包干合同范文

导语：如何才能写好一篇包干合同，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公文云整理的十篇范文，供你借鉴。

篇1

承包方：____________（简称乙方），地址_________________，企业经营者：____________。

甲乙双方根据__________________，经协商订本合同。

一、承包形式为上缴利润递增包干。

二、承包期限自_____年_____月_____日止，共______年。

三、上缴利润数额

1．乙方以________元为上缴利润包干基数，自______年起，按平均递增_____％的比例上缴利润，即_____年为________元，_____年为________元，______年为__________元。

2．上缴利润后剩余部分，全部留给乙方，由乙方首先归还国歌，然后建立生产发展基金、奖励基金和职工福利基金。各项基本比例为：

生产发展基金

奖励基金

福利基金

备注

年

年

年

3．乙方完不成上缴利润时，其差额由乙方用当年留利抵交。不足时，用企业资金抵交。

四、承包期间，乙方保证完成国家的指令性计划：_______________________________。

五、主要经济技术指标

1．乙方保证______年达到_________企业标准，______年达到_________企业标准。

2．承包期间，新增固定资产总额为________元，其中______年________元，______年_________元，______年________元。

3．新产品开发数分别为：________年_____个，________年_____个，_________年_______个；主要项目是_________新产品产值率为：______年________，_____年________，_____年_________。

4．承包期间技术改造投资总额共________元，新增总产值________元，利润________元。

5．承包期间产品质量达到______级标准，新创____________________。

六、承包期间，甲方有权对乙方的经营管理活动进行监督和检查；有权_________________。

承包期间，甲方必须尊重乙方自主权，不干预乙方正常经营活动；并帮助乙方解决下述问题：_______________。

七、承包期间，乙方享有国家法律、法规、政策规定的经营管理自主权。

企业经营者_________为乙方法定代表人，对企业经营管理中的下列事项，有依法自主决定的权利：

（一） ____________________________________________；

（二）_____________________________________________；

（三）_____________________________________________。

八、违约责任

1．甲方无理干扰乙方的生产经营活动，给乙方造成损失的，从上缴利润中扣除赔偿金额。赌偿金的计算方法为__________

2．甲方不按合同第_____条规定为乙方解决________问题时，按_________的______％交付违约金，违约金从上交利润中扣除。

3．乙方未按合同完成上缴利润总额或年度上缴利润额，按下述办法交付违约金：_____________________。

4．乙方未实现第______条规定的经济技术指标的，按下述办法纳违约金；未实现企业升级时，_________；新增固定资产达不到规定数额时_________；技术改造任务未完成时，____________；产品质量未达到规定标准时，______________。

5．乙方承包期间，给企业财产造成损害的，按下述办法支付赔偿金：____________。

九、企业经营者的奖惩

乙方完不成承包指标时，分别下列情况对企业经营者进行处罚：

1．___________________________________________________。

2．___________________________________________________。

3．___________________________________________________。

4．___________________________________________________。

乙方完成或超额完成承包指标时，分别下列情况，对企业经营者进行奖励：

1．___________________________________________________。

2．___________________________________________________。

3．___________________________________________________。

4．___________________________________________________。

十、合同的变更和解除

1．___________________________________________________。

2．___________________________________________________。

3．___________________________________________________。

4．___________________________________________________。

十一、争议的解决方式

因本合同发生争议时，双方应协商解决，协商不成时，以下列第______种方式解决

1．交___________仲裁委员会仲裁；

2．交___________法院审判。

十二、本合同自_____时起生效。

合同正本一式2份，甲、乙双方各执1份，副本一式_____份，分送______________。

甲方：（公章）__________________

地址：__________________________

法定代表人（签章）：____________

人（签章）：________________

乙方：（公章或个人签章）________

地址：__________________________

企业经营者（签章）：____________

签约日期：_______年____月_____日

篇2

承包方：_________，简称乙方；

企业经营者：_________。

甲、乙双方根据_________，经协商签订本合同。

一、承包形式

上缴利润定额包干，超额全留。

二、承包期限

自_________年_________月_________日起至_________年_________月_________日止，共_________年。

三、上交利润定额

1．乙方在_________年内，上交利润总额为_________元。其中，_________年_________元，_________年_________元，_________年_________元。

2．超出定额部分的利润，全部留给乙方。

3．乙方应根据留利数额，建立生产发展基金，奖励基金和福利基金。三项基金的比例为：_________。

四、经济技术指标

_________。

五、技术改造任务

_________。

六、承包前债权债务的处理办法

_________。

七、贷款归还办法

_________。

八、承包期间，甲方有权根据法律和合同的规定监督检查乙方的生产经营情况；有权_________；承包期间，甲方不得在法律和合同的规定之外随意干涉乙方的生产经营活动并有义务_________。

九、承包期间，乙方享有国家法律、法规、政策规定的经营管理自主权。企业经营者为乙方法定代表人，对企业经营管理中的下列事项，有依法自主决定的权利：_________。

十、违约责任

_________。

十一、对企业经营者的奖惩

_________。

十二、争议的解决办法

_________。

十三、其他有关事项

_________。

十四、本合同自_________时起生效。合同正本_________，副本_________。

甲方（盖章）：_________乙方（盖章）：_________

法定代表人（签字）：_________　法定代表人（签字）：_________

_________年____月____日_________年____月____日

签订地点：_________签订地点：_________

篇3

关键词：公路工程；单价和包干混合式合同；管理模式；应用

引言

采用单价和包干混合式合同管理模式进行公路工程建设时，除了合同所规定的分部分项工程在变更后可以相应调整单价外，其他分部分项工程无论变更与否均实行按固定总价包干。

1 单价和包干混合式合同管理模式的基本做法

1.1 合同有关规定 就公路工程而言，特殊防护加固工程、挡土墙、红线范围以外的改路、改河、改渠、管线改移等工程、桥梁结构、桥梁桩基础、涵洞、通道或渡槽、隧道工程、供、配电工程、收费、监控、通信三大系统工程以及照明和消防工程等分部分项工程都适合采用单价形式进行招标和结算，即构成单价项目，发生变更后允许相应增加或减少单价，从而引起合同总价的变化。

除此之外的分部分项工程构成包干项目。

1.2 合同配套措施 招标人在招标文件中设置了“风险金”项目，并列入工程量清单中，规定由投标人根据自身经验和实力，在仔细研究招标文件和勘察工程现场，并充分预测工程实施成本及潜在风险后自行报价。此外还规定，对主要材料市场价格变动超过一定范围时，除了对单价项目调价外，还应按施工图在合同工期内对包干项目程给予调价。

1.3 单价项目和包干项目划分的影响因素 在选择和界定单价项目与包干项目范围时，主要考虑以下几个方面因素：

（1）国家政策、法律法规的变化等投标人无法预测其变化，或即使能预测其变化却难以预测其变化规模的因素；

（2）大型结构物的增设或取消、隧道围岩地质出现异常情况等一旦发生变更对造价影响较大，承包商在竞争性投标报价中又难以充分考虑的项目；

（3）挡土墙、边坡特殊防护等以目前的勘察设计普遍水平仍然无法保证达到包干深度的工程项目；

（4）附属设施的预留、预埋及暂定工程量项目等由招标人（业主）自行预测和把握今后随方案改动而作变更的项目；

（5）原材料市场价格波动幅度过大等投标人无法掌控的情况。

2 单价和包干混合式合同管理模式遇到的问题

2.1 有些承包商对新的合同条件还不能完全适应 单价与包干混合式合同把工程量变化的风险更多地归给了承包商，把施工生产要素价格变化的风险更多地归给了业主。一些承包商管理不善，重视不够，风险应对的能力较差，特别当出现包干项目变更增加造价较多的情况时，一些项目部在生产要素投入上缺乏自，其上级单位的支持和扶助如不能及时到位，现场组织会比较困难。

2.2 有些承包商将包干后的成本风险失误，导致内部管理不畅 承包商将包干后的成本风险转嫁到下属作业队身上，由于工程分包和劳务协作队伍的实力参差不齐，分包和劳务管理行为还有待规范，大部分作业队无法承担也不愿意承担包干的风险，因此在施工到了一定阶段后，承包商内部合同争议和经济纠纷明显增多，甚至出现作业队拖欠农民工工资，停工要挟项目部追加合同工程款的情况，对工程进度影响较大。

2.3 部分工程变更内业资料的完善不够及时 由于包干项目变更后合同价款没有变化，承包商对这些变更的资料手续大都不够重视，个别严重的合同段还影响到计量支付工作的顺利进行，增加了各方管理工作难度。

3 单价和包干混合式合同管理模式应用成效

3.1 变更及变更引起的调价问题及合同争议明显减少 采用单价和包干混合式合同后，对大量包干项目来说，由于工程变更不涉及实际支付价款的变化，因而变更办理的重点主要是方案论证和施工图设计，对方案经济方面比较的要求较为粗旷，不容易出现争议，这样就大大提高了变更处理效率，有关人员可以把更多的时间和精力放在其他管理事务上。

3.2 促进提高勘察设计水平 采用单价和包干混合式合同的公路工程项目，业主要选派专人组成班子，重点对现场勘察工作进行跟踪，力图使这些方面的勘察更加细致和深入；要按照业主针对以往工程设计缺憾提出的补充要求和提示，额外增加了部分工作内容，特别是对部分软基进行逐处挖探摸查，对部分地质复杂地段增加地质钻孔，对地形变化较大路段进行断面加密测量，对图纸工程量和招标工程量清单进行多次校核等。

3.3 促进施工企业改善现场组织与管理 绝大部分施工企业对单价和包干混合式合同条款予以了高度重视，主要体现在现场技术力量有所加强、更加注重现场组织管理的效率、更加重视成本管理以及优化设计积极性有所提高等方面。在实行单价合同时曾经发生的一些不良现象，如有些承包商不注意保护和及时支护隧道软弱围岩，个别承包商甚至通过制造塌方险情，以谋求工程变更追加工程量来获取额外利润等现象在四平―松原高速公路工程现场已经基本杜绝。

3.4 减少变更及变更调价等问题的人为因素防范腐败 采用单价和包干混合式合同显著减少了该环节的人为因素，由于合同活口少，执行起来透明度大为提高，许多问题连协商的余地都没有，“找关系”、“托人情”、“走后门”的法子就更行不通了，对利益的追求只有通过在管理上找效益来实现。实行单价和包干混合式合同管理模式，只是力图从某项制度的源头上防范腐败的一种尝试，其最终效果如何，还有待时间的检验。

参考文献

［1］张泽江,刘剑.总价包干施工总承包合同计量支付方式的探讨［J］.山西建筑,2008,（09）.

［2］曹巍.论推行施工图招标采用总价包干合同模式的现实意义［J］.建筑经济,2003,(01).

［3］唐小富.公路工程项目计量支付的管理［J］.公路与汽运,2004,(06)

篇4

各省、自治区、直辖市环境保护厅（局），新疆生产建设兵团环境保护局，环境保护部各环境保护督查中心，中国石油和化学工业联合会，中国农药工业协会，各草甘膦（双甘膦）生产企业：

为贯彻落实《国务院关于加强环境保护重点工作的意见》（国发〔2011〕35号）和《关于深入开展重点行业环保核查 进一步强化工业污染防治工作的通知》（环发〔2012〕32号），进一步提升我国草甘膦行业污染防治水平，我部决定开展草甘膦（双甘膦）生产企业环保核查工作，并符合环保要求的草甘膦（双甘膦）生产企业名单公告，现将《草甘膦（双甘膦）生产企业环保核查指南》（以下简称《指南》）印发给你们，请遵照执行。

一、工作要求

（一）企业自愿申请环保核查

草甘膦（双甘膦）生产企业环保核查以自愿为原则。企业可对照《指南》开展自查自纠，全面分析、查找存在的环保问题，尽快完成整改。经过自查，符合要求的企业可以向所在地省级环保部门提交《草甘膦（双甘膦）生产企业环保核查申请表》（附表1：详见环保部网站）及相关证明材料。

（二）省级环保部门开展核查初审

各省级环保部门负责对辖区内提交申请的草甘膦（双甘膦）生产企业进行初审。初审以日常环保监管情况为基础，结合企业申报材料，对照《指南》进行书面审查和现场检查。对经初审符合环保要求的企业，省级环保部门应将初审意见及企业申请材料一并报送我部，同时抄送中国农药工业协会。对初审中发现存在环境问题的企业，环保部门应加强指导，督促整改；发现违法行为的应依法予以处罚。

（三）环境保护部复核并公告

我部与中国石油和化学工业联合会、中国农药工业协会组织有关专家，对通过省级环保部门初审的企业进行复核，并组织各环境保护督查中心进行现场抽查。对符合环保法律法规要求、清洁生产水平较高的企业，向社会公示5个工作日，接受社会各界监督。经公示无异议的，我部公告符合环保要求的草甘膦（双甘膦）生产企业名单，并将名单抄送工业和信息化部、农业部、商务部、质检总局等部门。

我部定期对通过环保核查的草甘膦（双甘膦）生产企业进行复查和抽查，如发现不符合本《指南》要求的，将撤销其名单并予以公告。

二、时间安排

（一）2013年安排

草甘膦（双甘膦）生产企业应于7月30日前向所在地省级环保部门提交环保核查申请表和相关证明材料，各省级环保部门应于9月30日前将通过初审企业名单及相关材料（附电子版）报送我部，我部将于12月底前公告符合环保要求的草甘膦（双甘膦）生产企业名单。

（二）2014-2015年安排

我部继续开展草甘膦（双甘膦）生产企业环保核查，企业应于每年3月底前向省级环保部门提出核查申请，各省级环保部门应于每年6月底前向我部报送通过初审企业名单，我部于每年9月底前符合环保要求的草甘膦（双甘膦）生产企业名单。到2015年底前，基本完成对草甘膦行业全面环保核查，公告3批符合环保要求的草甘膦（双甘膦）生产企业名单。

联系人及联系方式：

环境保护部污染防治司王晓密

电话：（010）66556298, 66556244（传真）

邮箱：

地址：北京市西直门内南小街115号

邮编：100035

中国农药工业协会曾途

电话：（010）84885918，84885001（传真）

邮箱

地址：北京市朝阳区安慧里四区十六楼919房间

邮编：100723

环境保护部办公厅

2013年5月21日

附件

草甘膦（双甘膦）生产企业

环保核查指南

为贯彻落实科学发展观，维护生态环境安全，保障人民群众身体健康，提升草甘膦行业污染防治水平，指导草甘膦企业环境保护核查工作，制定本核查指南。

一、核查范围

本指南适用于对草甘膦、双甘膦原药生产企业开展环保核查，符合环保要求的草甘膦（双甘膦）原药生产企业名单公告工作。

二、核查内容

各省级环保部门应根据日常环保监管情况，对企业申请核查当年及上一年度环保法律法规执行情况、环保治理设施完备性和运行效果进行现场核实：

（一）环保法律法规执行情况

1.建设项目环境影响评价和“三同时”制度执行情况。包括新、改、扩建项目是否依法履行环评审批及竣工环保验收制度，环境影响评价文件批复和环保验收意见中的要求是否逐一得到落实等。

2.污染物排放总量控制制度执行情况。包括企业是否完成主要污染物总量减排任务，各项污染物排放是否满足国家和地方污染物排放总量控制指标和排污许可证管理要求。

3.达标排放情况。包括环保治理工艺技术是否可行，环保设施是否齐全并与主体生产设施同步运行；企业是否执行了环评报告或环保部门规定的监测计划；是否按有关要求安装在线监测装置并与环保部门联网；废水、废气、噪声等各项污染物是否达标排放；固体废物是否规范收集、贮存（暂存）、转移和综合利用或无害化处置，委托处置危险废物的，是否依法执行危险废物转移联单制度、是否交由有资质单位利用和处置等。

4.排污申报登记、排污许可证和排污缴费制度执行情况。包括是否进行排污申报登记；是否领取排污许可证，并达到排污许可证的要求（实行排污许可证制度的，由省级环保部门在初审意见中予以说明）；是否按规定足额缴纳排污费。

5.实施清洁生产情况。是否依照《清洁生产促进法》开展清洁生产审核，并将审核结果向所在地县级以上环保部门报告；是否通过评估验收；是否依照《清洁生产促进法》和《环境信息公开办法（试行）》及相关规定，披露企业基本信息、主要污染物排放情况、环保设施建设运行情况、环境污染事故应急预案以及清洁生产审核结果等信息。

6.环境违法或重大突发环境事件情况。包括是否因环境问题被环保部门责令限期治理、限产限排或停产整治；是否受到环保部门处罚；是否发生重大及以上突发环境事件；是否存在对企业环境问题的投诉且尚未解决。

7.环境管理制度。包括企业是否有健全的环境管理机构和环境管理制度；是否按规定制定环境风险应急预案，应急设施、物资是否齐备，是否定期培训和演练等。

（二）企业环保工艺和设备

1.废气回收和治理设施：甘氨酸工艺草甘膦生产企业是否建有氯甲烷、甲醇、三乙胺、甲缩醛等回收利用装置；IDA工艺草甘膦生产企业是否建有氨或氢回收利用装置，含甲醛、氨、氯化氢等污染物尾气是否建有相应的废气处理设施、并做到达标排放等。

2.废水治理设施：企业是否建有物化除磷、生化处理等废水处理设施、并做到达标排放等。

3.母液回收处理装置：企业是否建有和原药生产能力相匹配的双甘膦、草甘膦母液回收处理装置（回收氯化钠和磷资源）。

4.固体废物贮存（暂存）场所和处理、处置设施：各类废液、废渣等固体废物（包括草甘膦母液、废水处理产生的含磷污泥、废活性炭、农药包装物等）是否按照环保标准规范贮存（暂存）；使用自有焚烧炉对产生的危险废物进行焚烧处置的，是否符合《危险废物焚烧污染控制标准》（GB18484-2001）；采取其他方式对危险废物利用处置的，是否符合相关环保管理要求；母液是否违规被用于生产草甘膦水剂等。

篇5

    再保险(reinsurance)系保险人以其所承保的危险, 转向他保险人为保险的契约行为,可谓为“保险之保险”(the insurance of insurance)。“其……对于再保险人而言,则有达成危险分散、节减营业费用与获致优厚利润之效能;而对原被保险人,亦有加强安全保障、简化投保手续及提高企业信用之功能。故曰保险经营的成败,端视再保险的运用妥当与否,实非虚言。”(注:袁宗尉:《再保险论》,台湾三民书局1972年版,第12页。)再保险合同及运用,均较一般保险合同更为精密、复杂且多变化,其影响之深远足以左右保险事业的发展,然而在国内并未受到应有的重视。本文拟从再保险合同的概念出发,讨论再保险合同的性质,进而探讨再保险合同的独立性及从属性,以期对再保险合同有进一步的认识。

    一、再保险合同的界定

    (一)再保险合同的性质

    再保险合同虽种类繁多,方式互异,其本质究竟是什么?似乎仍有探讨的必要。关于再保险合同属性的主要学说有:

    1.合伙合同或民法上其他有名合同

    有学者认为,再保险合同为原保险人与再保险人以分担危险为共同目的之合伙合同。此说认为就其经济机能而言,原保险人与再保险人由于危险分担之结果,在利害关系上有共同性,与合伙之性质相似。易言之,再保险合同之当事人,就危险之分担、利益之获得而言,有其共同之目的,如此结合,无异合伙。再由再保险的种类观察,不论比率再保险或溢额再保险,均由原保险人对原被保险人负给付之责,正如合伙债权人对合伙体请求履行合同之责。至于原保险人与再保险人责任的分摊,均由再保险合同决定,犹如合伙合同中约定出资额的多寡决定合伙人责任的大小。此说为德、日、法等国早期判例所采用。(注:袁宗尉:《保险法》,台湾三民书局1969年版,第69页。)笔者以为,就法律要件分析,合伙乃当事人互约共同出资以经营共同事业之合同,亦即必须有共同之合伙财产,当事人亦须以经营共同事业之意思而订立合同。而事实上原保险人与再保险人之间并无共同出资,且订立再保险合同之目的亦非在经营共同事业,加之再保险人与原保险人系两独立的法人,各为合同之主体,并非两者成为一合伙体,故再保险合同非合伙合同。早期代表性之见解还有保证理论、(注:此说认为,再保险合同的从属性与保证契约从属于债权契约而存在,两者有相似之处,故认为再保险人类似于保证人之地位,若担保保险人于事故发生时拒付保险金,将由再保险人代负履行之责。)转让理论(注:此说认为,原保险人将其对原被保险人之权利义务移转给再保险人,亦即契约主体的变更。)及委任理论(注:此说认为,再保险人是受原保险人之委任,处理原保险人承担危险等事物。)等,但由再保险的各种方式观察前述理论,发现其均难以自圆其说。以比例再保险为例,原保险人将所承保之危险按一定比例分出给再保险人,由再保险人承担一部分危险,这并不能使再保险人立于保证人的地位,进而代原保险人履行合同。而转让理论对比例再保险似可圆满解释,但对溢额再保险则无法自圆其说。另外,订立再保险合同后,原保险人仍须处理理赔等工作,并非委由再保险人处理,故委任理论亦无法妥善解释再保险合同的性质。

    2.保险合同说

    由于再保险合同既非合伙亦非民法上其他有名合同,就应从再保险人与原保险人间的合同内容加以观察。由此可以发现,不论比例再保险或溢额再保险合同,均系由原保险人给付一定保险费,而由再保险人承担危险的双务合同。此合同的内容与保险合同的内容相一致,故再保险合同应为保险合同无疑。唯其属何种保险仍有以下争议:

    (1)原保险合同说。亦即同种保险说、继承说。此说认为, 再保险合同继承原保险合同而来,两者并无二致。因再保险之成立与否,仅视原保险是否存在,而其实质内容仍以原保险合同之内容为基础,亦即认为再保险合同系由两个团体承担同一危险,而构成同一利害共同体,再保险人赔偿义务与原保险人赔偿义务同时发生,再保险与原保险属于同种保险。故原保险合同若为财产保险,则再保险合同为财产保险;原保险合同为人身保险者,再保险合同仍不失为人身保险。因为其保险标的并未改变。(注:陈继尧:《再保险实务研究》,台湾三民书局1976年版,第47页。)

    (2)责任保险合同说。此说认为, 再保险系基于原保险合同中原保险人对原被保险人之给付责任,而以填补此种给付为目的之一种责任保险。因责任保险合同所保险之对象,并非被保险人于保险事故发生时所致之财产损失,而是避免其因法律或合同所负债务之增加或扩大,所保护者为消极之保险利益,亦即一种不利之关系。再保险合同对原保险人的保护,正是其依原保险合同所负之赔偿责任,故其性质应为责任保险。换言之,不问原保险为财产保险或人身保险,再保险均属责任保险。(注:[日]田边康平:《保险契约法》,台湾财团法人保险事业发展中心出版社1993年版,第116页。)

    综上所述,关于再保险合同,《中华人民共和国保险法》(以下简称《保险法》)仅有两个条文的规定。其中第28条规定:“保险人将其承担的保险业务,以承保形式,部分转移给其他保险人的,为再保险。”这是我国法律对再保险合同概念的界定。笔者认为,我国法律虽然对再保险合同的性质作出了明确规定,但上述法律条文所称“将其所承担的保险业务……转移给其他保险人”至少有以下两层含义:其一,不论原保险合同为寿险或非寿险,再保险均系基于有效合同基础之上而成立的保险合同;其二,再保险之特征为责任转嫁或分担。据此,笔者认为,我国法律虽然没有明文规定再保险合同为责任保险,但从国家立法宗旨和当事人缔约目的观察,此种合同在性质上当属责任保险合同无疑。

    (二)再保险与相似制度的比较

    为了更进一步明确再保险合同的特征,有必要比较与再保险相类似的制度——共同保险与重复保险之间的差异。

    1.再保险与共同保险。共同保险(co-insurance)是由两个或两个以上的保险人联合直接承保同一保险标的、同一保险利益、同一保险责任而总保险金额不超过保险标的可保价值的保险。共同保险的各保险人在各自承保金额限度内对被保险人负赔偿责任。再保险与共同保险均具有扩大风险分散范围、平均风险责任、稳定保险经营的功效。两者的区别在于:共同保险是多数保险人同投保人建立的保险关系,属横向联系和原保险,且为原保险的特殊形式;就风险的分散方式而言,它是风险的第一次分散,因此,各共同保险人仍然可以实施再保险。而再保险是保险人同保险人建立的保险关系,是纵向联系;就风险的分散方式而言,再保险是在原保险基础上进一步分散风险,是风险的第二次分散,并可通过转分保使风险更加细化。从历史沿革来看,共同保险的产生早于再保险。但由于再保险的融通性高且运用方便,现代保险实务中普遍采用再保险分散风险的方式。而最近的发展结果表明,共同保险与再保险并非背道而驰,反而渐趋接近,呈出现共同保险的再保险化与再保险的共同保险化之“互化”趋势。尽管如此,两种制度间的差异仍较明显。

    2.再保险与重复保险。重复保险是指投保人对同一保险标的、同一保险利益、同一保险事故分别向两个以上保险人订立保险合同的保险。重复保险虽与再保险一样具有分散风险的功能,但二者之间的差异是明显的:从缔约动机上看,重复保险的投保人若系善意,旨在增强安全保障,恶意投保人则往往在于图谋不当得利;而再保险乃原保险人为避免或减轻所负责任,所做出分散危险的制度安排。从告知义务的履行事项看,重复保险的投保人应当将重复保险的有关情况通知各保险人;而再保险分出人(原保险人)则应将其自负责任及原保险的有关情况告知再保险接受人。从超额部分保险的效果来看,重复保险中保险金额不得超过保险价值,超过保险价值的,超过的部分无效;而再保险中则可就超额约定再保险合同。总之,再保险与重复保险为两种不同的保险制度。

篇6

[关键词] 肝细胞癌；肝切除术；肝血流阻断；肝硬化

[中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）07（c）-0041-04

手术治疗一直是原发性肝癌的首选治疗方法，但是肝脏血供十分丰富，如何选择有效的减少肝脏手术中出血量和避免各种并发症的发生，不但关系着手术成功率，还影响着患者的预后。目前，临床上主要采用半肝血流阻断法和全肝入肝血流阻断法（Pringle法）。本研究比较了这两种肝血流阻断法在肝细胞癌合并肝硬化手术患者疗效和安全性，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2010年1月～2013年9月于广东省高州市人民医院行肝切除术的肝细胞癌患者80例，年龄35～86岁，平均（37.4±8.3）岁。所有患者术后病理证实均为肝细胞肝癌合并肝硬化。根据入肝血流阻断方法的不同将其分为对照组）（Pringle法）和观察组（半肝入肝血流阻断法），每组各40例。其中9例患者入院化验肝功能Child B级，给予甘利欣、谷胱甘肽等保肝治疗后，术前复查肝功能达到Child A级，患者肿瘤切除范围均不超过半叶肝。两组患者性别、年龄、肿瘤大小、Child分级一般资料比较差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。见表1。

1.2 手术方法

1.2.1 半肝入肝血流阻断法 常规开腹手术必须先明确是否存在手术禁忌证。首先充分游离肝脏，显露出十二指肠韧带，用组织剪由十二指肠韧带一侧分离肝固有动脉，继而显露肝左右动脉，并使用血管夹夹闭患侧半肝动脉。把一根乳胶管连接于肝固有动脉深面和肝十二指肠韧带，切除肝脏肿瘤细胞时一起截断门静脉、胆总管和患侧半肝动脉，并保证健侧血流的供应。手术由经验丰富的主治医师实施，止血常规采用电凝法、血管结扎等手段，切肝后检查有无活动后出血后开放入肝血流以保证手术的成功。

1.2.2 Pringle法 肝血流阻断探查、肝切除及断面止血方法同1.2.1。肝脏游离后经文氏孔绕过肝十二指肠韧带乳胶管，用乳胶管扎紧肝十二指肠的韧带，以阻断全肝血供。一般阻断的时间控制在20 min以内，开放时间5～15 min，最多阻断2次。

1.3 观察指标

分别记录两组患者手术所需时间、术中失血量、术后第3、7天的血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、（ALB）、总胆红素（TBIL）、凝血酶原时间（PT）水平等肝功能指标，并比较其术后安全性。

1.4 生活质量评估表

采用国内1990年制订的肿瘤患者生活质量评分试行草案，采用1～5级评分，1分为最差，5分为最好，得分越高生活质量越高。

1.5 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组术中情况

两组患者在术中失血量、肝门阻断总时间、手术时间及术后住院时间上差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

2.2 两组肝功能指标比较

对照组和观察组术前血清ALT、TBIL、AST、ALB及PT比较，差异无统计学意义（P > 0.05），术后第3、7天，观察组血清ALT、TBIL、AST、ALB及PT均显著低于，对照组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。见表3。

2.3 两组术后并发症及不良反应发生情况比较

两组患者均未出现大出血、感染性休克、肝衰竭。对照组术后发生肺部感染4例，胆瘘2例，腹腔积液12例。观察组术后发生肺部感染9例，胆瘘4例，腹腔积液4例。对照组术后腹腔积液发生率明显低于观察组（P < 0.05）。见表4。

2.3 两组手术前后生活质量评分

手术后观察组的总生存质量、食欲、睡眠、自理能力、心理能力、对疾病的认识评分明显高于对照组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。见表5。

3 讨论

众所周知，我国是一个肝炎大国，而大约有80%的肝炎患者为肝硬化患者。目前，一般通过各种肝血流阻断术来减少肝切除术术中的出血量，但截断入肝血流也会相应地造成肝功能不能及时恢复[1]。Pringle法和半肝入肝血流阻断法是肝胆外科常见的血流阻断技术。Pringle法主要通过完全阻断肝动脉和门静脉的入肝血流[2-3]，这也就是阻断了几乎所有的入肝血流，会造成整个肝脏功能的失代偿，特别是那些合并肝硬化的患者，严重者可能会发生肝衰竭导致死亡。临床上，虽然采用阻断的时间控制在20 min以内，开放的时间在5～15 min，至多阻断2次。尽管间歇地阻断入肝血流在一定程度可以改善肝脏的缺血缺氧而影响其正常功能的运行，但在开放的5～15 min会使较多的创面出血，造成大量失血，也会造成手术时间的增加。Pringle法简便易行，是一种比较有效的血流阻断方法，无需过多解剖肝门，操作简单、省时，紧急情况下可快速达到止血的目的，适合各级医院开展，但不适合于肿瘤已侵犯肝门或腔静脉的手术[4]。有文献指出，常规手术下切断狗的肝动脉和门静脉，20 min后会引起其上消化道大出血而死亡[5-7]。其原因可能是切断入肝血流会引起相关的病理生理现象，血流的阻断导致肝细胞影响其结构和功能，而合并肝硬化的患者对肝脏功能的影响尤为显著。

半肝入肝血流阻断法主要是选择性阻断患侧的半肝入肝血流，保留对侧半肝的正常入肝血流，阻断后可在半肝分界面上出现清晰的分界线[8]。其优点为：为进行更为精细的手术操作赢取了时间；因为只阻断患侧肝入肝血流在一定程度减轻了缺血-再灌注损伤；术后并发症较少、肝功能较易恢复，特别适用于合并有肝硬化肝癌患者的肝叶切除[9-11]。Chau等[12]指出，合并肝功能不全的患者行肝脏切除术，两种方法在减少出血方面同样安全、有效，但半肝阻断术后患者早期肝功能较Pringle法恢复更快，尤其是对入肝血流阻断时间大于45 min的患者，术后恢复更具优势。还有报道肝癌患者对照研究结果提示半肝阻断明显优于Pringle法，前者术后肝功能恢复快，并发症少[13-16]。

本研究发现，两组患者手术时间和术中出血量相比较，差异无统计学意义（P > 0.05），但术后观察组第3、7天的血清ALT、TBIL水平明显低于对照组（P < 0.01）。观察组术后并发症发生率明显低于对照组（P < 0.05）。这些提示半肝入肝血流阻断法与Pringle法相比，不但减轻了肝脏缺血再灌注损伤的程度，还加快了术后肝功能的恢复。故在今后的手术中，对于原发性肝癌合并肝硬化的患者，都可以采取半肝入肝血流阻断法进行肝脏手术，会在一定程度上改善患者预后的速度。此外，观察组术后生活质量评分明显高于对照组（P < 0.05）。这提示与Pringle法相比，半肝入肝血流阻断法在一定程度上增强了患者手术后心理、生理的恢复，能更好地提高患者的生活质量。

综上所述，半肝入肝血流阻断法手术解剖分离等操作简单、安全且疗效显著，并能有效控制术中出血量和减少术后并发症的发生，术后的肝功恢复较快，值得在临床上大力推广。

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改善中小企业融资老大难问题到底路在何方？近日，宝瑞通典当行用一场黄金盛宴交出了答卷。

1月10日，宝瑞通典当行在西坝河总店开启了以“宝瑞通贺岁感恩，四重豪礼大回馈”为主题的黄金特惠活动。活动中，宝瑞通西坝河店以238元/克的国际金价回馈老客户，同时在所有分店推出了黄金典当息费低至6折和黄金典当价格提高等一系列黄金典当优惠举措，满足年末广大客户典当融资的需求。

除了黄金销售之外，宝瑞通此次重点推出黄金典当业务升级举措，在之前的优惠基础上又加大了对小微企业的扶持力度。黄金典当息费6折起，老客户息费低至2.9%；同时黄金典当价格也有所提高，黄金保真的情况下，典当价格最高可达到黄金交易所报价的90%以上，这些优惠措施对于年前着急筹措资金的中小企业主们来说，在短时间内付出更低的利息却能获得更多的资金，是个难得的机会。

“本次活动将息费降低了30%～40%，这也是2014年我们回馈广大中小企业的第一重豪礼，保守估计，仅这一项业务我们一年就将让利近千万元。”宝瑞通典当行民品经营中心总经理王德强告诉记者。目前，宝瑞通典当业务中接待的客户尤其是老客户里有将近7成是小微企业。由于企业规模等特点，选择黄金等贵金属典当融资成为小微企业快速解决资金困难的常用手段之一。宝瑞通这次感恩回馈，除了贺岁酬宾让利消费淘宝的老百姓之外，最主要的目的就是希望通过让利扶持小微企业，使他们付出更小的代价、快速融到更多资金。

小微企业是中国经济的基本细胞，占到所有企业的90%以上，他们具有数量大、类型多、灵活性强等特点，在促进增长、增加就业等方面具有不可替代的作用。“在他们的经营过程中，因发放工资、进货采购等各种原因，经常出现短期的资金缺口，融资需求旺盛。但因企业规模资质有限、难以符合银行苛刻的审核条件等局限，融资贷款难是老大难问题。这种情况下，典当行则因为放款便捷、安全稳妥的优势成为他们的首选。所以，我们一直通过拓宽渠道、创新形式、升级业务等方式不断满足其发展的需要，一方面通过让利拓宽业务渠道和中小企业共同成长，另一方面也希望困扰小微企业的融资难问题能得到一些缓解。” 宝瑞通典当行王德强向记者介绍。

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考古发掘现场（以下简称发掘现场）动态监测系统由发掘现场动态环境监测系统和发掘现场无线实时监测平台两部分组成。

发掘现场无线实时监测平台发掘现场无线实时监测平台的作用是为发掘现场监测子系统提供实时的数据支持，由发掘现场硬件平台和发掘现场软件平台两个部分组成。发掘现场无线实时监测硬件平台由传感器节点、中继节点和网关三个部分组成：布置在现场的数据采集节点负责采集实时环境数据（如大气温湿度、光照强度、降尘和有害气体等），按照一定的路由规则将数据发送至通信范围内的父节点，然后通过中继节点的相互中继，将数据不断转发直至到达网关节点。网关节点通过远程通信方式，如卫星通信、Internet、GPRS等手段，将数据传送至远程客户终端。其中各个数据采集节点和中继节点根据RSSI（接收信号强度指示）和跳数来选择合适的中继节点作为父节点，并以此在数据采集节点和中继节点间建立簇内星状网络拓扑结构，中继节点之间则根据RSSI值建立树状网络拓扑结构。每个传感器节点和中继节点在上电后自动加入网络，并定期将采集到的数据沿最优路由方向传送至网关。发掘现场实时监测软件平台则由中间件、数据库和数据采集接口三个部分组成。数据采集接口将接收到的实时监测数据存入数据库中，中间件的作用则是将数据库中保存的监测数据取出，并提供给用户和子系统。

发掘现场环境监测系统由于监测系统需要对发掘现场的内外环境同时进行监测，因此发掘现场监测子系统由环境监测子系统和气象监测子系统组成。环境系统检测子系统主要是针对文物所处环境参数，如大气温度、大气相对湿度、土壤温度、土壤水分含量、文物表面温度、文物表面湿度、大气二氧化碳浓度、有机挥发物总量等参数进行监测。气象监测子系统主要是针对发掘现场所处小环境的气象参数，如光照度、紫外线强度、风速、风向、降雨量等参数的实时监测。监测系统的目的在于对文物所处环境的各种参数进行数据挖掘整理，精确掌握文物埋藏的环境参数，实现对出土文物在第一时间的检测分析以及文物出土环境参数的采集，建立环境参数历史数据库，为文物预防性保护提供技术支撑，并为文物保护措施的制订提供科学依据。

案例研究

凤栖原文物保存环境监测数据分析凤栖原张安世墓葬遗址属于西汉宣帝时期的重臣、被封富平侯的大司马将军张安世。张安世在西汉的地位举足轻重，其墓葬的出土文物进一步证实了这一点，出土的很多随葬品都属于西汉皇帝御赐物件。根据发掘现场实际状况及需要，目前已部署七个监测点，监测时段大约在八个月左右，监测点部署图如下（图4）。数据记录及分析3月份期间，凤栖原张安世墓葬遗址气象站监测数据存在较大波动（图5）。其中3月19日-3月21日期间，环境温度基本保持在4℃左右，环境湿度基本保持在100%，波动均不大，光照变化范围也缩减至0-2000lx之间。结合当时的天气变化，3月天气刚刚由寒转暖，气候变化较频繁，3月19日-3月21日是降雨天气，持续阴天，光照度较低，导致空气中水分蒸发较少。3月22日停止降水后，光照开始恢复，环境湿度逐渐下降，气温也逐渐回升（因水分挥发缓慢，恢复的较为迟缓）。总体来看，3月份气象站的大气温度变化为0℃到23℃之间，大气湿度在16%到75%之间，每天的照度变化最大范围0lx到8500lx内，气象站数据与环境数值较一致，温度、湿度、光照度也保持合理的变化趋势。环境变化正常，期间出现的特殊变化，多是天气变化引起的。查看这一段时间82号监测点的土壤温度和含水量的变化，遗址坑内的土壤温度和土壤水分含量变化波动较大（图6），其中3月19日-3月21日土壤水分含量逐渐升高（由4.34%上升至4.65%），土壤温度也随之逐渐降低（由10.5℃下降至5℃）。结合气象站的监测结果看，3月天气变化频繁，3月19日-3月21日为降雨天气，室内土壤虽然不直接受到降雨给监测数据带来的骤然变化，但由于受到外界土壤水分的渗透作用，土壤温度和水分含量也随之以相同的趋势逐渐变化。3月22日停止降水后，土壤水分含量逐渐下降，土壤温度也逐渐回升。总体来看，土壤温度在5.2℃到13℃范围之间、土壤含水在4.3%到4.65%范围之间保持着较为稳定的变化，并且二者保持相符的变化趋势。期间出现的特殊变化，多是天气变化引起的（可查看气象站数据变化）。查看这一段时间90号监测点的大气温湿度变化，3月期间遗址环境的大气温湿度波动较大（图7）。其中3月19日-3月21日，大气温度由10℃骤降至1℃，大气湿度由41%骤升至98%，变图4监测点部署图化显著。结合气象站的监测结果看，3月19日-3月21日为降雨天气，大气温湿度受到直接影响带来的突然变化。3月22日停止降水后，大气温度逐渐回升，大气湿度也逐渐回落，监测点数据准确反映了监测区域的环境变化。总体来看，大气环境温度在1℃到22℃范围内、大气环境湿度在20%-98%范围内保持着稳定的变化，并且二者保持相符的变化趋势。期间出现的特殊变化，多是天气变化引起的（可查看气象站数据变化）。查看这一段时间92号监测点的大气温湿度变化，3月期间遗址环境的大气温湿度波动较大（图8）。其中3月19日-3月21日，大气温度由10℃骤降至0℃，大气湿度由50%骤升至100%，变化显著。结合气象站的监测结果看，3月19日-3月21日为降雨天气，大气温湿度受到直接影响导致突然变化。3月22日停止降水后，大气温度逐渐回升，大气湿度也逐渐回落，监测点数据准确反映了监测区域的环境变化。总体来看，大气环境温度在0℃到22.5℃范围内、大气环境湿度在20%-100%范围内保持着稳定的变化，并且二者保持相符的变化趋势。期间出现的特殊变化，多是天气变化引起的（可查看气象站数据变化）。总结对比4个监测点的数据变化，监测点的传感量数据变化和环境变化保持一致，并且与当时的天气环境较一致，说明数据正确反映了监测区域的环境变化。

高陵张栋家族墓文物保存环境监测数据分析2011年陕西考古研究院专家在高陵县泾河工业园发现一处罕见的完整明代家族墓园。据墓志记载，墓主人张栋生前为秦藩王府知印。这一发现对研究明代墓葬制度、风俗文化具有重要作用。根据发掘现场实际状况及需要，目前已部署十一个监测点，监测点部署图如下（图9）。说明：100号监测点:自动气象站--监测外界环境。52、53、54、55号监测点：大气温湿度传感器--其中53号监测点监测墓室底部到地表中间部位的环境，其他监测点监测墓室中的环境。61、62、63、64、65号监测点：土壤温度、土壤水分含量传感器--其中65号监测点监测墓室底部到地表中间部位的环境，其他监测点监测墓室中的环境。71号监测点：二氧化碳传感器--监测墓室中二氧化碳含量。数据记录及图形分析查看这一段时间52号监测点的大气温湿度变化，5月期间遗址环境的大气温湿度波动较大（图10）。其中5月1日-5月3日期间，湿度维持在82%-93%之间，温度在17.5℃-22.5℃之间，基本保持在高湿、低温的水平，昼夜温差和湿度差较小；5月11日-5月12日温度湿度和光照度骤变，湿度由62%升至88%，温度由25℃降至最低17℃。结合气象站的监测结果看，5月为春季末尾，气温总体呈缓慢上升趋势，并偶尔伴随降雨。5月1日-5月3日、5月11日-5月12日是降雨天气，湿度很大，气温较低。无降水期间，光照逐渐充裕，环境湿度逐渐下降，气温也逐渐回升并呈上升趋势。总体来看，当月大气环境温度在16℃到35℃范围内、大气环境湿度在20%到98%范围内保持着稳定的变化，并且二者保持相符的变化趋势。监测点数据准确反映了监测区域的环境变化。期间出现的特殊变化，多是天气变化引起的（可查看气象站数据进行对比）。查看这一段时间71号监测点的二氧化碳含量变化，5月期间遗址环境的二氧化碳含量波动较大（图11）。以5月9日为分界，5月1-9日二氧化碳含量在200-450ppm之间波动较大且均值偏高，5月9-20日二氧化碳含量在200-330ppm之间波动较小且均值偏低。经调查，5月1-9日，71号监测点放置于M4考古发掘现场，现场白天有大量工作人员活动，白天由人体排放的二氧化碳使得空气中二氧化碳浓度较高，夜晚则恢复至正常水平；5月9日之后，为防止因挖掘工作破坏监测设备，工作人员将其挪至无人活动的M5内，并以不透气薄膜覆盖，给71号监测设备营造出密闭的微环境，故而二氧化碳含量偏低且波动较小。其中5月1日-5月3日期间，二氧化碳含量在300-430ppm之间变化幅度相对较小，基本保持在高湿、低温、高浓度二氧化碳的水平。经分析，因期间有降雨，空气流通不畅，故而空气中二氧化碳含量一直保持在较高水平且波动较小。结合气象站的监测结果看，监测点数据准确反映了监测区域的环境变化，并且三者保持相符的变化趋势。期间出现的特殊变化，多是天气变化引起的（可查看气象站数据变化进行对比）。查看这一段时间53号监测点的大气温湿度变化，5月期间遗址环境的大气温湿度波动较大（图12）。其中5月1日-5月3日期间，湿度维持在60%-100%之间，温度在16-28℃之间，基本保持在高湿、低温的水平，昼夜温差和湿度差相对较小；5月11日-5月12日温度湿度和光照度骤变，湿度由62%升至100%，温度由25℃降至最低17℃，之后的3天内，湿度的最高值均能达到100%。结合气象站的监测结果看，5月为春季末尾，气温总体呈缓慢上升趋势，并伴随偶尔降雨。5月1日-5月3日、5月11日-5月12日是降雨天气，湿度很大，气温较低。无降水期间，气温呈缓慢上升趋势。结合监测点的布设位置（53号节点布设在墓底部和地表中间位置），且通风不畅导致湿度在降雨之后的3天内并没有立即回落，而是逐渐降低且较其他监测点数据高。总体来看，监测点数据准确反映了监测区域的环境变化，环境变化正常。期间出现的特殊变化，多是天气变化引起的（可查看气象站数据变化）。查看这一段时间65号监测点的土壤温度和含水量的变化，坑内的土壤温度和土壤水分含量变化波动较大（图13），5月1-11日土壤水分含量保持在20-43%之间，土壤温度变化范围维持在18-21℃之间；5月12日土壤水分含量由15%突升至42%，土壤温度峰值也由29℃大幅降至23.5℃，之后逐渐恢复至平均水平。经调查，5月1-11日监测设备放置于墓室内，故而受外界降雨等影响较小且缓慢，5月12日之后设备被挪至墓室外环境，由于当日有降雨，室外湿度较大，所以监测数据突增。总体来看，土壤温度在19.5℃到29.5℃之间、土壤含水率在15%到43%之间保持着较为稳定的变化，并且二者保持相符的变化趋势。期间出现的特殊变化，多是天气变化引起的（可查看气象站数据变化）。5月份期间，高陵张栋家族墓遗址内气象站监测数据存在较大波动（图14）。其中5月1日-5月3日期间，湿度维持在82-100%之间，温度在15-23℃之间，照度在0-5000lx之间，基本保持在高湿、低温、弱光照的水平，昼夜温差和湿度差较小；5月11日-5月12日温度湿度和光照度骤变，湿度由60%升至100%，温度由22℃降至最低12℃，光照度变化范围也缩减至0-4200lx。结合当时的天气变化，5月为春季末尾，气温总体呈缓慢上升趋势，并偶尔伴随降雨。5月1日-5月3日、5月11日-5月12日是降雨天气，持续阴天，光照度较低，气温降低。无降水期间，光照逐渐充裕，环境湿度逐渐下降，气温也逐渐回升并呈上升趋势。总体来看，气象站的大气温度在12-32.5℃之间，大气湿度在18%-100%之间，照度变化最大范围为0-9000lx，气象站数据与环境数值较一致，温度、湿度、光照度也保持合理的变化趋势。环境变化正常，期间出现的特殊变化，多是天气变化引起的。总结对比4个监测点的数据变化，监测点的传感量数据变化和环境变化保持一致，并且与当时的气候环境较一致，说明数据正确反映了监测区域的环境变化。

结语

篇9

[关键词] 丹参酮ⅡA；肝癌细胞；HepG2；凋亡

[中图分类号] R735.7 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）08-0004-03

恶性肿瘤严重危害着人们的健康和生命。随着环境的恶化、人们工作生活压力的增加，恶性肿瘤的发病率逐年上升。恶性肿瘤的发病与细胞的增殖和凋亡异常有密切关系。肝癌是一种常见的恶性肿瘤，其死亡率较高，仅次于胃癌[1]。临床上的治疗方法主要有手术、放疗和化疗，但每种治疗方法都有较大的不良反应。近年来生物疗法逐渐引起临床医生的重视，其具有副作用小、疗效高、避免正常细胞免受损伤的优势。丹参酮ⅡA可以增强细胞Caspase-3的活性，抑制细胞的癌基因的表达，从而诱导细胞凋亡[2]。目前国外有关丹参对肝癌HepG2细胞有抑制作用的报道屡见不鲜，但关于丹参酮ⅡA对肝癌HepG2细胞的作用的报道还比较少。本文主要是研究丹参酮ⅡA对肝癌HepG2细胞生长的抑制作用以及对其凋亡的诱导作用。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

肝癌细胞株HepG2购自上海博谷生物科技有限公司。丹参酮ⅡA由西安鸿生生物技术有限公司提供。

1.2实验方法

1.2.1 细胞培养 （1）肝癌细胞HepG2复苏，将细胞置入30℃～40℃水浴中迅速溶解，移至培养瓶，添加培养液到5 mL。培养条件37℃，5%CO2湿度饱和。每48 h换液一次，当细胞生长密度达到70%～80%时进行传代。（2）细胞传代：取出细胞，倒掉培养液，PBS缓冲液洗涤3次。加入0.2%的胰蛋白酶1～2 mL，覆盖细胞，30 s后加血清的DMEM培养液，分装其他培养瓶，并补充培养液。（3）将培养好的细胞进行冻存。取出培养好的细胞，倒去培养液，PBS缓冲液洗涤3次，加入0.2%的胰蛋白酶1～2 mL，覆盖细胞，30 s后加细胞冻存液，分装至冻存管。4℃冻存10 min，-20℃冻存30 min，-70℃保存。

1.2.2 药物处理 无水乙醇溶解丹参酮ⅡA，配成2.0 mg/mL备用。将含有10%胎牛血清的细胞培养液进行稀释，共分为5个浓度：0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL；0 μg/mL为对照组。

1.3观察指标

1.3.1 不同浓度丹参酮ⅡA对肝癌细胞HepG2生长的抑制 将对数生长期的肝细胞HepG2 PBS缓冲液洗涤3次，加入0.2%的胰蛋白酶消化，加入培养液配成单细胞悬液，浓度为1×105个/mL。将单细胞悬液接种于96孔板，每孔接种100 μL，培养24 h后换含药的培养液。空白组为不含细胞只含培养液；阴性对照组为含0 μg/mL丹参酮ⅡA；实验组为5个不同浓度丹参酮ⅡA。每组共重复8孔，分别培养24 h、48 h、72 h。然后弃去培养液，加入20 μL新鲜MTT液，培养4 h候弃去培养液。每孔加入120 μL DMSO，震荡至结晶完全溶解，使用酶标仪在490 nm处读取吸光度值（A），共重复3次。细胞抑制率=（1-实验组A值/对照组A值）×100%。

1.3.2检测细胞周期和凋亡情况 收集不同浓度丹参酮ⅡA处理过的细胞1×105个，离心后弃上清液，PBS缓冲液洗涤3次，缓慢加入70%乙醇1mL，4℃下保存过夜。取出后离心去除固定液，PBS缓冲液洗涤3次，加1.0 mg/mL的RnaseA 200 μL，37℃下水浴30 min，加PI 800 μL染色液，避光，4℃保存30 min，进行检测。采用流式细胞仪（美国BD流式细胞仪）进行检测，采用分析软件计算凋亡率和各凋亡周期的比例。荧光显微镜下观察细胞的凋亡形态。

1.4统计学方法

采用SPSS12.0统计学软件进行数据分析，计数资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间的比较采用方差分析，组间比较采用t检验。P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 丹参酮ⅡA对肝癌细胞HepG2生长的抑制作用

相同的浓度，随着时间延长吸光度逐渐下降，而同一时间，随着浓度的增加吸光度也逐渐下降。见表1。相同浓度，随着时间的延长，丹参酮ⅡA对肝癌细胞HepG2生长的抑制率逐渐增加；相同时间，随着浓度的增加，丹参酮ⅡA对肝癌细胞HepG2生长的抑制率也逐渐增加。见图1、2。

2.2细胞周期分布和凋亡率

搜集丹参酮ⅡA作用72 h的细胞，观察细胞周期，可见随着丹参酮ⅡA浓度的增加，G0/G1的比例逐渐升高（2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL），与对照组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。随着丹参酮ⅡA浓度（0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL）的增加，细胞凋亡率逐渐升高，与对照组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表2。荧光显微镜下的细胞凋亡形态见图3、4。

3 讨论

原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，目前针对肝癌的治疗方法较多，涉及到多个学科的共同协作，如能得到正确合理的治疗，肝癌远期疗效还是比较理想的。目前临床上的治疗方法主要有手术、化疗、放疗等。手术治疗对患者本身也是一种创伤，而化疗和放疗均对患者有较大的副作用。因此，了解肿瘤发生发展的机制，寻找效果好、副作用小的治疗方法成为临床的热点。目前生物疗法，包括免疫疗法等逐渐在临床上广泛应用。肿瘤的发生发展与细胞的异常增殖和凋亡有关。1972年Kerr等三位科学家首次提出了细胞凋亡的概念。细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等作用，它并不是病理条件下自体损伤的现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象，在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中十分必要。凋亡是多基因严格控制的过程，这些基因在种属之间非常保守。迄今为止，已发现多种凋亡抑制分子，包括P35、CrmA、IAPs、FLIPs以及Bcl-2家族的凋亡抑制分子。

丹参酮ⅡA为唇形科植物丹参（salvia miltiorrhza）中分离的二萜醌类化合物，临床应用广泛[3-6]，能够改善冠状动脉循环，抑制血栓疾病发生，具有显著扩张冠状动脉、增加冠脉血流量、降低心肌耗氧量、减慢心率和增加心肌收缩力的作用。丹参素及丹参酮IIA均能显著延长小鼠耐缺氧时间，减轻缺氧引起的心肌损伤，同时，改善心肌收缩力，促进心肌再生，具有抗氧化作用，可防止LDL的氧化，从而保护EC，维持其分泌PGL2的正常功能，抗AS形成。研究报道，丹参酮对多种肿瘤细胞具有抑制和诱导凋亡的作用。吴俊伟[7]研究丹参酮ⅡA抑制人食管癌细胞的生长及机制，结果显示其对Eca-1-9细胞的增殖具有抑制作用，丹参酮ⅡA浓度在1 μg/mL及以上浓度抑制作用明显，并随着浓度升高抑制作用增强。不同浓度的丹参酮ⅡA处理过Eca-1-9细胞后，抑制细胞凋亡的基因Bcl-2 mRNA的表达明显下降。钟志宏等[8]研究结果显示，丹参酮ⅡA对HepG2细胞生长的抑制作用具有明显的时间和剂量依赖性。荧光染色可以观察典型的凋亡细胞形态特征，琼脂糖凝胶电泳可见明显的凋亡细胞形成的梯状条带，作用72 h后，随着浓度的增加细胞的凋亡率也逐渐增加。江城锋等[9]研究结果显示，丹参酮ⅡA及其衍生物对Hela细胞的增殖具有抑制作用，对丹参酮ⅡA进行结构修饰，能够增强其抑制作用。

MTT全称为3-（4，5-Dimethylthiazol-2-yl）-2，5-diphenyltetrazolium bromide，汉语化学名为 3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐，主要用于细胞增殖及细胞活性测定。1983年由Mosmann等[10]首先报道用MTT比色法测定细胞活性剂抗癌药物对细胞增殖、活性效应。检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能[11]。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶标仪在490 nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。本文采用MTT方法检测丹参酮ⅡA对肝细胞癌HepG2的生长抑制作用。结果显示，相同浓度随着时间的延长，吸光度逐渐下降，而相同时间，随着浓度的升高吸光度也逐渐下降。说明丹参酮ⅡA对肝细胞癌HepG2的生长抑制作用具有时间和浓度依赖性。0.5 μg/mL的浓度对细胞生长的抑制作用不明显。对作用72 h的细胞检测不同细胞周期所占比例，发现随着浓度增加，G0/G1期的细胞比例逐渐增加。G0期是细胞休眠期，而G1期是从有丝分裂到DNA复制前的一段时期，又称合成前期。G0/G1期细胞的上升，S期细胞的下降提示丹参酮ⅡA抑制细胞生长的同时，也在诱导细胞向正常细胞分化。对凋亡率的检测显示，随着浓度的升高，细胞的凋亡率逐渐升高，说明丹参酮ⅡA能有诱导肝细胞癌HepG2的凋亡，并且具有浓度依赖效应。

综上所述，丹参酮ⅡA作为中药的提取物，在临床的应用广泛。其对肝癌细胞HepG2的生长具有抑制作用，并且具有时间和浓度依赖性，对凋亡的诱导作用具有浓度依赖性。

[参考文献]

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[2] 袁淑兰. 丹参酮ⅡA诱导肿瘤细胞凋亡分子机制[D]. 四川大学：2004.

[3] 赵兴琼. 丹参酮ⅡA磺酸钠、川芎嗪配合西药治疗心肌缺血临床效果观察[J]. 大众健康：理论版，2012，（10）：173-174.

[4] 马丽虹，李冬梅，李可建. 丹参酮ⅡA治疗缺血性卒中急性期疗效评价[J]. 中国医药导报，2012，31（11）：1510-1512.

[5] 于陈宝，范建生，张传明，等. 曲美他嗪联合丹参酮ⅡA磺酸钠注射液在慢性心力衰竭患者治疗中的疗效研究[J]. 中国医药科学，2012， 1（20）：51-52.

[6] 马丽虹，李冬梅，李可建. 丹参酮ⅡA治疗缺血性卒中急性期疗效评价[J]. 中国医药导报，2012，31（11）：1510-1512.

[7] 吴俊伟. 丹参酮ⅡA抑制人食管癌细胞生长及机制研究[M]. 石家庄：河北医科大学，2009：19-26.

[8] 钟志宏，陈文贵，柳永和，等. 丹参酮ⅡA抑制HepG2细胞生长及诱导其凋亡的实验研究[J]. 中南大学学报（医学版），2007，2（1）：99-103.

[9] 江城锋，李瑞峰，薛丹，等. 丹参酮ⅡA结构修饰及其对HeLa细胞的抑制作用研究[J]. 天然产物研究与开发，2012，24（3）：385-388.

[10] Berridge MV，Tan AS. Characterisation of the cellular reduction of 3-（4，5-dimethylthiazol-2yl）-2，5-diphenyltetrazolium bromide （MTT）：Subcellular localization，substrate dependence，and involvement of mitochondrial electron transport in MTT reduction[J]. Archives Biochem Biophys 1993，303：474-482.

[11] Berridge MV，Herst PM，Tan AS. Tetrazolium dyes as tools in cell biology：new insights into their cellular reduction[J]. Biotechnology Annual Review，2005，11：127-152.

篇10

1.引言

北方的冬季是冰雪天气多发的季节，如果遇到雪灾，在白天，菜农可以及时发现大棚顶上的积雪，如果积雪过厚，可以及时清雪。而在晚上，由于菜农都在休息，无法时时刻刻蹲守在大棚，所以无法及时发现积雪。据作者在山东各地区的实地采访，大雪压塌蔬菜大棚的事故多发生在深夜，由于深夜突降的大雪导致第二天清晨才发现大棚被压塌的情况数不胜数[1]。目前菜农的防雪手段还停留在原始的阶段，多是看天气预报，或者是提前在棚顶撒盐，不能有效的对付较大的雪灾。而使用新型材料做支撑骨架虽然能有效提高大棚的抗雪抗压能力，但是其造价极高，目前尚不能大规模推广。经调查，目前大多数蔬菜大棚还在使用竹竿或者钢结构做支撑架，其抗雪抗压能力受到很大的限制，针对这一情况，本文设计了一种大棚防雪防压塌报警系统，采用雪量传感器HSC-SE80，能有效探测到棚顶的积雪量，如果积雪超过一定厚度，会通过系统的GSM模块向菜农发送报警短信，及时提醒菜农，以便及时赶到大棚除雪。

2.系统总体方案设计

整个系统分为三个模块：雪量探测，主机，GSM模块。雪量探测模块的功能是有效的探测到棚顶的积雪高度。主机模块的功能是判断积雪是否高于我们设定的预警值，另有键盘和显示装置，来设置预警值或查看雪量信息。GSM模块的功能是沟通主机与菜农，如果主机检测到雪量高于我们设定的预警值，则由GSM模块向菜农的手机发送报警短信，来达到预警目的，系统总体方案的结构如图1所示：

3.系统的硬件电路设计

3.1 主芯片选择

本文采用一片AT89S52单片机作为控制核心，AT89S52是一种低功耗、高性能CMOS 8位微控制器，具有8K 在系统上编程的Flash 存储器，其使用Atmel公司高密度非易失性存储器技术制造，抗干扰性比较强[2]，拥有灵巧的8位CPU和系统可编程Flash，使得AT89S52完全能适应本系统的功能需求。

3.2 接口电路

由于雪量探测模块所采用的雪量传感器HSC-SR80，和用于通信的GSM模块，使用的都是RS-232接口，所以要给主电路设计接口电路，本文采用一颗MAX232芯片完成接口的转接任务[3]。MAX232芯片是美信（MAXIM）公司专为RS-232标准串口设计的单电源电平转换芯片，使用+5v单电源供电。

3.3 雪量探测模块

目前市面上的雪量传感器，主要有激光和超声波探测[4]，激光探测虽然精度比较高，抗干扰能力也比较强，但是成本太高，因此本文采用了华创维想科技开发有限公司的HSC-SR80雪深传感器，该传感器是一个性价比很高的测量雪深的解决方案，采用超声波探测。HSC-SR80测量探头到被测目标表面的距离，通过发射50kHz的超声波来进行测量，主要原理是通过发出一个声波脉冲，然后再接收这个回波，测量这个传播过程的时间。因为声波在一定的温度下的传播速度是一定的，所以通过测量传播时间、空气温度就可以计算出这段距离。传感器集成了温度传感器，通过测量温度对超声波速度进行修正，测量数据可通过RS-232串口以ASCII码输出。

3.4 GSM模块

本文的GSM模块采用的是TC35i芯片[5]，TC35i是德国西门子公司的一款双频900/ 1800MHZ高度集成的GSM模块，其易于集成，使用它可以在较短的时间内花费较少的成本开发出新颖的产品。其支持数据、语音、短消息和传真，集成强大的SIM应用工具包，具有体积小，重量轻，功耗低等优点。

4.系统的软件架构设计

雪量的检测最终是由系统的末端即雪量传感器来完成的，然后再将采集到的雪量信号传给单片机，由单片机判定是否调用GSM模块，向菜农发送报警信号，其总体系统的软件流程如图2所示。

系统上电以后，先由单片机进行初始化操作，包括HSC-SR80雪量传感器的初始化和TC35i的初始化。HSC-SR80雪深传感器的初始化工作包括：设置安装高度，设置传感器数据回传模式，设置串口通信模式，设置数据存储及数据自动回传时间间隔，设置传感器地址，设置传感器日期，设置传感器时间等等。TC35I发短信时采用的是PDU模式以实现中文短信的发送[6]。

5.报警参数的选择

由于本文的探测重点是雪量的探测，雪量传感器传回的数据是积雪的高度，所以报警的临界位选择是个特别重要的问题。根据查询到的蔬菜大棚技术规格，以CH-D5025为例，其技术规格如表1所示。

以三拱大棚为例，其跨度为9m，脊高3m，肩高1.7m，每根拱梁之间的间距为1.2m，故其棚顶面积约为24m2，经查询，刚下的积雪的密度约为100kg/m3，经计算后，理论上其可承受的雪量为20CM。而具体的报警参数，应该根据大棚的技术规格和风化程度做具体的计算，计算后的结果由键盘输入主机，保证了报警参数设置的灵活性。

6.结语

针对目前蔬菜大棚抗雪抗压的现状，本文设计了大棚的防雪防压塌预警系统，采用探测终端与手机终端相结合，实现了菜农对棚顶积雪的预警。经过测试，系统对棚顶雪量的探测误差在5mm以内，当雪量超过预警值时，菜农能够收到预警短信。该装置具有操作简单，成本低廉，应用灵活等特点。

参考文献

[1]任洪忠.陈庄五个蔬菜大棚被大雪压塌[N].齐鲁晚报，2011-12-1.

[2]万军.基于单片机大棚温湿度远程监控的设计与实现[D].电子科技大学，2012.

[3]裴清华.基于AT89 C5 1单片机的蔬菜大棚控制系统[J].计算机与现代化，2010，173（1）：4-6.

[4]王柏林，花卫东，阳艳红等.基于相位法激光测距原理的雪深传感器研究与应用[J].气象科技，2013，41（4）：597-599.