载脂蛋白十篇

载脂蛋白篇1

［关键词］ 脑梗死；血脂；脂蛋白；载脂蛋白；C反应蛋白

中图分类号：R743.3

文献标 识码：A

文章编号：1009_816X(2011)05_0366_03

DOI:10.3969/j.issn.1009_816X.2011.05.14

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是一种炎性病变，越来越多的证据表明，炎症反应 在脑动脉硬化形成过程中发挥着重要的作用。C反应蛋白(CRP)是机体急性时相反应蛋白,在 加重炎症反应及斑块破裂甚至促发局部血栓形成过程中起一定的作用。血脂、脂蛋白、载脂 蛋白被认为是影响脑动脉硬化的因素，有研究表明，脂蛋白、载脂蛋白水平是急性心血管事 件的炎性标记物［1］，本文旨在探讨急性期脑梗死患者血脂、脂蛋白、载脂蛋白水 平与C反应蛋白的关系，以期为脑梗死的防治提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择2010年5月至2010年11月在我院神经内科住院的急性脑梗死患者105例 ,诊断参照1996年第四届全国脑血管病学术会议修订的统一标准［2］,全部病例均经 头颅CT或MRI证实,并明确梗死部位。其中男60例,女45例,年龄55～91(67.19±12.12)岁； 前循环梗死69例，后循环梗死36例；高血压病25例；糖尿病13例；冠心病37例；既往均无脑 梗死病史；排除近3个月内应用具有免疫调节作用药物、近期有手术及外伤病史、出血性脑 血管病、感染、肿瘤、血液病、自身免疫性疾病以及严重的肝、心、肾功能损害病人。

1.2 方法：入院后第2天晨起空腹肘静脉取血送检血脂、脂蛋白、载脂蛋白、C反应蛋白。 C 反应蛋白试剂盒购自北京九强生物技术有限公司，血脂、脂蛋白、载脂蛋白试剂盒购自德赛 诊断系统（上海）有限公司，采用免疫透射比浊法进行上述指标的检测，严格按照试剂盒说 明操作，随批质控，C反应蛋白正常参考值为0～6mg/L。检测仪器为日立7600型全自动生化 分析仪。

1.3 统计学处理：应用SPSS17.0统计软件进行数据统计分析,所有指标均行Kolmogorov S mirnov法正态性检验，相关性采用spearman相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

血脂、脂蛋白、载脂蛋白检测结果见表1。对所有数据进行正态性检验，结果显示甘油三酯 、高密度脂蛋白(HDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)和C反应蛋白P值均小于0.05，呈非正态分布 ；总胆固醇、低密度脂蛋白(LDL)、载脂蛋白AI（apoAI），载脂蛋白B(apoB)，载脂蛋白B/ 载脂蛋白AI(apoB/apoAI)P值均大于0.05，呈正态分布。采用spearman相关分析，结果显示 ，apoAI与C反应蛋白呈负相关（r=-0.22，P＜0.05）（图1）,apoB/apoAI与C反应蛋 白呈显著正相关(r=0.34，P＜0.01）（图2）。

3 讨论

血脂异常是动脉粥样硬化性血管疾病最重要的危险因素之一，与其发生、发展和预后等有密 切关系。总胆固醇、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和甘油三酯已列为临床 实验室的常规血脂检测项目。近年来，国外发表了大量有关载脂蛋白Al(apoAl)、载脂蛋白B (apoB)的长期前瞻性和回顾性研究，结果显示apoAl，apoB及apoB/apoAl比值在预测心脑血 管疾病方面更优于常规脂质谱测定。因此，反映致动脉粥样硬化脂蛋白颗粒总和的ApoB和反 映抗动脉粥样硬化HDL颗粒总和的apoAl可能比其他常规脂质指标更能准确反映脑卒中风险。

C反应蛋白是一种有高度敏感性的炎性标记物,直接参与和影响了动脉粥样硬化形成过程以及 粥样硬化斑块破裂,因此,C反应蛋白在缺血性脑卒中发生和发展过程中起一定作用。C反应蛋 白是一种典型的人类急性期蛋白，主要由肝脏合成。当机体遭受组织损伤或病毒侵染时，C 反应蛋白的血浆浓度会迅速升高，因而在临床上被广泛用作炎症的非特异性标识物［3 ］。脑 血管疾病（cerebra vascular disease，CVD）是对人类健康威胁最为严重的疾病之一，其 致病主要因为动脉粥样硬化。炎症在动脉粥样硬化病理过程的各个阶段中均发挥着主导作用 ［4］。C反应蛋白是由5个相同亚基以非共价方式组装而成，以五聚体的C反应蛋白在 特定条件 下解聚成单体C反应蛋白（mCRP），通过研究发现，mCRP具有识别LDL变体、调控补体系统激 活及LDL代谢能力［5,6］，此外，mCRP还是多种细胞炎性应答的强刺激分子，因此， 与低密度 脂蛋白和补体系统的相互作用，被认为是C反应蛋白参与动脉粥样硬化进程的重要事件。

apoAI是HDL的主要组成部分，能抑制补体的激活以及减少巨噬细胞的渗透和泡沫细胞的形成 。这种apoAI和炎症反应的联系可能解释增高的apoAI具有稳定斑块的作用。apoAI能抑制脑 动脉硬化的形成，apoAI与C反应蛋白呈负相关，说明在炎症反应状态下，apoAI水平随之下 降，流式细胞术显示，apoAI通过结合T细胞来抑制单核细胞的活性，从而抑制TNF_α和IL_1 β的形成。此外，apoAI还下调中性粒细胞和单核细胞的功能。本文中，apoAI与C反应蛋白 呈负相关，apoB与C反应蛋白呈正相关，进一步表明apoAI能降低炎症反应，并延缓脑动脉硬 化的进程。一项大型的卒中 危险因素INTERSTROKE研究已将apoB/apoAI列为脑卒中的十大危险因素之一，并认为apoB/ap oAI水平的升高是脑动脉硬化的强烈危险因素［7］，本文apoB/apoAI与C反应蛋白显 著正相关 ，这可能与apoB的致动脉粥样硬化以及apoAI的抗动脉粥样硬化有关，apoAI和apoB/apoAI与 炎症标记物C反应蛋白的相关性进一步表明这两个指标与炎症反应有关，而甘油三酯、总胆 固醇、HDL、LDL、VLDL与C反应蛋白无显著相关，提示这些指标与炎症反应的关系不明显。

炎症反应在脑梗死病变过程中起着一定作用，载脂蛋白与C反应蛋白联合检测，对提高患者 发生脑梗死危险性的预测有较高价值；有报道［8］，给予他汀类药物可以降低apoB/ apoAI，今后我们可以将apoAI、apoB和apoB/apoAI与C反应蛋白联合检测，作为防治脑梗死 的参考指标。

参考文献

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载脂蛋白篇2

载脂蛋白E是身体内低密度脂蛋白受体的配体，出现血脂较高的情况，必要时需要服用降血脂的药物进一步治疗。平常在饮食上应注意适当的清淡饮食，避免进食过于油腻的食物以及胆固醇含量较高的食物，如蛋黄以及动物的内脏等食物。应注意适度的锻炼身体，避免熬夜、劳累。

（来源：文章屋网 http://www.wzu.com）

载脂蛋白篇3

【关键词】载脂蛋白A1;性能评价

【中图分类号】R446.11【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)10-045-1

载脂蛋白A1(apoli popro tein A1,ApoA1)是高密度脂蛋白(HDL)的主要结构蛋白。其含量基本可反应HDL颗多少。血清/血浆样品ApoA1减少提示心血管(冠心病),脑血管(脑血栓)疾病的危险性增加,常被作为心脑血管疾病的危险性评价的灵敏指标之一,ApoA1含量的测定,对预防和评价心脑血管疾病比其它脂类和脂蛋白更有效。目前最为常用测定ApoA1的方法为免疫比浊法,主要是利用抗原与相应的抗体发生特异性反应,形成抗原-抗体复合物,并形成一定浊度。该浊度的高低在一定量抗体存在时与抗原的含量成正比。通过与同样处理的校准液比较,计算未知样品中的ApoA1含量。本文结合国内应用较广的浙江伊利康生物技术有限公司生产的载脂蛋白A1检测试剂盒进行了主要的指标评价和探讨。现将结果报告如下:

1材料与方法

1.1样本我院住院病人当天空腹标本。

1.2试剂和仪器ApoA1检测试剂盒由浙江伊利康生物技术有限公司生产;批号:091205;比对试剂Randoxwc公司生产,仪器为HITACHI 7180全自动生化分析仪。

1.3方法均按试剂盒生产厂商提供测定参数、测定方法进行。对伊利康公司试剂进行精密度、准确度、相关性、性线范围、稳定性等性能进行测试。

2实验结果

2.1精密度按NCCLS[1]评价方案,取低、中、高三个不同浓度的ApoA1样本,连续测20次,再每天测1次,共测20d,结果见表1

表1 批内和批间精密度测定结果(g/L n=20)

标本 ApoB

批内 批间

-x SD CV% -x SD CV%

低 0.84 0.0138 2.79 0.84 0.0133 2.19

中 1.26 0.0176 1.68 1.26 0.0175 1.53

高 2.15 0.0244 1.17 2.15 0.0229 1.08

2.2回收试验取一份新鲜混合血清,ApoA1的浓度1.24g/L,将其分成6份,每管0.9m1.分别加入ApoA1为2.0g/L、1.16g/L、0.82g/L的高、中、低血清0.1ml,混合后ApoA1浓度分别为1.316g/L、1.232g/L、1.198g/L共3个浓度的样品;用伊利康公司的ApoA1试剂共测定5次,计算回收率分别为101.3%、99.6%、100.7%,平均为100.5%。

2.3线性范围测定按NCCLS[2]文件作线性评价标准,取一高值标本(ApoA1为2.0g/L)和一低值标本(ApoA1为0.5g/L),然后把2份样本等量混匀产生中间值,再分别将中间值和低值,中间值和高值等量混匀,共产生5个不同值的样品。在分析仪上用本试剂从低值到高值,然后从高值到低值对5个不同浓度的标本分别平行测定5次,求得均值为Y,以理论值为X,经线性回归分析,结果回归方程为:Y=0.9914X+0.075,r=0.9998,稀释变异试验

2.4对比实验取ApoA1浓度从0.4～2.0g/L的不同病人新鲜血清标本50份,分别用本试剂(Y)和Randox试剂(X)同时测定;测定数据均按NCCLS(EP6P)文件统计,结果相关系数r=0.9987,相关方程为Y=1.0251X+0.0047。

2.5干扰试验将一份新鲜的混合血清,对其ApoAI进行测定,其浓度为1.36g/L,将其分成12份,在其中分别加入不同浓度的抗坏血酸、血红蛋白、胆红素和VLDL组份,分别测定ApoAI浓度,结果表明TG浓度

3结论

上述实验表明,伊利康公司生产的载脂蛋白A1检测试剂盒结果精密度高,重复性好,日内不精密度(CV)小于3%。与进口原装试剂比较相关系数r=0.9987,相关方程为Y=1.0251X+0.0047。抗干扰能力强,TG浓度

参考文献

[1] 杨昌国等.精密度评价和方法比较中NCCLS评价方案的应用[J].临床检验杂志,1999,17(1):47.

载脂蛋白篇4

【关键词】 冠心病；载脂蛋白a-ⅰ；载脂蛋白b；载脂蛋白a-ⅰ/载脂蛋白b

脂蛋白含量增高是心血管疾病的一个独立危险因素［1］。为探讨载脂蛋白a-ⅰ、载脂蛋白b及apoa-ⅰ与apob比值与冠心病（chd）的关系，笔者所分析52例冠心病病人以及50例健康人进行血清总胆固醇（tc）、甘油三酯（tg）、apoa-ⅰ、apob进行测定，并进行比值比较。现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本组52例冠心病病人均来自本院心血管内科住院病人，年龄40～70岁，平均56.4岁，按1979年国际心血管病学会公布的冠心病诊断标准诊断为冠心病的病人。对照组50例，年龄38～68岁，平均55.8岁，选自健康体检者。空腹采血，测定tc、tg、apoa-ⅰ、apob、apoa-ⅰ/apob进行计算。

1.2 试剂 apoa-ⅰ、apob由上海明华体外诊断试剂有限责任公司提供，tc、tg试剂由南京建成生物工程研究所提供。

1.3 方法 apoa-ⅰ、apob采用免疫比浊法，tc、tg采用氧化酶法。

1.4 仪器 日本岛津uv-260型紫外分光光度计。

2 结果

测定52例冠心病病人空腹血清中血脂及载脂蛋白，结果显示，冠心病人的tc、tg与apob的水平平均高于对照组，apoa-ⅰ的水平则低于对照组，而apoa-ⅰ/apob差异也有非常显著性（p＜0.01），见表1。

表1 两组各项血脂指标检测结果比较 （略）

3 讨论

血脂及脂蛋白代谢异常与冠心病有密切关系［3］。载脂蛋白是脂蛋白（lp）颗粒外层中的蛋白质部分，是维持脂蛋白结构和脂质运输功能的主要成分，apoa-ⅰ是hdl主要蛋白，在肝脏和肠道合成，分子量2.8万。具有活化卵磷脂胆固醇转酰酶（lcat）的作用，活化lcat，能使游离胆固醇转化为胆固醇，使胆固醇作为hdl的核心成分，维持hdl的正常结构［2］。apoa-ⅰ又是hdl进行“胆固醇”逆向转运的功能单位，因此，apoa-ⅰ在调节从动脉粥样硬化斑块中消除胆固醇速度方面起重要作用［4］。

本组冠心病人血清apoa-ⅰ为（1.06±0.12）g/l，明显低于正常健康人（1.24±0.29）g/l水平（p＜0.05），符合冠心病改变规律。apob是ldl的基本蛋白成分，在肝脏合成，分子量40万。apob的主要机能是作为ldl受体识别标记及调节周围胆固醇代谢，对动脉粥样硬化形成比ldl或胆固醇具有更重要意义，ldl-c或血清胆固醇水平正常而apob升高者，仍可增加冠状动脉粥样硬化的可能。此外apob还可刺激平滑肌细胞增殖并进入内膜下层，促进动脉粥样硬化发生。本组冠心病病人apob为（1.18±0.18）g/l，明显高于对照组（0.94±0.19）g/l（p＜0.05）。冠心病病人apoa-ⅰ/apob比值为（0.96±0.27），明显低于对照组（1.31±0.38），差异均有非常显著性（p＜0.01）。

综上所述，表明载脂蛋白apoa-ⅰ与apob血清浓度与冠状动脉粥样硬化的形成和发展密切相关。一般认为与apoa-ⅰ的水平呈负相关，与apob的水平呈正相关，特别是临床病人中出现apoa-ⅰ下降、apob升高的病人，应该引起我们的注意，警惕冠心病的发生，密切进行监测。并由此我们可以认为apoa-ⅰ、apob、apoa-ⅰ/apob测定是诊断治疗冠心病更有意义的敏感指标。

【参考文献】

1 付振虹，董蔚，盖鲁粤，等.载脂蛋白a1、载脂蛋白a1与载脂蛋白b比值与下肢动脉粥样硬化闭塞症的关系.临床内科杂志，2004，21（8）：519-521.

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载脂蛋白篇5

[关键词]载脂蛋白E基因; 敲除小鼠; 动脉粥样硬化

[中图分类号] R543.1+2[文献标识码]A [文章编号] 1005-0515(2010)-10-022-02

Effect of APOE-gene Knockout Mice and Research of Atherosclerosis

Nie saiZhao shui-ping(auditing)

(Cardiology of 2nd Xiangya Hospital of Central South University,Hunan-changsha, 410011)

[Abstract]APOE is an important component of plasma a lipoproteins, and plays significant roles in lipoprotein metabolism. The absence or mutation of APOE may induce abnormal lmetabolism in vivo and dysfunction of organs, and then lead to a series of diseases and complications. APOE-knockout mice is one of the best models for research on mechanism of atherosclerosis, which became a popular model used in studies on vulnerable plaques. This article explore pathologic characteristics of atherosclerotic plaques, high fat diet, aerobic movement and application in pharmacological research about APOE gene knockout mice.

[Keywords] Apolipoprotein E; Gene knockout; Atherosclerosis; Mice

载脂蛋白E(ApoE)于1973年发现,与已知氨基酸序列的载脂蛋白相比,其精氨酸含量较高,故曾称为富含精氨酸的载脂蛋白(ARP)。1975年,Utermann建议根据字母顺序将其命名为ApoE。1992年美国洛克菲勒大学生化遗传和代谢实验室和北卡罗来纳大学病理遗传实验室应用胚胎干细胞基因敲除技术,成功培育出载脂蛋白E基因敲除小鼠[1]。载脂蛋白E作为配体,有助于乳糜微粒和极低密度脂蛋白的清除。因此,缺乏ApoE则会导致血液循环中脂蛋白代谢障碍,易于沉积动脉壁内,引起动脉粥样硬化(AS)斑块。ApoE基因敲除小鼠易形成严重高脂血症及AS病灶,所以广泛应用于AS的研究。

1ApoE基因敲除小鼠AS病灶的病理特点

对正常饮食下的ApoE基因敲除小鼠进行观察[2],发现血浆总胆固醇(TC)含量比同期正常小鼠高4-5倍,随着时间延长,可出现不同的病变特征。5-6周时动脉内皮上有单核细胞黏附,并向内皮下移动;10周时脂质条纹形成;15周时可见斑块形成,其内可见泡沫细胞和平滑肌细胞;20周时则有胶原和弹性纤维包饶的平滑肌细胞组成的纤维帽覆盖在坏死核心表面,形成成熟的斑块。随着时间延长,可出现钙化、增生的纤维帽,8个月左右冠脉动脉口处由于粥样硬化斑块的发展形成严重闭塞。这种小鼠虽然病变严重,但仍能在一般条件下存活。

将ApoE基因敲除小鼠分为低脂饮食组与高脂饮食组,分别在6、8、10、15、20、30、40周时,观察血管组织形态变化,发现AS各阶段的病理表现均存在于这种小鼠,与其他AS小鼠模型比较,ApoE基因敲除小鼠不仅能够在瓣膜基底,而且能够在所有胸腹动脉中形成广泛的粥样硬化病变,如:主动脉分支、颈动脉、肺动脉等。所以,ApoE基因敲除小鼠的AS病变发展同人类极其相似[3]。Cullen[4]研究认为,因为动物本身的特性及诱导斑块破裂和检查手段的限制及不确定性,使其不能够准确的反映或代表复杂的人类粥样硬化斑块,而ApoE基因敲除小鼠的自发破裂与人类的形似性更好。

42-60周龄的ApoE基因敲除小鼠,头臂段动脉存在富含胶原的纤维脂质斑,斑块内有坏死核和出血及被包埋的多层损伤,认为后者是由于反复斑块破裂后修复所致[5]。早期的钙化,对斑块破裂有促进作用,斑块在不同密度组织的交界面最易破裂;而当钙化融合后,这种交界面减少,破裂发生率也降低了[6]。因此,钙化对于斑块破裂是把“双刃剑”。

2膳食和遗传背景对APOE基因敲除小鼠AS病灶的影响

动脉粥样硬化小鼠模型中,经常用高脂饮食来诱导或加快AS的形成。已知不同剂量或不同类型的脂肪酸、加用或不加用胆固醇等,对于模型小鼠的血脂水平,或动脉粥样硬化的形成都具有重要的影响。

一般认为,动物模型发生和形成典型的AS病变,血胆固醇水平至少持续保持在300mg/dL以上。应用最多的是Getz等[7]认为的西方膳食(Western-type diet),包含有21%脂肪和0.15%胆固醇的膳食,可以使ApoE基因敲除小鼠胆固醇水平短时间内达到并持续保持1500mg/dL(38.79mmol/L)以上甚至更高。且研究发现,西方膳食与18%脂肪和0.25%胆固醇的膳食相比,在增高血脂水平及在主动脉弓部或无名动脉形成动脉粥样硬化损害的作用相似,同时0.15%和0.5%胆固醇的膳食,在诱导动脉粥样硬化损害形成上没有差别。

有研究表明,尽管ApoE基因敲除会导致高脂血症,但不同基因表型或不同遗传背景决定ApoE基因敲除小鼠的形成的AS严重程度。给予相同的高脂饮食,杂合子ApoE基因敲除小鼠(apoE+/-)血脂水平与野生型小鼠比较无显著差别,但AS损害面积是野生型小鼠的10倍左右,而对于纯合子ApoE基因敲除小鼠(apoE-/-),血浆胆固醇水平会更高(>2000mg/dL),大动脉的AS损害面积是杂合子apoE+/-的50倍。比较C57BL/6和FVB/NJ来源的ApoE基因敲除小鼠,发现给与相同膳食,FVB/NJ背景的小鼠血胆固醇浓度相对较高,C57BL/6背景的小鼠主动脉AS损害面积是FVB/NJ背景的8倍[8]。

3ApoE基因敲除小鼠斑块产生机理

ApoE基因敲除小鼠的血浆中总胆固醇浓度明显增高,三酰甘油水平亦比正常小鼠高68%,并不受年龄和性别的影响;但其高密度脂蛋白(HDL)却只有正常小鼠的45%。正常小鼠的胆固醇主要存在于HDL中,而ApoE主要存在于乳糜微粒(CM)和极低密度脂蛋白(VLDL)中;但是敲除ApoE基因后,胆固醇就不再主要存在于HDL中,而是在VLDL[9]。此时VLDL中大量的胆固醇就不能从小鼠体内降解,而在体内蓄积,导致动脉粥样硬化。

利用ApoE基因敲除小鼠研究极低密度脂蛋白(VLDL)和中间密度脂蛋白(IDL)的致动脉粥硬化作用,并从形态学方面证实,该模型易发生动脉粥样硬化,主要是VLDL和IDL从体内清除的延缓。并有研究显示,VLDL和IDL作为导致小鼠动脉粥样硬化的脂蛋白,以不依赖ApoE的方式直接作用于巨噬细胞,使之在动脉壁损伤处转化为泡沫细胞。

4ApoE基因敲除小鼠与AS的干预研究

利用此动物模型,可观察各种抗AS治疗措施的疗效。已发表了许多相关研究结果,大致可分两大类干预方法:降脂和非降脂措施。

4.1 他汀类药物的作用

利用此动物模型,Johnson等[10]观察到,普伐他汀(40mg/kg.d)可减少早期(9周)斑块的破裂,而且在不稳定斑块形成后依然有效,但与降低血浆胆固醇浓度无关。Taral等[11]研究显示, 辛伐他汀具有抗炎、抑制钙化及稳定斑块的作用。他汀类药物的调脂作用仍然具有争议,不同的研究结果皆然不同,有解释认为与给药方式不同有关。但高、低剂量辛伐他汀的调脂效果差异不明显,这可能与应用时间较短有关[12]。晏沐阳等[13]研究显示,辛伐他汀的应用可以小鼠的动脉粥样硬化斑块面积减小,降低血清中LDL-C和TC的水平,同时还有他汀类药物降低炎性反应,抑制金属蛋白酶活性等独立于调脂以外的作用。

4.2 非他汀调脂药物的作用

Zhang等[14]给予ApoE基因敲除小鼠口服普罗布考(0.5%,wt/wt),发现该药在降低血浆TC的同时,使高密度脂蛋白(HDL)和ApoAI明显降低。然而,主动脉AS斑块发展的速度比非用药组明显加快,面积约非组的2-4倍。组织学分析,普罗布考组小鼠病变以纤维组织增生为主,而非泡沫细胞,通常认为这种现象与局灶性炎症反应和动脉瘤扩张有关,而且给予高脂饮食的正常小鼠,普罗布考亦可加快粥样病变的发展。提示通过普罗布考降低血浆TC并非抗AS的有效措施。

4.3 非调脂药物的作用

Bourassa等[15]研究内源性和外源性雌激素对ApoE基因敲除小鼠对AS的影响。发现内源性雌激素较外源性雌激素能明显减轻AS病变,这种现象可能与内源性雌激素影响血浆脂蛋白的水平有关。治疗糖尿病药物罗格列酮可以减少巨噬细胞的浸润,同时减少新生内膜的形成,具有直接抗动脉粥样硬化的作用[16]。钙离子通道拮抗剂-拉西地平可以通过抗氧化作用和血管活性作用来抑制动脉粥样硬化的发生发展[17]。非洛地平及厄贝沙坦可能是通过阻断氧化应激反应抑制动脉粥样硬化发生发展[18,19]。而单独运用哌唑嗪(7.5mg/kg.d)既未能明显减缓小鼠AS的发展,也不能有效降低血压;氯沙坦(20或30mg/kg.d)除轻微降低血压外,对AS基本无影响。然而,两种药物同时使用时小鼠的AS斑块和血压都有了显著的降低,但以上方法在用药过程中对血浆TC都无明显影响[20]。

4.4 有氧运动的作用

Napoli等[21]研究了中度有氧运动(游泳)联合代谢治疗(含1.0%Vitamin E普通饮食、含0.05% Vitamin C和6%L-精氨酸饮水),对6周龄ApoE基因敲除小鼠长期的作用,发现,任何一种治疗都可以缓慢AS的形成,并联合治疗与单独任意一种干预方式相比,更能明显的减少AS损害和自发斑块破裂率,以及提高生存率,认为早期干预是必要的,有益的。在跑台上进行中等强度有氧运动的ApoE基因敲除小鼠的TC、TG和LDL-C和ApoB水平显著降低,AS斑块面积明显减少,有氧运动和低脂饮食两种结合的作用大于单独有氧运动和低脂饮食的作用,两者可以起协同加强的作用[22]。

ApoE在脂质代谢、心血管疾病、神经系统病变和糖尿病及其并发症等方面的研究已经广泛开展,但是ApoE在这些病理生理过程中发挥的作用及其机制并不十分清楚,尚需要进一步研究。然而,ApoE基因敲除小鼠所致的AS模型缘于遗传因素损伤,其病变更接近人类AS,相对于进食高脂饲料而发生AS的动物具有自然发生、渐进发展、病理形态典型等特点,为研究AS发病机理和干预措施提供了良好的实验平台,开拓了广阔的研究前景。

参考文献

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载脂蛋白篇6

【关键词】 糖尿病；冠心病；脂肪酸结合蛋白；基因多态性；载脂蛋白E

ABSTRACT: Objective To study the relationship of fatty acid binding protein2 (FABP2) and apolipoprotein E (ApoE) with coronary heart disease (CHD) in type2 diabetes mellitus (T2DM) patients. Methods FABP2 and ApoE gene polymorphisms were detected by PCRRFLP. At the same time all CHD in T2DM patients serum triglyceride (TG)， total cholesterol (TC)， highdensity lipoprotein cholesterol were (HDLC)， lowdensity lipoprotein cholesterol (LDLC) were detected. Results The Tallele frequencies of FABP2 were higher (P

KEY WORDS: diabetes mellitus; coronary heart disease; fatty acid binding protein2; gene polymorphism; apolipoproteinE

糖尿病尤其是2 型糖尿病(T2DM)患者常伴发冠心病(coronary heart disease， CHD)，并成为糖尿病患者的主要死亡原因之一，目前认为与脂质代谢密切相关。在遗传因素中，脂肪酸结合蛋白(fatty acid binding protein2， FABP2)及载脂蛋白E(ApoE)基因引起了医学界的极大关注。FABP2编码的小肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)，参与细胞内长链脂肪酸的吸收、转运及新陈代谢。FABP2基因编码区exon2 54位密码子的变异对于蛋白质的一级结构具有明确的影响，由此引起功能上的改变，从而可能导致脂质代谢异常、血管内皮的损伤[1]，为冠心病的危险因子[2]。载脂蛋白E有四种等位基因编码，但不同等位基因对脂质代谢的能力不同，与心脑血管疾病有关[2]。本研究探讨了脂肪酸结合蛋白(FABP2)及载脂蛋白E(ApoE)不同等位基因与T2DM并发CHD的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2005年3月至2007年3月，蚌埠医学院附属医院内分泌科T2DM患者(1999年WHO糖尿病诊断标准)分T2DM并发冠心病组(T2DMCHD)98例，主要动脉(左主干，左前降支，左回旋支，右冠状动脉)中至少有一支内径狭窄>50%；T2DM非冠心病组(T2DMnCHD)110例，上述主要动脉中无一支内径明显狭窄或狭窄程度

1.2 方法

1.2.1 PCRPFLP检测患者FABP2、ApoE基因型 取空腹静脉血3mL，EDTA抗凝，采用酚氯仿法提取DNA ，PCR扩增。FABP 引物1：5′ACAGGTGTTAATATAGTGAAAAG3′，引物2：5′TACCCTGAGTTCAGTTCCGTC3′。内切酶HhaⅠ酶切；ApoE：引物1：5′TCCAAGGGCTGCAGGCGGCGCA3′，引物2：5′GCCCCGGCCTGGTACACTGCCA3′。内切酶AflⅢ、HaeⅡ酶切。琼脂糖电泳。

1.2.2 血脂测定 所有检测对象禁食12h后次晨抽静脉血。新鲜血标本分离血清后经不同的处理，分别上机测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)(酶法)。

1.3 统计学分析 计量资料以±s表示，两组间比较用t检验，计数资料组间比较采用χ2检验，P

2 结

果

2.1 FABP2和ApoE基因的PCRRFLP检测结果 FABP2扩增产物长度为180bp，用HhaⅡ酶切，FABP2Ala54存在HhaⅡ切点，PCR产物酶解后呈99bp及81bp两个片段，而FABP2Thr54上HhaⅡ切点消失，仅180bp一个片段， 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定基因型(图1)。

ApoE基因：ApoE扩增产物为218bp。ApoE基因型区别仅存在112及154位氨基酸残基的不同，ε2经限制性酶AflⅢ酶切后大片段核苷酸长度168bp，ε3经限制性酶AflⅢ和HaeⅡ双酶切，其酶切后大片段核苷酸长度为145bp，ε4经限制性酶HaeⅡ酶切后大片段核苷酸长度195bp。用40g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型(图2)。

2.2 T2DMCHD组和T2DMnCHD组FABP2 54位点基因型与等位基因的比较 FABP2野生型A/A和变异型A/T、T/T的基因型频率在T2DMCHD组分别为32.7%、50.1%和14.3%，T2DMnCHD组分别为55.4%、48.2%和5.4%，组间比较差异均有统计学意义(P

2.3 T2DMCHD和T2DMnCHD组ApoE基因型与等位基因的比较 两组均以E3/3、E4/3基因型为主，T2DMCHD组E3/3、E4/3频率分别为44.9%和36.7%，明显低于T2DMnCHD组E3/3(64.5%)而高于T2DMnCHD组E4/3；24.5%(P

2.4 FABP2 T和ApoEε4基因的联合分析 以上结果表明FABP2 T和ApoEε4等位基因与T2DM并发CHD有关，联合分析FABP2 T和ApoEε4基因发现FABP2T+/ApoEε4+和FABP2T/ApoEε4联合基因型在两组之间有显著性差异(χ2=10.6，P=0.001；χ2=9.94，P=0.002)，而其他基因联合在两组间比较无统计学意义(表3)。表1 T2DMCHD与T2DMnCHD组FABP2基因型与突变基因的比较表2 T2DMCHD与T2DMnCHD组ApoE基因型与突变基因的比较表3 FABP2 T和ApoE基因与T2DM并发CHD的联合分析

2.5 T2DMCHD患者FABP2 54位点多态性与血脂水平的关系 T2DMCHD组中T等位基因携带者的空腹TG和TC水平与A等位基因携带者相比都有增加的趋势，差异有统计学意义(P

2.6 T2DMCHD患者ApoE等位基因与血脂水平的关系 T2DMCHD组中ε2等位基因携带者的空腹TC和LDLC与其他等位基因携带者相比都有增加的趋势，其差异有统计学意义(P

3 讨

论

FABP2基因位于4q2 8231，大约3.4kb，包括4个外显子和3个内含子。迄今为止，共发现5个FABP2基因多态性位点，其中研究最为广泛的是外显子2的密码子54位的多态性。其发生腺嘌呤置换鸟嘌呤的错义突变，导致苏氨酸置换成丙氨酸，改变了FABP2的结构与功能。体外研究发现，野生型(A/A)比突变型(A/T、T/T)结合脂肪酸的能力高2倍[4]，突变型比野生型具有更高的甘油三酯和胆固醇水平[5]。本研究中T2DMCHD组T等位基因携带者的血浆TG和TC浓度和A等位基因携带者相比都有增加的趋势，T等位基因携带者HDLC浓度低于A等位基因携带者，而LDLC浓度高于A等位基因携带者，两者之间有显著性差异(P

ApoE是一种富含甘油三酯的脂蛋白，通过其与LDL受体结合，在脂质代谢中起重要作用。有报道ε4等位基因与冠心病的发病相关[6]。本实验研究ε4等位基因与T2DM并发CHD的相关性，结果表明ε4等位基因能增加T2DM患者并发CHD的危险性，这可能与ε4等位基因携带者TC、LDLC水平增加有关。

在FABP2和ApoE基因联合分析对T2DM并发CHD的关联性的研究中，发现FABP2 T+基因和ApoEε4+基因连锁时，T2DM患者并发CHD的几率增加，而FABP2 T-基因和ApoEε4-基因连锁时降低T2DM患者并发CHD的几率，故建议可将FABP2 T+基因和ApoEε4+作为T2DM患者并发CHD的生物标记，用于预测T2DM并发冠心病的几率。

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载脂蛋白篇7

[关键词]冠心病；载脂蛋白B；载脂蛋白E；血管紧张素原；基因；多态性

[中图分类号] R541.4 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2011）19-04-03

The Research of Apolipoprtein B，E and Angiotensinogen Gene Polymorophisms in Predisposition to CHD

MA Juan ZHANG Hongqing WANG Wei TIAN Qing

Department of Cardiology，The First People’s Hospital of Kunming City，Kunmimg 650011，China

[Abstract] Objective To explore the relationship of apolipoprotein B，E（ApoB，ApoE）and angiotensinogen（AGT）gene polymorphism with coronary heart disease（CHD）. Methods Gene chip technology was performed to analyze ApoB XbaⅠ、ApoE 112/158 and angiotensinogen gene polymorphism. The allele frequency and gene type distribution were compared between groups. ResultsThere was a significant difference in the distributuion of Apo B，ApoE and AGT gene type between patients and controls（P＜0.05）. The frequency of X+X+ genetype and X+ allele of ApoB were significantly higher in patients with CHD than controls（P＜0.05）；the frequency ofε3/4、ε4/4 genetype andε4 allele of ApoE112/158 were higher in patients with CHD than controls（P＜0.05）. AGT-TT gene type was related with CHD significantly（P＝0.003）and T allele was more frequent significantly in CHD group than controlls（P＜0.05）. ConclusionThe Apo B，ApoE and AGT gene polymorphism may be the risk factors of CHD；X+ allele of ApoB Xba Ⅰ andε4 allele of ApoE gene and T allele of AGT gene might be the geneticmarkers of CHD.

[Key words] Coronary heart disease；Apolipoprotein B；Apolipoprotein E；Angiotensinogen；Gene；Polymorphism

冠心病（CHD）是严重危害人类健康的常见心血管疾病，病因是由遗传因素和环境条件共同决定的，在CHD的发生和发展中，遗传因素可能更为重要。近年来已相继研究发现了一些与之相关致病或易感基因，其中包括血管紧张素原（AGT）、亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因、一氧化氮合酶（NOS）基因以及脂质代谢相关基因位点等，这些基因结构和（或）表达异常可导致CHD，但各地报道不一，未见基因芯片联合分析ApoB、ApoE及AGT基因多态性与CHD相关性的报道，本研究应用基因芯片技术联合检测多个基因多态性及等位基因频率，分析它们与CHD的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2005～2006年昆明市第一人民医院心内科收住的CHD患者89例，符合缺血性心脏病（IHD）的命名和诊断标准，均为冠状动脉造影证实冠状动脉病变患者；其中男62例，女27例，平均年龄（60.01±12.40）岁。同期78名非CHD患者作为对照组，均行冠状动脉造影术无冠脉病变；其中男44例，女34例，平均年龄（64.27±11.28）岁。两组患者一般资料（平均总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯、心脏超声心动图测平均左室舒张末径、平均左室收缩末径、左室射血分数）比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2方法

采用基因芯片检测技术，结合PCR体外扩增方法，检测人类冠心病相关基因ApoB Xba I、ApoE112/158、AGT M235T的多态性情况。

1.2.1标本采集 用一次性无菌注射针头采集被检者静脉血0.5mL，收集于含50μL的2%EDTA溶液的1.5mL的无菌离心管中，盖上管盖，上下颠倒数次使混匀。

1.2.2 存放 上述血样在2～8°C保存，保存期不应超过3周；在-20°C保存期半年，-80°C可长期保存，但严禁反复冻融。

1.2.3扩增 采用适用0.2mL扩增管并有热盖的PCR扩增仪。

1.2.4 杂交 在芯片杂交过程中采用温控精度为±0.5°C的恒温设备（BaiO FLWS-526全自动杂交仪）进行杂交。

1.2.5 识读 在芯片杂交信号检测时采用BaiO BE-2.0生物芯片识读仪识读。图像Array Docctor软件分析可自动输出检测结果，最后检测出ApoB Xba I、ApoE112/158及AGT M235T基因的多态性位点。

1.3 质量控制

在每次检测中都应设置阴性、阳性、对照品。产品检测过程中，若软件对“标志列、阴性、阳性对照”三者进行判断后，输出其中之一为“不合格”，则实验无效。

1.4 结果判断

由软件自动判断并输出结果。当软件判断标志列、阴性、阳性对照均合格时，会自动输出检测结果。见表1。

1.5 统计学处理

采用SPSS11.0软件包作统计学处理。ApoB Xba I、ApoE112/158及AGT M235T基因型和等位基因频率之间的比较用χ2检验，同时计算优势比（OR）及95%可信区间（95%CI）。

2结果

2.1 AGT M235T基因型及等位基因频率的分布情况

CHD组以AGT-TT基因型最常见，对照组AGT-MT基因型最常见；CHD组AGT M235T基因型分布与对照组相比有明显差异（P＜0.05），易感等位基因T频率高于对照组（P=0.01，CI=0.339～0.864；OR=0.541），显示AGT基因多态性与CHD发病存在关联。见表2。

2.2 ApoB Xba I基因型及等位基因频率分布

CHD组及对照组ApoB Xba Ⅰ基因型均以X+X+型最常见，CHD组X+X+基因型明显高于对照组，两组基因型分布相比均有显著差异（P＜0.05），CHD组等位基因X+频率明显高于对照组（P＜0.05，OR=3.46，CI=1.554～7.681）。显示ApoB基因多态性与CHD发病存在密切关联，等位基因X+与CHD发病正相关。见表3。

注：与对照组比较，*P＜0.05

2.3CHD组ApoE112/158 基因型及等位基因频率分布等位基因频率情况

CHD组ApoE112/158等位基因频率：ε3＞ε4＞ε2；对照组ε3＞ε2＞ε4；CHD组以ε3/3型最常见，ε3/4型次之；对照组以ε3/3型最常见，ε2/3型次之两组基因型分布相比均有显著差异（P＜0.05）；冠心病组ε3/4、ε4/4基因型频率明显高于对照组（P＜0.05），ε4等位基因频率明显高于对照组（P＜0.05，OR=2.301，CI=1.203～4.398），两组的ε3等位频率没有明显差异，显示ApoE基因多态性与CHD发病存在密切关联，ε4等位基因与CHD发病正相关。见表4。

2.4 AGT-TT, ApoE-ε4/4,ApoB- X+X+联合基因型分布情况

在CHD组未发现AGT-TT、ApoE-ε4/4、ApoB-X+X+基因型联合出现。

3 讨论

近年来由于研究手段的进步，人们对CHD的遗传背景给予了更多的关注，其中AGT M235T多态性与冠心病的关系倍受重视。AGT-TT基因型可能通过协同效应增加促血管紧张素Ⅱ的生成而增加了CHD的发病危险。1995年Katsuya等[1]进行AGT M235T多态性的调查，发现AGT基因的T/T型频率在CHD组为21.9%，显著高于对照组的14.5%，AGT T/T型是CHD的独立危险因素。梁茜等[2]研究发现AGT的基因多态性可能是中国老年人CHD的独立危险因素。本研究也观测到CHD组AGT M235T基因型分布与对照组相比有显著差异，AGT-TT型及T等位基因频率均明显高于对照组，提示AGT M 235T多态性与CHD发病有关。

脂质代谢紊乱是致动脉粥样硬化（AS）及CHD发生的最重要的危险因素。目前发现ApoB基因cDNA第7673位核苷酸C-T突变，产生了一个XbaⅠ切点，即X+等位基因，它与脂质代谢紊乱密切相关。Guzman等[3]研究发现在高血脂女性患者中ApoB XbaⅠ基因多态性与总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白（LDLC）水平增高显著相关。李莎等[4]研究发现具有冠心病家族背景的X+等位基因的个体显著高于对照，而且相应的TC、LDLC和ApoB100水平也明显高于对照组，它们是汉族人群中冠心病发病的重要遗传标记。资料表明[5]（浙南地区）正常人组Apo B基因的多态Xba Ⅰ酶切位点以X-占优势，而CHD组XbaⅠ酶切位点以X+频率为优势，和正常人组对比差别显著。本研究结果示CHD组ApoB XbaⅠ基因型分布与对照组相比有明显差异，CHD组X+X+基因型及等位基因X+频率明显高于对照组，与国内报道一致，提示ApoB XbaⅠ的基因多态性是CHD遗传危险因素，等位基因X+是CHD的重要遗传标记。

ApoE基因多态性是决定血脂水平进而影响动脉粥样硬化病变发生发展的遗传因素之一。不同的ApoE表型对CHD的易感性不同，研究表明有ε4等位基因CHD的发生频率最高，而ε2等位基因可能由于有两个游离的巯基，因此ε2者较少患CHD、颈动脉疾病或中风，对心血管具有保护作用。Kolovougd等[6]通过大批量标本研究发现基因多态性并没有性别的差异性。Banaresvg等[7]发现ApoEε4等位基因和冠心病有着很大的关联，并且呈现年龄依赖性，是一个非常重要的遗传因素。本文CHD组ε3/4、ε4/4基因型和ε4等位基因频率明显高于对照组，ε2等位基因频率明显低于对照组，显示ε4等位基因与CHD发病存在密切关联。两组的ε3等位频率没有明显差异。本研究结果和国内外相关报道一致，支持ApoE等位基因多态性与冠心病之间存在关联，提示ε4等位基因是动脉硬化发生的潜在因素，为冠心病的易患因子，而ε2等位基因对冠状动脉粥样硬化的发展可能有保护作用。

本研究应用基因芯片技术，将中国人的AGT、ApoB、ApoE基因型探针固定于同一张基因芯片表面，利用碱基互补配对原理进行杂交，通过检测探针分子杂交信号强度，在同组人群同时检测多种CHD易感基因的多态性位点，其特点是高效、快速、自动微型化、高通量、高度并行性及高度敏感性，有着广泛的应用前景。对于多基因病包括，使用基因芯片技术进行基因多态性联合分析比单一基因更有价值，将来可根据不同基因型进行个体化预防、治疗和病情随访。

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载脂蛋白篇8

关键词：载脂蛋白E；血管性痴呆；多态性检测

    为了对载脂蛋白E基因多态性对血管性痴呆患者的症状进行诊断和病情程度进行评价的临床效果进行研究分析，使临床对血管性痴呆患者的症状有更加全面的了解，为临床提供对血管性痴呆患者进行诊断的有效方法，使该类患者病情程度能够得到更加客观的评价，组织进行了此次研究。在研究的整个过程中，抽取在过去一段时间内就诊的患有血管性痴呆和脑梗死的临床确诊患者以及健康体检的健康人各30例，对三组研究对象的载脂蛋白E水平进行检测，并对结果进行比较分析。现将分析结果报告如下。 1 资料与方法

1.1  一般资料：选取2008年10月～2011年10月我院就诊的患有血管性痴呆和脑梗死的临床确诊患者以及健康体检的健康人各30例。A组男17例，女13例，年龄61～77岁，平均68.3岁；B组男16例，女14例，年龄62～79岁，平均69.2岁；C组男14例，女16例，年龄64～80岁，平均69.7岁。抽样研究对象的自然资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。所有患者在接受治疗前，均经过相关的临床检查后确诊。

1.2  方法：将抽样中的三组共90例研究对象分别定义为A、B、C三组，对三组研究对象的载脂蛋白E水平进行检测，并对结果进行比较分析。

1.3  统计学处理：在本次研究过程中所得到的所有相关数据，均采用SPSS 14.0统计学数据处理软件进行处理分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

    经过仔细研究后我们发现，A组研究对象的载脂蛋白E水平明显高于B、C两组，差异有统计学意义（P＜0.05）；B组研究对象的载脂蛋白E水平略高于A组研究对象，差异无统计学意义（P＞0.05）。三组患者载脂蛋白E基因频率比较见表1。

表1  三组患者载脂蛋白E基因频率比较[例（%）]

组别

ε2/2

ε3/3

ε4/4

ε2/3

ε2/4

ε3/4

A组

0（0.0）

17（56.7）

1（3.3）

2（6.7）

1（3.3）

9（30.0）

B组

1（3.3）

19（63.3）

0（0.0）

2（6.7）

2（6.7）

6（20.0）

C组

1（3.3）

20（66.7）

0（0.0）

2（6.7）

1（3.3）

6（20.0）

3 讨论

    载脂蛋白E（ApoE）是机体脂质代谢过程中的一种非常重要决定性因素，其结构基因具有遗传多态性特点[1]。临床上认为导致患者出现血管性痴呆（VaD）症状的因素有很多，如脑卒中的具体部位、数量及大小等因素，但关于遗传因素特别是与ApoE基因的多态性因素的报道和研究目前还相对较少[2]。载脂蛋白E主要作为乳糜微粒的一种残基受体和LDL受体的一种配体在机体血脂代谢过程中起非常重要的作用。相关研究结果表明，载脂蛋白E是导致患者出现动脉粥样硬化和冠心病症状的一个重要因素[3]。载脂蛋白E2可以使血浆中的TC、LDL水平明显降低，HDL水平明显升高；载脂蛋白E4则能够使血浆中的TC、LDL水平明显升高，HDL水平明显降低。通常情况下临床认为，血浆胆固醇水平变化的8%左右与载脂蛋白E基因多态性有关[4]。载脂蛋白E对神经系统也有非常明显的影响，其参与神经系统的许多生理和病理过程，与神经系统的一些变性疾病、脑血管类疾病、血管性痴呆、水肿性损伤等多种临床常见疾病有关[5]。载脂蛋白E在导致血管性痴呆患者发病发病发面的主要作用机制目前还不是十分明确，相关研究认为可能与以下因素有关[6]：①导致机体血脂代谢功能发生紊乱，对动脉粥样硬化的形成起到促进作用；②对巨噬细胞、泡沫细胞的形成产生刺激效果，作用于脂蛋白的结构蛋白可以直接参与动脉粥样硬化的形成过程；③ε4基因携带者神经细胞缺血性损伤的程度相对较重；④对患有脑血管病的患者的预后产生极大影响，ε4对神经细胞损伤后神经功能的恢复具有阻止作用。

    总而言之，载脂蛋白E水平明显升高，是血管性痴呆患者的一个非常重要的临床特征性表现，对这一指标进行检测，可以对该类患者进行准确诊断并对症状变化情况进行客观的评价，值得临床进一步推广。

4 参考文献

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载脂蛋白篇9

【关键词】免疫透射比浊法；载脂蛋白E；评价

载脂蛋白E（ApoE）是血浆中重要的载脂蛋白之一，最早是在1973年由Shore等从正常人的极低密度脂蛋白(VLDL)中首先发现的。其主要分布于VLDL、乳糜微粒（CM）及残骸中，它既是机体LDL受体的配基，也是肝细胞膜CM 及VLDL残骸和部分HDL（含载脂蛋白E）受体的配基。ApoE主要在肝脏合成、分泌和代谢，参与脂质的运输、储存及排泄，有修复组织、抑制血小板聚集、免疫调节等作用。近年来研究发现，ApoE及其单核苷酸多态性（SNP）与高血脂症、冠心病、Alzheimer病以及肝病、人类长寿等有关[1]。本文结合国内应用较广的伊利康公司生产的免疫透射比浊法载脂蛋白E检测试剂盒进行了主要的指标评价和探讨。现将结果报告如下：

1 材料与方法

1.1 样本 我院住院病人当天空腹标本。

1.2 试剂和仪器 ApoE检测试剂盒由浙江伊利康生物技术有限公司生产；比对试剂为日本日东纺绩公司生产，仪器为Roche Modular DPP全自动生化分析仪。

1.3方法 均按试剂盒生产厂商提供测定参数、测定方法进行。

2 实验结果

2.1 精密度 按NCCLS[2] 评价方案，取低、中、高三个不同浓度的ApoE样本，连续测20次，再每天测1次，共测20天，结果见表1

表1批内和批间精密度测定结果（mg/L n=20）)

2.2 回收试验 取一份新鲜混合血清，ApoE的浓度65mg/L，将其分成6份，每管0.9m1，分别加入ApoE为32mg/L、68mg/L、126mg/L的高、中、低血清0.1ml， 混合后ApoE浓度分别为61.7mg/L、65.3mg/L、71.1mg/L共3个浓度的样品；用ApoE试剂共测定5次，计算回收率分别为101.5%、99.6%、100.7%，平均为100.5%。

2.3 线性范围测定 按NCCLS[3]文件做线性评价标准，取一高值标本（ApoE浓度为126mg/L） 和一低值标本（ApoE浓度为32mg/L），然后把2份样本等量混匀产生中间值，再分别将中间值和低值，中间值和高值等量混匀，共产生5个不同值的样品。在分析仪上用本试剂从低值到高值，然后从高值到低值对5个不同浓度的标本分别平行测定5次，求得均值为Y，以理论值为X，经线性回归分析，结果回归方程为：Y =0.9047X+5.3467，r2= 0.9922，说明本试剂在126mg/L范围内线性良好。

2.4 对比实验取ApoE浓度从10～120mg/L的不同病人新鲜血清标本50份，分别用本试剂（Y）和日本日东纺绩公司试剂（X）同时测定；相关方程为Y= 0.9739X+0.7552；r2 = 0.9931。

2.5干扰试验将一份新鲜的混合血清，对其ApoE进行测定，其浓度为66mg/L，将其分成12份，在其中分别加入不同浓度的抗坏血酸、血红蛋白、胆红素和VLDL组份，分别测定ApoE浓度，结果表明TG≤20mmol/L、 Hb≤5g/L、Vc≤2540μmol/L、BIL≤342μmol/L时对本法无显著性干扰。

3 结论

随着ApoE与多种疾病之间作用机制的深入研究，会对其基因组织学更加科学合理的解释，并将其充分应用于医学检验中，更好的协助临床疾病的诊断，为相关疾病的治疗提供可靠依据。本实验结果表明，伊利康公司生产的载脂蛋白E检测试剂盒结果精密度较好，总精密度（CV%）均小于6.0%。与进口原装试剂比较，相关方程为Y= 0.9739X+0.7552；r2＝0.9931。抗干扰能力强，TG≤20mmol/L、Hb≤5g/L、Vc≤2540μmol/L、BIL≤342μmol/L时对本试剂无显著性干扰。该试剂不仅有较大的病理结果范围，而且可以避免勾状效应，特别适合全自动生化分析仪使用，从而达到简便、快速、稳定、准确的目的。其各项性能指标都能达到临床诊断要求[4]，值得推广应用。

参考文献

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[2]杨昌国等.精密度评价和方法比较中NCCLS评价方案的应用[J].临床检验杂志，1999；17(1)：47

载脂蛋白篇10

【关键词】载脂蛋白 E；基因多态性；Alzheimer病；脑卒中；多发性硬化；帕金森病；精神分裂症；脊髓损伤

载脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE) 是一种多态性蛋白，含精氨酸较多，并且也是一种糖蛋白[1]。首先由Shore等人从正常人的极低密度脂蛋白 ( very low density lipoprotein, VLDL ) 中发现的[2]，ApoE主要存在于VLDL、乳糜微粒 ( chylomicron, CM)及 CM残基和某些高密度脂蛋白亚型中，是低密度脂蛋白 ( low density lipoprotein, LDL )受体、VLDL受体和 LDL受体相关蛋白等的配体，主要在肝脏和大脑中合成 ,在中枢神经系统（CNS）主要是由星形胶质细胞所产生 ,在周围神经系统中主要通过巨噬细胞合成。ApoE可通过调节胆固醇及其脂类物质的储存和再分布，并且影响血浆脂蛋白的代谢 ,同时参与组织修复、抑制血小板聚集，具有免疫调节和抑制细胞增殖以及老年性痴呆的病理生理过程 ,在神经系统的正常生长过程及损伤后的修复中发挥作用[3] 。本文将ApoE基因多态性与神经系统疾病的关系予以综述。

1ApoE基因多态性

Utermann等于1975年首先观察到ApoE的多态性，并且利用等电聚焦电泳和SDS-PAGE可以确认ApoE的多态性[4]，其后又被直接检测的cDNA序列所证实。ApoE有三种构体（isoform）ε2、ε3和ε4。有的人只含有一种主要异构体，即为纯合子；另一些人可含两种主要异构体，即为杂合子。1981年Zannis根据ApoE表型提出ApoE基因模型，认为ApoE的合成是由位于一个基因位点上的三个等位基因所控制，即ε2、ε3和ε4，每一个等位基因对应于一个主要异构体产生三种纯合子（ε2/2，ε3/3，ε4/4）和三种杂合子（ε2/3，ε2/4，ε3/4）共六种常见表型，另外还有极少见的异构体。由此可见，人群中一般可有六种不同的表型（phenotype）。通常认为，次要异构体是由主要异构体翻译后，经唾液酸糖化修饰后转变而来。其中，ApoE3/3型又称野生型。ApoE的氨基酸序列的112位和158位两种氨基酸残基即精氨酸（Arg）和半胱氨酸（Cys）的交换决定了异构体的种类。ApoEε4在这两个位置上都是Arg；ApoEε2都是Cys；112位为Cys和158位是Arg者为ApoEε3异构体，在人群中，基因频率分布最高的是ApoEε3，ApoEε3/3表型分布约为70%[5]。

2ApoE基因多态性与神经系统疾病的关系

2.1ApoE基因多态性与Alzheimer病

Alzheimer病（Alzheimer’s disease,AD）在中枢神经系统( central nervous system, CNS)的病理学主要特征为尸检可见患者脑组织内出现细胞外的ADβ-淀粉样蛋白(-βamyloid,Aβ)老年斑及细胞内的神经原纤维缠结(neuro-fibrillary tangles,NFT)形成。并且患者大脑皮质Aβ老年斑和NFT的形成是诊断AD的金标准[6]。ApoEε4等位基因于10余年前已被众多研究确立为AD的危险因素[7]，且有研究表明，ApoE基因频率和表现型具有种族和地域的差异性。携带 ApoEε4等位基因患者AD的危险性增加却发病趋于年轻化，纯合子和杂合子不存在明显差异性，AD存在的危险性都将有所增加[8]。从而认为ApoEε4等位基因可能是 AD的危险因素，同时研究证实在基因型方面AD患者所携带的ε4等位基因的主要形式为 ε3／4杂合子型 ，而不是 ε4／4纯合子型。有关研究表明，亚洲的AD患者 ApoEε4等位基因出现的频率较多数欧洲和北美人低。且ApoEε4 是散发性AD和晚发家族性AD的主要危险因子，所以ApoE基因测试可以作为AD的辅助诊断，对于无症状的晚发型AD人群评估其发生率尤为适用[9]。

2.2 ApoE基因多态性与缺血性脑卒中

普遍研究认为，脑动脉粥样硬化是缺血性脑卒中（ischemic stroke）的病理基础。随着ApoE在动脉粥样硬化中的作用逐渐被认识 ，近年来国内外学者对ApoE及其基因多态性与缺血性脑卒中的关系做了大量的相关研究。诸多研究表明ApoE基因多态性与缺血性脑卒中的发生密切相关，Jin等[10]实验结果表明，缺血性脑卒中组和正常对照组ApoE基因型以ε3/3为多，缺血性脑卒中组ε3/4基因型、ε4等位基因频率均明显高于正常对照组，提示ε4可能是缺血性脑卒中遗传易感因子，但也有研究[11-13]认为ApoE基因中ε4等位基因与缺血性脑卒中无明显关系，这些研究表明，ApoE基因多态性可能与地域种族差异具有相关性。一般多支持ApoE基因为缺血性卒中的危险因素。

2.3 ApoE基因多态性与出血性脑卒中

国内外对ApoE基因与出血性脑卒中（hemorrhagic stroke）相关性研究的结果存在较大的差异性，对ApoE是否影响脑出血的发生存在不同的观点。淀粉样血管变性是老年人脑叶出血的主要病因，淀粉样蛋白沉积能使血管中层变薄，内膜增厚，从而血管的完整性受到损害，导致血浆蛋白侵入, 血管呈纤维蛋白样坏死, 进而容易诱发脑出血。而ApoE和淀粉样变性有很大的关系, Sudlow等发现[14],ε2和ε4通过不同的机制促进淀粉样脑血管病相关的脑出血。ε4可增加淀粉样蛋白沉积,与其导致的脑出血的预后及再出血有关；而ε2等位基因促进含淀粉样蛋白的血管发生血管病理变化,最后出现破裂,与首次出血的早发年龄有关联性。Woo等[15]相关研究发现ε4等位基因系脑叶出血患者相对独立的危险因素。但也有学者认为ApoE基因多态性与一般意义上所认为的脑出血无直接相关性[16]。这些研究结果的差异性可能与出血性脑卒中致病因素的复杂性及研究方法的差异有关。

2.4 ApoE基因多态性与多发性硬化

多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是中枢神经系统（CNS）慢性进行性炎性脱髓鞘疾病，病理特征表现为中枢神经系统脱髓鞘、多灶性炎症、神经胶质增生、轴索缺失，病灶常累及侧脑室周围白质、脑干、脊髓、小脑及视神经[17-18]。由于CNS中只能合成ApoE载脂蛋白，且无法自身合成胆固醇，并且只能通过ApoE的介导来转运胆固醇，从而使神经轴突获得合成膜或髓鞘所必需的脂质。因此，ApoE在多发性硬化患者CNS轴突损伤、修复和其完整性的维持中起到重要的作用。研究表明[19] ,ApoE多态性与神经元生长发育具有密切相关性，在VLDL存在时ApoEε3异构体能够同时促进神经元的扩展和分化，ApoEε4异构体则不能。ApoE基因变异不仅对于多发性硬化的易感性具有影响作用，还会影响它的病程进展和疾病的严重性。ε4基因携带者病情较严重,ε2基因携带者则病程易于缓解。但相关研究均未发现ApoE基因多态性与MS发病有关。随着研究的深入，若能证实ApoE基因多态性与MS早期进展或临床病程易于由缓解-复发型转变为进展型具有相关性，那么对ApoE基因的检测将有助于临床上给予高危MS患者早期进行干预性治疗。

2.5 ApoE基因多态性与精神分裂症

由于精神分裂症患者（Schizophrenic Patients，SP）存在认知功能缺损方面的表现，并且存在神经元丧失及脑结构异常，已有相关证据显示[20-21]，精神分裂症患者大脑左侧额叶皮层BA9、46 区域的ApoE基因含量显著高于正常人，ApoE基因水平的改变可能与SP的病理具有相关性。Amold等[22]研究发现ApoEε4 携带者发病较早。Martotell等[23]发现携带ApoEε4 的女性患者发病则较携带其他基因型提早4年，且往往以阴性症状为主，提示预后不佳。相反，携带ε3 的精神分裂症患者发病年龄较晚[24]。

2.6 ApoE基因多态性与脊髓损伤

脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)不仅严重威胁人类健康，也给社会和家庭带来沉重负担。虽然通过一系列的治疗方法不同程度上缓解了SCI的病理改变．但其后果仍不可避免地造成了病人截瘫。人们对于ApoEε4与脑损伤相关性关注较多，但与脊髓损伤的相关性研究较少，一项研究发现[25]，ApoEε4可能延长脊髓损伤患者住院康复及运动恢复的时间。但载脂蛋白E基因在脊髓损伤的作用可能是复杂的，需要更为深入的研究。另一项有关脊髓损伤的实验动物研究发现[26]，试验中ApoE基因蛋白上调，且至少持续3周以上，表明ApoE基因可能起到修复损伤的作用。同时预测ApoEε4等位基因在脊髓损伤的机械组织损伤、出血性损伤、缺血性损伤病理变化类型恢复中可能具有不同的作用机制。

3展望

APoE基因多态性和与Alzheimer病、缺血性脑卒中、出血性脑卒中、多发性硬化、帕金森病、精神分裂症、脊髓损伤等疾病的相关性已成为临床研究及关注的重点。目前的研究有时会出现不一致的结论，这可能与人群选择、疾病诊断以及种族和地区差异性有关。相信随着ApoE基因研究的不断深入，ApoE与这些神经系统疾病的相关性将进一步得到阐明。ApoE基因多态性与疾病的相关性已经成为近年研究热点，深入研究ApoE基因多态性与神经系统疾病的关系，对预防及早期诊断神经系统疾病、探讨其发病机制、筛查高危人群、探索新的治疗措施、减少死亡率具有重要意义。

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作者简介：

刘学春，男，硕士研究生