心肌梗死后心衰管理论文

【摘要】目的观察芪苈强心胶囊对心力衰竭模型鼠梗死区胶原蛋白表达和成熟的影响，探讨其抗心肌纤维化的机制。方法将通过结扎冠状动脉左前降支并饲养4w的56只心衰模型鼠随机分为心衰模型组、雷米普利组、芪苈强心胶囊小及大剂量组，并设假手术组。同步药物干预4w后，应用RTPCR检测梗死区胶原ⅠmRNA。应用氯胺T法定量检测梗死区总胶原含量。结果三组药物均有效降低了梗死区胶原ⅠmRNA的表达和总胶原的水平（P＜0.05）。其中芪苈强心胶囊大剂量组和雷米普利组效果相似（P＞0.05），均优于芪苈强心胶囊小剂量组（P＜0.05）。结论芪苈强心胶囊能够明显地减少心梗后心力衰竭梗死区胶原进一步合成和成熟，减少瘢痕区纤维化，并具有明显的剂量依赖性。

【关键词】芪苈强心胶囊；胶原Ⅰ；羟脯氨酸；纤维化

在分子水平上，心衰心室重构表现为心肌细胞增生，肥大，间质内的纤维细胞的增殖和成熟胶原生成增加。研究表明〔1〕血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）在心梗后心衰的纤维细胞增殖、胶原合成及基质重构中发挥重要作用。血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）治疗心梗后左室重构疗效确切，这一点在动物实验和临床上已经被证实。芪苈强心胶囊作为一种新型的治疗慢性心力衰竭的口服通络药物。根据中医辩证施治机制，除以利水消肿药治标外，以益气温阳药治其病本，辅以活血通络药，达到气旺血行络通，阻断血瘀络阻的病理中心环节。药理研究表明〔2〕芪苈强心胶囊既能改善血流动力学，具有传统强心、利尿和扩血管缓解心力衰竭症状的作用，又能明显抑制肾素血管紧张素醛固酮（RAS）系统，减少心室重塑，改善心力衰竭。本试验拟通过不同剂量芪苈强心胶囊与抗心室重构机制和疗效确切的ACEI对实验性心梗后心力衰竭大鼠梗死区心肌纤维化程度的比较，探讨芪苈强心胶囊改善心室重构的机制。

1材料与方法

1.1试剂雷米普利由北京安万特制药有限公司生产。芪苈强心药粉由石家庄以岭药业集团赠送，每克芪苈强心胶囊粉相当于6.325g生药。RTPCR试剂盒购自宝生物工程（大连）有限公司。引物由上海生工生物工程有限公司合成。

1.2动物模型随机取健康100只体重200～240gWistar大鼠（雌鼠40只，雄鼠60只），由吉林大学基础医学院动物室提供。采用左前降支冠状动脉结扎术制备心衰模型，参考文献〔3〕方法，应用4%水合氯醛麻醉，快速打开胸廓，暴露心脏，在左心耳下约2mm处的冠状动脉左前降支用6/0线结扎，迅速关闭胸腔并缝合，复苏动物。同时另取8只大鼠（雌鼠4只，雄鼠4只），同样的方法手术，但术中只挂线，不结扎，作为假手术组。术后每天予青霉素24万U/kg，共3d，预防感染。饲养4w。

1.3动物分组及给药术后4w心衰模型大鼠存活61只（雌鼠28只，雄鼠33只）存活率61%（雌鼠70%，雄鼠55%）。随机选取存活鼠56只（雌雄鼠各28只），将其分为：心衰模型组（n=16,1ml自来水灌胃），雷米普利组（n=16，10mg/kg体重）、芪苈强心胶囊大剂量组（n=12，1.0g/kg体重）、芪苈强心胶囊小剂量组（n=12，0.25g/kg体重），每组大鼠雌雄各半。上述药物溶于1ml自来水中灌胃。所有实验大鼠均自由饮食，分笼饲养，给药过程中无一例死亡。

1.4标本采集给药4w后，处死大鼠，随机选取其中一半心肌组织（雌雄各半）检测胶原Ⅰ蛋白及mRNA的表达，另一半（雌雄各半）用于羟脯氨酸定量检测。

1.5梗死区心肌组织中胶原ⅠmRNA的检测用Trizol试剂处理梗死区心肌组织提取总RNA。使用逆转录酶将3μg总RNA合成CDNA。胶原Ⅰ及βactin通过GenBank获得,并设计引物。胶原Ⅰ的上游引物5′AGGGTCATCGTGGCTTCTC3′，下游引物5′ACCTTCGCTTCCATACTCG3′。βactin上游引物5′GCTCGTCGTCGACAACGGCTC3′，下游引物5′CAAACATGATCTGGGTCATCTTCTC3′。取3μl逆转录产物分别应用上述蛋白的上下游引物进行PCR扩增。PCR反应条件：94℃预变性5min，95℃变性40s，54℃退火30s，72℃延伸45s，循环30次，最后72℃延伸10min。取10μlPCR反应产物进行1.5%琼脂糖电泳，光密度扫描后图片经ImageJ软件分析，结果以检测蛋白/βactin的积分光密度比值表示。

1.6氯胺T法检测梗死区胶原的含量称取梗死区组织的干重，采用氯胺T法检测经6mol/LHCl酸化的心肌组织，应用NaOH中和，分别加入氯胺T和Ehrlich显色剂后在分光光度分析仪上检测558nm波长的蛋白肽的量。根据NaOH中和后的体积计算出样品中羟脯氨酸的量。由于羟脯氨酸在胶原占13.4%，比值恒定，故羟脯氨酸的量直接反映组织中胶原含量。因此，梗死区胶原含量表达方法就采用羟脯氨酸（μg）/梗死区心肌干重（mg）〔4〕。

1.7统计学方法数据以x±s表示，采用SPSS11.0软件进行t检验。应用onewayANOVA方差分析，多组间的相关性比较采用t检验，多组间的两两比较采用费希尔的LSD法。

2结果

2.1心脏梗死区心肌胶原ⅠmRNA的表达其他4组胶原ⅠmRNA表达明显高于假手术组〔0.0763±0.03212，P＜0.001〕，芪苈强心胶囊大剂量组胶原ⅠmRNA表达〔0.4127±0.12743〕与雷米普利组〔0.4246±0.17401〕接近，差异不显著（P＞0.05）。芪苈强心胶囊小剂量组〔0.5814±0.16170〕低于心衰模型组〔0.7382±0.16463〕（P＜0.05），但高于芪苈强心胶囊大剂量和雷米普利组（P＜0.05）（见图1）。

图1各组梗死区心肌组织胶原ⅠmRNA的表达

2.2梗死区心肌组织胶原含量的检测与心衰模型组〔(20.0±6.2)μg/mg〕和假手术组〔(3.7±1.9)μg/mg〕比较，3个治疗组胶原含量均显著下降（P＜0.05，P＜0.001）。芪苈强心胶囊大剂量〔(10.7±3.7)μg/mg〕与雷米普利组〔(10.5±2.7)μg/mg〕下调胶原的作用相似，差异不显著（P＞0.05）。芪苈强心胶囊小剂量〔(15.6±1.5)μg/mg〕亦使胶原水平下调（P＜0.05），但效果不及芪苈强心胶囊大剂量组和雷米普利组（P＜0.05）。

3讨论

基质是心脏的支架性结构，胶原作为主要成分对于维持心脏形态、保证心肌细胞规律性排列及收缩、舒张的有效性起主要作用。