增殖范文10篇

增殖范文篇1

【关键词】骨髓内皮细胞GMCSF细胞增殖

EffectsofGranulocyteMacrophageColonyStimulatingFactoronGrowthofMurineBoneMarrowEndothelialCells

AbstractThepurposeofthisstudywastoinvestigatetheeffectsofgranulocytemacrophagecolonystimulatingfactor(GMCSF)onthegrowthofmousebonemarrowendothelialcells.Endothelialcellculturemedium（EndoM）wasusedtoculturemurinebonemarrowendothelialcells.EndothelialcellcolonieswerecountedundermicroscopebyWrightGiemsastaining.TheeffectofdifferentconcentriationofGMCSFontheproliferationofbonemarrowendothelialcellswasobservedbytheformationofendothelialcellcolonies,MTTandflowcytometry.TheresultsindicatedthattheendothelialspecificmarkervWFwasexpressedbythecolonycells,GMCSFpromotedtheproliferationofbonemarrowendothelialcellcoloniesandMTTconfirmedtheeffectofGMCSFonpromotingtheproliferationofbonemarrowendothelialcells.TheresultofdetectingcellcycleshowedthattherateofcellsenteringintoSphasewas9.3%inGMCSFaddedgroupandtherateofcellsenteringintoSphasewas2.1%incontrol.Therewasnosignificantdifferenceincellgrowthcurvebetweenthefirstpassageandfourthpassage.ItisconcludedthatGMCSFcanpromotetheproliferationofbonemarrowendothelialcells,theproliferationpotentialofbonemarrowendothelialcellsbetweenthefirstandfourthpassagenosignificantlychanges.

Keywordsbonemarrowendothelialcells;GMCSF;proliferation

JExpHematol2007;15(3):622-625

目前，已有许多报道证明内皮细胞（endothelialcells,EC）、内皮祖细胞（endothelialprogenitorcells,EPC）可以用来治疗缺血性心脏病以及各种疾病引起的肢体缺血［1,2］也可以用于组织工程的血管构建［3］，并取得了一定的成果。Kawamoto等［4］报道，EPC对缺血心脏病进行治疗具有良好的效果，一方面减少了缺血组织的面积，同时改善了心脏的功能。Kalka等［5］则报道了利用EPC对肢体缺血的小鼠模型进行治疗，实验结果表明了EPC能显著增加缺血肢体的灌流，而且组织学检查发现缺血部位毛细血管的数目也大大增加。内皮细胞的来源有多种，可以从外周血、脐血及骨髓中获得［6］，而外周血中的内皮祖细胞来源于骨髓。从病人自体的骨髓中获得内皮细胞，一方面来源比较方便，而且也可以避免GVHD的发生。但是由于骨髓基质细胞种类多，难以分离纯化骨髓内皮细胞或内皮祖细胞。本研究用本实验室配制的内皮细胞培养液（EndoM）体外培养小鼠骨髓细胞，分离纯化骨髓内皮细胞及内皮祖细胞，并观察粒巨噬系集落刺激因子（rmGMCSF）对小鼠骨髓内皮细胞体外增殖的影响以及体外增殖后内皮细胞增殖机能的改变，这对临床运用内皮细胞或内皮祖细胞治疗疾病有一定的指导意义。

动物

昆明小鼠，由中南大学湘雅医学院动物学部提供，雌雄不限，普通饮食。

主要试剂和仪器

IMDM为Gibco公司产品；新生牛血清购自杭州四季清生物制品研究所；重组小鼠粒巨噬细胞集落刺激因子（rmGMCSF）为R&D公司产品；vWF抗体、CY3标记的羊抗兔IgG为Sigma公司产品；MTT、二甲基亚砜（DMSO）为Sigma公司产品；酶标仪为Awarens公司产品；CO2培养箱购自美国Forma。

小鼠骨髓内皮细胞及内皮细胞集落的培养

用颈椎脱臼法处死小鼠，在无菌条件下取出股骨，用IMDM冲出骨髓细胞，制成单细胞悬液，取1×106个小鼠骨髓单个核细胞种入1ml含有15%新生牛血清的EndoM培养体系，置于24孔板中，于37℃、5%CO2、饱和湿度下培养5天后,用胰蛋白酶消化，制成单细胞悬液，按每孔1×104个细胞种入24孔板，每组3孔。于二氧化碳培养箱内培养15天后计数内皮细胞集落数，以≥50个细胞的聚合计为1个集落。

内皮细胞的形态观察及vWF的检测

培养的骨髓内皮细胞集落经WrightGiemsa染色后，显微镜下观察内皮细胞形态。用间接免疫荧光法检测骨髓内皮细胞vWF。将内皮细胞培养于24孔板内放置的盖玻片上，当细胞间没有明显的间隙时，取出盖玻片，用PBS清洗，用4%的多聚甲醛固定30分钟，用PBS洗3次：2%的正常羊血清封闭4小时，加入vWF抗体，4℃过夜，用PBS洗3次，加入二抗CY3IgG，37℃孵育60分钟,PBS洗3次：置于荧光显微镜下观察。以本室建的小鼠骨髓内皮细胞株［7］为阳性对照，骨髓成纤维细胞为阴性对照。

不同浓度的GMCSF对小鼠骨髓内皮细胞形成集落的影响

取纯化的小鼠骨髓内皮细胞培养于24孔板中，每孔5000个细胞，在基本培养体系（含1%浓度EndoM）的基础上分别加入5、10、25ng/ml的rmGMCSF，对照组不加入GMCSF，每组3孔。置于CO2培养箱培养15天，于倒置显微镜下记数集落数，≥50个细胞的聚合计为1个内皮细胞集落。

GMCSF对内皮细胞增殖影响的MTT法测定

将纯化的小鼠骨髓内皮细胞按5000个/孔培养于96孔板，每孔0.2ml，每组3孔。实验组培养体系中分别加入5、25、100ng/ml的rmGMCSF，对照组内不加。在37℃、5%CO2、饱和湿度下分别培养5天和10天，取出培养板吸去培养液，然后加入无血清的IMDM180μl和20μlMTT溶液，放入培养箱孵育4小时，吸去液体，各孔加入DMSO150μl，振荡10分钟，使结晶充分溶解。选择492nm波长，在酶标仪上测定各孔的光吸收值（OD492）。

生长曲线

纯化的小鼠骨髓内皮细胞培养于96孔板中，每孔5000个细胞，加0.2ml含15%新生牛血清的基本培养液，并加入25ng/ml的rmGMCSF。共种6组，每组3孔，培养5天后，分别于第7、9、11、13、15天用胰酶消化后计数细胞，每次3孔，求平均值，做出生长曲线。按公式DT=t×1g2/(1gN-1gN0)算出第1代内皮细胞生长的倍增时间。

细胞周期的流式细胞术检测

无菌条件下取小鼠骨髓单个核细胞，按2×106个细胞种于6孔培养板中（2ml培养体系中含15%新生牛血清的EndoM），置于37℃、5%CO2、饱和湿度下培养5天，然后吸去培养液，加入两种不同培养体系，对照组加含15%新生牛血清的IMDM，实验组加15%新生牛血清的IMDM和100ng/ml的rmGMCSF，每组各10孔，置于CO2培养箱培养3天后，用胰酶消化细胞，200×g,离心5分钟，用PBS洗涤细胞2次之后，用300μlPBS重悬细胞，加入冰冷的乙醇（-20℃）约700μl（终浓度为70%），将细胞放于-20℃过夜处理后，用流式细胞仪检测细胞周期。

细胞传代培养

取小鼠骨髓单个核细胞，按2×106个细胞种于6孔培养板中（2ml体系中含15%新生牛血清的EndoM），置于37℃、5%CO2、饱和湿度下培养5天，然后吸去培养液，加入15%新生牛血清的IMDM培养液和100ng/ml的rmGMCSF，促使细胞融合，再按1∶4传代于6孔板中，同样加入15%新生牛血清的IMDM和100ng/ml的rmGMCSF，等细胞生长至融合，按1∶4传代，加入相同培养体系。按上述方法传4代后，绘制生长曲线，方法同前。公式DT=t×1g2/(1gN-1gN0)算出第4代内皮细胞生长的倍增时间，并与第1代的倍增时间进行比较。

统计学处理

实验数据为3次结果，以mean±SD表示。不同处理组两组间比较采用t检验，应用SPSS软件分析，P<0.05表示有统计学意义。

结果

细胞形态每孔种入小鼠骨髓内皮细胞5000个，对照组加基础培养液,实验组在基础培养液的基础上分别加入rmGMCSF5、10、25ng/ml。与对照组相比，实验组集落数均明显增多（图3），说明rmGMCSF对小鼠骨髓内皮细胞的增殖有明显刺激作用。

rmGMCSF对内皮细胞增殖的影响

小鼠骨髓内皮细胞培养5、10天，分别进行MTT的检测，结果表明rmGMCSF对小鼠骨髓内皮细胞生长促进作用明显，各组与对照组相比差异显著（P<0.01）（图4）。

GMCSF对EC细胞周期的影响

运用流式细胞仪检测细胞周期，观察GMCSF对EC细胞周期的影响。结果显示GMCSF使细胞进入S期的比例为9.3%，与对照组2.1%相比有明显差别。此结果说明GMCSF能够促使细胞进入S期，加快细胞的分裂，从而促进了细胞的增殖（图5）。Figure5.EffectofGMCSFoncellcycleofendothelialcells.A:grouptreatedbyGMCSF.B:controlgroup.

体外扩增传代对内皮细胞增殖的影响

图6为小鼠骨髓第1代和第4代内皮细胞的生长曲线。利用计算公式［DT=t×1g2/(1gN-1gN0)］计算出第1、4代细胞生长的倍增时间分别为30.25±0.55小时、31.67±0.26小时。第1代与第4代的细胞倍增时间相比，无明显差异，表明经体外扩增传代4次，仍能保持传代早期的增殖潜能。

Figure6.Growthcurveofthefirstandfourthpassagegenerationsofmurineboneendothelialcells.讨论

国内外对于骨髓内皮细胞的纯化报道较少，但已经进行了一些关于细胞因子对内皮细胞增殖影响的研究，如Yonekura等［8］报道VEGF可以促进内皮细胞的增殖，Rieck等［9］则报道bFGF可促进角膜内皮细胞的生长。我们此前曾报道了VEGF、bFGF、SCF、IL6、GMCSF等对内皮细胞株的增殖有促进作用［10］。GMCSF对未经转化的骨髓内皮细胞增殖的作用尚未见报道。本研究中，我们用本室配制的培养基在较短的时间内纯化了小鼠的骨髓内皮细胞，vWF为阳性，并在此基础上观察了GMCSF对骨髓内皮细胞增殖的影响。应用基本培养基培养内皮细胞集落时，形成的集落数较少，加入rmGMCSF后，集落生成明显增多。MTT的结果亦支持GMCSF对小鼠骨髓内皮细胞生长的刺激作用。细胞生长曲线的结果表明，在含GMCSF培养的条件下，内皮细胞生长的倍增时间为30.25±0.55小时，经4次传代后细胞倍增时间无明显延长，表明体外培养扩增4代后，细胞仍能保持早期的增殖能力，GMCSF对骨髓内皮细胞的体外增殖有明显刺激作用。文献报道内皮细胞表面有GMCSFR的存在，而内皮细胞本身也可以分泌GMCSF［11］。结合细胞周期测定的结果，可以认为，GMCSF促内皮细胞增殖的机制可能是GMCSF与GMCSFR结合，通过细胞内信号传递使更多的细胞进入S期来实现的。

【参考文献】

1LuttunA,CarmelietG,CarmelietP.Vascularprogenitors:frombiologytotreatment.TrendsCardiovascMed,2002;12:88-96

2RafiiS,LydenD.Therapeuticstemandprogenitorcelltransplantationfororganvascularizationandregeneration.NatMed,2003;9:702-712

3ZammarettiP,ZaischAH.Adult‘endothelialprogenitorcells’.Renewingvasculature.IntJBiochemCellBiol,2005;37:493-503

4KalkaC,MasudaH,TakahashiT,etal.Transplantationofexvivoexpandedendothelialprogenitorcellsfortherapeuticneovascularization.ProcNatlAcadSciUSA,2000;97:3422-3427

5KawamotoA,TkebuchavaT,YamaguchiJ,etal.Intramyocardialtransplantationofautologousendothelialprogenitorcellsfortherapeuticneovascularizationofmyocardialischemia.Circulation,2003;107:461-468

6HristovM,ErlW,WeberPC.EndothelialProgenitorCells:isolationandcharacterization.TrendsCardiovascMed,2003;13:201-206

7王绮如，严燕，汪保和.小鼠骨髓内皮细胞系的建立.中国实验血液学杂志，1997；5：360-366

8YonekuraH,SakuraiS,LiuX,etal.PlacentagrowthfactorandvascularendothelialgrowthfactorBandCexpressioninmicrovascularendothelialcellsandpericyts.Implicationinautocrineandparacrineregulationofangiogenesis.JBiolChem,1999;274:35172-35178

9RieckP,OliverL,EngelmannK,etal.Theroleofexogenous/endogenousbasicfibroblastgrowthfactor(FGF2)andtransforminggrowthfactorsbeta(TGFbeta1)onhumancornealendothelialcellsproliferationinvitro.ExpCellRes,1995;220:36-46

增殖范文篇2

第一条为了加强渔业养殖与增殖管理，保障水产品质量安全，促进现代渔业发展，根据《中华人民共和国渔业法》等法律、法规，结合本省实际，制定本办法。

第二条在本省管辖范围内从事渔业养殖与增殖及其他相关活动，应当遵守本办法。

第三条县级以上人民政府应当将渔业养殖与增殖纳入国民经济和社会发展规划，保护水域环境和生态安全，促进渔业养殖与增殖的发展。

县级以上人民政府统一领导、协调本辖区内的水产品质量安全监督管理工作，建立健全水产品质量安全责任目标考核制度，对水产品质量安全监督管理负总责。

第四条县级以上人民政府渔业行政主管部门负责本辖区内的渔业养殖与增殖管理工作。

乡(镇)人民政府应当协助渔业行政主管部门做好渔业养殖与增殖的相关管理工作。

发展改革、财政、卫生、水利、畜牧、环境保护、质量技术监督、工商行政管理、食品药品监督和出入境检验检疫等部门，应当按照各自职责，密切配合，做好渔业养殖与增殖的相关工作。

第五条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当建立健康养殖和无公害水产品生产制度。引导、推广水产品标准化生产，鼓励和支持生产绿色、有机水产品。

鼓励单位和个人开展渔业养殖与增殖科学技术研究，开发、推广先进技术和优良品种，促进渔业可持续发展。

第六条县级以上人民政府应当采取措施，鼓励、支持、引导养殖单位和个人依法组建或者加入渔业专业合作经济组织。

渔业专业合作经济组织应当加强自律管理，为成员及时提供生产技术服务，建立水产品质量安全管理制度，健全水产品质量安全控制体系。

第二章养殖管理

第七条省渔业行政主管部门应当根据全省土地利用总体规划和海洋功能区划，编制水域滩涂养殖规划和渔业苗种生产发展规划，并组织实施。

设区的市、县(市、区)人民政府应当组织有关部门根据全省水域滩涂养殖规划，编制本行政区水域滩涂养殖规划，按规定报经批准后实施。

第八条渔业苗种生产实行许可证制度。从事经营性渔业苗种生产活动的单位和个人，应当依法取得渔业苗种生产许可证。未取得渔业苗种生产许可证的，不得从事经营性渔业苗种生产活动。渔业苗种生产许可证的具体管理办法，由省渔业行政主管部门制定。

第九条渔业苗种应当采用人工培育方式获得，不得使用天然苗种进行养殖；国家另有规定的，从其规定。

第十条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当建立和完善渔业养殖调查评估制度，科学划分渔业养殖区域，合理确定养殖容量，适时调整渔业养殖区域布局，并向社会公布。

第十一条单位和个人使用全民所有的水域、滩涂从事渔业养殖的，应当依法取得养殖证。

第十二条渔业养殖用水应当符合渔业水质标准，养殖场所的进排水系统应当分开，养殖废水排放应当符合国家规定标准。

从事渔业养殖的单位和个人应当加强养殖用水水质监测，养殖用水水源受到污染时，应当立即停止使用，经净化处理达到渔业水质标准后方可使用；污染严重的，应当及时报告当地渔业行政主管部门。

鼓励单位和个人采用节水、节能、环保的方式从事养殖活动。

第十三条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当采取措施，完善水产品质量检测机制和水产品药物残留监控制度，定期组织对水产品药物残留进行检测，保障水产品质量安全。

第十四条从事渔用兽药和渔用饲料及饲料添加剂生产、经营的单位和个人，应当依法取得许可证后，方可从事生产、经营活动。

第十五条在渔业养殖中禁止使用或者限制使用的药品、生物制剂、防腐剂、保鲜剂，渔业养殖单位和个人应当严格按照国家规定的标准和要求执行。

禁止使用假、劣渔用兽药。禁止将原料药直接用于渔业养殖或者向养殖水域直接泼洒抗生素类药物。禁止销售含有违禁药物或者药物残留量超过标准的水产品。

第十六条渔业养殖单位应当建立水产品生产记录，对渔业养殖投入品的名称、来源、用法、用量、使用和停用日期，疫病发生和防治情况以及收获、捕捞日期等进行如实记载。水产品生产记录应当保存2年。

鼓励从事渔业养殖的个人建立水产品生产记录。

第十七条因工程建设占用水域、滩涂，给养殖单位和个人造成损失的，由建设单位依法给予补偿。具体补偿标准和办法由省财政部门、价格主管部门会同省渔业行政主管部门制定。

第三章增殖管理

第十八条渔业增殖应当坚持统一规划、因地制宜、保护生态、分级实施的原则，通过放流、底播、移植、投放人工鱼礁以及划定渔业增殖保护区等方式，涵养渔业资源，实现可持续利用。

第十九条省渔业行政主管部门应当根据渔业资源状况和水域特点，编制全省渔业增殖规划，报省人民政府批准后组织实施。

设区的市、县(市、区)人民政府渔业行政主管部门应当根据全省渔业增殖规划，编制本辖区的增殖规划，报本级人民政府批准后实施。

第二十条渔业增殖实行项目管理制度。省渔业行政主管部门负责渔业增殖项目的实施和监督，具体工作由其所属的渔业增殖管理机构承担。

渔业增殖项目管理的具体办法，由省渔业行政主管部门会同省财政部门制定。

第二十一条县级以上人民政府应当设立渔业增殖专项资金，并列入同级财政年度预算。

县级以上人民政府财政部门应当对渔业增殖工作所需经费给予保障。

渔业增殖受益单位和个人应当依法缴纳渔业资源增殖保护费。渔业资源增殖保护费应当专项用于渔业资源的增殖和保护。

第二十二条渔业增殖应当使用本地原种亲本及其子一代，不得使用外来物种、杂交种、转基因种和经检验检疫不合格的亲本或者苗种。

用于养殖的渔业亲本、苗种和成体，不得擅自投放到自然水域。

第二十三条建设人工鱼礁应当按照渔业增殖规划要求，委托有相应资质的单位进行本底调查和可行性论证，并向省渔业行政主管部门提出申请，经省渔业行政主管部门批准后方可建设。

禁止使用有毒、有害和其他可能污染水域环境的材料建设人工鱼礁。

第二十四条省渔业行政主管部门应当根据全省渔业增殖规划，在渔业增殖水域设立保护区，报省人民政府批准。未经省渔业行政主管部门批准，任何单位和个人不得进入渔业增殖保护区从事捕捞生产。

第二十五条省渔业行政主管部门应当定期组织有关专家，对渔业增殖生态安全进行评估，并采取措施，确保水域生态安全，防止对水域生态环境、生物资源种质等造成不良影响。

因开发利用水域、滩涂造成渔业生态损害的，应当按照国家规定进行生态补偿。

第四章防疫管理

第二十六条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当建立和完善水生动物疫病预防控制机制，加强水生动物疫病的监测、检测、诊断、流行病学调查、疫情报告以及其他预防、控制等监督管理工作。

水生动物防疫执法人员应当依法取得行政执法证件。

第二十七条从事水生动物的苗种培育、养殖、经营的单位和个人，必须具备国家规定的水生动物防疫条件。

水生动物及其产品应当依法进行检疫；应当检疫而未检疫的，必须强制补检。

经检疫不合格的水生动物及其产品，应当进行无害化处理；无法作无害化处理的，应当予以销毁。

第二十八条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当制定本行政区域内的水生动物疫情应急预案，报本级人民政府批准。

县级以上人民政府应当建立必要的渔用兽药、医疗器械等应急物资储备制度，为预防、控制和扑灭突发性重大水生动物疫病提供保障。

第二十九条任何单位和个人发现水生动物疫病或者疑似疫病的，应当立即向当地渔业行政主管部门报告。渔业行政主管部门接到疫情报告，应当根据疫情，按规定程序报本级人民政府批准后，启动水生动物疫情应急预案。

第三十条因预防、控制重大水生动物疫情，采取捕杀、消毒、隔离或者销毁措施，给当事人造成经济损失的，当地人民政府应当责成有关部门按照国家规定给予补偿。

第五章监督检查

第三十一条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当会同有关部门建立健全渔业环境监测体系，加强渔业水域环境监测，保障渔业养殖与增殖水域生态安全。

县级以上人民政府环境保护行政主管部门和水行政主管部门应当依法加强入海和入湖河流水质的检测管理，采取有效措施，改善和提高入海和入湖河口的水环境质量。

第三十二条省渔业行政主管部门应当依法组织有关专家，对可能影响水产品质量安全的潜在危害进行风险评估，并根据评估结果采取相应措施。

省渔业行政主管部门应当将水产品质量安全风险评估结果及时通报有关部门，并定期向社会公布水产品质量安全状况、渔业水域生态状况以及水产品病害、养殖容量等信息。

第三十三条省质量技术监督部门应当会同省渔业行政主管部门根据全省渔业生产发展需要，制定有关渔业养殖与增殖的地方标准和技术规范。

销售的水产品必须符合水产品质量安全强制性标准；运输、销售水产品过程中，不得使用违禁药物。

有毒赤潮发生区域内的水产品，任何单位和个人不得擅自采捕和销售。

第三十四条水产品生产单位以及从事水产品收购的单位和个人，应当按照国家和省有关规定对单体或者批次的水产品进行包装标识，标明品名、产地、生产者、生产日期、保质期和产品质量等级等内容。

禁止伪造或者冒用无公害水产品、绿色食品、有机水产品标识；严禁销售不合格水产品。

第三十五条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当加强水产品质量安全的监督检查工作。在监督检查中，可以对生产、销售的水产品进行现场检查，调查了解水产品质量安全的有关情况，查阅、复制与水产品质量安全有关的记录和其他资料；对经检测不符合水产品质量安全标准的水产品，有权查封、扣押，并可以责令生产者或者销售者召回其水产品。

县级以上人民政府渔业行政主管部门应当建立生产经营者违法行为记录制度，对违法行为的情况予以记录并公布。

第三十六条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当加强对渔用兽药使用和渔用兽药残留检测的监督检查工作，及时查处渔业养殖过程中的违法用药行为。

渔业行政主管部门在监督检查工作中发现违法生产、销售渔用兽药或者违法生产、销售、使用渔用饲料和饲料添加剂的，应当及时通知同级兽医行政管理部门，由兽医行政管理部门依法予以处理。

第三十七条鼓励单位和个人对水产品质量安全进行社会监督。任何单位和个人都有权对渔业养殖与增殖活动中的违法行为进行检举、揭发和控告。有关部门收到检举、揭发和控告后，应当及时调查处理。

第六章法律责任

第三十八条违反本办法规定，擅自使用天然苗种进行养殖生产的，由渔业行政主管部门责令限期改正，给予警告，没收渔业苗种和水产品，并处以1000元以上2万元以下的罚款。

第三十九条违反本办法规定，无兽药生产许可证、兽药经营许可证生产、经营渔用兽药的，或者虽有兽药生产许可证、兽药经营许可证，生产、经营假、劣渔用兽药的，由兽医行政管理部门责令其停止生产、经营，没收用于违法生产的原料、辅料、包装材料及生产、经营的渔用兽药和违法所得，并处以违法生产、经营的渔用兽药(包括已出售的和未出售的渔用兽药)货值金额2倍以上5倍以下的罚款；货值金额无法查证核实的，处以10万元以上20万元以下罚款；无兽药生产许可证生产渔用兽药，情节严重的，没收其生产设备。

生产、经营假、劣渔用兽药，情节严重的，由原许可机关吊销其兽药生产许可证、兽药经营许可证；构成犯罪的，依法追究刑事责任；给他人造成损失的，依法承担赔偿责任。生产、经营企业的主要负责人和直接负责的主管人员终身不得从事渔用兽药的生产、经营活动。

第四十条违反本办法规定，单位或者个人有下列行为之一的，由渔业行政主管部门责令限期改正，给予警告，没收渔业苗种和水产品，并按下列规定处以罚款：

(一)使用外来物种、杂交种、转基因种和经检验检疫不合格的亲本或者苗种用于渔业增殖的，处以2000元以上3万元以下的罚款；

(二)擅自将用于养殖的渔业亲本、苗种或者成体投放到自然水域的，处以2000元以上1万元以下的罚款；(三)擅自采捕或者销售有毒赤潮发生区域内水产品的，处以2000元以上1万元以下的罚款。

增殖范文篇3

第二条本规定所称水生生物增殖放流，是指采用放流、底播、移植等人工方式向海洋、江河、湖泊、水库等公共水域投放亲体、苗种等活体水生生物的活动。

第三条在中华人民共和国管辖水域内进行水生生物增殖放流活动，应当遵守本规定。

第四条农业部主管全国水生生物增殖放流工作。

县级以上地方人民政府渔业行政主管部门负责本行政区域内水生生物增殖放流的组织、协调与监督管理。

第五条各级渔业行政主管部门应当加大对水生生物增殖放流的投入，积极引导、鼓励社会资金支持水生生物资源养护和增殖放流事业。

水生生物增殖放流专项资金应专款专用，并遵守有关管理规定。渔业行政主管部门使用社会资金用于增殖放流的，应当向社会、出资人公开资金使用情况。

第六条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当积极开展水生生物资源养护与增殖放流的宣传教育，提高公民养护水生生物资源、保护生态环境的意识。

第七条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当鼓励单位、个人及社会各界通过认购放流苗种、捐助资金、参加志愿者活动等多种途径和方式参与、开展水生生物增殖放流活动。对于贡献突出的单位和个人，应当采取适当方式给予宣传和鼓励。

第八条县级以上地方人民政府渔业行政主管部门应当制定本行政区域内的水生生物增殖放流规划，并报上一级渔业行政主管部门备案。

第九条用于增殖放流的人工繁殖的水生生物物种，应当来自有资质的生产单位。其中，属于经济物种的，应当来自持有《水产苗种生产许可证》的苗种生产单位；属于珍稀、濒危物种的，应当来自持有《水生野生动物驯养繁殖许可证》的苗种生产单位。

渔业行政主管部门应当按照“公开、公平、公正”的原则，依法通过招标或者议标的方式采购用于放流的水生生物或者确定苗种生产单位。

第十条用于增殖放流的亲体、苗种等水生生物应当是本地种。苗种应当是本地种的原种或者子一代，确需放流其他苗种的，应当通过省级以上渔业行政主管部门组织的专家论证。

禁止使用外来种、杂交种、转基因种以及其他不符合生态要求的水生生物物种进行增殖放流。

第十一条用于增殖放流的水生生物应当依法经检验检疫合格，确保健康无病害、无禁用药物残留。

第十二条渔业行政主管部门组织开展增殖放流活动，应当公开进行，邀请渔民、有关科研单位和社会团体等方面的代表参加，并接受社会监督。

增殖放流的水生生物的种类、数量、规格等，应当向社会公示。

第十三条单位和个人自行开展规模性水生生物增殖放流活动的，应当提前15日向当地县级以上地方人民政府渔业行政主管部门报告增殖放流的种类、数量、规格、时间和地点等事项，接受监督检查。

经审查符合本规定的增殖放流活动，县级以上地方人民政府渔业行政主管部门应当给予必要的支持和协助。

应当报告并接受监督检查的增殖放流活动的规模标准，由县级以上地方人民政府渔业行政主管部门根据本地区水生生物增殖放流规划确定。

第十四条增殖放流应当遵守省级以上人民政府渔业行政主管部门制定的水生生物增殖放流技术规范，采取适当的放流方式，防止或者减轻对放流水生生物的损害。

第十五条渔业行政主管部门应当在增殖放流水域采取划定禁渔区、确定禁渔期等保护措施，加强增殖资源保护，确保增殖放流效果。

第十六条渔业行政主管部门应当组织开展有关增殖放流的科研攻关和技术指导，并采取标志放流、跟踪监测和社会调查等措施对增殖放流效果进行评价。

第十七条县级以上地方人民政府渔业行政主管部门应当将辖区内本年度水生生物增殖放流的种类、数量、规格、时间、地点、标志放流的数量及方法、资金来源及数量、放流活动等情况统计汇总，于11月底以前报上一级渔业行政主管部门备案。

增殖范文篇4

第一条为了加强渔业养殖与增殖管理，保障水产品质量安全，促进现代渔业发展，根据《中华人民共和国渔业法》等法律、法规，结合本省实际，制定本办法。

第二条在本省管辖范围内从事渔业养殖与增殖及其他相关活动，应当遵守本办法。

第三条县级以上人民政府应当将渔业养殖与增殖纳入国民经济和社会发展规划，保护水域环境和生态安全，促进渔业养殖与增殖的发展。

县级以上人民政府统一领导、协调本辖区内的水产品质量安全监督管理工作，建立健全水产品质量安全责任目标考核制度，对水产品质量安全监督管理负总责。

第四条县级以上人民政府渔业行政主管部门负责本辖区内的渔业养殖与增殖管理工作。

乡(镇)人民政府应当协助渔业行政主管部门做好渔业养殖与增殖的相关管理工作。

发展改革、财政、卫生、水利、畜牧、环境保护、质量技术监督、工商行政管理、食品药品监督和出入境检验检疫等部门，应当按照各自职责，密切配合，做好渔业养殖与增殖的相关工作。

第五条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当建立健康养殖和无公害水产品生产制度。引导、推广水产品标准化生产，鼓励和支持生产绿色、有机水产品。

鼓励单位和个人开展渔业养殖与增殖科学技术研究，开发、推广先进技术和优良品种，促进渔业可持续发展。

第六条县级以上人民政府应当采取措施，鼓励、支持、引导养殖单位和个人依法组建或者加入渔业专业合作经济组织。

渔业专业合作经济组织应当加强自律管理，为成员及时提供生产技术服务，建立水产品质量安全管理制度，健全水产品质量安全控制体系。

第二章养殖管理

第七条省渔业行政主管部门应当根据全省土地利用总体规划和海洋功能区划，编制水域滩涂养殖规划和渔业苗种生产发展规划，并组织实施。

设区的市、县(市、区)人民政府应当组织有关部门根据全省水域滩涂养殖规划，编制本行政区水域滩涂养殖规划，按规定报经批准后实施。

第八条渔业苗种生产实行许可证制度。从事经营性渔业苗种生产活动的单位和个人，应当依法取得渔业苗种生产许可证。未取得渔业苗种生产许可证的，不得从事经营性渔业苗种生产活动。渔业苗种生产许可证的具体管理办法，由省渔业行政主管部门制定。

第九条渔业苗种应当采用人工培育方式获得，不得使用天然苗种进行养殖；国家另有规定的，从其规定。

第十条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当建立和完善渔业养殖调查评估制度，科学划分渔业养殖区域，合理确定养殖容量，适时调整渔业养殖区域布局，并向社会公布。

第十一条单位和个人使用全民所有的水域、滩涂从事渔业养殖的，应当依法取得养殖证。

第十二条渔业养殖用水应当符合渔业水质标准，养殖场所的进排水系统应当分开，养殖废水排放应当符合国家规定标准。

从事渔业养殖的单位和个人应当加强养殖用水水质监测，养殖用水水源受到污染时，应当立即停止使用，经净化处理达到渔业水质标准后方可使用；污染严重的，应当及时报告当地渔业行政主管部门。

鼓励单位和个人采用节水、节能、环保的方式从事养殖活动。

第十三条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当采取措施，完善水产品质量检测机制和水产品药物残留监控制度，定期组织对水产品药物残留进行检测，保障水产品质量安全。

第十四条从事渔用兽药和渔用饲料及饲料添加剂生产、经营的单位和个人，应当依法取得许可证后，方可从事生产、经营活动。

第十五条在渔业养殖中禁止使用或者限制使用的药品、生物制剂、防腐剂、保鲜剂，渔业养殖单位和个人应当严格按照国家规定的标准和要求执行。

禁止使用假、劣渔用兽药。禁止将原料药直接用于渔业养殖或者向养殖水域直接泼洒抗生素类药物。禁止销售含有违禁药物或者药物残留量超过标准的水产品。

第十六条渔业养殖单位应当建立水产品生产记录，对渔业养殖投入品的名称、来源、用法、用量、使用和停用日期，疫病发生和防治情况以及收获、捕捞日期等进行如实记载。水产品生产记录应当保存2年。

鼓励从事渔业养殖的个人建立水产品生产记录。

第十七条因工程建设占用水域、滩涂，给养殖单位和个人造成损失的，由建设单位依法给予补偿。具体补偿标准和办法由省财政部门、价格主管部门会同省渔业行政主管部门制定。

第三章增殖管理

第十八条渔业增殖应当坚持统一规划、因地制宜、保护生态、分级实施的原则，通过放流、底播、移植、投放人工鱼礁以及划定渔业增殖保护区等方式，涵养渔业资源，实现可持续利用。

第十九条省渔业行政主管部门应当根据渔业资源状况和水域特点，编制全省渔业增殖规划，报省人民政府批准后组织实施。

设区的市、县(市、区)人民政府渔业行政主管部门应当根据全省渔业增殖规划，编制本辖区的增殖规划，报本级人民政府批准后实施。

第二十条渔业增殖实行项目管理制度。省渔业行政主管部门负责渔业增殖项目的实施和监督，具体工作由其所属的渔业增殖管理机构承担。

渔业增殖项目管理的具体办法，由省渔业行政主管部门会同省财政部门制定。

第二十一条县级以上人民政府应当设立渔业增殖专项资金，并列入同级财政年度预算。

县级以上人民政府财政部门应当对渔业增殖工作所需经费给予保障。

渔业增殖受益单位和个人应当依法缴纳渔业资源增殖保护费。渔业资源增殖保护费应当专项用于渔业资源的增殖和保护。

第二十二条渔业增殖应当使用本地原种亲本及其子一代，不得使用外来物种、杂交种、转基因种和经检验检疫不合格的亲本或者苗种。

用于养殖的渔业亲本、苗种和成体，不得擅自投放到自然水域。

第二十三条建设人工鱼礁应当按照渔业增殖规划要求，委托有相应资质的单位进行本底调查和可行性论证，并向省渔业行政主管部门提出申请，经省渔业行政主管部门批准后方可建设。

禁止使用有毒、有害和其他可能污染水域环境的材料建设人工鱼礁。

第二十四条省渔业行政主管部门应当根据全省渔业增殖规划，在渔业增殖水域设立保护区，报省人民政府批准。未经省渔业行政主管部门批准，任何单位和个人不得进入渔业增殖保护区从事捕捞生产。

第二十五条省渔业行政主管部门应当定期组织有关专家，对渔业增殖生态安全进行评估，并采取措施，确保水域生态安全，防止对水域生态环境、生物资源种质等造成不良影响。

因开发利用水域、滩涂造成渔业生态损害的，应当按照国家规定进行生态补偿。

第四章防疫管理

第二十六条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当建立和完善水生动物疫病预防控制机制，加强水生动物疫病的监测、检测、诊断、流行病学调查、疫情报告以及其他预防、控制等监督管理工作。

水生动物防疫执法人员应当依法取得行政执法证件。

第二十七条从事水生动物的苗种培育、养殖、经营的单位和个人，必须具备国家规定的水生动物防疫条件。

水生动物及其产品应当依法进行检疫；应当检疫而未检疫的，必须强制补检。

经检疫不合格的水生动物及其产品，应当进行无害化处理；无法作无害化处理的，应当予以销毁。

第二十八条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当制定本行政区域内的水生动物疫情应急预案，报本级人民政府批准。

县级以上人民政府应当建立必要的渔用兽药、医疗器械等应急物资储备制度，为预防、控制和扑灭突发性重大水生动物疫病提供保障。

第二十九条任何单位和个人发现水生动物疫病或者疑似疫病的，应当立即向当地渔业行政主管部门报告。渔业行政主管部门接到疫情报告，应当根据疫情，按规定程序报本级人民政府批准后，启动水生动物疫情应急预案。

第三十条因预防、控制重大水生动物疫情，采取捕杀、消毒、隔离或者销毁措施，给当事人造成经济损失的，当地人民政府应当责成有关部门按照国家规定给予补偿。

第五章监督检查

第三十一条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当会同有关部门建立健全渔业环境监测体系，加强渔业水域环境监测，保障渔业养殖与增殖水域生态安全。

县级以上人民政府环境保护行政主管部门和水行政主管部门应当依法加强入海和入湖河流水质的检测管理，采取有效措施，改善和提高入海和入湖河口的水环境质量。

第三十二条省渔业行政主管部门应当依法组织有关专家，对可能影响水产品质量安全的潜在危害进行风险评估，并根据评估结果采取相应措施。

省渔业行政主管部门应当将水产品质量安全风险评估结果及时通报有关部门，并定期向社会公布水产品质量安全状况、渔业水域生态状况以及水产品病害、养殖容量等信息。

第三十三条省质量技术监督部门应当会同省渔业行政主管部门根据全省渔业生产发展需要，制定有关渔业养殖与增殖的地方标准和技术规范。

销售的水产品必须符合水产品质量安全强制性标准；运输、销售水产品过程中，不得使用违禁药物。

有毒赤潮发生区域内的水产品，任何单位和个人不得擅自采捕和销售。

第三十四条水产品生产单位以及从事水产品收购的单位和个人，应当按照国家和省有关规定对单体或者批次的水产品进行包装标识，标明品名、产地、生产者、生产日期、保质期和产品质量等级等内容。

禁止伪造或者冒用无公害水产品、绿色食品、有机水产品标识；严禁销售不合格水产品。

第三十五条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当加强水产品质量安全的监督检查工作。在监督检查中，可以对生产、销售的水产品进行现场检查，调查了解水产品质量安全的有关情况，查阅、复制与水产品质量安全有关的记录和其他资料；对经检测不符合水产品质量安全标准的水产品，有权查封、扣押，并可以责令生产者或者销售者召回其水产品。

县级以上人民政府渔业行政主管部门应当建立生产经营者违法行为记录制度，对违法行为的情况予以记录并公布。

第三十六条县级以上人民政府渔业行政主管部门应当加强对渔用兽药使用和渔用兽药残留检测的监督检查工作，及时查处渔业养殖过程中的违法用药行为。

渔业行政主管部门在监督检查工作中发现违法生产、销售渔用兽药或者违法生产、销售、使用渔用饲料和饲料添加剂的，应当及时通知同级兽医行政管理部门，由兽医行政管理部门依法予以处理。

第三十七条鼓励单位和个人对水产品质量安全进行社会监督。任何单位和个人都有权对渔业养殖与增殖活动中的违法行为进行检举、揭发和控告。有关部门收到检举、揭发和控告后，应当及时调查处理。

第六章法律责任

第三十八条违反本办法规定，擅自使用天然苗种进行养殖生产的，由渔业行政主管部门责令限期改正，给予警告，没收渔业苗种和水产品，并处以1000元以上2万元以下的罚款。

第三十九条违反本办法规定，无兽药生产许可证、兽药经营许可证生产、经营渔用兽药的，或者虽有兽药生产许可证、兽药经营许可证，生产、经营假、劣渔用兽药的，由兽医行政管理部门责令其停止生产、经营，没收用于违法生产的原料、辅料、包装材料及生产、经营的渔用兽药和违法所得，并处以违法生产、经营的渔用兽药(包括已出售的和未出售的渔用兽药)货值金额2倍以上5倍以下的罚款；货值金额无法查证核实的，处以10万元以上20万元以下罚款；无兽药生产许可证生产渔用兽药，情节严重的，没收其生产设备。

生产、经营假、劣渔用兽药，情节严重的，由原许可机关吊销其兽药生产许可证、兽药经营许可证；构成犯罪的，依法追究刑事责任；给他人造成损失的，依法承担赔偿责任。生产、经营企业的主要负责人和直接负责的主管人员终身不得从事渔用兽药的生产、经营活动。

第四十条违反本办法规定，单位或者个人有下列行为之一的，由渔业行政主管部门责令限期改正，给予警告，没收渔业苗种和水产品，并按下列规定处以罚款：

(一)使用外来物种、杂交种、转基因种和经检验检疫不合格的亲本或者苗种用于渔业增殖的，处以2000元以上3万元以下的罚款；

(二)擅自将用于养殖的渔业亲本、苗种或者成体投放到自然水域的，处以2000元以上1万元以下的罚款；(三)擅自采捕或者销售有毒赤潮发生区域内水产品的，处以2000元以上1万元以下的罚款。

增殖范文篇5

总体而言，目前的历史聚落研究由于受到村落历史资料不足的限制，宏观分析为主，微观分析不足。村落往往被看作一个点，而不是被看作三维地理空间，对村落个体发展的具体历史过程以及村落内部的结构形态、人口发展以及社会组织的发育等问题的研究尚有待深入。因此，本文试图通过对村落人口增长、人口流动及姓氏构成的分析，探讨明清华北平原村落的生长过程及其影响因素。

一人口的自然增殖与村落的发展

研究发现，很多村落是由零星的小居民点逐渐发展成为独立的村落，每个村落实际上都经历了一个从零星小聚落到独立成村，再发展成熟最终达到饱和的过程。但就每个具体村落的发展而言，影响村落成长的因素是多方面的，既有村落内部人口自然增殖的原因，也有移民以及村际间人口流动的影响。在众多影响因素中，人口自然增殖无疑是村落发展壮大的最主要原因。

*人口自然增殖对村落发展的影响在单一宗族型村落表现得最为明显。毫无疑问，大多单一宗族的村落最初都是由一家一户的定居，逐渐发展成大家族，再分成若干户，最终发展成为一个具有一定地理空间与人口规模的村落。对村落的姓氏构成与人口的研究可以发现，这种以单一宗族为主的村落无论是华南、江南还是华北地区都是存在的，尤其以华南地区最为显著①。

以林耀华研究的福建省福州附近的义序为例，正如林耀华指出的那样：“义序是一个乡村，因为全体人民共同聚居在一个地域上。义序是一个宗族，因为全体人民都从一个祖宗传衍下来。前者是地缘团体，后者是血缘团体。义序兼并前后二者，就是一个宗族乡村。”②据林耀华民国时期的调查，义序共有居户1938家，其中黄姓1907家，其余的林姓12家，陈姓6家，刘姓、张姓3家，王姓、郑姓2家，杨、郭、庄姓各1家。黄姓占98．40％，其余各姓合起来不足2％③。由此可见，义序是一典型的宗族聚居型村落，全体人民由一个祖宗传衍下来，也就是说，这种村落主要依靠自身繁衍而得到发展。

华北地区虽然以多姓村为主，但是这种宗族型村落依然可见。在山东，据学者的调查，山东的村落可以分为单一型村落、亲族联合村落、杂姓聚居村落等类型。济南附近的傅家庄、孟家庄、姬家庄、魏家庄等，都是单一型宗族村落，这种单一型村落在山东偏远的山区和海岛数量尤其多，象容城县大苏家村、小苏家村、高家庵村都是单一宗族的村落④。

在河北，单一宗族型村落也是普遍存在的，例如新河县到民国17年时，杨十户村为杨姓一大族，东十户村只有王姓一族，徐冯召村为徐姓一大族，陈家冯召陈姓一大族，台家庄徐姓一大族，小贾家庄、贾家园为贾姓一族，护驾庄(也即傅家庄)为傅姓一大族，来远村王姓占据村民十之九，也可归为单一宗族型村落⑤。这些单一宗族型村落小的只有数家，大的可以达到一百多家，如护驾庄。它们都是由当初一姓一户形成，逐渐繁衍成村。由此可见人口自然增殖对村落发展的影响。

即使在多姓村落，人口的自然增殖对村落生长的影响也是显而易见的，在这种类型的村落中，常可见一两姓乃至三、四姓人口数量较多的情形，这些主要的姓氏往往构成村落人口的主体。以顺义县赵古营村为例，据满铁的调查，到民国30年10月31日为止，该村共有124户749口，23个姓氏。在23个姓氏中，石姓36户，姚姓36户，赵姓19户，其余20姓的户数都在4户以下，石、姚、赵三大姓共91户，占73．4％。

在望泉寺村，民国三十年共137户，723口，17姓中其中刘姓49户，王姓28户，张姓18户，路姓13户，其余13姓都在3户以下，刘、王、张、路四大姓共108户，占村落总户数的78．8％。赵古营村和望泉寺村都属于以几个姓氏为主的村落。梅沟营村则是以某一姓氏为主的村落，该村截止民国三十年十月三十一日共有58户346口，11姓中其中刘姓44户，其余都在3户以下，刘姓占总户数的75．8％⑥。从多姓村落中大族户口所占村庄户口的比例来看，在多姓村落，内部人口自然增殖对村落形成的影响也是相当显著的。

*

二“寄居型人口流动”与村落的发展

村落的生长除了自身的人口增殖以外，人口流动对村落的发展也有很大的影响，人口流动不但增加了村落的人口数量，也改变着村落的空间形态、姓氏结构和村落内部的社会关系。这里我们所说的人口流动，既包括省际、县际之间的移民，也包括县内村落之人口流动。

就流动人口与原来村庄的关系而言，一般有两种形式：一种情形是，居民迁出原来的村落，在离迁出村落较远的地方建立新的村庄，在行政上与迁出的村庄没有什么联系，具有移民的特征。例如隆尧县白家庄，据该村白氏家谱：明永乐二十年，该白氏祖由山西交城县徙于直隶赵州隆平县乡观社，立祖者为白仁亲，明洪熙元年(1425年)，部分白氏民复迁于此，村以姓氏而得名①。又如隆尧县的莲子镇公社的辛庄，据该村杨氏墓清道光二十五年碑文载：明永乐间，杨氏民由内丘县张马村迁于隆平县张汪村，后又由张汪徙此新建村落，遂名村为“新庄”，后演变为辛庄②。明代隆平县与唐山县是相邻的两县(民国时合为尧山县)，白家庄与辛庄虽然离迁出地不远，但是却属于跨县人口流动，行政上肯定不受原来村落的管辖。

这种类型的人口流动在一县内也同样存在。如盐山县杨集公社崔刘杨村，据崔氏家谱载：崔氏五世祖与刘氏一家由盐山县城北崔家园迁此立村，以其姓氏取名为崔刘庄，后又有杨氏由杨呈赵迁此定居，遂改称崔刘杨③。杨集公社驻地在盐山县县城东南偏北22．5里处，而崔刘杨又在杨集公社驻地东北偏北5公里处，新立村与迁出村落崔家园的直线距离近20里，行政上也不可能受原来村落管辖。因此，这类村落和甘布尔所说的“卫星聚落”不同，甘布尔所说的“卫星聚落”(settlementsatellite)，主要是由于受空间的限制，部分村民迁出村落的核心部分，在原来村庄的边缘形成新的聚落，这些新形成的聚落在政治和经济组织上仍然是原来村落的一部分④。

但是，不是说这类村落不受迁出村落管理就是完全独立的，这些新立村落并不能游离于国家基层管理组织之外，据嘉靖《获鹿县志》：“有远乡附籍或寄庄壻户不肯人甲，初时俱开作畸零户者，夫甲首积多又当并聚为里分矣，畸零户积又当分列为甲有矣。”⑤从获鹿县的事例中，可见明代的流动人口被归人到附近的里社中，由于许多人不愿人甲，被当作畸零户处理。

另外一种管理形式是代管，当这种移民聚落形成以后，由于规模较小，常常由附近较大村落代管，新河县尧李庄就是这样的一个典型。尧李庄始建于明代，具体年代不详，据《尧李庄图》附文“故事”条：“明沧头庙(属冀县)有李姓者，佣于沙井崔宅，东(家)伙(计)甚睦，主人以女配之，给地三顷六十亩，遂落户于此，因名李家庄而附属于沙井村。关帝庙前有古香亭，上刻‘万历二十八年，沙井村代管李家庄’诸字可证。后人口渐多，遂脱离沙井改名尧李庄。”⑥从古香亭碑刻“万历二十八年，沙井代管李家庄”这一条来看，该村始建应在万历二十八年之前，并且接受距离较近且有亲戚关系的沙井村代管。

*

到了明中叶以后，代管村这一形式可能已经逐渐取代在里社下“开作畸零户”的管理方式，原因是里社编审制度到明代中叶以后已经衰驰，村庄逐渐成为实现赋役的主体．所以这类新立小村在纳税和承担差役方面就可能和附近村落发生联系，并接受附近较大村落的管理，成为这些村落的“代管村”或“附属村”。到了清代，代管村或附属村这一形式已经被广泛使用①。

以唐县为例，据光绪《唐县志》载，整个唐县这样的代管村有87个，例如西旦里村的代管村有刘家沟、墨眼村、黄眼村。木兰村代管村庄有尖梢村、西沟村、小山河头、满心里、羊角里。代管村庄较多的村庄是上苇子村，其下代管村庄有梅家沟、大寺沟、皂角沟、马庄儿、梁家沟、平房庄、韩白里、桃沟门、台子村、上下黑角、枣儿沟、墁石道、西石门、吴儿庵、郭庄儿、土沟门、令公铺、六亩园、东石门、塔子沟共23个村庄②。实际代管村落的数量可能远不止87个，因为这87个代管村仅仅是采访册上记载的数量，当时编志者实地调查却发现有很多遗漏，例如小山、南庄三村“采访遗漏又有田家沟、果庄、鹞子岭、米家楼、岳沟、李家庄、三道冈、阎家庄、杨家庵等村庄，亦未详道理方向”③。

一般来说，这些代管村的道里方向县志和采访册记载都不完备，表明这些村落在当时规模还很小，应属于较晚形成的村落。光绪《唐县志》记载的一些代管村人口数量为我们理解代管村的规模提供了线索，表1列出了倒马村所代管村的户口情况：

从表1可以发现，很多代管村的户数在1—5户之间，这些只有一两户的村落毫无疑问是后来移民的结果，大多形成于道光前后。人口较多的柳家沟村成村的年代较早，新编《唐县志》认为大约明嘉靖二十九年始有居民，因当地有柳林而得名④，这种说法基本上应该是可靠的。校场沟与柳家沟的情形有所不同，光绪唐县志“校场沟”条下“自校场沟至大大沟门40户”⑤，它的户数较多是因为它实际上包括从校场沟到大大沟门这一段距离上的数个居民点。

唐县的代管村较多与它的山地较多有关，直到今天代管村这种管理形式仍然存在。平原地区代管村虽然没有唐县多，但代管村也是存在的，例如青县，到民国时期仍然有许多零星小村在发育，“此外尚有新立小村多处，虽或有一名，然类皆附人它村一牌应管，且为县局册表所不载，姑从阙”⑥。这些新立的村庄附入其它村应管，实际上也就是代管村或附属村。由于新立小村规模较小，一般县志对这种村落都不载，但是这种村落在村落发展过程中应该是普遍存在的，只是由于记载较少而被人们忽略了。

从这种类型人口流动的影响来看，它往往会短暂地改变迁入村庄的空间结构与姓氏结构，随着自身规模的发展，最终要独立成村。由于它们只是短时间内附迁入地附近的村落，具有寄居的特征，本文称之为“寄居型人口流动”。它的发展对村落数量变化有很大影响，同时，随着它的独立，也加速了村落的裂变分化以及一定地域内村落密集化的过程。

三“融入型人口流动”与村落发展

和“寄居型人口流动”不同，另一种情形的人口流动是，一个村的人口迁移到另一个村庄里，成为这个村庄的一部分，彼此结合比较紧密，并且不会再独立成村，我们可称之为“融人型人口流动”。这种类型的人口流动在一个村落开村以后是非常普遍的现象，对村落的发展壮大有很大影响。

*

例如盐山县孟店公社夏庄，据该村邢氏家谱记载：其先祖邢氏于明永乐末年迁来，其时即有夏村之称，后夏氏失传，郑、潘、张等氏相继迁入，村名仍称夏庄①。邢、郑、潘、张四姓就是夏氏立村后迁来的移民。另如新河县后梁家庄，据该村焦氏家谱称，焦氏洪武年间由山西洪桐县老鸦窝枕头村迁来，焦姓是该村较早的居民。在焦氏之后，程姓由冀县东午村迁来，徐姓由本县徐十户村迁来，黄姓由姚村迁来，成姓由马庄迁来，此外还有张、王、李、陈、姬、贾、申等姓②。后梁家庄由焦姓立村，徐、黄、成等姓都是后来迁入者，最终没有独立成村，属于融入型的人口流动。

这种类型人口流动对村落的发展有很大的影响，也不断改变着村落的宗族与社会结构。研究华北的学者都注意到，华北的村落以多姓村为主，但是，实际上，就今天的多姓村落而言，许多村落早期都是由单个家庭建立的。研究发现，今天的多姓村落很多都以姓氏命名村庄，表明这类村庄最初是由单一家庭发展而来的。村落家谱中关于村落起源的记载也可以证明这一点。

在盐山县望树公社魏庄，据魏氏家谱载：明永乐二年，魏氏奉诏由山东栖霞县迁此占产立庄，故名魏庄③。又如隆尧县小曹庄，该村曹氏家谱载：该族的曹氏祖于永乐间自山西洪桐县迁至隆平县户曹村，明成化间复由户曹村迁此，以姓氏命名为曹家庄，为与村西一大曹家庄相区别，遂更为小曹庄④。这些村落都当是最早移徙到此地的家庭姓氏命名的，故以姓氏名村，但是由于受到融入性人口流动的影响，到今天都已经变成了多姓村落。

村落早期由单个家庭开村的例证，还可见于那些以人名为村名的村落。在盐山县于环珍村，据于氏家谱称，明嘉靖五年(1530年)，于氏先祖于环珍由山东登州府文登县大水波迁此立庄⑤。又如李振宇村、李振环村，据李氏家谱：李氏先祖李振宇、李振环永乐年间奉诏由永平府滦州(今滦县)李家楼迁此分别立庄，各以姓名名村⑥。盐山县类似的例子还有刘洪宇村、王可忠村、孙良广村、张益吴村、李化斗村、王复娥村、崔凡村、韩才风村、刘振隆村、李芳庄子、李分乾村、刘春奎村、李士道村、卢少刚村、李梦飞村、刘武家村等，都是以最初立村者的姓名名村，表明这些村落建立之初只有一家一户而已。

也有一些村落由两三户集中居住发展而成，如前文所说的盐山县的崔刘杨村，最早开村的是崔、刘二姓，村庄的名称即为崔刘庄，后来杨姓迁来了，又改为崔刘杨庄。又如盐山县刘郭铺，据马氏家谱载，明永乐二年，马云奉诏由永平府栾州石门寨迁此占产立庄，因与杨家铺相邻，冠以姓氏取名马家铺，后刘郭二姓迁此居住，子孙繁衍，而马氏人丁不旺，改村名为刘郭铺⑦。从这些村落的名称及其变化中，也可以发现早期村落的姓氏构成与人口的流动状况。

因此，可以这样认为，在村落形成的早期，大多为单一宗族型村落，随着村落的发展和人口的流动尤其是“融入型人口流动”改变了村落原来的姓氏构成。而且，村落的规模越大、历史越悠久，其姓氏构成就越复杂。以顺义县为例(见表2)：

从顺义县的各村户口以及姓氏数的情况来看，到民国三十年，大部分村落属于多姓村庄，且村庄的规模越大、人口越多，姓氏的数量也就越多。例如衙门村有274户，村内共有30姓；马卷村189户，有36姓，而人口较少的妙尔巷村52户，有6姓，姚卷村23户，有9姓。小孙各庄35户，有9姓。这说明，随着村落的发展，“融入型人口流动”逐渐增加，村落的姓氏构成越来越复杂，使村落发展成为多姓村。

*

⑦刘郭铺村马氏家谱，引自河北省盐山县地名领导小组：《盐山县地名资料汇编》(内部资料)，1982年8月。

而且从各村落中不同姓氏的户数来看，各姓的户口数是不相同的，有的姓氏达到几十户，大多姓氏只有一两户。以沙井村为例，沙井村民国三十年十月三十日共有70户居民，16个姓氏，其中李、杨二姓有13户，张姓12户，刘、杜二姓各7户，赵姓5户，孙姓3户，王姓2户，其余的崇、任、柳、景、柏、傅、吴、周各一户①。如果不考虑灾害和人口外迁，村落各姓氏的人口处于相同繁衍速度的情况下，理论上人口越多的姓氏，移居的时间就越早。从这一点上也可以看出，在村庄发展的过程中，外来迁入人口的影响相当显著，村落的人口一直处于动态的发展过程中，村际间、县际间乃至省际间的人口流动一直就没有停止过。

增殖范文篇6

【摘要】目的研究姜黄素衍生物Fm04对K562细胞的增殖及对P210bcr/abl信号通路的影响。方法应用MTT法检测姜黄素衍生物Fm04对K562细胞增殖的影响;应用Westernblot法检测P210bcr/abl及其下游通路蛋白表达的变化和线粒体细胞色素C的变化;比色法测定Caspase3、Caspase9活化程度。结果Fm04对K562细胞的抑制作用呈量效、时效关系,4μmol/LFm04作用24h,抑制率88.4%,半数抑制浓度1.45μmol/L,强度约为姜黄素的7倍;Westernblot表明Fm04可显著下调P210bcr/abl及其下游信号通路蛋白,减少细胞线粒体内细胞色素C含量;Fm04处理组Caspase3、Caspase9浓度值增加。结论Fm04显著抑制K562细胞的增殖并减少P210的蛋白含量从而下调P210bcr/abl下游多种信号分子表达,通过激活caspase的活化和线粒体内细胞色素C的释放,最终诱导K562细胞的凋亡。

【关键词】姜黄素;细胞凋亡;白血病,髓样,慢性;融和蛋白质类;bcrabl;K562细胞;信号传导

ABSTRACT:ObjectiveTostudytheapoptosisinducingeffectsofthesyntheticalcurcuminderivativeFm04onchronicmyelogenousleukemia(CML)cell.MethodsMTTwasusedtodeterminetheapoptoticeffectsofFm04onK562cells.ThesignalproteinmoleculesexpressedinK562cellswasexaminedbyWesternBlotting.ThespectrophotometerkitwasusedtodetecttheactivityofCaspase3andCaspase9.ResultsExposureofK562cellstoFm04producedbothconcentrationandtimedependentincreaseintheantiproliferativerate.K562cellsweremuchmoresensitivetofm04thantocurcumin,4μmoL/LFm04for24htheinhibitingratsreached88.4%andtheIC50ofFm04was1.45μmol/L.Moreover,thelevelofP2l0bcr/ablaswellasthedownstreamsignalproteinwasstronglydownregulatedinfm04treatedK562cells,andtheDvalueofCaspase3andCaspase9wasupregulatedinFm04treatedK562cells.ConclusionFm04exhibitsstrongeractivityininducingapoptosisinchronicmyelogenousleukemia(CML)cellsthancurcuminbyhavingstrongeractivityofthedownregulationoftheP2l0bcr/ablandotherproteins,andbyactivingthecaspasecascadesandinducingthestrongerreleaseofcytochromeCfrommitochondria.Fm04mightbeworthyofbeingconsideredasapotentialchemotherapeuticagentofCML.

KEYWORDS:curcuminderivative;apoptosis;leukemia;P210bcr/abl

姜黄素(curcumin,Cur)系从姜黄中提取的酚性有效单体化合物,具有抗肿瘤、抗氧化、抗突变、抗炎、抗血小板聚集等广泛的药理作用[1]。近年来,有关姜黄素的药理学研究尤其在抑制细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡等方面的作用日益受到重视，并发现Cur与STI571体外联合应用可明显协同下调P210bcr/ab1的表达水平，这对于降低慢性粒细胞白血病对STI571的耐药性的一定的意义[2]。但姜黄素水溶性差,水溶液易水解,首过消除现象明显,生物利用度低,成为限制其临床应用的主要因素和产业化的瓶颈[3]。本实验保留分子中共扼β二酮链等活性必需基团,设计合成新的姜黄素衍生物Fm04。

P210bcr/abl融合蛋白定位于细胞质内,依靠Bcr的双聚体区,以形成二聚体。P210bcr/abl蛋白可通过其酪氨酸激酶(PTK)的持续激活而活化下游相关的信号转导通路,包括Ras/MAPK、PI3K、Erk、NFκB、JakSTAT通路等[49],并阻断线粒体内的细胞色素C(CytC)的释放引起caspases级联的激活[10],从而阻止细胞凋亡,导致细胞过度增殖,是治疗慢性粒细胞白血病的分子靶点。笔者以K562细胞为模型,对新合成姜黄素衍生物Fm04的体外抗慢性粒细胞白血病细胞活性进行初步评价及探讨。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1药品与试剂姜黄素(上海试剂三厂,批号980825),纯度99%;姜黄素衍生物Fm04由本实验室合成并提纯,经核磁共振光谱验证,经HPLC及薄层层析分析鉴定,纯度>90%;Westernblot试剂盒[普洛麦格(北京)生物技术有限公司];抗ABL单克隆抗体、Erk1/2、pErk、AKT、pAKT、CytC、NFκB(P65)、βactin抗体(美国SantaCruz公司);Caspase3、Caspase9分光光度法检测试剂盒(南京凯基生物发展有限公司)。

1.1.2细胞株及培养条件人慢性粒细胞白血病细胞株K562(中科院上海细胞研究所),培养于含10%新生牛血清,1×108U/L青霉素及100mg/L链霉素的RPMI1640培养液,在37℃、体积分数为0.05、饱和湿度的CO2培养箱培养。细胞接种24h后进入指数增长期。

1.2方法

1.2.1细胞增殖采用MTT法,观察Fm04对K562细胞作用的量效与时效关系,接种指数生长期的K562细胞于96孔板上,分别设置空白组,Fm04组（1,2,4,8μmol/L）,Cur组（5,10,20,40μmol/L）。将培养板置于37℃、体积分数为0.05、饱和湿度的CO2培养箱培养至所需的时间,加入MTT溶液,继续培养4h后,离心,弃上清,加入DMSO,颗粒完全溶解后用酶标仪在570nm处测定每孔的光密度值(D)。

1.2.2P210bcr/abl等信号蛋白表达采用Westernblot法,药物处理细胞24h,收集细胞,以0.01mol/L浴冷PBS(pH7.2)洗2次,加入去污裂解缓冲液于4℃裂解30min,离心,吸出上清,即为细胞总蛋白,用BCA蛋白定量,各组均采用同样的蛋白量上样,在SDS聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳。电泳后转膜,封闭液封闭过夜,加一抗室温作用1h,洗去未结合的一抗,以Westernblot试剂盒加二抗,DAB染色。

1.2.3Caspase3和Caspase9活性药物处理细胞24h,收集细胞,采用Caspase3、Caspase9分光光度法检测试剂盒,用分光光度计在λ=405nm测定其D值。通过计算D诱导剂/D阴性对照的倍数来确定Caspase3和Caspase9活化程度。

2结果

2.1Fm04对K562细胞增殖的抑制K562细胞增殖抑制率随Fm04浓度增大而提高,呈剂量依赖关系(图1A),其IC50为1.45μmol/L,强度约为姜黄素的7倍;K562细胞增殖抑制率随着Fm04作用时间的延长而提高,呈时间依赖关系(图1B),且低浓度Fm04在12,24及48h对K562细胞抑制率均比高浓度姜黄素高。

A:不同浓度Fm04和Cur;B:Fm044μmol/L和Cur10μmol/L.

图1Fm04对K562细胞增殖抑制的影响（略）

Fig1InhibitoryeffectofFm04onproliferationofK562cells福建医科大学学报2008年5月第42卷第3期李娜等：姜黄素衍生物Fm04抑制K562细胞增殖及其对P210bcr/abl信号通路的影响

2.2Fm04对K562细胞中P210bcr/abl及其下游信号通路蛋白的影响

2.2.1Fm04下调K562细胞P210bcr/abl蛋白含量随Fm04剂量增大,P210bcr/abl蛋白条带灰度逐渐变淡,Fm041μmol/L就可下调P210bcr/abl蛋白,Fm044μmol/L最明显,条带基本消失,呈量效关系(图2A)。Fm044μmol/L作用12h即对p210bcr/abl蛋白有抑制作用,随着时间的延长,条带逐渐变淡,至48h,P210bcr/abl蛋白条带几乎消失，可见明显的时效关系(图2B)。

A:Fm04;B:4μmol/LFm04.

图2Fm04对K562细胞P210bcr/abl蛋白含量的影响（略）

Fig2EffectofFm04onP210bcr/ablinK562cells

2.2.2Fm04对K562细胞P210bcr/abl下游相关信号通路蛋白含量的影响分别以Fm041,2,4μmol/L处理K562细胞12h,随着剂量增加,NFκB蛋白逐渐减少;而以Fm041,2,4μmol/L处理K562细胞24h,对于PAKT来说,随剂量增加,其蛋白含量减少;而对于PErk来说,其蛋白含量随剂量增加而增加(图3A)。用Fm044μmol/L分别处理K562细胞1,3,6,12,24,48h,PErk蛋白含量在1～6h。随时间延长而减少,处理6h蛋白基本消失,而12～48h,蛋白含量随着时间延长而逐渐增加,此现象于姜黄素并未发生。Cur40μmol/L处理K562细胞,0～48h内,PErk蛋白含量随时间变化逐渐减少(图3B)。

2.3Fm04对线粒体凋亡途径的影响

2.3.1Fm04触发K562细胞线粒体细胞色素C释放Fm041,2,4μmol/L处理K562细胞24h能促进K562细胞线粒体细胞色素C释放,细胞质S100中的含量逐渐增加,相反,线粒体中的细胞色素C含量逐渐减少(图4)。

2.3.2Fm04活化Caspase3、Caspase9Fm041,2,4μmol/L处理K562细胞24h后,Caspase3、Caspase9的活化程度增高,能将偶联有发色基团的Caspase3序列特异性的多肽底物被剪切,发色基团游离出来,D值升高。

3讨论

3.1Fm04下调K562细胞P210bcr/abl及其下游相关信号通路蛋白含量本实验合成的姜黄素衍生物Fm04,化学结构经1HNMR和13CNMR确证。细胞增殖抑制实验表明，Fm04对K562细胞有明显的抑制作用,呈量效和时效关系,其抑制活性明显优于姜黄素。P210bcr/abl是CML的特征性蛋白,具有异常活跃的酪氨酸激酶活性,是CML发病的主要原因,并与其对多种化疗药物耐药有关,且由于P210bcr/abl含有磷酸化位点,可与含SH2的信号分子相结合,从而活化下游相关的多条信号途径[49],促进细胞增殖。从实验结果表明,新合成姜黄素衍生物Fm04可下调K562细胞P210bcr/abl含量并呈量效和时效关系;Fm04还可下调与K562细胞增殖和凋亡有关的P210bcr/abl下游信号分子pErk(如6h)、pAKT、NFκB。

A:不同剂量Fm04;B:不同时间Fm04及Cur.

图3Fm04对K562细胞P210bcr/abl下游相关信号分子的影响（略）

Fig3EffectofFm04onthebcr/ablrelatedsignalingmoleculesinK562cells

图4Fm04对K562细胞线粒体细胞色素C(CytC)的影响（略）

Fig4EffectofFm04oncytochromeCofmitochondriainK562cells

图5Fm04对K562细胞Caspase3和Caspase9活化程度的影响（略）

Fig5EffectofFm04onactivationofCaspase3andCaspase9inK562cells

3.2Fm04对K562细胞PErk的影响细胞外调节蛋白激酶(ERK)分为ERK1和ERK2,统称为ERK1/2,主要被各种生长因子、离子射线、过氧化氢等磷酸化而激活,进入细胞核作用于E1k1,cmyc,cfos,cjun,ATF,NFκB和AP1等转录因子,促进某些基因的转录与表达,和细胞的增殖与分化密切相关。本实验结果表明,Fm04作用K562细胞24h,pErk蛋白含量随Fm04剂量增大而增加(图3A),而细胞增殖实验结果显示(图1)Fm04对K562细胞的增殖有很强的抑制作用,通过观察不同时间点Fm04对pErk蛋白表达的影响发现,Fm04作用于K562,早期引起pErk减少,而晚期引起其增多,Chunrong等发现Sti571作用于bcr/abl阳性细胞也有类似状况[11]。有报道显示,细胞外信号调节激酶(ERK)1/2是Ca2+/CaM信号通路的重要调节因素[1213],许多Ca2+/CaM抑制剂均可引起(ERK)1/2的持续磷酸化并抑制细胞增殖。Shim合成研究的姜黄素衍生物HBC可通过引起HCT15细胞(ERK)1/2的持续磷酸化而阻断Ca2+/CaM信号通路而抑制细胞增殖[14],因此可推断Fm04除了P210bcr/abl信号通路,或许对Ca2+/CaM信号通路也有一定的抑制作用,该方面机制有待进一步研究。

3.3Fm04对K562细胞Caspase3和Caspase9的影响Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用,Caspase9是级联酶的上游分子,在正常状态下以酶原的形式存在于细胞浆中,没有活性,可被从线粒体向细胞质释放的细胞色素C激活。Caspase3在正常状态下以酶原的形式存在于细胞浆中,没有活性;但在细胞发生凋亡阶段,它被激活,活化的Caspase3由两个大亚基和两个小亚基组成,裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。Fm04可促进细胞色素C从线粒体释放放入细胞质,活化Caspase9和Caspase3,激活下游的凋亡通路。

笔者认为,新合成姜黄素衍生物Fm04可显著抑制K562细胞增殖并下调P210bcr/abl信号通路,具有显著的体外抗慢性粒细胞白血病活性,笔者将进行进一步的在体实验,为进一步改造开发高效低毒的抗肿瘤药物奠定基础。

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增殖范文篇7

1PPARs的功能

PPARs是环境/饮食刺激的关键调节物，同时也在哺乳动物众多复杂的新陈代谢如脂肪酸的氧化及脂肪形成的调节过程中发挥着举足轻重的作用〔2，3〕。PPARs通过一连串复杂的事件以控制基因的转录，其调节靶基因表达的经典途径包括配体结合导致的激活作用。PPARs只有与9-顺视黄酸的受体—视黄醇类X受体(retinoidXreceptor，RXR)形成异二聚体后才能与DNA结合〔2〕。PPAR-RXR异二聚体结合到靶基因特定DNA序列的启动子区域，而这一特定的DNA序列即是过氧化物酶体增殖物反应元件(PPRE)。PPRE通常是具有一个碱基对间距的正向重复序列。当配体结合活化后，PPAR-RXR异二聚体便通过招募辅助因子以激活其靶基因的转录。研究结果表明，不管是在体或是离体实验中，受PPAR配体激活后，PPAR-RXR异二聚体与PPRE的结合并不能诱导其与辅激活物如SRC1或TIF2等的相互作用。相反，在RXR配体存在的情况下，SRC1能够稳定RXR同型二聚体与PPRE的结合，从而诱导靶基因的转活过程〔2〕。其中，PPARα刺激肝脏脂肪细胞的氧化及酮体的生成，并参与调节载脂蛋白的生成。PPARβ则被证实参与多数生物学过程，最新的研究结果显示，脂肪组织中PPARβ的表达或活化能阻止饮食或遗传诱导的肥胖。在活体或培养的脂肪细胞或平滑肌细胞中，被合成的配体激活的PPARβ能够促进脂肪酸的氧化和利用。因此，PPARβ可能导致较少的能量浪费和肥胖的倾向〔3〕。与PPARα不同，在脂肪组织中，PPARγ的大多数靶基因都参与了脂肪生成途径。PPARγ和PPARα的功能失调与肥胖、2型糖尿病及动脉粥样硬化等众多疾病相关。PPARγ是脂肪细胞分化必需的物质之一，它通过抑制编码瘦素基因来控制肥胖的发生。

2胰岛素抵抗及其相关疾病

胰岛素抵抗导致高胰岛素血症，与临床多种疾病相关。(1)代谢异常：在脂肪组织中，由于胰岛素抵抗脂解作用的降低，将导致葡萄糖摄取量降低以及游离脂肪酸(FFA)含量增加，在骨骼肌中FFA含量变化和氧化抑制葡萄糖的摄取和储存，在肝脏中这些脂肪酸则提高糖原异生作用。这些改变最终导致高血糖症，形成糖尿病的特征性脂质代谢异常，同时也显著提高了糖尿病患者中心血管疾病的发病风险〔4〕。(2)2型糖尿病：2型糖尿病或称非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)是以降低的葡萄糖耐受与胰岛素抵抗为特征的一类疾病。在该病早期，肝细胞中葡萄糖含量增加而外周组织中葡萄糖含量减少，导致血浆中葡萄糖水平升高，乳胰腺β细胞通过分泌更多的胰岛素以降低升高的葡萄糖水平和胰岛素抵抗，而这将导致高胰岛素血症〔5〕，并通过与位于靶组织上的细胞膜受体结合而调节上述效应〔6，7〕。(3)肥胖：脂肪细胞分泌的TNF-α、FFA、脂联素(adiponectin)、抵抗素(resistin)、瘦素(1eptin)、IL-6、转运生长因子-β、PAI-1等因子，在葡萄糖稳态平衡、能量代谢、炎症、脂肪代谢等方面起着不同的作用。脂肪(尤其是内脏脂肪)堆积导致的胰岛素抵抗已被认为是引起NIDDM发病率上升的原因之一。肥胖病人尤其是腹部肥胖的病人中，普遍存在着游离脂肪酸水平增高的现象，而高水平的游离脂肪酸及其细胞内代谢产物则抑制胰岛素介导的葡萄糖摄取过程〔8〕。(4)心血管疾病：胰岛素抵抗与一系列心血管疾病危险因子有关〔9〕，这些危险因子包括：高水平的总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(GL)以及高血压等。研究表明〔10〕，肝脏中游离脂肪酸的增加会导致肝细胞中极低密度脂蛋白(VLDL)含量的增加，而胰岛素能够阻止肝脏分泌VLDL，但在胰岛素抵抗患者中，这一抑制机制被减弱，因而增加的游离脂肪酸将导致高三酸甘油酯血症产生，最终达到降低胰岛素抵抗的目的〔11〕。(5)多囊卵巢综合征(PCOS)：多囊卵巢综合征以月经紊乱、卵巢来源的雄激素过多及胰岛素抵抗为特征。胰岛素抵抗在多囊卵巢综合征的发病机制中起关键因素的作用。然而，在这一疾病中，胰岛素信号缺乏的机制十分复杂并且至今仍未得到充分的阐明。但已有实验证明，卵巢内胰岛素抵抗会导致高胰岛素血症，而高胰岛素血症的发生将使卵巢内雄激素水平提高，这将进一步加重多囊卵巢综合征患者的症状〔12〕。(6)肝脏疾病：研究表明，糖尿病患者具有更高的肝硬化和肝纤维变性的发病率，且肥胖也是促使肝硬化发生的一个危险因子。此外，进一步研究发现，非酒精性脂肪肝还与代谢综合征中增加的尿酸含量、腰围指数以及增加的胰岛素抵抗稳态模型评价指数有关。这些事实表明，胰岛素抵抗及代谢综合征在非酒精性脂肪肝、肝硬化和肝脏纤维变性中发挥了重要的作用〔13〕。

3PPARs在胰岛素抵抗中的作用

31PPARs是噻唑烷二酮类药物(TZDs)的作用靶点目前有关PPARγ与胰岛素抵抗的研究主要集中在探索胰岛素增敏剂如噻唑烷二酮类药物(TZDs)激活PPARγ后的作用机制〔1〕。TZDs包括罗格列酮和吡格列酮等。该类药物能激活PPARγ，从而减少FFA和TNF-α的释放及增加脂联素的分泌来调节脂肪组织的发育及代谢。此外，PPARα调节游离脂肪酸氧化的能力暗示了这一受体的激动剂治胰岛素抵抗的潜能。研究表明，PPARα的激活可影响与胰岛素相关的炎症及血栓过程中的重要物质，例如C反应蛋白(CRP)，纤维蛋白原以及PAI-I等。新近的实验研究还指出〔14〕，PPARα的激活还能显著降低心血管疾病的发生率。

32PPARs影响胰岛素抵抗的机制(1)对内分泌的影响：脂肪细胞中的PPARγ的活化对其内分泌有调节作用，而内分泌激素可作为信号分子损害胰岛素信号通路，改变胰岛素介导的葡萄糖稳态平衡和脂肪代谢等过程。由脂肪细胞分泌的TNF-α已被证实是肥胖与胰岛素抵抗发展过程中的一个关键的细胞因子。实验表明〔15〕，肥胖病人脂肪组织中TNF-α的表达增加。而向成年大鼠体内注射TNF-α将导致大鼠脂肪细胞中与FFA释放有关的基因表达的改变，从而最终引起全身性的胰岛素敏感性降低。体内白色脂肪组织(WAT)经TZDs处理后可使TNF-α含量下降。棕色脂肪组织(BAT)能选择性表达解偶联蛋白-1(UCP-1)，而后者参与了线粒体呼吸过程而产热。此外，UCP-1相关的解偶联蛋白-UCP-2能在包括骨骼肌和脂肪等的多种组织中表达，它被认为是全身能量利用的一个重要调节因子。因此，PPARγ激活后通过使脂肪细胞减少TNF-α及其他信号分子的分泌而降低胰岛素抵抗，部分地增加胰岛素敏感性，并能改善2型糖尿病病人的葡萄糖耐量。(2)对糖-脂循环(Randle循环)的影响〔16〕：葡萄糖转运主要是通过胰岛素调节的葡萄糖载体GLUT4。在肌肉中，葡萄糖和脂肪酸在作为能量供给时相互竞争，脂肪酸水平的升高会影响到葡萄糖的利用。而在肝脏中，FFA的增加与升高的葡萄糖含量糖原异生作用密切相关。PPARγ的激活促进了葡萄糖载体GLUT1、GLUT2、GLUT4的表达，并导致了糖、脂代谢及信号转导途径中一些关键基因表达的改变。PPARγ能选择性地诱导脂蛋白脂酶和乙酰辅酶A在脂肪组织中的表达，促进了脂肪组织中FFA的清除，但其并未改变肌肉组织中脂蛋白脂酶和乙酰辅酶A的表达，也未增加FFA从脂肪组织向肌肉组织的释放，从而导致脂肪酸滞留于脂肪组织，使全身可利用的脂肪酸减少。因此，PPARγ可通过葡萄糖与脂肪酸的代谢过程，加快脂肪酸的消耗，从而改善胰岛素的敏感性。(3)PPARγ形成PPAR-RXR二聚体的作用机制：如前所述，PPARγ形成PPAR-RXR二聚体后可增加WAT中的总胆固醇(TG)含量，使肝脏／肌肉中的TG含量降低，从而改善高脂饮食诱导的肥胖和胰岛素抵抗。研究证明〔17〕，PPARγ的外显子B存在相当普遍的多态性，例如Prol2Ala多态性在多个民族中与体质指数和心血管疾病的发病率的降低以及胰岛素敏感性的升高有关。Alal2等位基因的胰岛素增敏效应只在具有低出生体重的研究对象中才发现，表明出生后的环境因素能改变PPARγ的活性。基因-生活方式的相互作用可能调节Prol2Ala多态性对体重的增加以及2型糖尿病发病风险的影响。这反映了胰岛素复杂的、多基因的本质以及多环境因素对表型的影响作用。

4结语

胰岛素抵抗可导致多种疾病，因此，研究胰岛素抵抗的机制十分重要。PPARs是噻唑烷二酮类药物(TZDs)治疗胰岛素抵抗的作用靶点〔1〕。该类药物能激活PPARγ，从而减少FFA和TNF-α的释放及增加脂联素的分泌来调节脂肪组织的发育及代谢。此外，PPARα调节游离脂肪酸氧化的能力暗示了这一受体的激活机制治疗胰岛素抵抗的潜能。实验研究指出〔18〕，PPARα的激活还能显著降低心血管疾病的发生率。显然，研究PPARs在治疗和预防胰岛素抵抗中的机制有着重要的学术价值和临床应用前景。

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增殖范文篇8

第二条凡在本市管辖范围内的江、河、湖、海及沿江、沿海滩涂等渔业水域，采捕天然生长和人工增殖的水生动植物以及收购、利用经济价值较高的水生动植物苗种、亲体的单位和个人，必须依照本办法缴纳渔业资源增殖保护费（以下简称“渔业资源费”）。

第三条渔业资源费的征收和使用，实行取之于渔，用之于渔的原则。

第四条市、县（区）渔政监督管理机构，依照批准发放捕捞许可证、收购许可证的权限，征收渔业资源费。

第五条渔业资源费分为海洋渔业资源费和淡水渔业资源费。

第六条海洋渔业资源费的征收金额按以下方式确定：

（一）从事外海捕捞作业的渔船按前3年平均年总产值的1％计征。

（二）从事近海拖网作业的国营、集体渔船，按前3年平均年总产值的2％计征；个体渔船按3％计征。

（三）从事近海围网（含对网）、流网、钓作业的国营、集体渔船，按前3年平均年总产值的1％计征；个体渔船按2％计征。

（四）从事定置作业的渔船，按前3年平均年总产值的3％计征，其中集体渔船从事高稀网、海蜇涨网、疏目转网、板曾网等作业的按2％计征。

（五）对持有临时捕捞许可证的渔船，按同类型作业的征收标准加倍计征，但最高不得超过9％。

（六）教学单位的教学实习船根据上级主管机关批准的实习计划从事捕捞作业的，可以减半征收；实习计划外从事生产性捕捞的，按国营渔船同类型作业标准计征。

（七）科研单位的科研调查船根据有关部门批准的课题任务书、调查监测计划从事捕捞作业的，可以免征；课题或者计划外从事生产性捕捞的，按国营渔船同类型作业标准计征。

（八）按规定属海区渔政监督管理机构征收渔业资源费的，按海区渔政监督管理机构制订的收费标准计征。

凡从事不利于渔业资源保护的作业（包括国家限制发展和应当逐步淘汰的作业）的，其征收标准应当高于前3年平均年总产值的3％，但最高不得超过9％。

教学、科研单位需要减征或者免征渔业资源费的，按发放捕捞许可证、收购许可证的权限审批。

第七条淡水渔业资源费的征收金额按以下方式确定：

（一）对从事钩子、丝网、扎网、抄网、扛网、虾笼、鳝笼、扒蚬（螺、蚌）等作业的船只或者个人，按前3年平均年总产值的2%至6％计征。

（二）对从事机拖蟹、机拖虾、珠网等作业的，按前3年平均年总产值的4%至8％计征。

（三）对从事机吸蚬（螺）、软硬簖等作业的，按前3年平均年总产值的6%至12％计征。

（四）在划定的增殖水域采捕增殖资源的，按前3年平均年总产值的5%15％计征；在重点增殖水域采捕增殖资源的，征收比例可以高于15％，但最高不得超过25％。

（五）在本市管辖的长江渔业水域从事流网、挑张网等作业的，按前3年平均年总产值的2%至3％计征。

凡从事不利于渔业资源保护的作业（包括国家限制发展和应当逐步淘汰的作业）的，其征收标准应当高于前3年平均年总产值的15％，但最高不得超过20％。

非专业渔民从事季节性淡水捕捞作业的，应当按同类型作业征收标准的200%至300％计征。

第八条对多种捕捞方式兼作的海洋或者内陆水域渔船，按其产值较高的作业类型的征收标准，计征渔业资源费。

对海洋、长江水域捕捞兼作的渔船，分别按相应的作业类型的征收标准，计征渔业资源费。

第九条对专项采捕经济价值较高的渔业资源品种的，属海洋的可以按前3年平均年总产值的3%至5％计征渔业资源费；属淡水的可以按前3年平均年总产值的5%至10％计征渔业资源费。

第十条因养殖和其他特殊需要采捕水生动植物苗种、亲体的，按不超过前3年平均年总产值15％的标准征收渔业资源费。其中从事鳗苗捕捞的按前3年平均年总产值的5%至10％计征渔业资源费，从事蟹苗捕捞的按前3年平均年总产值的3%至5％计征渔业资源费。

第十一条凡从事收购或者经营经济价值较高的水生动植物苗种、亲体的单位和个人，应当按其收购或者经营总金额的1．5%至2．5％计征渔业资源费。

收购经济价值较高的水生动植物苗种、亲体直接用于增殖、养殖的单位和个人，按其收购总金额的0．5%至1％计征渔业资源费。

第十二条依法经批准采捕珍稀水生动植物的，依照本办法第九条的征收标准，加倍征收渔业资源费。因科研活动的需要依据有关规定经批准采捕珍稀水生动植物的除外。

第十三条经本市渔政监督管理机构许可在本市管辖水域作业的外省（市）渔船和个人，从事海洋捕捞的按本市同类型作业的标准计征渔业资源费；从事淡水捕捞的可以高于本市同类型作业的标准计征渔业资源费，但最高不得超过其年总产值的25％。

第十四条从事捕捞作业的单位和个人如因自然灾害等不可抗力造成重大损失的，可以向发放捕捞许可证的渔政监督管理机构申请减征或者免征渔业资源费。

第十五条渔业资源费的具体收费标准，由渔政监督管理机构根据发证权限，依照本办法第六条至第十三条的规定确定，并报同级物价部门核定和上级渔政监督管理机构备案。

第十六条本市凡利用江、河、湖泊、河沟等自然水域从事水产养殖生产的，按当地平均亩产值的0．5%至1％计征养殖保护管理费。

精养鱼塘、园沟、宅河的养殖保护管理费征收与否由各县（区）人民政府自定。凡征收养殖保护管理费的，每年每亩收费不得超过1元。

第十七条市、县（区）两级渔政监督管理机构，按照职权范围在核发捕捞许可证、收购许可证、养殖使用证的同时征收渔业资源费及养殖保护管理费，在有关证书上记录缴款金额、加盖印章并出具收款收据。

已持有捕捞许可证、养殖使用证的单位和个人，在办理年度审证时缴纳渔业资源费、养殖保护管理费。

在规定日期内不缴纳渔业资源费、养殖保护管理费的单位和个人，由渔政监督管理机构责令其限期补缴，并按日加收0．5％的滞纳金。

第十八条渔业资源费列入当年生产成本。

第十九条渔业资源费实行按比例留成和上缴部分统筹使用的办法：

（一）市渔政监督管理机构征收的海洋渔业资源费，10％上缴海区渔政监督管理机构，90％留用。

（二）各县（区）渔政监督管理机构征收的海洋、淡水渔业资源费，10％上缴市渔政监督管理机构，90％留用。

（三）市渔政监督管理机构委托县（区）渔政监督管理机构捕捞许可证所的渔业资源费，80％上缴市渔政监督管理机构，20％由机构留用，其中的鳗苗渔业资源费，20％上缴市渔政监督管理机构，80％由机构留用。

前款规定应当上缴的渔业资源费，征收单位应当按季度上缴，不得截留坐支。

渔政监督管理机构所征收的养殖保护管理费，全部留用。

第二十条渔业资源费用于渔业资源增殖保护的使用范围是：

（一）购置增殖放流用的苗种和培育苗种所需的配套设施，修建近海和内陆水域的增殖设施。

（二）为增殖保护渔业资源的科学研究提供经费补助，以及为渔业资源监测和渔业水域环境监测提供经费补助。

（三）购置、更新与渔业资源增殖保护有关的渔政公务车、船，改善渔政管理设施。

（四）为保护渔业资源、渔场环境和维护渔业生产秩序提供经费补助。

（五）为保护特定渔业资源品种，借给生产单位用于转业或者转产的生产周转金（不得作为生活补助和流动资金）。

依据本办法所征收的养殖保护管理费，全部用于维护渔业生产秩序的经费补助。

第二十一条渔业资源费用于资源增殖的开支原则上应当高于用于保护管理的开支。

本市渔业资源费用于资源增殖和保护管理的比例为：资源增殖不得低于50％，保护管理不得高于50％，其中对采捕、收购、利用鳗苗所征收的渔业资源费，资源增殖不得低于40％，保护管理不得高于60％。

第二十二条渔业资源费、养殖保护管理费按预算外资金管理。

市、县（区）渔政监督管理机构征收的渔业资源费、养殖保护管理费，应当交同级财政在银行开设专户储存，按规定用途专款专用。

市、县（区）渔政监督管理机构使用渔业资源费、养殖保护管理费，应当在年初编制收支计划、在年终编制决算，报同级财政部门审批，并报上级渔政监督管理机构备案。

收支计划和决算报表使用国务院渔业行政主管部门统一制订的格式。

第二十三条本市的渔业资源费、养殖保护管理费自1989年度起征收。

第二十四条市、县（区）财政、物价、审计部门应当加强对渔业资源费、养殖保护管理费征收使用的监督检查。对挪用、浪费资金的行为，依照国家有关规定查处。

第二十五条本市各县（区）人民政府可以根据本办法和当地实际情况，制订具体的补充条文，不另订实施细则。

各县（区）制订的补充条文应当报市渔政监督管理机构备案。

增殖范文篇9

一、组织机构

成立县放流增殖苗种采购小组，负责放流增殖苗种的采购相关工作。

二、增殖放流工作的实施

1.科学确定放流苗种。根据县渔业资源实际情况，结合渔业资源和水域环境变化的特征，为减缓并最终遏制渔业资源衰退趋势，逐步改善渔业资源生态状况，保护水生物多样性，从而达到增殖渔业资源、净化水质环境和增强溪河渔业经济效益，研究制定放流计划，放流品种主要为河蟹、鲤鱼、鲫鱼、厚唇鱼、倒刺鲃、黄颡鱼、甲鱼、翘嘴鲌等，并根据河段情况作适当的放流苗种调整。

2.放流苗种采购。放流增殖采购小组根据苗种供应单位提供的苗种供应价目表，对苗种市场进行调查，赴苗种生产单位实地考察，掌握苗种生产单位在繁育、管理、质量等方面的基本情况，并通过公开招标或议标方式确定放流苗种供应单位，签订苗种供应合同。

3.放流计划与实施。按照放流计划，分批组织开展人工放流。认真做好放流苗种质量抽样、规格测量，严把质量关，确保放流苗种的规格整齐、体质活跃。做好苗种的称重、计数工作。4.加强宣传。充分发挥新闻媒体的舆论导向、监督作用，邀请新闻媒体对放流动态进行宣传报道，扩大人工放流影响，形成全社会共同关注、共同参与的良好氛围。

5.完善管理制度。为提高放流的透明度，接受社会监督，届时将邀请县政府、人大、财政局及渔民代表共同参与放流，监督放流过程中的每一个环节，确保人工放流规范化；加大执法力度，联合公安等部门开展打击“电、炸、毒鱼”等违法整治行动，确保放流增殖效果，增强溪河渔业经济效益。

三、经费预算

2月份放流增殖费用预算为98000元，其他月份费用另行预算。

1.苗种费91900元。其中，鲤鱼：2600斤×7元/斤=18200元；红鲤鱼：1700斤×8.5=14450元；鲫鱼：3000斤×10.5元/斤=31500元；倒刺鲃：18500尾×0.75元/尾=13875元；厚唇鱼：18500尾×0.75元/尾=13875元。

2.其他开支6100元。主要为增殖放流仪式费用、车辆使用费用等。

渔业资源增殖放流领导小组有关人员按要求认真填写有关表格，监督人员在放流现场对放流情况进行核实并签字验收，各河段渔民代表签字确认。放流苗种供应单位凭原始放流计量表结算放流苗种经费，按购销合同开具发票，农业局按手续从放流增殖专项资金和溪河渔业资源费中予以拨付。

四、产值测算

2月份放流增殖苗种到年底至2015年3月前捕捞，经测算产值为500685元，利润按30%测算为150200元。

1、鲤鱼：数量：2600斤，规格8-15尾/斤，折成尾数为11.5尾/斤×2600斤=29900尾，回捕率按30%计，可捕获8970尾；重量：平均尾重1.5斤，计13455斤；产值：13455斤×10元/斤=134550元。

2、红鲤鱼：数量：1700斤，规格8-15尾/斤，折成尾数为11.5尾/斤×1700斤=19550尾，回捕率按30%计，可捕获5865尾；重量：平均尾重1.5斤，计8798斤；产值：8798斤×10元/斤=87980元。

3、鲫鱼：数量：3000斤，规格10-20尾/斤，计45000尾，回捕率按30%计，可捕获13500尾；重量：平均尾重0.3斤，计4050斤；产值：4050斤×20元/斤=81000元。

4、倒刺鲃：数量：回捕率按40%计，可捕获18500尾×40%=7400尾；重量：平均尾重0.6斤，计4440斤；产值4440斤×28元/斤=124320元。

5、厚唇鱼：数量：回捕率按45%计，可捕获18500尾×45%=8325尾；重量：平均尾重0.25斤，计2081斤；产值2081斤×35元/斤=72835元。

五、管护措施

1.实行公示制度。按照政府采购招标程序，本着公开透明、公平竞争的原则，及时在局网站上《放流苗种招标公告》，公布苗种采购要求、数量等信息。放流结束后，及时将放流品种、数量及资金使用等情况向社会进行公示，确保项目资金全部用于增殖放流。

增殖范文篇10

一、工作目标

通过水生生物增殖放流，进一步改善上犹江流域生态环境，保护渔业资源，促进生物多样性和生态平衡，提高资源利率。

二、工作内容

1、放流区域：思顺江，陡水水库（水口码头）。

2、放流时间：2014年5月。

3、苗种来源：由本市具备省级及以上水产原良种场资质和法人资质的苗种场供应，通过县政府采购办公开招标采购。

4、放流品种：以“四大家鱼”为主。

5、放流规格和数量：大规格夏花鱼种（3cm以上）、其中“四大家鱼”等经济鱼类占90﹪。放流鱼种数量总计30万尾，金额共计15万元。

6、资金来源。国家渔业资源增殖放流资金15万元。

三、工作要求

1、加强组织领导。成立组织机构

为使增殖放流顺利开展，加强组织领导。成立以局长为组长，分管副局长副组长、办公室、财务室、渔政站、水产站、执法大队为成员的水生动物增殖放流工作领导小组。

2、强化宣传，增强保护意识

充分利用媒体，发放宣传单，张贴标语等途经，加强水生生物增殖放流重要意义的宣传，增强社会各界对水域生态环境，渔业资源保护意识。通过水生动物增殖放流形式，广泛吸收公众参与，扩大社会影响，为深入开展水生动物增殖放流活动营造良好的社会氛围。