真核细胞范文
时间：2023-03-22 06:57:00
导语：如何才能写好一篇真核细胞，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公文云整理的十篇范文，供你借鉴。
篇1
1.细胞壁上的差异
原核细胞细胞壁的成分主要是肽聚糖和胞壁酸，还有脂多糖、脂蛋白等成分。细胞壁除对细胞有保护作用外，还对物质交换起部分调节作用，其成分还与抗原性、致病性等方面有关。真核细胞中动物细胞没有细胞壁，植物细胞的细胞壁成分主要是纤维素和果胶，起支持和保护作用。
2.细胞核与染色体水平
原核生物的特征是体积较小，直径由0.2～10μm，进化地位较原始，现存资料可以证明真核细胞是由原核细胞进化而来。代表性的原核生物有：细菌、蓝藻、支原体、衣原体、立克次氏体等。原核细胞与真核细胞最本质的区别就是看有没有成型的细胞核，原核细胞没有核膜将它的遗传物质与细胞质分隔开，没有核膜、没有核仁、没有固定形态、结构也较简单，其遗传信息量小，遗传信息的载体是的双链环状DNA分子，没有与组蛋白结合，不构成染色体（有的原核生物在其主基因组外还有更小的能进出细胞的质粒DNA）。真核细胞具有双层膜结构的核膜将细胞内部分成细胞核与细胞质两部分，核膜上有核孔，核内有核仁，其绝大多数遗传物质就分布在细胞核内，双层核膜的出现为遗传物质结构的演化提供了良好的微环境，使高度复杂的遗传装置相对独立起来，也使基因的表达具有严格的区域性。真核细胞遗传信息的载体DNA与原核细胞的DNA相比，其结构与数量都有变化。数量由几千发展到几万甚至十万以上；结构为线状，线状的DNA分子能与多种组蛋白结合，形成直径10nm的核小体结构，然后再以核小体为结构单位高度螺旋盘绕形成复杂的染色体或染色质。
3.细胞器水平
细胞器存在于细胞膜以内核膜以外具有一定形态结构功能。原核细胞只具有一种细胞器—核糖体。真核细胞除核糖体外，还有具有双层膜结构的细胞器：线粒体、叶绿体（植物细胞）；单层膜结构的细胞器：高尔集体、内质网、溶酶体、液泡（植物细胞）和没有膜结构的细胞器—中心体，它们分散在细胞质中，每种细胞器都有各自的结构和功能，他们之间协调配合来完成物质的代谢。如分泌蛋白的合成，首先要在核糖体上合成肽链，然后运到内质网中进行加工，再运到高尔基体上进行再加工，最后释放到细胞外，在整个过程中涉及到核糖体、内质网、高尔基体和提供能量的线粒体四种细胞器。二者虽然都有核糖体，但核糖体的化学组成和形态结构上有明显的区别。真核细胞核糖体的沉降系数为80S型，由60S和40S大小两个亚基组成；原核细胞核糖体的沉降系数为70S型，由50S和30S大小两个亚基组成。
真核细胞中的线粒体，有自己特有的基因组，能完成自己DNA的复制及部分蛋白质的合成，其内膜上有与氧化磷酸化相关的电子传递链，为细胞的代谢活动提供能量。原核细胞功能上与线粒体相当的结构是质膜和由质膜内折形成的结构，但后者没有自己特有的基因组。真核细胞的叶绿体，也有自己特有的基因组和合成系统。有些原核生物虽然也具有能进行光合作用的膜结构称之为类囊体，但未被双层膜包裹，不形成叶绿体。
4.基因结构及其表达上的差异
基因结构及其表达在原核细胞与真核细胞之间存在明显的差异。
原核细胞DNA含量有限又要保证生命活动必要数量的基因，就必须充分利用仅有的DNA来存储遗传信息，所以其基因简洁而有效，无多余序列。当基因表达时，转录形成的mRNA直接与核糖体结合开始翻译蛋白质，即原核细胞是转录与翻译同时进行的。
真核细胞DNA含量远远大于原核细胞，充分的遗传物质使它形成一些特殊的基因结构，如重复序列、内含子、假基因等。其中内含子是基因中不编码蛋白质的序列与外显子相间形成结构基因，正是因为它的存在，真核细胞的基因在表达过程中，出现转录后对mRNA进行加工的过程，即将基因中内含子所转录的RN段剪切掉形成mRNA。真核细胞的DNA存在于细胞核中，而翻译所需的核糖体在细胞质中，所以细胞核中的基因在细胞核中转录后，形成mRNA从细胞核中出来进入到细胞质中与核糖体结合翻译出相应的蛋白质，即真核细胞基因的转录和翻译不像原核细胞那样同时进行而是分开进行的，转录在细胞核中，翻译在细胞质中。这些结构上的特点，促成真核细胞能在转录前水平、转录水平、转录后水平、翻译水平及翻译后水平对基因的表达进行多种层次上的调控。原核细胞的调控方式比较简单使其能适应多种不利环境，进行快速调节。而真核细胞基因表达的复杂性及多层次性能够保证遗传信息传递的准确性和稳定性。
原核细胞与真核细胞除上述差异外，还有以下差异：真核细胞有内膜系统，原核细胞无；真核细胞有细胞骨架，原核细胞无；真核细胞的分裂有细胞周期，原核细胞无；真核细胞主要进行有丝分裂和减数分裂，原核细胞无等。
原核细胞与真核细胞除有差异外，也有相同的地方，如都有细胞膜结构，细胞质结构，翻译共用一套密码子等。
在学习过程中易出现的错误：
（1）把病毒当成原核生物。因为它们没有细胞结构，所以既不是原核细胞也不是真核细胞。
篇2
【摘要】
目的: 构建重组载体pcDNAλ并在COS7细胞分泌表达鸡Igλ轻链， 制备抗鸡Igλ轻链的单克隆抗体（mAb）。方法: PCR扩增带有信号肽的鸡Igλ轻链基因， 限制性酶切消化后， 定向克隆于真核表达载体pcDNA3， 构建具有6×His标签、 分泌表达的重组载体pcDNAλ。重组载体转染COS7细胞后， SDSPAGE分析真核表达载体pcDNAλ在COS7细胞的分泌表达。用2×106个雏鸡B淋巴细胞免疫BALB/c小鼠， 取脾细胞与骨髓瘤细胞融合， 分别采用细胞免疫荧光和间接ELISA筛选阳性杂交瘤克隆。结果: 成功构建分泌表达鸡Igλ轻链的重组载体， SDSPAGE分析表明在COS7细胞上清有目的蛋白的分泌表达。杂交瘤细胞经筛选与鉴定， 获得2株分泌抗鸡Igλ轻链mAb的杂交瘤细胞株， Western blot检测到该mAb对重组鸡Igλ轻链的反应性。结论: 构建了重组表达载体pcDNAλ并在COS7细胞上清分泌表达了重组鸡Igλ轻链。并用淋巴细胞杂交瘤技术成功筛选出抗鸡Igλ轻链mAb。为深入研究鸡Igλ轻链的结构与功能奠定了基础。
【关键词】 鸡Igλ轻链 pcDNA λ COS7细胞 真核分泌表达 单克隆抗体
[Abstract] AIM: To construct the eukaryotic expression vector for chicken Igλ light chain， to express it on COS7 cells and to prepare the monoclonal antibodies against chicken Igλ. METHODS: The cDNA of chicken Igλ light chain with signal peptide sequence was amplified and then inserted into eukaryotic expression plasmid pcDNA3 after double enzyme cutting. The constructed recombinant vector was transfected into COS7 cells by lipofectamin and the secretable eukaryotic expression of chicken Igλ light chain was verified by Western blot. The monoclonal antibodies (mAbs) against chicken Igλ light chain were prepared by immunizing BALB/c mice with 2×106 chicken B cells and by cell fusion technology. RESULTS: The eukaryotic expression vector was successfully constructed. Western blot demonstrated that chicken Igλ light chain existed in the cultural supernatant. The hybridoma lines secreting antiIgλ mAbs were screened by indirect ELISA. The specific reactivity between antiIgλ mAbs and recombinant chicken Igλ light chain was detected by Western blot. CONCLUSION: The secreted recombinant chicken Igλ light chain and antiIgλ mAbs provide a basis for further study of the functions of chicken Igλ.
[Keywords]chicken Igλ light chain; pcDNAλ; COS7 cell; secretable expression; monoclonal antibody
禽类拥有特殊的抗体基因结构、 独有的免疫器官和相对保守的抗体基因类别， 已经成为研究抗体产生和免疫系统发生发育的重要模式生物[1]。法氏囊是鸡特有的中枢免疫器官， 鸡抗体基因数量少且结构简单， 抗体多样性机制与哺乳动物及人类有根本性差异[2]。轻链作为抗体和膜表面免疫球蛋白（mIg）的重要组分， 在抗原识别、 B细胞分化和免疫防御等方面发挥着重要作用[3-5]。已经发现约95%的鸡免疫球蛋白属于λ型。研究鸡Igλ轻链对于全面认识鸡的抗体基因以及免疫系统发育和功能具有重要价值和意义。本研究中通过构建真核表达的重组载体pcDNAλ， 实现重组鸡Igλ轻链在COS7细胞的分泌表达。利用杂交瘤技术制备了抗鸡Igλ轻链mAb， 为进一步研究鸡抗体轻链的结构和功能奠定了基础。
1 材料和方法
1.1 材料 重组质粒pGEMλ由河南省动物免疫学重点实验室构建[6]。真核表达载体pcDNA3（Invitrogen公司）、 COS7细胞株（中科院上海细胞生物所）、 脂质体LipofectamineTM2000（Invitrogen公司）、 质粒提取试剂盒（Qiagen公司）、 限制酶、 T4连接酶、 DNA聚合酶（购自TaKaRa公司）。DMEM培养基、 RPMI1640细胞培养基， HAT、 HT培养基， PEG4000， 胎牛血清均为Gibco产品。NS0瘤细胞由英国国家动物健康研究院惠赠。BALB/c纯系雄性小鼠购自郑州大学医学院实验动物中心， 鼠龄6～8周， 体质量18～22 g用于动物免疫和制备饲养细胞。
1.2 方法
1.2.1 分泌型真核表达重组载体pcDNAλ的构建 以已构建的重组质粒pGEMλ为模板， PCR扩增鸡Igλ cDNA并引入Hind III和Xhol I酶切位点。用于扩增的引物: A1 5′CAGAAGCTTAGCTGCTGGGATTC3′， A2 5′TCTCTCGAGTTAATGATGATGGTGGTGATGGCACTCGGACCT3′。PCR扩增反应体系为: cDNA 1 μL、 Premix Ex TaqTM 25 μL、 上游引物1 μL、 下游引物1 μL、 ddw 22 μL。PCR反应参数: 94℃， 预变性2 min; 94℃ 30 s， 60℃ 30 s， 72℃ 90 s， 30个循环， 72℃保持10 min。10 g/L琼脂糖凝胶电泳分析PCR扩增产物。Hind III和Xhol I酶切λcDNA和pcDNA3质粒， 将λcDNA定向克隆于表达载体， 构建重组表达载体pcDNAλ， 转化感受态大肠杆菌JM109， 转移至含有氨苄的固体平板培养基上培养， 37℃条件下培养12～16 h后挑取单个菌落PCR扩增， 并进一步经酶切鉴定和测序验证后提取超纯质粒用于真核细胞转染。
1.2.2 转染COS7细胞 COS7细胞用含100 mL/L FBS的DMEM培养基培养于细胞培养板上， 转染前24 h细胞传代， 培养至细胞单层达80%时， 用脂质体LipofectamineTM2000（Invitrogen）介导转染（按操作说明进行）。
1.2.3 分泌蛋白的纯化和SDSPAGE 电泳分析 转染后72 h收集COS7细胞培养上清用NiNAT Spin Column亲和层析柱纯化。纯化的重组蛋白用120 g/L分离胶进行SDSPAGE电泳分析。
1.2.4 抗鸡Igλ轻链mAb制备 ①免疫小鼠: 取3周龄雏鸡法氏囊组织， 研磨， 无菌获取B淋巴细胞， 用2×106个细胞免疫8周龄BALB/c小鼠， 每只剂量0.3 mL颈背部皮下多点注射。共免疫3次， 每次间隔1～2周。最后一次免疫后10 d断尾采血分离血清， 用间接ELISA检测血清效价。最后一次加强免疫后4周， 尾静脉和腹腔注射5×106 B淋巴细胞超强免疫， 3 d后进行细胞融合。②细胞融合: 无菌取免疫鼠脾脏， 将分离的脾细胞与NS0骨髓瘤细胞按10∶1的比例在预热的500 mL/L PEG2000作用下融合。融合细胞加到含饲养细胞的96孔细胞培养板上， 置于HAT选择培养基中， 37℃ 50 mL/L CO2培养箱中培养。③阳性杂交瘤的筛选与克隆: 融合后第8天分别用间接ELISA和细胞免疫荧光法对细胞生长孔上清进行抗体检测。用重组鸡Igλ轻链包被ELISA反应板， 与细胞培养上清作用后再加入羊抗鼠IgG， TMB显色。酶联免疫检测仪记录450 nm读值。细胞免疫荧光法（IFA） 制备B淋巴细胞悬液并调整细胞密度为1×109个细胞/L。细胞与待测上清及灭活兔血清作用， 充分洗涤， 加入FITC 抗鼠IgG二抗， 荧光显微镜观察。分别以未免疫小鼠血清、 免疫小鼠血清为阴性、 阳性对照。检测的抗体阳性孔进行连续3次有限稀释克隆化，阳性克隆的检测值高且细胞状态良好者即为筛选的单克隆细胞株。④Western blot检测mAb与重组鸡Igλ轻链反应的特异性: 将纯化的鸡Igλ蛋白经SDSPAGE分离， 转移到硝酸纤维素膜上， 用筛选的mAb对Igλ蛋白进行杂交试验， 鉴定mAb与Igλ蛋白反应的特异性。
2 结果
2.1 重组表达载体pcDNA3λ的构建 PCR扩增λcDNA并引入Hind III和Xhol I酶切位点。Hind III和Xhol I双酶切的λcDNA和pcDNA3载体经连接转化后， 提取质粒进行双酶切鉴定， 切出约700 bp DNA条带， 证明目的基因已经插入该载体中（图1）， DNA测序结果表明插入片段为插入方向正确的目的基因， 且读码框正确。
图1 表达载体pcDNAλ的酶切鉴定（略）
Fig 1 Restriction enzyme analysis of expression vector pcDNAλ
1: pcDNAλ was digested by Hind III; 2: pcDNAλ was digested by Hind III and Xhol I; 3: DNA marker.
2.2 细胞转染及重组蛋白的SDSPAGE电泳分析 COS7细胞培养达到80%融合时， 用脂质体LipofectamineTM2000将表达载体pcDNAλ和空质粒pcDNA3转染COS7细胞， 37℃、 50 mL/L CO2孵育箱内培养72 h。收集细胞培养上清用NiNTA spin column亲合柱层析纯化分泌蛋白， 纯化的重组蛋白用120 g/L分离胶进行SDSPAGE 电泳。pcDNAλ转染的COS7细胞培养上清有重组蛋白Igλ分泌表达， 在Mr约23000位置有明显的蛋白表达条带（图2）。
图2 分泌型重组鸡Igλ的SDSPAGE电泳分析（略）
Fig 2 SDSPAGE analysis of the secreted chicken Igλ
1: Supernatant of COS7 cells transfected with pcDNAλ; 2: Recombinant chicken Igλ after purification by NiNTA spin column; 3: Protein molecular weigh marker.
2.3 mAb与B细胞反应的特异性 IFA鉴定mAb与B细胞反应的特异性。mAb作用后， B细胞有明显的荧光， 阴性对照则没有荧光出现（图3）。
图3 IFA检测mAb与鸡B细胞反应特异性（略）
Fig 3 Detection of chicken B cells reaction with mAb by IFA
A: Chicken B cells reacted with mAb; B: Chicken B cells reacted with negative mAb control; C: Chicken B cells under light microscope.
2.4 mAb与鸡Igλ反应的特异性 （1）间接ELISA: 重组鸡Igλ蛋白包被ELISA反应板， 与mAb进行间接ELISA反应， 鉴定mAb与鸡Igλ反应的特异性。以mAb的最大稀释倍数作为mAb的间接ELISA效价和工作浓度。1 mg/L的Igλ蛋白包被反应板测定的杂交瘤上清的间接ELISA效价: E9、 3F3分别为1∶512和1∶128。 （2）Western blot: 鸡Igλ蛋白经SDSPAGE分离， 转移到硝酸纤维素膜， 分别用mAb E9和3F3对Igλ蛋白进行杂交试验， 鉴定mAb与Igλ蛋白反应的特异性。显示的阳性杂交条带说明mAb与重组蛋白Igλ能特异性反应（图4）。
图4 重组鸡Igλ与抗鸡Igλ mAb Western blot（略）
Fig 4 Western blot analysis of the secreted chicken Igλ reaction with mAb
1: The culture supernatant of COS7 cells transfected with pcDNAλ; 2: Recombinant chicken Igλ after purification by NiNTA spin column; 3: Reactivity of Recombinant chicken Igλ with mAb E9; 4: Reactivity of Recombinant chicken Igλ with mAb 3F3.
3 讨论
分泌蛋白的合成通常起始于细胞质基质中的游离核糖体， 在N端信号肽引导下进入内质网继续蛋白质合成和加工修饰， 最后经由高尔基体的囊泡运输转移至细胞膜外。鸡Igλ轻链为分泌蛋白， N端具有21个氨基酸组成的信号肽[7]。本研究中采用PCR技术扩增出带有信号肽序列的鸡Igλ轻链基因， 限制性酶切消化后， 定向克隆于真核表达载体pcDNA3， 成功构建带有6×His标签、 分泌表达的重组载体pcDNAλ。重组载体转染COS7细胞， 收集细胞上清进行NiNTA亲合柱层析纯化分泌蛋白， SDSPAGE电泳分析表明有目的蛋白的分泌表达。重组表达载体所具有的6组氨酸标记物序列编码的6组氨酸标记物亲合性好， 便于重组蛋白的分离纯化。
Igλ轻链是鸡B细胞表面分子膜免疫球蛋白（mIg）的重要组分， 在制备抗体时， 我们分别尝试用鸡法氏囊B细胞和可溶性抗原（重组鸡Igλ）免疫小鼠， 并且从抗原剂量、 接种途径、 间隔时间以及是否加入佐剂等几方面进行了条件优化。免疫效价测定结果表明， 用2×106个细胞免疫小鼠， 首免和二免间隔1周时间， 小鼠免疫效价虽然比加佐剂的可溶性抗原低， 但抗体特异性高， 杂交瘤筛选效果更好， 说明用全细胞免疫小鼠制备针对膜表面分子的mAb具有一定优势。
我们分别采用细胞免疫荧光、 间接ELISA和蛋白质印迹技术对阳性杂交瘤进行筛选和鉴定， 三种方法的综合运用提高了筛选效果， 尤其是蛋白质印迹综合了电泳的高分辨率和免疫探测技术的灵敏性和专一性的优点， 在特异蛋白质检测方面已得到广泛的应用， 对鉴定mAb的特异性更为适用[8]。
参考文献
[1] Sayegh CE， Drury G， Ratcliffe MJH. Efficient antibody persification by gene conversion in vivo in the absence of selection for V(D)Jencoded determinants[J]. EMBO J， 1999， 18(22): 6319-6328.
[2] 张 红， 刘钧珂， 张改平， 等. 鸡免疫球蛋白基因结构与抗体多样性产生的分子机制[J]. 河南农业科学， 2007， 2: 102-104.
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[5] Fang T， Smith BP， Roman CAJ. Coventional and surrogate light chains differentially regulate Igμ and Dμ heavy chain maturation and surface expression[J]. J Immunol， 2001， 167(7): 3846-3857.
[6] 宋海涛， 张 红， 王 丽， 等. 法氏囊B细胞λ轻链基因编码蛋白在大肠杆菌中的表达[J]. 河南农业科学， 2007， 3: 109-111.
篇3
一位长者讲过这么一个故事：有一个人非常幸运地获得了一颗美丽的珍珠，然而他并不感到幸福，因为在那颗珍珠上面有一个小小的斑点。他想若能拥有一块没有斑点的珍珠那该多好啊！
于是，他就下狠心削去珍珠的表层，可是斑点还在。他不断地削掉了一层又一层，直到最后，那个斑点没有了，而珍珠也不复存在。那个人痛心不已，并由此一病不起。在临终前，他无比懊悔地对家人说：“若当时我不去计较那一个斑点，现在我手里还会攥着一颗美丽的珍珠呵。”
每想到这个故事，就会使我想起另一件事儿。有一段时间，我几乎每天傍晚都要去看田野的景致。经常会看到一对头发斑白的老人，依偎在路边的一条长椅上眺望远方。他俩总是静静地坐着，而面孔则始终挂着一种祥和的微笑，宛如一尊神态安详的雕塑。
有一天，我好奇地走到他俩近前，轻声地招呼道：“你们也喜欢看田野吗？”
篇4
关键词：癫痫；大针手法；督脉；海马；核转录因子-κB
中图分类号：R742.1 R246 文献标识码：A
doi：10.3969/j.issn.1672-1349.2014.04.045
文章编号：1672-1349（2014）04-0471-04
Effects of Nuclear Factor-kappa B Expression in Hippocampal Nerve Cells of Epileptic Rats through Dazhen Acupuncture Manipulation on Du Meridian
Ni Wenjie，Zhao Lixin，Duan Shuqin，et alShanxi Hospital of Traditional Chinese Medicine（Taiyuan 030012）
Abstract：Objective To study the effects of nuclear factor-kappa B（NF-κB） expression in hippocampal nerve cells of epileptic rats through dazhen acupuncture manipulation on Du Meridian，then explore the mechanism of anti-epilepsy through dazhen acupuncture manipulation on Du Meridian，provide new theoretical basis for clinical acupuncture treatment of epilepsy.Methods Thirty health rats were randomly and enenly divided into blank control group（group A），epilepsy model group（group B），dazhen acupuncture manipulation group（group C），Lithium chloride and pilocarpine were injected the rats’ enterocoelias of group B and group C，induce status epilepticus（SE） model.The rats’ behavior changes were observed.Equal dose of normal saline were injected the rats’ enterocoelia of group A.Any treatment was not given to group A，dazhen acupuncture manipulation was applied at points of Du Meridian ：Fengfu，Dazhui，Taodao，Wuming，Shenzhu，once a day，20 minutes every time，treatment for 14 days.The pathological morphological changes in the hippocampal nerve cells of the three groups were observed by using HE staining.The expression of NF-κB P65 in hippocampal nerve cells of the epileptic rats were observed by immunohistochemistry.Results The status epilepticus were induced in group B and group C，one rat dead in two groups.The rats in group B had obvious pathological morphological changes，the pathological morphological change in group C had obvious improvement. There was no obvious pathological morphological changes in group A.Immunohistochemical staining：The expression of NF-κB P65 was（13.95±6.99） in group A，（28.75±8.80） in group B，（19.25±8.60） in group paring each two groups，the differences are statistically significant（P
Key words：epilepsy；dazhen acupuncture manipulation；Du meridian；nucler factor-kappaB
癫痫（Epilepsy）是由多种原因引起的脑部兴奋性过高以致某些神经元突然过度异常放电，导致脑部功能短暂异常，临床表现为阵发性意识改变或丧失，同时可有阵发性抽搐、感觉异常、特殊感觉现象或行为障碍的一种慢性临床综合征。持续而频繁的癫痫发作可导致大脑神经元细胞的凋亡，本病长期反复发作，不仅使患者躯体遭受痛苦，而且在一定程度上导致精神及社会心理障碍，在智能及人格方面均受到损害。
许多实验研究发现，在癫痫发病中，核转录因子-κB（nuclear factor-kappaB，NF-κB）作为转录因子参与了急性炎症过程，作为细胞因子参与了神经兴奋和/或神经胶质瘢痕的形成。因此，本实验研究NF-κB在癫痫大鼠海马中的表达，进而研究大针手法对癫痫大鼠神经NF-κB表达的调节作用，对针刺治疗癫痫的作用机制进行研究，为针灸临床治疗癫痫提供新的理论依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物 Wistar大鼠30只，体重200 g～250 g，雌雄各半，由山西省中医药研究院中心实验室提供，实验动物生产许可证号：SCXK（晋）2010-0002，实验动物使用许可证号：SYXK（晋）2010-0002，实验动物合格证号：0000014，室温22 ℃～26 ℃室内，湿度70%，分笼喂养。
1.2 试剂与仪器 氯化锂（Lithium chloride，美国Sigma公司），毛果芸香碱（匹鲁卡品，Pilocarpine hydrochloride，美国Sigma公司），水合氯醛（Chloral hydrate，天津市科密欧化学试剂有限公司），多聚甲醛（Paraformaldehyde，天津市化学试剂研究所），兔抗NF-κB多克隆抗体（sc-372，美国Santa Cruz公司），山羊抗兔IgG （sp-9001，北京中杉金桥），DAB显色试剂盒（ZLI-9032，北京中杉金桥公司），切片机（德国莱卡RM2015），离心机（北京离心机厂LDZ5-2型），电子天平（瑞士METTER AE100型），移液器（德国EPPENDORF），干燥箱（日本三洋MIR-153型），低温冰箱（日本三洋MDF-382E型），恒温水浴箱（江苏太仓医用仪器厂DSHZ-300型），医用微波炉（浙江临安爱迪仪器厂YWY781B型），显微镜（日本OLYMPUS公司 BX51T-PHD-J11），计算机图像处理系统CMOS（日本OLYMPUS公司），多功能真彩色细胞图像分析管理系统（美国Media Cybernetics 公司Image-Pro Plus）。
1.3 实验方法
1.3.1 动物分组及模型制作 30只大鼠随机分为3组：空白对照组（Α组）、癫痫模型组（Β组）、大针手法组（C组），每组10只，雌雄各半。Α组：腹腔注射同等容量的生理盐水代替氯化锂和匹鲁卡品；Β组：腹腔注射氯化锂3 mmol/kg，24 h后腹腔注射匹鲁卡品30 mg/kg，分3次注射，每次间隔10 min，直至出现无间歇的癫痫持续状态；C组：腹腔注射氯化锂3 mmol/kg，24 h后腹腔注射匹鲁卡品30 mg/kg，分3次注射，每次间隔10 min，直至出现无间歇的癫痫持续状态。
参考Racine分级标准（0级～V级）：0 级，正常；Ⅰ级，湿狗样颤动，面肌痉挛，如眨眼、动须、节律性咀嚼等；Ⅱ级，节律性点头； Ⅲ级，前肢阵挛；Ⅳ级，站立伴双侧前肢阵挛； Ⅴ级，跌倒失平衡，四肢抽动。B组、C组大鼠诱导出Ⅳ级～Ⅴ级癫痫持续状态（SE）且SE发作持续1 h视为造模成功，SE发作持续1 h后，予大鼠腹腔注射10%水合氯醛（300 mg/kg）终止发作，若注射水合氯醛30 min后未终止发作，予150 mg/kg重复注射，直至终止发作（以3次为最高限）。记录大鼠行为学变化。
1.3.2 治疗方法 Α组、Β组不做任何治疗；C组用1寸不锈钢针，针刺大鼠督脉穴：风府、大椎、陶道、无名（2～3胸椎棘突之间）、身柱（取穴参照《实验针灸学》中大鼠的穴位），每日1次，每次20 min，中间行针1次，平补平泻，治疗14 d。
1.3.3 海马取材 针刺14 d后，第15天时对大鼠脑组织进行取材。各组大鼠用10%水合氯醛腹腔注射，每只1 mL，过度麻醉，迅速剪开胸腹腔，暴露心脏肝脏，先经左心室快速灌注4 ℃生理盐水300 mL（灌注针由左心室进针穿入主动脉，止血钳固定，剪破右心耳，快速灌注生理盐水300 mL），后接含4%多聚甲醛的磷酸盐缓冲生理盐水（PBS，0.1 mol/L，pH=7.4）300 mL，先快后慢，灌注固定，大鼠迅速出现四肢颤动，颈部变硬，尾部变硬伸直，待大鼠全身僵硬后，迅速断头开颅取脑，将修整后的脑组织置于4%多聚甲醛中，4 ℃冰箱保存。24 h后，将大鼠脑组织移入含20%蔗糖的0.1 mol PB溶液（磷酸盐缓冲液，pH=7.4，4 ℃）中至沉底。待脑组织下沉后，每个大脑半球于背侧海马最大断面处，切取3 mm厚的组织，制成石蜡包块，再做冠状切片，厚度为4 μm（冰冻切片机切取），每只大鼠切取4张切片，贴于经明胶处理过的载玻片上。
1.3.4 HE染色 石蜡切片经常规脱蜡入水后，在苏木素溶液浸染10 min，1%盐酸酒精分色3 s～5 s（当深蓝紫色变为淡粉色则中止）；氨水反蓝5 min（由淡粉红色变为淡蓝色），自来水冲洗，终止反应，镜下观察，细胞核清晰染色呈蓝紫色，细胞浆及其他背景基本无色即可。伊红溶液染色5 min，自来水冲洗，镜下观察，细胞浆呈红色，细胞核蓝色即可。随后经梯度乙醇脱水（从低浓度到高浓度，70%乙醇，80%乙醇，90%乙醇，100%乙醇，每级5 min），每次2 min，二甲苯透明2次，每次10 min，最后用中性树胶封片。光镜下观察大鼠海马神经元形态学改变。
1.3.5 免疫组化染色 切片常规脱蜡至水，3%双氧水室温下作用10 min后，以蒸馏水冲洗3次，每次30 s，滴加复合消化液，室温下作用10 min，以蒸馏水冲洗3次，每次30 s，滴加正常山羊血清封闭液室温20 min，甩去多余液体，吸水纸吸取多余水分，滴加兔抗鼠NF-κB多克隆抗体（1∶50），4 ℃过夜；取出后自然复温30 min，PBS（pH7.4）冲洗3次，每次5 min；滴加生物素标记山羊抗兔IgG（1∶100），37 ℃孵育20 min，PBS（pH7.4）冲洗3次，每次3 min；滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液（1∶100），37 ℃孵育20 min，PBS（pH7.4）冲洗3次，每次3 min；DAB显色：使用DAB显色试剂盒内AB试剂各一滴，混合后加至切片。室温下显色，镜下控制反应时间， 约5 min～20 min。然后用蒸馏水充分冲洗。苏木素复染。乙醇梯度脱水（70%乙醇，80%乙醇，90%乙醇，100%乙醇，每级5 min）。二甲苯透明5 min，中性树胶封片，晾干即可。每张切片测5个视野，以人机交互方式，由计算机计算出每个视野的NF-κB P65阳性细胞数及平均光密度，取其平均值。计算机图像处理系统由CMOS及多功能真彩色细胞图像分析管理系统组成。
1.3.6 主要观察指标 各组大鼠造模过程中行为学变化；各组大鼠海马神经细胞病理改变；各组大鼠海马神经NF-κB P65表达的变化。
1.4 统计学处理 采用SPSS17.0 统计软件对NF-κB P65阳性细胞数进行统计学分析。实验数据以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，P
2 结 果
2.1 各组大鼠行为学观察 A组大鼠腹腔注射生理盐水后，行为活动无异常，无死亡。B组和C组大鼠腹腔注射氯化锂（3 mmol/kg）后，所有大鼠行为活动均无异常，24 h后，腹腔注射匹鲁卡品（30 mg/kg，分3次注射，每次间隔10 min）2次或3次后，2 min～15 min内，大鼠逐渐出现外周胆碱能反应：立毛、流涎、颤抖、流血泪，同时或先后出现刻板行为：凝视不动、咀嚼、吸鼻或探索行为、湿狗样震颤、反复头颈上仰，随后出现眨眼、面肌痉挛、点头，口吐白沫，嘴唇、四肢皮肤发绀，甚至大小便失禁，最后出现反复双侧前肢阵挛伴直立、跌倒或翻转，部分动物出现四肢强直-阵挛发作。开始发作尚不频繁，随着时间延长，发作频率增高，全部达到Ⅳ级～Ⅴ级癫痫持续状态。SE状态1 h后，B组和C组大鼠腹腔注射10%水合氯醛（300 mg/kg）终止发作。终止发作后，B组死亡1只，存活率90%，C组死亡1只，存活率90%，A组存活率100%。B组与A组存活率比较，差异无统计学意义；C组与A组存活率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。详见表1。
2.2 各组大鼠海马神经细胞的病理改变 经HE染色后，光镜下观察海马组织病理改变： A组海马CA1区神经元结构正常，排列整齐，形态完整，细胞核圆或椭圆形，规则，核膜清楚完整，染色质分布均匀，胞质内可见尼氏小体，核仁清晰可见。
B组海马CA1区神经元排列不整齐，正常神经元数量显著减少，细胞间隙增大，部分神经元形态不完整，核膜结构不清楚，细胞核开始出现固缩，核仁不明显，胞浆浓缩深染，呈空泡样变，大部分细胞尼氏体消失，还可见变性坏死的神经细胞。
C组海马CA1区神经元排列较整齐，接近正常，正常结构的神经元较多，大部分神经元细胞核、核膜结构清楚，少部分细胞尼氏体消失或胞浆浓缩深染，变性或坏死的细胞较少，损伤程度较癫痫模型组轻。
2.3 各组大鼠海马NF-κB P65阳性细胞数的表达 免疫组化结果：A组大鼠海马CA1区，棕黄色的NF-κB P65阳性反应物在胞浆、胞核染色非常弱，且几乎都分布于胞浆中，胞核中的阳性物质很少甚至没有。
B组大鼠海马CA1区可见很多NF-κB P65阳性细胞表达，神经元细胞核、胞浆内棕黄色的NF-κB P65的阳性反应物染色较正常组明显加深，多呈团块状分布，且胞核内染色较胞浆深。
C组大鼠海马CA1区可见较少NF-κB P65阳性表达细胞，NF-κB P65阳性反应物在胞核、胞浆棕黄色染色非常浅，在胞核内的棕黄色染色较癫痫模型组染色浅，接近空白对照组，未见棕黄色染色团块状分布。详见表2。
3 讨 论
目前，对癫痫的发病机制尚未完全明了，在治疗癫痫方面，所有的抗癫痫化学药物都有不良反应。因此，探寻防治癫痫的新途径、新方法具有重要的意义。
针灸治疗癫痫早在《内经》中就有记载，也是现在临床上较为有效的办法。针灸治疗癫痫选穴多样，但总的是以任、督穴位为多。彭光超[1]取穴鸠尾、筋缩、腰奇、间使、丰隆，痰热较盛加太渊；肝热加太冲；体弱加足三里，痊愈34例，显效10例，好转4例，无效6例。张智龙[2]用意气行针法治疗癫痫35例，取丝竹空、三阴交、太冲、阴陵泉、阳陵泉、丰隆、内关（均双侧）、鸠尾、关元，从头到足依次取穴，针丝竹空得气后密切注意守气勿失，拇指向前捻转180°，紧捏针柄不动，意守针尖，以意聚气，待针下有跳动感时，以意行气，余穴用平补平泻法，痊愈25例，显效7例，好转2例，无效1例，总有效率97.14%。翟文生等[3]用醒脑开窍针法治疗60例，治愈9例，显效18例，好转30例，无效3例。许永迅[4]采用芒针治疗102例，大椎透灵台，至阳透筋缩，脊中透命门，腰奇透长强，神庭透囟会，百会透后顶，璇玑透膻中，鸠尾透中院、内关（双）、丰隆、太冲、双侧顶颞前斜线，显效54例，有效25例，效差10例，无效13例。
已有研究表明，针刺可对癫痫动物中枢神经的脑电活动、神经递质、环核苷酸等产生影响[5]，张颖[6]研究了针刺对电刺激癫痫大鼠模型的作用，发现针刺可显著降低癫痫大鼠的放电平均波幅、放电最高波幅及放电频率，提高其脑电基本频率，说明针刺可显著抑制痫性放电、控制癫痫发作。杨帆等[7]发现大鼠癫痫模型组脑内兴奋性氨基酸天门冬氨酸、谷氨酸升高明显，而抑制性氨基酸γ-氨基丁酸明显降低，经电针百会、风池后γ-氨基丁酸、丙氨酸明显升高，而谷氨酸降低明显。杨帆等[8]用戊四唑（PTZ）制作的点燃型癫痫大鼠模型海马结构内环磷腺苷（cAMP）、环磷鸟苷（cGMP）含量均有增加，其中cGMP增加非常明显，经电针百会、风池、风府后cAMP、cGMP含量均明显降低，电针对PTZ点燃型癫痫大鼠海马结构内cAMP、cGMP含量的改变有一定的调节作用，对cAMP的调节迅速但持续时间短，而对cGMP的调节缓慢而持久。
NF-κB在癫痫发病机制中的作用也是目前研究热点之一，NF-κB是一种重要的核转录因子，参与真核细胞多种基因的表达调控，影响细胞的许多生物学功能[9]，其活化形式通常是P50和P65，当细胞处于静息状态时，NF-κB和其抑制因子IB结合存在于细胞质中，当细胞受到各种刺激后，许多实验研究发现，在癫痫发病中，NF-κB作为转录因子参与了急性炎症过程，作为细胞因子参与了神经兴奋和/或神经胶质瘢痕的形成。Blondeau研究发现，海人藻酸可快速增加NF-κB与DNA的连接活动度，使其亚单位产生核移位，认为NF-κB活化作为癫痫发病机制的基础信号转导通路的一个关键步骤[10]。Matsuoka等[11]利用大鼠海人藻酸点燃模型发现痫性发作后4 h～16 h内海马神经元NF-κB活化明显增加，并伴胶质细胞NF-κB持续活化。Crespel利用合并海马硬化的颞叶癫痫患者术后病理切片进行免疫组化分析发现，胶质细胞和大脑锥体细胞NF-κB/P65过度表达，并推测癫痫形成过程是由NF-κB介导的炎症反应过程，其过程是一个被痫样发作反复、短折激活的慢性过程[12]。
用大针手法治疗癫痫是我院针灸专家冯尚武和郭耀康老师在长期的临床工作中，发现的一种治疗癫痫的针刺方法，疗效确切，已得到临床验证。此法是用21号、长3寸～4.5寸的不锈钢针，针刺督脉穴的风府、大椎、陶道、无名（胸椎2～3之间）、身柱。操作时，先用捻转法进针，当针尖到达两椎骨棘突之间时，改用缓慢推进法（不捻转慢慢向前推进），约当针尖达脊髓腔时，其方向为：若针风府穴，须使针和耳垂成水平线，缓慢推进；若针大椎、陶道、无名、身柱，均按45°～60°角向斜上方缓慢推进（注意：不可用力过猛，更不可行捻转捣刺术）。针到适应处时，患者常尖叫一声，全身抽动一次，此时立即停止针刺，患者意识不清的可能稍转清醒，有的可出现胸部灼憋闷，全身发麻发软，颜面苍白，瞳孔散大，全身肌肉松弛，出冷汗等症状，属正常反应，可留针15 min～30 min。若在针刺狂躁厉害或体格强壮的患者时，未出现上述诸症之一者，可再行抽刺，抽刺时一般采用扇形往两侧抽刺，每抽刺一下，患者的腿随即跳动一下，抽刺后有的患者可出现双下肢的暂时性瘫软，一般在1 h～2 h后即可恢复，必要时可架扶慢慢行走或适当休息。另外，如患者体质比较虚弱，可选用26～28号针进行针刺，以减少刺激。
本实验通过大针手法治疗癫痫大鼠，研究大针针刺督脉对癫痫大鼠神经NF-κB表达的影响。证实癫痫大鼠的海马神经发生病理改变，大针手法针刺督脉穴位可以改善海马神经的病理改变，癫痫大鼠的海马神经NF-κB P65阳性细胞数的表达增多，减少海马神经NF-κB P65阳性细胞数的表达。针灸治疗癫痫可能是通过抑制海马神经细胞NF-κB的表达，从而减轻了NF-κB作为转录因子参与的急性炎症过程，减少了NF-κB作为细胞因子参与的神经兴奋和/或神经胶质瘢痕的形成，从而减少正常海马神经细胞的凋亡，达到治疗癫痫、减轻癫痫症状的目的。
参考文献：
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[2] 张智龙.意气行针发治疗癫痫35例临床观察[J].天津中医，1990，（1）：30-31.
[3] 翟文生，王建明.醒脑开窍法治疗癫痫60例[J].浙江中医杂志，1992，27（10）：445.
[4] 许永迅.长针和头针为主治疗运动性癫痫[J].上海针灸杂志，1991，10（3）：16-17.
[5] 李梦.针刺治疗癫痫的临床及实验研究进展[J].中国中医急症，2005，14（5）：469-470.
[6] 张颖.针刺对电刺激致痫动物模型影响的实验研究[J].河南医药信息，1999，7（7）：10-12.
[7] 杨帆，徐国龙，王频，等.电针对戊四唑点燃型癫痫大鼠脑内氨基酸含量的影响[J].针刺研究，2002，27（3）：174.
[8] 杨帆，徐国龙，王频，等.电针对癫痫大鼠海马内cAMP，cGMP含量的影响[J].中国中医药科技，2002，9（4）：199-200.
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[10] Erner Natoli M，Montpied P，Rousset MC，et al.Sequential expression of surfacean tigens and transcription factor NF-kappa B by hippocampal cells in excitotoxicity and experimental epilepsy[J].Epileps Res，2004，41（2）：141-154.
篇5
【关键词】腱鞘；巨细胞瘤；磁共振成像
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.05.081文章编号：1004-7484（2014）-05-2473-01
1材料与方法
收集2例经手术及病理证实的发生于膝关节及踝关节腱鞘巨细胞瘤患者的资料，2例均为女性，年龄分别37和50岁，主要临床表现为关节生长缓慢、疼痛及无痛性包块而就诊，病程分别为1.5年及7年，均无明显外伤史，查体：膝关节前方局限性软组织及踝关节周围弥漫性软组织肿块，无红肿热痛，关节活动度受限，术前行GE Signa 1.5T MRI扫描仪，常规T1WI、T2WI，P（D）-抑脂系列，造影剂为15ml钆喷酸葡胺T1WI，T2WI（TR/TE 2000/75）系列扫描。
2结果
一例为膝关节髌下脂肪垫卵圆形块影，边界清楚，与关节滑膜紧贴（图1），一例为踝关节周围不规则分叶状、结节融合样块影，关节滑膜弥漫性增厚（图2），肿块均表现为信号不均，各系列以低信号为主，其中以T2WI信号最低，增强扫描肿块成不均匀中等度强化，其间可见低信号的分隔影及局限性小片状无强化低信号影，部分显示完整或不完整包膜强化影，肿块局部与临近骨质相贴，踝关节病例胫骨前下缘与肿块相贴处骨质局限吸收改变，但骨质信号未见异常，肿块与相邻肌肉分界清楚，踝关节腔少量积液（图1、图2）。
3讨论
3.1临床特点腱鞘巨细胞瘤是发生于关节外腱鞘的病变，表现为单个或多个弥漫性或浸润性肿块，伴发或不伴发毗邻关节病变。发病率较低，病程多在1-3年，好发年龄30-50岁，女性略多于男性[2]，本病起病隐匿，病因不明，许多专家认为可能与局部外伤出血，反复损失有关，也有的学者认为是由于肌腱或滑膜损伤后导致滑膜的纤维组织细胞增生的修复性慢性反应，有的认为是在胆固醇代谢紊乱的基础上再受外伤引起的，但我们遇到的两个病例均没有外伤史。
3.2病理特点GCTTS的病理特点是滑膜组织的弥漫性受侵，大多呈结节或分叶状肿物，切面呈灰黄或红棕色，质地较韧，其成分包括不同比例的圆形单核细胞、破骨性多核巨细胞、泡沫样吞噬细胞、吞噬含铁血黄素细胞及慢性炎性细胞，间质为胶原基质具有不同成分的玻璃样变性，富血管的区域含有含铁血黄素沉着，表面被覆纤维性包膜是GCTTS的病理学特征之一，部分包膜延伸进入病灶内分隔病灶形成结节。
3.3鉴别诊断①PVNS（色素绒毛结节性滑膜炎）：GCTTS与PVNS是有着相同组织学表现和相似影像学特征的两种不同的疾病，公认的较为统一的认识是发生于关节内滑膜的该类疾病为色素绒毛结节性滑膜炎（PVNS），发生于关节外滑膜腱鞘组织的为腱鞘巨细胞瘤（GCTTS），两者在MRI上均表现危机特征性的多个系列低信号，不同的是GCTTS表现为关节外沿肌腱生长的边界清楚的肿块，骨质受累较少见；而PVNS特点是广泛的关键内滑膜受累，形成分叶状的绒毛结节，结节内有丰富的含铁血黄素沉积，同时伴有大量的关节积液和边缘骨质受侵。②创伤后的血肿：创伤有的血肿有时也会在关节内或周围形成类似的软组织肿块，由于含铁血黄素沉积，在MRI各系列上都表现为低信号，但患者后明确的创伤病史，局部疼痛症状明显，而且血肿随时间推移会发生明显变化，密切结合病史和随访有助于鉴别。③肉瘤：GCTTS进犯范围非常广泛时，需要与软组织肉瘤和皮质旁肉瘤鉴别，恶性肉瘤多表现为T1WI低信号，T2WI高信号或不均匀等信号，起源于骨组织皮质胖的肉瘤多有骨质破坏，而GCTTS多为MRI各系列低信号，骨质改变为慢性压迫性吸收，多有硬化缘。
综上所述，MRI对于GCTTS的诊断具有极高的敏感性和特异性，对本病的诊断和鉴别诊断具有重要价值，有助于制定术前计划和确定切除范围；在关节周围出现T1WI、T2WI低信号肿块，T2WI信号更低，增强后中等程度不均匀强化，无骨质破坏，病程较长，首先考虑GCTTS，总之，GCTTS的MRI表现具有一定的特征性，MRI能够对GCTTS做出定性诊断，对指导临床治疗和随访均具有重要价值。
参考文献
篇6
【摘要】目的 探讨淋巴结针吸细胞病理学对淋巴结核早期诊断的研究，提高淋巴结核诊断准确率。方法根据显微镜下淋巴结核不同时期的针吸细胞病理学特点及特征性结构改变，结合抗酸染色和结核抗体检测做出分型诊断。结果在1090例结核性淋巴腺炎中，男360例，占33.0%，女730例，占67.0%，年龄1～78岁，平均28.3岁。结核初期―炎性增殖期60例占5.5%；结核早期―淋巴结节期130例占11.9%；结核中期―结核性结节期有590例,占54.1%;结核晚期―干酪样脓样坏死期有280例占25.7%;结核恢复期―纤维素增殖期30例占2.8%。炎性增殖反应期非特异性形态学变化,需要结合结核抗体阳性和腺苷脱氨酶明显增高有助于诊断,结核结节期主要可有较多类上皮样细胞及郎罕氏细胞;而干酪样脓样坏死主要见大量坏死组织及碎屑、少数残碎不全类上皮样细胞,此期主要能查到抗酸菌为特点; 纤维增殖期,抽出物难取,仅见少数纤维组织、纤维细胞和粘液间质为其特征，提示结核恢复、疤痕形成所致。结论应用淋巴结针吸细胞病理学分型诊断，而且为淋巴结核早期诊断、早期发现、早期治疗提供重要方法。
关键词：淋巴结 针吸 结核 早期诊断
文章编号：1008-6919（2006）07-0068-03
中图分类号:R322.2+ 5
文献标识码：A
The research of the diagnosis of tuberculotu lymphadenitis typing basedon needle aspirate cytology of lymphnode
[ Abstract ] Objective To evaluate the research of needle aspirate cytology of lymphnode in the diagnosis ofthe typingoftuberculotu lymphadenitis and the function of the typing to improve the accurate rate in diagnosy .Method tuberculotu lymphadenitis type were diagnosed according to the FNA pathological characteristics and specific construction modification under the microscope,with the aid of acid-fast stain and tuberculotu antibody’s detection .Result The 1090 cases in cluded 360 males making up 33.0% ,and 730females, making up 67.0% , with age arranged from 1to 78 years old and an average age of 28.3.The results showd that 60 cases (5.5% ) were of the inflammation reaction hyperplastic stage (1) ;130 cases (11.9% ) .Lamphaticnodular stage (2) ; 590 cases (54.1% ) tuberculous nodular stage (3) ; 280 cases (25.7% ).Caseous necrosis stage (4) ; and 30 cases (2.8% ) fibrinous hyperplastic stage (5).The inflammation reaction hyperplactic stage and lymphatic nodular stage are of nonspecific morphological changes and should be diagnosed with the help of positive tuberculin test and obvious increase of Adenosine Deaninase (ADA ) ; tuberculous nodular stage has a great number of epithelioid cells, and Langhans cells, caseous necrosis stage is charteriged by a great deal of necrotic tissue and debris, a small number of fragmented epithelioid cells, and maily by antiacid bacteria fibrinous hyperplastic stage is featured by a few fibrous tissue, cells and mucous oweing to hardness to get puncture, which neans tubercalous restoration, and scar formation. ConclusionThe application offine needle aspirate cytoiology sapplies an important nethod of early diagnosis findings and trealment.
Keyword： Lymphnode Needle Tuberculosis Typing
结核病是多发病、常见病，最近几年结核的发病逐渐上升，有卷土重来之势。淋巴腺结核在淋巴结肿大疾病中, 仅次于慢性淋巴腺炎, 名列第二位, 在青少年淋巴结肿大疾病中占首位,。可单独存在或合并肺结核，肠结核，本组总结我院两年多来1090例淋巴腺结核针吸细胞学特点及分型诊断研究, 报告如下:
1.材料与方法
1.1本组收集我院门诊、住院以及外院会诊结核性淋巴腺炎1090例, 男360例占33.0% , 女730例占67.0% , 年龄1～78岁, 平均28.3岁。诊断及分型标准, 根据细胞学特征及抗酸染色结果确定。其中细胞阳性率950例占87.2% , 抗酸染色阳性率150例占13.8%，结核抗体阳性符合率65.4%。
1.2常规消毒,选用一次性10毫升塑料注射器,挑选有意义肿大淋巴结,左手固定，右手持针进行多方位穿刺抽吸取材,涂片、干后，进行瑞氏-姬姆萨双重混合染色。对干酪样坏死标本,分别做抗酸染色及革兰氏染色, 对非典型标本涂片同时做结核抗体和结核菌素试验(OT)及腺苷酸脱氨酶(ADA) 测定。显微镜下检查，根据淋巴结核不同时期的细胞学特点及特征性结构，结合抗酸染色和结核抗体的结果做出分型诊断[1、2、3、5]。
2.结果
淋巴结核分型诊断结果及各型的细胞学特征见表1，表2。
3.讨论
3.1我们根据淋巴结核在不同时期，有不同细胞形态特征和病理结构特点， 将淋巴腺结核分五期Ⅴ型：即Ⅰ型：淋巴结核初期―炎性增殖期;Ⅱ型：淋巴结核早期―淋巴结节期; Ⅲ型：淋巴结核中期―结核结节期; Ⅳ型：淋巴结核晚期―干酪样坏死期;Ⅴ型：淋巴结核恢复期―纤维素增殖期[6、7]。
3.1.1Ⅰ型（炎性增殖期）: 此期为疾病早期诊断, 整个淋巴结结构完整，除了以成熟小淋巴细胞增生为主外，伴有原幼淋巴细胞增生但在20%-30%。并见组织细胞、单核细胞、浆细胞增多, 但未见坏死灶，核分裂增多，仔细寻找可查到少数散在的上皮样细胞为早期结核征象。此期诊断与慢性炎症增殖反应、与某些肿瘤早期增生无法区别, 需要做结核抗体或OT试验及腺苷脱氨酶(ADA) 的测定有助诊断，本文有60例，占5.5%。
3.1.2Ⅱ型（淋巴结节期）：在结核炎性增殖期过后，紧接着进入结核中期，该期主要特征：可见到淋巴细胞及组织细胞增生，许多组织细胞与多个淋巴细胞成群成堆混杂在一起，部分组织细胞浆内可见数个淋巴细胞称为“淋巴结节”，为淋巴结核第Ⅱ期特征性诊断细胞。该期有时可见少数上皮样细胞。本文130例，占11.9%。
3.1.3Ⅲ期（结核结节期）：该期淋巴结核继续发展，整个淋巴结有明显改变，突出特点是看到数目较多的上皮样细胞，散在或成堆出现，数十个上皮样细胞与淋巴细胞聚集在一起形成“结核结节”，有的可见典型的朗罕氏细胞。数十个上皮样细胞聚合，有的细胞浆互相融合在一起呈灰蓝色，有时稍带粉红调，核卵圆形，核染色质颗粒状，分布均匀，核仁小，这种典型或不典型朗罕氏细胞统称为“结核结节”，该细胞是诊断淋巴结核的特征性细胞。本文590例，占54.1%。
3.1.4Ⅳ型（干酪样脓样坏死期）：为该病晚期阶段，淋巴结结构破坏，有时可见淋巴细胞残核碎影，仔细查找可见少数退化样潜隐样类上皮细胞。该期主要以抗酸染色可找到大量抗酸菌为其特征。如破溃后伴有感染时，病人可同时伴有红、肿、热、痛四大症状。整个淋巴结除了上述改变外，主要看到较多中性粒细胞，少数组织细胞，异物巨细胞。此时革兰氏染色，可查到革兰氏阳性球菌。本文共280例，占25.7%，抗酸菌阳性率可达98.4%以上，提示抗酸染色是该期主要特征。
3.1.5Ⅴ型（纤维素增殖期）：该期又称为淋巴结核结节硬化期，为淋巴结核的恢复期。并不是以干酪样物分解为主，而是少数的淋巴结病变以硬结过程而告终，淋巴结核经过治愈，结缔组织增殖代替了淋巴组织，所以淋巴结系统除了淋巴组织增生和结核性肉芽组织增生外，尚可见到一束束结缔组织纤维，表示有纤维素改变，整个淋巴结像看不到细胞成分，只有少数粉红色纤维间质及少数纤维细胞、组织细胞。本文有30例, 占2.8%[2、3、6、8]。
结针吸细胞病理学诊断过程中, 应注意下列诸点:
3.2.1淋巴结肿大性状及穿刺液外观有助于淋巴结核的分型诊断：一般淋巴结核的肿大淋巴结多发生在颈部、腋下，少数在腹股沟及其它部位，而且淋巴结体积较小，1-3厘米，但数目较多，活动较好，但也有少数在锁骨上淋巴结，肿块可达10多厘米。因此，不能以肿块的大小、性状、位置作为淋巴结核的诊断依据，只对诊断有参考作用[9、10]。
3.2.2郎罕氏细胞多出现在结核结节期，偶尔可见于干酪样脓样坏死期，但结核其它期很难看见，本文中朗罕氏细胞仅见35.8%，也就是大部分淋巴结核是找不到朗罕氏细胞的，因此，不能以朗罕氏细胞作为诊断淋巴结核的主要依据，并且注意穿刺部位，如甲状腺针吸多为亚急性甲状腺炎重要指标。类上皮样细胞虽对结核诊断价值最大, 但也并非结核特异性诊断细胞，因在霍奇金氏病、亚急性甲状腺炎、结节病和血管炎等某些变态反应的疾病时，也可以看到大小不等的类上皮样细胞出现，遇此情况要注意查找有否R-S细胞及类上皮样细胞数目变化，结节病时可出现大量的类上皮样细胞[1、2、4、6、7]。
3.2.3对于结核溃疡或未破溃淋巴结, 不要切开引流, 对已确诊的淋巴结核不应做病理切片, 或者对临床怀疑的淋巴结核提倡做小针头穿刺细胞学检查，否则会使创面不愈合形成瘘管[11、12、13]。
3.2.4提倡用结核抗体试验代替OT试验：经多年研究结果表明OT试验测定机体T细胞免疫功能指标，该指标受下列因素影响：①机体免疫机能，②有否接种过卡介苗或感染过结核，③合并免疫缺陷疾病，④放疗、化疗、药物治疗等因素。因此，该指标做结核病诊断会诊断错误，引起诱导。目前我院应用结核抗体试验取代，又因结核抗体的种类（IgG、IgM、IgA）不同，而且各生产厂家提供的试剂盒敏感性、特异性不同，都会影响淋巴结核的诊断。因此，我们必须依靠淋巴结针吸细胞学形态特征和突出的结构特点进行诊断，进而达到准确合理的治疗[14、15]。
3.2.5淋巴结核分型诊断中，本文应用一次性塑料注射器代替传统50毫升玻璃大注射器，取材简单快速、创伤小、定位准确、结果准确可靠、经济实用、适合淋巴结核各期各型诊断，从而使诊断准确率提高到98.4%以上，明显高于传统诊断方法，深受欢迎。为淋巴结核的早期发现，早期诊断，积极合理准确的治疗开辟了新的诊断途径和方法[3、14、15]。
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篇7
1.贵阳医学院附属医院，贵州贵阳 550001；2贵州省人民医院，贵州贵阳 550002
[摘要]噬血细胞综合征（HPS）又称噬血细胞性淋巴组织细胞增多症（ HLH ），分为原发性与继发性两大类。其病因、临床表现多样，易造成漏诊及误诊。该文对近年来HPS的病因、诊断方面的进展进行总结。
关键词 嗜血细胞综合征；病因；诊断
[中图分类号]R557；R817.4[文献标识码]A[文章编号]1674-0742（2015）04（a）-0197-02
[作者简介]丁思睿赟（1987.11-），女，贵州贵阳人，硕士，研究方向：血液内科。
[通讯作者]郭鹏翔（1971.1-），男，陕西人，硕士，主任医师，研究方向：血液系统疾病。
噬血细胞综合征（ hemophagocytic syndrome，HPS）又称噬
血细胞性淋巴组织细胞增多症（ hemophagocytic lymphohistiocyto
sis，HLH ）是由多种致病因素导致淋巴细胞、单核细胞和巨噬细胞系统异常激活、增殖，分泌大量炎性细胞因子所引起的严重甚至致命的炎症状态[1]。该病是一组因遗传性或获得性免疫缺陷所引起高炎症综合征。病因复杂，发病机制不完全明确，缺乏特异性实验室指标，临床上易发生漏诊、误诊。故本文对病因及诊断进展进行综述。
1 分类、病因及相关疾病
1.1 原发性噬血细胞综合征（primary hemophagocytic syndrome，pHPS）
该病最早被报道是在1952 年。pHPS又分为两类：①家族性噬血细胞综合征（familiary hemophagocytic syndrome，FHPS）：为常染色体隐性遗传疾病，由多种致病因素导致机体免疫功能紊乱的一组疾病，以至于单核—巨噬细胞系统反应性增生、释放大量细胞因子、浸润重要脏器、导致血细胞减少的疾病[2]；目前已确定与FHPS有关的基因缺陷有3种：PRF1基因、Munc13-4（17q25）基因、突触融合蛋白11（syntaxin 11，STX11）基因。根据致病基因不同，将FHPS分为1～5型。进一步的研究发现FHL-2是编码穿孔素的基因[3]。异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）是FHPS治疗的根本措施[2]。②免疫缺陷相关噬血细胞综合征（immunodeficiency-related hemophagocytic syndrome，iHPS）容易发生HPS的免疫缺陷病，约80%的患者发病年龄小于20岁，因为遗传为X连锁，故70%的患者为男性。
1.2 继发性噬血细胞综合征
获得性噬血细胞综合征，sHPS：与各种原发病相关，感染、自身炎症反应和自身免疫性疾病（MAS）、恶性肿瘤、免疫抑制、HSCT、器官移植、AIDS[4]。
（1）感染：①病毒[3]：EB病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘带状疱疹病毒、麻疹病毒、腺病毒Ⅱ型、流感病毒A、登革热病毒、柯萨奇病毒A9 、风疹病毒、人类免疫缺陷病毒和人类微小病毒B-19。②细菌、真菌和寄生虫：肠道革兰阴性杆菌、嗜血杆菌、肺炎链球菌、葡萄球菌、布鲁菌，分枝杆菌；念珠菌、隐球菌，毛孢子菌；利什曼原虫；其他还有立克次体及支原体感染等均可引起噬血细胞综合征。自身炎症反应和自身免疫性疾病：儿童中最常见于系统性幼年特发性关节炎[4]及其成年发病形式、成人则多见于Still 病（AOSD）、系统性红斑狼疮及其他风湿疾病。③恶性肿瘤：一方面恶性肿瘤可刺激组织细胞增生或通过细胞因子诱发HPS。另一方面恶性肿瘤患者在治疗过程中常常接受免疫抑制治疗（放化疗），导致机体免疫功能破坏，已发生感染诱发HPS。④免疫抑制、HSCT、器官移植、AIDS：获得性免疫缺陷病、免疫抑制等药物的使用导致机体免疫功能低下或受抑，增加了病原微生物的感染风险，诱发噬血细胞综合征。
以前认为，年龄可作为区分原发性HPS与继发性HPS，但伴随对晚发型原发性HPS的认识，以及对发病的青少年及成人基因进行检查后，得出年龄并不能作为完全判断标准。因此对于有高热，肝脾、淋巴结肿大，血细胞减少及肝功能异常等表现的患者应警惕HPS。不仅要从临床症状、实验室检查、影像学等多方面寻找引起HPS原发疾病的病因，还要结合SH2D1A、穿孔素基因是否突变判断原发或继发。小儿发病多因细菌病毒感染所致，成人除感染因素外，还易见于恶性淋巴瘤及自身免疫性疾病等全身疾病。
2 诊断
由于HPS部分临床表现与某些原发疾病（败血症、全身炎症反应综合征等）相似，加之该病缺乏特异性实验室检查指标，会掩盖原发疾病的表现，干扰诊断，导致误诊及漏诊。即使早期诊断、及时给予适当的治疗，仍有较高的死亡率。因此，该病的诊断应从临床表现、实验室、影像学等多方面综合诊断[7]。
2.1 1991年HPS诊断标准
①发热在7 d以上，且体温高峰超过38.5℃；②脾脏增大（超过肋下3 cm） ；③全血细胞减少（外周血2系或3系减少），血红蛋白低于90 g/ L， 血小板低于100 ×109 /L， 中性粒细胞低于1.0×109/L ，还要除外系骨髓造血功能减低或停滞所致；④高甘油三酯血症和/或低纤维蛋白原血症（ 甘油三酯达到210mg/dl或大于同年龄正常值的3个标准差， 纤维蛋白原小于1.5g/L 或小于正常值的3个标准差）；⑤骨髓、脾、淋巴结组织细胞非恶性增生且伴噬血细胞现象。
由于该标准要求必须达到上述所有诊断指标，才能确诊噬血细胞综合征。因此，临床工作中反映出该诊断标准的缺陷及不足。于2004年制定了新的诊断标准。
2.2 2004年HPS诊断标准
该诊断标准将噬血细胞综合征的诊断从细胞形态学提高到分子生物学水平，并且确立了基因筛查的必要性。
发热（为高热且持续时间长）；
脾脏增大；
全血细胞减少（三系或两系减少）：血红蛋白低于90 g/L（4周以内婴儿者，血红蛋白低于100 g/L）），血小板低于100×109/L，中性粒细胞低于1.0×109/L；
高甘油三酯血症和/或低纤维蛋白原血症（甘油三酯≥3.0 mmol/L或纤维蛋白原≤1.5 g/L）；
骨髓检查、脾脏、淋巴结细胞学检查中发现嗜血现象；
自然杀伤细胞活性下降或完全丧失；
高铁蛋白血症（达500 ng/mL以上）；
可溶性CD25（可溶性IL-2受体）达2400 U/mL以上。
此次制定的诊断标准，只需在上述8项指标中达到5项即可诊断噬血细胞综合征。
为更合理，更贴近临床工作中该病的诊断，进一步提高确诊率，降低误诊率，美国血液病学会于2009年制定了目前最新的诊断标准。
2.3 2009年美国血液病学会制定了新的诊断标准[5]
在肯定分子生物学检查明确存在家族性/ 已知遗传缺陷可作为HPS独立诊断依据的同时；在临床诊断指标方面进行了以下调整：
（1）①发热（最常见，发生率几乎为100%）；②脾大；③血细胞减少（外周血至少有二系以上减少）；④有肝炎表现。以上4条指标中至少符合3条。
（2）①骨髓、脾脏或淋巴结细胞学检查中发现噬血现象；②铁蛋白的升高；③sCD25水平升高（与年龄有相关性）；④NK细胞活性减低或缺失。以上4条指标中至少符合1条。
其他可支持HLH诊断的指标：①高甘油三酯血症；②低纤维蛋白原血症；③低钠血症。
在结合上述三个诊断标准可以认为，长期发热尤其是体温高峰在38.5℃以上合并血细胞减少、肝脾肿大为HPS的三联征，对于出现这三联征患者应警惕HPS。再结合其他实验室指标可较快的确定或排除本病。
对不明原因发热、肝脾肿大、血细胞减少的患者需警惕本病可能。该病引起的中枢神经系统损害大多不可逆，且死亡率极高。对疑似病人或已有中枢神经系统受累的患者进行头颅的相关影像学检查也是必不可少的，必要时可行脑脊液检查，及早控制病情以降低因中枢神经系统受累而导致的患者日后的生活质量低下或死亡。
3 结语
HPS 不是一个独立的疾病，是一个病因众多，进展迅速，危及生命的高炎症临床综合征。其临床特征与其他疾病相似，症状、体征缺乏特异性，容易误诊及漏诊。目前针对继发性HPS的尚无标准化治疗方法，对于继发性HPS患者是否需要给予完整的化疗尚有争议。但无论是原发性或继发性HPS，控制感染都是至关重要的。基因筛查是对原发性与继发性的重要鉴别方法。对于长期发热、肝脾肿大、血小板减少的患者，应及时考虑到本病的可能。HPS在临床上虽不少见，但因疾病本身凶险，还可并发感染性休克、多器官功能衰竭、颅内及内脏大出血等危及生命的相关并发症，死亡率较高。作为临床医生对该病需要高度警惕，早期识别诊断，可增加预后，降低死亡率。
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篇8
传统的河道治理一般采取浆砌石或混凝土固岸、裁弯取直、疏挖河道等措施，这些措施虽然在一定时期内保障了河道水系安全，但也伴随着出现了一些生态环境问题：如采用大量的混凝土或浆砌石材料使河道硬化严重，改变了河道的自然属性，侵占了生物栖息地，割裂了水路系统的联系，也减少了对地下水的补充：硬化的护岸使得各种污染物未经过滤吸收直接随径流排入河道，导致水质恶化，河流生态系统严重受损；河道的裁弯取直增大了水流流速，从而加剧了水流对河床底部和河岸的冲刷。可见传统的河道整治措施已经不能满足现代化城镇发展的需要。因此必须寻找新的河道治理理念，在未来的河道整治中，不仅要继承传统整治技术的精髓，更要重视水质的提高，水环境的改善和生态水系统的保护，实现人与自然的和谐统一。
城镇河道综合治理原则
开展河道综合整治是恢复提高河道基本功能的根本措施，是提高水资源承载能力、改善生态环境的有效途径、是打造绿色生态河道的客观需要。在整治过程中，应遵循以下基本原则：
安全性：河道整治的目的不仅仅是为了防洪排涝安全，更重要是为了洪水安全、生态用水安全和水环境的质量安全。水安全体系是构成河道生态系统的基础条件。
生态性：生态性是指河道治理应满足生物的生存需要，保证河道生态的健康发展为基础。河道整治应以生态性为基本原则，尽量保留原有的生物群落及其栖息地，促使水体自然循环与净化，实现河道生态可持续发展。
自燃性：蜿蜒曲折是河道的天然属性，因此在河道整治中，应尽量保持河道的自然地貌特征，维持自然的水文过程，为水体自然流势创造条件。
地域性：不同区域具有不同的特点，这种地域的差异性和特殊性要求人们在进行河道综合整治过程中不能照搬照抄，要因地制宜选择适应的整治措施。如流经城镇居民区的河段在整治过程中宜注重景观功能，满足人们回归、亲近自然的要求，把水利工程和城镇景观结合起来，造当地浓郁的人文气息。
城镇河道综合治理措施
河道整治工程所追求的重要目标就是要协调城镇发展与河道生态保护的关系，同时尽量维护河道原有的自然地貌和水文特征，因此综合整治的措施包括生态护坡、水质修复治理及河道景观三个方面。
1、生态护坡工程
在防洪与生态需求成为河道建设中主要矛盾的背景下，采用生态护坡政治模式可以在满足城镇生态系统要求并创造良好生态条件的同时，使河坡具有一定抗洪防冲能力。因而建设生态护坡工程已经成为国际上公认的解决河道整治问题行之有效的方法。生态护坡技术是基于水土保持学、生态学、水利工程学和生物科学等科学的基本原理，利用植物及植物与工程材料相结合的方法，在边坡上构建具有生态功能的护坡系统，通过生态工程的自支撑、自我组织与自我修复等功能，实现边坡的抗冲蚀、抗滑动和生态恢复，以达到减少水土流失、维持坡面植物生存环境、提高坡面动物和微生物栖息地的质量，营造健康的河流生态系统和改善人居环境等目的。可见，真正意义的生态护坡应该是一个包括植物、动物、微生物的完整的生态系统。然而，目前国内很多生态护坡的建设仅仅考虑的护坡上的植物，而完全忽略了动物及微生物在边坡生态系统中的作用，没有从根本上实现生态护坡生态系统的完整性。所以，借鉴国外生态护坡技术，完善我国生态护坡技术体系，在工程建设中实现真正意义的生态护坡，这将是我国今后生态护坡技术应用研究的重点，当前国内外采用的各种生态护坡技术主要有生物工程技术、土工网符合植被技术、植被型生态混凝土技术、多自然型技术等。
2、水质修复治理工程
水污染治理是一个综合系统工程，其主要措施包括污染水源的拦截，河床的清淤处理、有源活水和污水处理等方面，并辅以必要的植物措施，恢复河流的自净能力。河道污水治理关键要从污染源治理与截污入手，加强截污工程建设力度。同时，必须提倡清洁生产，大力控制污水的排放和处理，在保证一定水质的基础上，采用河流生态技术，进一步提高水质，美化环境。将环境工程中的生物修复救赎应用到水利工程的河道综合整治中，是城镇河流特别是受污染河流整治的重要方向。生物修复技术因具有处理效果好，工程造价相对较低，运行成本低廉，还可以结合景观改善河道及其周边休闲场所的建设等优点，故该技术在实际操作中具有很高的应用价值，其发展前景十分广阔。目前水环境生物修复技术的主要类型有：土壤渗滤技术、人工湿地技术、稳定塘技术、人工浮岛技术等。
3、河道景观工程
河道景观建设是对河道进行生态整治的重要环节，主要内容包括河道水域沿岸带及水域范围内的景观建设，景观建设的目的是通过对河道空间与平面、纵向与横向的综合整治，做到提高城镇水系防洪排涝和供水标准与河道景观相结合，河道清淤与环境保护相结合，河道整治与改善当地的人居环境相结合，最终营造人与自然和谐的水环境。河道景观工程主要包括以下几个方面。
河道平面修复：过去的河道平面设计时，一般采取拓宽断面、裁弯取直、修筑高堤等措施，这些方法在一定时期内解决了洪涝灾害的问题，但却淡化了河流的资源功能和生态功能，破坏了自然河流的生态链，导致生态环境的不断恶化。因此在满足安全行洪断面的条件下，改变过去裁弯取直的办法，随着地形、层次的变化易弯则弯，易窄则窄，宜宽则宽，恢复河流的纵向连接性和横向连通性；同时尽可能多安排一些蓄水湖地，这种“带囊状”的结构不仅有益于防洪，且对景观和生态系统都具有重大意义。
河道断面恢复：任何与生态过程相协调，尽量使其对环境的破坏影响达到最小的设计形式都称为生态设计。河道的断面恢复要综合考虑河道的防洪排水及生态景观的功能，不断优化断面设计，最终达到良好的生态河道体系。河道系统中一片草地、一块林地、一座山丘、一个岛屿都可能是一个自然生态系统。在恢复中应采取多种工程和管理措施，维持河道断面的自燃性状。目前国内外典型的河道断面形式主要有：矩形断面、梯形断面、复式断面和双层断面。
生态河堤工程：生态河堤建设是目前国际上河流治理与建设的新趋势。生态河堤是融现代水利工程学、环境科学、生物科学、生态学、美学等学科于一体的水利工程。它以“保护、创造生物良好的生存环境和自然景观”为前提，在考虑具有一定强度、安全性和耐久性的同时，充分考虑生态效果，把河堤改造成水体和土体、水体和生物相互涵养，适合生物生长的仿自然状态。生态河堤不仅可发挥涵水保土的作用，而且能改善大气、水体和土壤质量，进而将大大改善生态环境和人们的生活质量。沿岸景点的建设将增加周边环境的文化氛围，实现良好的社会效益和生态效益，这对城镇生态建设、拓展城镇发展空间等方面具有重大意义。
滨岸植被缓冲带工程：国内外研究实践表明，滨岸缓冲带是截留陆域面源污染物、改善河道水质的有效手段。作为河陆生态系统的连接地带，缓冲带对保持河道的生态性具有重要意义，主要体现在以下四方面：①对地表径流可以起到滞缓作用，调节入河（水体）的洪峰面；②降低地表径流速度并对其中的颗粒态污染物起过滤和拦截作用；③植物吸收、土壤吸附溶解态的污染物；④促进氮的反硝化作用。城镇是人口大量集中和工业化规模庞大的地方势必会产生许多生活和工业垃圾，如得不到及时有效处理，将会随雨水直接进入地表或地下水，形成新的非点源污染，导致水环境恶化。滨岸植被缓冲带的建立，不仅可以吸收径流中的有机成分，减少进入水体中污染物的含量，而且对于营造滨岸景观、改善生态环境和保持水土流失具有重要意义。
结语
随着城镇水利向环境水利和生态水利转化，在城镇河道整治中，必须考虑河道生态环境的建设，这不仅是人们随生活水平提高对自身生存环境质量提出的要求，也是系农村建设的重要内容；河道的整治与建设包括生态护坡工程、水环境治理工程及河道景观工程等内容，应根据区域的实际情况，统筹规划，综合治理；城镇河道建设不仅要发水利工程的功效，而且还要融入城镇园林景观、生态和建筑艺术等诸多内容，以充分发挥河流的综合功能尤其是生态环境功能，真正做到让河流回归自然。
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篇9
方法：对80例胆囊息肉患者临床资料进行回顾性分析。
结果：80例胆囊息肉患者占同期行胆囊切除术病例的5%，术前B超诊断率为90%，其中合并胆囊结石率30%，合并胆囊炎45%；病理类型以胆固醇肉最多，占45%。腺瘤恶变率为15.6%。
结论：腺瘤肉易恶变，尤其是合并胆囊结石的息肉，诊断检查首选B超。治疗首选胆囊切除术。
关键词：胆囊息肉诊断治疗
【中图分类号】R4【文献标识码】B【文章编号】1671-8801（2013）04-0129-01
胆囊息肉（polypoid lesion of gallbladder，PLG）是一类表现为胆囊黏膜向腔内突起的局限性病变的总称。我院从2003年1月-2012年12月共手术治疗胆囊息肉患者80例，现报道如下。
1临床资料
1.1一般资料。本组PLG患者80例，占同期胆囊切除的5%（80/1600），其中男性32例，女性48例，年龄18-74岁，平均56.5岁。术前行B超检出72例，占90%，8例患者术前诊断为胆囊结石，于手术时发现合并PLG。
1.2临床表现。57例患者术前有右上腹疼痛不适，其中有胆绞痛发作9例，23例无明显临床症状而于术前健康体检时发现。全部病例术前均进行B超检查，其中65例胆囊壁上有中回声至中强回声光团，后无声影，不光滑，7例胆囊壁上见多个小点状强回声，8例术前仅有结石影像，未见胆囊息肉。
1.3术中情况及病理结果：胆囊息肉直径在2-18mm。病理类型：胆固醇肉36例，占45%，腺瘤肉28例，占35%，炎肉12例，占15%，腺肌增生症4例，占5%，腺瘤恶变4例，占5%。腺瘤恶变占腺瘤肉的14.3%（4/28），腺瘤恶变直径>10mm，占75%（3/4），良肉
2讨论
2.1PLG的诊断：据报道[1]PLG占同期行胆囊切除术病例的9.9%，本组为5%。PLG无特殊临床表现，早期多无症状，或表现为上腹部隐痛、不适、消化不良等，少数有胆绞痛，因此诊断主要依靠影像学诊断，以B型超声为首选。有报道[2]B型超声的检出率为93.2%，特异性为94.8%，假阳性率为5.2%，准确率明显高于上腹部CT。本组检出率为90%（72/80）。B型超声检查简便易行、诊断率高且属无创检查，PLG表现为胆囊壁上小的、圆的、强回声光团，位置固定并且突向胆囊腔内，由于其位置固定，不发生移动，无声影，其后方可见混响伪影[3]。B型超声检查能清晰显示PLG的部位、大小、数目，是否有蒂，是否合并胆囊结石、胆囊炎。
2.2PLG病理类型、分类及其特点：PLG的表现形式相同却包含很多病理类型。病理分类可分为非肿瘤性与肿瘤性两大类病变，后者又分为良性与恶性。非肿瘤性PLG分为胆固醇肉（CPS）、炎肉及腺肌增生症等。肿瘤性病变中良性以腺瘤为主，恶性主要为胆囊癌（腺瘤恶变）。据报道[4]150例PLG患者中胆固醇息肉占69.9%。本组胆固醇肉最多，其次为腺瘤肉。胆固醇肉的发生主要与胆固醇代谢有关，胆固醇代谢异常，泡沫细胞将其吞噬后聚集而成。胆固醇息肉病理特点为多发小息肉，Li等[5]报道342例PLG中胆固醇息肉占68.4%，直径3个占50.9%。肿瘤肉往往为单个病变。胆固醇肉质脆蒂细，且易与黏膜分离，不伴肠化生及不典型增生，也不含其他基质成分。即使伴炎症也很轻，目前尚未见癌变报道。炎肉为炎症刺激所致的肉芽肿，直径多在5mm左右，为单发或多发广基性结节，其成分为毛细血管、成纤维细胞及慢性炎症细胞，息肉周围胆囊壁有明显炎症，也无癌变报道。腺肌增生症又称腺肌瘤，有弥漫型、节段型与局限型，有恶变可能。肿瘤肉外形可呈状或非状，恶变机会与腺瘤大小呈正比。本组腺瘤恶变占腺瘤肉的14.3%（4/28）。本组病例中腺瘤恶变者直径>10mm占75%（3/4）。
2.3PLG的治疗：鉴于PLG可以发生癌变，故越来越多的PLG采用胆囊切除术，但手术本身可有一定风险，并可能引起一些并发症。PLG是否行手术治疗，目前国内外尚无统一标准。国内多数作者认为[1]：单发息肉，直径>10mm，并存胆囊胆石，即使无症状亦应行胆囊切除术。理论上讲，不是所有的PLG均需手术治疗，特别是一些无症状的无癌变倾向的胆固醇肉或炎肉，但就目前诊断水平而言，术前无法对PLG进行病理诊断，且临床仍有一些PLG合并有胆囊结石、胆囊炎，需要手术。胆囊息肉样病变外科处理上虽然存在不少争议，但总体来说[6]：胆囊息肉直径>10mm，年龄>50岁，单发，广基以及合并胆囊结石，已被绝大多数学者认为是PLG恶变的危险因素。可据这些危险因素来选取适宜手术的患者。对于直径
参考文献
[1]祥，王景明，徐贵云.胆囊息肉样病变113例临床病理分析[J].肝胆外科杂志，2001，9（3）：207-208
[2]刘民生，刘会周，陆文煜.胆囊息肉样病变207例的治疗[J].中华普通外科杂志，2000，15（6）：376-376
[3]王志斌，房世宝主译.腹部超声诊断[M].北京：人民卫生出版社，2003.45-67
[4]田大广，朱洪，吴发友，等.150例胆囊息肉的临床分析.中国普通外科杂志，2003，12（8）：629-630
篇10
关键词猪痢疾;附红细胞体;混合感染;发病情况;剖检变化;治疗措施
猪痢疾是由猪密螺旋体引起的一种特有的肠道传染病，临床以消瘦、腹泻或粘液性出血性下痢为特征[1]。该病发病率高、发病快、死亡率高。附红细胞体病是由血液寄生虫引起的一种以贫血、黄疸和发热为主要症状的人畜共患病，病程为10～30 d以上，死亡率高。这2种病单独发病时治疗不难，一旦混合感染后，会给诊断和治疗带来很大困难，并且高死亡率和高淘汰率会给养猪业带来惨重的损失。
1发病情况
宁阳县蒋集镇自2006年6月至今，在小胡村、大槐村、吕庄村、彩石等村饲养架子猪育肥密集区域，一些中小型养猪场饲养的猪只普遍发病。一般猪只引进后4～20 d发病，病初采食量迅速下降或废绝，体温可达41～42 ℃，部分病猪迅速消瘦，呼吸困难，排软粪或稀便，随即变为水泻，粪便为油脂样或胶冻状，呈棕色、红色或黑色，随病程发展粪便中混有黏膜或纤维素渗出物的碎片，味腥臭。从鼻部、耳朵到全身皮肤发红或出现红斑，后期发紫。病程达7 d以上死亡率猛增，如治疗不当，死亡率可达90%以上。多数经2～5 d治疗无效后到笔者处就诊，其间共收治56起病例，患病猪只达1 860头。
2临床症状
不同猪群发病后症状表现不同，多数呈急性经过，1～3 d波及全群，多数病例厌食，剧烈下痢或便秘。粪中含粘液、血液或血块，急性死亡者全身发紫或无明显变化。病猪精神沉郁，呈高度脱水状态，排便失禁，弓腰、腹痛，耳尖、腹下、四肢末端发紫，耳边缘变干并向上卷起，个别猪只出现呼吸急促，呈腹式呼吸、干咳，眼结膜发炎，尿液呈咖啡色或深黄色。慢性猪胸腹部、会阴有出血点，行走摇摆，用后肢踢腹，被毛粗乱无光，迅速消瘦，后期排粪失禁，周围及尾根部被粪便沾污，起立无力，极度衰弱死亡[2]。
3剖检变化
体表可见耳、鼻及四肢末端、胸部、腹部有针状出血点和紫斑，血液凝固不良。颌下、肺门、肠系膜、腹股沟淋巴结高度肿大，不同程度出血，咽喉部有绿豆大小的出血性溃疡灶[3]。气管内充满泡沫样粘液，肺部大面积瘀血或有点状出血，心肌变性如开水烫过。胃溃疡或胃底部潮红，胃底幽门红肿或出血。急性死亡的猪营养良好，可见卡他性或出血性肠炎。结肠及盲肠黏膜肿胀、出血，肠内容物稀薄，其中混有粘液、血液，呈酱油色或咖啡色。直肠黏膜增厚，严重的见有出血点。病变主要集中在盲肠和结肠，肠壁和肠系膜充血、水肿，有的出现粘液性出血性炎症，表层黏膜坏死，形成灰色或黄色粘液纤维蛋白伪膜，呈麸皮样，剥去伪膜可见潜在的糜烂面。肝脏瘀血、肿大、质脆，有的重达5 kg，表面有区域性坏死灶，胆囊充盈，胆汁似米汤状，胆囊黏膜出血。有的肾肿大，包膜易剥离，有弥散性小出血点，膀胱内膜充血、出血。
4诊断
肠黏膜及粪便检查取病猪新鲜粪便或大肠黏膜涂片，用姬姆萨、草酸铵结晶紫或复红染色液染色、镜检，高倍镜下每个视野可见3个以上具有3～4个弯曲的较大螺旋体，即可怀疑有猪血痢的存在。血液检查:病猪血液呈水样，不黏附试管壁，将收集在抗凝剂试管中的血液冷却后倒出来，可见试管壁有粒状微血，当血液加热到38 ℃时，这种现象几乎消失。取静脉血(或抗凝血)滴于载玻片上，加等量盐水混匀，加盖玻片，在400～600倍暗视野显微镜下观察，可见虫体呈球形、逗点形、杆状或颗粒状。血液涂片检查，取耳静脉血(或抗凝血)涂片，姬姆萨染色镜检，可见红细胞表面有许多圆形、椭圆形、杆状紫红色虫体;当调动微螺旋时，虫体折光性较强，中央发亮，形似气泡，细胞边缘不光滑，凹凸不平，瑞氏染色镜检虫体呈紫蓝色。根据流行病学、临床症状、剖检变化和实验室检查可诊断为猪痢疾与附红细胞体混合感染。
5治疗措施
病猪肌肉注射痢菌净针5 mg/kg体重(潍坊六旺生产)，每天2次，连用5 d;强力附红消(盐酸多西环素，齐鲁动保生产)肌注0.1 mL/kg体重，每天1次，连用4 d。待猪群采食后，饲料中加入氟苯尼考200 g/t、痢菌净100 g/t、强力霉素200 g/t，连用1周。病猪及时淘汰，另外治疗过程中应注意对症治疗，补充维生素C、维生素K3[4]。心脏衰弱者注射强心剂(安钠咖等)。采用上述方法治疗，一般第3天病情即有好转，食欲开始增加。持续用药5 d后，大群基本可恢复，治愈率可达85%。
6典型病例简介
宁阳县蒋集镇一育肥猪场于2007年10月21日外调架子猪160头，入场当日肌注猪瘟苗5头份，猪瘟、猪丹毒、猪肺疫三联苗2头份，7 d内猪群未发现异常，8 d后猪只陆续发病，1周内波及全群。病初采食迅速减少，皮肤发红，特别是腹下、耳后;体温升高至40～42 ℃，眼结膜潮红、发绀;尿液深黄或咖啡色，排酱油色或深黄色稀便。随病程发展，猪群食欲废绝，病重者全身发紫，开始死亡。到笔者处就诊时已死亡12头，剖检病死猪可见全身浅表淋巴结肿大，肠系膜淋巴结及肺门淋巴结重度出血。心脏似水煮，心包积液，胃出血、溃疡或穿孔。盲肠、结肠呈出血性、纤维素性或坏死性病变。肠内容物混有血液，肝脏肿大，胆囊多数充盈，胆汁呈米汤样、酱油色。膀胱黏膜呈弥漫性出血。经用强力附红消配合痢菌净针、维生素K3、澳克林(森澳达生产)肌注，3 d后猪群采食逐渐恢复，同时在饲料中加入痢菌净粉100 g/t、强力霉素200 g/t，连用7 d。治愈140头，死亡3头，淘汰5头。
7参考文献
[1] 李文超.猪痢疾的诊断与综合防治[J].畜牧与饲料科学，2009(7):143-147.
[2] 杨传政，冯国强.猪痢疾与附红细胞体混合感染的病例诊治[J].现代农业科技，2008(17):276，279.
