子宫内膜异位症

1对象和方法

1.1对象

选取200409/200502我科行手术治疗的内异症患者30例，年龄25～48（39±9）岁.按RAFS标准，早期（Ⅰ～Ⅱ期）14例,晚期（Ⅲ～Ⅳ期）16例.对照组为同期就诊的卵巢良性上皮性肿瘤患者30例，年龄22～44（36±7）岁.实验组和对照组均经术后病检证实,月经周期正常,术前3mo未使用激素类药物，无盆腔炎症,无自身免疫异常,无其他内、外科疾病，两组年龄无差异，均为汉族,来自湖北省.

1.2方法

1.2.1采样患者入院后抽肘静脉血3mL，分离血清储于-70℃冰箱中.腹腔镜下或开腹手术中抽取腹腔液3mL(血染腹腔液不收集)，以2000r/min离心15min，取上清液于-70℃保存.共留取血清标本60份，腹腔液标本60份.

1.2.2sICAM1的测定标本中sICAM1的水平用ABSELISA法定量检测，试剂盒由深圳晶美生物工程有限公司提供(德国R&D公司)，操作方法严格按照试剂盒说明进行.用Biocell2010型酶标仪（澳大利亚生产）在450nm处读数.

1.2.3sHLAⅠ的测定采用ELISA法检测［3］.主要试剂包括鼠抗人HLAABC单克隆抗体（英国Serotec公司）和兔抗人β2微球蛋白辣根过氧化物酶(德国DAKO公司).

将96孔酶标板每孔加鼠抗人HLAABC单抗(pH9.6碳酸盐缓冲液稀释，蛋白浓度10μg/mL)100μL包被，置4℃作用24h，再以洗涤液（PBS:pH7.4,5g/LTween20,0.02mol/L）冲洗（自动洗板机完成，洗板5次），每孔加10g/L牛白蛋白(BSA)PBS，室温封闭1h，再冲洗后备用.以稀释液（2.5g/LBSAPBS）作空白对照，每孔加样（被检血清和腹腔液用2.5g/LBSAPBS作1∶20稀释）100μL,37℃保温2h后弃上清液并洗涤，再加兔抗人β2HRP(2.5g/LBSAPBS1∶1000稀释)100μL,37℃保温1h，弃上清液并洗涤，加底物应用液(含OPD)100μL,37℃保温30min，加2mol/L硫酸50μL终止反应，在5min内用相同酶标仪在490nm处测定A值.

统计学处理：所有数据用x±s表示，采用SPSS11.5软件进行两样本t检验，P<0.05为有统计学差异.

2结果

内异症组血清和腹腔液中sICAM1水平高于对照组，且内异症早期组高于晚期组；内异症组血清sHLAⅠ水平低于对照组，但内异症早期组高于晚期组（Tab1）.表1血清和腹腔液中sICAM1和sHLAⅠ水平（略）

3讨论

根据双信号活化理论，HLAAg肽复合物与TCRCD8复合物的结合，启动T细胞活化信号1,LFA1与ICAM1的结合，作为协同刺激信号.若无粘附分子的协同刺激,则引起T细胞无能.sICAM1,sHLAⅠ分别是膜ICAM1、膜HLAⅠ的脱落部分，已知ICAM和HLA分子在盆腔组织广泛表达，无疑对内异症的发生有潜在性影响.

异位内膜引起炎症反应，使白细胞分裂增殖，其分泌的sICAM1必然增多，故血清sICAM1上升，本实验结果正是如此.升高的sICAM1与内皮细胞膜上ICAM1竞争，影响白细胞附壁，使其无法移动到炎症反应部位来发挥杀伤异位内膜细胞的作用；另一方面，腹腔液中升高的sICAM1阻断ICAM1/LFA1，影响了NK细胞或CTL与异位内膜细胞的结合，从而有利于异位内膜逃避免疫监视.

许多人类肿瘤细胞表面有HLAⅠ类抗原的减少或丢失［4］，这可能代表肿瘤细胞逃逸CTL介导的识别途径之一.本实验内异症组腹腔液sHLAⅠ的A值低于对照组（P<0.05），反推异位内膜细胞上HLAⅠ含量降低，说明内异症的发生可能具有与肿瘤细胞相似的机制，这与Matalliotakis等［5］的报道一致.也有相反观点，Amirghofran等［6］发现内异症患者腹腔液sHLAⅠ升高.

本实验中sHLAⅠ的A值在内异症组与对照组有区别（P<0.05）.有学者发现，内异症患者NK细胞活性和功能下降，内异症越严重，NK细胞活性下降越明显［1］.从本实验结果分析，可能是升高的sICAM1抑制了NK细胞的活性，再加上HLAⅠ的表达降低而引起的sHLAⅠ下降，通过实验我们推测，sICAM1和sHLAⅠ主要以影响抗原刺激信号的方式参与调节CTL和NK细胞的功能，二者的变化可能与盆腔内异症发病有关，对sICAM1和sHLAⅠ的研究有利于了解内异症的发病机制和分期.

【参考文献】

［1］NagamasaM,ChiakiI,HiroyoshiO,etal.Aberrantexpressionofintercellularadhesionmolecule1andkillerinhibitoryreceptorsinducesimmunetoleranceinwomenwithpelvicendometriosis［J］.FertilSteril,2002;77(4):679-683.

［2］JoK,HiroshiO,NorikoK,etal.AssociationofHLAclassIandclassIIalleleswithsusceptibilitytoendometriosis［J］.HumImmunol,2002;63(11):1033-1038.

［3］兰炯采,石宁,郑世荣,等.可溶性HLAⅠ的检测及中国人正常值［J］.中国免疫学杂志,1999;15(5):228-230.

LanJC,ShiN,ZhengSR,etal.QuantificationofserumsolubleHLAclassⅠantigens［J］.JChinImmunol,1999;15(5):228-230.

［4］ChangCC,CampoliM,FerroneS.HLAclassIantigenexpressioninmalignantcells:WhydoesitnotalwayscorrelatewithCTLmediatedlysis［J］?CurrOpinImmunol,2004;16:644-650.

［5］MatalliotakisIM,GoumenouAG,KoumantakisGE,etal.ExpressionofserumhumanleukocyteantigenandgrowthfactorlevelsinaGreekfamilywithfamilialendometriosis［J］.JSocGynecolInvestig,2003;10(2):118-121.

［6］AmirghofranZ,SheikhiAK,KumarPV,etal.SolubleHLAclassImoleculesinmalignantpleuralandperitonealeffusionsanditspossibleroleonNKandLAKcytotoxicity［J］.JCancerResClinOncol,2002;128(8):443-448