抑菌范文10篇

抑菌范文篇1

关键词：青翘；提取物；抑菌活性

连翘为木犀科(Oleaceae)连翘属(Forsythia)植物连翘Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果实。连翘药材商品分为“青翘”和“老翘”。果实初熟尚带绿色时采收蒸熟，晒干，习称“青翘”；果实熟透颜色发黄时采收，晒干，习称“老翘”［1］。

连翘是中国临床常用传统中药之一，又名黄花条、连壳、青翘、落翘、黄奇丹等。已有的研究报道表明，连翘种子挥发油对3种真菌有明显的抑制作用，陕西产青翘、老翘和连翘叶均对大肠杆菌和金色葡萄球菌也有较好的抑制作用［2～6］，上述研究报道都没有对连翘的提取物进行系统的抑菌活性研究。本研究首次以山西道地药材青翘作为研究对象，比较其不同极性提取物的抑菌活性，旨在为临床应用连翘提供理论依据。

1材料与仪器

1.1药材青翘200806购自山西省安泽县连翘GAP生产基地，植物标本由山西省药检所郭文菊研究员鉴定，植物标本现存于山西中医学院实验中心。

1.2试剂与菌株金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus、大肠杆菌Escherchiacoli、白色念珠菌Candidaalbicans，均由山西省药品检验所提供。营养琼脂培养基，购自杭州天和微生物试剂有限公司；牛肉膏购自北京市海淀区微生物培养基制品厂，蛋白胨购自北京奥特博星生物技术有限责任公司，庆大霉素细菌药敏试纸购自杭州天和微生物试剂有限公司，所用试剂均为分析纯。

1.3仪器与设备LR4001型旋转蒸发仪（德国Heidolph公司）；CA-111型冷却水循环系统（上海爱郎仪器有限公司）；SHB-88型水循环真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；DHP-9162型电热恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；DSX-280B型手提式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；BBS-DSC型洁净工作台(上海巴艾贝斯科技有限公司)；BS224S-L型电子分析天平（德国Sartorius公司）。

2方法

2.1青翘提取物的制备取青翘1kg，粉碎，用95%乙醇加热至70℃回流提取4次，3h/次，减压浓缩回收溶剂至无醇味，得总提取物320g。总提取物经水悬浮后，用石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇依次萃取，得到的石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇萃取相及萃取后水相提取。取适量各部位浸膏及总浸膏，干燥成粉末，备用。

2.2抑菌活性分析

2.2.1药敏纸片的制备［4］

将普通定性滤纸用打孔机打成若干圆形纸片，直径为6mm，置于干燥洁净的试管内，放入压力蒸气灭菌器中经121℃，20min高压灭菌，干燥。分别取干燥后的不同待试样品0.5，1.0，2.0mg，用合适的溶剂溶解，将滤纸片放入溶液中，反复吸取、晾干，直至将溶液吸干，备用。

2.2.2培养基的制备固体培养基：用天平准确称取36g营养琼脂，加入蒸馏水1000ml，加热并不断搅拌，使琼脂完全溶解。然后放入压力蒸气灭菌器中经121℃，20min高压灭菌，取出趁热倒入经过高压灭菌的培养皿中，厚度约3～5mm,冷却凝固后备用。

液体培养基［7］：用天平准确称取牛肉膏0.3g，蛋白胨1g，氯化钠0.5g，加入蒸馏水100ml，加热并不断搅拌，用1%NaOH溶液调节pH7.2～7.4，然后放入压力蒸气灭菌器中经121℃，20min高压灭菌，分装于试管中，备用。

2.2.3菌悬液的制备用接种环分别取各菌种一环，接种于液体培养基中，放入37℃培养箱中培养24h，用灭菌生理盐水分别稀释至1×10-5CFU/ml浓度，备用。

2.2.4药物抑菌作用测定采用K-B纸片扩散法［8］，用无菌移液管吸取稀释好的菌悬液0.1ml，置于培养基中央，用涂布棒涂布均匀。用无菌镊子夹取含药滤纸片贴在培养基表面，以含药量为10μg的庆大霉素细菌药敏试纸为阳性对照。放入37℃培养箱中培养24h后，观察抑菌圈，并用十字交叉法测量抑菌圈直径,结果以毫米(mm)表示,见表1～3。每种不同含药量的样品对3种菌均做3组平行对照，结果取平均值。

3结果

用青翘不同提取物，以细菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和霉菌白色念珠菌作为指示菌进行抑菌实验。结果见表1～3。表1青翘不同提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌圈活性，表2青翘不同提取物对大肠杆菌的抑菌圈活性，表3青翘不同提取物对白色念珠菌的抑菌圈活性（略）。

从表1看出，除氯仿提取物外，其余各提取物均对金黄色葡萄球菌均有抑制作用，其活性比较：正丁醇提取物﹥醋酸乙酯提取物﹥石油醚提取物≈95%乙醇提取物﹥水提取物。并且，随着纸片含药量的增加，抗菌作用增强。

从表2可知，青翘不同提取物对大肠杆菌均有一定抑制作用。总体来看，氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和95%乙醇提取物对大肠杆菌抗菌活性较强，其次为石油醚提取物。并且，石油醚提取物与95%乙醇提取物在含药量为0.5mg时抗菌活性最强，氯仿提取物在含药量为1.0mg时抗菌活性最强，而其它提取物含药量为2.0mg时抗菌活性最强。这与文献报道的连翘乙醇提取物的浓度与抑菌作用强弱之间并不呈简单的正比关系［6］相一致，提示我们多种成分同时存在时可能仅存在“最适抑菌浓度”。

从表3可知，青翘不同提取物对白色念珠菌均有一定抑制作用。总体来看，醋酸乙酯提取物和正丁醇提取物对白色念珠菌的抑制作用较强，其次为95%乙醇提取物。所有提取物的抗菌作用受含药量改变的影响不大，并且，纸片含药量为0.5mg时，显示出略强的抗菌活性。与青翘提取物对大肠杆菌的抑菌作用一样，说明了浓度与抑菌作用强弱之间并不呈简单的正比关系。

4讨论

本研究表明，青翘不同提取物对3种菌株均表现了不同程度的抑菌作用，抑菌作用的顺序为金黄色葡萄球菌﹥大肠杆菌﹥白色念珠菌。金黄色葡萄球菌是目前引起上呼吸道感染的常见菌，这与中医药认为连翘具有清热解毒功效，以及连翘治疗呼吸道感染的临床应用基本吻合，临床上一些感染性疾病的最终治愈还是依赖清热药的抗病原体作用，因此抗菌是这类药物的主要药理作用［6］。对于金黄色葡萄球菌和白色念珠菌，抑菌活性成分集中于正丁醇和醋酸乙酯提取物中；而对于大肠杆菌，抑菌活性成分集中于醋酸乙酯和氯仿提取物中。这说明青翘中极性较大的成分具有较强的抑菌活性，是其发挥清热解毒功效的物质基础。青翘提取物对大肠杆菌的抑菌作用研究表明，95%乙醇、石油醚与氯仿提取物浓度与抗菌作用强弱之间不呈正比关系，查阅相关资料［5］，推测其原因可能是青翘提取物中的某些极性小的成分提供了菌体生长所需的“营养物质”，或是这些极性小的成分刺激了菌体的生长。由于中药成分的复杂性和各种成分性质的差异性，使药物作用过程和机理更加复杂。因此，以往参照抗生素求最小抑菌浓度(MIC)的方法很难准确地反映青翘的抑菌活性，应该寻求它的“最适抑菌浓度”。

研究结果可以指导青翘中抑菌活性成分的分离纯化，为更好地发挥青翘抗菌作用奠定基础。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005:117.

［2］牛新华，邱世翠，邸大琳，等.连翘体外抑菌作用的研究［J］.时珍国医国药，2002,13(6):342.

［3］杨天鸣，张志海,张虹.连翘水提物抗菌作用的实验研究［J］.兰州医学院学报，2003,29(1):40.

［4］段飞，张双民，杨健雄，等.连翘叶提取物抑菌作用的研究［J］.西北药学杂志，2005，20(2):66.

［5］刘世旺，徐艳霞，郑永良.连翘乙醇提取物对细菌生长曲线的影响［J］.安徽农业科学，2007,35(24):7383.

［6］张恩户，赵子剑，张英，等.连翘及其制剂抗菌效价的生物测定法［J］.中国中医基础医学杂志，2005,11(10):782.

抑菌范文篇2

【关键词】黄连；体外抑菌；实验研究

Abstract：［Objective］Tostudytheinvitrobacteriostasiseffectofdifferentprocessedproductsofcankerroot.［Method］Putdifferentprocessedproductsofcankerrootdecoctionsinculturemediumandcultivatedwithbacteriainthesametime，observetheinfluenceofdrugsonbacteriagrowthtojudgethestrengthofbacteriostasis.［Result］ItshowsthebacteriostasisofdifferentproductswithMICbutindifferentstrength.［Conclusion］Differentprocessedproductsofcankerroothavethesamebateriostasisasrawcankerroot，butwithdifferentfunctionalbacteriagroups.

Keywords：cankerroot；bacteriostasisinvitro；experimentalstudy

黄连为常用中药，临床运用广泛，其有效成分为小檗碱。据古书记载黄连能治“肠辟腹痛，妇人阴中肿痛”，“泻心火，去中焦湿热”，“治诸疮，赤眼暴发”等。近代研究证明黄连和小檗碱均有明显的体外抑菌作用，而且抑菌范围广［1］。然而黄连不同炮制品临床应用也较常见，故笔者对黄连生品和几种炮制品的水煎液的抑菌作用进行了体外实验观察，现将结果报道如下。

1实验材料

1.1药材原料黄连购自杭州华东医药药材公司，为毛茛科植物黄连CoptisChinensisFranch的干燥根茎，根据《中国药典》（2005版）鉴定为正品。其不同炮制品为：（1）生黄连：取原药，成簇者掰开，除去泥沙等杂质，抢水洗净略润，切薄片，干燥。（2）炒黄连：取原药，炒至表面棕黄色，微具焦斑时，取出，摊凉。（3）酒黄连：取黄连，与黄酒拌匀，稍闷，炒至表面色变深时，取去，摊凉。黄连与黄酒的比例为100∶12.5。（4）姜黄连：取黄连与姜汁拌匀炒至表面色变深时，取出，摊凉。黄连与姜汁的比例为100∶12.5。（5）萸黄连：取吴茱萸加适量水煎煮，煎液与净黄连拌匀，待液吸尽炒干，取出，摊凉。黄连与吴茱萸的比例为100∶10。

1.2实验菌种由杭州市桐庐第一人民医院检验科微生物实验室提供。

2实验方法

2.1水煎液的制备称取黄连生品及各炮制品饮片10g，分别加10倍量蒸馏水浸20min后，加热煮沸1h过滤，在药渣中再加5倍量蒸馏水煮沸半小时后过滤，将两次滤液合并，在沸水浴上浓缩成1g/ml浓度的水煎液备用。

2.2抑菌试验采用混合法进行，将各炮制品水煎液的原液，分别用无菌蒸馏水作等倍稀释（1/2～1/32），加入双倍营养琼脂混合，倾注成平板。分别接种一定菌龄（12～16h）及一定浓度（80万/ml）的实验菌液，置37℃温箱培养，经24h后观察各细菌在不同药物浓度中能否生长，不生长的药物最低浓度，即为该药物最低抑菌浓度（MIC）。

3实验结果

黄连不同炮制品的抑菌作用，以该药物的最低抑菌浓度来衡量其对常见细菌的体外抑菌效果，结果见表1。

表1黄连不同炮制品的体外抑菌效果（略）

实验结果表明，黄连不同炮制品的水煎液对上述各菌株均有不同程度的抑制作用。生品和各种炮制品对福氏痢疾杆菌、宋内氏痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌抑菌作用较强，对伤寒杆菌、副伤寒杆菌抑菌作用较弱，此结果和有关资料相符［2］。而酒黄连水煎液对金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌的抑制作用优于生品及其他炮制品。

体会

黄连中主要有效成分为小檗碱（黄连素）。黄连碱，药根碱也是抗菌作用的重要成分［3］，因协同作用，所以黄连的抑菌作用强。实验结果显示，不同炮制品和生品相比也都有一定程度的抑菌作用，这是因为具有抗菌作用的小檗碱在生品和各炮制品中含量变化不大，经数理统计无显著性差异［4］。实验中各炮制品对不同细菌的MIC值不同，说明黄连经不同炮制后其所含成分发生部分变化，药理作用和抑菌机制也发生相应变化。所以，黄连生品及各种炮制品临床应用时应根据病情正确使用。

【参考文献】

［1］王筠默.中药药理学［M］.上海：上海科学技术出版社，1986：38.

［2］国家中医药管理局科技教育司.中药药理学［M］.北京：中国中医药出版社，1997：14.

抑菌范文篇3

1.1药材原料黄连购自杭州华东医药药材公司，为毛茛科植物黄连CoptisChinensisFranch的干燥根茎，根据《中国药典》（2005版）鉴定为正品。其不同炮制品为：（1）生黄连：取原药，成簇者掰开，除去泥沙等杂质，抢水洗净略润，切薄片，干燥。（2）炒黄连：取原药，炒至表面棕黄色，微具焦斑时，取出，摊凉。（3）酒黄连：取黄连，与黄酒拌匀，稍闷，炒至表面色变深时，取去，摊凉。黄连与黄酒的比例为100∶12.5。（4）姜黄连：取黄连与姜汁拌匀炒至表面色变深时，取出，摊凉。黄连与姜汁的比例为100∶12.5。（5）萸黄连：取吴茱萸加适量水煎煮，煎液与净黄连拌匀，待液吸尽炒干，取出，摊凉。黄连与吴茱萸的比例为100∶10。

1.2实验菌种由杭州市桐庐第一人民医院检验科微生物实验室提供。

2实验方法

2.1水煎液的制备称取黄连生品及各炮制品饮片10g，分别加10倍量蒸馏水浸20min后，加热煮沸1h过滤，在药渣中再加5倍量蒸馏水煮沸半小时后过滤，将两次滤液合并，在沸水浴上浓缩成1g/ml浓度的水煎液备用。

2.2抑菌试验采用混合法进行，将各炮制品水煎液的原液，分别用无菌蒸馏水作等倍稀释（1/2～1/32），加入双倍营养琼脂混合，倾注成平板。分别接种一定菌龄（12～16h）及一定浓度（80万/ml）的实验菌液，置37℃温箱培养，经24h后观察各细菌在不同药物浓度中能否生长，不生长的药物最低浓度，即为该药物最低抑菌浓度（MIC）。

3实验结果

黄连不同炮制品的抑菌作用，以该药物的最低抑菌浓度来衡量其对常见细菌的体外抑菌效果，结果见表1。

表1黄连不同炮制品的体外抑菌效果（略）

实验结果表明，黄连不同炮制品的水煎液对上述各菌株均有不同程度的抑制作用。生品和各种炮制品对福氏痢疾杆菌、宋内氏痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌抑菌作用较强，对伤寒杆菌、副伤寒杆菌抑菌作用较弱，此结果和有关资料相符［2］。而酒黄连水煎液对金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌的抑制作用优于生品及其他炮制品。

4体会

黄连中主要有效成分为小檗碱（黄连素）。黄连碱，药根碱也是抗菌作用的重要成分［3］，因协同作用，所以黄连的抑菌作用强。实验结果显示，不同炮制品和生品相比也都有一定程度的抑菌作用，这是因为具有抗菌作用的小檗碱在生品和各炮制品中含量变化不大，经数理统计无显著性差异［4］。实验中各炮制品对不同细菌的MIC值不同，说明黄连经不同炮制后其所含成分发生部分变化，药理作用和抑菌机制也发生相应变化。所以，黄连生品及各种炮制品临床应用时应根据病情正确使用。

【参考文献】

［1］王筠默.中药药理学［M］.上海：上海科学技术出版社，1986：38.

［2］国家中医药管理局科技教育司.中药药理学［M］.北京：中国中医药出版社，1997：14.

［3］国家中医药管理局科技教育司.中药药理学［M］.北京：中国中医药出版社，1997：14.

［4］李凌云，廖波，甄汉琛.黄连不同炮制品中盐酸小檗碱的含量研究［J］.中国药业，2001，10（12）：36.

抑菌范文篇4

实验药物：小檗碱、药根碱、黄连碱和巴马亭（由实验室从石柱黄连中提取分离制备，HPLC检测纯度均在97%以上）。实验菌株：金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，金黄色葡萄球菌耐药菌（MR），脓肿分枝杆菌，伤寒杆菌，绿脓杆菌，志贺氏痢疾杆菌，克雷伯氏菌，肠炎沙门菌，巨大芽孢杆菌，枯草杆菌，大肠杆菌变形杆菌，白色葡萄球菌，假丝酵母，白色念珠菌，四联球菌，鱼害粘球菌和鱼肠型点状产气单胞菌（实验菌株由重庆医科大学基础医学院病原微生物教研室和西南大学资源与环境科学学院微生物教研室提供）。

培养基：真菌采用改良沙保氏培养基（配方为：蛋白胨10g，葡萄糖20g，蒸馏水1000ml），鱼病原菌（鲑肾杆菌，鱼害粘球菌和鱼肠型点状产气单胞菌）采用胰蛋白胨醋酸钠培养基（配方：胰蛋白胨5.0g，醋酸钠2.0g，酵母膏5.0g，牛肉膏0.2g，蒸馏水1000ml），其它细菌采用普通细菌培养基加减成分进行培养。配制时固体培养基加入1.5%的琼脂，液体培养基不加。

实验设备：96微孔板，酶标仪，超净工作台，灭菌锅，恒温培养箱。

2方法

2.1微生物敏感性实验将备选的菌种采用较高浓度的药液进行药物敏感实验，初步确定3种生物碱对实验菌的抑菌作用，为进一步研究药物对敏感菌的抑菌能力提供依据。

方法为：①药液配制及纸片制备：将每种药液均配制成浓度为2.0mg/ml的溶液，将直径6.35mm的纸片浸泡于药液，100℃/30min灭菌，冷却后置冰箱保存。②菌液制备：将实验菌种先接种到斜面活化培养24h,脓肿分枝杆菌培养2d后用灭菌生理盐水洗下，计数后用液体培养基配成108cfu/ml的菌液。③抑菌圈试验：用灭菌后的涂布环将试验菌液均匀涂抹于固体琼脂平板上，每个平板放上3个药物纸片，脓肿分枝杆菌培养2d，其它实验菌培养24h后观察，记录抑菌环直经。

2.2敏感菌的MIC定量实验对3种药液进行药物敏感性实验以后，挑选敏感的菌种，采用液体培养基连续稀释法培养后检测每种黄连生物碱对敏感菌的最小抑菌浓度（MIC）。

1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256，1∶512和1∶1024共11个浓度。②实验操作在96微孔板上进行，每试验微孔用移液枪加入液体培养基100μl，试验菌液20μl，药液120μl，混匀后置37℃培养，脓肿分枝杆菌培养2d，其它实验菌培养24h后观察。每个实验3个重复并设立不加实验菌的本底对照（120μl药液＋120μl液体培养基）。③采用酶标仪检测微孔板实验菌的生长情况，检测指标为微孔中培养液体系的光密度（OD值），检测波长620nm。实验微孔的OD值减去同浓度的本底对照的OD值即为实验微孔的OD净值。根据OD净值判定药物对该实验菌的MIC。

3结果与讨论

3.1药物敏感性实验表1为黄连中4种生物碱对常见19种微生物药物敏感性试验的观察结果，从表中可以看出，4种黄连生物碱的敏感菌菌谱除了药根碱以外其它3种基本相同，从表中数据不难发现，黄连生物碱类对G+菌比对G－菌和真菌的作用更加明显。表1黄连生物碱对19种病原菌的药敏实验（略）

3.2黄连生物碱敏感菌的MIC测定表2为4种黄连生物碱在2000μg/ml浓度纸片法条件下筛选出的14种敏感菌的MIC测定结果，从表中数据可知：4种生物碱对同种敏感菌的抑菌能力有一定的差异，总体分析来看，小檗碱的抑菌作用和抑菌谱似乎更大一些，黄连碱和巴马亭次之，药根碱最弱。由于药物的难溶性而限制进一步提高药物浓度，在表面看来是抑菌谱的差异实际上可能是抑菌能力的差异。同时在试验中还观察到4种生物碱对耐药金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用，小檗碱，黄连碱和巴马亭对脓肿分枝杆菌具有一定的抑制作用。表24种黄连生物碱对敏感菌的MICμg·ml-1（略）

小檗碱，黄连碱，巴马亭和药根碱是黄连中含量最为丰富的4种生物碱，4种生物碱具有相同的基本分子骨架即原小檗碱类生物碱分子骨架和芳型季铵氮结构，4种生物碱均具有相同的异喹啉基本分子骨架，抑菌谱理论上不会产生较大差异。而Iwasa等［2］报道原小檗碱类生物碱的药效必需结构为7位的芳环季铵氮结构，4种生物碱在分子结构上的区别在于A环2，3位取代基团和D环9，10位的取代基团的不同，而在A环和D环取代基团不同对原小檗碱类化合物的抑菌活性会有增减作用。

张传美等［3］发现黄连复方三黄汤或黄连小檗碱对庆大霉素大肠杆菌具有很好的抑制活性，认为它们能抑制和消除耐药菌株的抗药性。本实验中4种黄连生物碱对金葡菌和耐药金葡菌（MR）的MIC基本相同，进一步证明了黄连生物碱对耐药菌株有较好的抑制作用，就此现象进行研究具有很高的医学价值。

对原小檗碱类化合物药理作用的深入研究后发现，该类化合物除了具有较强的抗菌消炎作用外，而且还具有降血脂，降血糖，抗肿瘤和抗疟疾等药理作用［3～5］。因此，对原小檗碱类生物碱药物化学的深入研究具有较高的科研价值。

【参考文献】

［1］JiYB.Thepharmacologyandapplicationoftheactivecomponentofchineseherbs［M］.Harbin:Heilongjiangtechnologicalpress,1995：691.

［2］KIwasa,MKamigauchi,MUeki,etal.Antibacterialactivityandstructure-activityrelationshipsofberberineanalogs［J］.EurJMedChem,1996,31:469.

［3］ZhangCM,LiuNB,YuM,etal.InhibitionofCompoundingofGentamycin,SanhuangtangandBerberinetoE.coliinVitro［J］.JLaiyangAgriCo,2004，21(1):14.

［4］WeiJ,JiangJD,WuJD,etal.Researchontheeffectiveimprovementofhyperlipidemiabyberberine［J］.ChinJDiabetes,2005,13(1):49.

［5］YinJ,HuRM,TangJF,etal.Glucose-loweringeffectofberberineinvitro［J］.ActaUnivMedSecondShanghai,2001,21(5):4252.

抑菌范文篇5

1资料与方法

1.1菌种与培养基试验菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯氏菌，由浙江省台州医院微生物实验室友情赠送。牛肉膏蛋白胨培养基按文献［4］自制，PH为6.0（用PBS配制［5］）。

1.2五味子提取物的制备五味子饮片购自临海市医药有限公司，经70℃烘干后研成粉末。取粉末10g用75％乙醇在超声波清洗器中提取，反复多次，直至浸出液色淡。将浸出液浓缩，并定容到10ml，即1ml提取液为1g五味子的提取物［6］。提取液过0.22μm滤膜除菌，4℃贮存备用。

1.3抑菌试验

1.3.1抑菌效力的测定将供试菌从斜面转接到5ml液体培养基，30℃培养24h，吸取50μl到5ml液体培养基，30℃培养6h后取100μl菌液均匀涂布到平板上；再贴上滤纸圆片（φ6mm，提取液浸24h后风干），每皿4片，重复3次。37℃倒置培养24h后测定抑菌圈大小，用无菌水作空白对照，确定抑菌效果。

1.3.2最低抑菌浓度（MIC）的测定采用二倍稀释法［7］测定提取物对供试菌的MIC。取7支试管，第1支加入10ml提取液，其余6支各加入5ml无菌水，从第1支吸取5ml提取液移至第2支，混匀后，再吸取5ml至第3支，以此类推，最后1支试管取出5ml弃去，每一试管的浓度分别为1000、500、250、125、62.5、31.3和15.6mg/ml。分别将5ml上述各浓度的提取物与20ml牛肉膏固体培养基混匀，制成提取物的浓度分别为200、100、50、25、12.5、6.3和3.2mg/ml（w/v）的平板，接种菌液后倒置培养24h观察，以没有供试菌生长的最低浓度为提取物的MIC。

1.3.3热稳定性试验将五味子提取液置于80℃水浴、100℃水浴和121℃湿热条件下［8］热处理20min，再制成浓度为500mg/ml的提取液浸泡滤纸片，稍风干后贴在涂有菌液的平板中，测定其抑菌效果。

2结果与分析

2.1提取物浓度对抑菌效力的影响滤纸片法测定结果（见表1）显示，五味子提取物对4种供试菌的生长均有很强的抑制作用，其中对绿脓杆菌的抑制作用最强，肺炎克雷伯氏菌其次，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最弱。

表1五味子提取物的浓度对抑菌效率的影响（略）

2.2不同菌的MIC提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌的MIC值如表2所示。除金黄色葡萄球菌的MIC为50mg/ml外，其余3种菌均为25mg/ml（与滤纸片法基本一致）。

表2五味子提取物的MIC（mg/ml）（略）

“－”表示无菌生长，“+”表示细菌生长

2.3提取物的热稳定性试验提取物经3种温度的热处理20min后，仍具有较强的抑菌效力，其抑菌圈直径与未经高温处理的样品接近，其中只有对绿脓杆菌抑制作用，经100℃处理和湿热灭菌后有显著下降，对金黄色葡萄球菌的抑制作用，经湿热灭菌后有显著降低；而对大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌抑制作用，3种处理与对照均无显著差异（见表3）。说明五味子的抑菌成分具有一定的热稳定性。

表3热处理对五味子提取物抑菌效力的影响（略）

不同字母表示P＜0.05水平显著，ns为不显著

抑菌范文篇6

【关键词】川产习用品种；金银花；体外抑菌;平板打孔法

前言

金银花FlosLonicerae为常用中药，具有清热解毒、通经活血、疏风散热之功效。2005年版《中国药典》规定金银花为忍冬科Caprifoliaceae植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或初开的花，但我国作为中药金银花流通及使用的品种却是复杂的［2］。四川地处西南，为我国金银花主要产区之一，品种比较复杂。为了客观评价其品质，我们测定了川产金银花主要有效成分绿原酸的含量。本实验以道地正品金银花河南密县“密银花”作对照，用平板打孔法对川产金银花品种细毡毛忍冬L.similisvar.similis，淡红忍冬L.acuminata，红腺忍冬L.hypoglauca，峨嵋忍冬L.similisvar.omeiensis进行了体外抑菌作用研究。

一、材料

1.1药物川产习用金银花细毡毛忍冬、淡红忍冬、红腺忍冬、峨嵋忍冬经成都中医药大学万德光教授鉴定，“密银花”委托河南中医学院曹继华教授采集鉴定。

1.2菌种金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、溶血性链球菌（Staphylococcushaemolyticus）、大肠杆菌（Escherichiacoli）、福氏志贺菌（Shigellaflexneri）、鼠伤寒沙门菌（Salmonellatyphimurium）、肺炎球菌（pneumonococcus）由四川卫生干部学院微生物教研室提供；卡他球菌（Branhamellacatarrhlis）、表皮葡萄球菌（Staphylococcusepidermidis）由成都中医药大学微生物教研室提供。

1.3试剂琼脂粉和蛋白胨（购自广州海洋生物有限公司）、牛肉浸出粉（购自灵武市泰运生化制品有限公司）、脱纤维兔血（自制）、分析纯氯化钠等。

二、方法

2.1培养基的制备

2.1.1营养肉汤培养基取蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化钠、蒸馏水，按《中国药典》规定比例混合，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，在115℃灭菌30min。

2.1.2营养琼脂培养基照上述营养肉汤培养基的处方及制法，按《中国药典》规定比例加入适量琼脂，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，在115℃灭菌30min。

2.1.3血琼脂培养基将营养琼脂培养基加热溶化，待冷至50℃左右，以无菌操作加入10%无菌脱纤维兔血，摇匀，置冰箱备用。

2.2菌液的制备于实验前将上述保存菌种于相应的琼脂平板上划线，于37℃培养箱内培养48h，取出，用白金环挑起典型菌落接种营养肉汤管中，为了溶血性链球菌、肺炎球菌的生长，后二者需要在血琼脂培养基中培养，经过37℃下培养24h，将菌液稀释成1×107cfu·ml-1，供实验备用。公务员之家:

2.3供试液的制备称取川产习用金银花药材及“密银花”各5g，分别加蒸馏水适量，煎煮3次，第1次40min，后两次各30min，分别合并水煎液，浓缩至6ml，分别定容于消过毒的10ml容量瓶中，各得500mg·ml-1的供试液，冰箱中保存备用。

2.4抑菌实验将溶血性链球菌、肺炎球菌菌液0.1ml滴在血琼脂培养基上，其它菌液0.1ml滴在营养琼脂平板上，用无菌L型玻棒涂布均匀。用6mm直径打孔器打孔，每平板打孔3个，除取孔内琼脂，并向每孔内加药液约0.1ml，放置37℃培养箱内培养18～24h，观察并记录抑菌环直径。结果见表1。表1抑菌实验结果（略）

三、小结

参照《微生物和检验技术》判定结果，抑菌圈直径≥20mm为高敏；抑菌圈直径为10～19mm为中敏；抑菌圈直径<10mm为钝敏。可见川产4种习用金银花对金黄色葡萄球菌高敏，而“密银花”对其为中敏；5种金银花对溶血性链球菌和鼠伤寒沙门菌基本都为钝敏（抑菌环直径没有大于10mm）；肺炎球菌对峨嵋忍冬高敏，对细毡毛忍冬和红腺忍冬中敏，对淡红忍冬和“密银花”钝敏；卡他球菌对红腺忍冬和峨嵋忍冬高敏，对其它3种金银花中敏；表皮葡萄球菌对峨嵋忍冬高敏，对细毡毛忍冬和淡红忍冬中敏，对红腺忍冬和“密银花”钝敏；大肠杆菌对细毡毛忍冬和峨嵋忍冬高敏，对其它3种金银花中敏；福氏志贺菌对细毡毛忍冬、淡红忍冬和峨嵋忍冬高敏，对其它两种金银花中敏。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：152.

［2］徐炳声.中药金银花原植物的研究［J］.药学学报，1979，14（1）：23.

［3］苟占平，万德光.HPLC法测定5种1变种金银花中绿原酸含量［J］.中国中医药信息杂志，2004，11（5）：421.

［4］国家药典委员会.中国药典,Ⅱ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：附录83.

抑菌范文篇7

【关键词】厚朴体外抑菌

AbstractObjectiveTostudytheinvitrogrowth-inhibitoryeffectofMORonbacteria.MethodsK-Bpaperdispersionmethodwasusedandthepaperwaspresoakedwith100%MORwaterextract.WeobservedtheinhibitoryeffectofcircularfilterpaperpiecesofMORonStaphylococcusaureus,Staphylococcusepidermidis，P.aeruginosa，E.coli，S.typhi，α-hemolyticstreptococcus，β-hemolyticstreptococcus.ResultsTheherbhadobviouseffectofgrowthinhibitiononbacteria.ConclusionMORhassignificanteffectofgrowthinhibitioninvitroonbacteria.

KeywordsEuphorbiahumifusaWilld.(MOR)；Invitrogrowthinhibition

厚朴为木兰科落叶乔木植物厚朴MagnoliaofficinalisRehd．etWils．或凹叶厚朴M．officinalisRehd．etWils．var．bilobaRehd．etWils．的干皮、根皮及枝皮［1］。主产于四川广元、荥经、丰都、城口，湖北恩施、宜昌、利川，浙江龙泉、遂昌，福建浦城、松溪，湖南衡阳、彬县等地，江西、广西、甘肃、陕西等地也有出产，以四川、湖北所产者量大质优，野生与栽培均有。主要功效：行气，燥湿，消积，平喘。为观察中药厚朴的体外抑菌作用，对其进行了相关的抑菌实验研究，旨在为临床应用厚朴提供理论依据。

1材料

金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、甲型链球菌、乙型链球菌，均购于中国药品生物制品检定所。营养琼脂培养基，购于北京海淀区微生物培养基制品厂。游标卡尺、规格（0～150）mm×0.02mm，安徽桐城量具厂生产。

2方法

2.1药液的制备

厚朴购于滨州医学院附属医院中药房。取厚朴50g，加水500ml，文火煎煮1h，去渣浓缩为50ml（浓度100%）备用。

2.2操作方法

2.2.1普通培养基的制备［2，3］

将金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌分别用取菌环致密接种到普通营养培养基表面，以无菌操作将含厚朴浸出液的直径0.4cm的滤纸片贴到培养基上，37℃培养24h观察测量抑菌环直径。

2.2.2血平板培养基的制备［2］

在普通营养琼脂培养基础上高压消毒后，冷却至56℃时加上5%～10%无菌脱纤维绵羊血混匀，倒入培养皿中制备。

2.2.3抑菌实验

将甲型链球菌，乙型链球菌用取菌环分别致密接种到血平板营养基上后，以无菌操作将含厚朴浸出液的直径0.4cm的滤纸片贴到培养基上后，37℃培养24h观察测量抑菌环直径。

3结果

厚朴对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、乙型链球菌均有明显的抑菌作用。结果见表1。表1厚朴的抑菌作用（略）

4讨论

从表1可以看出，厚朴对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、乙型链球菌均有明显抑菌作用。现代研究表明［1］，厚朴具有松弛肌肉、降低血压、抑制中枢系统、抗病原微生物的作用。体外实验中，厚朴对葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎球菌、百日咳杆菌等革兰氏阳性菌以及炭疽杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、霍乱弧菌、大肠杆菌、变形杆菌、枯草杆菌等革兰氏阴性菌均有抗菌作用。本次实验证明厚朴有明显的抑菌作用，为临床应用提供了科学依据。

【参考文献】

［1］高学敏.中药学，上册［M］.北京：人民卫生出版社，2000：720.

抑菌范文篇8

关键词：青翘；提取物；抑菌活性

连翘为木犀科(Oleaceae)连翘属(Forsythia)植物连翘Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果实。连翘药材商品分为“青翘”和“老翘”。果实初熟尚带绿色时采收蒸熟，晒干，习称“青翘”；果实熟透颜色发黄时采收，晒干，习称“老翘”［1］。

连翘是中国临床常用传统中药之一，又名黄花条、连壳、青翘、落翘、黄奇丹等。已有的研究报道表明，连翘种子挥发油对3种真菌有明显的抑制作用，陕西产青翘、老翘和连翘叶均对大肠杆菌和金色葡萄球菌也有较好的抑制作用［2～6］，上述研究报道都没有对连翘的提取物进行系统的抑菌活性研究。本研究首次以山西道地药材青翘作为研究对象，比较其不同极性提取物的抑菌活性，旨在为临床应用连翘提供理论依据。

1材料与仪器

1.1药材青翘2008??06购自山西省安泽县连翘GAP生产基地，植物标本由山西省药检所郭文菊研究员鉴定，植物标本现存于山西中医学院实验中心。

1.2试剂与菌株金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus、大肠杆菌Escherchiacoli、白色念珠菌Candidaalbicans，均由山西省药品检验所提供。营养琼脂培养基，购自杭州天和微生物试剂有限公司；牛肉膏购自北京市海淀区微生物培养基制品厂，蛋白胨购自北京奥特博星生物技术有限责任公司，庆大霉素细菌药敏试纸购自杭州天和微生物试剂有限公司，所用试剂均为分析纯。

1.3仪器与设备LR4001型旋转蒸发仪（德国Heidolph公司）；CA-111型冷却水循环系统（上海爱郎仪器有限公司）；SHB-88型水循环真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；DHP-9162型电热恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；DSX-280B型手提式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；BBS-DSC型洁净工作台(上海巴艾贝斯科技有限公司)；BS224S-L型电子分析天平（德国Sartorius公司）。

2方法

2.1青翘提取物的制备取青翘1kg，粉碎，用95%乙醇加热至70℃回流提取4次，3h/次，减压浓缩回收溶剂至无醇味，得总提取物320g。总提取物经水悬浮后，用石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇依次萃取，得到的石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇萃取相及萃取后水相提取。取适量各部位浸膏及总浸膏，干燥成粉末，备用。

2.2抑菌活性分析

2.2.1药敏纸片的制备［4］

将普通定性滤纸用打孔机打成若干圆形纸片，直径为6mm，置于干燥洁净的试管内，放入压力蒸气灭菌器中经121℃，20min高压灭菌，干燥。分别取干燥后的不同待试样品0.5，1.0，2.0mg，用合适的溶剂溶解，将滤纸片放入溶液中，反复吸取、晾干，直至将溶液吸干，备用。

2.2.2培养基的制备固体培养基：用天平准确称取36g营养琼脂，加入蒸馏水1000ml，加热并不断搅拌，使琼脂完全溶解。然后放入压力蒸气灭菌器中经121℃，20min高压灭菌，取出趁热倒入经过高压灭菌的培养皿中，厚度约3～5mm,冷却凝固后备用。

液体培养基［7］：用天平准确称取牛肉膏0.3g，蛋白胨1g，氯化钠0.5g，加入蒸馏水100ml，加热并不断搅拌，用1%NaOH溶液调节pH7.2～7.4，然后放入压力蒸气灭菌器中经121℃，20min高压灭菌，分装于试管中，备用。

2.2.3菌悬液的制备用接种环分别取各菌种一环，接种于液体培养基中，放入37℃培养箱中培养24h，用灭菌生理盐水分别稀释至1×10-5CFU/ml浓度，备用。

2.2.4药物抑菌作用测定采用K-B纸片扩散法［8］，用无菌移液管吸取稀释好的菌悬液0.1ml，置于培养基中央，用涂布棒涂布均匀。用无菌镊子夹取含药滤纸片贴在培养基表面，以含药量为10μg的庆大霉素细菌药敏试纸为阳性对照。放入37℃培养箱中培养24h后，观察抑菌圈，并用十字交叉法测量抑菌圈直径,结果以毫米(mm)表示,见表1～3。每种不同含药量的样品对3种菌均做3组平行对照，结果取平均值。

3结果

用青翘不同提取物，以细菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和霉菌白色念珠菌作为指示菌进行抑菌实验。结果见表1～3。表1青翘不同提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌圈活性，表2青翘不同提取物对大肠杆菌的抑菌圈活性，表3青翘不同提取物对白色念珠菌的抑菌圈活性（略）。

从表1看出，除氯仿提取物外，其余各提取物均对金黄色葡萄球菌均有抑制作用，其活性比较：正丁醇提取物??醋酸乙酯提取物??石油醚提取物≈95%乙醇提取物??水提取物。并且，随着纸片含药量的增加，抗菌作用增强。

从表2可知，青翘不同提取物对大肠杆菌均有一定抑制作用。总体来看，氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和95%乙醇提取物对大肠杆菌抗菌活性较强，其次为石油醚提取物。并且，石油醚提取物与95%乙醇提取物在含药量为0.5mg时抗菌活性最强，氯仿提取物在含药量为1.0mg时抗菌活性最强，而其它提取物含药量为2.0mg时抗菌活性最强。这与文献报道的连翘乙醇提取物的浓度与抑菌作用强弱之间并不呈简单的正比关系［6］相一致，提示我们多种成分同时存在时可能仅存在“最适抑菌浓度”。

从表3可知，青翘不同提取物对白色念珠菌均有一定抑制作用。总体来看，醋酸乙酯提取物和正丁醇提取物对白色念珠菌的抑制作用较强，其次为95%乙醇提取物。所有提取物的抗菌作用受含药量改变的影响不大，并且，纸片含药量为0.5mg时，显示出略强的抗菌活性。与青翘提取物对大肠杆菌的抑菌作用一样，说明了浓度与抑菌作用强弱之间并不呈简单的正比关系。

4讨论

本研究表明，青翘不同提取物对3种菌株均表现了不同程度的抑菌作用，抑菌作用的顺序为金黄色葡萄球菌??大肠杆菌??白色念珠菌。金黄色葡萄球菌是目前引起上呼吸道感染的常见菌，这与中医药认为连翘具有清热解毒功效，以及连翘治疗呼吸道感染的临床应用基本吻合，临床上一些感染性疾病的最终治愈还是依赖清热药的抗病原体作用，因此抗菌是这类药物的主要药理作用［6］。对于金黄色葡萄球菌和白色念珠菌，抑菌活性成分集中于正丁醇和醋酸乙酯提取物中；而对于大肠杆菌，抑菌活性成分集中于醋酸乙酯和氯仿提取物中。这说明青翘中极性较大的成分具有较强的抑菌活性，是其发挥清热解毒功效的物质基础。青翘提取物对大肠杆菌的抑菌作用研究表明，95%乙醇、石油醚与氯仿提取物浓度与抗菌作用强弱之间不呈正比关系，查阅相关资料［5］，推测其原因可能是青翘提取物中的某些极性小的成分提供了菌体生长所需的“营养物质”，或是这些极性小的成分刺激了菌体的生长。由于中药成分的复杂性和各种成分性质的差异性，使药物作用过程和机理更加复杂。因此，以往参照抗生素求最小抑菌浓度(MIC)的方法很难准确地反映青翘的抑菌活性，应该寻求它的“最适抑菌浓度”。

研究结果可以指导青翘中抑菌活性成分的分离纯化，为更好地发挥青翘抗菌作用奠定基础。

参考文献：

［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005:117.

［2］牛新华，邱世翠，邸大琳，等.连翘体外抑菌作用的研究［J］.时珍国医国药，2002,13(6):342.

［3］杨天鸣，张志海,张虹.连翘水提物抗菌作用的实验研究［J］.兰州医学院学报，2003,29(1):40.

［4］段飞，张双民，杨健雄，等.连翘叶提取物抑菌作用的研究［J］.西北药学杂志，2005，20(2):66.

［5］刘世旺，徐艳霞，郑永良.连翘乙醇提取物对细菌生长曲线的影响［J］.安徽农业科学，2007,35(24):7383.

［6］张恩户，赵子剑，张英，等.连翘及其制剂抗菌效价的生物测定法［J］.中国中医基础医学杂志，2005,11(10):782.

抑菌范文篇9

1.1菌种与培养基试验菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯氏菌，由浙江省台州医院微生物实验室友情赠送。牛肉膏蛋白胨培养基按文献［4］自制，PH为6.0（用PBS配制［5］）。

1.2五味子提取物的制备五味子饮片购自临海市医药有限公司，经70℃烘干后研成粉末。取粉末10g用75％乙醇在超声波清洗器中提取，反复多次，直至浸出液色淡。将浸出液浓缩，并定容到10ml，即1ml提取液为1g五味子的提取物［6］。提取液过0.22μm滤膜除菌，4℃贮存备用。

1.3抑菌试验

1.3.1抑菌效力的测定将供试菌从斜面转接到5ml液体培养基，30℃培养24h，吸取50μl到5ml液体培养基，30℃培养6h后取100μl菌液均匀涂布到平板上；再贴上滤纸圆片（φ6mm，提取液浸24h后风干），每皿4片，重复3次。37℃倒置培养24h后测定抑菌圈大小，用无菌水作空白对照，确定抑菌效果。

1.3.2最低抑菌浓度（MIC）的测定采用二倍稀释法［7］测定提取物对供试菌的MIC。取7支试管，第1支加入10ml提取液，其余6支各加入5ml无菌水，从第1支吸取5ml提取液移至第2支，混匀后，再吸取5ml至第3支，以此类推，最后1支试管取出5ml弃去，每一试管的浓度分别为1000、500、250、125、62.5、31.3和15.6mg/ml。分别将5ml上述各浓度的提取物与20ml牛肉膏固体培养基混匀，制成提取物的浓度分别为200、100、50、25、12.5、6.3和3.2mg/ml（w/v）的平板，接种菌液后倒置培养24h观察，以没有供试菌生长的最低浓度为提取物的MIC。

1.3.3热稳定性试验将五味子提取液置于80℃水浴、100℃水浴和121℃湿热条件下［8］热处理20min，再制成浓度为500mg/ml的提取液浸泡滤纸片，稍风干后贴在涂有菌液的平板中，测定其抑菌效果。

2结果与分析

2.1提取物浓度对抑菌效力的影响滤纸片法测定结果（见表1）显示，五味子提取物对4种供试菌的生长均有很强的抑制作用，其中对绿脓杆菌的抑制作用最强，肺炎克雷伯氏菌其次，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最弱。

表1五味子提取物的浓度对抑菌效率的影响（略）

2.2不同菌的MIC提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌的MIC值如表2所示。除金黄色葡萄球菌的MIC为50mg/ml外，其余3种菌均为25mg/ml（与滤纸片法基本一致）。

表2五味子提取物的MIC（mg/ml）（略）

“－”表示无菌生长，“+”表示细菌生长

2.3提取物的热稳定性试验提取物经3种温度的热处理20min后，仍具有较强的抑菌效力，其抑菌圈直径与未经高温处理的样品接近，其中只有对绿脓杆菌抑制作用，经100℃处理和湿热灭菌后有显著下降，对金黄色葡萄球菌的抑制作用，经湿热灭菌后有显著降低；而对大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌抑制作用，3种处理与对照均无显著差异（见表3）。说明五味子的抑菌成分具有一定的热稳定性。

表3热处理对五味子提取物抑菌效力的影响（略）

不同字母表示P＜0.05水平显著，ns为不显著

3结论

经反复实验，结果表明五味子提取物的浓度在31.3～1000mg/ml范围内，对4种供试菌的抑制效应依次为：绿脓杆菌>肺炎克雷伯氏菌>大肠杆菌>金黄色葡萄球菌。滤纸片琼脂扩散法结果显示，除金黄色葡萄球菌MIC为62.5mg/ml外，其余3种供试菌MIC均为31.3mg/ml；采用二倍稀释法测得的MIC也显示类似的结果，金黄色葡萄球菌的MIC为50mg/ml，另3种菌的MIC均为25mg/ml。另外，五味子提取物经短时高温处理后，其活性成分不变，仍保持较强的抑菌效果。

【参考文献】

［1］樊骏，张亚雯.五味子规模化栽培管理技术［J］.陕西林业科技，2005，(3)：8385.

［2］王森.五味子研究概况及其发展前景［J］.经济林研究，2003，(4)：8587.

［3］王森.栽培五味子有前途［J］.农家参谋，2002，(1)：35.

［4］黄秀梨.微生物实验指导［M］.北京：高等教育出版社，1997：35115.

［5］张志良，瞿伟菁.植物生理学实验指导［M］.北京：高等教育出版社，2004：307.

［6］李钧敏，虞优优，金则新.大血藤叶片提取物抑菌作用的初步研究［J］.浙江中医学院学报，2004，28(1)：5557.

［7］郑钧镛.药物微生物及检验技术［M］.北京：人民卫生出版社，1985：351352.

抑菌范文篇10

【关键词】五味子提取物抑菌作用

五味子［Schisandrachinensis(Turcz.)Baill］别名北五味子、辽五味子、山花椒、乌梅子、软枣子等，为木兰科五味子属植物。多年生落叶木质藤本，以野生为主，为常用中药材。主要以果实入药，因有甘、酸、辛、苦、咸五味而得名，有敛肺、滋肾、止汗、生津、止泻、涩精等功能。可以治疗咳嗽、哮喘、口渴自汗、盗汗、遗精、久泻、神经衰弱等症，也是很好的果酒和饮料的原料［1］，具有极高的药用价值和营养价值，是一种新型的“药食同源”功能性保健食品，其果实在国际上已成为一种新兴食品工业的重要原料［2，3］。本实验采用滤纸片法和二倍稀释法，研究了五味子提取物对4种常见污染菌的抑制作用，为其进一步开发利用提供依据。

1资料与方法

1.1菌种与培养基试验菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯氏菌，由浙江省台州医院微生物实验室友情赠送。牛肉膏蛋白胨培养基按文献［4］自制，PH为6.0（用PBS配制［5］）。

1.2五味子提取物的制备五味子饮片购自临海市医药有限公司，经70℃烘干后研成粉末。取粉末10g用75％乙醇在超声波清洗器中提取，反复多次，直至浸出液色淡。将浸出液浓缩，并定容到10ml，即1ml提取液为1g五味子的提取物［6］。提取液过0.22μm滤膜除菌，4℃贮存备用。

1.3抑菌试验

1.3.1抑菌效力的测定将供试菌从斜面转接到5ml液体培养基，30℃培养24h，吸取50μl到5ml液体培养基，30℃培养6h后取100μl菌液均匀涂布到平板上；再贴上滤纸圆片（φ6mm，提取液浸24h后风干），每皿4片，重复3次。37℃倒置培养24h后测定抑菌圈大小，用无菌水作空白对照，确定抑菌效果。

1.3.2最低抑菌浓度（MIC）的测定采用二倍稀释法［7］测定提取物对供试菌的MIC。取7支试管，第1支加入10ml提取液，其余6支各加入5ml无菌水，从第1支吸取5ml提取液移至第2支，混匀后，再吸取5ml至第3支，以此类推，最后1支试管取出5ml弃去，每一试管的浓度分别为1000、500、250、125、62.5、31.3和15.6mg/ml。分别将5ml上述各浓度的提取物与20ml牛肉膏固体培养基混匀，制成提取物的浓度分别为200、100、50、25、12.5、6.3和3.2mg/ml（w/v）的平板，接种菌液后倒置培养24h观察，以没有供试菌生长的最低浓度为提取物的MIC。

1.3.3热稳定性试验将五味子提取液置于80℃水浴、100℃水浴和121℃湿热条件下［8］热处理20min，再制成浓度为500mg/ml的提取液浸泡滤纸片，稍风干后贴在涂有菌液的平板中，测定其抑菌效果。

2结果与分析

2.1提取物浓度对抑菌效力的影响滤纸片法测定结果（见表1）显示，五味子提取物对4种供试菌的生长均有很强的抑制作用，其中对绿脓杆菌的抑制作用最强，肺炎克雷伯氏菌其次，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最弱。

表1五味子提取物的浓度对抑菌效率的影响（略）

2.2不同菌的MIC提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌的MIC值如表2所示。除金黄色葡萄球菌的MIC为50mg/ml外，其余3种菌均为25mg/ml（与滤纸片法基本一致）。

表2五味子提取物的MIC（mg/ml）（略）

“－”表示无菌生长，“+”表示细菌生长

2.3提取物的热稳定性试验提取物经3种温度的热处理20min后，仍具有较强的抑菌效力，其抑菌圈直径与未经高温处理的样品接近，其中只有对绿脓杆菌抑制作用，经100℃处理和湿热灭菌后有显著下降，对金黄色葡萄球菌的抑制作用，经湿热灭菌后有显著降低；而对大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌抑制作用，3种处理与对照均无显著差异（见表3）。说明五味子的抑菌成分具有一定的热稳定性。

表3热处理对五味子提取物抑菌效力的影响（略）

不同字母表示P＜0.05水平显著，ns为不显著

3结论

经反复实验，结果表明五味子提取物的浓度在31.3～1000mg/ml范围内，对4种供试菌的抑制效应依次为：绿脓杆菌>肺炎克雷伯氏菌>大肠杆菌>金黄色葡萄球菌。滤纸片琼脂扩散法结果显示，除金黄色葡萄球菌MIC为62.5mg/ml外，其余3种供试菌MIC均为31.3mg/ml；采用二倍稀释法测得的MIC也显示类似的结果，金黄色葡萄球菌的MIC为50mg/ml，另3种菌的MIC均为25mg/ml。另外，五味子提取物经短时高温处理后，其活性成分不变，仍保持较强的抑菌效果。

【参考文献】

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