异型淋巴细胞十篇

异型淋巴细胞篇1

【关键词】　儿童疾病；　感染；　病因；　异型淋巴；　形态学

异型淋巴细胞又称病毒细胞、非典型淋巴细胞、传染性单核细胞、刺激性淋巴细胞等[1]。形态分为三型，Ⅰ型为泡沫型，Ⅱ型为单核细胞型，Ⅲ型为幼稚型。近年来，随着血液分析仪的普及，血常规的检查质量都在下降。一方面缘于五分类分析仪生产厂家盲目宣传其对血液细胞辨认的可靠性，使医院检验科放松了对血液细胞形态学镜检的质量控制，甚至有的医院放弃了血液细胞涂片染色镜检的步骤。临床实践表明，即使目前最先进的血液分析仪对血液细胞形态的辨认都是不够准确的，不能满足临床医学的要求。分析仪不能将有核红细胞、少量的原始细胞、异型淋巴细胞、淋巴瘤细胞与单核细胞或淋巴细胞区别开来[2]。本文对笔者所在医院197例经血涂片证实的异型淋巴细胞≥0.05的儿童患者临床资料、异型淋巴细胞的形态类型进行回顾性分析，用以了解患儿异型淋巴细胞增高的临床价值，增强检验人员的认知性和责任性，提高复检率，尽可能减少漏检率、误检率，为临床迅速明确儿童感染性疾病的病因，或者为进一步检查做出正确选择及为临床及早合理治疗提供依据。现报告结果如下。

1　资料与方法

1.1　一般资料　选择笔者所在医院2009-2011年住院和门诊初诊患儿197例，男103例，女94例，年龄2个月~12岁，以1~5岁者居多，计123例，占62.44%，其他年龄段74例，占37.56%。患儿均有不同程度的发热、哭闹、全身不适，部分患儿有黄疸、腹泻、咽痛、皮肤斑丘疹、浅表淋巴结肿大等表现。

1.2　方法　常规消毒采集无名指指尖血液，涂片1~3张，干后进行瑞氏染色，步骤按《全国临床检验操作规程》进行。

1.3　异型淋巴细胞检查　采用奥林巴斯双目显微镜油镜观察。

1.4　异型淋巴细胞的辨认及形态分型依据　按文献[3]进行。综合详细病史、症状、体征及相关检查，分析病因得出诊断。

2　结果

通过对197例患儿的外周血异型淋巴细胞的检查，结果异型淋巴细胞增高除了传染性单核细胞增多症外，还存有其他病毒单一及混合感染。异型淋巴细胞形态多样，以Ⅰ型(泡沫型)、Ⅱ型(单核细胞型)为主，Ⅲ型(幼稚型)次之，个别可见两种形态的异型淋巴细胞。见表1、表2和表3。

表1　患儿异型淋巴细胞增高的病因分布

表2　197例患儿异型淋巴细胞增高混合感染的病因分布

3　讨论

从表1中看出，异型淋巴细胞增多除了传染性单核细胞增多症以外，还可见于病毒性肺炎、病毒性肝炎、流行性腮腺炎、流行性感冒、巨细胞病毒、风疹等病毒性疾病。从表2中可以看出，异型淋巴细胞增多还见于几种病毒合并感染及病毒合并支原体、结核杆菌等感染。过去通常认为出现大量的异型淋巴细胞，是EB病毒感染所致 “传单”的特征性实验室依据。现代实验观察与临床发现，诸多种其他病原性病毒感染也会引起细胞免疫的敏感应答反应，血液中出现大量的反应性变异T淋巴细胞增多所致，故异型淋巴细胞并非传染性单核细胞增多症所特有[4]。本组资料结果显示，患儿异型淋巴细胞增多的主要病因是病毒性肺炎、流行性感冒、流行性腮腺炎，分别占17.77%、17.26%、12.18%。两种以上的感染主要是病毒感染合并细菌感染，占8.12%。此外，病毒性肺炎合并支原体感染占1.02%，病毒性肝炎合并结核杆菌感染占0.51%，巨细胞病毒合并风疹病毒及疱疹病毒感染占0.51%，可见儿童感染性疾病的病因复杂，比例不高的混合感染也不容忽视。涂片检查异型淋巴细胞有助于患儿明确感染病因，提高临床诊断水平。

本文197例患儿的血涂片镜检，检出Ⅰ型异型淋巴细胞占57.87%，Ⅱ型异型淋巴细胞占26.39%， Ⅲ型异型淋巴细胞占15.23%，Ⅰ型、Ⅱ型异型淋巴细胞同时检出的少见。Ⅰ型、Ⅱ型检出率最高，与文献[5]报告基本一致。Ⅲ型异型淋巴细胞核/质比例高，有核仁，染色质疏松，胞质嗜碱性，应与急性白血病的原、幼稚淋巴细胞相区别，后者有核仁，核染色质细致，胞质少，淡蓝色，透明，核周界明显。形态学的鉴别要求工作人员具有严谨的工作作风和一定的识别能力，阅片时特别要注意观察片尾及片边的区域，同时要求血片制作要厚薄适中，着色均匀清楚，忌用其他快速染色液。笔者认为，应重视涂片镜检异型淋巴细胞，提高复检率，可以弥补全自动血液分析仪的局限性，尽可能降低儿童病毒性感染疾病的漏诊率及误诊率。

参考文献

[1] 王凤计，曲垣瑞.血液病治疗学[M].天津：天津科学技术出版社，1997：48.

[2] 张国平，冯莉娟.简明实验血液学[M].湖南：中南大学出版社，2006：1.

[3] 王淑娟，王建中，吴振茹.现代血液学图谱[M].北京：人民卫生出版社，2001：130.

[4] 连利娟.林巧稚妇科肿瘤学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，1994：224.

异型淋巴细胞篇2

【关键词】 T淋巴细胞亚群；全身麻醉；依托咪酯；二异丙酚

【Abstract】 Objective To compare the different changes between T-lymphocyte and immune factors in severe traumatic patients after induction.Methods Twenty severe traumatic patients undergoing emergency surgery were pided into two groups according to different general anesthetics received：Group P receiving propofol and Group E receiving etomidate.The plasma level of CD3+，CD4+，CD4+/CD8+ were detected and compared between the two groups at the time point of：before induction (T0)，5 min after induction (T1)，the end of surgery (T2)，1 day after surgery (T3) and 3 day after surgery (T4).Results The level of CD3+，CD4+，CD4+/CD8+ were significantly decreased at the end of surgery.At the same time point， the level of the T-lymphocyte subsets were of no difference between the two groups.Conclusion At the induction dosage， the effects of propofol and etomidate on the T-lymphocyte subsets of severe traumatic patients had no significant difference.

【Key words】 T-lymphocyte subsets；general anaesthesia；etomidate；propofol

创伤后机体产生的应激反应及免疫功能的变化是机体的一种保护性反应，但是如果这一过程过于激烈或调节失衡就会造成机体抵御感染的免疫功能降低。对于创伤患者麻醉和手术其应激反应也可通过直接或间接的方式影响机体的免疫功能［1］。因此对重型创伤患者的麻醉除考虑维持患者重要脏器的血流灌注外，还应注意对其免疫功能的保护。临床研究表明，异丙酚是一种相对免疫安全的静脉麻醉药［2］，但诱导剂量的异丙酚对心血管有明显的抑制作用，而依托咪酯对循环功能的影响比异丙酚轻，但其对免疫功能的影响很少论及。本课题拟就两种全麻诱导药异丙酚及宜妥利对重型创伤患者围手术期T淋巴细胞亚群的影响进行比较，探讨两种全麻诱导药对重型创伤患者免疫功能的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 急诊创伤患者20例，男17例，女3例，年龄17～56岁。对患者呼吸频率，呼吸幅度，收缩期血压，毛细血管再充盈，Glasgow的昏迷程度五方面进行评分（创伤评分：TS评分法），总分1～16分，TS≤12分为重型创伤。本文选择的急诊创伤患者TS≤12，均须急诊行手术探查。手术种类包括：脾外伤脾切除术，肝破裂清创修补术，肝部分切除术，胰腺修补术，肠破裂修补术。患者按全麻诱导用药不同随机分两组，异丙酚组（P组）和宜妥利组（E组），每组10例。患者在麻醉诱导前均肌注派替啶50mg、东莨菪碱0.3mg。

1.2 麻醉方法 全麻诱导时依次静注咪唑安定0.04mg/kg、芬太尼5ug/kg、维库溴铵0.1 mg/kg、异丙酚0.5～1mg/kg或 宜妥利0.2mg/kg。气管插管成功后接Ohmeda 210麻醉机行控制呼吸。麻醉维持吸入N2O∶O2=1∶1和异氟醚，及间断给予维库溴铵、芬太尼，并维持SpO2 在97%～99%及呼气末二氧化碳(PETCO2)在30～40mmHg。

1.3 监测项目 所有患者均采用BP-508监测心电图、血压。经桡动脉穿刺行动脉血压监测，右颈内静脉穿刺。分别于诱导前（T0）、诱导后5min(T1)、术毕(T2)、术后1天(T3)和术后3天(T4)，从颈内静脉采血，用流式细胞仪(FACS Caliber，B-D公司)直接免疫标记测定CD3+ T淋巴细胞及亚群(CD4+、CD8+)。

1.4 统计学方法 计量数据以均数±标准差（x±s）表示，计数资料采用χ2检验，组内比较行配对t检验，组间比较采用团体t检验。P

2 结果

两组患者在性别构成、年龄、身高、体重、创伤评分（TS）、麻醉前血流动力学参数、手术时间、及术中失血量及输血情况等方面差异无显著性（P＞0.05），见表1。

表1 两组患者麻醉前的基本情况 （x±s）

异丙酚组患者在诱导后血压有一过性的下降，至诱导后5min降至最低，其后能自行回复；宜妥利组血压无显著性降低。两组的心率在静注后均无显著性变化，见表2。

表2 两组患者麻醉诱导后的BP(mmHg)、HR(次/min)比较 （x±s）

注：与T0相比，*P

T淋巴细胞及其亚群的变化见表3，组间比较各时间点检测值均无显著性差异。异丙酚组和宜妥利组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+术毕与诱导前相比下降明显，术后1天CD3+开始回升恢复正常，CD4+、CD4+/CD8+术后1天、术后3天逐渐上升，但均未恢复正常。

表3 两组T淋巴细胞及其亚群的改变 （x±s）

注：与诱导前相比，*P

3 讨论

机体免疫系统有识别自己和排斥异己的能力，而这种能力的实现是通过免疫应答来完成。机体的细胞免疫主要是T淋巴细胞，T淋巴细胞是参与免疫应答的核心细胞之一，用单克隆抗体法分类可将其分为不同功能的亚群［3］。其中CD3+是代表总T细胞，CD4+代表T细胞辅助诱导亚群，能促进其他T细胞亚群成熟与B细胞产生抗体，CD8+代表T抑制细胞毒亚群，能抑制T细胞和B细胞的功能并对靶细胞有杀伤作用。CD3+、CD4+、CD8+是细胞免疫枢纽， CD4+/CD8+ 为免疫调节的一项指标，两类细胞相互作用能调节机体的免疫平衡［3～5］。

创伤后机体交感、肾上腺髓质系统，下丘脑－垂体系统和肾素－血管紧张素－醛固酮系统均受到激活，三者通过机体、神经内分泌系统的激发作用，可诱发T细胞亚群发生显著变化［6］。麻醉后创伤病人的免疫变化取决于两方面的因素：一是创伤后机体自身应激机制所引起的免疫功能变化；二是麻醉后创伤病人对全麻状态适应所致的免疫功能变化。麻醉药作为一种抗原作用于机体也会产生免疫应答反应。本组试验选择重型创伤病人对不同全麻诱导药的免疫功能影响表明，在相同严重程度的创伤病人中应用异丙酚和宜妥利全麻诱导均出现术毕CD4+细胞减少，CD8+下降不明显，因而CD4+/CD8+下降。CD4+/CD8+降低是疾病严重程度及预后不良的重要指标［7，8］。本试验说明用异丙酚和宜妥利诱导对重型创伤的手术病人细胞免疫功能影响程度相似，另一方面也提示麻醉后创伤病人的免疫应答是以手术创伤引起的应激反应为主。

异丙酚是一种相对免疫安全的静脉麻醉药，具有多方面的免疫保护功能，能有效抑制中性粒细胞参与炎性反应的多个环节，具有抵抗机体过度炎性反应的效应［1］。而重型创伤患者多伴有严重的失血性休克或内毒素性休克，因此选择异丙酚的诱导可提供一定程度的保护作用，有利于重型创伤患者争取手术时机和术后及早恢复。本文中10例重型创伤患者选用异丙酚全麻诱导剂量为0.5～1mg/kg。这是因为：（1）异丙酚的综合性免疫保护作用虽然在一定范围内具有剂量依赖性，但对循环不稳定的重型创伤患者而言，剂量的增加将加重扰乱循环的稳定性，引发新的引起免疫调节失衡的因素；（2）异丙酚的保护作用一方面来自药物本身的直接效应，另一方面来自于异丙酚麻醉后机体内分泌环境重新调整后的整体保护效应。对重型创伤患者而言，异丙酚剂量加大至常人应用剂量可引起血液中药物浓度过高，导致患者过深的麻醉，反而不利于患者的整体免疫功能的平衡。

宜妥利的突出优点在于它对心血管影响轻微，能维持血流动力学的稳定，适用休克或循环功能不稳定的创伤患者。虽有单次静注后抑制肾上腺皮质功能的报道，但这种抑制作用的时间短，不完全，临床意义尚存争论［9］。本文研究表明，在宜妥利剂量为0.2mg/kg时，其对重型创伤患者的免疫功能影响与异丙酚相似。这一结果一方面是由于宜妥利在此剂量下对循环功能扰乱小，另一方面与其一定程度的皮质抑制功能有关。因此，宜妥利对重型创伤患者免疫功能的整体效应还是有一定程度的保护作用。

总之对重型创伤患者而言，异丙酚和宜妥利在全麻诱导时如能保证机体循环不再发生严重的波动，二者对机体的整体免疫因子的影响是相似的。这也从另一方面表明麻醉后免疫功能的变化，药物本身作用是一个因素，麻醉后机体整体功能调节是另一个因素。药物本身与麻醉深度地相互作用结果是机体免疫功能的整体效应。

由于重型创伤患者手术救治过程中涉及的环节多，术中伤及的重要脏器和手术方式乃至术后的治疗方案均能影响患者的免疫功能，因此，本文主要测定全麻诱导静脉药物对患者免疫功能的影响。对重型创伤患者而言，异丙酚和宜妥利在诱导剂量范围内，对机体的免疫功能影响无明显差异。两者的选用主要应依据患者的具体情况而言。

【参考文献】

1 庄心良，曾因明，陈伯銮.现代麻醉学，第3版.北京：人民卫生出版社，2003，230-233.

2 王爱国，李冬，张宏.静脉麻醉药物对青年和老年人淋巴细胞转换功能的影响.中华麻醉学杂志，2001，6：342-344.

3 金伯泉.细胞和分子免疫学.西安：世界图书出版公司，1995，95-172，259-289.

4 Hori Y，Ibuki T，Hosokawa T，et al.The effect of neurosurgical stress on peripheral lymphocyte subpopulations.J Clin Anesth，2003，15：1-8.

5 李玉兰，周丕均，李春林，等.普鲁卡因静脉复合与硬膜外麻醉对上腹部手术病人T淋巴细胞亚群的影响.临床麻醉学杂志，1997，13：310-311.

6 赵武术，陈仁，卞志强.现代临床免疫学.北京：人民军医出版社，1999，649-660.

7 岳红文，胡小琴，龙村，等.体外循环手术前后病人IL-2水平和T淋巴细胞亚群，NK细胞的变化及临床意义.中华麻醉学杂志，1997，17(1)：7-9.

异型淋巴细胞篇3

关键词:慢性淋巴细胞白血病;临床表现;实验室检查;特点

慢性淋巴细胞白血病是一种异质性较大的成熟B淋巴细胞肿瘤，临床主要表现为脾脏淋巴结肿大，外周血中存在表达CD5+的淋巴细胞［1］。慢性淋巴细胞白血病在西方人群中具有较高的发病率，而亚洲人群的慢性淋巴细胞白血病发病率显著低于西方白种人群，表明慢性淋巴细胞白血病的发病存在一定的种族差异［2］。临床研究表明，西方国家和亚洲国家的慢性淋巴细胞白血病患者在分子遗传学特征方面也存在一定的差异，表明亚洲慢性淋巴细胞白血病患者的分子遗传学和临床特点具有一定的独特性［3］。本研究对我院2010－01—2015－01间收治的37例慢性淋巴细胞白血病患者的临床资料进行回顾性分析，探讨了慢性淋巴细胞白血病患者的临床特点和实验室检查特点，现报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料选择我院2010－01—2015－01间收治的37例慢性淋巴细胞白血病患者，男21例，女16例，年龄42～84岁(中位年龄64岁);临床诊断标准为［4］:(1)外周血B淋巴细胞绝对值5×109/L，并超过3个月;(2)形态主要为近似成熟的小淋巴细胞，外周血淋巴细胞中幼稚淋巴细胞小于10%;(3)流式细胞术检查发现克隆性B细胞，同时满足慢性淋巴细胞白血病的典型满意表型特点;(4)排除其他容易误诊为慢性淋巴细胞白血病的慢性淋巴增殖性疾病等以白血病样表现小B细胞肿瘤。全部37例慢性淋巴细胞白血病患者根据Binet分期为:I期21例，II期12例，III期4例。1.2方法使用仪器主要包括美国贝克曼库尔特有限公司生产的流式细胞仪、奥林巴斯BX53显微镜。对全部患者初诊时的临床表现进行回顾性分析，包括患者初诊时是否存在发热、肝脾大以及浅表淋巴结肿大等。通过骨髓涂片染色镜检、血细胞分析仪、R显带技术、流式细胞术等对患者进行实验室检查，具体的实验室检查包括骨髓形态学、血细胞分析、免疫表型、染色体核型改变等，总结分析以上实验室检查结果，并对慢性淋巴细胞白血病患者的实验室特点进行分析。

2结果

2.1慢性淋巴细胞白血病患者的临床特征患者初诊时肝脾或者脾大9例(24.3%)，乏力11例(29.7%)。见表1。2.2血细胞分析全部37例患者中，淋巴细胞比例大于50%，白细胞数＞10×109/L，绝对值＞5×109/L的患者有33例(89.2%)，镜下白细胞分类发现全部为近似成熟的小淋巴细胞。1例患者在出诊时发现血红蛋白表现为进行性降低，Coombs检查发现，患者出现自身免疫性溶血性贫血。4例患者初诊时虽然白细胞没有满足上述标准，但是对患者进行随访发现，B淋巴细胞表现为进行性上升，在病情不断发展的过程中出现一定程度的血小板减少或(和)贫血，白血病细胞类似为成熟小淋巴细胞。2.3细胞免疫表型特点和FISH检测染色体结果分析利用三色流式细胞仪对患者进行免疫表型检测，对22例患者进行染色体检测发现，6例患者出现异常。见表2。

3讨论

异型淋巴细胞篇4

[关键词]淋巴系统疾病; 活组织检查; 针吸; 诊断; 鉴别

[中图分类号]R551.2[文献标识码]A [文章编号] 1005-0515(2010)-8-040-01

针吸细胞学检查是一种安全、快速、微创的病理学诊断技术,现结合我院及歙县医院2004～2009年120例针吸细胞学结果进行分析,其中85例在同部位取淋巴结活检作病理组织学诊断,对比针吸细胞学与组织病理学诊断的结果,探讨颈部淋巴结针吸细胞学诊断准确率及误诊原因。

1材料与方法

1.1材料所选120例我院与歙县人民医院病理科2004～2009年12月接收的针吸细胞学的合格标本。其中男性68例,女性52例,年龄10～75岁,85例随后进行淋巴结原部位活检。

1.2 方法10 ml注射器(7号针头),具体操作步骤:局部消毒后,左手固定肿块,用右手将针头刺入肿块,在肿物内不同方向进退2～3次,然后降低负压,迅速拔出针头,压迫止血,将组织于载玻片上涂片、固定,HE染色。

2结果

2.1 细胞学检查结果120例颈部淋巴结针吸细胞学检查中,炎性疾病82例,淋巴结肿瘤38例。炎性疾病包括反应性增生48例,特异性炎34例,其中结核23例,结节病9例,Kikuchi病2例。淋巴结肿瘤包括原发性肿瘤16例,继发性肿瘤22例。

2.2细胞学形态淋巴结反应性增生:可见各期增生的淋巴细胞,急性炎时可见中性粒细胞。淋巴结结核:干酪样坏死背景中可见淋巴细胞,组织细胞,类上皮细胞及多核巨细胞。结节病:增生的淋巴细胞为背景,可见多量类上皮细胞,无坏死。Kikuchi病:片状的细胞坏死碎片灶混杂组织细胞、淋巴细胞,中性粒细胞稀少或缺如。非霍奇金淋巴瘤:可见弥漫分布的核大,体积大小一致的肿瘤性淋巴细胞。淋巴结转移癌:淋巴细胞背景中,可见成团分布的癌细胞。

2.3针吸细胞学与组织学检查对照结果120例淋巴结肿大的病例中,85例取原部位活检病理检查,针吸细胞学及组织学检查对照结果见表1。

针吸细胞学与组织学对照结果显示,细胞学检查有7例误诊,原因如下:1例转移肿瘤组织细胞体积较大、圆形、泡状核,异型明显,误诊为鼻咽癌。1例转移性肿瘤组织细胞体积小,大小一致,异型明显,误诊为转移性小细胞癌;1例反应性增生穿刺时仅抽到少许细胞,核染色深,有一定的异型性误诊为淋巴瘤;1例增生型结核和1例结节病仅抽到少许上皮样细胞和淋巴细胞误诊为反应性增生;2例非霍奇金淋巴瘤的凝固性坏死被认为干酪样坏死,而误诊为结核。

2.4淋巴结转移癌原发灶的确定22例针吸细胞学检查提示为转移癌的病例,建议临床作相应部位的影像学等检查,其中16例经影像学等其他检查确定了原发灶,包括鼻咽癌11例、鼻咽部胚胎性横纹肌肉瘤2例、舌癌1例、肺癌2例。

3讨论

颈部淋巴结肿大是一种常见的病理现象,能反映淋巴结自身或身体其他部位的多种病变,细针穿刺细胞学检查是常用的体表肿块诊断技术。我们分析了120例针吸细胞学检查中,85例取原部位活检作组织学对照,诊断总准确率为91.1%,文献报道淋巴结疾病针吸细胞学诊断总准确率82%～96%[1],反应性增生、结核、结节病、非霍奇金淋巴瘤、转移癌的准确率分别为96%、93.3%、88.9%、87.5%、90%,文献报道淋巴结转移癌针吸细胞学诊断准确率90%～96%[2]。我们通过分析针吸细胞学与组织病理学对照结果,总结针吸细胞学误诊的原因,认为提高诊断的准确率需注意以下几个方面。(1)触诊、穿刺、涂片、诊断最好有同一医师“一体化”操作。(2)触诊时注意淋巴结的大小、硬度、活动度、有无粘连等。(3)穿刺时仔细体会针感。(4)正确取材是关键[3]。(5)熟悉掌握各种病变的细胞学特点。

通过对16例淋巴瘤的诊断经验,我们认为对可疑病变及原发肿瘤的分型,针吸细胞学仅可给予提示性初步诊断,必要时应用免疫组织化学辅助诊断分型。

参考文献

[1] 孙海斌,郑晓芙,张剑.颈部淋巴结针吸细胞学580例诊断分析.中华病理学杂志,2008,37(10):695.

异型淋巴细胞篇5

【关键词】 白血病；免疫分型；流式细胞仪

Immunophenotyping in 24 patients with leukemia in comparison with morphotyping

【Abstract】 AIM: To study the immunophenotyping with flow cytometry rapidly and efficiently in 24 patients with acute or chronic leukemia. METHODS: Immunophenotyping was performed by doublelabeling with different antibodies conjugated with FITC and PE and analyzed with multiparameter flow cytometry for 24 patients with acute or chronic leukemia， which were difficult to be diagnosed clinically by morphology. RESULTS: ① Nine patients clinically diagnosed as chronic lymphocytic leukemia were immunophenoyped as B lymphocytic leukemia by FCM; ② Five patients clinically diagnosed as acute lymphocytic leukemia (L2) were immunophenotyped as different leukemia groups by FCM， including 1 patient with B lymphocytic leukemia， 2 with T lymphocytic leukemia (one of them with erythrocytic abnormity)， 1 with undifferentiated leukemia， and 1 with lymphocytic leukemia expressing both B and T cell antigens; ③ Five patients clinically diagnosed as acute nonlymphocytic leukemia were immunophenotyped by FCM as 2 patients with myeloid leukemia， 3 patients with erythroleukemia (M6); ④ One patient clinically diagnosed as MDS with myelofibrosis was immunophenotyped as M6 by FCM; ⑤ Among 4 patients who were suspected as both myeloid and lymphoidlineage phenotype， only 2 were diagnosed as double myeloid and lymphoid markers positive phenotype. The coincidence between immunophenotype ane FAB phenotype was 79.2%. CONCLUSION: Immunophenotyping by FCM may retrieve the faults of FAB phenotyping， providing important evidences for clinical diagnosis and guiding treatment inpidually.

【Keywords】 leukemia; immunophenotype; flow cytometry

【摘要】 目的： 应用流式细胞仪对24例临床形态学诊断困难的急慢性白血病进行快速、有效地免疫分型，以指导临床化疗. 方法： 采用单克隆抗体双色直接免疫荧光标记法及多参数流式细胞术（FCM），分型根据抗体积分系统，并与FAB分型进行比较. 结果： ① 9例临床诊断慢性淋巴细胞白血病经FCM免疫分型确诊为B淋巴细胞性白血病；② 5例临床诊断急性淋巴细胞白血病（L2）的患者经FCM免疫分型确诊1例为B淋巴细胞性白血病；2例为T淋巴细胞性白血病，且1例伴红系异常改变； 1例为未分化型白血病；1例为淋巴细胞白血病B，T双表达；③ 5例急性非淋巴细胞性白血病经FCM免疫分型确诊2例为髓系白血病；3例为红白血病（M6）；④ 1例MDS伴骨髓纤维化经FCM免疫分型确诊为M6；⑤ 4例疑似粒淋双表型白血病经FCM免疫分型确诊为粒淋双表型白血病. 免疫分型与FAB分型的符合率为79.2%. 结论： 流式细胞仪多参数白血病免疫表型分析，可以弥补FAB分型的不足，为临床诊断提供重要依据，并为白血病治疗措施的个体化提供依据.

【关键词】 白血病；免疫分型；流式细胞仪

0引言

白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型. 我们对24例临床确诊为急慢性白血病，但形态学分型较困难的患者，应用流式细胞仪对其进行了免疫分型，并与FAB分型进行了比较.

1材料和方法

1.1材料白血病患者的骨髓24（男11，女13）例，年龄17～67（平均44）岁. 所用单抗包括FITC标记的MsIgG1，CD10，CD20，CD3，CD7，HLADR，CD41及Glycophorin A；藻红蛋白（PE）标记的MsIgG1，CD19，CD22，CD5，CD33，CD13及CD34，均购自美国BD公司.

1.2方法骨髓经肝素抗凝后，PBS稀释5倍，使用Ficoll(1077 g/L)分离骨髓单个核细胞，PBS洗涤2次，以2×1010/L悬于PBS中，按文献［1］方法进行标记. 以标记FITC的抗钥孔嘁血蓝素mAbIgG2a和标记PE的抗钥孔嘁血蓝素mAbIgG1处理细胞作为阴性对照. 应用美国BD公司的FACSort流式细胞仪进行检测，每个样本收集5000～10 000个细胞，Cellquest软件分析其抗原表达情况.

2结果

2.1抗原表达B淋巴细胞性白血病抗原表达为：CD19，20，22，HLADR; T淋巴细胞性白血病伴红系异常改变阳性抗原表达为：CD5，CD3， CD7，HLADR，Glycophorin A（63.1%）;髓系白血病抗原表达为：CD13，CD33;红白血病（M6）抗原表达为：Glycophorin A［（96.4±5.6）%］，CD34和CD41均为阴性；淋巴细胞白血病B，T双表达阳性抗原为：CD19，CD10，CD20，CD3（89.3%）， CD13，HLADR; 粒淋（B）双表型白血病抗原表达为:CD19，CD10，CD20，CD22，CD33，CD13，HLADR;粒淋（T）双表型白血病抗原表达

为:CD5，CD3，CD33，CD7，CD13，HLADR（表1）.

2.2形态学和免疫分型临床诊断慢性淋巴细胞白血病9例经FCM免疫分型确诊为B淋巴细胞性白血病；临床诊断急性淋巴细胞白血病（L2）的5例经FCM免疫分型确诊1例为B淋巴细胞性白血病；2例为T淋巴细胞性白血病，且1例伴红系异常改变； 1例为未分化型白血病；1例为淋巴细胞白血病B，T双表达；急性非淋巴细胞性白血病5例经FCM免疫分型确诊2例为髓系白血病；3例为红白血病（M6）； MDS伴骨髓纤维化1例经FCM免疫分型确诊为M6；疑似粒淋双表型白血病4例经FCM免疫分型确诊为粒淋双表型白血病. 免疫分型与FAB分型的符合率为79.2%（表2）.

表1流式细胞仪免疫分型（略）

ND+：抗原表达量>20%. -：抗原表达量

表2形态学分型和FCM免疫分型（略）

3讨论

白血病的主要类型有源自未成熟T或B淋巴细胞的ALL，源自未成熟骨髓细胞的AML，源自成熟B淋巴细胞的CLL，源自粒细胞前身的CML. 准确的诊断可以指导临床选择最有效的治疗手段. 一般认为形态学鉴定细胞性质准确率在60%，而免疫学分型可超过90%，尤其在下列情况下，应用单克隆抗体对白血病进行免疫分型更为必要. 用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病［2-3］. 如：未分化型白血病和混合细胞性白血病；形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL）或急性未分化白血病（AUL）但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记；部分髓系白血病；慢性淋巴细胞白血病；微小残留白血病.

目前，临床对急慢性白血病的诊断主要是根据对原始血细胞的形态学与细胞化学染色的分析来诊断. 随着免疫学单抗技术的不断提高和对白细胞抗原研究的日趋深入，学者们认识到有些抗原特异性强，很少发生交叉表达，如CD3，CD22，CD79，MPO等，有些曾被认为属于某一系列特异性的抗原实际在其他系列的某一阶段或特殊情况下也可能出现［2，4］，我们对24例临床形态学及细胞化学染色难以分型的急慢性白血病，采用流式细胞术进行了免疫分型. 其中，1例急性淋巴细胞白血病经FCM分型确诊为淋巴细胞白血病T，B双表达， 1例临床诊断急淋L2并疑似粒淋双表型白血病的患者，经FCM分型确诊为T淋巴细胞性白血病伴红系异常改变，即淋红双表；以上两例经FCM分型的白血病在国内尚未见报道；经FCM分型确诊为M6的4例白血病，临床无1例疑似M6诊断；而4例疑似粒淋双表型白血病经FCM分型均确诊为粒淋双表型白血病；免疫分型与FAB分型的符合率为79.2%. 与其他学者报告的83.9%相近［5］. 流式细胞仪多参数白血病免疫表型分析不仅可以有效地支持临床诊断，还可以弥补FAB分型的不足，为临床诊断提供重要依据. 此外，免疫分型还可以提示预后，监测病程的发展、疗效，进行微小残留白血病的检测，从而为临床预测白血病复发，选择个体化治疗方案提供重要的依据.

参考文献

［1］ Ma DC， Sun YH， Zuo W， et al. CD34+ cells derived from fetal liver contained a high proportion of immature megakaryocytic progenitor cells［J］. Eur J Haematol，2000，64:304-314.

［2］ 张之南，沈悌. 血液病诊断及疗效标准［M］. 2版. 北京：科学出版社，1998：188，208，214.

［3］ Bene MC， Castoldi G， Knapp W， et al. Proposals for the immunological classification of acute leukemia［J］. Leukemia， 1995， 9:1783-1786.

异型淋巴细胞篇6

[关键词] 急性；坏死性；淋巴结炎；临床分析

[中图分类号] R632.6 [文献标识码] C [文章编号] 1674-4721（2011）11（c）-191-02

急性坏死性淋巴结炎是一种非肿瘤性淋巴结肿大，临床常易误诊为细菌或结核感染，现将本院收治的5例患者进行分析如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

本院2000～2007年共收治本病5例，其中，男3例，女2例，年龄分别为22、25、40、48、66岁，发病在春季2例，秋季3例，病初以发热就诊者2例，发热伴淋巴结肿大1例，以淋巴结肿大为主诉就诊者2例。

1.2 症状与体征

全部患者均有高热，3例呈弛张热，1例呈稽留热，1例呈不规则热，热程1周至2个月不等。发热同时伴多汗，全身倦怠，食欲减退，体重下降。对抗生素均无效。淋巴结肿大以颈及颌下为主，3例同时有轻、中度肝脾肿大，仅脾肿大者1例，出现斑丘疹或荨麻疹者3例，持续2～7 d消退，1例皮疹随发热高峰而出现，随体温下降而隐退。发生全身水肿1例。

1.3 辅助检查

2例白细胞减少[（2.9～3.9）×109/L]，1例增高（10.5×109/L），2例周围血可见异型淋巴细胞（0.04～0.05），5例血红蛋白下降（64～103 g/L）。2例骨髓涂片分别偶见原淋幼淋及原始免疫细胞。5例血沉均增高（55～95 mm/h）。1例低蛋白血症。1例ALT 66 IU/L，2例HBsAg阳性，各例肥达氏试验及血培养均阴性。2例IgG升高（27.8～28.3 g/L），1例补体C3增高（2.01 mg/ml）。测定2例细胞免疫均降低（T4 38%～40%，T4/T8=1.15～1.25）。各例ANA及 LE细胞均阴性肺CT1例示纵隔多发淋巴结肿大融合成块，上腔静脉受压移位，两侧胸腔积液，心包积液，3例肺纹理增强，腹部彩超2例发现后腹膜淋巴结肿大。淋巴结活检，淋巴结正常结构消失，可见大片坏死，内杂以碎片，坏死边缘带见组织细胞增生。3例以组织细胞增生为主，其中1例偶见原始免疫细胞，1例淋巴结显著坏死，细胞崩解，仅见少量细胞碎片。

1.4 治疗及转归

本组病例均经各种广谱抗生素治疗无效，1例口服异烟肼，利福平，乙胺丁醇20 d无效。当淋巴结活检证实本病后，立即给予糖皮质激素治疗，1～3 d后体温降至正常，1周淋巴结及脾肿大消失，3周后血常规及各项检查指标均恢复正常，约1个月停服，有1例在住院期间多次复发，再用激素仍有效。

2 结果

初期治疗5例均给予广谱抗生素，5例均无效，无效率为100%。淋巴活检确诊后，给予糖皮质激素治疗，1～3 d后体温降至正常，1周后，淋巴结及脾大消失，3周后，各项检查指标恢复正常。1个月停用激素，有1例复发，再用激素仍然有效。有效率为100%，治愈率为80%。

3 讨论

3.1 病因与病理

急性坏死性淋巴结炎（ANL）是一种病因不明的非肿瘤性淋巴结肿大。临床以浅表淋巴结肿大，发热和白细胞减少为三大主征。组织学以广泛性凝固性坏死伴组织细胞反应性增生，无中性粒细胞浸润为特点[1]。ANL是1972年由菊池首先描述，国外以日本学者报道较多，在国内本病临床病例首先由孙丹枫等于1983年报道8例儿童病例，此后有不少病例报道。由于本病临床表现复杂特殊，易误诊。HE染色切片，低倍镜下见淋巴结内散在不规则的淡染区，主要位于副皮质区或皮质区并相连成片。高倍镜下见淡染区内细胞广泛坏死，留有大量碎片。坏死灶边界不清，与周围的残存的淋巴组织参差相交。坏死边缘带亦见成片组织细胞增生及吞噬核碎片，网状纤维染色证实坏死部网状纤维仍保存。临床上呈变应性发热和多脏器受累者，其淋巴结内见到由组织细胞和小血管内皮细胞增生所形成的淡染区。此区可见早期机化的小坏死灶和少量碎片，在淋巴组织增生区内见少量免疫母细胞和浆细胞，未见嗜伊红性无定行的物资在间质中沉积[2]。有人对多个淋巴结进行穿刺，发现淋巴结肿大早者组织细胞，巨噬细胞多，肿大晚者此类细胞少，最晚的一个淋巴结未找到组织细胞，但母细胞化很明显，组织细胞与坏死物的多少无平行关系。

3.2 临床特征

亚急性或急性发病。发病前多有前驱症状，如咽炎，上呼吸道感染，肺炎或腹泻。多见于青壮年，男∶女为1∶2。年龄10～45岁，以春夏发病多。初发症状以淋巴结肿大和发热为主。热型可为弛张热、稽留热、间歇热或不规则热，多数报道以弛张热为主。淋巴结肿大多见颈、腋以及锁骨上淋巴结，多长期反复出现，有疼痛，不相互粘连，活动度好，少数有肺门淋巴结肿大。发热同时多伴全身倦怠，厌食，多汗。本病持续高热或热达高峰时淋巴结也随之肿大，发热缓解时淋巴结也见缩小，肝脾肿大，贫血和皮疹等可一过性存在。少数病例长期迁延反复发作或缓解复发，久之多脏器受累。白细胞减少，骨髓可表现为感染性骨髓象伴继发性贫血和粒细胞退行性变，此外多有转氨酶增高，体液免疫水平均较高，而细胞免疫处于低值[3]。

3.3 鉴别诊断

3.3.1 淋巴结结核 患者可出现发热、淋巴结肿大、白细胞减少等非特异性表现，与本病有相似之处。但结核患者OT试验或PPD试验常呈（+），淋巴结组织切片上有典型的结核结节，免疫组化提示T、B细胞混合性增生，组织细胞呈散在性分布与本病大片状分布不同。在机体反应低下时，结核干酪灶周围往往缺乏结核性肉芽肿或仅有上皮样细胞围绕时须与本病仔细鉴别，本病坏死灶周围增生的小核裂样T细胞背景，灶内多残留有核碎片具有参考价值。

3.3.2 恶性组织细胞病 恶性组织细胞病为一凶险的血液系统恶性肿瘤。临床上常以长期高热伴进行性全身衰竭，淋巴结、肝、脾进行性肿大，还可有黄疸、出血、皮肤损害和浆膜腔积液等，实验室检查常发现全血细胞进行性减少，血涂片可发现异常的组织细胞或不典型的单核细胞；骨髓涂片有数量不等形态不正常的组织细胞及多核巨组织细胞。而组织细胞坏死性淋巴结炎为一良性自限性疾病，全身衰竭及出血较少见，血常规异常一般仅限于白细胞伴有粒细胞的减少，而无红系及血小板的异常。恶性组织细胞病与本病的病理特征亦不一样。恶性组织细胞病为组织细胞恶性克隆性增生，而本病为反应性增生。恶性组织细胞病受累组织免疫组化检查CD68 和lysozyme（+），组织细胞呈散在或簇状分布，与本病呈大片状分布在坏死区不同；恶性组织细胞病常伴染色体异常，如1p11易位（1qter1p11）、t（2：5）（p23；q35），尤其是17p13异常；而本病鲜有染色体改变。

3.3.3 系统性红斑狼疮 女性患者出现发热、皮疹、白细胞减少、淋巴结肿大、肝脾肿大、尿蛋白及抗核抗体等极易误诊为SLE。但SLE尚有一些其他典型特征，如光过敏、面颊蝶形、盘状红斑及关节炎等，在本病一般不会出现，SLE患者还有一些特异性化验的异常，如抗dsDNA、抗Sm抗体、狼疮细胞（+）等。如有淋巴结病理活检，则更易鉴别。SLE患者淋巴结活检虽偶可见到坏死性淋巴结炎，但无大量组织细胞，可见到中性粒细胞浸润。而本病一般无中性粒细胞浸润，但有大量的组织细胞增生并吞噬碎片。值得一提的是本病若伴有抗核抗体阳性，需警惕为SLE的早期表现。

3.3.4 非何杰金氏淋巴瘤 临床常以无痛性淋巴结肿大为主，结外可侵犯其他任何脏器。20%～30%的患者出现发热、体重减轻、盗汗等全身症状，是一组异质性疾病。骨髓受累时可发生血细胞减少。组织细胞坏死性淋巴结炎的淋巴结大多伴有轻度疼痛及压痛，一般来说肿大的程度较NHL为轻，质地比较软，NHL的淋巴结质地比较韧，饱满，晚期可融合。结外浸润在NHL多见。NHL的病程呈进行性，一般无自限性，这与本病不同。病理组织活检在两者鉴别中起很大作用。NHL淋巴结正常结构被破坏，多数淋巴滤泡和淋巴窦消失，恶性增生的淋巴细胞形态呈异形性，多为单克隆性（T细胞或B细胞）淋巴包膜及周围组织亦被侵犯，与本病不同。免疫组化显示NHL，恶性细胞表现为T细胞或B细胞标记的阳性细胞一种占绝对优势，而另一种仅少数散在分布，属反应性细胞成分，这与本病T、B细胞呈混合性增生而非单一性或单克隆增生明显不同。有无片状坏死也是区别NHL。与本病的一个重要病理学特征。因此，从临床经过与病理学检查不难将两者鉴别。

3.4 诊断及治疗

较早的报告认为淋巴结病理是确诊的可靠依据，但系统性红斑狼疮（SLE），干燥综合征（SS），结核患者淋巴结病理也有凝固性坏死改变，故不能以淋巴结病理诊断作为唯一的确诊标准，要结合病史、症状、体征、实验室检查、淋巴结活检，以及对糖皮质激素治疗的反应来综合分析，一定要排除血管原始免疫细胞淋巴结病、淋巴瘤、淋巴结核、SLE、SS等疾病。现将诊断要点归纳如下：顽固性发热，浅表淋巴结肿大，一过性白细胞减少伴全身症状，一过性肝脾肿大，不定型皮疹或红斑，关节痛，乏力，食欲不振，体重减轻等。淋巴结活检，为凝固性坏死伴组织细胞增生，无中性粒细胞浸润，排除其他疾病，抗生素治疗无效，糖皮质激素治疗效果好[4]。

4 结论

总之，ANL病因不明，可能是由病毒感染或其他诱因导致自身免疫反应，累及免疫器官，即为一种非特异性免疫反应疾病，多见于日本及东亚地区国内报道也不少，多以颈部淋巴结肿大为主要特征或体征，实验室检查，血沉快，白细胞计数正常或偏低，OT实验阴性，抗生素治疗无效，糖皮质激素治疗效果好，临床极易误诊为淋巴瘤，淋巴结结核等病，提醒临床医师对本病引起重视，及早诊断治疗。

[参考文献]

[1] 于丽杰.坏死增生性淋巴结炎[J].中国医药指南,2004,12(28):984.

[2] 梁艳华.组织细胞坏死性淋巴结炎3例临床与病理分析[J].吉林医学,2003,24(4):142-143.

[3] 王旭.20例坏死性淋巴结炎临床分析[J].中国医刊,1999,34(9):34.

异型淋巴细胞篇7

[关键词] 程序性细胞死亡-1；系统性红斑狼疮；自身免疫病；免疫调节异常

[中图分类号] R593.24 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）08（b）-0019-03

Correlational research between programmed cell death-1 and systemic lupus erythematosus

DOU Yingying LI Yingnan

Department of Rheumatology, the Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University, Heilongjiang Province, Harbin 150086, China

[Abstract] Programmed cell death-1 (PDCD-1) molecule is an important down-regulated costimulatory molecule, which plays a role of immuno-suppressive function through its ligand. It mainly involves in the central and peripheral immune tolerance of T lymphocyte, and it plays an important role in autoimmune disease. Systemic lupus erythematosus (SLE) is a kind of autoimmune disease, it will develop when the body loses normal immune tolerance balance, and lymphocyte which is activated abnormally cannot recognize autologous tissue correctly. In recent years, many studies have found that the polymorphism of PDCD-1 is related to the development of SLE, therefore, this article reviews a recent research progress about the relationship between the PDCD-1 and SLE.

[Key words] Programmed cell death-1; Systemic lupus erythematosus; Autoimmune disease; Immune dysregulation

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种弥漫性、全身性非器官特异性自身免疫疾病，以T、B淋巴细胞异常活化，机体产生大量致病性自身抗体为主要特征。患者体内丧失了正常的免疫耐受平衡，淋巴细胞异常活化，不能正确识别自身组织导致免疫病理损伤而引起组织器官功能障碍，最终因一个或多个器官衰竭而死亡。

程序性细胞死亡-1（programmed cell death-1，PDCD-1）是一种新近发现的CD28免疫球蛋白超家族新成员，相对分子质量为55 000的Ⅰ型跨膜糖蛋白，与CTLA-4（cytotoxic T-lymphocyte antigen-4）有23%的相同氨基酸序列[1]，是一种重要的下调型共刺激因子。PDCD-1基因是一种非人类白细胞抗原基因，位于染色体2q37.3，并在自身免疫性疾病中起重要作用[2]。

1 SLE的免疫发病机制

异型淋巴细胞篇8

关键词：非霍奇金淋巴瘤；T淋巴细胞亚群；流式细胞仪

T细胞介导的细胞免疫在免疫监视、杀伤靶细胞及免疫调节方面具有重要的作用。T细胞各亚群的比例是反映细胞免疫功能的重要标志。NK细胞通过直接抗肿瘤效应及激活其他免疫效应细胞发挥抗肿瘤作用。非霍奇金淋巴瘤（NHL）是一种起源于免疫组织的恶性疾病，肿瘤生长、发展与机体免疫功能紊乱有密切关系。本研究通过检测NHL患者化疗前后外周血T淋巴细胞亚群以及NK细胞表达水平，进一步探讨NHL的发病机制，为治疗和判断预后提供依据。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取我院 2012年01月至2014年01月甘肃省中医院血液肿瘤科收治的初治NHL60例，其中男36 例，女 24例，年龄 14～83岁， 平均 43.5岁。入选患者均经甘肃省中医院病理科依据WHO标准诊断病理类型，其中B细胞NHL（B-NHL）43例，T细胞NHL（T-NHL）17例。并选择我院同一时期健康体检者60例作为健康对照组， 其中男、女各30例，年龄 22～74岁， 平均46.7 岁。

1.2 方法

所有受试者均于清晨空腹抽取静脉血 2ml，肝素抗凝，NHL患者采取回顾性分析手段， 分别追踪病情初次诊断时、 经4疗程化疗后的资料。T淋巴细胞亚群和NK细胞表达的检测均由甘肃省中医学院中心实验室采用BD FACS Calibur 流式细胞仪完成并经BD FACSDiva软件分析得出试验数据。

1.3 统计学处理

采用SPSS18.0 统计软件进行统计学处理，所测数据以均数±标准差（X±s ） 表示，两组间比较采用独立样本t检验、配对t检验，以 P

2 结果

2.1 NHL患者化疗前及化疗后淋巴细胞亚群及NK细胞的表达情况

NHL患者化疗前CD3+、CD4+、NK细胞百分比与对照组相比均偏低，差异有统计学意义（P

2.2 不同病理类型NHL患者T细胞亚群及NK细胞比例的比较

T-NHL组Treg细胞比例高于B-NHL组，差异有统计学意义（P0.05）。

3 讨论

NHL是来源于淋巴结和淋巴组织的免疫系统恶性肿瘤。免疫功能的异常对NHL的发生、发展及预后有着重要的影响 [1]。在机体抗肿瘤效应中，细胞免疫起着重要作用。而细胞免疫又以T淋巴细胞亚群和NK细胞为主要效应细胞。因此，研究NHL患者的T细胞和NK细胞变化可进一步明确NHL患者的发病因素及免疫状态，为免疫治疗提供一定的思路。

外周血T亚群可反映机体细胞免疫状态，CD3+为总细胞免疫状态， CD3+CD4+为辅T淋巴细胞，发挥免疫监视作用，可通过产生的细胞因子辅助B细胞产生抗体，同时激活NK细胞，NK细胞可以非特异性的直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞。CD3+CD8+通过自身及抑制因子在免疫反应中起负向作用，抑制CD4+细胞和B细胞功能，从而抑制抗体形成及细胞免疫反应。研究证实，在肿瘤或其他疾病进展过程中，机体免疫功能常呈现紊乱，其中一个明显表现为T 淋巴细胞亚群在数量上和功能上发生改变[2-3]。本研究中，NHL组外周血CD3、CD4、NK细胞比例低于健康对照组，CD8+、Treg细胞比例高于健康对照组（P

Treg细胞是近年来肿瘤免疫研究的热点之一，近年研究表明，肿瘤周围的淋巴细胞含有大量的Treg细胞，这些Treg细胞可通过抑制或杀伤效应性CD8+或CD4+T细胞抑制机体的抗肿瘤免疫，Treg细胞数量的升高与肿瘤患者较差的预后有关。然而在NHL中，情况要复杂得多，Treg细胞在不同亚型的NHL中临床意义不同。例如在滤泡性淋巴瘤和生发中心弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中，Treg细胞的高表达与好的预后相关，而在非生发中心DLBCL中则没有观察到类似的情况，在成年人T细胞淋巴瘤中高表达的Treg细胞是预后较差的标志，提示在不同亚型的NHL中，Treg细胞功能及作用机制不同。本研究显示T-NHL组Treg细胞比例明显高于B-NHL组（P

参考文献：

[1] Miller TP，Dahlberg S，Cassady JR，et a1.Chemotherapy alone compared with chemotherapy plus radiotherapy for localized intermediate-and high-grade non-Hodgkin’s lymphoma.N Engl J Med.1998.339：21-26.

[2] 邵明海，王建华，丁维军，等.恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25+调节性T 细胞的检测及其临床意义[J].现代实用医学，2009，21（2）：142-143.

[3] 张国庆，赵宏，温新宇，等.大肠癌患者化疗前后淋巴细胞亚群变化[J].中国医学科学院学报，2013，35（2）：155-160.

[4]Martin KM，Cooper WN，Metealfe JC，et a1.Mouse BTEB3，a new member of the basic transcription element binding protein（BTEB）family，activates expression from GC-rich minimal promoter regions.JBiochem，2000，345：529-533.

[5]Kaczynski J，Zhang JS，Ellenrieder V，et a1.The Spl-like proteinBTEB3 inhibits transcription via the basic transcription element boxby interacting with mSin3A and HDAC-1 co-repressors and competingwith Spl.J Biol Chem，2001，276：36749―36756.

[6] 武晓博，张巧花，侯淑玲，等.难治性淋巴瘤患者外周血T 淋巴细胞亚群与自然杀伤细胞活性的检测及其临床意义[J].白血病・淋巴瘤，2011，20（3）：162-164.

异型淋巴细胞篇9

【摘要】 套细胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma， MCL）是一类较少见的非霍奇金淋巴瘤（nonHodgkin's lymphoma， NHL），形态学方法常难以将其与其他类型小细胞淋巴瘤相鉴别。为了提高对MCL的认识，报道1例误诊为滤泡性淋巴瘤（follicular lymphoma， FL）的MCL，总结该病例临床资料及实验室检查特点。结果显示：流式细胞术（flow cytometry，FCM）及免疫组织化学染色检查符合MCL的特征，细胞遗传学检查发现了包括t(11;14)在内的多种染色体异常。结论： MCL为难以确诊的疾病，间期荧光原位杂交、多重荧光原位杂交、FCM以及免疫组织化学染色等检查有助于MCL的诊断。

【关键词】 套细胞淋巴瘤

A Case Report of Misdiagnosed Mantle Cell Lymphoma

Abstract

Mantle cell lymphoma (MCL) is a rare group of nonHodgkin's lymphoma (NHL)， which is difficult to discriminate from other subtype of small lymphocytic lymphoma in morphologic appearance. In order to enhance the understanding of MCL， a case of MCL first diagnosed as follicular lymphoma (FL) was reported. The clinical and laboratory characteristics of MCL were analyzed and summarized. The results showed that the findings of flow cytometry (FCM) and immunohistochemical staining technique were compatible with the diagnosis of MCL. Cytogenetic analysis can detect multiple types of chromosomal abnormalities， including t(11;14). In conclusion， MCL is a disease which diagnosis is difficultly confirmed. Interphase fluorescence in situ hybridization， multiplex fluorescence in situ hybridization， FCM and immunohistochemical staining technique play important roles in the diagnosis of MCL.

Key words

mantle cell lymphoma; IFISH; MFISH; FCM

套细胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma， MCL）是1994年于欧美淋巴瘤修订分类（revised European American lymphoma， REAL）中提出的一个独特的病理类型［1］，为较少见的一类非霍奇金淋巴瘤（nonHodgkin's lymphoma， NHL），占NHL的2％-10％。在Kiel分类中归为生发中心细胞淋巴瘤，在工作分类中归为小细胞与大细胞混合性淋巴瘤或弥漫型小裂细胞淋巴瘤，但不明确的滤泡部分常被误诊为滤泡性淋巴瘤（follicular lymphoma， FL）或反应性淋巴滤泡增生。细胞遗传学特点是t(11;14)(q13;q32)，由11号染色体的Bcl1基因（11q13）易位到14号染色体免疫球蛋白重链（immunoglobulin heavy chain， IgH）基因启动子的下游，从而导致Bcl1基因表达的上调。Bcl1基因的易位导致细胞周期蛋白D1（cyclin D1，CCND1）mRNA过度表达，最终导致细胞增殖的调控紊乱。临床过程呈进展型，侵袭性强，预后较差，中位生存期为3-5年［2］。近来我科收治1例患者，外院误诊为FL，在我院经过荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）以及流式细胞术（flow cytometry， FCM）检测确诊为MCL，现报告如下。

材料和方法

病例资料

患者，男，58岁，2005年1月体检B超发现后腹膜淋巴结肿大。增强CT、MRI显示：两下肺结节影，纵隔淋巴结肿大；腹腔及后腹膜淋巴结肿大，胰腺周围及腹主动脉旁、肝门处见多个大小不等的低回声，周围清晰，最大直径5.9 cm × 5.3 cm，部分内部回声不均，脾脏肿大，膀胱直肠间类圆形软组织影。外院行腹腔淋巴结切除活检术，术后病理检查显示： FL（I级）；免疫组织化学检查显示： CD79α+、CD20+、CD43+，CD3-、Bcl2+、Bcl6-、CD10-、CCND1+、CD5-。2005年2月以MACOP（米托蒽醌、阿糖胞苷、环磷酰胺、长春新碱和泼尼松）方案化疗，2005年3月复查，CT显示两下肺结节絮状影有所进展，纵隔淋巴结仍肿大，转至其他医院病理切片会诊显示： FL（I级），免疫组织化学检查显示：CD79α+、CD20+、CD43+、Bcl2+、Bcl6-、CD10-、CCND1+，背景细胞CD3+、CD5+。2005年3月-2006年1月采用FND（福达华、米托蒽醌和地塞米松）方案化疗，共计8疗程，期间多次复查CT显示部分病灶有所吸收，部分增大，并出现左颈根部、左腋下淋巴结肿大。2005年8月中国实验血液学杂志 J Exp Hematol 2007; 15(5)套细胞淋巴瘤一例误诊分析常规骨髓检查未见异常。2006年3月患者出现四肢游走性疼痛，4月复查CT显示：左中下颈、左侧锁骨上及左侧腋窝淋巴结较前增大、增多，两肺浸润灶较前有所缩小，脾肿大。骨ECT显示：两肱骨中段、两股骨中段、左侧坐骨肿瘤骨转移。患者疾病进展，于2006年4月26日转至我院。我院病理报告显示： FL（I-Ⅱ级），入院体检为：轻度贫血貌，皮肤黏膜无瘀点瘀斑，浅表淋巴结未扪及，胸骨无压痛，心肺无异常，腹平软，肝未及，脾肋下2 cm。骨髓细胞形态学：有核细胞增生明显活跃，原始淋巴细胞22.8%，幼稚淋巴细胞10.0%，成熟淋巴细胞4.0%；原幼细胞过氧化物酶（POX）和糖原染色（PAS）染色阴性。外周血白细胞16×109/L，原始淋巴细胞11%，幼稚淋巴细胞11%，成熟淋巴细胞38%，血红蛋白 85 g/L，血小板 160×109/L。

常规细胞遗传学（conventional cytogenetics， CC）分析

取骨髓5 ml肝素抗凝，有核细胞计数后按(1-2)×106/ml进行直接法和（或）短期培养法制备染色体并采用R显带技术进行核型分析。染色体核型按照《人类细胞遗传学国际命名体制（ISCN 2005）》描述。

间期FISH检测t(11;14)

探针来源 间期FISH探针购自美国Vysis公司。该探针是分别用荧光素SpectrumGreenTM标记的IgH和用SpectrumOrangeTM标记的CCND1探针的混合物。

方法 参照文献步骤［2］。

结果分析 应用Leica DMRA2型荧光显微镜在DAPI/FITC/TexasRed三色滤光镜激发下观察间期细胞荧光杂交信号：无t(11;14)(q13;q32)异常的间期细胞核内出现两个红色信号和两个绿色信号（2R2G）。有t(11;14)(q13;q32)异常的间期细胞核内出现绿色和红色相互靠近或叠加产生的黄色融合信号（F）。每个病例计数200个间期细胞。

MFISH分析

探针来源 MFISH探针购自美国Vysis公司。此探针是经流式细胞仪分选、显微切割后经DOPPCR扩增的全染色体涂抹探针，应用5种荧光素的不同组合经缺口平移法标记，5种荧光素包括SpectrumGoldTM、SpectrumFRedTM、SpectrumAquaTM、SpectrumRedTM和SpectrumGreenTM。

步骤 标本处理、图像采集及分析方法参照文献步骤［3］。

FCM免疫表型分析

取肝素抗凝的新鲜（6小时内）抽取的骨髓，调整细胞数至（0.5-1.0）×106/ml，取100 μl经直接免疫荧光标记法标记，避光15分钟后上溶血剂溶解红细胞。流式细胞仪（BeckmanCoulter公司产品，Epics XL型，USA，488nm激发波长，采用Expo32 ADC分析软件）检测至少10 000个细胞，FS/SS双参数设门，分析淋巴细胞群不同抗原的表达情况，膜单克隆抗体包括有CD5、CD19、CD20、CD23（购自法国Immunotech公司）。结果判断以抗原表达≥20％为阳性。

结

果

FCM检测结果

原幼淋巴细胞占39.9%，其表达为CD19+ 90%，二次设门（CD19+细胞表达）CD5+ 89.5%，CD20+ 100%，CD23-。

CC检查结果

92，XXYY，7q+×2，9q+×2，t(11;14)×2，13q+×2，15q+×2［2］/46，XY［8］。

间期FISH检查结果

t(11;14)阳性细胞占24%，其中3R3G3F 16%，4R3G2F 4%，2R2G3F 4%（图1）。

Figure 1. t (11; 14) positive cells shown by FISH.

MFISH检查结果

综合上述FCM、CC、IFISH和MFISH结果，结合外院淋巴结免疫组织化学CCND1+、CD43+、CD10-，诊断此患者为MCL（IV期A组）。于2006年5月初开始HyperCVAD A方案（环磷酰胺、长春新碱、阿霉素、地塞米松）及B方案（阿糖胞苷和甲氨蝶呤）交替化疗，每周期2次腰穿鞘注甲氨蝶呤、阿糖胞苷和地塞米松治疗，共计进行4疗程化疗。5月26日复查骨髓：原幼淋占0.8%。FCM未见微小病灶残留（minimal residual disease， MRD）。FISH 结果：t(11;14)阳性细胞：0/200。2006年8月复查CT显示：左腋窝淋巴结、纵隔淋巴结、腹膜后淋巴结均明显缩小，脾脏亦有所缩小，但仍超过正常大小，肺部病灶明显吸收。

讨

论

MCL因其独特的细胞来源、病理形态、免疫表型和分子生物学特征而成为WHO NHL分类中独立的一种类型。MCL起源于滤泡套内层中未受抗原刺激的CD5+CD23-周围性B细胞，拥有B细胞的免疫标记： CD19+、CD20+、CD22+、CD43+、CD79α+、sIgM+，并过度表达CD5+、FMC7+、Bcl2+，但CD3-、CD10-、CD23-、Bcl6-，CD5+有助于MCL与FL区别。CCND1+几乎存在于每例MCL中，而在慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤（chronic lymphocytic leukemia/small lymphocytic lymphoma，CLL/SLL）及其它NHL很少见［5］。通过遗传学和免疫学方法检测t(11;14)(q13;q32)和CCND1表达可作为区别MCL和其他小B细胞性淋巴瘤的重要手段［6］。

在MCL、FL、CLL/SLL和边缘区B细胞淋巴瘤等小B细胞淋巴瘤中，组织病理学形态有时有重叠，而套细胞淋巴瘤对治疗反应性差，5年生存率仅为11%［7］，因此必须与其他小B细胞淋巴瘤作鉴别。有时MCL的结节性病灶极类似于FL的肿瘤性滤泡，单从形态上很难鉴别，因此鉴别两者需把组织学、免疫组织化学和分子遗传学综合考虑。由于免疫组织化学检测易受到多种技术性与人为因素以及抗体特异性与敏感性不足的影响，因此其结果始终是HE组织学改变的辅助与补充，不能脱离组织学改变去评价免疫组织化学检测结果，我们认为免疫组织化学结果与组织学特点相一致才可以肯定。尤其是淋巴瘤的诊断，最基本的是确切、充分的组织学依据，免疫组织化学检测只能作为分型与鉴别诊断的辅助手段。此病例虽然免疫组织化学检测结果CCN1+，但先后两次CD5结果不一致，而淋巴结病理形态与FL高度符合，鉴于上述原因，三家医院病理科诊断为FL。先后以MACOP方案1次及FND方案8次化疗，均无明显疗效，病情进展，转至我院后FCM显示CD5+、CD19+、CD20+、CD23-、CC、间期FISH和MFISH检测均有t(11;14)异常，尽管病理学诊断为FL，但结合病史特点以及免疫表型特征和分遗传学结果确诊为MCL。

t(11;14)易位导致了CCND1的表达异常。Monteil等［8］在1996年首次采用间期FISH检测MCL中t(11;14)(q13;q32)。现FISH已经作为国外日常病理辅助诊断MCL的首选方法［9］。PCR只能检测出11q13上主要易位簇（major translocation cluster， MTC）内有限区域上（大约几百个bp）的断裂点，落在距离主要易位簇以外大约100 kb的次要易位簇（minor translocation cluster， mTC）内的断裂点，由于PCR技术上的局限性而不能完整的扩增出如此长的片段。FISH敏感性高的原因是其所用的CCND1探针杂交的目的片段包括了11q13上MTC、CCND1等大约350 kb大小的区域，明显提高了易位检出率［10］。本研究中，骨髓细胞采用FISH检测到t(11;14)(q13;q32)。

间期FISH只能用特异性的探针检测已知的染色体异常，且通常一次杂交只能检测一种至数种染色体异常。MFISH不仅可以确定CC发现的核型异常，包括染色体易位、大片段缺失、不明来源的额外物质的增加、衍生染色体和标记染色体，而且还可以发现CC分析未发现的异常，纠正CC分析中的错误，对检测未知核型异常很有帮助。本例患者CC与MFISH检查示近四倍体，染色体条数稍有差别可能和不同的分裂像有关，CC仅见t(11;14)伴7q+，9q+，13q+，15q+，而MFISH发现了6、7、9、13、14、22号衍生染色体，t(7;9)，t(9;15)，t(3;13)，t(11;14)，t(4;22)易位及11号染色体片段缺失等多种染色体异常，11号染色体片段缺失可能与易位的14号片段丢失或其片段很小有关。

近来人们利用比较基因组杂交（comparative genomic hybridization，CGH）技术显示MCL的基因突变。deLeenw等［11］用基因芯片技术分析8例MCL细胞系（G519、HBL2、NCEB1、Rec1、SP49、UPN1、Z138C和JVM2），结果发现平均每个细胞有35种基因改变，其中14种为基因缺失、21种为基因扩增，18q21/Bcl2和13q31/GPC5异常扩增和9p21缺失多见，重要的是发现了位于2p11和22q11上的免疫球蛋白轻链基因等新的位点的缺失，这些新位点的变化对研究MCL很有意义。Jarosova等［12］利用CGH分析30例确诊的MCL，80%的患者有不稳定的异常染色体变化。常见的缺失有1p、8p、9q、11q、13q和17p，约1/4的病例3号染色体有附加异常。

Ott等［13］用FISH及CC方法研究发现，大约30％的MCL可检测到染色体四倍体克隆，且在母细胞样型MCL出现率明显增高（80％）。由于四倍体染色体异常在其它B细胞NHL现象少见，可作为MCL遗传学特征之一。本研究结果提示，对少见复杂表现的小细胞淋巴瘤可以先借助组织学和免疫组织化学染色来诊断大部分的病例。不能鉴别时，采用FCM检测、间期FISH、MFISH等方法尤为重要。

Khouri等［14］报道45例MCL患者予HyperCVAD方案化疗4周期化疗后总体有效率93.5％，其中完全缓解(CR) 38％，部分缓解(PR)55.5％。所有随后进行移植的患者均达CR。25例初治的患者3年总体生存率(OS)和无事件生存率(EFS)分别为92％和72％，而曾经接受过治疗的患者其OS和EFS则分别为25％和17％。与经典的CHOP类似方案相比， HyperCVAD方案的3年EFS及OS亦显著增高。认为HyperCVAD方案后进行干细胞移植是治疗初诊MCL患者的有效方案。而Hagemeister［15］认为在年龄小于65岁的患者中，美罗华联合HyperCVAD方案与HyperCVAD后进行干细胞移植在治疗有效率、疾病无复发以及总体生存率方面类似。本例患者初诊时误诊为FL，外院采用MACOP及FND方案化疗，疗效不佳，且病情进展，侵犯骨髓，我们应用HyperCVAD方案取得了较好的近期疗效，目前患者仍在随访中。

参考文献

1Harris NL， Jaffe ES， Stein H， et al. A revised EuropeanAmerican classification of lymphoid neoplasms: a proposal from the International Lymphoma Study Group. Blood， 1994;84:1361-1392

2Weisenburger DD， Armitage JO. Mantle cell lymphoma — an entity comes of age. Blood， 1996; 87:4483-4494

3李建勇，潘金兰，薛永权等. 间期荧光原位杂交检测骨髓增生异常综合征8 号染色体三体. 中华血液学杂志，2000;21:179-181

4肖冰，李建勇，潘金兰等. 多重荧光原位杂交检测骨髓增生异常综合征患者复杂核型异常. 中华血液学杂志，2005;26:513-516

5Decaudin D. Mantle cell lymphoma: a biological and therapeutic paradigm. Leuk Lymphoma， 2002;43:773-781

6Li JY， Gaillard F， Moreau A， et al. Detection of translocation t(11;14)(q13;q32) in mantle cell lymphoma by fluorescence in situ hybridization. Am J Pathol， 1999;154: 1449-1452

7The NonHadgkin's lymphoma classification project. A clinical evaluation of the international lymphoma study group clasification of nonHadgkin's lymphoma. Blood， 1997; 89: 3909-3918

8Monteil M， Callanan M， Dascalescu C， et al. Molecular diagnosis of t(11;14) in mantle cell lymphoma using twocolour interphase fluorescence in situ hybridization. Br J Haematol， 1996;93:656-660

9BelaudRotureau MA， Parrens M， Dubus P， et al. A comparative analysis of FISH， RTPCR， PCR， and immunohistochemistry for the diagnosis of mantle cell lymphomas. Mod Pathol， 2002;15:517-525

10Aguilera NS， Bijwaard KE， Duncan B， et al. Differential expression of cyclin D1 in mantle cell lymphoma and other nonHodgkin's lymphomas. Am J Pathol， 1998;153:1969-1976

11deLeeuw RJ， Davies JJ， Rosenwald A， et al. Comprehensive whole genome array CGH profiling of mantle cell lymphoma model genomes. Hum Mol Genet， 2004;13:1827-1837

12Jarosova M， Papajik T， Holzerova M， et al. High incidence of unbalanced chromosomal changes in mantle cell lymphoma detected by comparative genomic hybridization. Leuk Lymphoma， 2004;45:1835-1846

13Ott G， Kalla J， Ott MM， et al. Blastoid variants of mantle cell lymphoma: frequent bcl1 rearrangements at the major translocation cluster region and tetraploid chromosome clones. Blood， 1997;89:1421-1429

14Khouri IF， Romaguera J， Kantarjian H， et al. HyperCVAD and highdose methotrexate/cytarabine followed by stemcell transplantation: an active regimen for aggressive mantlecell lymphoma. J Clin Oncol， 1998;16:3803-3809

异型淋巴细胞篇10

[关键词] 宫颈鳞癌；淋巴管密度；淋巴转移

[中图分类号] R737.33[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2011）04（b）-020-04

Investigation of lymphatic vessel density and distribution in cervical sqamous cell carcinoma

PENG Xiaolian1, WU Yilin2

1.The People′s Hospital of Linxiang City, Hu′nan Province, Linxiang 414300, China; 2.The Second XiangyaHospital, Central South University, Changsha 410011, China

[Abstract] Objective: To investigate the relationship of lymphatic vessel density (LVD) and distribution with clinicopathological parameters of cervical sqamous cell carcinoma. Methods: Immunohistochemical (IHC) staining was used to detect D2-40 labeled intratumoral LVD and peritumoral LVD in 63 cases of invasive cervical sqamous cell carcinoma and LVD in 11 cases of benign cervix tissue. Statistical analysis was performed using SPSS 17.0 soft-ware. Results: ①Compared with benign cervix tissue, the intratumoral LVD and peritumoral LVD in invasive cervical sqamous cell carcinoma were significantly increased (all P=0.000). In addition, peritumoral LVD was significantly higher compared with intratumoral LVD in invasive cervical sqamous cell carcinoma (Z=-5.778；P=0.000). ②High intratumoral LVD showed significant correlation with histological grade and lymphatic metastasis; peritumoral LVD was significantly associated with histological grade, depth of stromal invasion and lymphatic metastasis (all P＜0.05). Conclusion: There is a certain regularity in lymphatic vessel distribution of invasive cervical sqamous cell carcinoma. Lymphangiogenesis maybe play an important role in the tumorigenesis, development and lymphatic metastasis of cervical sqamous cell carcinoma. Furthermore, the peritumoral LVD may be more effective.

[Key words] Cervical sqamous cell carcinoma; Lymphtic vessel density; Lymphatic metastasis

宫颈癌是全球妇女常见的恶性肿瘤之一，我国每年约有13.15万新发病例[1]，且有淋巴转移者单纯手术治疗不够；若肿瘤已经扩散到照射野以上区域，盆腔照射也无效。脱氧葡萄糖正电子发射断层扫描（FDGPET/CT）对直径小于5 mm的淋巴结亦不敏感[2]。因此，预测微淋巴转移意义重大。淋巴管的生成往往与淋巴转移有关，但淋巴管的研究因缺乏特异性标志物而受到限制。最近发现几种新型淋巴管内皮选择性标志物：跨膜蛋白淋巴管内皮透明质酸受体-1（LYVE-1）、转录因子-1（Prox-1）和肾小球足细胞膜黏蛋白（podoplanin）[3]，但各自的特异性不一。D2-40是一种源于抗癌胚抗原M2A的IgG2a新型单克隆抗体，能特异性识别Podoplanin[4]。D2-40抗体特异、强烈地标记淋巴管内皮细胞，有利于在恶性肿瘤中识别淋巴转移的存在[5]。最近被肿瘤学家公认为淋巴管内皮最特异的标志物[6]。本实验采用D2-40单克隆抗体，对宫颈鳞癌组织淋巴管分布规律进行了研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2007年10月～2009年11月手术切除的宫颈浸润鳞癌组织63例（湘雅二医院），正常宫颈组织11例（临湘市人民医院）。年龄32～70岁，中位年龄43岁；FIGO分期：Ⅰa2期2例，Ⅰb1期26例，Ⅰb2期8例，Ⅱa期25例，Ⅱb早期2例；病理分级：Ⅰ级6例，Ⅱ级32例，Ⅲ级25例；淋巴转移：有转移29例，无转移34例。所有标本均为经中尔马林固定、石蜡包埋的标本。

1.2 方法

1.2.1 仪器和试剂采用朗珈牌显微照相系统。即用型D2-40鼠抗人单克隆抗体、试剂盒均购自北京中杉金桥生物工程有限公司。DAB显色试剂盒为maxin-bio公司产品，购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.2.2 实验方法将蜡块切成4 μm的薄片，应用免疫组化P-V二步法染色：严格按照试剂盒说明书中的操作程序进行。

本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文

1.2.3 结果判定由两位病理医师盲法检测LVD计数。D2-40阳性染色定位于淋巴管内皮细胞，呈棕褐色。以D2-40染色观察淋巴管形态及分布情况，分别测定癌组织内、癌旁及正常宫颈组织内的LVD。具体为：先采用低倍物镜（100倍）下观察，确定5个着色最密集的区域，即热区。然后在高倍物镜（200倍）下计数D2-40阳性脉管数，取平均值。

1.3 统计学处理

采用SPSS 17.0统计软件进行t检验、近似t检验、Wilcoxon秩和检验和Kruskal-Wallis H检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

宫颈浸润鳞癌组织内、癌旁及正常宫颈组织内均有淋巴管分布。D2-40阳性染色定位于淋巴管内皮细胞的胞浆和胞膜。D2-40染色阳性淋巴管呈棕褐色，有一个扩大、缺乏红细胞的管腔，管腔内可见到癌栓，而血管不着色（图1）；且可见癌细胞浸润D2-40阳性淋巴管（图2）及管腔内癌栓表面附有D2-40阳性淋巴管内皮细胞（图3）的现象。

淋巴管在宫颈浸润鳞癌中的分布不均匀，大多数瘤内淋巴管呈闭锁、扁平、裂隙状（图4）；瘤周淋巴管则呈扩大、膨胀、不规则状；而正常宫颈组织的淋巴管则比较规则。

宫颈浸润鳞癌癌组织内（7.21±2.30）及癌旁LVD（9.71±2.07）均明显高于正常宫颈组织LVD（1.55±1.04），差异有高度统计学意义（Z值分别为-5.101、-5.308，P=0.000 ）。癌旁LVD明显高于癌组织内，差异有高度统计学意义（Z=-5.778，P=0.000）。

2.1 宫颈浸润鳞癌癌组织内LVD与临床病理参数的关系

病理分级：高、中、低分化三组的癌组织内LVD差异有高度统计学意义（H=23.602，P=0.000）；经Nemenyi法两两比较：各组之间差异均有高度统计学意义（χ2值分别为18.41、12.76、504.52，均P＜0.005）。淋巴转移：有转移组的癌组织内LVD明显高于无转移组，差异有高度统计学意义（近似t=-4.340，P=0.000），而与年龄、FIGO分期、肿瘤直径、间质浸润深度、有无癌栓等无关（均P＞0.05），见表1。

2.2宫颈浸润鳞癌癌旁LVD与临床病理参数的关系

病理分级：高、中、低分化三组的癌旁LVD差异有高度统计学意义（H=13.762，P=0.001）；两两比较：高、低两组之间的差异有高度统计学意义（χ2=12.18，0.005＜P＜0.010）；中、低及中高两组之间均无统计学意义（χ2值分别为，5.45、4.69，0.05＜均P＜0.10）。间质浸润深度：浅、中、深肌层三组之间的癌旁LVD差异有统计学意义（H=10.034，P=0.007）；两两比较：浅、深两组之间的差异有统计学意义（χ2=6.58，0.025＜P＜0.05）；浅、中两组之间的差异无统计学意义（χ2=0.794，0.50＜P＜0.75）；中、深两组之间的差异无统计学意义（χ2=5.64，0.05＜P＜0.10）。淋巴转移：有转移组的癌旁LVD明显高于无转移组，差异有高度统计学意义（t=3.306，P=0.002）；而与年龄、FIGO分期、肿瘤直径、有无癌栓等无关（均P＞0.05）。见表1。

表1 宫颈浸润鳞癌组织内及癌旁LVD与临床病理参数的关系

注：P为Wilcoxon秩和检验；P为t检验；P：Kruskal-Wallis H检验

3 讨论

宫颈癌早期转移以淋巴转移为主。随着淋巴管内皮细胞特异性标志物的发展和淋巴内皮细胞分离、培养技术的改进，淋巴管在宫颈癌转移中的作用正逐渐成为研究热点。D2-40是一种IgG2a型新型鼠单克隆抗体，能识别表达在人类滤泡树突状细胞的黏液性跨膜糖蛋白：Podoplanin。能在福尔马林固定、石蜡包埋组织和实体瘤淋巴管密度研究异性识别淋巴管[7]。

3.1 宫颈鳞癌中淋巴管分布的意义

本实验中，我们用D2-40单克隆抗体标记淋巴管，发现D2-40染色阳性淋巴管呈棕褐色，有一个扩大、缺乏红细胞的管腔，癌栓可在管腔内被观察到；管壁通常是不规则的，由单层内皮细胞构成，每个细胞含有一个大的、挤出的核。相反，血管不着色，管腔内含大量红细胞，管壁通常是厚、规则的，并包含扁平核的内皮细胞。这与Gombos等[7]的研究一致，说明D2-40单克隆抗体对淋巴管特异性强。另外，癌栓多位于淋巴管内，反映早期宫颈癌以淋巴转移为主。切片中可见癌细胞浸润D2-40阳性淋巴管；管腔内癌栓表面可见D2-40阳性淋巴管内皮细胞的现象，推测可能的原因是癌细胞在浸润淋巴管时，淋巴管的内皮细胞可能被附着癌栓上，使管腔内癌栓表面可见D2-40阳性淋巴管内皮细胞。目前肿瘤内是否有淋巴管报道不一，大多数人认为肿瘤内无淋巴管存在，仅在癌边缘及癌旁组织中发现毛细淋巴管；但少数人研究发现肿瘤内存在淋巴管。本研究中宫颈浸润鳞癌组织内存在淋巴管，我们认为这可能与不同肿瘤的组织类型有关。我们发现瘤内淋巴管呈闭锁、扁平、裂隙状，而大多数瘤周淋巴管呈扩大、膨胀、不规则状。推测可能由于肿瘤细胞快速增殖致肿块增长迅速，使新形成的淋巴管处于高基质静水压下，导致癌组织内的淋巴管闭锁呈扁平、裂隙状；同时由于瘤周组织结构松散、管壁薄，微淋巴管容易受到肿瘤细胞侵蚀而损害其完整性，导致癌旁淋巴管呈扩大、膨胀、不规则状[8]。

3.2 宫颈浸润鳞癌癌组织内LVD及癌旁LVD与临床病理参数的关系

3.2.1 两者之间的共性本研究结果显示，宫颈浸润鳞癌组织内及癌旁LVD均明显高于正常宫颈组织，且均与淋巴转移有关。提示可能在宫颈鳞癌细胞分泌的淋巴管生长因子VEGF-C/D的调节下，淋巴内皮细胞经过增殖、迁移形成新的管腔。新形成的淋巴管与正常生理条件下的淋巴管结构相似，但数量更多、管壁更薄、渗透性更强，这些特征有利于肿瘤细胞转移。癌组织内的淋巴管可能在肿瘤生长早期当间质静水压尚未高到可阻塞它时，为肿瘤细胞转移提供直接途径；而更多膨胀的癌旁淋巴管为瘤细胞转移至区域淋巴结进一步提供途径[3，8]。癌组织内及癌旁LVD均明显高于正常宫颈组织，还提示新生淋巴管形成可能与宫颈癌的发生有关。我们发现癌组织内及癌旁LVD均与病理分级有关，中低分化组明显高于高分化组。推测可能的原因是中、低分化的宫颈鳞癌细胞恶性程度更高，分泌更多的生长因子诱导淋巴管形成和淋巴转移[8]。

3.2.2 两者之间的个性本实验中发现癌旁LVD明显高于癌组织内，推测可能由于癌边缘组织分泌的生长因子更多。Gombos等[7]发现宫颈癌浸润边缘部位VEGF-C的高表达可诱导癌旁高LVD形成，导致宫颈癌的浸润性和淋巴转移增加。有研究表明了用单克隆抗体阻断淋巴管生长因子VEGF-C/D-VEGFR-3信号传导通路可抑制肿瘤淋巴管形成和淋巴转移[9]，本研究与之一致。另外，癌旁LVD还与宫颈间质浸润深度有关，深肌层的LVD明显高于浅、中肌层。宫颈深部肌层浸润是宫颈癌术后复发的高危因素之一，提示可能高的癌旁LVD与宫颈鳞癌的侵袭行为有关，促进宫颈癌进一步发展。

综上所述，宫颈鳞癌组织内的淋巴管分布存在一定的规律性，淋巴管生成可能在宫颈鳞癌的发生、发展和淋巴转移中起重要作用，且癌旁淋巴管的作用更强。

本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文

[参考文献]

[1]曹泽毅.中华妇产科学[M].北京:人民卫生出版社,2008:2012.

[2]Mitchell DG, Snyder B, Coakley F, et al. Early invasive cervical cancer MRI and CT predictors of lymphatic metastases in the ACRIN 6651/ GOG 183 intergroup study [J]. Gynecol Oncol,2009,112(1):95-103.

[3]Sebastian F. Schoppmann, Peter Birner, Johannes Stckl, et al. Tumor-associated macrophages express lymphatic endothelial growth factors and are related to peritumoral lymphangiogenesis [J]. Am J Pathol,2002,161(3):947-956.

[4]Vanessa FZ Marinho, Konradin Metze, Fernanda SF Sanches, et al. Lymph vascular invasion in invasive mammary carcinomas identified by the endothelial lymphatic marker D2-40 is associated with other indicators of Poor prognosis [J]. BMC Cancer,2008,8:64-87.

[5]Kimberly L Dumoff, Christina Chu, Xiaowei Xu, et al. Low D2-40 immunoreactivity correlates with Lymphatic invasion and nodal metastasis in early-stage squamous cell carcinoma of the uterine Cervix [J]. Modern Pathology,2005,18(1):97-104.

[6]Jian-guo Sun, Yan Wang, Zheng-tang Chen, et al. Detection of lymphangiogenesis in non-small cell lung cancer and its prognostic value [J]. J Exp Clin Cancer Res,2009,28(1):21-45.

[7]Zoltan Gombos, XiaoWei Xu, Christina S. Chu, et al. Peritumoral lymphatic vessel density and vascular endothelial growth factor c expression in early-stage squamous cell carcinoma of the uterine cervix [J]. Clinical Cancer Research,2005,11(23):8364-8371.

[8]Shi-qian Zhang, Hao Yu, Lin-lin Zhang. Clinical implications of increased lymph vessel density in the lymphatic metastasis of early-stage invasive cervical carcinoma: a clinical immuneohistochemical method study [J]. BMC Cancer,2009,9:64-79.

[9]Hoshida T, IHosaka N, Hagendoorn J, et al. Imaging steps of lymphatic metastasis reveals that vascular endothelial growth factor-C increases metastasis by increasing delivery of cancer cells to lymph nodes: therapeutic implications[J].Cancer Res,2006,66:8065-8075.