高良姜配方颗粒制备论文

【摘要】目的确定高良姜配方颗粒的最佳制备工艺，建立高良姜配方颗粒中桉油精的含量测定方法。方法采用水蒸气蒸馏法提取高良姜药材中的挥发油，设计L9（34）正交实验确定最佳挥发油包合工艺，将水提液浓缩干燥与包合物制成配方颗粒，采用气相色谱法，FID检测器测定配方颗粒中桉油精的含量。结果将药材加水10倍量提取5h，收集提取液和挥发油。挥发油最佳包合工艺：挥发油与β-环糊精比例为1∶9，包合温度为45℃，包合时间为1h。含量测定中回归方程为y=26354x-0.0404，r=0.9998，平均回收率为100.72%，RSD为2.58%(n=5)。结论高良姜配方颗粒的制备工艺稳定可行，评价指标可靠、合理。

【关键词】高良姜配方颗粒；桉油精；挥发油；气相色谱法

Abstract：ObjectiveTooptimizethepreparationprocessofAlpiniaofficiarumformulagranulesandestablishadeterminationmethodofeucalyptolintheformulagranules.MethodsThevolatileoilwasextractedwithsteamdistillationmethodandincludedwithβcyclodextrintoavoiditsvolatilization.Thegranulewaspreparedbymixingthewaterextracts,volatileoilandstarch.ThecontentofeucalyptolinthegranulewasdeterminedwiththeGCmethod.ResultsTheoptimumextractionconditionwasasfollows:thecrudedrugwasextractedwith10timesamountofwaterfor5hourstocollectthevolatileoil.TheoptimalinclusionconditionselectedbytheL9（34）orthogonaldesignwasasfollows,theratioofvolatileoiltoβcyclodextrinwas1:9（ml/g）,theinclusiontimewas1handthetemperatureoftheinclusionwas45℃.Theregressionequationwasy=26354x0.0404，r=0.9998.Theaveragerecoverywas100.72%andRSDwas2.58%.ConclusionThepreparationprocessofAlpiniaofficiarumformulagranulesisstableandfeasible.TheGCmethodforqualitycontrolisaccurateandsuitable.

Keywords：Alpiniaofficiarum;Formulagranules;Eucalyptol;Volatileoil;GC

高良姜是姜科山姜属植物高良姜AlpiniaofficiarumHance的干燥根茎，主产于福建、台湾、广东、广西、海南、云南等地，具有温胃散寒、消食止痛的功效，临床常用于治疗脘腹冷痛、胃寒呕吐、嗳气吞酸等病症［1］。现代药理研究表明高良姜具有较强的镇痛止呕［2］、抗溃疡、利胆、抗腹泻［3］、抗菌［4］、抗氧化［5］、抗癌［6］等作用。

高良姜配方颗粒是高良姜饮片经提取、浓缩、干燥、制粒等工序制成的单味中药配方颗粒剂。将传统的高良姜饮片改变为颗粒剂，可以有效地去除植物纤维等无活性成分，增加稳定性，易储存，服用方便。配方颗粒以其生产自动化，生产条件恒定，人为因素小等优势被广泛应用于临床。如黄连配方颗粒，无论批号是否相同，其盐酸小檗碱的含量都在测定要求范围之内［7］。目前，关于高良姜配方颗粒的制备工艺和含量测定未见报道，本文采用气相色谱法控制颗粒中的桉油精的含量。现报道如下。

1仪器与试药

Agilent6820气相色谱仪（美国安捷伦公司）；KQ218型超声清洗器昆山市超声仪器有限公司；DZG401电热真空干燥箱天津天宇实验仪器公司；SartoriusBS210S型电子天平天津奥特赛恩斯仪器有限公司。

高良姜饮片（由天津中药饮片厂提供），符合《中国药典》2005年版要求；桉油精对照品（批号110748200507）购于中国药品生物制品检定所。正己烷，环已酮为色谱纯，乙醇、β环糊精，淀粉等其它试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1高良姜配方颗粒挥发油提取工艺取高良姜200g，加10倍量水提取，用挥发油测定器收集（轻油法）挥发油，每隔1h量取挥发油的体积，考察提取时间与出油率的关系，结果见表1。从表1中可知，前5h出油已达总量的95.1%。因此提取时间为5h。表1提取时间的考察（略）

2.2高良姜挥发油的β环糊精的包合

2.2.1挥发油包合工艺正交实验设计预实验结果表明，挥发油与β环糊精的比例（A）、包合温度（B）、包合时间（C）是影响包合结果的主要因素。在此基础上设计L9(34)正交实验，以包合物的产率和挥发油的包合率为指标，对包合工艺的各参数进行考察，因素水平设计见表2。表2因素水平（略）

2.2.2挥发油包合物产率的考察称取一定量的β环糊精，按照正交实验的各因素水平搭配顺序加入一定量的蒸馏水，加热使溶解制成2%的溶液，于恒温磁力搅拌器上搅拌至规定的温度，缓缓滴加挥发油乙醇溶液，边加边搅拌至规定时间，放冷，置冰箱冷藏24h，抽滤，继用10ml石油醚(30～60℃)洗涤，40℃干燥3h，研碎得包合物，计算包合物产率。实验结果见表3。

由表4方差分析可知，挥发油与β环糊精的比例对包合物产率的显著性影响因素，而包合温度和包合时间对包合物产率无显著影响。

2.2.3挥发油包合率的考察为了考察不同条件下包合效果的优劣，以挥发油包合率为指标，分析包合产物中所含有的挥发油量。

挥发油包合率＝(V1+V2)/V×100%；V1－从包合物中回收得到的挥发油量（ml）；V2－空白回收实验中挥发油的损失量（ml）；V－挥发油投料量（本实验中为1ml）。

由方差分析表4，可看出挥发油与β环糊精的比例是影响挥发油包合率的显著性因素，包合温度和包合时间对挥发油包合率则无显著性影响。

表3正交实验L9(34)方案和数据处理%

表4方差分析

由包合物的产率和挥发油的包合率两项分析指标可以看出，设定适当的挥发油与β环糊精的比例是包合产物质量优劣的重要因素。根据包合率的直观分析可见A3均值远高于A2和A1，根据包合物收得率的直观分析可见A2均值高于A3和A1，综合考虑，选择挥发油与β环糊精比例为1∶9最为合适。包合温度和包合时间都是非显著性影响因素，结合直观分析和成本选择B2C1。因此，最佳包合工艺为A3B2C1。

为验证最佳工艺，重复3次实验，得到平均包合率为89.9%，平均挥发油包合率为88.8%，证明上述包合工艺可靠。

2.3高良姜配方颗粒的制备以高良姜配方颗粒优选后的工艺，即取高良姜饮片500g，加10倍量水，微沸提取5h，同时收集提取液和挥发油。对挥发油按照最佳包合工艺包合、干燥、研碎，备用。将提取液减压浓缩得干浸膏，真空干燥，按照干浸膏和淀粉质量比为1∶1的比例加入辅料，混匀，加入75%乙醇适量制成软材，软材过14号筛制成颗粒，60℃下真空干燥24h。然后再按照药材中原有的比例添加挥发油包合物，混匀，即得高良姜配方颗粒。

2.4高良姜配方颗粒的定性鉴别

2.4.1供试品溶液的制备取高良姜配方颗粒约0.5g，精密称定，置挥发油提取器中加水200ml，并在挥发油提取器内水液面上加约2ml正己烷提取2h，得到含油正已烷定容至5ml，得供试品溶液。

2.4.2对照药材溶液的制备取高良姜对照药材5g，按2.5.4项下“供试品溶液的制备”方法，同法制成对照药材溶液。

2.4.3阴性对照溶液的制备按照配方颗粒处方比例取淀粉、β环糊精和药材的水提物浸膏，按供试品溶液制备方法进行制备，作为阴性对照溶液。

2.4.4薄层层析鉴别按照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取阴性对照品溶液，挥发油，上述供试品溶液和对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯醋酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应得位置上，显相同颜色的斑点。

2.5高良姜配方颗粒的含量测定

2.5.1气相色谱条件

色谱柱：HP5弹性石英毛细管(30m×0.32mm，0.25μm)；程序升温条件：初始温度50℃，保持1min，以10℃·min升至180℃，再以20℃·min升至210℃，保持1min；载气N2；进样口温度为220℃，FID检测器温度250℃，进样1.4μl。

2.5.2对照品溶液制备

精密称定桉油精对照品，用正己烷溶解，制成14.096mg/ml的溶液。

2.5.3内标溶液的制备

精密称定环已酮，用正己烷溶解，制成15.654mg/ml的溶液。

2.5.4供试品溶液的制备

取高良姜配方颗粒约0.5g，精密称定，置挥发油提取器中加水200ml，并在挥发油提取器内水液面上加约2ml正已烷提取2h，置含油正已烷溶液于容量瓶中，精密加内标溶液1.10ml，定容至10ml，摇匀，作为供试品溶液。

2.5.5线性关系考察

分别取对照品溶液100,140,180,220,260μl，各加内标液150μl，定容至5ml，进行气相测定。以桉油精量为横坐标，以桉油精峰面积/内标物蜂面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到标准曲线方程为y=26354x-0.0404，r=0.9998。

2.5.6精密度实验

取线性关系中的第5份样品连续进样5次，测得RSD为0.76%(n=5)。校正因子平均值为0.8280。

2.5.7重现性实验

精密称取同一批样品5份，按供试品溶液的制备方法进行操作，连续进样，测得RSD为0.845%。

2.5.8稳定性实验

精密称取一份样品，按供试品溶液的制备方法平行操作，每隔2h进样，连续8h，结果测得RSD为1.59%。

2.5.9加样回收率实验

以2.5.4项下供试品溶液的制备方法制备5份高良姜配方颗粒样品溶液，加入一定浓度的对照品溶液及内标液，定容，测定，测得平均加样回收率为100.72%，RSD为2.58%(n=5)。表5加样回收率实验（略）

2.5.10高良姜配方颗粒含量测定分别精密称取3批高良姜配方颗粒，照2.5.4项下的方法制备供试品溶液，分别测定，计算桉油精含量。结果见表6。表6高良姜配方颗粒含量测定结果（略）

3讨论

3.1本制剂与传统汤剂相比较的优势高良姜配方颗粒的主要有效成分为挥发油类，故按挥发油的提取方法进行提取，而中医传统汤剂以水提液口服，配方颗粒作为中药汤剂改革的一种形式一方面要发挥现代科学技术的优势，另一方面也要保持与传统汤剂的一致性，故先将提完挥发油的水溶液浓缩干燥，制粒，再按照药材中原有的比例添加挥发油包合物，混匀，达到兼顾水溶性成分和挥发油的目的。

3.2挥发油的包合条件选择在考察挥发油的包合条件时，分别以包合率和包合物产率为指标时得到的最佳条件并不一致，但考虑到不一致的条件是非显著性影响因素的各个水平，而且从直观分析可以看出它们差别很小，故主要从经济成本方面对非显著性影响因素的水平进行了选择。

本实验方法简便可行，重现性好，可作为控制产品质量的方法。

【参考文献】

［1］国家药典委员会，中国药典［S］.北京：化学工业出版社，2005：202.

［2］Daitetsushin,KauruKinoshita,KiyotakaKoyama,etal.AntiemeticprinciplesofAlpiniaofficiarum.KunioT［J］.JNatProd,2002，65：1315.

［3］朱自平，陈光娟，张明发，等．高良姜的温中止痛药理研究［J］.中药材，1991,14(10)：37.

［4］宫毓静，安汝国，虞慧，等．164种中药乙醇提取物抗真菌作用研究［J］.中草药，2002，33(1)：42.

［5］刘小红，张尊听，段玉峰，等．市售天然植物香料的抗氧化作用研究［J］.食品科学，2002，23(1)：143.

［6］安川宪.高良姜的抗促癌作用［J］.国外医学·中医中药分册，2003，25(11）：53.

［7］姚焕英,赵宁侠,史恒军,等.配方颗粒剂临床利弊点滴谈［J］.现代中医药,2006,26(1)：66.