黄酮范文10篇

黄酮范文篇1

1.1原料现蕾期紫花苜蓿〔品种为WL323〕采自于河北省保定市河北农业大学实验基地。将苜蓿洗净，40℃下烘干，用粉碎机在40目下粉碎成粉末。

1.2试剂与仪器乙醇、石油醚、芦丁、实验用水为去离子水。VIS-7220型紫外分光光度计，F2102微型植物粉碎机，SHB-IIIA循环水式多用真空泵，KQ2200DE型数控超声波清洗器，756PC型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司），索氏提取器等。

2方法

2.1标准曲线的绘制准确配置100ml浓度为0.168mg/ml的芦丁储备液。准确吸取芦丁储备液0.00，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00，10.00ml放入7个25ml的容量瓶中，用30%的乙醇定容到刻度，在266nm下测定吸光度并绘制标准曲线。标准曲线的线性回归方程为Y=0.18222×C+0.05853（C:mg/ml），线性相关系数r=0.9988。

2.2单因素及正交实验设计见表1。表1正交实验因素水平

3结果

3.1单因素实验结果与分析

3.1.1乙醇浓度的确定称取1g苜蓿粉末3份，分别加入20ml的60%，70%，80%的乙醇，加热回流提取2h，溶液冷却后离心5min，再取0.5ml稀释到10ml在266nm下测吸光度。测定吸光度分别为0.220，0.444，0.421。

随乙醇浓度的增加，吸光度亦随之增大。当浓度达到70%时，黄酮类化合物溶解度最大，吸光度最高。乙醇浓度再增加，黄酮类化合物溶解度减小，同时一些醇溶性杂质、色素、亲脂性强的成分溶出量增加，这些成分与黄酮类化合物竞争同乙醇-水分子结合，从而导致黄酮化合物提取率下降。因此确定乙醇浓度为70%。

3.1.2提取方法的确定称取1g苜蓿粉末3份，分别加入20ml70%的乙醇，分别用加热回流萃取、索氏提取器提取、超声萃取的方法提取2h，然后取部分溶液离心5min，再取0.5ml稀释到10ml测吸光度。测定吸光度为0.443，0.499，0.538，因此确定提取方法为超声提取法。

3.1.3提取时间的确定称取1g苜蓿粉末5份，分别加入20ml70%的乙醇，用超声萃取的方法分别提取0.5，1，1.5，2，2.5h，然后取部分溶液离心5min，再取0.5ml稀释到10ml测吸光度。测定结果为0.321，0.385，0.531，0.527，0.520。可以确定提取时间为1.5h。

3.1.4料液比的确定称取1g苜蓿粉末4份，按1∶10，1∶20，1∶30，1∶40（g/ml）的料液比加入70%的乙醇，用超声提取的方法提取1.5h，然后取部分溶液离心5min，再取0.5ml稀释到10ml测吸光度。测定结果0.512，0.537，0.602，0.497。可以确定料液比为1∶30（g/ml）。

3.1.5提取次数的确定称取1g苜蓿粉末4份，分别加入70%的乙醇，用超声提取法分别提取1，2，3，4次，1.5h/次，然后取部分溶液离心5min，再取0.5ml稀释到10ml，测吸光度。测定结果0.525，0.545，0539，0.521。可以确定提取次数为两次。

3.2正交实验结果与分析在单因素实验基础上，采用L9（34）正交实验对提取工艺条件进一步优化。结果见表2～3。

由表2和表3知，在超声提取下，各因素对提取结果的影响大小依次为B>A>C>D，其中影响因素A、B表现为极显著，因素C表现为显著，因素D对结果的影响不显著，从节省原料的角度考虑选择60%的乙醇。所以最佳组合为A3B2C1D1。表2正交实验设计及结果表3方差分析

3.3苜蓿中黄酮的测定准确称取1.00g苜蓿粉末，加入30ml60%乙醇，用超声法提取3次，1h/次。合并提取液定容到250ml。取1ml样液，放入25ml容量瓶中，用30%的乙醇稀释至刻度，试剂为空白参比。根据测得吸光度，利用标准曲线计算样品中总黄酮含量为3.81%，3.75%，3.69%。

4结论

经正交实验，确定了超声法提取苜蓿总黄酮的最佳工艺为：60%乙醇，30∶1的液固比，提取3次，1h/次。测量结果表明苜蓿全草中含有总黄酮3.75%，苜蓿叶子中含有总黄酮4.85%。

【参考文献】

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黄酮范文篇2

【关键词】竹叶黄酮半数致死量Amees实验微核致突变作用毒理学

ToxicologicalTestonFlavonoidsfromLeavesofDendrocalamusLatiflorus

Abstract:ObjectiveAcutetoxicityexperimentsandmutationexperimentswereconductedonmicewiththeflavonoidsfromtheleavesofDendrocalamuslatiflorus.MethodsBymeansofacutetoxicitytest,malformationtestofmicesperm,micronucleustestofbonemarrowcellandAmestest.ResultsLD50（ig）formicewasmorethan25g·（kg·bw）-1andinLD50（ip）formicewasmorethan10g·（kg·bw）-1.MutagenicactionofflavonoidfrombambooleavesonTA97，TA98，TA100andTA102，andtoxiceffectonmicemarrowmicronucleusaswellaseffectonmalformationofmicespermwereallnegative.ConclusionTheflavonoidsfromleavesofDendrocalamuslatifloruswasatypeofsecurefunctionfactorofhealthyfood，butwhetherithastoxicornegativeeffectonhumanornotitneedfurtherobservationinclinicalapplication.

Keywords:Flavonoidsfrombambooleaves（FBL）；LD50；Amesexperiment；Micronucleus；Mutationexperiments；Toxicology

麻竹Dendrocalamuslatiflorus又名甜竹、八月麻（福建），属禾本科牡竹属，是广泛分布于我国福建、台湾、广东、广西、云南、贵州和四川等南亚热带和热带地区的大型丛生竹种［1］。麻竹叶大，宽4～7cm以上，内含有丰富的营养物质，很值得开发利用。竹叶在我国具有悠久的食用和药用历史［2～4］。竹叶提取物具有优良的抗自由基、抗氧化、抗衰老、调节血脂、阻断亚硝化反应、增强免疫和抗菌抑菌的作用［2～4］。竹叶中所含的功能因子主要是黄酮糖苷和香豆素类内酯等［3,4］。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1实验用竹叶黄酮系麻竹叶黄酮，本实验室自备［2］，总黄酮>80%。

1.1.2实验动物昆明种小鼠：为BALB/C纯系小鼠（医动字2004第002号），♂，♀各半，8～10周龄，体重18～20g，由重庆市中药研究院实验动物中心提供。

1.1.3菌株鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型突变株TA97，TA98（移码型突变株）和TA100，TA102（碱基置换型突变株）：均由重庆市疾控中心提供。

1.2方法

1.2.1竹叶黄酮的经口（ig）、腹腔注射（ip）急性毒性（LD50）实验［5～7］采用霍恩法。实验剂量以最大注射量或经口灌胃不超过1ml/只小鼠为限。竹叶黄酮经口的剂量组设4个组为2.15，4.64，10.0，21.5g·（kg·bw）-1；竹叶黄酮经腹腔注射剂量组设4个组为1.00，2.15，4.64，10.00g·（kg·bw）-1。取健康小鼠，禁食16h后，给预受试物后观察7d，记录小鼠的活动和死亡情况。

1.2.2竹叶黄酮的鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体实验（Ames实验）［6,8～10］采用平板渗入法。实验菌株采用TA97，TA98（移码型突变株）和TA100，TA102（碱基置换型突变株），实验前菌种的5个遗传特征要作鉴定，达到规定的标准才能使用，并且在实验前均要在营养肉汤培养基中，于37℃水浴振荡培养14h增菌，得到大约2×108的菌株悬浮液。按急性毒性实验所用腹腔注射最高剂量（10.00g/kg）的1/10，1/20，1/40，1/80，1/160，1/320设6个剂量组，另设阴性对照组（竹叶黄酮为0mg/平皿）和阳性对照组（2-AF、敌克松、叠氮钠），共10个实验组，并各实验组分别进行加S9（20μl/平皿）活化和不加S9活化的实验，每次实验做3个平行样品，取两次实验的平均数，以超过自然回变数（阴性对照组）的2倍作为阳性判断标准。

1.2.3竹叶黄酮的骨髓微核实验［9］取健康小鼠，随机分成5组，每组动物10只，按急性实验所用腹腔注射最高剂量〔10.00g·（kg·bw）-1〕的1/2，1/4和1/8设3个剂量组，另设阳性对照组〔环磷酰胺40mg·（kg·bw）-1〕和阴性对照组共5组，连续腹腔注射给药2d，1次/d。第2次给予受试物后6h，颈椎脱臼处死小鼠，取胸骨，用止血钳挤出骨髓液与玻片一端的小牛血清混匀，常规涂片。涂片自然干燥后放入甲醇中固定5～10min，再放入Giemsa应用液中，染色10～15min，立即用pH6.8的磷酸盐缓冲液冲洗晾干，写好标签，置干燥器中保存。选择细胞完整、分散均匀、着色适当的区域，在油镜下观察，以有核细胞形态完好作为判断制片优劣的标准，观察嗜多染红细胞的微核（呈灰蓝色），而成熟红细胞呈粉红色。每只动物计数1000个嗜多染红细胞，观察含有微核的嗜多染红细胞数，计算微核率：

微核率（‰）=含微核细胞数观察细胞数×1000

1.2.4竹叶黄酮的小鼠精子畸形实验［6,7,9］取健康小鼠，随机分成5组，每组动物10只，按急性实验所用腹腔注射最高剂量〔10.00g·（kg·bw）-1〕的1/2，1/4和1/8设3个剂量组，另设阳性对照组〔环磷酰胺40mg·（kg·bw）-1〕和阴性对照组共5组，连续腹腔注射给药5d，于第1次腹腔注射给药后的第35天用颈椎脱臼处死小鼠，取出两侧副睾，放入盛有适量生理盐水（1ml）的小烧杯中。用眼科剪将副睾纵向剪1～2刀，静置3～5min，轻轻摇动，用4层擦镜纸过滤，吸滤液涂片。于空气中干燥后，用甲醇固定8min，干燥后用1%～2%伊红染色1h，用水轻冲，干燥。在低倍镜下（用绿色滤光片）找到清晰、精子重叠少的部位，用高倍镜顺序检查精子形态，计数结构完整的精子，每只动物至少检查1000个精子，观察畸形精子数，计算精子畸形率：

精子畸形率（%）=畸形精子数观察的精子数×100

1.2.5数据处理采用SPSS统计软件进行t检验和方差分析，并以LDS法进行组间的两两比较，检验的显著性水平设定为P<0.05(显著水平)和P<0.01(极显著水平)。

2结果与分析

2.1竹叶黄酮的经口、腹腔注射急性毒性（LD50）实验结果见表1～2。表1经口給药后小鼠毒性反应情况（略）表2竹叶黄酮的经口急性毒性（略）

从表1～2的实验数据可以看出：竹叶总黄酮经口LD50实验，小鼠的饮食、行动、皮毛、大便等均正常，未发现异常现象，无小鼠死亡，测不出其LD50。推测其LD50>21.50g/kg·bw，属实际无毒。

从表3和表4可以看出：竹叶总黄酮经腹腔注射LD50实验，小鼠的饮食、行动、皮毛、大便等均正常，未发现异常现象，无小鼠死亡，测不出其LD50。推测其LD50>10.00g·（kg·bw）-1，属实际无毒。表3腹腔注射給药后小鼠毒性反应情况（略）表4竹叶黄酮的经腹腔注射急性毒性（略）

2.2竹叶黄酮的鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体实验（Ames实验）结果见表5～6。表5竹叶黄酮对TA98和TA100的致突变作用（略）表6竹叶黄酮对TA97和TA102的致突变作用（略）

由表5～6可知，麻竹叶黄酮的6个测试浓度在加S9或不加S9活化的情况下，4个菌株TA97，TA98，TA100和TA102的回变菌落数均与阴性对照组很接近，没有显著性差异（P>0.05）且没有超过阴性对照组的2倍,而与阳性对照组比较要低得多,有极显著性差异(P>0.01)，因此竹叶黄酮不能使鼠伤寒沙门氏菌移码突变株和碱基置换突变株发生回复突变的现象。

2.3竹叶黄酮的骨髓微核实验竹叶黄酮的骨髓微核实验结果见表7。表7竹叶黄酮的骨髓微核实验结果（略）

由表7可知,阳性对照组(环磷酰胺)具有微核嗜多染色红细胞数与阴性对照组(竹叶黄酮0.00g/kg)相比,差异极显著(P<0.01)。竹叶黄酮的各剂量组小鼠具有微核嗜多染红细胞率与阴性对照组相比，微核率值非常接近，无明显差异（P>0.05），且无剂量-效量关系，因此竹叶黄酮没有对小鼠骨髓细胞染色体的断裂效应及纺锤体毒效应。

2.4竹叶黄酮的小鼠精子畸形实验结果见表8。表8竹叶黄酮的小鼠精子畸形实验结果（略）

由表8可知,阳性对照组(环磷酰胺)具有小鼠精子畸形率与阴性对照组(竹叶黄酮0.00g/kg)相比,差异极显著(P<0.01)。竹叶黄酮的各剂量组小鼠精子畸形率与阴性对照组相比，小鼠精子畸形率非常接近，均无显著差异（P>0.05），且无剂量-效量关系，揭示竹叶黄酮对小鼠精子的畸形无影响。

3结论

通过实验结果可得出如下结论：小鼠经口LD50>25g·（kg·bw）-1，腹腔注射LD50>10g·（kg·bw）-1，属实际无毒；竹叶黄酮各剂量组不能使鼠伤寒沙门氏菌移码突变株和碱基置换突变株发生回复突变；没有对小鼠骨髓细胞染色体的断裂效应及纺锤体毒效应；也对小鼠精子的畸形无影响。

以上结果显示竹叶黄酮是一种安全的保健食品。但对人体长期毒副作用研究还需临床试验。

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黄酮范文篇3

1.1仪器精密天平BS224S（德国塞多利斯）；UV-4501S紫外分光光度计(天津市港东科技发展有限公司)；超声清洗机SK8210LHC（上海科导超声有限公司）。

1.2试药知母（产地河北，河南，安徽）；芒果苷为对照品（中国生物制品检验所，批号111607－200301）；乙醇、甲醇均为分析纯。

2方法与结果

2.1实验条件与方法的建立

2.1.1对照品的选择很多文献报道中药制剂中总黄酮的含量测定多数采用芦丁作为对照品。采用芦丁作为对照品，解决了部分中药或中药制剂中本身缺少黄酮对照品的问题，在没有合适的对照品情况下，也不失一种测量总黄酮的可行的方法。芒果苷是知母中含量较高的黄酮类化合物，是其清热作用的有效成分，同时还具有抗炎、抗病毒、抗氧化、免疫抑制、利尿、预防肥胖等作用。因此，用知母中含量较高且具有抗病毒作用的专属性活性成分作为对照品来测定知母总黄酮的含量更加有意义。

2.1.2最大吸收波长的选择NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法测定总黄酮的原理［6］，是黄酮母核所含有的游离羟基在NaNO2-Al（NO3）3存在的条件下与金属铝离子形成络合物而显色，在波长500nm左右有最大吸收。本实验中所用的对照品是知母中主要黄酮类成分芒果苷对知母总黄酮进行含量测定。因此将芒果苷溶液及知母总黄酮提取液显色后在200～400nm处用可见-紫外分光光度计扫描，知母总黄酮和芒果苷均在258nm有最大吸收波长，结果见图1。故选择含量测定的检测波长为258nm。

Ⅰ知母总黄酮紫外吸收波谱图Ⅱ芒果苷的紫外吸收波谱图

图1知母总黄酮、芒果苷的最大紫外吸收波谱图

2.2对照品溶液的制备取芒果苷适量，于60℃减压干燥至恒重，精密称定，加70％乙醇溶解，制成每毫升含32μg溶液，即得。

2.3线性关系实验精密吸取混合对照品溶液贮备液1，2，5，10，15，25ml，分别置于50ml量瓶中，加70％乙醇稀释到刻度，摇匀，即得。分别取上述溶液，进行测定，以溶液浓度与吸收度比值进行回归，分别得到回归方程为：芒果苷：Y=0.2309X-0.0031（r=0.9993），表明芒果苷在0.26～3.57μg/ml，范围内线性关系良好，芒果苷线性关系见图2。

图2芒果苷线性关系图

2.4提取方法的选择

2.4.1回流提取法取知母粗粉1g，精密称定，置100ml圆底烧瓶中，加甲醇80ml，水浴回流提取3h，滤过，用少量甲醇洗涤药渣及容器，滤液置于同一100ml量瓶中，放冷，用甲醇补足至刻度，摇匀，取溶液5ml，置于50ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.4.2超声提取法取知母粗粉1g，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，超声提取30min，放冷，用甲醇补足至刻度，摇匀，过滤，取续液5ml，置于50ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按“2.3项下分别取上述溶液”起，依法操作，测定各供试品溶液的吸收度。结果见表1。表1不同提取方法对知母总黄酮含量的影响

表1表明以上两种提取方法差别不大，回流提取法方法繁琐，耗时，能耗大；而且知母含有较多的黏液质，提取液较难过滤。而超声提取法的方法更方便、简单、快速，易于过滤。因此,选择超声提取法提取知母总黄酮。

2.5提取溶剂的考察按照上述优选的方法，分别以甲醇和70％乙醇作为提取溶剂，提取知母总黄酮，并进行含量测定，（见表2）。表2表明甲醇、70％乙醇提取知母总黄酮差别不大，由于甲醇有毒，对环境有污染，选择70％乙醇作为知母总黄酮提取溶剂。表2不同溶剂对知母总黄酮含量的影响

2.6提取时间的考察分别取知母粗粉1g，精密称定，置于100ml量瓶中，加70％乙醇，稀释到刻度，分别超声20，30，40min，分别按“2.4.2项下放冷处理”起，依法操作,分别制备供试品溶液，并分别测定（见表3）。表3表明超声30min，知母总黄酮含量不再提高，因此，选择超声提取时间为30min。

表3超声时间对知母总黄酮的影响

时间t/min吸收度A202.0076302.1388402.1387

n＝3

2.7供试品溶液的制备按照上述优选的工艺参数制备供试品溶液，取知母粗粉1g，精密称定，置100ml圆底烧瓶中，加70％乙醇至刻度，超声提取30min，放冷，用70％乙醇补足至刻度，摇匀，滤过，取续液5ml，置于50ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.8精密度实验取“2.7”项下溶液，在258nm波长下，连续测定5次，其吸收度的RSD=0.09％，表明仪器精密度良好。

2.9样品溶液稳定性考查取“2.7”项下溶液，每隔2h测定1次，测定5次，其吸收度的RSD=0.09％，表明溶液稳定性良好。

2.10重现性实验取同一批的知母粉末5份，分别按“2.7”项下制备样品溶液，并按样品测定方法，测定5次，芒果苷含量9.57mg/g，RSD=1.72%，表明样品重现性良好。

2.11加样回收率实验取已知含量的供试品5份，分别精密加芒果苷一定量，依法制备供试品溶液，照含量测定法测定，加样回收率为101.01％，相对标准偏差1.27%。结果见表4。表4芒果苷回收率实验

2.12样品的测定按上述方法，对3个不同产地知母药材进行了总黄酮的含量测定。结果见表5。表5不同知母总黄酮的含量测定

从表2可以看出，不同的产地知母总黄酮含量有较大的差异，其功效也必然有一定的差别，河北知母是道地药材，其功效差别是由于内在的化学成分引起的，通过该实验，证实了河北知母的有效成分含量较高。

3讨论

在研究知母总黄酮含量测定方法时，最初选用芦丁为对照品，但实验结果并不好，而且未见文献报道知母中含有芦丁。由于知母中黄酮类成分较多，同时芒果苷是知母中含量较高的一种黄酮类化合物，且芒果苷紫外吸收波谱图和知母总黄酮的紫外吸收波谱图呈现一致性，因此用其作为知母药材中总黄酮含量测定的对照品更有意义，同时也更能真实反应总黄酮的含量。在知母总黄酮和芒果苷最大紫外吸收波谱图，二者最大吸收波长分别在240，258nm呈一致性。原则上，二者均可作为知母总黄酮最大吸收波长，但是由于波长越长，其他杂质干扰就越小，故本次最大吸收波长选定为258nm。在知母总黄酮的提取方法上，还考察了以甲醇为溶剂，索氏提取知母总黄酮，结果其提取效果和超声提取相差不大，但是其耗时、方法也很繁琐。因此，所选定的知母总黄酮的提取方法具有简便、快速、准确，可以作为知母总黄酮的提取方法及含量测定方法。

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黄酮范文篇4

1材料和方法

1.1实验材料实验材料：浓度为0.1mg/ml的甘草黄酮溶液、浓度为0.5mg/ml的甘草黄酮溶液、浓度为1mg/ml的甘草黄酮溶液、浓度为2mg/ml的甘草黄酮溶液、二甲基亚砜溶液（由二甲基亚砜溶解，二甲基亚砜的最终浓度为1%）和豚鼠1只。

1.2实验器材麦式浴槽，温度计，张力换能系统，恒温水浴装置，供氧装置，铁架台，弹簧夹，注射器，手术剪，棉线。

1.3实验方法实验操作步骤：①取制肠段标本。取空腹豚鼠一只，迅速将其致死。然后剖开豚鼠的腹部，剪取其空肠和回肠的上半段。②在肠段的两端各穿一根线，将肠段的一端系在固定片上，另一端系在张力换能器的小勾上。然后开动记录仪，待肠管收缩平稳后，记录一段正常的肠管收缩曲线。③依次在肠段上使用不同浓度的甘草黄酮溶液，并观察不同浓度的甘草黄酮溶液对离体小肠自发活动的影响。

2结果

2.1二甲基亚砜对豚鼠离体小肠的影响实验结果表明，二甲基亚砜对豚鼠离体小肠有微弱的影响，但对本次实验结果影响不大。

2.2甘草黄酮溶液对豚鼠离体小肠的影响实验结果表，浓度为0.1mg/ml的甘草黄酮对离体小肠的收缩无明显影响，其他浓度的甘草黄酮，如浓度为0.5mg/ml的甘草黄酮、浓度为1mg/ml的甘草黄酮和浓度为2mg/ml的甘草黄酮对豚鼠离体小肠的收缩活动呈抑制作用，表现为收缩振幅降低、收缩紧张性下降，且随着溶液浓度的加大，抑制收缩作用会逐渐加强。其中，浓度为0.1mg/ml的甘草黄酮对离体小肠的抑制率为0.0045±0.030，浓度为0.5mg/ml的甘草黄酮对离体小肠的抑制率为0.272±0.038，浓度为1mg/ml的甘草黄酮对离体小肠的抑制率为0.636±0.057，浓度为2mg/ml的甘草黄酮离体小肠的抑制率为0.727±0.063。具体是实验结果。

3.讨论

3.1甘草黄酮的成分分析甘草黄酮属查耳酮和二氢黄酮，均为含有酚羟基的化合物。其对脂质过氧化终产物——丙二醛（MDA）的生成具有明显的抑制作用，对超氧阴离子自由基和超氧阴离子羟自由基有明显的清除作用。有学者证实，甘草黄酮具有明显的清除自由基、抑制脑组织脂质发生过氧化反应的作用；甘草黄酮对Fenton反应生成的羟自由基具有较强的清除作用，其效果明显优于甘露醇（甘草黄酮清除羟自由基的IC50是甘露醇的1/255，抑制羟自由基生成的IC50是甘露醇的1/139）。有报道称，有14种甘草黄酮类化合物对4种活性氧（即超氧阴离子自由基、羟自由基、单线态氧和过氧化氢）具有清除效应。有10种甘草黄酮类化合物对抗卟啉衍生物（HPD）具有明显的溶血作用。另有国外学者从甘草黄酮降低β-胡萝卜素损耗、抗低密度脂蛋白（LDL）氧化的角度阐明了甘草黄酮的抗氧化机制，并论述了这一机制与机体抗过敏、抗血栓、抗肿瘤、抗炎等作用之间的关系。

黄酮范文篇5

岛津LC-10A高效液相色谱仪(LC-10ATVP泵，SCL-10AVP控制器，SPD-10AVP紫外检测器，CTO-10AVP柱温箱)；紫外分光光度计(岛津UV3101PC)；分析天平（Mettler,AE240）；旋转蒸发仪（上海申越科学仪器公司）；四用紫外分析仪（上海顾村科学器材厂）。芹菜素和木犀草素标准品购于天津尖峰植物提取物公司，甲醇为色谱纯（TEDIACompanyInc.USA），提取及精制用乙醇、氯仿、醋酸乙酯均为分析纯（广州大华试剂公司），其他化学试剂均为分析纯。半边旗植物采收于广东湛江郊区，经广东海洋大学杨燕君副教授鉴定为半边旗。

2方法与结果

2.1半边旗总黄酮的测定

2.1.1标准曲线绘制参照文献［5］，采用紫外分光光度计法并适当调整。精密称定干燥至恒重的芦丁对照品2mg，加适量甲醇溶解，定容到10ml即得对照品储备液。精密吸取0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml对照品储备液于50ml容量瓶中，加甲醇至20ml，加入5%亚硝酸钠溶液2ml，摇匀，放置5min，加入10%硝酸铝溶液2ml，摇匀，放置6min，加入新配制的5%氢氧化钠溶液20ml，用甲醇定容至50ml，用分光光度计于500nm处测定吸光度。以浓度(C)与相应的吸光度(A)进行回归分析，得回归方程A=0.1632C+0.0564，r=0.9976。

2.1.2样品总黄酮的测定称取干燥半边旗粗粉10g，加入含溶剂的圆底烧瓶中，按表1的实验设计进行回流提取，过滤，取滤液挥干溶剂，残留物用甲醇溶解，定容到50ml，即得样品溶液，用分光光度计测定500nm处的吸光度值，由标准曲线计算样品总黄酮溶出量。

2.2半边旗总黄酮的提取工艺考察

2.2.1筛选因素水平半边旗总黄酮采用醇提法。经预试验研究，提取过程中可能的影响因素包括溶剂用量（A）、乙醇浓度（B）、提取次数（C）以及提取时间（D）。以半边旗总黄酮溶出量为考核指标，按4因素3水平进行正交实验，因素水平见表1。表1因素水平表（略）

2.2.2正交实验设计及结果按L9(43)正交表对半边旗进行提取并测定总黄酮量。结果见表2～3。表2正交实验结果及分析（略）表3最佳工艺验证实验（略）

由表2和表3分析结果可知，在半边旗总黄酮的提取工艺中，各因素对提取效果的影响程度依次为B>C>A>D，且因素B（乙醇浓度）和C（提取次数）的影响具有统计意义，因此应选B2和C2，确定最优水平组合为A3B2C2D3，即溶剂为12倍量的80%乙醇回流提取2次、2h/次。

2.2.3放大的提取工艺验证实验称取3份半边旗干燥粗粉各500g，采用A3B2C2D3最佳工艺条件提取，按“

2.1.2”方法测定提取液总黄酮含量平均为1.68mg/g生药。提取液减压蒸去溶剂，所得浸膏60℃真空干燥72h，称重得22.9g棕黑色固体，计算得此提取物中总黄酮质量分数为11%。

2.3半边旗黄酮的精制半边旗黄酮的精制采用溶剂抽提法。称取上述粗黄酮适量，按重量比3∶2混入硅藻土，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯进行索氏抽提，分别抽提至无色，取醋酸乙酯溶液，减压蒸干得棕黄色固体即为精制的半边旗黄酮。

2.4半边旗精制黄酮的测定采用峰面积归一化法。以木犀草素和芹菜素混合溶液为对照品，以半边旗精制黄酮为供试品，分别进样高效液相色谱。以供试品中木犀草素与芹菜素的面积和与供试品出峰总面积的比值确定供试品中的黄酮含量。

色谱条件：色谱柱DiamonsilC18(150mm×4.6mm，5μm)；紫外检测波长283nm；流动相为甲醇-水溶液，按照甲醇含量0～100%梯度洗脱；流速0.2ml/min；柱温为35℃。

对照品溶液的配制：精密称取木犀草素和芹菜素对照品各1mg，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解，定容至刻度，即为对照品溶液。

供试品溶液制备：称取精制的半边旗黄酮约2mg，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解，定容至刻度，即为供试品溶液。

吸取上述溶液5μl，分别进样高效液相色谱。色谱图见图1～2。经峰面积归一化法计算供试品中木犀草素与芹菜素的面积和与供试品出峰总面积的比值，计算得供试品中已知黄酮含量占84.3%。

3讨论

以总黄酮溶出量为考核指标，半边旗用乙醇提取有利于黄酮类化合物的溶出，提高溶剂乙醇的浓度，可加快半边旗中总黄酮的溶出速度，从而使溶出量增加。但溶剂乙醇浓度过高时，黄酮物质的溶出量下降，这可能是溶剂乙醇浓度增加，反而使植物细胞脱水、皱缩，不易于溶胀破裂及总黄酮的溶出。

结合正交设计得出优选的最佳因素水平为12倍用量的80%乙醇溶剂回流提取2次，2h/次。正交统计结果表明，提取时间因素的水平对总黄酮含量影响最小，从节能、经济考虑，样品的提取工艺最终采用每次提取1.5h为佳。

采用最佳工艺条件放大提取半边旗，所得提取物中总黄酮溶出量达1.68mg/g生药，总黄酮的质量分数占11%。进一步的研究表明该提取物中还含有脂溶性色素及萜类物质，其质量分数分别占5%和78%。

半边旗黄酮物质主要是木犀草素、芹菜素及其结合的糖苷［6］，精制后的半边旗黄酮成分含量占84.3%，达到新药开发的要求。有关药理及临床实验的结果表明木犀草素在体内具有抗菌、抗病毒及降低血脂和胆固醇的作用［7］，芹菜素具有抗炎、降血压、抗动脉硬化和血栓症、抗菌、抗病毒以及抗氧化作用等多方面的生物学活性［8］。因此开展半边旗黄酮的研究，为从该植物中开发新型中药提供了依据，有利于天然植物资源的综合利用。

【摘要】目的确定提取半边旗总黄酮的最佳工艺条件，并精制以提高黄酮的含量。方法采用正交实验法，考察溶剂用量、乙醇浓度、提取时间以及提取次数对半边旗中总黄酮溶出量的影响，确定最佳提取条件，然后对半边旗总黄酮进行精制，用高效液相色谱测定已知黄酮的含量。结果在所考察的因素中，对半边旗总黄酮提取影响程度为乙醇浓度>提取次数>溶剂用量>提取时间，半边旗总黄酮最佳提取条件为12倍用量80%乙醇回流提取2次、每次回流2h，精制后半边旗黄酮含量达到84.3%以上。结论该工艺设计合理，操作简单，生产成本低廉，有较高的工业生产应用价值。

【关键词】半边旗黄酮正交实验精制

【参考文献】

［1］谢宗万.全国中草药名鉴［M］.北京：人民卫生出版社,1996：53.

［2］MaurakamiT,TanakaN.Occurrence,structureandtaxonomicapplicationsoffermconstituents［J］.ProgChemOrganicNatProd,1988,54：1.

［3］张晓,崔燎，田中信寿，等.半边旗有效成分及抗肿瘤活性研究［J］.中国药学杂志，1997，32（1）：37.

［4］LiJH,CuiL.EffectsofantitumorcompoundsisisolatedfromPterissemipinnataLonDNAtopoisomerasesandcellcycleofHL-60cells［J］.ActaPhamacolSin,1999,20(6)：541.

黄酮范文篇6

【关键词】草珊瑚；总黄酮；提取工艺；含量

［Abstract］ObjectiveTooptimizetheextractionprocessoftheflavonoidsfromsarcandraglaber.MethodsUsedsarcandraglaberasrawmaterials，tookethanolextractionmethodsandusedultrasonicwaterbathtoextracttheflavonoids，thenusedL9（33）orthogonalexperimenttooptimizetheextractionprocessofflavonoids.Oneoftheexperimentsisthesinglefactorexperiment.Accordingtothegivenconditionsandmeasuredflavones，whatwewilldoistohavesinglefactorexperimentsaboutdifferentconcentrationsofethanol，feedratio，extractiontimeandtemperature.Accordingtotheremarkableconditionsfromsinglefactorexperiments，wewillhaveanorthogonaldesignandthenselectthebestconditions.ResultsTheoptimumconditionsofultrasonicmethodsarefortheconcentrationof50percentethanol，feedrate1∶15，theextractedtime45minutes，theflavonesin69.25mg/g.Theoptimumconditionsofwaterbathforethanolmethodsareforconcentrationof50percent，feedrate1∶20，theextractedtemperature80℃andtheflavonesin49.60mg/g.ConclusionThetimeusedinultrasonicextractionisgreatlyshorterthanthatofwaterbathandtheexperimentiseasiertocontrolthanthatofwaterbath，andtheextractionrateofflavonoidsalsoraise28.38%thanthatofwaterbath.

［Keywords］sarcandraglaber；flavonoids；extractionprocess；content

随着草珊瑚在医药、兽药、保健食品及保健用品领域中的应用越来越广泛，对其有效成分的提取分离显得越来越重要。黄酮类化合物是草珊瑚中含量最多、最主要的活性成分之一。目前，对草珊瑚总黄酮的提取分离工艺技术研究尚未见有详细报道，本学位论文拟对草珊瑚总黄酮提取分离工艺技术进行较系统的研究并筛选最佳新技术新工艺。采用正交实验方法考察沸水提取法及乙醇提取法对草珊瑚总黄酮提取效果的影响；采用中药高新工程技术大孔吸附树脂对草珊瑚总黄酮进行分离纯化研究，以确定草珊瑚总黄酮最佳提取分离工艺条件及方法。以确定的草珊瑚总黄酮最佳提取工艺对不同季节采收的草珊瑚中总黄酮含量的动态变化，草珊瑚自然存放时间不同对总黄酮含量的影响，贵州草珊瑚根、茎、叶中总黄酮的不同含量进行动态变化研究，以确

定草珊瑚原料的最佳利用时机。从而为生产中最有效的开发利用草珊瑚，获得草珊瑚总黄酮的最大提取率，发挥草珊瑚的最大经济效益提供实验依据及指导，以达到提升草珊瑚药、食用产品的质量档次，使其更具三效（高效、速效、长效），三小（剂量小、毒性小、不良反应小），三便（便于贮藏，便于携带，便于服用）的特点，使其产品能走出国门、出口创汇，有着重要的经济和社会意义［1］。

1材料与方法

1.1实验材料原料：草珊瑚购于贵阳花果园药材市场；NaNO2（固体）（重庆北碚精细化工厂）；95%的乙醇溶液（分析纯）（遵义国营化学试剂厂）；Al（NO3）3（固体）（汇源化工有限公司）；NaOH（固体）（天津市化学试剂六厂三分厂）。

1.2实验器材HH-S2s型恒温水浴锅（金坛市环保仪器厂）；UV2755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；抽滤机（金宇机械有限公司）；JY88（96）-IIN型数控超声波细胞粉碎机（宁波新芝生物科技有限公司）；FA1004型电子分析天平（上海天平仪器厂）。

1.3实验方法

1.3.1黄酮类化合物的超声波法提取研究超声波提取方法：取原料草珊瑚5g按实验要求的料液比加入乙醇，放入准备好的烧杯中，超声波提取，抽滤液体，取0.3ml加入25ml容量瓶中，再在25ml容量瓶中加入1ml5%的NaNO2溶液，等待6min后，再在25ml容量瓶中加入0.5ml5%的Al（NO3）3溶液，等待6min后，再在25ml容量瓶中加入10ml5%NaOH溶液，并加入60%乙醇溶液定容。等待15min后在500nm处检测吸光度，然后记录数据［做空白对比的不加Al（NO3）3］。

超声波提取过程：（1）称取草珊瑚5g分别装入准备好了的烧杯中，在烧杯上填上编号，并记录好数据。（2）用95%乙醇分别配制50%、60%、70%、80%的乙醇，按正交实验设计搭配装入对应号的锥形瓶中。（3）根据以上配置好的原料，放入超声波仪器中进行提取。（4）将以上提取物过滤，将滤液按照实验方法测出吸光度，并记录好数据。

1.3.2黄酮类化合物的水浴提取研究取原料草珊瑚5g按实验要求的料液比加入乙醇，放入锥形瓶中，水浴锅加热，抽滤液体，取0.3ml加入25ml容量瓶中，再在25ml容量瓶中加入1ml5%的NaNO2的乙醇溶液，等待6min后，再在25ml容量瓶中加入0.5ml5%的Al（NO3）3的乙醇溶液，等待6min后，再在25ml容量瓶中加入10ml5%NaOH的乙醇溶液，并加入60%乙醇溶液定容。等待15min后在500nm处检测吸光度，然后记录数据［作空白对比的不加Al（NO2）3］。

水浴提取的实验过程为：（1）称取草珊瑚5g分别装入准备好了的锥形瓶中，在锥形瓶上填上编号，并记录好数据；（2）用95%乙醇分别配制50%、60%、70%、80%的乙醇，按正交实验设计搭配装入对应号的锥形瓶中，并用保鲜膜密封好；（3）把锥形瓶放入已准备好的一定温度的水浴中加热，2h后取出抽滤液体转入干净的烧杯中，并用保鲜膜密封好；（4）将以上的提取物过滤，将滤液按照实验方法测出吸光度，并记录好数据。

2实验结果与讨论

2.1标准曲线的制备见图1。从芦丁对照储备液中分别吸取1ml，放入1号、2号容量瓶中（25ml），各加60%乙醇至5ml，加5%NaNO2溶液1.0ml，摇匀放置6min，再加10%Al（NO3）3溶液0.5ml（空白对照不加），摇匀再放置6min，加4%NaOH溶液10ml，摇匀放置15min，从400～600nm处测吸光值：可得出芦丁在500nm处存在最大吸收峰。

回归方程：A=0.0095C+0.0016,线性范围为0～59.82μg/ml，相关系数R2=0.9991

图1标准工作曲线

首先，精密称取芦丁对照品18.6mg，置于100ml量瓶中，加60%乙醇溶解至刻度，摇匀即得对照品溶液。然后，分别精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0和5.0、6.0、7.0、8.0ml对照品溶液置于25ml容量瓶中，各加60%乙醇至5ml，加5%NaNO2溶液1.0ml，摇匀放置6min，再加10%Al（NO3）3溶液0.5ml，摇匀再放置6min，加4%NaOH溶液10ml，摇匀放置15min，在500nm波长处测定吸光度值，以同法配制空白（不加硝酸铝）对照。显色剂的配置：含量测定，标准曲线的绘制。所用试剂均为分析纯，4%NaOH乙醇溶液（200ml）：称取8gNaOH置入烧杯中，用200ml60%乙醇溶解。10%Al（NO3）3乙醇溶液（25ml）：称取2.5gAl（NO3）3置于烧杯中，用25ml60%乙醇溶解。5%NaNO2乙醇溶液（50ml）：称取2.5gNaNO2置于烧杯中，用50ml60%乙醇溶液溶解［2］。

2.2黄酮提取过程

2.2.1提取方法（1）超声波提取：精密称取干燥、粉碎的草珊瑚粉末5g置于烧杯中，按实验要求的料液比加入乙醇溶液浸泡，然后用超声波提取。

（2）水浴法提取：精密称取干燥、粉碎的草珊瑚粉末5g置于锥形瓶中，按实验要求的料液比加入乙醇溶液浸泡并用保鲜膜密封好，然后放在水浴锅上加热2h，滤去残渣。

2.2.2样品测定精密吸取黄酮提取液0.3ml于25ml容量瓶中，分别加入60%的乙醇6ml，再加入5%NaNO21.0ml，摇匀放置6min，加入10%Al（NO3）30.5ml（做空白对照的不加），摇匀放置6min，加入4%NaOH10.0ml，加入60%的乙醇定容至刻度。摇匀放置15min在500nm处测吸光度，利用标准回归方程计算出浓度。得到标准曲线回归方程：A=0.0095C+0.0016，相关系数R2=0.9992，根据标准方程可以推导出C=（A-0.0016）/0.0095，C为物质浓度（单位为μg/ml），提取黄酮的质量（mg）=C·25/3·10·V·10-3,提取总黄酮含量=提取黄酮的质量（mg）/原料草珊瑚质量（g）。

2.3超声波法提取黄酮的单因素实验设计及正交实验数据处理

2.3.1乙醇浓度对超声波法提取效果的影响在五个烧杯中各取5g草珊瑚放入，分别用40%、50%、60%、70%、80%乙醇溶液50ml浸泡后超声波萃取15min，按以上的含量测定方法测定吸光度值。见表1。表1表明：随着乙醇浓度的增加，黄酮的提取率也逐渐增加，但是当乙醇浓度超过60%的时候，黄酮的提取率反而降低，是因为随着乙醇浓度的增大，会使提取粗品中杂质含量增加，黄酮成分含量反而降低。表1乙醇浓度对草珊瑚黄酮提取的影响

2.3.2料液比对黄酮提取效果的影响在四个烧杯中各取5g草珊瑚放入，用60%的乙醇，料液比分别1∶5、1∶10、1∶15、1∶20浸泡后超声波萃取15min，按含量测定方法测定吸光度值。见表2。表2料液比对草珊瑚黄酮提取的影响表2可见，浸提固液比在1∶10至1∶20的范围内，浸提固液比在1∶15时提取率最高，但随后增加溶剂的量对提取率的变化不大，在实际操作中，当浸提固液比过小时，提取液偏少，不利于过滤分离，因此选择浸提固液比在1∶15较为合适。

2.3.3超声波萃取时间对黄酮提取效果的影响在四个烧杯中各取5g草珊瑚放入，在料液比1∶10，60%乙醇条件下选择时间分别为15min、30min、45min、60min进行超声波萃取，按含量测定方法测定吸光度值。见表3。表3提取时间对黄酮提取的影响由表3可见，随超声波提取时间15~30min，吸光度增长0.046，增长程度一般，而提取时间30~45min时，吸光度增加了0.102，幅度大增，而提取时间45~60min时，吸光度增长了0.012，增长程度大大降低。由此可以看出，再增加超声波提取时间，吸光度增速出现先增强再逐渐减缓趋势。造成提取物在超声作用达到一定时间后，提取率增加缓慢或呈下降趋势的原因可能是在长时间超声作用下，提取率逐渐向极限值靠近，致使提取率增幅降低。同时超声作用时间太长，会使提取粗品中杂质含量增加，有效成分含量反而降低，影响提取物有效含量。故45min提取时间是最好的工艺条件。

由以上单因素实验可得出几个在实验过程中，对实验结果有显著作用的因素，他们分别是乙醇浓度50%、60%、70%，料液比1∶10、1∶15、1∶20，提取时间15min、30min、45min，运用这些条件做出提取工艺参数设计表（表4），为下面的正交实验做好准备条件。见表5、6。

由表5可看出R料液比＞R乙醇浓度＞R提取时间，所以本实验料液比作为主要因素，K1、K2、K3中数据最大者对应的水平为最佳水平，即转化率最高。本实验的最佳水平组合是A1B2C3，即最佳工艺条件为乙醇浓度50%、料液比1∶15、提取时间45min。表4提取工艺参数设计表表5L9（33）提取工艺条件正交实验结果表表6最佳工艺条件提取由表6可看出黄酮含量69.25mg/g，比正交实验中的A1B2C2（乙醇浓度50%、料液比1∶15、提取时间30min）所提取出的黄酮含量还高，证明本次正交设计实验结论是合理的。

2.4水浴法提取黄酮的单因素实验设计及其正交实验数据处理

2.4.1乙醇浓度对水浴法提取效果的影响在四个锥型瓶中各取5g草珊瑚放入，分别用50%、60%、70%、80%乙醇溶液75ml浸泡后，水浴提取2h，按以上的含量测定方法测定吸光度值（表7）。表7乙醇浓度对水浴法提取效果的影响由表7可看出：随着乙醇浓度的增加，黄酮的提取率也逐渐增加，但从60%～70%，吸光度增长幅度变小即提取的黄酮含量增长幅度变小，当乙醇浓度超过80%的时候，黄酮的提取率反而降低，提取的黄酮含量变小，是因为随着乙醇浓度的增大，会使提取粗品中杂质含量增加，有效成分含量反而降低，影响提取物有效含量。

2.4.2提取温度对水浴法提取黄酮效果的影响在四个锥形瓶中各取5g草珊瑚放入，在料液比1∶20，60%乙醇条件下选择60℃、70℃、80℃、85℃进行水浴法提取，按含量测定方法测定吸光度值（表8）。

由表8可看出在乙醇浓度60%、料液比1∶20的不变条件下，随着提取温度的升高，吸光度值也在不断的增长，60℃~70℃的增长程度是最大的，吸表8提取温度对水浴法提取黄酮效果的影响光度增长最大，但随着温度的继续升高，吸光度的增长程度越来越小，是因为随着温度的增加，提取出来的黄酮参与了其他的反应，故提取的增长率变小了（温度也不易太高，体积将会大量减少）。

2.4.3料液比对水浴法总黄酮提取效果的影响在四个锥形瓶中按料液比各取草珊瑚放入，在提取温度70℃、乙醇浓度60%条件下选择料液比分别为1∶15、1∶20、1∶25、1∶30进行水浴法提取，按含量测定方法测定吸光度值（表9）。表9料液比对水浴法总黄酮提取效果的影响表9可见，浸提固液比在1∶15至1∶20的范围内，吸光度最高，但随后增加溶剂的量对吸光度的变化不大，在实际操作中，当浸提固液比过小时，提取液偏少，不利于过滤分离，因此选择浸提固液比在1∶20较为合适。

由以上单因素实验可得出几个在实验过程中，对实验结果有显著作用的因素，他们分别是乙醇浓度50%、60%、70%，料液比1∶15、1∶20、1∶25，提取温度60℃、70℃、80℃，运用这些条件做出提取工艺参数设计表（表10），为下面的正交实验做好准备条件，见表11、12。表10提取工艺参数设计表表11水浴法提取黄酮L9（33）实验表表12最佳工艺条件确定表由表11可看出R料液比＞R提取温度＞R乙醇浓度，所以本实验料液比作为主要因素，K1、K2、K3中数据最大者对应的水平为最佳水平，即转化率最高。本实验的最佳水平组合是A1B2C3，即最佳工艺条件为乙醇浓度50%、料液比1∶20、提取温度80℃。

由表12可看出黄酮含量49.60mg/g，比正交实验中的A1B2C2（乙醇浓度60%、料液比1∶20、提取温度80℃）所提取出的黄酮含量还高，证明本次正交设计实验结论是合理的。

3结论

本文是通过对两种不同的提取方法对草珊瑚进行总黄酮的提取的研究，以便为以后的提取研究找出合适的实验条件及设计。两种不同的方法，同样的浸提试剂，所提取的黄酮量是超声波法提取的多于水浴法提取的，实验得出结果：超声波法的最佳工艺条件为乙醇浓度50%、料液比1∶15、提取时间45min，根据确定的最佳工艺条件，按实验中的测定方法测得提取的总黄酮含量为69.25mg/g。水浴法的最佳工艺条件为乙醇浓度50%、料液比1∶20、提取温度80℃、提取2h，按实验中的测定方法测得提取的总黄酮含量49.60mg/g。

超声波辅助提取的优点有：（1）所用的提取时间较水浴法缩短了两倍多；（2）实验过程中不用像水浴法一样，要注意温度的控制［3］；（3）所提取的黄酮含量比水浴提取高了28.38%。

提取黄酮量,超声波法提取的多于水浴法,分析原因可能是：（1）超声波的空化作用对细胞膜的破坏有助于总黄酮的释放与溶出；（2）超声波使浸提剂和提取物不断震荡，有助于溶质的扩散；（3）超声波的热效应使介质温度基本维持在60℃，对草珊瑚有水浴效果；草珊瑚分布广泛，资源丰富，成分多样。药理作用广泛、毒性小，用于治疗多种疾病，无明显副作用。目前已有厂家生产了针、片等剂型，日用化工厂以此为原料，制成草珊瑚牙膏。产生了较好的社会和经济效益。从文献资料［4］看来，尽管已进行了生药学、化学成分、药理、临床等方面的研究，但是仍有许多问题有待进一步深入研究。

【参考文献】

1郁建生，李英伦.草珊瑚研究进展.安徽农业科学，2005，33（12）：2390-2392.

2江苏新医学院.中药大辞典.上海：上海科学技术出版社，1997，57.

黄酮范文篇7

1．1仪器UV－2201紫外可见分光光度计（Shimadzu）；倾斜式高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；PB203－N电子精密天平（MettlerToledo仪器上海有限公司）；AJ150L电子精密天平（MettlerinSwitzerland）。

1．2试药实验用药材采自北京市昌平区，落叶晾干，经鉴定为柿树科柿属柿DiospyrosKakiL．f．；芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：080－9303）；AlCl3·6H2O等均为分析纯。

2方法与结果

2．1因素水平表乙醇作为提取溶剂，对乙醇浓度、溶剂量及提取次数和时间3种因素进行考察，每种因素分为3个水平，结果见表1。

2.2供试品溶液的制备精密称取柿叶最粗粉（10～22目之间）1g共9份，按照表2L9（34）正交实验设计方案，用对应浓度和体积的乙醇回流提取相应次数和时间。回流结束后合并提取液，放冷，抽滤，滤液转移至100ml或200ml量瓶中，分别以其相应的提取溶剂定容，过微孔滤膜（0．45μm），作为供试品溶液。

表1正交设计因素水平（略）

表2L9（34）正交实验设计及结果分析（略）

2.3对照品溶液的制备精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品0．0825g于100ml量瓶中，70％乙醇超声溶解，定容至刻度，得芦丁标准液0．825mg·ml－1。

2.4显色试剂及测定波长的选择Al（NO3）3－NaNO2－NaOH显色法［4］：精密吸取芦丁标准液0．5ml和供试液1＃、4＃、7＃各适量至25ml量瓶中，分别加入5％NaNO21．0ml，放置6min，然后加入10％Al（NO3）31．0ml，混匀，放置6min，再加入4．3％NaOH10ml，用70％乙醇定容至刻度，放置15min。在190～700nm范围内扫描测定吸收光谱。

AlCl3显色法［5］：精密吸取芦丁标准液0．1ml和供试液1＃、4＃、7＃各适量至10ml量瓶中，分别加入0．1mol／LAlCl3·6H2O1．0ml，用50％乙醇定容至刻度，摇匀，放置15min。在190～700nm范围内扫描测定吸收光谱。

比较上述两种显色法，用Al（NO3）3－NaNO2－NaOH显色后，明显生成红色絮状沉淀，此法不宜采用；而AlCl3显色后，芦丁标准液的λmax＝410nm，3个样品溶液的λmax＝400～410nm，故选择AlCl3显色后410nm测定吸光度。

2.5显色稳定性考察精密吸取芦丁标准液0．3ml和供试液4＃1．0ml，依法显色后放置不同时间，测定吸光度，结果见表3，吸光度RSD分别为0．2％和0．3％，可见芦丁标准液和供试液4＃显色后4h内基本稳定。

2.6线性关系考察取芦丁标准液1．0ml置25ml容量瓶中，用50％乙醇定容至刻度，摇匀，分别取1．0，2．0，2．5，3．0，3．5，4．0ml置10ml量瓶中，加入0．1mol／LAlCl3·6H2O1．0ml，用50％乙醇定容至刻度摇匀，40min后于410nm处测定吸光度A值，结果见表4。线性回归得标准曲线：A＝5．6×10－3C＋5．7×10－3，R＝0．9999，线性范围为33．0～132．0μg／ml。

2.7样品测定分别取9份供试品溶液适量至10ml量瓶中，加0．1mol／LAlCl3·6H2O1．0ml，用50％乙醇定容至刻度，摇匀，40min后于410nm处测定吸光度A值，换算为总黄酮含量（mg·g－1），如表2所示，极差分析得最佳提取工艺为A2B2C3，即80％乙醇，25倍量，提取4次（2，1．5，1．5，1h）。

表3显色稳定性考察（略）

表4芦丁标准曲线的制作（略）

2.8验证实验精密称取柿叶最粗粉（10～22目之间）1g5份，置于100ml锥形瓶中，按照A2B2C3条件提取，合并提取液，放冷，抽滤，滤液转移至200ml量瓶中，80％乙醇定容至刻度，过微孔滤膜，测定样品中总黄酮的含量，结果见表5，其平均值为101．821mg·g－1，RSD＝2．1％，表明此条件重复性良好。

表5验证实验结果（略）

3结论与讨论

3.1结论柿叶乙醇提取最佳工艺为A2B2C3，即80％乙醇，25倍量，提取4次（2，1．5，1．5，1h）。经验证样品中总黄酮平均含量为101．821mg·g－1（RSD＝2．1％），表明正交实验结果可靠。

3.2讨论

3.2.1预实验采用同一方法测定柿叶水提物和乙醇提取物中总黄酮含量，结果前者显著低于后者，根据参考文献及上述预实验结果，采用乙醇作为提取溶剂。

3.2.2AlCl3显色方法与参考文献比较未采用70℃水浴，因为实际测定两者差异不大，不采用水浴可以减少测定步骤，减小误差。

3.2.3预实验采用22～48目柿叶粉回流提取，发现有爆沸现象，改为最粗粉10～22目。

【参考文献】

［1］郭玫，董晓萍，徐文萍．柿叶的研究概况［J］．甘肃中医学院学报，2000，17（增）：78．

［2］谭仁祥．植物成分分析［M］．北京：科学出版社，2002：486．

［3］贝伟剑，彭文烈，罗杰．柿叶黄酮的大孔树脂分离提纯富集［J］．中成药，2005，27（3）：257．

［4］高梦祥，赵喜红．柿叶黄酮类物质的提取工艺研究［J］．陕西农业科学，2005（3）：41．

［5］刘斌，石任兵，周素蓉．苦参汤有效部位总黄酮含量测定方法研究［J］．中国实验方剂学杂志，2004，10（6）：24．

黄酮范文篇8

【关键词】超声波提取芹菜总黄酮鉴别

TheTotalFlavanoneofCeleryExtractionandtheIdentificationbyUltrasonicWave

Abstract：ObjectiveTomakeuseoftheresourcesofcelery，avoidwastingandapproachtheextractionoftotalflavanoneofcelery.MethodsTheflavonoidswereextractedbyethanolasthesolventfromcelerywithultrasonicwaveandethanolextraction.Usingspectrophotometrytoextractandchecktheflavanoneofcelery.ResultsThedensityofthetotalflavanoneofcelerywasC=0.2126mg/mlandtherateofrecoverywas100.3%.Theoutcomeandthepurityoftheflavanonewereallveryhigh.ConclusionThismethodisapurelyphysicalprocessandhasnotanypollution.Itisanidealwaytoextracttheflavanoneofcelery.

Keywords：Ultrasonicwavetreatment;Celery;Totalflavanone;Identification

芹菜ApiumgraveolensL．属伞形花科一年生或二年生草本植物，异名药芹、旱芹。芹菜味辛、甘，性凉，营养丰富。已有研究证实，芹菜含有丰富的黄酮类化合物、多不饱和脂肪酸、矿物元素、丁基苯酞类、萜类、香豆素衍生物、叶绿素、氨基酸与维生素、膳食纤维等［1］，其中，黄酮类化合物主要成分为水蓼素及7-甲基水蓼素,医学证明，这2种黄酮类化合物是治疗高血压的有效成分［2］。在药理上，芹菜还具有降压、安神、降血糖、血脂、软化血管、增强免疫力、增进食欲和健胃等药理作用［2］。还可作为神经衰弱、小便热涩不利、月经不调等症的食疗。芹菜中含有大量膳食纤维素，经常食用有促进肠蠕动、防治便秘以及预防大肠癌等［3］。

有文献报道芹菜中总黄酮的提取方法采用乙醇提取［2～4］，但是，这种方法的提取效率仍然较低。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道［5，6］，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响［6］。但超声技术应用于提取芹菜中黄酮类物质的研究尚未见报道，本文报道用超声波提取芹菜总黄酮及鉴别。

1仪器与试剂

1.1仪器

KQ5200DB型数控超声波清洗器（超声工作频率40kHz、昆山市超声仪器有限公司）；UV755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHBIII循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。

1.2试剂

95%乙醇AR；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜芹菜买自百色市农贸市场。

2方法与结果

2.1总黄酮成分提取

取新鲜芹菜，烘干，粉碎。称取芹菜粉末约6g，加80ml95%乙醇，超声波提取2.5h，抽滤。滤渣再加80ml95%乙醇，超声波提取2.5h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩5～7ml为止，放置100ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。

2.2测定方法依据

以芦丁为对照品测定芹菜中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。

2.3定量实验-总黄酮的含量测定

2.3.1波长的选择取样品液适量，在0.30ml5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。

2.3.2标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（0.13mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10.00ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30ml，摇匀，静置6min；再加10%硝酸铝溶液0.30ml，摇匀，静置6min；再加4%氢氧化钠溶液4.00ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12min，以试剂作空白参比液，于510nm处测定吸光度，结果见表1。表1紫外可见分光光度计测定吸光度（略）

根据上表得回归方程：A=3.619×103+12.34C，r=0.9999。

2.3.3提取物含量的测定精密吸取样品液0.50ml，置10.00ml容量瓶，按标准曲线的制备方法测定其吸光度A=0.137，根据回归方程：A=3.619×103+12.34C，计算样品中总黄酮的含量C=0.2162mg/ml。

2.3.4回收率实验

精密量取样品液1.00ml，加入标准芦丁对照品1.00ml（0.13mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为100.3%。

2.4定性实验-总黄酮的鉴别

2.4.1颜色反应紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。

浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏30s，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。

三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1％三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。

乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。

盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液1ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。

2.4.2纸层析取样品溶液10μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5（体积比）为展开剂，上行展开5h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。

3讨论

3.1实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为100.3%，利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。

3.2黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等［7］。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。

黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用［8～13］。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目，芹菜分布广泛，本文实验结果表明，芹菜中含有黄酮。因此，芹菜具有广泛开发和利用价值，值得综合利用加强资源开发。

【参考文献】

［1］高金燕，陈红兵.芹菜中活性成分的研究进展［J］.中国食物与营养，2005，（7）：28.

［2］严建刚，张名位，杨公明，等.芹菜黄酮的提取条件及其抗氧化活性研究［J］.西北农林科技大学学报，2005，33(1):131.

［3］魏秀俭.芹菜与人类健康［J］.中国果菜，2005，1:48.

［4］张桂，畅天狮.从芹菜中提取黄酮类物质的研究［J］.食品科学，2002，23(8):121.

［5］刘祥义.超声波提取元宝枫叶总黄酮方法研究［J］.云南化工，2003，30（1）：27.

［6］谢明杰，宋明，邹翠霞，等.超声波提取大豆异黄酮［J］.大豆科学，2004，23(1):75.

［7］夏杏洲，张辉，魏传晚.榕树叶中黄酮类化合物的提取条件研究［J］.食品研究与开发，2002，23(5):35.

［8］华光军，郭勇.黄酮类化合物药理研究进展［J］.广东药学，1999，9（4）：9.

［9］黄河胜，马传庚，陈志武.黄酮类化合物药理作用研究进展［J］.中国中药杂志，2000，25（10）：499.

［10］王玮，王琳.黄酮类化合物的研究进展［J］.沈阳医学院学报，2002，4（2）：115.

［11］曹纬国，刘志勤，邵云，等.黄酮类化合物药理作用研究进展［J］.西北植物学报，2003，23（12）：2241.

黄酮范文篇9

1仪器与试药

1.1仪器

WND200A型高速中药粉碎机（上海微型电机厂），BS224S精密电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，TU1900双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司），IRIS/AP型电感耦合等离子体发射光谱仪(美国TJA公司)，全自动回流消化仪(重庆南岸玻璃仪器厂)。

1.2试药

芦丁标准品(中国药品生物制品检定所，批号为0080-9705)；硝酸、高氯酸均为优级纯，其他试剂均为分析纯，测微量元素用水为双蒸水。乌蕨药材于2008年10月采于杭州九溪，经熊耀康教授鉴定为乌蕨Stenolomachusanum(L.)Ching的地上部分，阴干，粉碎，备用。

2实验方法与结果

2.1总黄酮含量测定［4］

2.1.1对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥恒重的芦丁对照品16.50mg，加60%乙醇溶解定容于50ml容量瓶，得浓度为0.33mg/ml对照品溶液，备用。

2.1.2供试品溶液的制备：定量称取乌蕨干燥粗粉5.0g，加16倍量0.1％HCl-60％乙醇回流提取4h，提取1次，提取液减压浓缩，加60%乙醇定容至25ml，作为供试品溶液备用。

2.1.3标准曲线的制作：精密吸取标准品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，分别置25ml容量瓶中，加入5%NaNO21.0ml，摇匀，放置6min后加入10%Al(NO3)31.0ml，摇匀，放置6min后加入4%NaOH10ml，再加60%乙醇稀释至刻度，混匀，静置15min，于510nm处，以相应试剂作空白，测定吸光度，以芦丁浓度为纵坐标，以吸光度值为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=2.778X-0.0775（r=0.9991），结果表明芦丁在0.016～0.99mg范围内呈良好的线性关系。

2.1.4精密度实验：取芦丁对照品溶液2.0ml，置25ml容量瓶中，按“2.1.3”项操作，平行测定5次，结果其RSD为0.21％，表明精密度良好。

2.1.5重复性实验：取同1份样品溶液5份，分别按“2.1.3”项操作，结果RSD为0.72%。

2.1.6稳定性实验：取1份样品溶液，按上述实验方法在显色完全后0、10、20、30、45、60min分别测定吸光度，结果RSD为1.08%。实验表明：供试品溶液在1.0h内稳定的。

2.1.7加样回收率实验：取已知总黄酮含量的乌蕨样品6份，分别精密添加已知浓度的芦丁对照品适量。按供试品溶液制备方法制备，按“2.1.3”项操作，测定总黄酮含量，计算测定回收率，结果平均回收率为99.34％，RSD为1.82％。

2.1.8乌蕨不同部位总黄酮含量的测定：精密吸取提取液适量，按“2.1.3”项操作，测定吸光度A，结果见表1。表1乌蕨根、茎、叶、全草等不同部位总黄酮含量测定结果（略）

2.2微量元素含量的测定［5］

2.2.1供试品溶液的制备：各取药材约0.5g，精密称定，置50ml凯氏烧瓶，加8.0ml消化液［V(HNO3)∶V(HClO4)=4∶1］，静置过夜，加热回流消化至无色透明，冷却后，定量转移至100mL容量瓶中，加超纯水稀释至刻度，摇匀，备用。取相同体积的消化液，同法消化，制备空白溶液。

2.2.2混合标准溶液的制备：分别取各重金属元素标准品溶液适量，用5%硝酸溶液制成混合溶液，梯度稀释，作为混合标准品溶液备用。

2.2.3测定方法：仪器工作参数：检测器CID的低波段（＜265nm）积分时间：15s；高波段（＞265nm）积分时间：5s；进样蠕动泵转速：100r/min；进样雾化器氩气压力：28psi；辅助气流量：1.0L/min；高频发生器功率：1500W；样品冲洗时间：5s；测定波长范围：193.7～407.7nm。

依次将仪器的进样管插入各个浓度的混合标准品溶液中进行测定，以每一浓度测得的3次读数的平均值为纵坐标，相应元素标准溶液浓度为横坐标，作标准曲线，并进行方法学考察。由各元素的标准曲线计算微量元素的含量，测定结果见表2。表2乌蕨根、茎、全草、叶等不同部位微量元素含量测定结果（略）

3讨论

3.1由实验可知，乌蕨全草、根、茎、叶等不同部位总黄酮含量分别11.89%、4.47％、3.46％和11.75%，总黄酮含量在叶中较高，而根与茎中总黄酮含量较低。乌蕨富含黄酮类化合物，而黄酮类化合物在临床上具有预防血液类疾病、治疗冠状动脉硬化、抗癌、抗菌、抗衰老、抗糖尿病等作用，食品上作为甜味剂、天然色素等食品添加剂。因此提取乌蕨中的黄酮类化合物，不单可以用于临床药物的研究，也可用于食品与工业方面。

3.2元素测定结果表明，乌蕨全草、根、茎、叶等不同部位均含有丰富的微量元素，其中含B、Ca、K、Na、P、S等多种常量元素；此外还含Cu、Fe、Zn、Cr、Co等多种人体必需的微量元素。其中K、Fe、Ca、Na等元素含量均较高，其次为Mn、Zn、Cu。而有害元素Pb、As、Cu在地上部分含量较低，根中Pb、As、Cu含量都高出了《药用植物及制剂进口绿色行业标准》（Hg≤0.2μg/g、Pb≤5.0μg/g、As≤2.0μg/g、Cd≤0.3μg/g和Cu≤20.0μg/g），可能是由于本身的沉积或者土壤受到污染造成。

【参考文献】

［1］江苏新医学院.中药大辞典(上册)［S］.上海:上海人民出版社,1985：157158.

［2］马莺,王静.功能性食品活性成分测定［M］.北京:化学工业出版社,2005:253.

［3］吴巧凤,曾晓艳.苏州荠苧总黄酮与微量元素含量的测定［J］.广东微量元素科学，2004,11(9):3437.

黄酮范文篇10

【关键词】复方生物黄酮；Ames实验；小鼠骨髓细胞微核实验；小鼠精子畸形实验

【Abstract】Inordertostudythepotentialmutationgenesisofcompoundflavine，wehaveperformedAmestests，ratmarrowosteocytemicronucleartestsandratspermdeformationtests.Theresultsareallnegative，notoxicchangeshavebeenobserved.Itisconcludedthatnomutationgenesiseffectsofcompoundbio-flavinehavebeendiscoveredinfeedingdosage.

【Keywords】compoundbio-flavine；Amestests；ratmarrowosteocytemicronucleartests；ratspermdeformationtests

随着生命科学的不断发展，人们对生物黄酮有了广泛的研究，发现黄酮类化合物具有良好的抗氧化性能［1］和清除自由基的能力［2］；具有抗肿瘤作用［3］；植物雌激素样作用；减少体内胆固醇的合成，降糖作用［4］和降低血清胆固醇浓度和对心脑血管的保护作用［5］；对细胞免疫功能和非特异性免疫功能均有提高作用。生物黄酮的种类众多，其来源不同，所发挥的生物活性也不同。根据传统中医理论以枸杞、黄芪、银杏叶为主要原料，辅以其他辅料制成的复方生物黄酮，可以更好的发挥黄酮的提高免疫作用，尽管这些主要原料均来源于“既食又药”的物质，但是关于复方成分的致突变性研究较少。为了研究复方生物黄酮（圣安泰牌百力康片）可能对人体造成的潜在致突变性，我们对该产品进行了Ames实验、小鼠骨髓微核实验和小鼠精子畸形实验，以期为今后开发利用我国“既食又药”的医药宝库提供科学依据。

1材料与方法

1.1样品复方生物黄酮的商品名称为圣安泰牌百力康片，由哈尔滨圣安泰生物科技有限公司提供。样品以枸杞、黄芪、银杏叶为主要原料，辅以其他辅料制成，功效成分为总黄酮。

1.2材料昆明种小白鼠（批准证号：医动字第09-2-7号），购自黑龙江省肿瘤研究所实验动物中心。TA97a、TA98、TA100和TA102四种菌株引自美国加州大学Ames实验室。

1.3方法

1.3.1鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶实验（Ames实验）TA97a、TA98、TA100和TA102四种菌株引自美国加州大学Ames实验室。经菌株特性鉴定均符合实验要求。活化系统为PCB-五氯诱导的雄性Wistar大鼠肝s-9液。按1：9加入辅助因子（Ames1983年配方）配成10％s-9混合液，经阳性诱变剂活性鉴定符合实验要求。实验样品经XAD-11树脂柱过滤及洗脱预处理，最后以DMSO为溶剂，剂量设计分别为5mg/皿、1mg/皿、0.2mg/皿、0.04mg/皿和0.008mg/皿受试物。除上述5个剂量组外，又设未处理对照组、溶剂对照组（DMSO）和阳性对照组［加s-9用2-AF（TA102用1，8-二羟蒽醌），不加s-9用DEXON（TA100用叠氮钠）］。采用平板渗入法进行实验。在保温的顶层培养基中依次加入测试菌株新鲜增菌液0.1ml，混匀；加受试物或对照物0.1ml［需活化时加入10％s-9混合液0.5ml（含s-95μl）］，再混匀，迅速倾入底层培养基上，转动平皿使顶层培养基均匀分布在底层上，平放固化，37℃培养48h观察结果。每个剂量平行做了3皿，并重复一次，最后以3皿平均值报告实验结果。

1.3.2小鼠骨髓细胞微核实验昆明种小白鼠，体重25～30g，共50只，在本实验室适应环境7天后，随机分成5组，每组10只，雌雄各半。高剂量组剂量为10g/kgbw；中剂量组为5g/kgBw；低剂量组为2.5g/kgbw；阴性对照组经口灌胃蒸馏水；阳性对照组灌胃给予环磷酰胺，剂量为40.0mg/kgbw。按20ml/kgbw灌胃容积进行灌胃。采用30h给受试物法，即二次给受试物间隔24h，第二次给受试物后6h颈椎脱臼处死小鼠，取股骨，常规制片。显微镜双盲法阅片，每只小鼠观察1000个嗜多染红细胞（PCE），记录有微核的嗜多染红细胞数，计算出微核率。每只动物计数200个嗜多染红细胞，观察嗜多染红细胞与成熟红细胞比值。

1.3.3小鼠精子畸形实验昆明种小白鼠25只，体重25～30g；随机分成5组，每组5只。设3个剂量组，剂量设计同小鼠骨髓微核实验，即高剂量组为10g/kgbw，中剂量组为5g/kgbw，低剂量组为2.5g/kgbw。阴性对照组给予蒸馏水，阳性对照组给予环磷酰胺，剂量为40mg/kgbw。所有各组均按20ml/kgbw容积灌胃，每日1次，连续5天。各组动物均于首次投入检样后35天处死。按常规方法制片，固定，2％伊红溶液染色，每只小鼠镜检1000个完整精子，计算畸形率。

2结果

2.1鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶实验（Ames实验）圣安泰牌百力康片二次Ames实验结果见表1和表2。

表1圣安泰牌百力康片第一次Ames实验结果(x±s)

注：以上结果为3皿回变菌落数的平均值

表2圣安泰牌百力康片第二次Ames实验结果（x±s）

注：以上结果为3皿回变菌落数的平均值

实验结果表明，受检样品对Ames各实验菌株在加与不加活化系统条件下均呈阴性结果，即鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶实验为突变阴性结果。

2.2小鼠骨髓细胞微核实验圣安泰牌百力康片的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验结果见表3。

表3圣安泰牌百力康片小鼠骨髓细胞微核实验结果

注：与阴性对照组相比**P<0.01

对实验结果进行泊松分布检验，结果两个性别小鼠除阳性对照组外，各剂量组微核率与阴性对照组相比均无统计学差异（P>0.05），亦无剂量效应关系，说明受试物小鼠骨髓细胞微核实验为阴性结果。此外，各组动物PCE/RBC值经方差分析差异无显著性，说明各组动物均未见到细胞毒性作用。

2.3小鼠精子畸形实验圣安泰牌百力康片的小鼠精子畸形实验结果见表4。

表4圣安泰牌百力康片对小鼠精子畸形发生率的影响

注：与阴性对照组相比**P<0.01

从表4可见，各组小鼠均可见到一定数量的畸形精子，除阳性对照组外各实验组小鼠的精子畸形与阴性对照组相比，均没有超过2倍，且无剂量效应关系，亦无统计学意义，说明受试物对小鼠精子畸形发生率无影响。

3讨论

复方生物黄酮的主要来源为枸杞、银杏叶和黄芪。研究证实这几种成分未见致突变毒性结果。枸杞的Ames实验（TA97、TA98、TA100、TA1024个菌株）结果为无论加S9与不加S9回变菌落数均未超过空白对照的两倍。雌性和雄性动物的微核率分别为1.6‰与1.2‰，与阴性对照组微核率相比，差异不显著。小鼠精子畸形实验精子畸形率均在正常范围内，与阴性对照组精子畸形率相比，差异无统计学意义［6］。对银杏叶的遗传毒性实验研究也未见致突变作用［7］，目前尚未见黄芪的突变性研究。本文在急性毒性实验的基础上进行了复方生物黄酮的Ames实验、小鼠精子畸形实验和小鼠精子畸形实验，结果表明复方生物黄酮对Ames各实验菌株在加与不加活化系统条件下均呈阴性结果。各剂量组微核率与阴性对照组相比均无统计学差异（P>0.05），亦无剂量效应关系，说明受试物小鼠骨髓细胞微核实验为阴性结果。各组小鼠均可见到一定数量的畸形精子，除阳性对照组外，各实验组小鼠的精子畸形与阴性对照组相比，均没有超过2倍，且无剂量效应关系，亦无统计学意义，说明受试物对小鼠精子畸形发生率无影响。总之，本研究结果说明实验剂量的复方生物黄酮没有致突变性。

【参考文献】

1姚平，刘烈刚，贾文波，等.银杏黄酮对小鼠急性酒精摄入后抗氧化系统的影响.卫生研究，2005，34（3）：303-306.

2彭珊珊，于化泓，赵哲霞.具有抗氧化效果的植物性食品.食品科技，2005，1：44-48.

3杜凤英.植物雌激素抗癌作用的研究进展.预防医学情报杂志，2005，21（2）：153-155.

4曹群华，瞿伟菁，牛伟，等.沙棘黄酮对链脲佐菌素致糖尿病大鼠降糖作用.营养学报，2005，27（2）：151-154.

5朱旭贞.杏丁治疗急性脑梗死50例疗效观察.现代中西医结合杂志，2005，14(9)：1169.