存活范文10篇

存活范文篇1

关键词：金融危机;中小企业;应对策略

始于2007年2月份的美国次贷危机。目前已演化为席卷美国、影响全世界的金融危机。当前国际金融危机仍在蔓延，已从局部发展到全球，从发达国家传导到新兴市场国家，从金融领域扩散到实体经济领域，给世界各国经济发展和人民生活带来了严重影响，形势十分严峻。我国的外贸依存度高达60%，美国又是我国第二大出口市场，因此金融危机除了对我国金融市场产生直接影响外，还引发国内中小企业倒闭、工人失业及一系列的连锁反应，这种间接损失是巨大的。为此。我们要积极采取措施，支持和维护中小企业的发展，及时遏制由此引发的一系列连锁反应，以保证我国经济的平稳健康发展。

一、金融危机对我国中小企业的影响

中小企业的发展事关国家经济的快速平稳发展和就业水平的提高。目前。我国中小企业的数量已占全国企业总量的99.3%、我国GDP的55.6%、工业新增产值的74.7%、社会销售额的58.9%、税收的46.2%以及出口总额的62.3%，而且，全国75%左右的城镇就业岗位也是由中小企业提供的。但是全球金融危机对中国经济的影响首先表现在家底最薄弱、生命力最脆弱的群体——中小企业身上。

国家发展改革委中小企业司公布的数据显示。2008年上半年，我国共有6.7万家规模以上的中小企业倒闭。其中作为劳动密集型产业代表的纺织企业，倒闭超过1万家。其他受到较大影响的行业包括电子、玩具、五金、鞋类等劳动密集型产业和房地产业等。

我国很多中小企业以劳动密集型产品、低附加值出口产品为主，吸纳的劳动力较多，而金融危机造成中小企业的举步维艰，甚至大量倒闭，这就造成了失业人口尤其是失业农民工数量激增。据农业部对安徽、广东等11个劳务输出、输入大省120个村的典型调查显示，我国沿海发达地区约减少6.5%务工人员，其中多数为外来农民工。

随着金融危机的蔓延，我国受金融危机影响而受损的区域将进一步扩大，涉及的行业进一步增多，而中小企业的大量倒闭和失业人口的继续增加也将成为不可避免的现实，进一步影响整个国民经济的健康发展。

二、制约我国中小企业发展的障碍

改革开放30年来，中小企业从小到大，从弱到强，已经成为促进国民经济和社会发展的重要力量。但是在当前的经济形势下，中小企业的生存和发展受到了严重威胁。制约我国中小企业发展的因素可以从企业自身和外部环境两方面探寻：

(一)企业自身存在的障碍

我国的中小企业经历过市场严酷的考验。普遍具有开拓、创新、坚韧、灵活的特点，但是其抵抗市场风险的能力不足，与大企业相比。在技术、资金、人才、管理、营销渠道、组织能力等各方面的资源都处于劣势。

1.企业专业化程度低。中小企业规模不大。却“小而全”，将大量资本重复投资在规模小，技术水平低的项目上，很少有企业具备自主品牌和核心竞争优势。生产能力不仅过剩，而且分散。难以形成规模优势，又造成行业内部过度竞争。

2.中小企业主缺乏长远的战略。中小企业主在创业过程中，往往急功近利，对企业的发展缺乏长远的战略规划。从管理才能上看。中小企业主大多数是靠个人的悟性和某些机遇取得成功的，很多人知识结构不完全，甚至根本没有接受过高等教育。在这些企业走向快速发展之后。企业主就会感到力不从心。很多中小企业在膨胀之后，出现了严重的混乱、腐败、分裂和失控。

3.经营管理不规范，资源配置效率低下。中小企业大多实行家长制管理，没有合理的组织体系，没有正常的沟通渠道，没有有效的约束激励机制，甚至没有相应的规章制度。结果是缺乏对市场的准确预测和把握，与大型企业相比，中小企业的劳动生产率明显偏低，据测算，我国大型企业劳动生产率为291%，中型企业为163%，小型企业只有128%。

4.缺乏技术、知识和人才。对我国而言。大多数中小企业是靠离开土地的农民发展起来的，职工素质低，技术人员与专业管理人员缺乏。而且，员工对学习普遍比较淡漠，企业和员工积累、更新知识的能力都很差。

(二)外部环境给中小企业带来的障碍

1.中小企业资金不足。融资困难。中小企业的创办资金主要是个人积累资金和借贷资金，这种投资结构决定中小企业的启动资金是极其有限的;中小企业缺乏足够的抵押担保，而且信用不足、贷款规模小，难以从银行得到信贷支持;同时，金融市场、股票市场的开放度不能与中小企业发展相适应。因此，与大型企业和国外企业相比，中小企业获取营运资金等非战略性资产的难度很大，企业外生性扩张阻力太大。

2.金融危机带来的市场需求减少。金融危机在全球范围内造成严重影响，尤其是美国、欧洲等与我国外贸联系紧密的国家和地区，因此造成出口型企业的国外市场需求量急剧减少。同时由于国内失业人口的增多、居民收入的降低和面对金融危机时消费的进一步锐减。中小企业的国内市场份额也进一步压缩。

3.人民币升值给出口型企业带来困扰。首先，我国大部分中小企业出口初中级产品，主要依靠价格优势参与国际市场竞争。人民币升值意味着以外币表示的我国商品价格上升，直接削弱了出口商品的国际竞争力。其次，汇率的不确定性增加了经营风险。特别是人民币汇率的持续上升，对那些已出了货但还未收货款，或已签了订单的企业，更是形成了直接的汇兑损失，也给那些应收汇账款较多的中小企业造成了更大压力。

三、我国中小企业应对金融危机的策略

抵抗金融危机的威胁，不仅需要企业自身顽强的努力，更需要政府给予中小企业广泛而深入的政策支持。

(一)中小企业的应对策略下载论文

1.积极改变观念，提高核心竞争力

首先，要强化品牌意识，不断改造产品和服务。优秀的品牌、顾客的信任。是企业极其宝贵的资源，可以为企业带来持久的竞争优势。其次，要强化自主意识，提高核心竞争力。我国多数的中小企业在完整的运营系统里只参与产品的加工制造环节，不能自主的根据环境的变化选择新的策略和应对方式。因此，中小企业应强化自主意识，将产品的设计、管理、物流、生产、营销等作为一个完整的环节进行经营，特别要提高产品的技术含量，提高核心竞争能力，有效地抵御市场风险。

2.加大创新投入，积极推进技术创新和管理创新

首先，加大技术改造、兼并重组的力度，推动产业升级和产品换代。中小企业要改变以往对技术创新不重视的观念，设立专项资金;进一步优化产品结构，提升精益制造能力;强化内部管理，提高企业的竞争力。其次，进行管理创新。通过更有效的资源整合范式提高资源的利用效率。企业的管理创新主要环节体现在以下几个方面：建立有效的激励约束机制;加强企业技术创新的管理;加强企业对信息的管理;建立中小企业战略管理等几个方面。

3.压缩成本，提高资源配置效率

首先，可以通过加强学习、留住人才来降低成本。学习先进的技术和知识有助于企业降低成本，提高资源配置效率。同时要建立人才引进机制和人才留住机制。人才是企业发展壮大的基础，高、精、尖人才和技术熟练的工人享有不菲的工资，但是他们往往可以独当一面，为企业创造巨大的价值，大大降低企业的成本。同时，可以通过流程改造和技术创新降低成本。要认真分析价值链的每一个环节，寻找降低成本的可能，必要时，还应重新组合价值创造的流程。同时进行技术创新，开发新产品、新工艺，节约研发、制造、流通等环节中产生的各种费用，从而降低成本。

4.开拓国内外新市场

首先，密切关注市场变化。加强与外界的联系和沟通。作为抗风险能力较弱的中小企业，要充分应用现代信息技术手段，掌握外部环境变化的最新资讯，及时调整策略，以最大限度的应对外部环境带来的危险和挑战。其次，要开辟国际新市场。要避开受金融危机影响较为严重的美国、欧洲等国家和地区，转而开辟其它国际市场。同时要改变产品结构，多提供高产品附加值的出口产品，努力培育新的经济增长点，进一步拓展国际市场。另外，还要进一步开辟国内新市场。我国的国内市场巨大，居民一直保持着“高储蓄、低消费”的消费结构，企业有非常广阔的发展空间。鉴于国家扩大内需的政策和政府采购向中小企业倾斜的政策导向，那些符合国家产业政策、有条件和具备一定实力的中小企业要向中西部转移。同时，沿海发达地区的中小企业也应针对国内市场开发新产品，提供新的服务，拓展市场空间。

(二)政府的应对策略

一个充满活力的中小企业群体，是中国经济持续健康发展的不竭动力。在中小企业面临资金瓶颈的情况下，政府应该积极作为，进一步加大对中小企业的政策扶持力度，从立法、政策、资金、技术、服务等方面对中小企业进行全面地引导和支持。

1.加快立法步伐，扩大立法范围。对中小企业的各项发展促进措施都应该通过立法的形式固定下来。《中小企业促进法》的颁布只是一个开始，从横向看，围绕促进中小企业发展的融资、创新、人才培养、信息化等各方面的法律应该迅速落实到位：从纵向看，从中央到地方的立法工作应全面铺开。立法的重点应该放在承认、保护、扶持和反垄断上。

2.建立针对中小企业发展不同阶段的多层次、全方位的中小企业融资体系。在创业阶段，对中小企业创业实施税收减免和适当的财政支持。政府可牵头联手商业银行成立非营利性的中小企业风险投资公司。在发展阶段，以间接融资为主，成立政策性的中小企业银行，专门为中小企业发展提供资金，并为担保机构提供再担保。引导扶持担保机构和再担保机构的发展，扩大中小企业融资范围。发展企业间的互助合作担保贷款制度。对中小企业的技术进步、技术改造提供税收减免。在成熟阶段，鼓励中小企业以市场化融资为主，尤其以资本市场直接融资为主，包括发行股票、企业债券等。

3.对中小企业的技术创新活动给予经费支持、信贷和税收扶持政策。政府要鼓励中小企业设立技术开发和技术培训机构，鼓励科技人员向企业流动，注重在实际工作中培养企业的技术开发人员。增强企业的自主创新能力。引导中小企业建立与科研机构、大专院校的协作关系。促进科研成果向中小企业的转化。为中小企业技术创新建立良好的信息、咨询、技术服务保障体系。

4.建立中小企业公共服务体系。建立以政府部门为龙头，半官方服务机构为骨架，各类民间商会、协会为桥梁，社会服务中介为依托的多方参与的遍及融资担保、技术创新、人员培训、管理咨询等全方位的中小企业社会化服务体系。尤其要大力发展为中小企业服务的民间协会和中介机构，使其真正发挥沟通政企、为企业服务、减轻政府负担的作用。

存活范文篇2

（一）清明节在当代社会的传承与变异

作为一个承载着很强的文化消费需求、富于特色与活力的传统节日，清明节在当代仍然是一个很受人们重视的节日。它的内涵和形式保持了很多传统的成分，也有因适应新的社会情境而发生的变化。

1、传统的延续

中国社会发展格局的一个显著特点是城市与农村有较大的差异。清明节在城市与农村也出现不同的传承形态。

在农村地区，清明节扫墓是每个农家必须郑重完成的事情，其主要习俗仍然保持着传统的形态。目前，农村的大部分地区还是采取墓葬的丧葬方式，这为保持清明节扫墓时清除杂草、添坟、祭酒、烧挂纸钱等传统习俗提供了客观条件。

在城市地区，清明扫墓受到人们的普遍重视。就北京的情况而言，每年清明节前后，民间扫墓活动都有很大的规模。据2004年3月31日《北京娱乐信报》报道，从3月27日到29日14时，北京市通州区群众扫墓接待工作临时指挥部已经接待了9万余人，“而祭扫人流在未来几日内将持续增加。”据这里的工作人员说，“每年的祭奠高峰都在清明节前1周左右开始，逢周末时更是人山人海，可比平时增加几倍。”扫墓高峰日期间，通惠陵园周边采取单行措施，以防止交通拥堵。据2004年3月31日《长沙晚报》：“据初步估计，清明节期间，全省将有20万务工人员和10万在外地工作的人员回家乡祭祖扫墓。”2004年3月31日《新民晚报》一篇题为《祭扫大军年年“扩军”今年上海祭扫人预计646万》的消息说：“据统计，今年清明期间落葬墓穴数达到20435穴，祭扫人数646万余人，祭扫车辆27万余辆，均创下历年之最。由于清明节正逢周末，上海市殡葬管理处预计4月4日人流将会比较集中，另外3月27日、28日，4月3日也将成为人流、车流的高峰期。”从以上报道，可以看到当代中国城市地区清明扫墓的盛况，而且呈现出越来越兴盛的趋势。

2、习俗的变迁

建国以后，在全新的社会环境中，清明节的习俗有了不少变化和革新。

首先，在清明节习俗的主要内容上，在传统的扫墓与春游两大项目中，现代人主要关注清明节扫墓的习俗，春游节俗已衰落。据笔者观察，在清明节前后，很少有人出于过节的考虑而出外踏青、游戏，除非在扫墓时顺便而为。人们一般意识不到在清明节的传统习俗中，春游是与扫墓几乎同样重要的习俗。在城市，清明节不放假，一般工作人员自然不会耽误工作去游玩。但在农村，一般人也不在清明扫墓之外而特意进行节俗性的春游。如在山东枣庄市红山峪村，“目前踏青完全消失”。[16]当然现代人还是很重视出外旅游和户外娱乐的，只不过是在有时间和兴致时随意而为，不一定在清明节期间。

其次，建国以后，由于政府的提倡，全国各地的学校或单位常在清明节组织人们去革命烈士陵园扫墓，缅怀先烈事迹。也有些人自发前往。

第三，城市人的清明扫墓习俗变化较大。与传统时期相比，城市里的丧葬方式发生了很大变化，一般都采用火葬了，祭祀对象放在骨灰盒里，与很多亡人的骨灰盒排放在一起；或者有坟墓，但一般也不按家族分区修坟，即一般找不到祖坟了。这些客观条件是祭祀习俗的基本构成要件。它们的变化必然带来祭祀方式和内容以至祭祀观念的变化。比如祭祀对象在骨灰盒里，就不会有整修坟墓的内容；找不到祖坟，一般就不再祭祀祖灵。在清明祭祀观念上，人们扫墓主要是表达对逝去亲人的孝敬或怀念，寄托自己的亲情，几无灵魂崇拜的成分。在祭祀方式上，公务员之家版权所有总的趋势是简单、文明、不断翻新。随着人们生活水平和文明程度的提高，很多人改变了清明节以烧纸方式祭奠亡灵的传统习俗，以敬献鲜花、上网扫墓等形式寄托哀思，不事铺张，既文明又时尚。网上祭祀是近几年新兴的方式，一些网站设立网上墓园这种虚拟墓地，网民可以在这个墓园里为死去的亲属设置墓穴；有些墓园的管理者将实地墓园与“网上墓园”互动，所有在实地墓园中安葬的死者，都可以在“网上墓园”得到一块网上墓地，死者的亲朋好友可以在这个属于死者个人的网上专页中为死者献上一束鲜花、留一支歌曲、点一根烛光、种一棵松柏或留下祭文，也可以经常在网上墓园给死者写信……。[17]这种网上祭祀新颖而方便，但与传统的扫墓相比，缺点是不能兼有春游的好处。

（二）清明节在当代的社会功能

从到目前为止的实际情况来看，在当代中国社会，主要作为扫墓节的清明节主要有如下社会功能：

1、能够满足人们怀念离世亲人的情感需要，同时密切了人际关系。

通过清明节的习俗活动，人们对亡人的孝敬和思念的情感有了适当的表达方式，获得了精神慰藉与平衡。和他人一起扫墓，祭祀共同的亡人，也联络了同他人的感情。在农村，清明祭祀祖先是团聚祖族人重要方式。

2、有利于人文精神的建设和弘扬。

二十世纪八十年代以来，中国社会处于急剧转型期，经济发展很快，但文化建设没有同步发展，社会上有人文精神失落的倾向。清明节俗的兴盛，宣扬了中国传统中的孝道伦理，强调了亲人间的感情联系，从一个特定的角度促进了社会上人文精神的建设和弘扬。

3、有利于加强民族凝聚力，团结海外侨胞。

弘扬包括清明节俗在内的中国传统民族文化，能够增强国人的民族文化认同意识和民族自豪感，从而加强了民族凝聚力。

存活范文篇3

全国约二千余所疗、休养院，大致可分为两类，一类是七十年代末以前按前苏联模式所建，多归属工会系统、中央各部委及各省市卫生系统管理，位置多在远离闹市、风景气候宜人或有矿泉浴资源的地方，内部有较完备的医疗管理体系，较整齐的卫生技术队伍和必要的医疗设备和手段，业务具有典型的医疗特点，数量约有近九百所，我院大致属于这一类型。另一类是八十年代中期以后兴建的观光度假型疗、休养院，多由中央各部、委、各大型企业所建，不配备或只配备少量医务人员，基本不开展医疗业务，数量在一千所以上。两类疗、休养院都是计划经济体制下的产物，日常开支很大程度要依赖上级经费拨款。

二、市场经济带给疗养院的冲击

计划经济体制下的一切事物必定要经受市场经济大潮的冲击，优者发展，适者生存，差者调整，劣者淘汰。疗养院也不例外.普遍面临的突出问题有:

1.疗养人数与相应的业务收入锐减，经费开支逐年攀升.收不抵支的矛盾日益尖锐。以我院为例，八十年代，每年接待疗养员大致在2000一2500人。进人九十年代则急速减少，1995、1996年以后每年仅数百人。这是企业深化改革的必然结果。而疗养院同期的事业开支则因员工工资及煤、水、电、油、通讯维修等费用的猛增而逐年攀升，由八十年代末的90万元升至1994年的270万元，1996年更达700万元。

2.疗养的滑坡迫使疗养院设法从旅游接待市场上寻找弥补。然而陈旧过时的房屋设施、过于简陋的餐饮娱乐条件满足不了当今会议接待和旅游市场的基本需求，需要资金启动装修改造，长期计划经济体制下形成的员工队伍中的陈旧观念和缺乏服务意识的“官办”作风，这些都制约着疗养院在市场的竞争。

3.疗养的内涵已从过去老干部、劳模、科技骨干的慢性病康复疗养转变为普通干部职工的观光度假为目的。单纯的医疗管理模式不适应要求，必然向宾馆化管理模式转变。随之而来的结果是，医疗业务萎缩，医务及行政人员大量过剩。

4医疗业务面向社会困难重重。随着医疗改革深化和社会医疗保险的发展，医疗市场的竞争也异常激烈。各地卫生行政部门、各企事业单位有关医疗费用的种种保护性限制规定以各综合医院、专科医院在知名度、技术及设备上的优势，均使得各类疗养院在这一竞争中陷人重重困难。

三、路在何方

因地制宜，扬长避短，立足实际，走向市场，应当是各种类型疗养院应取的现实态度。从资产运营的角度分析，疗养院最主要的资产是土地房屋，医疗设备与技术往往不具备优势。因此可以从盘活资产搞活经营入手，探索疗养院生存之路。

(一)立足自身，搞活疗养接待。对于大多数疗养院，这是最现实的选择。在三个关键环节上必须有所突破:

1.顺应市场需求，改变原有僵化的疗养模式。要适应人们精神生活需求的提高，尽可能丰富疗养生活，合理安排自然观与人文景观的游览。要开展多种形式的健康教育。还可以展灵活的不定期休养，组织周末，节假日的食、宿、行、游、乐全程休假服务等。总之，要搞活疗休养市场。

2.医疗工作要走出新路。首先，可以探索建立特色专科。专科的选择要尽量避开与社会医院竞争激烈的病种。原先即有专科特色或有矿泉浴条件的单位，则应保持原有优势。也可以开展面向本行业职工与社会的健康体检业务，这是既有经济与社会效益，又能积累人群健康资料，开展疾病谱与预防医学研究的一条途径。还可以走出院门，担起全科医生的职责，开展行业内、外的社区医疗服务工作。有条件的行业疗养院还可以通过适当调整，同时承担起企业医院的任务。

3.实行“一院两制”。客房床位是疗养院主要创收手段。基于这一点，在继续巩固疗休养阵地的同时，另辟蹊径参与旅游接待市场竞争便成为另一现实途径。要设法筹资完善会议接待、餐饮、娱乐等配套设施，选拔和训练一支有较强生存竞争意识的服务队伍，实行宾馆化管理，采取有别于“大锅饭”机制的激励政策。要规范服务，加强营销工作，广揽会议、团队和散客等各类客源，努力创收，为疗养院生存提供保证。

(二)面向社会，走联合之路。至少可以有以下几种选择:

1.个别自身困难重重而又地处新兴居民城区的疗养院，可以以提供场所为条件，与当地政府探讨联合兴办综合医院，由地方卫生行政部门统一组织技术力量，配备医疗设备。这样可合理配置卫生资源，减少新建医院的投资。

2.与驻地城市较有知名度的社会医院合办专科病房、专科分院或康复中心等，利用对方的品牌与技术优势带活疗养院。

3.老龄社会的到来伴随一系列社会问题。疗养院可以发挥自己的优势与地方有关部门联合兴办老年康复中心、护理中心、临终关怀中心或敬老院之类的机构。

存活范文篇4

关键词：檫木；截干；造林；成活率

1引言

檫木（Sassafrastzumu）又名檫树，樟科檫木属落叶乔木，主要分布于中国长江流域及以南地区。檫木材质优良，叶型奇特，树型美观，具有重要的经济价值和生态价值。随着造林理念的变化，乡土和彩叶树种越来越受到重视，檫木造林具有广阔的前景。在福建等东南沿海地区，由于高温和强日照等因素影响，檫木裸根苗造林初期成活率偏低，造林3年苗木保存率仅65％左右，导致林分郁闭慢，影响了檫木造林成效。有关檫木造林技术研究主要集中在混交林营造、栽植密度、土壤立地条件影响、抚育和施肥管理等方面［1～8］，同时一些造林技术有关文献指出檫木截干造林成活率高［9，10］，适宜推广。有研究表明五角枫、构树、刺槐等树种［11～16］截干造林成活率提高25％以上，个别树种（如丝棉木）成活率提高80％以上，且生长表现优异，截干造林效果良好。在生产实践上也发现造林风折后的檫树更易成活，长势良好，因此设计檫木截干造林试验，研究截干造林对檫木造林成活率及生长量的影响程度，探讨造林效果，以期为檫木造林提供参考。

2试验材料和方法

2．1试验地概况。檫木造林地位于福建省福鼎后坪国有林场后坪工区58～050小班，地理位置为东经119°57′37″，北纬27°9′20″，坡向西北，坡度17～23°，海拔960～970m，土壤为黄红壤，立地质量等级为Ⅲ级即中等较肥沃级，土层厚度比较薄。试验地属东亚热带海洋性季风气候，气候温和，温暖湿润，雨量充沛。多年平均气温18．4℃，年平均降水量1668mm，冬春两季多云雾，偶有冰霜，夏秋两季风凉气爽。2．2试验材料。苗木为裸根苗，苗木种子2017年采自福鼎后坪国有林场吴阳工区04～030小班母树林，2018年春育苗，2019年3月造林。采用不炼山块状整地方式，株行距2．0m×2．0m。试验采用截干和不截干（对CK）两种处理，每种处理各栽植0．6hm2，合计1．2hm2；截干用修枝剪一次性剪断苗木，确保截口平滑，高度保留30cm，截干后用于造林试验。2．3测定及分析方法。2019年10月、2020年8月分别调查成活株数、地径、苗高和抽高情况。每个处理调查设置上、中、下3个固定样地，每个样地调查100株。试验成活率、平均值等数据用Excel处理分析，地径、抽高、树高等生长性状分析时将每个处理的3个样地数据合并分析，方差分析用SASV8／STAT模块进行计算，模型为单因素方差分析模型。

3结果与分析

3．1造林成活率分析。由表1调查统计数据可知，檫木截干造林当年全部成活，成活率100％，第二年8月调查，3个样地共死亡6株，平均每个样地2株，平均成活率为98％。未截干造林当年10月底调查3个样地合计死亡54株，成活率平均为82％，第二年8月死亡数量累计达到74株，成活率平均为75．3％。由此可见，截干造林第一年100％成活，第二年成活率可提高30．15％。对两个年度造林成活率数据分别进行了T检验（表2），表明截干与未截干造林成活率差异显著，截干造林可大幅度提高檫木造林成活率。3．2试验生长情况分析。对地径、树高和抽梢等性状进行方差分析，由表3可知，2019年地径、树高和抽梢性状均差异极显著，2020年地径和抽梢差异极显著，树高差异显著，截干造林对檫木的生长产生明显的影响。3．2．1地径生长量差异分析由表4可知，檫木截干造林当年（2019年）地径均值1．82cm，未截干地径均值1．41cm，截干造林地径生长量增加0．41cm，增幅29．21％；造林第二年（2020年）地径均值2．26cm，未截干地径均值1．76m，地径生长量增加0．5cm，增幅29％。可见，截干造林后地径生长量明显提高，截干促进了檫木地径的快速增长。3．2．2树高生长量差异分析由表5可知，檫木截干造林当年（2019年）树高为0．74m，未截干树高1m，截干造林树高相比降幅26．32％；造林第二年（2020年）树高为1．07m，未截干树高1．17m，截干造林树高相比降幅8．86％。檫木截干造林第二年后树高均值还未超过未截干造林树高。但从檫木苗个体看，截干造林的苗高最高值已经高于未截干造林的最大苗高。造成这种情况的原因主要是由于截干后苗木主干高度降低，导致整个苗木在树高生长起点上有较大的差距。但这不能说明截干对树高生长产生不利影响，相反截干还会进一步促进苗木的生长，具体影响还应还结合苗木年度抽梢生长量情况进行进一步分析确定。3．2．3抽梢生长量差异分析由表6可知，檫木截干造林当年（2019年）抽梢为0．55m，抽梢变幅为0．11～1．19m，未截干抽梢为0．17m，抽梢变幅为0．02～0．45m，截干造林抽梢增幅222．78％。造林第二年（2020年），截干抽梢量为0．33m，抽梢变幅为0．01～1．21m，未截干抽梢为0．17m，抽梢变幅为0．02～0．43m，截干造林抽梢增幅94．49％，截干造林抽梢增幅有逐年降低的趋势。综合两个年度的数据，檫木截干造林在造林初期能明显促进树干抽梢生长。

4结论与讨论

存活范文篇5

材料和方法

将新生2一5d的SD大鼠麻醉后取出四肢骨骼肌，剪碎，用胰酶及胶原酶共同消化后制成细胞悬液。用Percoll梯度法纯化细胞，以1xl护细胞密度放人35mm培养皿中，经过5~7d的培养，使其中的干细胞(stemeells)发育为成肌细胞(myoblasts)和肌管细胞(myotubes)。部分培养皿中，加人荧光染料Diz(3.3，一dioctadeeyloxaearboeyanineperehlorate，M.p.Ine)以供原代肌细胞吞噬并被着色。将培养的成肌和肌管细胞按2:3比例混合后[0]，以大致lx106细胞数分两点植人到体重220~2509的SD大鼠脑内一侧纹状体中，总量为15川。共移植大鼠38只，其中有4只所用移植细胞为被DII染色的肌细胞。移植后动物分别存活2周(n=6)、4周(n=8)、8周(n=8)、16周(n=8)、6个月(n一8)和12个月(n一4)，将动物经升主动脉先灌注0.lmol/L磷酸缓冲液(PBS)Zooml，再灌人0.lmol/LPBS(pH7.4)配制含4%多聚甲醛和15%蔗糖的固定液。灌注后立即取脑并作冰冻额状切片(厚20拌m)。切片分3组，一组分别用抗横纹肌动蛋白和肌红蛋白抗体(DAKOCo.I-td)孵育12一24h(4c)，并用ABc法染色(试剂盒由vector公司提供)，再用Nissl法复染。其他两组切片分别用Nissl法及HE染色。普通及荧光显微镜下观察并记录结果。另外将存活8周(n一2)及16周(n-2)的动物不经任何灌注直接断头取出脑内移植物，经胰酶消化后按上述体外培养方法重新进行培养，并观察记录其存活、生长情况。

结果

1.原代骨骼肌细胞体外培养

在倒置显微镜下观察原代骨骼肌细胞体外培养状况，发现在培养的前3d，这种细胞以成肌细胞的形式存在。细胞小，呈梭形。3d后细胞开始有排列现象，并逐渐形成管状，细胞与细胞相互融合，此期细胞称肌管细胞(图1)，有时还可见到这些细胞有轻微的收缩现象。培养细胞经用抗横纹肌动蛋白或肌红蛋白的免疫组织化学染色后发现其免疫阳性细胞数占培养细胞总数的90%以上(图2)。这些免疫阳性细胞呈明显横纹肌特征，即细胞内有多个细胞核。

2.移植区的组织学检测

2.1经免疫组织化学染色的观察:对移植后分别存活2周、4周、8周、16周及6个月的各例动物脑切片行免疫组织化学染色，结果显示全部动物移植部位均反应阳性(图3)。应用抗横纹肌动蛋白及肌红蛋白两种抗体孵育，结果无明显区别。在经Nissl方法复染的切片上，发现在存活2周的动物的移植物周围有少量胶质细胞增生，移植4周可见胶质细胞浸润有所增加。移植前经nl处理的移植物在波长4“一550nm下用荧光显微镜观察，显现强红色(图4)。随着移植后时间延长，各组动物的移植区均未见明显缩小或扩大，亦未见肿瘤形成现象。另外，在存活12个月的4例动物中，其中2例脑切片免疫组织化学染色后移植区呈阳性反应，另外2例为阴性反应。

2.2移植区组织的体外培养:对移植后8周和16周动物脑内取出的移植区组织重行体外培养，发现原代肌细胞重新生长。但这些细胞生长缓慢，早期呈梭形，到第10d后才出现细胞排列现象。12d后细胞逐渐形成肌管细胞并开始相互融合。用抗横纹肌动蛋白和肌红蛋白抗体行免疫组织化学反应，可见这些细胞呈阳性反应(图5)。

存活范文篇6

【关键词】腹主动脉；大鼠；模型；心肌肥厚

在高血压及病理性心肌肥厚的研究领域，有多种大鼠模型可供利用，制备方法包括L硝基精氨酸甲酯(LNAME)灌饲法、皮下注射血管紧张素II法、结扎一侧肾动脉法以及腹主动脉缩窄法等。特别是后者，由于通过手术的方法造成了腹主动脉的机械性狭窄，直接导致心脏射血的后负荷增加，从而形成了不易受药物影响的稳定的高血压，故较其他造模法更有利于高血压与心肌肥厚关系的研究〔1〕。目前，在制备腹主动脉缩窄模型时，研究者多沿用传统造模术式〔2～4〕，并将腹主动脉的内径缩窄至0.7mm〔5～7〕。但由于传统术式所造成的术中创伤以及术后过于剧烈的血流动力学变化，使术后大鼠的存活率偏低。基于此，我们对制备该模型的一种改良术式进行了探讨；并用改良术式将4组大鼠腹主动脉在结扎点处的内径分别缩窄至0.5、0.6、0.7和0.8mm，通过对各组存活率和造模效果的比较，探讨对大鼠腹主动脉的合适缩窄程度。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物14～16w龄雄性近交系SpragueDawley大鼠(河北医科大学实验动物中心提供)，体重250～270g，标准颗粒饲料喂养。按照随机排列表和随机数字表将大鼠随机分组：①传统（术式）组和改良（术式）组，每组各30只；②0.5、0.6、0.7和0.8mm组和假手术组(只分离出腹主动脉而不做缩窄处理)，每组各30只；③术后4w，在0.7、0.8mm组和假手术组中各随机选择8只存活的大鼠，对比评价该3组大鼠的血压值及心肌肥厚程度。

1.1.2主要试剂与仪器戊巴比妥钠、氯化钾购自Sigma公司。主要设备包括LEICARM2125型切片机、RM6240B多道生理信号采集处理系统、TD600真彩色病理显微图像分析系统、电子称量记数天平及洁净动物柜等。

1.2方法

1.2.1传统术式与改良术式

1.2.1.1传统术式4%戊巴比妥钠溶液腹腔注射麻醉(40mg/kg)，仰卧位固定大鼠，于腹部正中剑突下作一长2～3cm的纵行切口，入腹腔后牵开腹部脏器以暴露术野，探寻腹主动脉，在腹主动脉发出右肾动脉的分支点的上方约3mm处，分离出一小段腹主动脉，然后用4#缝合线将一根直径为0.8mm的钢丝和该段腹主动脉一起结扎，再迅速抽出钢丝，造成腹主动脉在结扎点处内径缩窄(即腹主动脉在结扎点处恢复再通的内径为所用钢丝的外径)。依次还纳各脏器，缝合腹壁，术毕。

1.2.1.2改良术式对传统造模术式进行了改良，过程为：大鼠麻醉后采取左侧卧位，以右肾在右髂腰区体表投影的正中点为中点作一长2～3cm的纵行切口，依次切开皮肤、筋膜及肌肉，即可从腹膜后位直接暴露出右肾。剪开肾脂肪囊，向腹侧牵拉右肾，以暴露肾门背侧，可见到右肾动脉几乎呈直角由背侧横跨下腔静脉与腹主动脉相连。辨清腹主动脉发出右肾动脉的分支点，在分支点上方约2mm处，分离腹主动脉并进行缩窄操作，随后步骤同传统术式。

1.2.2使用不同直径的钢丝对腹主动脉进行缩窄操作采用改良术式，对4组大鼠依次使用直径为0.5、0.6、0.7和0.8mm的钢丝对腹主动脉进行缩窄操作。

1.2.3各组大鼠血压值及心肌肥厚程度的测量

1.2.3.1平均动脉压(MABP)的测定大鼠麻醉后，右颈总动脉插管，血压描记结果由RM6240B多道生理信号采集处理系统显示(正常大鼠MABP为90～100mmHg。

1.2.3.2左心室重量指数〔8〕（LVMI）的测定LVMI=左心室湿重/体重(mg/g)。麻醉后向大鼠腔静脉内注射10%氯化钾，使心跳停于舒张期，取大鼠心脏，游离出左心室(包括室间隔)，用生理盐水冲洗后，滤纸吸干左心室附带的液体，于电子称量记数天平上称重后计算LVMI。

1.2.3.3左心室室壁厚度〔9〕(LVWT)的测量用游标卡尺分别测量室间隔、左心室游离壁及心尖部室壁的厚度，取三者平均值作为LVWT的测量数据。

1.2.3.4心肌细胞直径〔10〕(DiameterofCardiacMyocyte，DCM)的测定在心尖与冠状沟之间的中点处(即左室前乳头肌在左室前壁的投影点)，沿着与左室长轴垂直的方向切断左心室，取含有心尖的部分。包埋后从左心室的断面处开始切片，切片厚度5μm，每隔20张切片取1张切片裱于载玻片上，共取3张切片，作HE染色，使用TD600真彩色病理显微图像分析系统进行细胞直径的测量。在每个切片中随机选择5个视野，在每个视野中随机测量8个心肌细胞的直径。测量时要求：①待测细胞边缘清晰、规则；②待测细胞的胞核明显，测量时令测量线过细胞核并与细胞核垂直。取所有测量值的平均值作为该只大鼠DCM的测量数据。

1.2.4统计学方法样本率的比较采用χ2检验(在进行多个样本率的两两比较时，使用“多个样本率两两χ2检验的显著性界值表”法〔11，12〕)；其他实验数据以x±s表示，多个样本均数的比较采用方差分析和SNK检验。

2结果

2.1传统组与改良组大鼠术后4w存活率的比较改良组大鼠术后存活率90.00%(27/30)显著高于传统组存活率66.67%(20/30)(χ2=4.81,P=0.028)。

2.2对0.5、0.6、0.7和0.8mm组4组大鼠术后4w存活率的比较以上4组大鼠术后4w的存活率不相等(χ2=44.91,P=0.0003)；0.8mm组大鼠存活率86.67%(26/30)，分别显著高于0.7mm组存活率63.33%(19/30)(χ2=4.36,P＜0.01)、0.6mm组存活率43.33%(13/30)(χ2=12.38,P＜0.01)及0.5mm组存活率3.33%(1/30)(χ2=42.09,P＜0.01)；该4组大鼠的存活率按由高到低的顺序排列依次为0.8、0.7、0.6、0.5mm组。

2.3MABP、LVMI、LVWT及DCM的检测结果施行改良术式后4w，0.7mm组和0.8mm组大鼠的MABP、LVMI、LVWT以及DCM等指标的检测结果均显著高于假手术组大鼠(见表1)。而0.7mm组大鼠和0.8mm组大鼠之间，就上述指标而言，均无显著差异。表1三组大鼠MABP、LVMI、LVWT以及DCM的比较与假手术组比较：1）P＜0.01

3讨论

在腹主动脉缩窄的动物模型中，由于通过手术造成心脏射血的后负荷增加，形成了不易受各种药物影响的相对稳定的高血压，从而在研究心肌肥厚发生发展机制的过程中，巧妙地区分开血流动力学因素(如高血压)与非血流动力学因素(如神经、体液因素)对心肌肥厚不同的影响作用，因此，该造模法较其他造模法更有利于研究者相对独立和专一地去探讨非血流动力学因素对心肌肥厚的作用〔1，2〕。

在本实验中，传统术式组大鼠的存活率显著低于改良术式组，我们认为这是由于传统术式本身存在的一些问题影响了术后大鼠的存活率。这些问题包括：①在探寻腹主动脉的过程中，需要将肠道外置于腹腔或向一侧牵拉，术毕还纳肠道时容易造成肠道扭转，从而导致术后肠梗阻；②探寻、分离腹主动脉时，需要牵拉肝叶以充分暴露术野，牵拉时极易造成肝脏撕裂；③为了分离腹主动脉而牵拉肝叶和肠道时，容易造成大鼠胆管的断裂；④下腔静脉在相当于右肾水平位置处，由腹主动脉背侧渐移行至其腹侧，从而使经由腹正中切口分离腹主动脉的操作易造成下腔静脉及其属支的损伤。

为了避免上述问题，我们设计了改良术式来制备大鼠模型，这种术式的最大优点为：在腹膜后位对腹主动脉进行手术操作，未触及腹膜及其所包裹的腹腔脏器，从而避免了肝叶牵拉、肠道扭转，确保了胆管和下腔静脉不受损伤，因此，改良术式显著提高了术后大鼠的存活率。但是，在施行改良术式时亦应注意，腹主动脉发出右肾动脉后，右肾动脉随即发出一根肾上腺下动脉，后者贯穿肾门处的脂肪囊，到达肾上腺，在沿右肾动脉探寻腹主动脉的过程中，勿损伤此动脉。

与腹主动脉共同结扎时所用钢丝的外径，决定了抽去钢丝后缩窄点处的腹主动脉恢复再通的内径。因此，使用不同粗度的钢丝必然会对大鼠循环生理产生不同程度的影响，若使用的钢丝过粗，不会显著增加心脏射血的后负荷，也就不能有效地形成心肌肥厚和高血压；若使用的钢丝过细，则会引起缩窄点以下的组织器官缺血、坏死和心衰的发生，导致大鼠模型的死亡率增高。因此，在造模手术中所使用的钢丝，其直径要适宜。目前，在制备本模型的手术操作中，常采用直径为0.7mm的钢丝〔5～7〕，我们认为使用直径0.7mm的钢丝，术后4w大鼠模型的存活率(63.33%)仍偏低，若换用直径0.8mm的钢丝，则可显著提高术后大鼠模型的存活率(提高至86.67%)，同时，又不会影响到大鼠心肌肥厚和高血压的形成效果。

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10李瑾，方宁远，陆惠华，等.依那普利对自发性高血压大鼠心脏局部血管紧张素转换酶及左室肥厚的作用〔J〕.中国老年学杂志，2004；24(11)：10535.

存活范文篇7

糖尿病已经成为仅次于恶性肿瘤、心脑血管疾病危害人类健康的第三大类疾病。近年来,终末期肾病患者中糖尿病肾病的比例在逐年增加,新开始血液透析治疗的患者当中有30%是糖尿病肾病患者［1］。终末期糖尿病肾病患者绝大多数需要接受长期维持性透析治疗,但因糖尿病肾病的特殊性,这类患者的生活质量、生存率均不及其他的血液透析患者。本文旨在探讨如何提高糖尿病肾病患者的透析水平，以进一步改善其生活质量和提高生存率。

1临床资料

1.1一般资料

2000年1月至2007年6月在本院进行血液透析患者37例,其中男20例,女17例,年龄36～79岁(平均61.3岁)，均符合糖尿病肾病诊断标准［2］。另取同期在本院进行血液透析的非糖尿病肾病患者48例作为对照组,其中男31例,女17例,年龄30～72岁(平均59.2岁)。

1.2方法

两组患者均采用GambroAK-95和Fresenius4008B透析机，每周透析2～3次,每次5h。根据每个患者情况给予降压、补充促红细胞生成素、叶酸、维生素、活性维生素D3等,糖尿病肾病患者并予以皮下注射胰岛素控制血糖。比较两组患者首次透析前的肌酐、尿素氮和观察透析后2年的的血白蛋白变化、透析期间发生的并发症(心功能不全、透析低血压、高血压、脑血管意外、感染)、存活情况、死亡原因。

1.3统计学处理

计量资料用(x±s)表示,配对资料用t检验及χ2检验。

2结果

2.1两组存活率比较

糖尿病肾病组1年存活32例(86.49%)，3年存活19例(51.35%)，5年存活5例(13.51%)；非糖尿病肾病组1年存活45例(93.75%)，3年存活38例(79.17%)，5年存活23例(47.92%)。3年和5年的存活率糖尿病肾病组明显低于非糖尿病肾病组(p<0.01)。糖尿病肾病组患者的主要死因是心血管并发症(3年内死亡8例，占同期死亡数的44.44%)和感染(3年内死亡3例，占同期死亡数的的16.67%),主要为透析通路感染和肺部感染，其他死因为脑血管意外、多脏器功能衰竭、电解质紊乱、低血糖。

2.2透析期内两组并发症比较

见表1。糖尿病肾病组心功能不全、透析低血压、感染发生率等均明显高于非糖尿病肾病组。表1两组并发症发生率及血白蛋白比较(略)注：与非糖尿病肾病组比较，p<0.01

2.3肌酐、尿素氮与糖尿病肾病患者存活期关系

糖尿病肾病组存活2年与2年内死亡患者首次接受透析前肌酐、尿素氮比较，存活组首次透析前肌酐(584.3±81.9)μmol/L、尿素氮(23.48±6.89)mmol/L,死亡组患者首次透析前肌酐(921.6±230.1)μmol/L、尿素氮(38.13±12.43)mmol/L，死亡组均明显高于存活组(p<0.01)。

2.4透析2年后两组血白蛋白比较

糖尿病肾病组血白蛋白(26.20±0.19)g/L，非糖尿病肾病组血白蛋白(33.10±0.19)g/L，前者明显低于后者(p<0.01)。

3讨论

3.1透析时机

糖尿病是一种慢性进行性疾病,随着疾病的进展，心、脑、肾和眼底血管均同时受损。故糖尿病患者一旦出现肾功能不全，常进展迅速，即使其肾功能损害不严重，也可出现明显的尿毒症症状和难以控制的水钠潴留，这与患者存在的其他糖尿病并发症如心血管病变、胃肠道病变、低蛋白血症、营养不良等有关。另外，糖尿病肾病患者由于机体代谢异常，体内多种酶的功能缺陷，影响氮质代谢与肌酐的生成，因此所测的血肌酐值常低于实际所代表的肾功能［3］。本资料存活2年以上患者首次透析前肌酐、尿素氮明显低于2年内死亡患者。故对于糖尿病肾病患者透析时机的选择应早于一般患者。作者认为，当CCr降至25ml/min就可行内瘘手术准备透析，当CCr降至20ml/min就可开始透析。适当的提早透析，将有助于提高糖尿病肾病患者的生存率和生活质量。

3.2并发症的防治

糖尿病肾病患者，除一般尿毒症的并发症外，还有更多的并发症，这是影响其生存率和生活质量的主要因素。本资料糖尿病肾病组患者的心功能不全、透析低血压、感染发生率均高于非糖尿病肾病组，糖尿病肾病组44.44%的患者在3年内死于心血管并发症，与文献一致［4］。因此预防和控制心血管并发症必须引起重视。（1）适当提早透析。本资料中5例患者出现了心功能不全才开始透析，其生存时间较短，均死于顽固性心衰。（2）加强宣教，严格控制透析间期体重。体重增加量过多是糖尿病肾病患者的一项独立危险因素［5］，是引起心衰及透析低血压的首要原因,要求患者透析间期体重增加不应超过干体重的3%～5%，以防止心功能不全和透析中低血压的发生。（3）充分透析。糖尿病肾病患者对透析不充分的敏感性更高，因此应尽量保证这些患者的透析时间，降低心血管并发症。（4）合理使用降压药，保持血压稳定。对于易发生透析中低血压的患者透析前可减药或停服一次。感染是糖尿病透析患者的另一重要并发症，主要为透析通路感染和肺部感染。预防透析通路感染的关键是严格无菌操作，对已有感染迹象的患者应及早给予血培养、抗生素封管，如无效则拨管。防治肺部感染的关键是明确病原菌，有针对性治疗。

3.3胰岛素的合理应用

影响糖尿病透析患者血糖的因素较多。终末期肾病患者（不论有无糖尿病）对胰岛素的敏感性都降低,要维持正常血糖水平需要增加胰岛素用量,另外，部分患者通过透析后尿毒症症状改善，食欲好转，随着食量的增加，也要增加胰岛素用量。但是，由于目前多数透析单位使用无糖透析液,4h的治疗会丢失约25～30g糖，而且充分透析可使胰岛素受体的敏感性增加，因而又要求减少胰岛素用量，故糖尿病透析患者血糖调节相对较困难,没有一个具体的公式可遵循。作者认为，首先要加强血糖检测，根据具体情况个体化使用胰岛素，特别要警惕低血糖的发生。本资料有5例曾在透析中发生低血糖。对这类患者透析前胰岛素应减量或停用一次。

3.4改善营养状况

本资料糖尿病肾病组患者血白蛋白明显低于非糖尿病肾病组患者。其实很多糖尿病患者由于胃轻瘫及为控制血糖而过分限制了糖和蛋白质的摄入，在进入透析以前就已经存在营养不良，进入透析后，又由于每次透析丢失蛋白质，使原有的营养不良很难纠正。低蛋白血症是透析患者死亡的独立危险因素［6］,因此对这些患者应加强热量和蛋白质的补充,胃瘫患者给予胃动力药促进胃排空及胃肠蠕动，对严重营养不良者可给于胃肠道外营养。

【参考文献】

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4沈清,甘华,杜晓刚,等.影响糖尿病终末期肾病血液透析患者长期生存率的危险因素分析.重庆医学,2006,35(2):140～141.

存活范文篇8

2014年4月-2015年7月收治急诊护理患者96例，随机分成观察组和对照组各48例，其中观察组男28例，女20例，年龄41～84岁，平均66.3岁，脑卒中分类：出血性脑卒中8例，缺血性脑卒中40例，昏迷指数(GCS)3～12分，平均7.2分。对照组男27例，女21例，年龄40～85岁，平均66.1岁，脑卒中分类：出血性脑卒中7例，缺血性脑卒中41例，昏迷指数(GCS)3～12分，平均7.1分。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义。方法：①对照组：接到急救电话后，立即出车，抵达现场后，建立静脉通路，进行心电监护等常规急救护理。②观察组：接到急救电话后，立即出车，在急救车上与患者及家属接通电话，保持与患者的电话联系，获取患者的基本信息，了解病因、症状，初步判断病情，同时将信息传递给院内专家，指导救护，告诉患者家属禁止禁挪动患者，将头部抬高，清理口腔，冰敷患者头部。当急救车辆到达后，及时、正确地对昏迷指数进行评分，若评分＞8分，要立即转运，若＜8分，立即清理口腔，建立护理通道和静脉通路，吸氧、检测血压，维持生命体质稳定。在转运过程中让患者平卧，头部偏向一侧，同时随时将患者的信息传递给院内专家，进行救护指导。

2结果

两组抵达患者的实施救护时间、住院时间、存活例数比较：观察组抵达患者实施救护时间(30.5±9.2)min，住院时间(11.2±2.6)d，存活23例，存活率47.9%，患者满意度96.8%，对照组抵达患者实施救护时间(41.3±13.2)min，住院时间(18.9±4.5)d，存活18例，存活率37.5%，患者满意度81.3%，两组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。

3讨论

存活范文篇9

【关键词】铅；硒；海马；神经元；神经突起

铅具有显著的神经发育毒性。毒理学实验和人群流行病学调查表明，铅能对神经系统造成不可逆性损害，严重损坏海马神经元，影响学习、记忆及行为发育〔1，2〕。硒有防止铅吸收和加速其排泄的作用，因此，硒有可能成为有效防治铅神经毒性的重要资源〔3〕。为了解硒拮抗铅神经毒性的效果和研究其拮抗作用机制，同时也为更多有效地利用硒，本试验对体外原代培养的Wistar乳鼠海马神经元进行低剂量PbCl2和Na2SeO3染毒，观察低水平铅、硒单独和联合作用对神经细胞生长和存活的影响。

1材料与方法

11材料

111试剂解剖液、种植培养液、无血清培养液［由98%Neurobasal培养基和2%B27(美国Gibco公司)无血清培养基添加剂和1%的青霉素、链霉素和005mol/L的谷氨酰胺(美国Sigma公司)组成］；胰酶、DNaseⅠ、左旋多聚赖氨酸和台盼兰(美国Sigma公司)；PbCl2(上海试四赫维化工有限公司)；Na2SeO3(天津化学试剂研究所)。神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体和神经丝蛋白(NF)抗体(北京中山生物技术有限公司)。

112仪器CO2细胞培养箱(美国ShelLab公司)；全自动图像分析系统(德国KONTRON公司)；图像摄录输入仪(日本JVC公司)；倒置显微镜(德国ZEISS公司)。

113动物出生24h内Wistar大鼠(中山大学北校区动物中心)。

12方法

121海马神经细胞的分散、移植和培养参考文献〔4〕，将乳鼠全身消毒后分层剪开头皮和颅骨，暴露两侧脑半球，分开颞叶皮层，暴露并取出海马回，置解剖液中；清洗后剪碎成糊状，0125%胰酶消化20min，终止消化后离心、过筛、CO2培养箱内培养。第2d更换无血清培养液，以后每隔2d换液1次，每次更换一半培养液。培养第2，3，4，5，6和7d在倒置显微镜下观察细胞生长情况。

122分组及染毒设对照组、Pb组、Se组、Pb+Se组和先Pb后Se组。对照组加入30μl的磷酸盐缓冲液，Pb组加入30μlNa2SeO3，Pb+Se组同时加入PbCl2和Na2SeO3各30μl，先Pb后Se组于培养第2d换液时加入30μl的PbCl2，次日半量换液并加入30μl的Na2SeO3。使PbCl2、Na2SeO3的终浓度分别为1×10-5mol/L和2×10-6mol/L。以后换液时补入相应量的PbCl2或Na2SeO3，维持终浓度不变。

123神经元存活率的测定每次到培养的时间终点，收集细胞，洗涤定容后取10μl细胞悬液台盼兰拒染法进行镜下活细胞计数，获得各个剂量组不同时间终点的活细胞总数，再分析与同一观察时间的对照组的活细胞总数，比较计算各组细胞的相对存活率。

124神经元突起的测定倒置显微镜下(200×)，随机选择3个视野，利用图像自动分析仪测量形态可辨的所有神经元突起的长度。

2结果

21海马神经元形态观察对照组和单独硒作用组的海马神经元镜下呈圆形，体积小，透亮，散在分布；培养2h后开始贴壁，6h后绝大部分细胞已贴壁，光晕明显；12h细胞几乎全部贴壁，且长出短小的突起；2d后细胞有明显增长的突起，胞体饱满多数呈梭形、锥形，胞浆丰富，核大，核仁隐约可见，背景中可见极少数扁平状多边形的神经胶质细胞铺垫；5～6d细胞相互间搭连成片，胞体间突起连接成网状逐渐明显；7d神经元数目不等地聚集成团，突起联结成网。与对照组比较，单独硒作用组的神经元胞体更丰满，神经元突起更长、更粗壮。铅单独作用组(10-5mol/L)的神经元生长改变情况如下：(1)贴壁减少：24h后，培养基中悬浮细胞数目较对照组多，贴壁细胞数减少，致使细胞在培养皿底部分布不均匀；(2)生长迟缓：第3d与对照组比较，散在分布的小体积圆形透亮细胞仍然较多，形态和大小与细胞刚种植时的情形无明显差别；(3)出芽延迟：对照组12～24h即可见短小突起，铅细胞种植后第2d才开始看见细胞变成梭形，伸出短小突起；(4)碎片增多：倒置显微镜下的视野中悬浮细胞和死亡细胞的碎片较多，培养后第7d，培养皿中的神经元已极其稀疏；(5)成团提前：正常神经元在本培养条件下第7d可见明显的成团现象，铅组于第4d即可见神经元细胞5～10个聚齐成团，第5d可见成团细胞中间神经元边界模糊，核仁消失，部分出现裂解，第7d成团神经元消失，皿中细胞数目显著减少。铅硒同时作用组神经元生长的改变情况与铅作用组相似，也出现了贴壁减少、生长迟缓、碎片增多和成团提前的改变，但是二者不完全相同，铅硒同时作用组神经元出芽晚于对照组但较铅组早，培养第6和第7d，贴壁神经元数目明显较铅组多。先加铅后加硒作用组早期改变与铅组相同，但从培养第4d开始，与铅组相比，贴壁神经元数目增多，细胞碎片减少，突起较多且较为粗壮。

22海马神经元存活率分析(表1)表1可见，10-5mol/L铅引起神经元存活率明显下降；单独硒(2×10-6mol/L)对海马神经元存活率的影响不明显；铅硒同时孵育组，存活率最低，提示使用的硒作用剂量可能偏高。

表1Pb、Se对海马神经元存活率的影响（略）

23海马神经元突起长度分析(表2)表2可见，10-5mol/L铅明显抑制了原代培养的海马神经元突起生长(P005)，单独硒(2×10-6mol/L)作用有明显促进海马神经元突起生长的作用，尤其在神经元突起生长早期(P005)；铅和硒共同孵育时，培养早期硒能拮抗铅对神经元突起延伸的抑制(P005)，但随着培养时间延长，这种拮抗作用变得不明显。

表2Pb、Se对海马神经元突起长度的影响（略）

注：与对照组比较，aP005；与Pb组比较，bP005；与Se组比较，cP005

3讨论

低剂量的铅一方面可以引起包括神经细胞在内的多种细胞发生凋亡〔4，5〕，另一方面可以通过多种途径引发神经元死亡〔6，7〕。因此，本研究所观察到的铅抑制体外培养的神经元的存活，应该是铅诱导神经元凋亡和诱发神经元坏死共同作用的结果。本次实验发现，硒对体外培养的海马神经元突起的生长有很明显的促进作用，但作用机制不清楚，硒是否在神经元生长发育过程中参与了对神经细胞粘附因子(NCAM)表达调控需进一步研究。本实验中未观察到硒对体外培养的海马神经元的存活有明显的影响。铅硒共育组较铅组在神经元突起长度上存在差异，尤其在生长早期，提示硒对铅抑制神经元突起生长具有一定的拮抗作用，至于这种拮抗作用随培养时间延长而逐渐减弱至不显著，认为可能与铅的毒作用剂量过高有关，从神经元存活率的结果也能反映这一点，由于高剂量的铅导致对神经元生长的累积毒效应已经超过了硒的拮抗能力。提示应进一步降低铅的毒作用剂量再进行观察研究。

参考文献

〔1〕StewartWF,StewatBS,SimonD,etal.Neurobehavioralfunctionandtibialandchelatableleadlevelsin543formerorganoleadworkers［J］.Neurology,1999,52(8):1610-1617.

〔2〕胡前胜，董胜璋，任铁玲，等.儿童齿铅与智商关系流行病学研究［J］.环境与健康杂志，1999，16(1)：16.

〔3〕NehruB,DuaR.Theeffectofdietaryseleniumonleadneurotoxicity［J］.JEnvironpatholtoxicoloncol,1997,16(1):47-50.

〔4〕DelaFuenteH,PortalesPerezD,BarandaL,etal.Effectsofarsenic,cadmiumandleadontheinductionofapoptosisofnormalhumanmononuclearcells［J］.ClinExpImmunol,2002,129(1):69-77.

〔5〕HeL,PobenzAT,MedranoCJ,etal.Leadandcalciumproducerodphotoreceptorcellapoptosisbyopeningthemitochondrialpermeabilitytransitionpore［J］.JBioChem,2000,275:12175-12184.

存活范文篇10

【关键词】新生胶囊;S180肉瘤肿瘤模型;MGC-803肿瘤模型;扶正祛邪

新生胶囊是由黄芪、乳香、没药等多味中药组成的中药复方制剂,具有清热解毒、活血消症、散结止痛的功效,临床上用于食管癌、胃癌及恶疮肿毒等症的辅助用药。为验证其主要药理作用,我们选用ICR小鼠、BALB/C品系裸鼠,建立S180肉瘤肿瘤模型和MGC-803肿瘤模型,观察新生胶囊扶正祛邪的药理作用,并以参芪颗粒、注射用环磷酰胺为阳性对照,试验结果如下。

1材料

1.1动物小鼠:ICR品系,等级:SPF(清洁级);裸鼠:BALB/C品系,等级:SPF。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。供给源许可证号:SCXK(京)2002-0003。

1.2药物新生胶囊批号:20040118,含量:每克原药提取物相当3.68g生药。提供单位:北京中医药大学。注射用环磷酰胺生产单位:江苏恒瑞医药股份有限公司,产品批号:0208211。临用时用生理盐水配成所需浓度。参芪颗粒生产单位:江西山高制药有限公司,临用时用0.5%羧甲基纤维素钠配成所需浓度。

1.3瘤株小鼠S180瘤株由中医研究院中药研究所提供;小鼠MGC-803瘤株由中国医学科学院肿瘤研究所动物室提供。

1.4仪器与试剂TU-1901双光束紫外可见分光光度计,北京普析通用仪器有限责任公司制造。

2试验方法

2.1祛邪作用的研究

2.1.1对小鼠S180肉瘤瘤体生长的影响[2]肿瘤模型建立于超净工作台中,取S180肉瘤瘤液,以生理盐水稀释,显微镜下计算1ml瘤液中活体瘤细胞数,用生理盐水稀释成所需浓度(1.6×107个/ml),按每只小鼠0.2ml接种于右腋皮下。

取上述健康ICR品系小鼠75只(每次同性别),体重19~21g,无菌条件下,于右侧腋下接种上述配置的S180肿瘤瘤液0.2ml,24h后随机分成5组,模型组,新生胶囊大、中、小剂量组,环磷酰胺阳性对照组,每组15只(分组和给药剂量见表1)。每天各组小鼠灌胃相应药物0.5ml/20g,连续给药8天。阳性对照组小鼠隔日腹腔注射环磷酰胺20mg/kg。共4次,模型组灌胃同体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液。于末次给药24h后处死小鼠,称体重并剥离皮下瘤块,称瘤重,计算各组瘤体重量,并按下列公式计算抑瘤率,以抑瘤率>30%为有效。

抑瘤率=(1-T/C)×100%(T为给药组瘤重,C为对照组瘤重)

以上实验重复3批。表1新生胶囊对S180肉瘤瘤体生长的影响注:与模型组比较,**P<0.01,*P<0.05

2.1.2对BALB/C小鼠MGC-803肉瘤瘤体生长的影响[2]取上述健康BALB/C品系雌性裸鼠50只,体重13~16g,无菌条件下,于右侧肩后接种MGC-803肉瘤瘤块3mm×3mm±2mm,24h后随机分成5组:模型组,新生胶囊大、中、小剂量组,环磷酰胺阳性对照组,每组10只(分组和给药剂量见表2)。每天各组小鼠灌胃相应药物0.1ml/20g,连续给药25天。阳性对照组小鼠每隔6天腹腔注射环磷酰胺20mg/kg,共连续4次,模型组小鼠灌胃同体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液。于末次给药24h后处死小鼠,称体重并剥离皮下瘤块,称瘤重,计算各组瘤体重量,并按下列公式计算抑瘤率,以抑瘤率>30%为有效。

抑瘤率=(1-T/C)×100%

(T为给药组瘤重,C为对照组瘤重)

以上实验重复2次。表2新生胶囊对MGC-803肉瘤瘤体生长的影响注:与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01

2.1.3对S180腹水肿瘤小鼠生命存活时间的影响[1]取上述健康ICR小鼠75只,按体重随机分为5组,无菌条件下,以生理盐水稀释S180腹水肿瘤细胞(1.2×107个/ml),每只小鼠腹腔注射S180肿瘤腹水液0.2ml,24h后按体重随机分为5组(分组、给药剂量及方法同2.1.1),连续给药14天,观察记录各组小鼠存活的天数,并计算生存率。以上实验重复3次。见表3。表3新生胶囊对S180腹水肿瘤小鼠存活时间的影响注:与模型组比较,**P<0.01

2.2扶正作用的研究(对小鼠免疫功能的影响)

2.2.1对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响取上述健康ICR雌性小鼠60只,体重20~22g,无菌条件下,于右侧腋下接种S180肿瘤细胞(1.6×107个/ml)0.2ml,24h后随机分成5组:模型组,新生胶囊大、中、小剂量组,环磷酰胺阳性对照组,每组12只(分组、给药剂量见表4)。另设一组空白对照组,每天各组小鼠灌胃相应药物0.5ml/20g,连续给药8天。阳性对照组小鼠隔日腹腔注射环磷酰胺20mg/kg。共4次,模型组和空白对照组灌胃同体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液。于末次给药24h后处死小鼠,解剖,称取胸腺、脾脏重量,按下列公式计算器官系数。

胸腺指数=胸腺(mg)/体重(g)

脾指数=脾脏(mg)/体重(g)表4新生胶囊对荷瘤小鼠免疫器官的影响注:与模型组比较,**P<0.01;与空白组比较,△△P<0.01

2.2.2对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响[3](小鼠碳粒廓清法)取健康ICR品系小鼠78只,雌雄各半。按体重随机分为6组(分组及给药剂量见表5),各组小鼠每天分别灌胃相应药物0.5ml/20g体重,连续14天。除空白对照组外,其余各组小鼠分别于给药后第8天、10天小鼠腹腔注射环磷酰胺100mg/kg,造成小鼠免疫功能低下模型,于末次给药后1h,每只小鼠尾静脉注射印度墨汁0.1ml/10g体重,分别于注射后1min、5min从小鼠眼静脉丛取血20μl,溶于2.5ml0.1%Na2CO3溶液中摇匀,照分光光度法,在680nm处测定吸收度(OD)值,最后将小鼠颈椎脱臼处死,分别称取肝脾重量。按下列公式计算廓清指数(K)和校正廓清指数(a)进行统计学计算。

K=logOD1-logOD2T2-T1

ɑ=3K×体重/(肝重+脾重)表5新生胶囊对小鼠RES吞噬功能的影响注:与空白对照组比较,△△P<0.01;与模型组比较,*P<0.05

2.2.3小鼠体液免疫功能的影响(溶血素法)取健康ICR品系小鼠78只,雌雄各半。按体重随机分成6组(分组、给药剂量见表6),每组13只。各组小鼠每天分别灌胃相应药物0.5ml/20g体重,模型组、空白对照组灌胃同体积0.5%CMC-Na溶液,连续给药14天。于给药后第7天,各组按0.2ml/只腹腔注射5%鸡红细胞生理盐水混悬液进行免疫。第8天、10天除空白对照组小鼠外其他各组小鼠每只腹腔注射环磷酰胺100mg/kg,造成小鼠免疫功能低下模型。并于免疫后第7天,各组动物取血,将血清稀释100倍。取稀释血清,与5%鸡红细胞、10%豚鼠血清(补体)作用后,离心,取上清液于540nm处测定光密度(OD值),各组进行比较,进行统计学计算。表6新生胶囊对小鼠血清溶血素含量的影响注:与空白组比较,△△P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01

2.3增效作用的研究(与环磷酰胺合用对S180腹水小鼠存活时间的影响)取上述健康ICR小鼠90只,按体重随机分为6组,无菌条件下,以生理盐水稀释S180腹水肿瘤细胞(1.2×107个/ml),每只小鼠腹腔注射S180肿瘤腹水液0.2ml,24h后按体重随机分为6组,模型组,新生胶囊大、中、小剂量组,环磷酰胺5mg/kg、20mg/kg剂量组,各组每天灌胃给药(药剂量及方法同2.1.1),同时新生胶囊各组隔日腹腔注射环磷酰胺5mg/kg体重,连续14天,观察记录各组小鼠存活的天数。以上实验重复2次。

2.4统计学方法以SPSS统计软件,进行统计学处理。实验结果用平均值±标准差(x±s)表示,组间差异用t检验。

3试验结果

3.1祛邪作用的研究(抗肿瘤作用研究)

3.1.1对小鼠S180肉瘤瘤体生长的影响试验结果表明:S180肿瘤模型小鼠口服新生胶囊大、中剂量组能显着抑制S180移植瘤的生长,与肿瘤模型组比较差异有显着性(P<0.01)。结果见表1。

3.1.2对BALB/C小鼠MGC-803肉瘤瘤体生长的影响试验结果表明:MGC-803肿瘤模型小鼠口服新生胶囊大、中剂量组能显着抑制BALB/C小鼠MGC-803移植瘤的生长,与肿瘤模型组比较差异有显着性(P<0.05)。结果见表2。

3.1.3对S180腹水肿瘤小鼠生命存活时间的影响试验结果表明:S180腹水肿瘤小鼠口服新生胶囊小鼠的存活时间与模型组比较差异无显着性(P>0.05)。注射环磷酰胺组小鼠与模型组比较差异有显着性(P<0.01),结果见表3。

3.2扶正作用的研究(对免疫功能的影响)

3.2.1对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响试验结果表明:与模型对照组比较,新生胶囊大、中、小剂量对荷瘤小鼠胸腺、脾脏重量,差异无显着性(P>0.05)。结果见表4。

3.2.2对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响(小鼠碳粒廓清法)试验结果表明:小鼠灌胃新生胶囊3.15g生药/kg、1.58g生药/kg14天后,对环磷酰胺引起的免疫功能低下,有提高K值(廓清指数)的作用,与模型组比较差异有显着性(P<0.05),结果见表5。

3.2.3对小鼠体液免疫功能的影响(溶血素法)试验结果表明:小鼠口服新生胶囊3.15g生药/kg、1.58g生药/kg、0.79g生药/kg,可提高血清溶血素含量,与模型组小鼠比较差异有显着性(P<0.05),结果见表6。

3.3增效作用的研究(与环磷酰胺合用对S180腹水小鼠存活时间的影响)结果表明:新生胶囊大剂量组小鼠合用环磷酰胺5mg/kg,生命延长率为33.2%,38.86%提示新生胶囊与环磷酰胺合用对S180腹水小鼠存活时间有协同增效作用的趋势。结果见表7。表7新生胶囊与环磷酰胺合用对S180腹水肿瘤小鼠存活时间的影响注:与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01

4小结

新生胶囊是由黄芪、乳香、没药、重楼、人工麝香等中药组成的复方制剂,具有清热解毒、活血消症、散结止痛的功效,临床上将用于食管癌、胃癌及恶疮肿毒等症的辅助用药。动物试验表明:(1)新生胶囊具有一定的祛邪作用。大、中剂量组能显着抑制S180荷瘤小鼠和BALB/C小鼠MGC-803移植瘤的生长,与肿瘤模型组比较差异有显着性(P<0.05)。(2)小鼠灌胃新生胶囊,对S180腹水肿瘤小鼠生命存活时间与模型组比较差异无显着性(P>0.05)。但小鼠灌胃新生胶囊3.15g/kg同时注射环磷酰胺5mg/kg可以延长S180腹水小鼠存活时间,生命延长率为33.2%~38.86%,提示新生胶囊与环磷酰胺合用对S180腹水小鼠存活时间有一定协同增效作用趋势。(3)新生胶囊具有一定的扶正作用。小鼠灌胃新生胶囊,对注射环磷酰胺引起的免疫功能降低有一定的改善作用,对血流中碳粒的吞噬廓清能力有一定的增强作用。提高吞噬指数(K)、增加血清溶血素含量,与模型组比较差异有显着性(P<0.05)。

5讨论

肿瘤,尤其是恶性肿瘤是危害人民健康的重大疾病之一,临床上对肿瘤的治疗,无论是放疗或是化疗,都有一定的副作用,给患者带来痛苦和肌体免疫力的下降,新生胶囊是中药复方制剂,具有清热解毒、活血消症、散结止痛的功效,动物试验也表明具有一定的扶正祛邪、增强机体免疫功能的作用。这对于临床上治疗肿瘤,减少放化疗带来的痛苦又增加了新的治疗途径。

【参考文献】

1陈奇.中药药理研究方法学,第2版.北京:人民卫生出版社,2006,1019-1021.