溶剂后，加少量甲醇溶解，定容至25ml，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.2测定方法适量供试品溶液置干燥具塞试管，60℃水浴挥干溶剂后，精密加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸，摇匀，置60℃恒温水浴加热20min，取出，立即置冰水浴中冷却15min，加入5ml冰醋酸，摇匀，同时做空白，于（458±2）nm波长处测定吸光度值。

2.3标准曲线的绘制与线性关系精密吸取对照品溶液0.10，0.15，0.20，0.25，0.30，0.35，0.40ml，分别加入干燥具塞试管中，60℃水浴挥干溶剂,依次加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸，置60℃水浴加热20min，取出，立即置冰水浴中15min，停止反应，加入5ml冰醋酸，摇匀，于458nm处测定吸光度，同时做试剂空白。以吸光度为纵坐标，以对照品质量为横坐标,绘制标准曲线,得线性回归方程W=0.0631+0.2835A，r=0.9997，对照品在0.10～0.40mg范围内线性关系良好。

3结果

3.1精密度及重现性实验精密吸取对照品溶液0.2ml,共6份，按“2.2”项下方法自60℃水浴挥干起测定（见表1）。其RSD为1.09%，表明方法精密度良好。精密称取样品粉末0.07g，共5份，按供试品溶液制备方法制备，精密吸取0.05ml,显色测定（见表2）。其RSD为4.58%，表明方法重现性良好。表1精密度实验结果（略）表2重现性实验结果（略）

3.2显色溶液稳定性实验精密量取对照品溶液和供试品溶液适量，分别按标准曲线的制备方法显色后放置,于0，30，60，90，120min测定吸收度值（见表3）。结果表明对照品和供试品在120min内显色稳定。表3显色后溶液稳定性实验结果（略）

3.3加样回收率实验精密称取已知总皂苷含量的开口箭粉末，共5份,加入对照品适量,按照供试品溶液制备方法制备，显色测定。结果见表4,平均回收率为97.2%，RSD为2.26%。表4加样回收率实验结果（略）

3.4样品含量测定精密吸取按供试品溶液0.05ml,按“2.2”测定方法项下操作，同时做空白，计算供试品中总皂苷含量。结果见表5。结果表明开口箭70%乙醇提取物总皂苷含量为135.1mg/g，其百分含量为13.51%，RSD为4.57%。表5样品中总皂苷含量测定结果（略）

4讨论

经过对皂苷类含量测定文献的统计与分析，选定下列4种显色剂：0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸、0.5ml8%香草醛乙醇溶液和5.0ml72%硫酸试液、高氯酸、0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸；4种不同的显色温度：55，60，65，70℃；4种不同的显色时间：10，15，20，25min；通过实验进行比较。发现用0.2ml5%香草醛-冰醋酸和0.8ml高氯酸作显色剂，显色温度为60℃，显色时间为20min时，对照品溶液与供试品溶液在（458±2）nm波长处均有最大吸收。

对照品溶液依法显色后，溶液的波长（400～700nm）扫描图中，在458和554nm两处均出现最大吸收峰，但供试品溶液的最大吸收峰分别在456nm和580nm处，表明供试品溶液在580nm处的吸收峰有其它成分干扰，而在456nm处的吸收峰无其它成分干扰，吸收稳定。

供试品溶液制备时分别用水、甲醇、70%乙醇、95%乙醇作溶剂，进行比较，发现70%乙醇溶液浸泡开口箭粉末时其总皂苷溶出量最大。

建立了开口箭总皂苷含量测定方法，采用5%香草醛-冰醋酸溶液为发色体系的比色法测定开口箭中总皂苷的含量，显色后溶液在120min内稳定，标准曲线在0.10～0.40mg范围内线性关系良好，方法的精密度和重现性好，RSD分别为1.09%和4.58%；加样平均回收率为97.2%，RSD为2.26%；测得开口箭70%乙醇提取物中总皂苷平均含量为135.1mg/g，其平均百分含量为13.51%，RSD为4.57%，方法操作简便，精密度及准确度高,重现性及稳定性好,可用于开口箭药材的质量控制。

【参考文献】

总皂苷范文篇5

【关键词】三七总皂苷氧化铝高效液相法

三七为五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根及根茎[1]，三七总皂苷是中药三七的有效部位，主要含有三七皂苷R1，人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1等达玛烷型三萜皂苷类化合物[2]。现代药理研究证明：三七总皂苷具有多方面的生物活性，主要表现在扩张冠状动脉、增加冠脉血流量、改善心肌代谢、抗自由基、抗凝、钙拮抗等方面[3]。

目前三七总皂苷的富集与纯化一般采用大孔吸附树脂来完成[4]，纯化后三七总皂苷的含量达到60%以上。为了提高药物的安全性和有效性，提高其成药原料药的纯度。本实验拟采用氧化铝柱层析对三七总皂苷的纯化物进行精制[5]，并对工艺进行了考察，为进一步的制剂学研究打下基础。

1仪器与试药

1.1仪器与设备

RE52-99旋转蒸器（上海亚荣生化仪器厂）；DK-S22型电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；JA-1003型电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；电热鼓风干燥箱（上海博迅实业有限医疗设备厂）；美国Tsp高效液相色谱仪；TspP-2000泵、TspUV-1000UV-VIS检测器；TspPC1000色谱工作站；色谱柱：ODSC18柱（250×4.6mm,5μm,大连依利特科学仪器有限公司）。

1.2材料与试剂

三七总皂苷提取物（云南玉溪天然药物有限公司）；三七总皂苷对照品：三七皂苷R1（0745-200008）、人参皂苷Rg1（0703-200015）、人参皂苷Rb1（0704-200115）对照品（中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯，水为二次蒸馏水。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：ODSC18柱（250×4.6mm,5μm）；流动相：A为乙腈，B为水；流速：1.0mL·min-1；采用梯度洗脱法，0～8分钟（26:74），8:10～40:40分钟（34:66）；检测波长203nm；柱温：30℃；进样量20μL。

2.2线性范围关系的考察

分别精密称取三七总皂苷对照品三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1各约6.0mg、2.5mg和2.5mg置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取此溶液3、4、5、6、7mL置50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述对照品溶液各注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，以峰面积(A)对进样量(μg)进行线性回归，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1回归方程分别为：A=327127.8W－681.2（r=0.9991）；A=406964.1W+787.9（r=0.9991）；A=262563.9W－5498.7（r=0.9996），三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂Rb1分别在进样量0.2981～0.6956μg、1.2768～2.9792μg和1.1539～2.6925μg范围内时，峰面积与进样量具有良好的线性关系。

2.3精密度试验

取含量测定项下对照品溶液，连续进样六次，记录色谱图，量取峰面积，计算平均值及相对标准偏差，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的峰面积平均值分别为151792、802039.7和476940.7，RSD分别为0.81%、1.73%和1.62%，结果表明，本方法精密度良好。

2.4供试品溶液的制备

取上柱流出液浓缩至干，精密称定干粉一定量，用甲醇溶解并转溶至10mL量瓶，滤过。精密量取续滤液1mL置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.5工艺参数的考察

2.5.1洗脱剂浓度的考察

取三七总皂苷原料3份，每份10g。分别用50%乙醇适量溶解，分别转移至氧化铝柱（中性氧化铝50g，内径4cm，干法装柱），然后分别用35%、55%和75%乙醇洗脱，分别收集洗脱液，减压回收乙醇，真空干燥，按HPLC法测定总皂苷含量和收率。

从以上结果可知，当用75%乙醇洗脱时，总皂苷含量最高，但收率太低，而用55%乙醇洗脱时虽然收率比用35%乙醇洗脱时略低，但总皂苷含量高6%左右，因此，洗脱剂确定为55%乙醇。

2.5.2洗脱剂用量考察

取三七总皂苷原料3份，每份10g。分别用50%乙醇适量溶解，分别转移至氧化铝柱（中性氧化铝50g，内径4cm，干法装柱），然后用55%乙醇洗脱，分别收集洗脱液，减压回收乙醇，真空干燥，按HPLC法测定总苷含量和收率。

从以上结果可知，随着洗脱剂用量的增加，得到总皂苷的含量逐渐下降，考虑收率，以10倍量55%的乙醇洗脱比较合适。

2.5.3吸附剂用量考察

取三七总皂苷原料3份，每份10g。分别用50%乙醇适量溶解，分别转移至氧化铝柱（柱1：中性氧化铝25g，内径2cm；柱2：中性氧化铝50g，内径4cm；柱3：中性氧化铝100g，内径5cm），然后用10倍量55%乙醇洗脱，分别收集洗脱液，减压回收乙醇，真空干燥，按HPLC法测定总苷含量和收率。

从以上结果可知，随着吸附剂氧化铝用量的增加，收率逐渐降低，而含量呈上升趋势，氧化铝用量为5倍与10倍相比较，前者虽然总皂苷含量略低，但已经大于80%，而且收率较高，因此吸附剂氧化铝的用量确定为5倍。

2.6中试验证结果

取三七总皂苷原料3份，精密称取质量分别为44.4g，42.8g和47.9g，分别用50%乙醇适量溶解，分别转移至氧化铝柱，中性氧化铝用量为三七总皂苷的5倍，然后用10倍量55%乙醇洗脱，分别收集洗脱液，在60℃以下减压回收乙醇，真空干燥，按HPLC测定方法，分别测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量。

从以上三批中试结果可知，按选定的精制工艺可以制备总皂苷含量大于80%的三七总皂苷原料，且收率大于70%，说明此精制工艺是可行的。

3结论

3.1氧化铝柱层析精制三七总皂苷的最佳工艺为：洗脱剂的浓度为55%乙醇，洗脱剂的用量为10倍量吸附剂的用量，吸附剂用量为5倍三七总皂苷的用量。

3.2本实验提出了一种新的三七总皂苷的精制方法—氧化铝柱层析，具有分离效果好、工艺简单、投资少、处理量较大等优点。有文献报道[6]，大孔吸附树脂法具有选择性好、吸附容量大、安全无毒、再生容易等优点，但由于应用时间相对较短，还存在着一些问题，因此，在纯化中药有效成分的工艺过程中，两种纯化方法可以互相结合，取长补短，共同促进中药制剂的不断发展。

参考文献

[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典2005年版二部[S].北京：化学工业出版社，2005:9.

[2]甘烦远.三七的化学成分研究概况[J].中国药学杂志，1992，27(3):128.

[3]ChanP,TomlinsonB.AntioxidantefectsofChinesetraditionalmedicine:focusontrilinoleinisolatedfromtheChineseherbsanchi(Panaxpseudoginseng)[J].JClinPharmacol,2000,40(5):457.

[4]孙建平，崔淑霞，等.大孔吸附树脂富集三七总皂苷的工艺研究[J].黑龙江医药，2007，3(20):232-233.

总皂苷范文篇6

【关键词】正交设计；人参皂苷；提取工艺

人参为舒脉宁注射液中的贵重药，人参皂苷提取量直接影响注射液的疗效。因此为制备舒脉宁注射液而提取人参皂苷，参考有关资料，用正交设计法研究其最佳提取工艺。

1实验材料

1.1人参符合《中国药典》（1995年版一部有关规定）。

1.2人参皂苷Rb1化学对照品，中国药品生物制品检定所提供，批号703-8802。

1.3高效液相色谱仪HP8810美国惠普公司。

2正交设计

2.1因素水平的确定根据人参皂苷的性质，确定用乙醇回流法提取，自然pH值条件下，本研究重点考察乙醇浓度、乙醇用量、回流时间、回流次数等4个因素，每个因素3个水平，因素水平表见表1。表1人参皂苷提取因素-水平表

2.2正交表的选择本研究选择L9（34）表，正交设计及统计分析见表2。

3实验方法

3.1样品液的提取取人参（粗粉）20g，加表2中规定量的规定浓度的乙醇，回流规定的次数和时间，放置24h以上，滤过，回收乙醇，加水溶解并稀释至100ml，115℃灭菌30min，静置3天以上，滤过，备用。

3.2含量测定参照《中国药典》2000版（一部）新增与修订内容汇编（1999年8月）“人参”项下方法进行。精密样品液1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。分别取对照品溶液与供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，即得。

4结果

测定结果见表2。表2提取工艺正交表及统计分析表

5结果分析

实验结果表明，影响人参皂苷提取的因素大小顺序为B>C>A>D，即乙醇浓度为最重要的因素，溶媒用量、提取次数及提取时间影响不大。各因素最佳水平为A2B1C1D3。

6结论

最佳提取工艺：取人参粗粉，加10倍量75%乙醇，回流提取5次，每次30min。

7讨论

(1)人参为五加科植物人参PanaxginsengC.A.Meg的干燥根。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津安神作用。用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病赢虚、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克。人参皂苷为人参的主要成分，含量约为4%。人参皂苷的提取方法较多。有用甲醇提取，除去甲醇后用水溶解，乙醚脱脂，正丁醇提取，得总皂苷［1］。用95%乙醚回流提取，回收乙醇，加水溶解，石油醚等脱脂，正丁醇提取［2］。用80%甲醇室温提取，回收甲醇，乙醚脱脂，正丁醇提取［3］。对于人参制剂提取工艺，有文献报道，将人参分别进行50%乙醇回流、50%乙醇渗漉及水煎煮3种提取液用正丁醇萃取，丙酮沉淀，沉淀干燥后用甲醇溶解过滤，结果热回流比较好［4］。有人选用乙醇浓度、回流次数、回流时间、pH值的影响4个因素，以比色法测定人参总皂苷含量，结果认为用85%乙醇回流7次，每次回流60min，pH值在原自然状态，以此条件提取人参皂苷为最佳方案［5］。本研究是参考各家报道，应用正交设计法研究其最佳工艺。

(2)本研究设计的依据为人参皂苷的性质，人参皂苷易溶于水、甲醇、乙醇，可溶于正丁醇、醋酸、醋酸乙酯。其次根据前人研究的结果。

(3)本研究中，参照中国药典方法，应用高效液相色谱法测定人参皂苷的含量。其方法学考虑将在其他论文中报告，本文不作赘述。

【参考文献】

1李伯廷.植物药有效成分的提取与分离.太原：山西高校联合出版社，1993，262.

2陆蕴如.中药化学.北京：学苑出版社，1995，303-304.

3王继彦.吉林农业大学学报，1993，15(1):25-30.

总皂苷范文篇7

【关键词】开口箭；皂苷；MTT法；细胞毒活性

Abstract：ObjectiveToobservethecytotoxicitiesoftheextractsofTupistrachinensisBak.withinvitrocellculturetechnology,andprovideevidenceforthefurtherresearch.MethodsThecytotoxicitieswereassayedbyMTTmethodsonHL-60andCaskitumorcells.ResultsTheinhibitioneffectoftheextractsofTupistrachinensisBak.,totalsaponins,30%totalsaponinsand70%totalsaponinsonHL-60andCaskicellswereallprominent,comparedwiththenegativemodelgroup(P<0.05).TheirinhibitionratiosonHL-60tumorcellswereasfollows:60.12%,72.25%,89.09%and95.17%，andtheirIC50were65.57,45.07,35.40and22.89μg/ml.TheirinhibitionratiosonCaskicellswere63.94%,71.48%,62.49%and73.43%，andtheirIC50were108.42,84.53,41.02,47.19μg/ml.ConclusionTheextractsofTupistrachinensisBak.havesignificantcytotoxicityonHL-60andCaskitumorcells.

Keywords：TupistrachinensisBak.；Saponin；MTTmethod；Cytotoxicity

开口箭（TupistrachinensisBak.）系百合科Liliaceae铃兰族开口箭属植物，为著名的传统中药，主治劳热咳嗽、跌打损伤、风湿痹痛等症，民间用于治疗咽喉炎、扁桃体炎等。现证明开口箭具有祛痰、抗炎、抑菌及醒酒作用［1，2］。

本实验室通过实验证实湖北省产开口箭含有甾体皂苷和甾体皂苷元,且含量较高［3］。皂苷具有增强免疫功能、抗辐射、抑制肿瘤生长、抗炎、降血糖等广泛的生物学活性,近年越来越受人们的普遍关注。有研究证实开口箭同属植物皂苷成分有细胞毒活性［4，5］。本文旨在通过体外抗肿瘤实验,观察开口箭提取物对HL-60和Caski细胞的细胞毒活性,现报告如下。

1材料

1.1细胞株人急性淋巴细胞性白血病细胞（HL-60）、人宫颈鳞状上皮癌细胞(Caski)均由三峡大学免疫教研室提供。

1.2药品与仪器RPMI-1640为美国GIBCO公司产品；新生小牛血清为杭州四季青生物材料有限公司产品；HEPES为美国Sigma公司产品，胰蛋白酶为美国GIBCO公司产品；四氮唑蓝(MTT)为美国AMRESCO公司产品；丝裂霉素(MMC，浙江海正药液股份有限公司，批号：051211)；酶联免疫检测仪(GENIOSTECAN)；CO2培养箱（日本三洋公司）；LD4-2A离心机(北京医用离心机厂)；96孔板(美国Cornning公司)。

开口箭根茎于2002-07采自湖北省神农架林区，经三峡大学化学与生命科学学院陈发菊副教授鉴定为TupistrachinensisBak.，标本存放于湖北省天然产物研究与利用重点实验室（编号：TC200207SNJ）。

1.3药物制备开口箭根茎粉碎后，用甲醇回流提取3次，合并3次提取液，浓缩后经石油醚脱脂用水饱和的正丁醇萃取，旋转蒸发回收正丁醇，浓缩液抽干后即得到开口箭总皂苷，配成水液，过大孔树脂柱，水洗，30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇梯度洗脱，得开口箭四部分皂苷。

分别取开口箭甲醇提取物、开口箭总皂苷、30%开口箭皂苷、70%开口箭皂苷4个样品，用含10%灭活的新生小牛血清RPMI-1640培养液将其配制成所需浓度，依次为62.5,125,250,500,1000,2000μg/ml。丝裂霉素(MMC)用含10%灭活的新生小牛血清RPMI-1640培养液将其配置为250μg/ml。所有受试样品均用0.22μm微孔滤膜过滤除菌。

2方法

2.1细胞培养HL-60和Caski细胞用RPMI-1640培养液（另加10mmol/LHEPES,2.0mg/mlNaHCO3，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素和10%新生小牛血清），于CO2孵箱中37℃，5%CO2饱和湿度下培养。贴壁细胞用含0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶消化传代。

2.2MTT比色法［6］按Mosmann氏法略加改进。将处于对数生长期的细胞制成单个细胞悬液，调整细胞浓度为0.8×105个/ml,接种于96孔培养板,每孔接种180μl，转板6h后加20μl受试药,另设阴性对照组(不加药)、空白凋零组（只有培养基）和阳性对照组（MMC组），每组均设6个复孔，培养48h后加MTT(5mg/ml)15μl,继续培养4h后,弃去上清液，加DMSO100μl,用全自动酶联免疫检测仪于492nm波长处测定吸光度(OD)值［7］,求出IC50。抑制率（%）=［1-（实验组OD均值-空白组OD均值）/(对照组OD均值-空白组OD均值）］×100%。

2.3统计学处理实验数据以±s表示，数据分析采用SPSS11.5统计软件进行。用Origin软件，通过半对数拟合直线求IC50值。

3结果

3.1开口箭总提取物和总皂苷对HL-60细胞的影响结果见表1。

表1总提取物和总皂苷对HL-60细胞的抑制作用（略）

与阴性对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；n=6

由表1可知开口箭总提取物和总皂苷对HL-60细胞的抑制作用显著，与阴性对照组相比有显著性差异（P<0.05或P<0.01），且呈良好的量效关系,总皂苷的抑制作用强于总提取物。

3.2开口箭30%总皂苷和开口箭70%总皂苷对HL-60细胞的影响结果见表2。

表230%总皂苷和70%总皂苷对HL-60细胞的抑制作用（略）

与阴性对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；n=6

由表2可知开口箭30%总皂苷和70%总皂苷对HL-60细胞的抑制作用显著，与阴性对照组比有显著性差异（P<0.05或P<0.01）。30%总皂苷最佳浓度为25μg/ml，其抑制率达89.09%，70%总皂苷对HL-60细胞的抑制作用虽药物浓度的增加而增大，量效关系明显。

3.3开口箭总提取物和总皂苷对Caski细胞的影响结果见表3。

表3开口箭总提取物和总皂苷对Caski细胞的抑制作用（略）

与阴性对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；n=6

由表3可知开口箭总提取物和总皂苷对Caski细胞抑制作用明显，与阴性对照组比有显著性差异（P<0.05或P<0.01）,呈良好的量效关系，总皂苷的抑制作用强于总提取物。

3.4开口箭30%总皂苷和70%总皂苷对Caski细胞的影响结果见表4。

表430%总皂苷和70%总皂苷对Caski细胞的抑制作用（略）

与阴性对照组比较，**P<0.01；n=6

由表4可知，开口箭30%总皂苷和70%总皂苷对Caski细胞抑制作用显著，与阴性对照组比有显著性差异（P<0.05或P<0.01）,呈现一定的量效关系。

4讨论

以上结果表明，开口箭甲醇提取物、总皂苷、30%皂苷和70%皂苷对体外培养的HL-60和Caski细胞株的抑制作用显著，与阴性对照组比均有显著性差异（P<0.05或P<0.01），其细胞毒作用呈现较明显的剂量依赖性。其中30%开口箭皂苷在25μg/ml时与同浓度下丝裂霉素作用于HL-60细胞的效果相当，70%开口箭皂苷在50μg/ml与丝裂霉素在25μg/ml浓度下作用于HL-60细胞的效果相当。药理实验显示开口箭毒副作用小，因此开发其细胞毒作用有潜在价值。

开口箭总皂苷上大孔树脂柱所得95%开口箭皂苷部分量较少，目前正在研究之中。至于不同的开口箭部位细胞毒活性存在差异，应与它们所含不同皂苷成分有关，还需要对其进行深入研究。

从植物中寻找抗肿瘤药物及抗肿瘤辅助药物，在国内外均为抗肿瘤药物研究的重要组成部分。据文献报道开口箭对HepG2和S180细胞株亦有明显的抑制作用［8］,本实验室发现开口箭对HL-60和Caski细胞有较强的细胞毒作用，可见开口箭具有广谱抗肿瘤作用，此外开口箭还有祛痰抗炎等作用。因此对开口箭的抗肿瘤作用及机制值得进一步研究。

【参考文献】

［1］杨春艳,邹坤,杨兴海,等.开口箭祛痰、抗炎和抑菌实验研究［J］.中国民族民间医药杂志,2005，2:103.

［2］汤子春,邹坤,汪鋆植,等.开口箭与筒鞘蛇菰提取物的醒酒作用的实验研究［J］.时珍国医国药,2006,17(11):2163.

［3］黄丽,廖全斌,邹坤,等.开口箭中甾体皂苷元含量的测定［J］.三峡大学学报·自然科学版,2003,25(6):562.

［4］沈平，王三龙,杨崇仁,等.弯蕊开口箭中的多羟基甾体皂甙元［J］.植物学报,2003,45(5):626.

［5］PanWb,ChangFR,WeiLM,etal.Newflavans,spirostanolsapogenins,andapregnamegeninfromTupistrachinensisandtheircytotoxicity［J］.J.Nat.Prod.,2003,66(2):161.

［6］司徒镇强,吴军正.细胞培养,第1版［M］.西安:世界图书出版公司,2004:199.

总皂苷范文篇8

绞股蓝为葫芦科多年生攀援草本植物Gynostemmapentaphylla(Thunb.)Makino，又名小苦叶、公罗锅底、遍地生根等。绞股蓝在我国药用历史悠久，其药用部位为根状茎或全草，味甘、苦，性寒，有益气健脾、化痰止咳之功效；现代研究表明绞股蓝中含有皂苷、氨基酸、黄酮、糖和多种无机元素等等，其中皂苷有80多种，6种与人参皂苷相似，绞股蓝的提取物具有抗疲劳、抗缺氧、免疫调节、降血脂、降血糖等作用。本文就其药理作用研究进展情况作一综述，为进一步开发研究提供依据。

1药理作用

1.1对心脑血管系统的作用

1.1.1对脑循环系统的作用昆明种小鼠腹腔内注射绞股蓝总皂苷（GP）后，小鼠耳廓血管、脑膜血管的血流速度及流量明显增加，微循环微镜下可见小动脉血管交通支开放数明显增多，证明绞股蓝增加组织血流量与加快血流速度及增加脑动脉侧支循环有关，对缺血性脑损伤可呈现较好的防治作用［1］。GP还可明显抑制谷氨酸引起的Wistar大鼠胚胎大脑皮层神经细胞内NO、H2O2含量的升高，有效地防止线粒体膜电位的下降，从而提高细胞存活率，减少大脑皮层神经元的损伤［2］。绞股蓝提取物还能明显的改善由东莨菪碱和乙醇造成的大鼠学习和记忆的获取与再现的障碍。

1.1.2对心脏的作用绞股蓝总皂苷1mg/kg静脉注射，使麻醉犬动脉收缩压、舒张压、平均动脉压均显著升高，明显增加左室收缩压(LVSP)、室内压最大上升速率(+dp/dtmax)及室内压最大下降速率，20mg/kg静脉注射，则出现心率减慢，动脉收缩压、舒张压、平均动脉压、LVSP、-dp/dtmax均降低，呈现剂量大小不同而出现正负双向效应。绞股蓝总皂苷100mg/kg腹腔注射，能缩小兔冠脉结扎引起的心肌梗塞范围，对大鼠的梗塞心肌，可降低其丙二醛含量，并保护心肌超氧化物歧化酶活性。绞股蓝皂苷5，10mg/kg静脉管注射，明显降低麻醉犬血压和总外周阻力,也降低脑血管及冠状血管阻力,增加冠脉流量,减慢心率,使心脏张力-时间指数下降,对心肌收缩性能和泵血功能无明显影响。绞股蓝总皂苷5mg/只静脉注射,可对抗垂体后叶素引起蟾蜍心电图T波的降低。绞股蓝皂苷静脉注射家兔3d后，夹闭肠系膜上动脉复制肠缺血再灌注心肌损伤模型，利用MedlabU/4c生物信号采集处理系统采集并分析，发现与静脉注射生理盐水的对照组比较，绞股蓝皂苷组左心室收缩峰压（LVSP）、室内压最大上升速率（+dp/dtmax）、室内压最大值（Vpm）均显著升高，室内压最大下降速率（-dp/dtmax）明显降低，表明绞股蓝皂苷可明显改善心肌的收缩功能，对损伤的心肌有保护作用［3］。

1.2对血液系统的作用

1.2.1对血脂的作用GP能够不同程度地降低高脂喂养的大鼠血清中的血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）浓度，尚可显著提高高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）,并且可显著降低血浆内皮素（ET），从而减少动脉粥样硬化的发生［4］；用高脂乳剂灌胃的小鼠服用不同剂量复方绞股蓝胶囊后发现大、小剂量复方绞股蓝胶囊均能提高高血脂小鼠的超氧化物歧化酶（SOD）活性和降低血清过氧化产物丙二醛（MDA）含量，降低高血脂小鼠体重，对血脂（TC，TG，LDL-C）含量有明显降低作用，及对HDL-C有升高作用，表明绞股蓝提取物具有调节高血脂小鼠脂质紊乱作用［5］。

1.2.2对血糖的作用GP体外对a-淀粉酶有一定的抑制作用，而淀粉酶可促进消化道内的淀粉水解为单糖，使单糖的吸收增加，血糖升高；GP对四氧嘧啶致糖尿病大鼠灌胃后血糖水平有显著降低，提示GP在体内外都有一定的降血糖作用［6］。

1.2.3对血液流变学的影响绞股蓝可显著降低高脂血兔的全血黏度及血浆黏度、红细胞压积，提高红细胞变形能力，提示绞股蓝对血淤兔的血液流变学有明显的改善作用［7］。

1.2.4对血小板聚集和花生四烯酸代谢的影响绞股蓝水煎醇提物0.25～2g/L的终浓度,明显抑制花生四烯酸诱导的兔血小板聚集和血栓素B2(TXB2)释放,剂量与效应相关,其半数抑制剂量(ID50)为0.28g/L；35mg/kg静脉注射，对兔血小板聚集及TXB2的释放也有抑制作用；0.25～4g/L对家兔离体胸主动释放6-Keto-PGF1α无明显影响，表明绞股蓝提取物对降低TXA2-PGI2比值有较好作用。绞股蓝总皂苷50mg/kg皮下注射，可明显抑制大鼠血小板血栓及静脉血栓；0.25，0.5，1.0mg/ml体外试验可抑制兔血小板TXB2生成，1mg/kg可抑制兔主动脉环6-Keto-PGF1α生成，对TXB1及Keto-PGF1α生成的ID50分别为1.07mg/ml及1.15mg/ml。也有不同结果，绞股蓝叶热水提取物1/100、1/200浓度，体外实验对牛血小板有聚集作用，此聚集作用可为PGIα抑制，不为阿斯匹林所影响，不为蛋白酶所破坏，但可为β-葡萄糖苷酶所灭活，认为该物质可能是一种葡萄糖苷或多糖。GP也具有对抗血小板聚集诱导剂引起的血栓形成作用［8］。

1.3对呼吸系统的作用绞股蓝在体外可减轻由石英(SiO2)粉尘所致大鼠肺纤维化的肺泡巨噬细胞线粒体过氧化脂质（LPO）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）以及肺泡巨噬细胞死亡率，减轻石英所致的肺纤维化［9］。

1.4对消化系统的作用

1.4.1抗溃疡作用绞股蓝皂苷100mg/kg对水浸造成的应激性胃溃疡有明显的保护作用，对照组的溃疡系数为20.08，绞股蓝皂苷(GPs)组为11.95，溃疡抑制率为40.49%，同样剂量连续5d，对大鼠胃溃疡的治愈率为46.79%，如延长至15d，可使治愈率提高至56.72%。大鼠醋酸性胃溃疡在给予冻干幽门螺旋杆菌（HP）后，胃黏膜溃疡面积明显加大，胃黏膜组织内白细胞介素-8（IL-8）、前列腺素E2（PGE2）和MDA生成明显升高，SOD含量明显下降；而再给予GP后，结果显示，黏膜内MDA生成抑制，IL-8，PGE2水平平行下降，SOD活性提高，溃疡面积、溃疡面积百分率明显减小，有明显促进溃疡愈合作用［9］。

1.4.2对肝脏的作用GPs能明显降低CCl4诱导肝损伤升高的SGOT，SGPT，且可升高白蛋白/球蛋白(A/G)比率；使胶原质降低33%，病理学观察亦发现肝胶原质变薄。证实GPs有保护肝脏和抗肝脏纤维化作用。绞股蓝的水提取物(100,300和500mg/kg)可加快肝脏的恢复。在扑热息痛模型中，绞股蓝水提取物可逆转天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)升高。组织学观察在肝小叶中心区的坏死总量和窦状隙充血、肝中央静脉周围的淋巴细胞和肝巨噬细胞的滤过，以及细胞边界模糊和气球样变性均被GPs逆转。用GP对由四氯化碳致肝功能受损的Wistar大鼠灌胃，发现大鼠的血清谷丙转氨酶(ALT)显著降低，但与正常水平比较扔有差距，表明GP只能减弱四氯化碳对肝功能的损害，而不能完全阻抑其对肝脏的毒性作用。而线粒体过氧化脂质(LPO)含量下降、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性增加，并接近正常水平，表明GP在一定程度上能减弱四氯化碳所致大鼠肝脏脂质过氧化作用［9］。

1.4.3对胆囊的作用同时服用GP和高胆固醇饲料的豚鼠与单纯服用高胆固饲料的对照组相比，胆汁中胆固醇的含量显著降低，胆汁酸含量显著升高，从而提高了对胆固醇的溶解能力，减少了因胆固醇过饱和而致结石的几率［10］。

1.5对泌尿系统的作用在大鼠被动型Heymann肾炎模型，GPs能减轻蛋白尿，降低血脂黏度，提高氧化能力并改善肾功能。GPs对灌服腺嘌呤所致的大鼠慢性肾功能衰竭、肾组织纤维化不仅具有抗纤维化作用，而且可使肾功能明显改善，血浆内皮素和肿瘤坏死因子含量明显降低，血红蛋白量明显升高。在体实验已证实GPs对庆大霉素所致大鼠急性肾功能衰竭具有保护作用。离体实验研究表明，GPs通过抗氧化、拮抗膜的流动性下降、激活并保护膜Na+，K+-ATP酶、减轻DNA合成的受抑等机制减轻庆大霉素肾毒性损伤。用GP对单侧输尿管结扎（UUO）大鼠灌胃后，经测定发现与用标准饲料喂养的大鼠相比，肾组织结缔组织生长因子（CTGF）、转换生长因子β1(TGF-β1)和a-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）及肾小管间质损伤指数明显降低，表明GP能够抑制肾纤维化的进展从而保护肾功能［11］。

1.6对中枢神经系统的作用绞股蓝浸膏450mg/kg灌胃，用小鼠热板法实验表明有镇痛作用；对小鼠自发活动有抑制作用。绞股蓝水提物、20%醇提物、95%醇提物3g/kg皮下注射，连续4～5d，可改善樟柳碱引起的小鼠记忆获得障碍；20%醇提物0.75g/kg、单体Rb150mg/kg，腹腔注射，连续3d，可部分对抗乙醇引起的小鼠记忆获得障碍；Tb125mg/kg腹腔注射1次，可拮抗戊巴比妥钠造成的小鼠记忆获得障碍；20%醇提物0.75，1.5g/kg皮下注射，连续5～6d，或1次性给药，可对抗环己酰亚胺、氯霉素所致小鼠记忆巩固障碍和乙醇引起的记忆再现障碍，表明本品有改善记忆的作用。有实验表明,模型组大鼠海马区存在大量神经细胞凋亡,而复方绞股蓝总苷胶囊高、低剂量组神经细胞凋亡与模型组比较明显减少,说明复方绞股蓝总苷胶囊均具有抑制神经细胞凋亡、保护神经细胞的作用［12］。

1.7抗菌的作用研究表明绞股蓝对不同种细菌呈不同程度的体外抗菌活性，对金黄色葡萄球菌，藤黄八叠球菌抗菌活性最高，具有杀菌作用，而对其它细菌如短小芽孢杆菌、痢疾杆菌等在同样浓度下则为抑菌作用［13］。

1.8对肿瘤的作用动物实验证明，绞股蓝总皂苷（GP）能显著抑制小鼠S180肉瘤的生长，显著增加肿瘤坏死面积（TNA）与肿瘤总面积（TTA）的比率，瘤周尤其是瘤内淋巴细胞、巨噬细胞浸润数量明显增加，带瘤小鼠脾重增加、脾白髓数目增多、体积增大，同时对K562细胞株也具有明显的生长抑制作用，表明GP能直接杀伤瘤细胞，并能通过活化免疫细胞来发挥一定的抑瘤作用［14］。

1.9对免疫功能的影响绞股蓝总皂苷400mg/kg灌胃，连续5d，可对抗环磷酰胺引起的小鼠血清溶血素抗体的减少，150，300mg/kg灌胃连续15d，可对抗地塞米松引起的大鼠脾脏空斑形成细胞、特异性玫瑰花结形成细胞及脾细胞抗体分泌量的减少，400mg/kg灌胃，连续12d，对肉瘤-180荷瘤小鼠的免疫功能低下也有增强作用，绞股蓝总皂苷200，400mg/kg灌胃，连续10d，对环磷酰胺引起的小鼠胸腺缩小、血清溶血素抗体的降低，E-玫瑰花结减少均有明显对抗作用，但对正常小鼠的这些免疫指标，绞股蓝总皂苷表现了双向调节作用；400mg/kg灌胃连续12d，或对抗环磷酰胺引起的自然杀伤细胞活性的降低。对正常小鼠和免疫功能低下小鼠，绞股蓝总皂苷10，30mg/kg皮下注射，可增强由ConA诱导的脾T淋巴细胞的增殖反应，和由LPS诱导的脾B淋巴细胞的增殖反应，并提高脾细胞的白细胞介素-2(IL-2)的生成。绞股蓝总皂苷300mg/kg灌胃，连续7d，可增强小鼠腹腔巨噬细胞活性，提高血清IgG含量，便降低血清溶血素抗体水平，延长小鼠移植心肌的存活时间。绞股蓝浸膏250，500mg/kg灌胃，连续6d，可对抗环磷酰胺引起的小鼠外周血白细胞的减少。绞股蓝总皂苷10mg/kg腹腔注射，连续10d，可对抗地塞米松引起的大鼠肾上腺和胸腺萎缩。绞股蓝总皂苷350mg/kg灌胃，连续6d，对抗地塞米松引起的小鼠肾上腺萎缩及肾上腺皮质功能的低下。绞股蓝皂苷10mg/kg腹腔注射，连续10d，对抗地塞米松引起的大鼠肾上腺、胸腺萎缩及血浆皮质醇含量的下降。200mg/kg的GP能显著促进刀豆蛋白A（ConA）和脂多糖（LPS）诱导的小鼠外周血T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖反应，显著增加小鼠免疫器官重量，提高小鼠血清溶血素含量，但此作用随着剂量的增加（300，400mg/kg）而逐渐减弱，证明适当剂量的GP对细胞免疫和体液免疫有促进作用［15］。绞股蓝总皂苷对小鼠腹腔巨噬细胞内酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶活性及巨噬细胞吞噬功能有增强作用,且存在一定剂量效应［16］。

1.10抗衰老及抗氧化作用绞股蓝水提物0.5%，1.0%混于培养基中饲养果蝇，可延长果蝇的平均寿命，并能促进果蝇幼虫的生长发育。有d-半乳糖造成的小鼠亚急性衰老模型，绞股蓝浸膏15mg/只灌胃40d，可提高衰老小鼠学习主动逃避反应能力，降低脑内单胺氧化酶-B(MAO-B)的异常升高及脑内脂褐质的增加，以及胸腺的缩小和脾脏的增大。绞股蓝浸膏0.5%，1.0%溶液给家蝇饮用，可延长家蝇寿命，并使其脑内超氧化物歧化酶(SOD)活性升高，丙二醛(MDA)含量降低。绞股蓝总皂苷15.6～500mg/L，可降低大鼠微粒体丙二醛(MDA)的形成，对自发性的及Fe2+-半胱氨酸、Vitc-NADPH或四氯化碳诱发的大鼠肝微粒体脂质过氧化，均有抑制作用；2.5～160mg/L对Fe2+-半胱氨酸诱发的大鼠肝微粒体膜及线粒体膜流动性损伤有保护作用。绞股蓝能使D-半乳糖所致的亚急性衰老大鼠下丘脑匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）活性明显增高，同时丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）活性明显降低，而SOD的活性反应了机体清除氧自由基的能力，MDA反应体内自由基产生和老化程度，NO则加速细胞死亡从而使脑老化，证实绞股蓝能够延缓D-半乳糖所致的大鼠衰老［17］。

1.11抗疲劳、抗高温、耐缺氧作用绞股蓝总皂苷200mg/kg灌胃，使小鼠游泳耐力增强。绞股蓝水提取物200mg/kg灌胃，连续14d，对大鼠游泳1h及2h，可保持其较高血糖水平，减少肌糖的消耗。绞股蓝浸膏450mg/kg灌胃，增强小鼠耐缺氧、耐高温(42±0.5)℃及抗疲劳(小鼠泳法)的能力。绞股蓝总皂苷50mg/kg灌胃，连续3d，增加小鼠持续游泳时间，400mg/kg灌胃，增强小鼠耐缺氧能力。绞股蓝皂苷能明显提高小鼠常压缺氧、异丙肾上腺素作用下的缺氧、强迫游泳应激能力及大鼠急性心肌缺血应激能力，且该种作用与人参皂苷类似［18］。

2发展与展望

我国绞股蓝资源丰富，近年来在日常生活保健以及临床上的应用日益广泛。近年来国内外对绞股蓝的药理作用和临床应用进行了多方面的研究，随着对其有效成分的药理活性和有效单体的提取更深层次的研究，绞股蓝必将会更好地造福于人类。

【参考文献】

［1］史以菊，邢国庆，邱玉芳，等.绞股兰对小鼠脑血流量及耐氧能力的影响［J］.现代康复，2001,5（5）：117.

［2］王旭平，赵玲，冯玉新，等.绞股蓝总苷对谷氨酸诱导的胎鼠大脑皮层神经元氧化性损伤保护机制的研究［J］.山东大学学报，2006,44（6）：564.

［3］葛君，朱妤捷，吴军，等.绞股蓝皂苷对家兔肠缺血再灌注致心肌损伤的保护作用［J］.蚌埠医学院学报，2006，31（4）：347.

［4］田健，董晓晖，于信民，等.绞股蓝总皂苷对实验性高脂血症大鼠内皮素的影响［J］.中国煤炭工业医学杂志，2005，8（8）：906.

［5］王树，桂潘莹.复方绞股蓝胶囊对高脂血症小鼠血脂的影响［J］.广西中医药，2005，28（3）：54.

［6］魏守蓉，薛存宽，何学斌，等.绞股蓝多糖降血糖作用的实验研究［J］.中国老年学杂志，2005，25（2）：418.

［7］马平勃，朱全红，黄中伟.绞股蓝泡服对实验性高脂血症及血液流变学的影响［J］.中国现代应用药学杂志，2005，22（6）：454.

［8］董晓晖.绞股蓝总甙与乙酰水杨酸对血小板聚集和血栓形成的影响［J］.济宁医学院学报，2006，29（3）:47.

［9］潘峰,刘迪,黄翠霞,等.绞股蓝皂甙的药理与临床研究［J］.现代中西医结合杂志,2006,15(5):674.

［10］李均乐，田立新.绞股蓝预防豚鼠胆囊胆固醇结石形成［J］.中华肝胆外科杂志，2002，8（10）：609.

［11］张永，丁国华，张建鄂，等.绞股蓝总皂苷防治单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的实验研究［J］.中国中西医结合肾病杂志，2005，6（7）：382.

［12］彭跃钢,黄立武.复方绞股蓝总甙胶囊对血管性痴呆大鼠海马神经细胞凋亡的影响［J］.广西医科大学学报,2005，22(3):368.

［13］曾晓黎.绞股蓝的体外抗菌活性试验［J］.中成药，1999，21（6）：308.

［14］徐长福，王冰，任淑婷，等.绞股蓝总皂甙对小鼠S180肉瘤及K562细胞的抑制作用［J］.西安医科大学学报，2002，23（3）：217.

［15］张海燕，郭强，温伟业.绞股蓝总皂苷对小鼠免疫功能的影响［J］.中兽医学杂志，2006，2：13.

［16］段炳南,陈庆林.绞股蓝总皂甙对小鼠腹腔巨噬细胞内酶活性及吞噬功能的影响［J］.江西医学院学报,2007，47(3):38.

总皂苷范文篇9

【关键词】中药；微丸；临床药学

三七总皂苷（PNS）对抗动脉粥样硬化以及血栓的形成具有显著的效果[1]。此研究则对其有效成分进行检测，随后进行制备，并为脑血栓、冠心病以及心绞痛患者提供新型的治疗方法，以此来提升患者的治疗效果以及生活质量。

1仪器与资料

1.1设备仪器

选择日本生产的LC-10ATvp高效液相色谱仪，其超声波清洗器则为昆山市所生产。

1.2资料

研究中所采用的对照品则为人参皂苷Re，三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，乙腈以及甲醇为色谱纯，水则为自制高纯水，剩余试剂均为分析纯以及PTS原料药。

1.3方法

1.3.1检测有效成分

其检测内容包含：（1）色谱条件和系统适用性试验。色谱柱应设置为C18柱，其流动相为乙腈水19.5：80.5；流速则为1.0ml/min，而检测波长则为210nm，将柱温调制30℃，进样量则为10μl。根据人参皂苷Rg1峰相关数据予以计算[2]（；2）混合对照品溶液制备。在此研究中应对对照品进行正确的称取，在称取的过程中则是通过干燥直至恒重的人参皂苷Re、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1，同时将其进行制备对照品溶液，将其留以备用。而每1ml中具有0.447mg人参皂苷Re、0.11mg三七皂苷R1以及2.484mg人参皂苷Rg1；（3）供试品溶液。对PTS微丸粉末进行准确的称取，称取剂量为50mg，并将其放置在锥形瓶中，随后在其中加入15ml的流动相，并将其混匀，经超声提取30min之后，并通过过滤将其转移至容量瓶中（25ml），将其定容至刻度，采用0.45μm微孔滤膜进行过滤，并留以备用。

1.3.2确定处方

根据相关文献，将三七微丸的处方设置为120gPTS、90g淀粉、惠安PH101型MCC90，PVPK306g以及PVPK30（8%）乙醇溶液的黏合剂[3]。

1.4方法考察

此研究对对照品溶液实行准确的吸取，其吸取量则为0.25ml、0.5ml、1ml、2ml以及4ml，同时将吸取的溶液放置在量瓶中，随后通过流动相对溶液予以稀释，并选择10μl溶液将其注入到液相色谱仪中。

2结果

2.1工艺制备

通过多次试验后可得知，影响挤出滚圆制丸工艺的主要相关因素为挤出速度、滚圆速度以及滚圆时间。选择三因素三水平正交实验设计为主要条件，其因素水平则根据U（34）进行试验，其主要试验内容则为水平1时，其A挤出速度为100r/min，B滚圆速度为500r/min，C滚圆时间为6min；当水平为2时，A挤出速度为200r/min，B滚圆速度为700r/min，C滚圆时间为8min；当水平为3时，A挤出速度为300r/min，B滚圆速度为1000r/min，C滚圆时间为10min。经过分析可知，上述三个因素对微丸影响大小分别为C滚圆时间＜A挤出时间＜B滚圆时间。而正交试验结果表明，总转率较优则为挤出时间200r/min，滚圆速度为1000r/min以及滚圆时间为8min。

2.2回收率试验

对三七皂苷R1、人参皂苷Rg1以及人参皂苷Re含量中的PTS微丸样品各5份，在其中加入三七皂苷R1、人参皂苷Rg1以及人参皂苷Re的对照组品，根据相关制备方法对供试品溶液进行制备，同时对三七皂苷R1、人参皂苷Rg1以及人参皂苷Re，同时对其三七皂苷R1、人参皂苷Rg1以及人参皂苷Re的含量进行计算，并计算其三七皂苷R1、人参皂苷Rg1以及人参皂苷Re的回收率，其回收率经计算分别为99.72%、100%以及98.01%，而RSD值则为1.74%、1.12%以及1.32%。

3讨论

伴随中医技术水平的不断完善以及发展，中药在临床治疗中应用较为广泛，但是因为中药在煎煮的过程中具有一定的麻烦，所以，中成药的研制逐渐受到了药学研究的重视[4]。中药三七具备抗动脉粥样硬化、改善血液粘稠度的效果，与此同时还能够抵抗血栓的产生，此外，对脑血栓、冠心病以及心绞痛等疾病具有显著的治疗效果。就目前而言，以微丸制剂为主的多单元型给药模式，其医患人员予以其一定的重视程度，而此模式逐渐成为现代给药的一项主要内容，因此需要将PTS制备成微丸，从而体现其临床应用价值[5]。

综上所述，此研究通过现代科学技术以及可利用资源，对中药三七微丸进行相应的制备，同时根据中药新药研究技术相关要求，对其进行实验，经过实验之后可知，三七微丸具有一定的安全可靠性，同时能够有效的治疗其血栓等相关疾病，并为新型中药的制备提供准确的根据。

作者:刘庆波 单位:吉林省吉林中西医结合医院

参考文献

[1]李建蕊，陈建波，周群，等.中药三七不同部位和组织的红外光谱分析[J].光谱学与光谱分析，2014，34（3）：634-637.

[2]程晓莉.中药三七微丸的临床药学研究[J].中外医疗，2013，32（36）：119-120.

[3]周雨欣，黄淑勤，唐跃年，等.冠心康微丸质量标准研究[J].时珍国医国药，2012，23（12）：3159-3162.

总皂苷范文篇10

【关键词】金花茶组植物总皂苷总多酚（鞣质）总黄酮

Abstract:ObjectiveTodeterminethechemicalconstituentsoftotalsaponin,totalpolyphenol(tannin)andtotalflavonoidsinSectionChrysanthaChang.MethodsTheircontentsweredeterminedbyspectrophotometry.ResultsThecontentsoftotalsaponin,totalpolyphenol(tannin)andtotalflavonoidswere：①21.30%,6.56%（0.34%）,21.76%；43.24%,3.95%（1.57%）,0.93%；9.91%,6.69%（1.34%）,5.19%；13.53%,5.88%（0.83%）,6.85%；②43.49%,6.79%（1.65%）,1.54%；③36.29%,13.19%（5.33%）,1.12%；20.58%,5.29%（0.14%）,0.33%；④35.90%,7.01%（0.47%）,0.78%；⑤30.08%,7.57%（0.19%）,0.82%respectively.ConclusionThemethodisconvenientandreliabletodeterminethethreesubstances,andthereproducibilityandtherecoveryarefairlygood.

Keywords:SectionChrysanthaChang;Totalsaponin;Totalpolyphenol（tannin）;Totalflavonoids

20世纪60年代初，在我国广西首次发现黄色山茶属植物——金花茶Camelliachrysantha(Hu)Tuyama,震惊世界。到目前为止，已发现并命名的黄花山茶属植物已达32种5变种，1998年张宏光教授将其归类为金花茶组。其中除越南与广西接壤的北部有3种，云南、贵州、四川各有1种外，其余26种、5变种均产于我国广西南部和西南部的亚热带南缘和热带北缘地区。90%分布于中国，80%分布于广西，说明中国是金花茶组植物的特产国，而广西是金花茶组的特产区。

但因为金花茶组植物发现较晚，加之分类上争议时间较长，所以尽管在园林、花卉界轰动较大，亦被国家列为珍稀保护植物，但对它的现代研究甚少。本文以皂苷、多酚、黄酮类成分为指标，对其中产量大、资源较丰富的5种金花茶组植物化学成分进行了分析测定。现报道如下。

1仪器与试药

1.1仪器Unico7200可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司);Laborata4000型旋转蒸发仪(Heidolph公司);BP210S十万分之一电子天平(Sartorius公司);Jascov﹣2560紫外可见分光光度计(JASCO日本分光株式会社)。

1.2试药5种金华茶组植物均采集于广西(由广西林科院梁盛业鉴定，标本现存于大连大学药物研究所）;对照品由本实验室提供；芦丁(东京化成工业株式会社,纯度98%);齐墩果酸(中国药品生物制品检定所,批号:1107092200304,纯度98%以上);没食子酸(中国药品生物制品检定所,批号:1205632200412,纯度99.1%);所用试剂均为分析纯;实验用水为蒸馏水。

2方法与结果

2.1总皂苷的含量测定［1］

2.1.1对照品溶液的制备精确称取干燥至恒重的齐墩果酸对照品25mg,置50ml容量瓶中,加入甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得0.5mg·ml-1的对照品溶液,备用。

2.1.2供试品溶液的制备精确称取金花茶组植物提取物的干浸膏A(g),置100ml容量瓶中加入甲醇,溶解并稀释到刻度,摇匀,得B(mg·ml-1)的溶液,备用。

2.1.3测定波长的选择齐墩果酸对照品溶液和供试品溶液香草醛-冰醋酸-高氯酸显色后,在紫外可见分光光度计上,波长400～800nm区间扫描。均在551nm处有最大吸收,因此选择551nm为测定波长,测得的结果以齐墩果酸为基准计算总皂苷的含量。

2.1.4线性关系考察精确吸取齐墩果酸标准溶液0.0，0.05，0.10，0.15，0.20和0.25ml分置于具塞试管中,挥去甲醇,精密加入5%香草醛-冰醋酸溶液(新鲜配制)0.2ml,高氯酸0.8ml,摇匀,于60℃水浴中加热15min后,置冰浴中冷却。加冰醋酸5ml,摇匀,立即在551nm波长下测定吸光度A,同时以试剂空白作参照。以吸光度A为纵坐标,体积V(ml)为横坐标,绘制标准曲线。得回归方程A=2.252V-0.0066（R2=0.9994）。

2.1.5重复性实验精确吸取C（ml）的供试品溶液,置于具塞试管中,挥去甲醇,照标准曲线项下的方法操作,平行做5次实验,测定吸光度A,代入回归方程,计算总皂苷的含量。A，B，C的数据见表1。结果见表2。表1金花茶总皂苷的实验数据表2总皂苷含量测定结果%

2.2多元酚及鞣质的含量测定［2,3］

2.2.1对照品溶液的制备精确称取干燥至恒重的没食子酸对照品10mg,置100ml棕色容量瓶中,加水溶解并稀释到刻度,摇匀,精密量取25ml,置100ml棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,得浓度为0.025mg·ml-1的对照品溶液,备用。

2.2.2供试品溶液的制备精确称取金花茶组植物提取物的干浸膏D(g),置250ml容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀。过滤,弃去初滤液50ml,精密量取100ml,置500ml棕色容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,得E(mg·ml-1)的供试品溶液Ⅰ;精密吸取供试品溶液Ⅰ100ml,加至已盛有2.4g干酪素的500ml具塞锥形瓶中,密塞,置30℃水浴中保温1h,时时振摇,取出,放冷,摇匀,滤过,弃去初滤液,续滤液作为供试品溶液Ⅱ,备用。

2.2.3测定波长的选择没食子酸对照品溶液和供试品溶液经磷钼钨酸-碳酸钠显色后,在紫外可见分光光度计上,波长400～1000nm区间扫描。均在754nm处有最大吸收,因此选择754nm为测定波长,测得的结果以没食子酸为基准计算总酚和鞣质的含量。

2.2.4线性关系考察精确吸取没食子酸标准溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0和2.5ml分别置10ml棕色容量瓶中,各加水至5ml,再分别加入磷钼钨酸试液1ml,用29%Na2CO3溶液稀释至刻度,摇匀,以相应的试剂为空白,30min后,在754nm波长下测定吸光度A。以吸光度A为纵坐标,体积V(ml)为横坐标,绘制标准曲线。得到回归方程A=0.3532V-0.0292（R2=0.9991）。

2.2.5重复性实验精确吸取F（ml）的供试品溶液Ⅰ和Ⅱ,分别置于10ml的棕色容量瓶中,照标准曲线项下的方法操作,同法测定吸收值,各平行测定5次,在754nm处测定吸光度A,代入回归方程,计算总酚和鞣质的含量。D，E，F的数据见表3。结果见表4。

2.3总黄酮的含量测定［4,5］

2.3.1方法一对照品溶液和供试品溶液经NaNO2-AlCl3显色后在紫外可见分光光度计上以400nm为测定波长进行测定。

对照品溶液的制备：精确称取干燥至恒重的对照品20mg，置100ml容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，得浓度为0.2mg/ml的对照品溶液，备用。

供试品溶液的制备：精确称取金花茶组植物提取物的干浸膏G(g),置100ml容量瓶中加入甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得H(mg·ml-1)的溶液,备用。表3金花茶总酚和鞣质的实验数据表4总酚和鞣质含量测定结果测定波长的选择：对照品溶液和供试品溶液NaNO2-AlCl3显色后,在紫外可见分光光度上,波长200～600nm区间扫描。均在400nm处有最大吸收,因此选择400nm为测定波长。测得的结果以对照品为基准计算总黄酮的含量。

线性关系考察：精密吸取对照品溶液0.00，0.30，0.60，0.90，1.20，1.50ml，各加甲醇至4.0ml，再分别加入质量分数为5%的NaNO2溶液0.3ml,摇匀，室温放置6min，再加10%AlCl3溶液0.3ml,摇匀，室温放置10min，在400nm波长下测定吸光度A，同时以试剂空白做参比。以吸光度A为纵坐标，浓度C（mg/ml）为横坐标，绘制标准曲线。得到回归方程A=15.065C+0.0026,R2=0.9999线性范围：0.013～0.0652mg/ml。

重复性实验：精确吸取I（ml）的供试品溶液,置于试管中,加入甲醇至4.0ml,按照标准曲线项下的方法操作,测定吸光度,平行做5次实验,代入回归方程,计算总黄酮的含量。G、H、I的数据见表5。结果见表6。表5金花茶总黄酮的实验数据表6总黄酮含量测定结果

2.3.2方法二芦丁对照品溶液和供试品溶液经NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色后，在紫外可见分光光度计上，以500nm为测定波长进行测定。

对照品溶液的制备：精确称取干燥至恒重的芦丁对照品20mg,置100ml容量瓶中,加入甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为0.2mg·ml-1的对照品溶液,备用。

供试品溶液的制备：精确称取金花茶组植物提取物的干浸膏J(g),置100ml容量瓶中加入甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得K(mg·ml-1)的溶液,备用。

测定波长的选择：芦丁对照品溶液和供试品溶液NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色后,在紫外可见分光光度上,波长200～600nm区间扫描。均在500nm处有最大吸收,因此选择500nm为测定波长。测得的结果以芦丁为基准计算总黄酮的含量。

线性关系考察：精确吸取芦丁对照品溶液0，0.3，0.6，0.9，1.2和1.5ml分置于试管中,各加甲醇至2.0ml,再分别加入质量分数为5%的NaNO2溶液0.25,摇匀,室温放置5min再加10%Al(NO3)3溶液0.25ml,摇匀,室温放置5min,再加质量分数为4%的NaOH2.0ml,摇匀,室温放置15min,在500nm波长下测定吸光度A,同时以试剂空白做参比。以吸光度A为纵坐标,体积V(ml)为横坐标,绘制标准曲线。得到回归方程A=0.5527V-0.0108（R2=0.9999）。

重复性实验：精确吸取1.0ml的供试品溶液,置于试管中,加入甲醇至2.0ml,按照标准曲线项下的方法操作,测定吸光度,平行做5次实验,代入回归方程,计算总黄酮的含量。J，K，L的数据见表7。结果见表8。表7金花茶总黄酮的实验数据表8总黄酮含量测定结果%

3讨论

3.1总黄酮含量测定方法的选择经大量的文献调研表明，采用可见分光光度法测定总黄酮的含量是比较成熟的方法，此方法稳定性好，准确度高，且简便快捷，易于操作，结果可靠，故选择了采用分光光度法测定金花茶提取物中总黄酮的含量。

3.2皂苷含量测定方法的选择皂苷的分析测定有多种方法，如沉淀法、溶血指数法、层析法等，沉淀法测定往往易带进杂质或导致皂苷变质；层析法一般可以分离出总皂苷，但对总含量测定不适，误差大，成本高，而分光光度法操作简便、灵敏，属于经典、成熟的方法，我们选择了与金花茶皂苷类成分基本母核结构接近的齐墩果酸为对照品，采用分光光度法测定其总皂苷的含量。

3.3鞣质测定方法的选择鞣质的经典含量测定方法有很多种，如重量法、容量法、比色法等。以前最常用的有皮粉法、高锰酸钾法、络合定量法。2005年版以前的《中国药典》Ⅰ部［2］鞣质含量测定法一直沿用皮粉法。但是其缺点是耗用样品多，测定时间长，且没有选择性，测定结果偏高，而且皮粉用量很大，而2005年版《中国药典》Ⅰ部鞣质测定法，以没食子酸为对照品稳定性好，干酪素的吸附作用具有专属性，其方法操作简便，用时短，且重复性和回收率都较理想。

【参考文献】

［1］高声传，郭涛，夏维杰，等．比色法测定酸枣仁提取物中总皂苷的含量［J］.实用药物与临床，2005,8（1）：15.

［2］国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社,2005:附录57，附录63.

［3］王坤，鲁静.中药材中鞣质含量测定方法的研究［J］.中国药事，2004,18(6)：361.