新雪片质量标准研究论文

【摘要】目的研究与建立新雪片的质量标准。方法采用薄层色谱法（TLC）对新雪片中穿心莲、栀子、冰片进行定性鉴别;采用反相高效相色谱法（RPHPLC）测定新雪片中栀子苷的含量。结果TLC专属性强。HPLC准确可靠。栀子苷在0.256～1.280μg范围内呈良好线性关系（r=0.9999），平均回收率为97.12%，RSD=1.43%（n=6）。结论该方法可靠、准确，能有效地控制制剂质量。

【关键词】新雪片；栀子苷；质量控制；薄层色谱

QualityStandardforXinxueTablets

Abstract:ObjectiveToeslablishandstudythequalitystandardforXinxuetablets.MethodsConnonAndrographisHerb,CapeJasmineJasmineFruit,BorneolwereidentifiedbyTLC,andGeniposedecontentinTabletswasdeterminedbyRP-HPLC.ResultsTLCmethodwasspecific.HPLCmethodwasaccurateandreliable.TheGeniposedeshowedagoodlinearrelationshipintherangeof0.256～1.280μg(r=0.9999)andaveragerecoverywas97.12%,RSD=1.43%(n=6).ConclusionThismethodisreliable,accurateandcanbeusedtocontrolthequalityofthepreparationeffectively.

Keywords:XinxueTablets;Geniposede;Qualitycontrol;TLC

新雪片为《中华人民共和国卫生部药品标准（WS3B281397）·中药成方制剂》第14册所收载，后经国家药典委员会修订（药品标准颁布件零069），为国家非典指挥部指定的非典用药新雪颗粒的不同新剂型,由磁石、石膏、滑石、寒水石、硝石、芒硝、栀子、竹叶卷心、广升麻、穿心莲、珍珠层粉、沉香、冰片、人工牛黄14味组成，具有清热解毒功能，用于各种热性病之发热，如扁桃腺炎、上呼吸道炎、咽炎、气管炎、感冒所引起的高热，以及温热病之烦热不解。原标准中［鉴别］项只有3个理化鉴别，1个薄层色谱鉴别（胆酸、猪去氧胆酸），较简单，不足以控制药品质量。为此本文对新雪片的鉴别、含量测定进行研究，制订能控制药品质量的标准。现报道如下。

1材料与仪器

LabALLiance高效液相色谱仪，Model500检测器；UP250H超声清洗器（功率300W，频率40kHz，熊猫集团南京电子计量有限公司生产）；硅胶G（青岛海洋化工厂）；层析缸（20cm×10cm)；层析柱（内径10mm)；ZF2型三用紫外分析仪（上海市安亭电子仪器厂）；栀子苷、穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、冰片对照品（中国检定所提供），样品及阴性样品（由广西药物研究自制）；甲醇（色谱纯）；水（重蒸水）；其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1薄层色谱鉴别

2.1.1栀子［1］取本品适量，研细，取约10g。加甲醇50ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇10ml使溶解，转移至已处理好的柱子（活性炭0.5g，100～200目中性氧化铝2g，二者混合均匀后，湿法装柱，内径为1.5cm)上，用甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水20ml使溶解，滤过，滤液用正丁醇振摇提取2次，40ml/次，合并正丁醇液。用浓氨试液洗涤2次，10ml/次。弃去洗液，再用水洗涤2次，20ml/次，弃去水洗液，取正丁醇层液，蒸干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。再按处方比例，取缺栀子的其它药材按新雪片［制法］制备，再按供试品溶液的制备方法制备，所得溶液作为阴性对照溶液。照薄层色谱法［1］实验，吸取上述3种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨水（10∶4∶0.3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。结果见图1。

2.1.2穿心莲［1］取本品适量，研细，取约5g，加乙醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品，加甲醇制成每毫升各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。再按处方比例，取缺穿心莲的其它药材按新雪片［制法］制备，再按供试品溶液的制备方法制备，所得溶液作为阴性对照溶液。照薄层色谱法［1］实验，吸取供试品溶液与阴性对照溶液各10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇（4∶3∶0.5）为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置中，分别显相同颜色的斑点，阴性无干扰。结果见图2。

2.1.3冰片取本品适量，研细，取约5g，加乙醚30ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取冰片对照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。再按处方比例，取缺冰片的其它药材按新雪片［制法］制备，再按供试品溶液的制备方法制备，所得溶液作为阴性对照溶液。照薄层色谱法［1］实验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷醋酸乙酯（8.5：1.5）为展开剂，展开，取出晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。结果见图3。

2.2含量测定

2.2.1色谱条件与系统适应性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（20∶80）作为流动相；检测波长为238nm。柱温（23±1℃），理论板数按栀子苷峰计算应不少于5000。

图1栀子TLC图谱（略）

图2穿心莲TLC图谱（略）

图3冰片TLC图谱（略）

2.2.2线性关系考察精密称取栀子苷对照品12.8mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液（0.128mg·ml-1）。精密吸取对照品贮备液（0.128mg·ml-1）1.0，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0ml溶液，分别置10ml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取各溶液20μl，按上述色谱条件测定峰面积值。以峰面积值为纵坐标（Y），进样量（μg）为横坐标（X），绘制标准曲线，并求得回归方程为Y=7.27E5X-1.13E3,r=0.9999。可见，栀子苷在0.256～1.28μg（浓度1.28～64.0μg·ml-1）间呈良好线性关系。

2.3精密度实验取样品，按正文含量测定项下方法制成供试品溶液，在选定的色谱条件下，依法操作测定，重复进样6次，峰面积平均值为355159，RSD=0.59%。

2.4稳定性实验取样品，按正文含量测定项下方法制成供试品溶液，分别在放置0，2，4，6，8，12，24h后，依法测定，结果峰面积平均值为375006，RSD=0.29%。表明供试品溶液在24h内稳定性好。

2.5重复性实验取同一样品（批号060201）6份，精密称定：0.242，0.2157，0.2383，0.2293，0.2056，0.2128g。按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液，依法测定，结果含量平均值为2.10mg·g-1，RSD=0.85%。表明方法重复性较好。

2.6加样回收率实验取已知含量的样品（批号060201，含量为2.1mg/g）6份，精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入栀子苷对照品（0.128mg/ml）2ml，按供试品溶液的制备方法制备，依法测定，计算回收率。结果见表1。表明本方法回收率较好。

表1栀子苷回收率实验数据（略）

2.7供试品溶液的制备及测定取本品，研细，取约0.2g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入50%甲醇20ml，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，再用微孔滤膜（0.45μm）滤过，作为供试品溶液。另精密量取栀子苷对照品贮备液2ml，置10ml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（每毫升含25.6μg）。再按处方比例，取除栀子外的其它药材，按［制法］制备，然后按制供试品溶液方法制备，作为阴性对照溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，按上述的色谱条件注入液相色谱仪，照高效液相色谱法［1］测定，按外标法计算含量。结果见表2及图4～6。

3讨论

新雪片是由磁石、石膏、寒水石、滑石、穿心莲、竹叶卷心、栀子、沉香、广升麻、芒硝、硝石、珍珠层粉、人工牛黄、冰片等14味药材组成，具有清热解毒功能，用于各种热性病之发热，如扁桃腺炎、上呼吸道炎、咽炎、气管炎、感冒所引起的高热以及温热病之烦热不解。方中石膏、寒水石、滑石为处方君药，都是矿物药材，难以制定薄层色谱和含量测定方法。穿心莲、栀子、竹叶卷心为方中臣药，穿心莲中的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯在水中溶解度很低，而在穿心莲中含量亦较低，加上新雪片的制备方法为水提取，穿心莲药材绝大部分为水煮，只有极少部分为粉碎成粉末后压片而成，这就使得穿心莲内酯的含量在新雪片中的含量更低，故测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯意义不大，竹叶卷心其成分未详，栀子有明显的抗菌消炎作用，其主要有效成分为栀子苷，且为全部水提取，故选择栀子苷作为新雪片定性和定量的指标成分。

表26批新雪片样品测定数据（略）

图4栀子苷对照品HPLC图（略）

图5阴性对照品HPLC图（略）

图6供试品HPLC图（略）

通过薄层色谱实验，确定了新雪片中栀子、穿心莲、冰片的薄层色谱鉴别方法，阴性对照表明其他成分对本法无干扰，说明该方法专属性较强，结果可靠。

本品参照《中国药典》2005年版Ⅰ部“栀子”及其制剂中栀子含量测定方法［1］及有关文献，并结合本品的性质特征，进行优化含量测定条件，建立本品栀子苷的含量的测定方法，并就该测定方法进行了方法学的研究。研究结果表明，本方法简便、灵敏、准确、专属性强，可作为控制新雪片的栀子苷含量方法。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：173，189，附录VIB，附录VIQ.