丙肝患者IgM特异性激活补体类循环免疫合物的检测及意义

【关键词】肝损伤

摘要:目的:探讨丙肝患者体内IgM特异性激活补体类循环免疫复合物（即IgM/C3-TCIC）的变化及其意义。方法:采用捕捉法ILISA，对丙肝患者血清中的IgM/C3-TCIC进行检测，并将其与患者的性别、年龄、病程及谷丙转氨酶（ALT）进行统计学分析。结果:80例丙肝患者血清中有52例检测呈阳性，IgM/C3-TCIC的阳性率为65.0%。IgM/C3-TCIC的阳性率与ALT相关，在ALT升高组IgM/C3-TCIC的阳性率要显著高于ALT正常组（P<0.05）;而与患者的病程、性别及年龄则均无明显相关（P>0.05）。结论:丙肝患者体内IgM/C3-TCIC可能直接参与了对肝组织损伤的过程，其病理意义值得重视。

关键词:丙肝病毒（HCV）;IgM/C3-TCIC;ELISA;肝损伤

自双特异性循环免疫复合物（Two-component-determinedcirculatingimmunecomplexes，TCIC）的概念提出以来，其病理生理意义的研究受到广泛重视［1～3］。本研究采用捕捉法ELISA，对丙肝患者血清中的IgM特异性激活补体类免疫复合物（即IgM/C3-TCIC）进行检测，旨在阐明这类双特异性循环免疫复合物在丙肝患者体内的变化及其临床意义，现报告如下。

1材料和方法

1.1实验材料

羊抗人C3抗血清，羊抗人IgM抗血清均为上海生物制品研究所产品，经硫铵-DEAE32层检提取IgG组分。酶抗体为本室自制，采用简易过碘酸钠法［4］将HRP（辣根过氧化物酶，Sigma）标记到抗人IgM的羊IgG组分上。

1.2实验对象

实验组包括80例丙型肝炎患者血清标本（其中男性37例，女性43例），对照组包括115例健康人血清标本（其中男性50例，女性65例）。

1.3IgM/C3-TCIC的检测捕捉法ELISA的操作步骤如下:用0.1M，pH9.6的碳酸缓冲液将抗人C3的羊IgG稀释至7.5ug/ml，加入反应板，每孔0.1ml，4℃18～24小时，用0.01M，pH7.4PBS-T洗涤3次，加入用生理盐水按1∶75稀释的血清标本，每孔0.1ml，4℃18～24小时，同上洗涤;用含2.5%兔血清的PBS-T将HRP-抗人IgM的羊IgG作1∶1000稀释，每孔0.1ml，37℃1小时，同上洗涤;加入TMB-H2O2底物溶液，每孔0.1ml，37℃避光反应45min;2M的H2SO4终止反应，最后在BIO-RAD680全自动酶标仪（美国产品）上测OD值。每块反应板分别以混合人血清和以羊血清的作阳阴性对照。以阳、阴对照血清OD值的20次均值，按下面的公式对实验标本的OD值进行校正:被检标本OD校正值=阳、阴性对照血清20次OD均值之差阳、阴性对照血清实测OD均值之差×被检标本复孔实测OD均值。

2结果

2.1IgM/C3-TCIC的阳性界值采用捕捉法ELISA检测115例健康人血清标本，由于CIC与年龄有关［1］，故以不同年龄组计算X和SD，以X±2SD为阳性临界值，≥X±2SD者为升高的阳性标本，结果如表1。

表1正常人IgM/C3-TCIC的阳性界值（略）

2.2丙肝患者IgM/C3-TCIC的阳性率采用捕捉法ELISA对80例丙肝患者的IgM/C3-TCIC进行检测，结果有52例呈阳性，阳性率为65.0%。对不同年龄组之间进行统计学分析，发现15～、30～、40～和50～年龄组IgM/C3-TCIC的阳性率依次为66.7%、63.5%、64.5%和66.7%，相互之间均无显著性差异（P>0.05），如表2所示。此外，不同性别之间IgM/C3-TCIC的阳性率亦无明显差异。表2丙肝患者IgM/C3-TCIC的阳性率

2.3丙肝患者血清ALT与IgM/C3-TCIC阳性率的关系比较ALT升高组与正常组中IgM/C3-TCIC的阳性率，结果如表3。表3丙肝患者ALT与IgM/C3-TCIC阳性率之间的关系

2.4丙肝患者的病程IgM/C3-TCIC阳性率的关系80例丙肝患者按病程又分为两组:病程不足20天的患者归为一组，共有37例;病程超过20天的患者归为另一组，共有43例。各组中IgM/C3-TCIC的阳性率见表4。可以看出，IgM/C3-TCIC的阳性率在长病程组明显高于短病程组，两者之间具有极显著性差异（P<0.01）。表4丙肝患者病程与IgM/C3-TCIC阳性率之间的关系

3讨论

针对丙肝患者体内循环免疫复合物（CIC）的研究已有报道［5～7］，然而这些报道大都只从非特异性CIC的角度进行研究，并未对复合物中的不同组分及其意义进行深入探讨。本研究采用捕捉法ELISA，以羊抗人C3的IgG为捕捉抗体，然后分别以HRP标记的抗人IgM的IgG为指标抗体，检测丙肝患者血清中IgM特异性激活补体类CIC，即IgM/C3-TCIC，旨在探讨该类双特异性CIC在丙型肝炎患者体内的变化及其临床意义。通过对115例健康人血清的IgM/C3-TCIC进行检测，发现健康人血清中该类双特异性循环免疫复合物的水平可达0.77±0.14，且在不同年龄组之间存在一定差异。因此，我们以不同年龄组IgM/C3-TCIC的X±2SD为阳性临界值，≥X±2SD者确定为升高的阳性标本。据此对80例丙肝患者IgM/C3-TCIC的阳性率进行研究，结果发现共有52例呈阳性，阳性率为65.0%。15～、30～、40～和50～年龄组IgM/C3-TCIC的阳性率依次为66.7%、63.5%、64.5%和66.7%，相互之间均无显著性差异（P>0.05）。此外，不同性别之间IgM/C3-TCIC的阳性率亦无明显差异。此外，通过比较IgM/C3-TCIC与患者病程的关系，结果表明IgM/C3-TCIC的阳性率与患者的病程并无明显关系。进一步将IgM/C3-TCIC的检测结果与患者的ALT水平进行相关性分析，发现IgM/C3-TCIC的阳性率与ALT明显相关，在ALT异常组IgM/C3-TCIC的阳性率显著高于ALT正常组（P<0.05）。由于ALT为肝脏损伤的敏感指标，因此推测IgM/C3-TCIC可能直接参与了导致肝组织损伤的过程，其病理意义值得重视。

参考文献

1彭宣宪.双特异性免疫复合物的研究进展.上海免疫学杂志，1996，16（5）:315～317.

2彭宣宪，万雅各，张文军，等.甲型肝炎的免疫球蛋白-补体循环免疫复合物.病毒学报，1995，11（3）:203～207.

3王三英，杨天赐，彭宣宪.Ig/Ig双特异性免疫复合物定量及免疫调节作用.中国公共卫生，2002，18（6）:712～714.

4李思光，彭宣宪，张文军，等.IgM类HBsAg免疫复合物与乙肝肝损害关系初探.江西科学，1997，15（3）:154～157.

5TsaiJF，JengJE，ChangWY，etal.CirculatingimmunecomplexesinchronichepatitisC.JMedVirol，1995，46（1）:12～17.

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