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高乌头药材生药学分析

1试验材料

1.1高乌头药材。高乌头分别购于甘肃、青海等地,经甘肃中医药大学药学院杨扶德教授鉴定为毛茛科乌头属植物高乌头的干燥根,结果见表1。1.2仪器与试剂。BT125D电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司);KQ3200DB超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);FW-400A高建万能粉碎机(北京科伟永兴仪器有限公司);NikonDS-Ril生物显微镜;HHS-11S数显恒温水浴锅(上海宜昌仪器纱筛厂);BX51荧光显微镜;SHB-3循环水多用真空泵(郑州杜甫仪器厂);旋转蒸发仪;多功能暗箱式紫外分析仪(北京赛百奥科技有限公司);ATS4自动点样仪、称量瓶、干燥器等。高乌甲素对照品(购自甘肃神龙药业股份有限公司,批号20001001,含量97.50%);冉乌头碱;三氯甲烷、氨水、正己烷、异丙醇、水合氯醛、甘油、95%乙醇、乙酸乙酯均为分析纯。

2方法与结果

2.1外观性状高乌头根呈圆柱形,上粗下细,稍扁扭曲不直,有分枝,长短不一,长5~20cm,直径1~4cm。表面棕褐色至棕黑色,粗糙,有时因后生皮层脱落露出木质部,扭裂,顶端有凹陷的茎痕或留有茎的残基,周围有时残存棕色叶鞘纤维,有明显的网状纵向裂隙,有的可见腐朽的空腔,有不规则纵纹。质轻而松脆,易折断,断面淡黄棕色,呈蜂窝状或中空。气微,味苦。2.2显微鉴别。2.2.1横切面显微鉴别取干燥高乌头个子药材,用水浸泡,待药材浸透软后,取直径为2~4mm根末端,冷冻后徒手切片。将制备好的切片置显微镜下观察,可见木栓层为2~5列木栓化细胞组成;皮层较宽广,约占整个根部的2/3,皮层中有一轮异型维管束环状排列,分布在皮层中,维管束均为外韧型;韧皮部细胞较小,排列紧密,束中形成层细胞数列,而束间形成层不明显;形成层细胞2~3列;木质部导管作径向排列,直径14~60μm,异型维管束之间的维管射线宽广,射线细胞中夹杂有小型棕色细胞径向排列成行;次生维管束呈圆柱形,韧皮部较宽广。薄壁细胞中分布大量的淀粉粒及少量的草酸钙方晶。结果见图1。2.2.2粉末鉴别取样品粉碎过4号筛,得棕褐色粉末,挑取少许置载玻片上,加2~3滴水合氯醛在酒精灯上透化后,盖上盖玻片,置显微镜下观察,可见大量的淀粉粒,多为单粒,呈圆形、类圆形或半圆形,直径为4~24μm;大粒有明显的脐点,呈星状或叉状,层纹不明显;复粒由2~4个分粒组成。后生皮层组织碎片呈棕褐色,细胞表面呈多角形或类方形,壁木栓化或木化,有时细胞壁弯曲直径为25~220μm。网纹导管及具缘纹孔导管,直径为20~45μm。常有棕色块状物散在。草酸钙方晶少见,呈菱形或多边形。结果见图2。2.3薄层鉴别。2.3.1不同提取溶剂的考察取高乌头药材粉末2g(过三号筛)2份,一份加95%乙醇30mL超声处理(功率300W,频率40kHz,水温25℃以下)30min,放冷,补足失重,摇匀,滤过,取续滤液25mL,40℃以下减压回收溶剂至干,残渣加入甲醇3mL,溶解,密塞,摇匀;另一份加氨试液3mL,再加入异丙醇-乙酸乙酯(1∶1)混合溶液50mL,称定质量,超声处理(功率300W,频率40kHz,水温25℃以下)30min,放冷,补足失重,摇匀,滤过,取续滤液25mL,40℃以下减压回收溶剂至干,残渣加入甲醇3mL,溶解,密塞,摇匀。分别进行薄层色谱鉴别。结果后者色谱斑点更为清晰。2.3.2展开剂系统的选择分别以二甲苯-甲醇(5∶1)、正己烷-乙酸乙酯-甲醇(10∶8∶2.5)、甲苯-三氯甲烷-甲醇(1∶8∶1)、正己烷-三氯甲烷-甲醇(4∶8∶1)、正己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(5∶6∶8∶1.5)等展开系统进行试验,结果显示以正己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(5∶6∶8∶1.5)为展开剂,置氨蒸气饱和20min后展开,展开效果较好,斑点集中且分离好,Rf值适中。2.3.3薄层板的选择分别筛选了硅胶G、硅胶GF254薄层板,结果显示选用硅胶GF254薄层板时斑点清晰。2.3.4不同温湿度对薄层色谱的影响考察不同温湿度对薄层色谱的影响,结果表明在温度为30℃下,相对湿度在45%~60%,均可使主斑点分离较好,斑点集中、清晰,且比移值变化不大。通过上述条件的考察,得到稳定的薄层色谱鉴别条件:取高乌头药材粉末各2g(过3号筛),精密称定,置具塞锥形瓶中,加氨试液3mL,再加入异丙醇-乙酸乙酯(1∶1)混合溶液50mL,称定质量,进行超声处理(功率300W,频率40kHz,水温25℃以下)30min,放冷,补足失重,摇匀,滤过,取续滤液25mL,40℃以下减压回收溶剂至干,残渣加入甲醇3mL,溶解,密塞,摇匀,作为供试品。另取冉乌头碱及高乌头甲素对照品,分别加甲醇溶解制成每1mL含1mg溶液,作为对照品溶液。按照薄层色谱法实验,分别吸取冉乌头碱、高乌甲素对照品、各批次供试品各5μL,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以正己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(5∶6∶8∶1.5)为展开剂,置氨蒸气饱和20min后展开,取出,晾干,分别置紫外光灯(254nm及365nm)下检视(温度18~30℃,湿度45%~60%)。供试品色谱,在与对照品相应的位置上显相同颜色的斑点,结果如图3。

3讨论

3.1高乌头是一味民间常用中药,有关其质量控制方面的研究鲜有文献报道。现有的质量标准指标过于简单,不能很好地控制其质量,本研究从外观性状、显微特征、薄层鉴别等角度对甘肃、青海等西部特色民间常用中药高乌头进行了生药学研究,为新版《甘肃省中药材标准》中高乌头药材标准的完善提供了科学依据。3.2薄层色谱法用于中药的鉴别具有快捷、简便等诸多优点。试验分别考察了正己烷、二甲苯、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇等多种溶剂展开系统,用三氯甲烷-甲醇-氨水(7∶2∶0.5)、二甲苯-甲醇(5∶1)等,经过多次试验和筛选,最终确定上述展开条件,证明该条件具有分离度好、斑点清晰、简便易行等特点,可用于高乌头药材的薄层鉴别分析。3.3高乌头在功效上与同科同属的乌头(川乌、草乌)作用相当,但高乌头基本不含极毒的双酯型乌头碱类成分,临床应用比乌头(川乌、草乌)更加安全。乌头可以引起动物心律失常[18],而高乌头则恰恰相反,不但不会引起心律失常,还具有抗乌头碱引起的心律失常的作用[6],这一点值得高度关注。高乌头一直作为地方用药,一方面是由于其标准不够完善;另一方面是由于民间用药,产量又小,目前主要用于提取高乌甲素的原料药材,使用范围受限,也未能引起重视。如果解决以上问题,高乌头很有可能代替乌头药材,载入药典标准。

作者:张立军 戴海蓉 樊秦 夏鹏飞 沈秉学 李芸 单位:1.甘肃中医药大学 2.甘肃省高校中藏药化学与质量研究省级重点实验室

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